авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 32 |

«НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ МИКОЛОГИИ ОБЩЕРОССИЙСКАЯ ОБЩЕСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ СОВРЕМЕННАЯ МИКОЛОГИЯ В РОССИИ ТОМ 2 ТЕЗИСЫ ДОКЛАДОВ ВТОРОГО ...»

-- [ Страница 17 ] --

Частота выявления ОТА в разных кормах колеблется В почках, как органах- мишенях для ОТА, отме от 1 до 18 %, а в зерновых, выращенных в странах Ев- чались микрокровоизлияния, эпителий извилистых ропы и Америки, его обнаруживали в количестве от 10 канальцев находился в состоянии мутного набухания, до 27500 мкг/кг корма. вследствие чего их просвет слабо просматривался. От В связи с тем, что a. nіger контаминирует корма в мечалась десквамация канальцевого эпителия и форми Украине, нами была поставлена задача выяснить воз- рование белковых цилиндров. В клубочковом аппарате можность выработки ОТА штаммами этого гриба. ексудат, скапливаясь в капсуле Боумена- Шумлянсько Объектом токсикологического исследования были го, оттеснял сосудистый клубочек на периферию.

14 штаммов гриба a. nіger, выделенных в 1975, 1976 Установленные нами гистологические изменения в и 2004 годах из зерна пшеницы, ячменя, комбикорма печени и почках погибших мышей были идентичными и травяной муки из Кировоградской, Херсонской, До- изменениям в этих органах, которые наблюдали при нецкой, Киевской, Черниговской области и АР Крыма. экспериментальном охратоксикозе мышей p. Galtіer и Для накопления микотоксина штаммы гриба выращи- соавторы.

вали на увлажненном, стерильном зерне риса на про- Таким образом, в результате проведенных иссле тяжении 14 дней при температуре 27° С, а экстракцию дований нами впервые установленная способность штаммов a. nіger, изолированных с зерновых Украины, токсина проводили етилацетатом. После очистки экс тракта наличие ОТА определяли методом ТШХ с ис- синтезировать охратоксин А. Указанные штаммы- про дуценты гриба a. nіger вырабатывают ОТА в количес пользованием пластин «Sorbfіl». Пластины хроматог рафировали в системе толуол-етилацетат-муравьиная тве, которое после введения лабораторным животным кислота (6:3:1) и экспонировали в УФ лучах длиной вызвало их гибель. В современной научной литерату волны 365 нм. Для подтверждения наличия токсина ре отсутствуют данные о способности штаммов этого хроматограммы выдерживали в камере, насыщенной гриба, выделенных на территории Украины и странах парами аммиака. В качестве стандарта использова- бывшего СССР, продуцировать охратоксин А, в новых отечественных обзорных публикациях a. nіger до нас ли охратоксин А русского производства (ГСО 7941 2001). не упоминался как продуцент охратоксина А.

С целью подтверждения наличия ОТА в культурах Все выше упомянутое является основанием для a. nіger изучали также биологическое действие экс- дальнейшего изучения распространения продуцентов охратоксину А как среди штаммов a. nіger, так и среди трактов грибов. Для этого два выявленных штамма 262 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел других видов грибов родов aspergіllus и Penіcіllіum, ко- установления их этиологической роли в заболевании торые часто выделяются из кормов при алиментарных и определении количества охратоксина А, которую мо микотоксикозах животных, с целью окончательного гут синтезировать эти грибы.

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ФУМОНИЗИНА В1 НА ЦЫПЛЯТ И ПРОТЕКТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ МИКОСОРБА Рухляда В.В., Билан А.В.

Белоцерковский государственный аграрный университет, Белая Церковь, Украина Одними из наиболее распространенных грибов рабуры;

кислой фосфатазы (КФ) – реакцией с 4-нит на зерновых кормах являются представители рода рофенилфосфатом. Уровень мочевины исследовали Fusarium, которые являются продуцентами различных диацетилмонооксимным методом;

активность общей фузариотоксинов. В последнее время исследователи лактатдегидрогеназы (ЛДГобщ) и ее кардиоспецифи стали уделять внимание открытому в 1988 г. токсину – ческого изофермента ЛДГ1 – методом Севела-Товаре фумонизину, с которым связывают развитие лейкоен- ка, АСТ и АЛТ – унифицированным методом Райтма цефаломаляции лошадиных и отек легких у свиней, на – Френкеля.

а также гепатотоксическое и канцерогенное действие Для гистологического исследования кусочки пече на крыс и риск для человека. Первое сообщение о по- ни фиксировали 10 %-ным раствором нейтрального ражении птицы, в результате поедания контаминиро- формалина, обезвоживание и заливку в парафин про ванного фумонизинами зерна сделали Вhat R.v. et al., водили за общепринятыми методиками, гистологичес (1996). кие срезы окрасили гематоксилин-эозином.

Цель работы – изучить влияние фумонизина В1 на Результаты исследований и их обсуждение. В нача организм цыплят и протективное действие микосорба. ле опыта цыплята всех групп хорошо потребляли корм Материал и методы исследований. В опытах ис- и были достаточно подвижными. У птицы, которая пользованы 30 цыплят мясо-яичной породы «Адлер получала фумонизин В1, наблюдали незначительное серебристый» средней живой массой 208 г, из которых угнетение и некоторое разжижение каловых масс. На были сформированы 3 группы по 10 голов в каждой. чиная с второй недели у групп цыплят, которые полу Цыплятам первой группы один раз в сутки давали «per чали фумонизин и микосорб устанавливали большие os» 8 мг фумонизина В1 в 2-ух мл 5 %-ного водного среднесуточные приросты в сравнении с контрольной этанола, цыплята второй группы получали такую же группой. В конце опыта средняя живая масса цыплят дозу токсина и комбикорм с микосорбом в количестве в группе, где применяли токсин и микосорб была на 2 % на килограмм корма. Третья группа служила конт- ибольшей – 474 г, в группе токсин, – 424 г и в конт ролем и не получала ни токсина ни микосорба. Птица рольной – 366 г.

содержалась на стартовом комбикорме для цыплят. Активность общей щелочной фосфатазы у цыплят Фумонизин В1 для исследования получали культи- под воздействием фумонизина В1 в первую неделю вированием штамма продуцента 1170/5 f. moniliforme опыта несколько снизилась, а в конце второй недели на стерильном увлажненном зерне пшеницы при тем- выросла за счет костного изофермента, а затем опять пературе 24 °С на протяжении трех недель. Токсин уменьшилась. У цыплят, которые получали токсин и экстрагировали смесью ацетонитрил – вода (1:1) и микосорб, наблюдали аналогичные изменения, но ме проводили переекстракцию в 5 %-ный водный эта- нее выраженые, в то время как в контрольной группе нол, содержание токсина определяли методом ТШХ и отмечали постепенное возросное повышение актив ИФА. ности фермента в течении всего опыта.

За цыплятами вели постоянное клиническое на- Активность кишечного изофермента у цыплят блюдение, учитывали их общее состояние и один раз опытных групп в конце первой недели была вдвое в неделю определяли живую массу. В конце каждой ниже, чем в контрольной группе. Активность кислой недели по три цыпленка из каждой группы забивали фосфатазы у цыплят, под действием токсина снача методом декапитации и отбирали пробы крови для ла немного повышалась, а в конце опыта снизилась.

биохимического исследования и материал (кусочки У цыплят, которые получали с токсином микосорб, печени) для гистологического исследования. В сыво- наблюдались подобные изменения, а в контрольной ротке крови определяли содержание общего, ультра- группе на протяжении опыта отмечали постепенное фильтрировоного, ионизированного, нейтрального повышение активности фермента.

и связанного с белками кальция – в реакции с глиок- Активность общей ЛДГ в сыворотке цыплят, под саль-бис-2 оксалином;

неорганического фосфора – ре- действием токсина достоверно увеличивалась на про акцией с аскорбиновой кислотой;

активность общей тяжении всего опыта и микосорб не сдерживал это не щелочной фосфатазы (ЛФ) и ее костного и кишечно- гативное влияние. Подобные изменения, под действи го изоферментов – методом Вагнера, Путилина и Ха- ем токсина также наблюдались в активности ЛДГ1.

Микотоксикология Токсин вызывал достоверное повышение активнос- тов с укрупненными ядрами, считается показателем ти АСТ у цыплят обеих групп, хотя микосорб несколь- функциональной активности органа.

ко уменшал влияние токсина. Особенно значительно Структура печени цыплят группы контроля имела под действием токсина увеличивалась активность ала- долевое строение, частицы печени состояли из четко ниновой трансферазы. размещенных печеночных пластин, в отдельных учас Содержание мочевины и креатинина под воздейс- тках обнаружено их радиальное размещение. Печеноч твием фумонизина В1 достоверно (Р0,01) увеличива- ные пластины состояли из полигональных групп кле лось на протяжении всего опыта, а применение мико- ток – гепатоцитов. Последние имели круглую форму, сорба сдерживало этот рост. цитоплазма равномерно окрашена в бледно-розовый Содержание общего, нейтрального, связанного с цвет, ядра большие, круглые, с мелкими ядрышками.

белками и ультрафильтрированого кальция под дейс- Межпластинчатые капилляры умеренно заполнены твием токсина несколько уменьшалось, в то время как форменными элементами, что отвечало норме.

в группах цыплят, которые получали токсин и мико- На основе полученных результатов установлено, сорб и в группе контроля, после незначительного по- стимуляцию прироста живой массы цыплят опытных нижения на протяжении первых двух недель отмеча- групп, которые получали фумонизин В1 в дозе 8 мг на лось повышение их содержания. голову и микосорб в количестве 2 % на кг корма. По Концентрация неорганического фосфора в сыво- данным Merrill et al., (2001) фумонизин В1 вызывает на ротке крови цыплят, под действием токсина была ниже рушение метаболизма сфинго-липидов и образование при сравнении с контрольной группой, хотя наблюда- большого количества промежуточных биоактивных ве ли постепенное увеличение его концентрации. ществ, которые стимулируют прирост живой массы.

Содержание общего магния у цыплят, под действием Биохимическими исследованиями сыворотки крови фумонизина В1 уменьшалось в обоих опытных группах, установлено уменьшение активности общей ЛФ в нача в то время как в контрольной плавно увеличивалось. ле опыта и последующее повышение за счет костного При проведенные гистологических исследований изофермента, что свидетельствует о хроническом по печени, отобранной в разных группах в конце опыта ражении печени, холестаз, нарушение проницаемости установлены отличия в структуре последней. мембран и разрушение гепатоцитов, а также на пато В гистопрепаратах печени цыплят, которые полу- логию костной ткани – высокую степень ее резорбции.

чали фумонизин В1 обнаружены большие казеозные Повышенная активность кишечного изоферменту свя некрозы, и их структура характеризовалась наличием зана с высоким уровнем его катаболизма в печенке.

белково-жирового детрита с присуцтвием одиночных Полученные результаты указывают, что под дейс эпителиоидных клеток, что указывало на замещение твием фумонизина В1 у цыплят возникает гепатоз и некротической массы ретикулярной тканью. нарушается минеральный обмен. Использование ми В печени цыплят, которые получали фумонизин В1 косорба улучшило биохимические показатели и умень и микосорб отмечено возобновление структуры за счет шило негативное влияние токсина на печень цыплят.

регенерации гепатоцитов, последние имели интенсив- Перспективой последующих исследований будет но еозинофильную цитоплазму, а одиночные гепото- изучение протективного действия других сорбентов циты имели несколько ядер. Наличие таких гепатоци- при фузариотоксикозах.

МОНИТРОИНГ АФЛАТОКСИНОВ В КОРМАХ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН Садыкова В.Н., Танасева С.А., Шангараев Н.Г.

ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных, казань Наиболее обширную группу грибов, поражаю- Здоровье сельскохозяйственных животных, их про щих зерновые и другие корма представляют грибы дуктивность, воспроизводительная функция и био Aspergillus flavus и Aspergillus parasiticus, являющихся логическая ценность получаемых от них продуктов в основными продуцентами афлатоксинов. В силу особой значительной степени зависят от санитарного качества биологической активности и широкой распространен- кормов. Своевременное обнаружение микотоксинов в ности опасность представляет афлатоксин В1. Микоток- кормах является очень важной проблемой сельского син уже в незначительных количествах при длительном хозяйства и ветеринарии. Соблюдение режимов убор поступлении в организм может вызвать необратимые ки урожая, закладки и хранения, а также системати процессы всех его систем: нервной, иммунной, вы- ческий анализ кормов и сельхозпродукции на содержа делительной, эндокринной, гуморальной;

приводит к ние в них микотоксинов, является важным фактором в нарушению функций печени и оказывает отдаленные профилактике микотоксикозов.

последствия на потомство (канцерогенное, эмбриоток- В 2007 – 2008 гг нами проведены исследования сическое, тератогенное, мутагенное действие). 1537 проб кормов, отобранных из 18 районов Рес 264 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел публики Татарстан в различных техногенных зонах. микотоксин был обнаружен в концентрациях до 0, Исследовались комбикорма, зернофураж различного мг/кг. Однако, и в комбикормах собственного приго состава, пшеница, ячмень, овёс, рожь, горох, сено, се- товления из местных ингредиентов также обнаружи наж, силос. Анализы проведены с помощью хроматог- вался микотоксин, но при этом его концентрация не рафических методов – ТСХ и ВэЖХ. превышала 0,035 мг/кг. Следует отметить, что наруше Афлатоксин В1 обнаруживался в 12,6 % кормов, ние технологии приготовления сенажа и силоса при концентрация микотоксина варьировала от 0,002 до вело к тому, что в них часто выявлялся афлатоксин В1, 0,81 мг/кг. Наиболее часто микотоксин обнаруживался последующие микологические исследования показали в комбикормах, сенаже и силосе. В комбикормах афла- высокую загрязненность кормов микроскопическими токсин присутствовал в основном за счёт включения в грибами – продуцентами афлатоксинов.

рацион привозных добавок – шрота соевого и жмыха Хозяйствам, неблагополучным по санитарному подсолнечного, так большинство проб шрота соевого качеству кормов, были даны рекомендации по рацио (84 %) содержали афлатоксин В1 в концентрациях до нальному их использованию, обезвреживанию и в от 0,24 мг/кг, в 42,7 % образцов жмыха подсолнечного дельных случаях их утилизации.

ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ И НЕКОТОРЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ НОРОК ПРИ Т-2 ТОКСИКОЗЕ И ПРИМЕНЕНИЕ СОРБЕНТОВ И ПРОБИОТИКОВ Самсонов А.И., Тремасов М.Я., Нуртдинов М.Г., Папуниди К.Х.

ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных», казань Микотоксикозы являются актуальной проблемой и ческие и биохимические исследования крови. Количес для звероводства. Опасность возникновения микоток- тво эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина сикозов в звероводстве, согласно сведениям многих в периферической крови определяли по общепринятым авторов, не вызывает сомнений. Во многом это связано методикам, общий белок – рефрактометрически (Анто с тем, что кормление пушных зверей в звероводческих нов Б.И. и др., 1991;

Кондрахин И.П., 2004).

хозяйствах за последние годы сильно изменилось, в Биохимические показатели сыворотки крови опре их рационе стали преобладать растительные продук- деляли на анализаторе EXpRESS pLUS.

ты, существенно сократив количество мясомолочных Во второй группе норок, содержание эритроцитов, продуктов. Норки обладают более высокой чувстви- гемоглобина лейкоцитов в крови по сравнению с конт тельностью к микотоксинам по сравнению с сельско- ролем уменьшилось на 30 сут эксперимента на 32,15 %, хозяйственными и лабораторными животными 26,65 %, 39,34 % (p0, 01) соответственно. В третьей В настоящее время существует множество подхо- группе на 7,65 %, 6,37 %, 7,65 % соответственно.

дов для профилактики микотоксикозов. Нами отобра- Содержание общего белка, глюкозы у норок во ны в качестве профилактических средств пробиоти- второй группе по сравнению с контролем к 30 сут экс ческий препарат «энтероспорин», произведенный в перимента снизилось на 27,48 %, 28,85 % (p0,01) со ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» на основе культуры Bacillus ответственно. В третьей группе животных на 9,63 %, subtilis и бентонит натрия Тарн-Варнского месторож- 9,34 % соответственно.

дения РТ, с содержанием минерала монтмориллонита Во второй группе активность аспартатаминотранс не менее 82 %. феразы, аспартаталанинтрансферазы, щелочной фосфа Исследования проведены на базе зверосовхоза тазы и содержание мочевой кислоты на 30 сут увеличи «Кощаковский» Республики Татарстан. В опыте ис- лось, относительно контроля, на 49,7 %, 47 %, 96,3 %, пользовались самки норок породы «Пастель», массой 25,4 % (p0, 01) соответственно. В третьей группе на тела 1,2 – 1,4 кг. В качестве микотоксина использовали 13,8 %, 17,65 %, 37,4 %, 8,45 % соответственно.

кристаллический Т-2 токсин, полученный в ФГУ ФЦ- Таким образом, поступление Т-2 токсина в дозе ТРБ. В качестве продуцентов микотоксина использова- 200 мкг/кг корма ежедневно в течение 30 суток отри ли гриб fusarium sporotrichiella, штамм 2м15, предо- цательно воздействует на гематологические и биохи ставленный д.в.н. А.Н. Котиком. мические показатели крови норок. Введение в рацион Было сформировано 3 группы животных по 3 нор- пробиотика энтероспорина и агроминерального эн ки в каждой. Первая группа – служила биологическим теросорбента – бентонит натрия оказывает защитное контролем. Вторая – получала с рационом Т-2 токсин действие, способствует снижению негативного дейс в дозе 200 мкг/кг корма. Третья – получала с рационом твия микотоксина на гематологические и биохими Т-2 токсин 200 мкг/кг корма, бентонит в дозе 2 % от ческие показатели крови норок, это свидетельствует рациона и энтероспорин 2 мл/животное. Опыт длился о том, что данные препараты могут применяться для в течение 30 суток, в конце опыта провели гематологи- профилактики и лечения микотоксикозов норок.

Микотоксикология САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА УРОВНЯ КОНТАМИНАЦИИ ПРОДУКТОВ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ АФЛАТОКСИНАМИ Сеидова Г.М.

кафедра медицинской микробиологии и иммунологии Азербайджанского Медицинского Университета, Баку В настоящей работе приведены результаты им- чем на основе фруктовых пюре. Наиболее демонстра муноферментного (ИФ) анализа уровня загрязнения тивны в этом отношении продукты детского питания микотоксинами грибов рода Aspergillus продуктов фирмы «Винни». Максимальное количество афлаток детского питания. Всего проанализировано 12 видов синов (2,17±0,26 мкг/кг) было обнаружено в молоч продуктов детского питания (молочные смеси и фрук- ной смеси «Рисовая плюс гречневая» и в молочной товые пюре), импортируемых из России, Германии и смеси «Овсяная» (2,76+0,18 мкг/кг). По сравнению с Швейцарии. Полученные данные в целом свидетельс- продуктами российского производства, продукты из твуют о том, что афлатоксины в различной степени вы- Швейцарии и Германии значительно менее подверже раженности присутствуют во всех изученных пробах. ны контаминации афлатоксинами, это относится как Продукты детского питания, импортируемые из к фруктовым пюре, так и молочным смесям. Только России были более контаминированы афлатоксина- один вид швейцарской продукции – молочная смесь ми, чем из Швейцарии и Германии. Так содержание «Гречневая», содержал афлатоксины в количестве суммарных афлатоксинов в фруктовом пюре с ябло- 1,21+0,14 мкг/кг, что превышает предельно-допусти ком фирмы «Агуша» (Москва, Россия) в некоторых мую норму. Дальнейший анализ накопленных данных пробах достигает уровня 2,15±0,24 мкг/кг, что зна- показал, что частота встречаемости контаминирован чительно превосходит допустимые нормы контами- ных проб также различна для продукции различных нации в 1,0 мкг/кг афлатоксинов для продуктов де- фирм-производителей. Чаще всего афлатоксины были тского питания. Из 5 наименований продукции этой выявлены в продуктах фирмы «Агуш», где вероят фирмы только один (фруктовое пюре с грушей) от- ность обнаружения микотоксинов достигает 22 %, в вечает современным требованиям. По сравнению с то время как для продуктов из Швейцарии этот по этим, фруктовые пюре фирмы «Фруттоняня» (Моск- казатель составляет не более 9,9 % из общего числа ва, Россия) выглядят предпочтительнее, хотя и в них изученных проб. Результаты исследования застав уровень контаминации в некоторых случаях на 20– ляют придти к выводу о необходимости системати 30 % превышает допустимые нормы. С другой сторо- ческого санитарно-гигиенического контроля уровня ны, продукты детского питания на основе молочных контаминации микотоксинами пищевых продуктов смесей были контаминированы значительно сильнее, детского питания.

Penicillium ciTrinum THOM КАК МОДЕЛЬНЫЙ ОБЪЕКТ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНО-ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЙ В КУРСАХ МИКОЛОГИИ И МИКОТОКСИКОЛОГИИ Скоробогатова Р.А., Жебрак И.С.

Гродненский государственный университет имени Янки купалы, Белоруссия До настоящего времени продолжает наблюдаться ких как яйца, молоко, сыры, содержащие микотоксины высказанное в 1968 г э. Мюллером и В. Леффлером в результате кормления животных контаминированны ощутимое противоречие между постоянно возрастаю- ми кормами. И, как следствие, микотоксины обнару щим значением микологии и недостаточным распро- живаются в крови норвежских и шведских доноров, странением знаний о грибах. Отсутствие элементарных урине мальчиков и девочек Сьерры-Леоны, урине и микологических знаний у населения ведет к микологи- плазме крови людей Соединенного Королевства Вели ческому невежеству, провоцирующему развитие чрез- кобритания, Польши, в грудном молоке в Египте. этот вычайно опасных ситуаций, стимулирующих рост и список можно было бы продолжить. Разумеется, что развитие токсинообразующих грибов в окружающей всё это отражается на долгосрочном здоровье челове среде, в том числе и в пищевых субстратах. Загряз- чества, так как большинство микотоксинов карцино нение окружающей среды микотоксинами (micotoxin генны, мутагенны, тератогенны.

contamination) относится к общемировой проблеме. В связи с этим в недрах микологии стала разви Известно, что в пищевые цепи человека микотоксины ваться микотоксикология как наука. История микоток входят не только с растительными субстратами, но и сикологии началась с конца 1-го тысячелетия описа при употреблении животных продуктов питания, та- нием заболевания под названием «Антониев огонь», 266 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел вызываемого алкалоидами спорыньи. Гибель 100000 дистиллированная вода – 1 л, смесь микроэлементов индюшат и утят в 1960 г в Соединенном Королевстве (1 мл. на 1 л. среды) MgSO4 – 8 мг., СuSO4 – 40 мг., Великобритания, вызванная наличием в скармливае- znSO4 – 880 мг., Co(NO3)2 _ 10 мг., feSO4 – 100 мг., мой им арахисовой муке токсического компонента, от- NH4MoO4 – 30 мг., H3BO3 – 6 мг., CaCl2 – 100 мг., дис крыло новую эру в изучении микотоксинов и развитию тиллированная вода – 100 мл. После инокуляции спо микотоксикологии как науки. И если грибы хотя бы и ровой суспензией выращивание культуры проводится слишком бегло, но всё-таки рассматривают в курсе в покое при температуре 27о С в течении 10–14 дней.

ботаники средней и высшей школы, то в отношении Для выделения кристаллического препарата цитринина микотоксикологии этого сказать нельзя. Курс микоток- культуральную жидкость отделяют от мицелиальной сикологии в системе общебиологического образования пленки и подкисляют 20 % HCl до pH 3,0. По мере под наших стран отсутствует. В связи с этим возникает не- кисления происходит выпадение желтого аморфного обходимость в подготовке у нас специалистов, владе- осадка. Подкисление проводят до полного осаждения ющих теорией и методами выделения токсинов и усло- порошка. Полученный осадок центрифугируют при вий токсинообразования и действия их на различные 3000 об./мин 5 минут, а затем высушивают в эксикаторе живые организмы. над CaCl2. Для получения кристаллического препара В этом отношении идеальным модельным объек- та порошок-сырец растворяют в подогретом до 40–50о том является почвенный сапрофитный гриб penicillium этиловом спирте. Нерастворимый осадок отбрасывают, citrinum Thom, который продуцирует микотоксин-анти- а чистый раствор ставят в холодильник, где происходит биотик цитринин. Для получения цитринина продуцент кристаллизация вещества. Полученный кристалличес выращивается на среде Ролен-Тома с микроэлемента- кий препарат цитринина можно использовать для изу ми: сахароза – 40 г;

глюкоза – 8 г;

С4Н6О6 (NH4)2 –7 чения гриборастительных отношений, действие на ор г;

КН2pO4 – 2,2 г;

k2SO4 – 0,6 г;

MgSO47H2O – 0,2 г;

ганизм животных и антибактериальный эффект.

О НАРУШЕНИИ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ ЖИВОТНЫХ ПРИ МИКОТОКСИКОЗАХ Тремасов Ю.М., Ахметов Ф.Г., Сергейчев А.И., Иванов А.В.

ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных, казань Имеются многочисленные сведения об отрицатель- изменений в клиническом статусе не отмечалось, в ном влиянии микотоксинов на половую систему орга- крови было пониженное содержание общего белка, низма животных. Избирательно действует на органы гамма глобулинов, каротина и глюкозы. В хозяйствах размножения зеараленон, вызывает эстрогенизм, у выявлялись случаи мертворождения, аборты. У беременных животных рассасывание плодов, рожде- коров после родов, часто сложных, наблюдались эндо ние мертвых и мумифицированных плодов, аборты, метриты, до 93,4 % случаев осложненные кандидозом, уродства;

у хряков – олигоспермию и олигосперматоз. 52,7 % эндометритов были гнойными. Лечение живот Бесплодие могут вызывать Т-2 токсин, афлатоксины, ных различными препаратами и средствами эффекта патулин и др. не давало, коровы не осеменялись, большинство из На сельскохозяйственных предприятиях республик них выбраковывались. В некоторых хозяйствах коли Татарстан, Марий – эл, Удмуртия, Чувашия нами диа- чество полученного приплода не достигало 30 телят на гностировались нарушения воспроизводительной фун- 100 коров.

кции у крупного рогатого скота, основным причинным После постановки диагноза – субхронический или фактором которых явилось потребление животными хронический микотоксикоз, исключение из рациона кормов, содержащих микотоксины. В кормах, преиму- пораженного микотоксинами корма или добавления щественно в зерновых и комбикормах, выявляли афла- энтеросорбентов число эндометритов значительно токсин В1, стеригматоцистин, Т-2 токсин, зеараленон;

снижалось и не превышало обычные для хозяйств в корнаже, силосе и сенаже – патулин. Концентрация данные. Для лечения эндометритов у коров были ис микотоксинов составляла от 0,05 до 5 мг/кг, патули- пользованы разработанные в ФГУ ФЦТРБ – ВНИВИ на – до 12 мг/кг. В рационе часто одновременно выде- средства – эндометрин (ДС-1) и эндометрин – 2 (ДС лялись два, реже три микотоксина, продолжительность 2) на основе активных серосодержащих компонентов, скармливания кормов составляла от 10 сут до 3-х ме- отличие в препаратах заключается в наличии в ДС- сяцев. Всего под наблюдением находилось 3500 коров маточно – стимулирующего средства и мебетизола.

черно – пестрой, холмогорской и голштинской пород, Применение препаратов способствовало выздо 46 быков производителей – голштинской породы. Ко- ровлению большинство животных (до 88,4 %), коровы ровы получали с кормом спонтанно микотоксины и в оплодотворялись в основном после первого осемене период сухостоя и после родов. У животных резких ния (до 61,5 %), остальные после второго и третьего Микотоксикология осеменения. эффективность препаратов связана с по- После полной замены пораженного микотоксинами тивокандидозной, антимикробной активностью и ан- корма, на 10 – 12 сут, качество спермы соответствова тивоспалительным действием. ло существующим требованиям.

В рационе у быков производителей был выделен Таким образом, микотоксикозы сопровождаются микотоксин афлатоксин В1 в количестве 0,05 – 0,5 мг/ нарушением воспроизводительной способности жи кг, кормление таким кормом продолжалось 30 суток. вотных, а предложенный комплекс мероприятий спо Сперма, полученная от этих животных была низкого собствует оздоровлению большинства животных и по качества т.е. не соответствовала требованиям ни по од- лучению от них потомства.

ному показателю, и была утилизирована.

АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ МОНИТОРИНГА ЗАГРЯЗНЕНИЯ КОРМОВ МИКОТОКСИНАМИ Фетисов Л.Н., Солдатенко Н.А.1, Русанов В.А.1, 1 ГНУ Северо-кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт, Новочеркасск 2 ГНоУ вПо Южный федеральный университет, Ростов-на-Дону Микотоксины (МТ) все чаще и во все больших загрязненных охратоксином в количествах выше масштабах становятся причиной не только снижения МДУ: среди образцов пшеницы на 16,5 %, жмыха продуктивных качеств животных, но зачастую острых подсолнечного – 4 %, дерти ячменной – 29,4 %, ком заболеваний и гибели их. Непрямым конкурентным бикормов для откорма и доращивания свиней – 38 %.

ИФА исследовано 443 пробы кормов из зерна урожаев Среди фузариотксинов в кормах чаще был представ 2006–2007 гг., поступивших из 22 районов Ростовской лен Т-2 токсин. Рост его присутствия установили в области, Краснодарского и Ставропольского краев. пробах кукурузы на 16 %, ячменя на 16 %, дерти яч Анализ полученных результатов показал общее воз- менной на 37,4 %, комбикормов для поросят на 23 %.

растание частоты загрязнений всех исследованных кор- Доля проб, загрязненных другими фузариотоксинами мов. В 2007г. увеличение числа положительных проб снизилась почти во всех видах кормов. Наибольший по сравнению с 2006 г. составило в образцах пшеницы рост загрязнения отметили в пробах дерти ячменной 2 %, кукурузы 22 %, ячменя 3 %, гороха 40 %, жмыха и жмыха подсолнечника. Особенно высокую встре подсолнечного 37 %, дерти ячменной 19 %, комбикор- чаемость в этих кормах имели также представители мов для поросят 19 %, комбикормов для доращивания «плесеней хранения». В 2004–2006гг аспергиллоток и откорма свиней 13 %. Возросла также доля кормов, сины и фузариотоксины обнаруживали в пробах кор контаминированных двумя и более токсинами, причем мов в равных долях или близко к равным. В 2007 году увеличение числа таких проб оказалось более значи- ситация изменилась.

тельным.

Рост сочетанных контаминаций составил в При общем увеличении числа положительных проб образцах пшеницы 20 %, кукурузы – 62 %, ячменя – за этот период произошел сдвиг в спектре определяе 50 %, гороха – 35 %, жмыха подсолнечного – 26 %, мых микотоксинов: загрязнение аспергиллотоксинами дерти ячменной – 11 %, отрубей пшеничных – 32 %, устанавливали в пробах кормов в 2,2 раза чаще чем фу комбикормов для поросят – 18 %, комбикормов для зариотоксинами. Отмеченные отличия в соотношении доращивания и откорма свиней – 10 %. микотоксинов обусловлены, главным образом, клима В 2007 году наибольшая встречаемость выявле- тическими особенностями вегетационного периода на для аспергиллотоксинов. Увеличение числа проб, 2007 года (длительная засуха). Накопление в кормах содержащих афлатоксин АВ1 составило в образцах преимущественно токсинов «плесеней хранения» сви кукурузы 20,5 %, ячменя –0,5 %, гороха – 30 %, жмы- детельствует также о необходимости создания удов ха подсолнечного – 11 %, дерти ячменной – 22,7 %, летворительных условий хранения кормов на складах отрубей пшеничных – 27 %, комбикормов для поро- кормопроизводителей и на фермах. Установленный сят – 1 %, комбикормов для доращивания и откорма факт существенной смены состава токсикантов кормов свиней – 8 %. Стеригматоцистин также обнаружи- подтверждает необходимость постоянного контроля вали чаще в количествах выше МДУ в пробах пше- загрязнения, так как спектр установленных токсинов ницы(2 %), кукурузы(5 %), ячменя(14 %), жмыха определяет меры по профилактике и по лечению жи подсолнечного(9 %), дерти ячменной(23 %), ком- вотных, определяет подбор сорбентов, средств патоге бикормов для поросят(14 %). Возросло число проб, нетической и симптоматической терапии.

268 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел ИЗМЕНЕНИЯ В СТРУКТУРНОМ КОМПЛЕКСЕ МИКОБИОТЫ КОРМОВ ПОД ВЛИЯНИЕМ СИНТЕТИЧЕСКИХ МОЮЩИХ СРЕДСТВ И ИХ КОМПОНЕНТОВ Харченко С.Н., Башта Е.В., Волощук Н.М.

Национальный аграрный университет, киев Интенсивное производство синтетических мою- Bon., Fusarium Link. Индуцированная устойчивость щих средств (СМС), изготавливаемых на основе по- названных родов микромицетов к СМС и ПАВ транс верхностно активных веществ (ПАВ), создало новую, формировалась по наследству новым популяциям и глобального масштаба проблему – изучения влияния сопроваждалась изменениями морфолого-культураль ранее неизвестного антропогенного фактора на состав ных признаков и токсигенных свойств. Полученные микобиоты отдельных экологических ниш, в том числе результаты объясняют высокий коэффициент встреча на рост и токсинобразование микромицетов, поражаю- емости представителей видов с измененным потенци алом: aspergillus flavus, a. fumigatus, a. niger, Penicil щих корма.

lium cyclopium, P. urticae, Fusarium sporotrichiella и др.

Изучено антифунгальное действие более 50 наиме нований СМС и ПАВ (стиральные порошки, гели, пас- в почве, ризосфере растений, кормах.

ты, шампуни, мыла и др.) по отношению к 30 видам Установлена избирательная чувствительность мик (320 штаммам) 18 родов грибов, выделенных из кор- ромицетов к препаратам бытовой химии. Она дает воз мов (сено, солома, зерно, комбикорма), отобранных в можность прогнозировать загрязненность кормовых хозяйствах и птицефабриках Украины. субстратов микотоксинами, характеризовать способ Статистическая обработка полученных данных вы- ность их усваивать в экстремальных условиях сущес явила тенденцию повышения резистентности к хими- твования необычных для них источников питания, а катам у видов родов aspergillus Mich., Penicillium Link, также возможности направленного поиска изолятов – и в меньшей степени у представителей myrothecium активных деструкторов пестицидов разного хозяйс link, dendrodochium toxicum pid. et Bilai, Stachybotrys твенного назначения.

ОДНОВРЕМЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФУМОНИЗИНА, ОХРАТОКСИНА И ЗЕАРАЛЕНОНА В ПШЕНИЦЕ МЕТОДОМ МЕМБРАННОГО ПРОТОЧНОГО ИММУНОАНАЛИЗА Яковлева М.Е.1, Колосова А.Ю.2, Сара де Саегер2, Еремин С.А. 1 Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова, Москва 2 Гентский Университет, Гент, Бельгия 3 Московский Государственный Университет им. М.в. ломоносова, Москва Микотоксины являются продуктами метаболизма борьбы с загрязнением агропродукции привело к тому, микроскопических плесневых грибов и составляют что в большинстве стран были установлены ПДК со обширную группу токсикантов природного проис- держания микотоксинов и началась разработка мето хождения. В настоящее время более 25 % мирового дов их определения.

урожая зерновых культур заражено одним из видов В настоящее время приоритетной задачей при раз микотоксинов. Среди них наиболее распространены работке любого метода анализа является возможность афлатоксины, трихотецены, охратоксины и зеарале- одновременного определения нескольких микотокси нон. Большинство из них являются высокотоксичными нов, т.к. в большинстве случаев для них характерно соединениями, образование которых нельзя предупре- совместное присутствие в том или ином виде заражен дить, т.к. оно тесно связано с экологическими услови- ной агропродукции. При наличие достаточной чувстви ями. Из-за наличия устойчивой химической структуры тельности и селективности дополнительными преиму микотоксины не разрушаются в процессе хранения и ществами являются дешевизна метода, его быстрота, а переработки сырья, а также в процессе приготовления также отсутствие громоздкого оборудования, работать пищи. В результате, они в неизменном виде и в значи- с которым может только высококвалифицированный тельных концентрациях попадают в продукты питания персонал. Учитывая перечисленные факторы, нами и корма для животных. При употреблении контамини- была разработана методика мембранного проточно рованной продукции возможны отравления вплоть до го иммуноанализа одновременного определения трех летальных исходов. Отсутствие эффективных методов микотоксинов: фумонизина В1, охратоксина и зеарале Микотоксикология нона в пшенице. Методика основана на конкуренции ки ((ДE*ab(fB1) = 13,33 ± 2,59;

ДE*ab(ОТА) = 12,92 ± определяемого вещества и коньюгата с ферментной 2,31;

ДE*ab (zEA) = 14,26 ± 1,07 (n = 15)), а «положи меткой (щелочной фосфатазой) за места связывания тельному» результату – отсутствие окраски на мемб специфических антител, адсорбированных на мембра- ране (ДE*ab = 5,55 ± 0,71;

(n = 15).

не с вторичными антителами. Первичные антитела к Кроме разработки методики одновременного оп трем микотоксинам наносят на поверхность мембраны ределения нескольких микотоксинов не менее важной при помощи пипетки в виде точек диаметром не более задачей данной работы являлся подбор оптимальных 1–1.5 мм. Мембрана помещена в пластиковый планшет условий для экстракции и дальнейшего анализа ис с впитывающей подложкой и отверстием, через кото- следуемых токсикантов в пшенице. Пробоподготовка рое последовательно пропускают: 1) 600 мкл раствора заключалась в экстрагировании, центрифугировании и стандарта или образца, 2) 60 мкл смеси коньюгатов и 3) фильтровании супернатанта, разбавленного в шприце 120 мкл субстрата. После 1-го и 2-го этапов через мем- фосфатным буфером, на поверхность мембраны. Оп брану пропускают соответственно 60 мкл и 120 мкл тимальным для полного извлечения микотоксинов из фосфатного буфера для удаления непрореагировавших матрикса оказалось использование смеси метанола, компонентов. Данный объем, подобранный опытным воды и ледяной уксусной кислоты (79:20:1) в качес путем, позволяет достичь наименьшей интенсивности тве экстрагента, а также политетрафторэтиленового фона мембраны. Через пять минут после добавления фильтра, в меньшей степени, по-сравнению с другими субстрата реакцию останавливают при помощи 100 фильтрующими материалами, адсорбирующего иссле мкл дистиллированной воды, затем визуально или при дуемые токсины на своей поверхности.

помощи портативного колориметра проводят оценку Для апробации методики были проанализированы интенсивности образовавшихся коричневых пятен с образцы пшеницы, загрязненные смесью микотокси учетом того, что интенсивность окраски обратно про- нов в концентрациях выше и ниже уровня ПДК, уста порциональна концентрации определяемого вещества. новленного для каждого из них. Анализ проводили три Методика позволяет визуально оценить наличие или раза в день в течение трех дней с последующим расче отсутствии фумонизина В1, охратоксина и зеараленона том коэффициента вариации и стандартного отклоне в пшенице на уровне ПДК согласно требованиям Ев- ния. Максимальная величина коэффициента вариации росоюза (200 мкг/кг, 0.5 мкг/кг и 10 мкг/кг, соответс- не превысила 14,95 % для результатов, полученных в твенно) в режиме «да»/«нет» (отсутствие или наличие течение одного дня и 16,12 % для результатов, полу пятна), а также определить концентрацию микотокси- ченных за три дня, что свидетельствует о хорошей вос нов при измерении интенсивности окраски пятен при производимости методики.

помощи колориметра. В этом случае интенсивность Разработана методика одновременного визуального окраски выражается единичной величиной ДЕ*аb. определения фумонизина В1, охратоксина и зеарале Оптимальные концентрации первичных монокло- нона на уровне ПДК. Данная методика мембранного нальных антител и коньюгатов были определены мето- проточного иммуноанализа не требует сложной пробо дом «проб и ошибок» с использованием стандартного подготовки, обладает хорошей воспроизводимостью и раствора смеси микотоксинов, концентрация каждого может быть использована для скрининга данных мико из которых соответствует ПДК, и раствора фосфатного токсинов в продуктах питания и кормах для животных.

буфера с метанолом в качестве «бланкового» раствора. Работа выполнена при финансовой поддержке Разведения иммунореагентов были подобраны таким гранта РФФИ и Фландрии 05–03–34828-МФ_а «Стра образом, чтобы «отрицательному» результату соот- тегия экспрессной детекции микотоксинов в пищевых ветствовали пятна с высокой интенсивностью окрас- продуктах».

Раздел бИОЛОГИЯ ДРОЖЖЕй ИЗУЧЕНИЕ ШТАММОВ candida albicanS ДЛЯ СОЗДАНИЯ АНТИКАНДИДОЗНОЙ ВАКЦИНЫ Блинкова Л.П., Горбатко Е.С.

ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Москва Культуры, выделенные из клинического материала проведена серия экспериментов с применением жид и предварительно идентифицированные с помощью кой среды Сабуро и 10 созданных нами сред (солевых прибора «Микроб-Автомат» как candida spp., допол- или различающихся белковым компонентом).

нительно изучали по морфологическим, тинктори- Выращивание осуществляли при разной темпера альным, культуральным и физиолого-биохимическим турной экспозиции и продолжительности процессов свойствам, а также на токсичность in vivo. культивирования.

Оценку интенсивности роста штаммов candida На широком наборе дифференциально-диагнос spp. проводили по оптической плотности (ОП) вырос тических сред в сравнении с контрольным штаммом c. albicans ATCC 885–663 определяли способность 11 ших культур с измерением величины ОП на приборе штаммов дрожжевых грибов утилизировать углеводы Dynatech MR5000 при длине волны 450 нм с использо и многоатомные спирты, аминокислоты, соли, синте- ванием микролуночных планшет.

зировать пигменты, бактериоцины, гемолизины и ха- Рост клинических культур на среде Сабуро не от рактерные для вида продукты метаболизма. личался по показателям интенсивности от роста кон Наличие некоторых «ключевых» диагностических трольного штамма. Однако наиболее высокие показа свойств культур повторно подтверждено с использова- тели размножения дрожжевых грибов отмечены при нием тест-системы «HiCandida Identification kit» (Hi- выращивании на оригинальной среде СПАС-4.

Media). На беспородных белых мышах при внутрибрю Важные фенотипические характеристики штаммов шинном введении разных концентраций клеток кон трольной и клинических культур candida albicans, получены на хромогенной среде, предназначенной для candida spp., и на среде Никерсона (HiMedia);

на хла- была испытана и оценена их токсичность, относяща мидоспорагаре, бульоне и агаре Сабуро (НПО «Пита- яся к основным критериям безопасности вакцинных тельные среды»). штаммов.

Особое внимание уделено образованию псевдоми- В итоге этого этапа исследований эксперимен целия, бластоконидий, хламидоспор. тально подобраны штаммы и оптимальные условия Среди изученных штаммов, помимо candida al- выращивания candida albicans (питательные среды, bicans, идентифицированы c. tropicalis, c. globrata, режимы процесса периодического культивирования) с c. krusei. целью получения биомассы, из которой будут выделе Всего изучено 80 признаков. ны протективные антигены.

С целью выявления оптимального состава пита- Помимо этого, проведена подготовка штаммов candida albicans, наиболее перспективных для созда тельных сред, которые могли быть наиболее пригодны для получения биомассы штаммов candida в выбран- ния антикандидозной вакцины, к депонированию в ных условиях периодического культивирования, нами Национальной коллекции культур.

272 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел ВЛИЯНИЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ НА ФИЗИОЛОГО БИОХИМИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ Войчук С.И., Громозова Е.Н.

Институт микробиологии и вирусологии им. Д.к. заболотного НАН Украины киев эффекты, возникающие при центрифугировании Показано, что центрифугирование оказывает су клеток микроорганизмов, связаны с изменениями гра- щественное влияние на физиолого-биохимическое витационного поля, а также механическим взаимодейс- состояние клеток дрожжей. эффект действия зави твием клеток друг с другом и с компонентами среды. сит от скорости центрифугирования. Было отмече Различные варианты центрифугирования применяются но, что при минимальной скорости (1000 об./мин) для моделирования и исследования поведения микро- активность ферментов дегидрогеназного комплекса бов в условиях микро- и гипергравитационных воз- возрастает. При этом резистентность клеток к дейс действий. При постановке лабораторных исследований твию нистатина падала на 60 %. Увеличение скоро центрифугирование чаще всего используется для осаж- сти центрифугирования приводило к изменениям в дения клеток организмов, а также с целью отмывания характере обоих этих показателей. При 2000 об./мин их от предыдущей среды. В этих случаях клетки, чаще активность ферментов дегидрогеназ варьировала от всего подвергаются воздействию, так называемой, ги- опыта к опыту не позволив выявить закономернос пергравитации, т.е. их центрифугируют при значениях ти. В то же время резистентность к антибиотику g 2000. Отцентрифугированные клетки используются постоянно демонстрировала эффект возрастания в для дальнейших экспериментальных манипуляций. При результате центрифугирования (в 1,5–2 раза) и сни этом из виду упускаются возможные изменения, про- жения в результате процедуры отмывания (минимум изошедшие в их физиолого-биохимическом состоянии. на 40 %). При 5000 об./мин ферменты дегирогеназ Однако известно, что гипергравитационное воздействие вели себя как и при 2000 об./мин, а жизнеспособ приводит к целому ряду изменений в структурно-функ- ность увеличивалась минимум в 2 раза после цент циональной и физиолого-биохимической организации рифугирования и в 1,5 раза после центрифугирова клеток живых организмов. ния с отмыванием.

В настоящей работе исследовалось влияние проце- Таким образом, полученные данные свидетель дуры центрифугирования на жизнеспособность кле- ствуют о важной биологической роли процедуры ток и их чувствительность к ингибиторам роста. Цент- центрифугирования, которая обязательно должна рифугирование проводили при скоростях 1000, 2000 и учитываться при проведении исследований. Дейс 5000 об./мин., три раза по пять минут. После каждого твующим фактором оказывается как само центрифу центрифугирования часть клеток ресуспендировали в гирование, так и процедура отмывания, т.е. удаление такой же, но свежей среде, а вторую часть клеток ос- внеклеточных метаболитов. Отмеченные эффекты тавляли в той среде, в которой они только что находи- вероятно будут зависеть не только от параметров лись. Контролем служили клетки дрожжей не подвер- центрифугирования, но и от организма, а потому гнутые центрифугированию и соответственно они не должны детально исследоваться для получения пол отмывались. Жизнеспособность оценивали по КОЕ и ной картины взаимодействия живой природы с ее активности ферментов (дегирогеназ). окружением.

эПИФИТНЫЕ ДРОЖЖИ СПОРОВЫХ РАСТЕНИЙ Голубев В.И.

ИБФМ РАН, всероссийская коллекция микроорганизмов, Пущино Дрожжевая микобиота, ассоциированная со споро- соответственно, папортника и хвоща. Для подавления выми растениями, в отличие от микобиоты семенных, бактерий в среды вносили бензилпенициллин и стреп до настоящего времени практически не обследована, томицин.

что инициировало изучение ее в филлосфере, в част- Количество клеток (КОЕ) дрожжевых грибов в ности, папоротника (athyrium filix-femina (L.) Roth) и указанные месяцы на папоротнике находилось в диа хвоща (equisetum hiemale L.), произрастающих в лесах пазоне 48–85 тыс./г, что составляло 40–46 % от чис южного Подмосковья. ленности всех микромицетов. На хвоще количество Образцы растений собирали в июне-июле 2005 г. и дрожжей колебалось значительнее, от 17 до 131 тыс.

анализировали в день отбора проб. Высевы проводи- кл./г, представляя 13–44 % от общей численности мик ли на агаризованные отвары из надземных же частей, ромицетов. На обоих растениях плотность популяций Биология дрожжей как дрожжей, так и мицелиальных микромицетов в тельные криптококки комплекса C. laurentii (Tremella les). Ряд этих изолятов отнесен к виду c. victoriae Mon июле была выше, чем в июне.

Изучение более 50 изолятов с папоротника и хво- tes et al., а остальные фенотипически сходны с видами c. carnescens (verona et Luchetti) Takashima et al., c.

ща показало, что все они относятся к базидиомицетам laurentii (kufferath) Skinner, c. nemorosus Golubev et и принадлежат к родам Cryptococcus kьtzing emend.

al. и c. peneaus (phaff et al.) Takashima, но также отли phaff et Spencer, Cystofilobasidium Oberwinkler et Bandoni, Rhodotorula Harrison, Sporobolomyces kluyver чаются от них по некоторым свойствам и результатам et van Niel и Tilletiopsis Derx. Во всех высевах резко микоцинотипирования. Поскольку микоциночувстви преобладали криптококки, составляя свыше 90 % в по- тельность таксоноспецифична, многие полученные из пуляциях дрожжевых грибов в филлоплане обоих рас- филлоплана папортника и хвоща изоляты принадле тений. Лишь в июне на хвоще доля их была несколько жат, по-видимому, к новым, еще неописанным, видам.

ниже (70 %). Минорные же компоненты дрожжевого сообщест ва филлоплана хвоща идентифицированы как cys. cap Дрожжи филлосферы папоротника представлены itatum (fell et al.) Oberwinkler et Bandoni, r. bacarum в основном нитрат-положительными криптококками (Buhagiar) Rodrigues de Miranda et Weijman, r. pal комплекса C. albidus (filobasidiales), среди которых идентифицирован c. phenolicus fonseca et al. Другие lida Lodder, r. glutinis (fresenius) Harrison и S. roseus изоляты фенотипически близки видам c. silvicola Gol- kluyver et van Niel. Последние два вида обнаружены и ubev et Sampaio, c. saitoi fonseca et al. и c. wieringae на папоротнике, где найдены кроме того r. auriculariae (Nakase) Rodrigues de Miranda et Weijman и T. washing fonceca et al., отличаясь от них по некоторым диагнос tonensis Nyland. В отличие от криптококков все выше тическим признакам и чувствительности к микоцинам.

Напротив, в популяциях дрожжей филлосферы хвоща указанные виды присутствовали высевах однократно и присутствовали почти исключительно нитрат-отрица- были представлены единичными колониями.

ИЗУЧЕНИЕ ПУТЕЙ ПЕРЕДАЧИ КЛЕТОЧНЫХ СИГНАЛОВ НА МОДЕЛИ КАНДИДОЗА Гроза Н.В., Иванов И.В., Мягкова Г.И.

Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.в. ломоносова, Москва Окисленные производные ненасыщенных жирных индивидуальных образцов оксилипинов – 3-гидрокси кислот (оксилипины) играют важную роль в процессах эйкозатетраеновой кислоты (3-НЕТЕ) – в среде инку адгезии, роста и репродукции клеток грибов. Вместе бации клеток хозяина. В качестве экспериментального с тем остаются невыясненными особенности взаимо- животного объекта была выбрана культура клеток эпи телоидной карциномы матки человека – клеток Hela, действия болезнетворных грибов с животными тка которая в комбинации с инфекцией c. albicans являет нями, поэтому актуальной задачей является изучение метаболизма оксилипинов в грибах, а также оксили- ся моделью вульвовагинального кандидоза.


Hela клетки подвергали временной трансфекции:

пин-ассоциированной трансдукции сигналов на моде лях «хозяин-патоген» с целью выявления механизмов 1) репортерным вектором, содержащим конструкцию функциональной области гена cox-2, лигированную с возникновения и развития микозов.

Известно, что ферменты перекисного окисления геном люциферазы (prСОХ-2-pLUC), 2) либо анало липидов – циклооксигеназы (COX-1, COX-2) – ката- гичной плазмидой, содержащей функциональную об лизируют ключевые реакции биосинтеза простано- ласть гена транскрипционного фактора Nf-кB (prNf кB-pLUC). Дополнительно применяли d/n плазмиды, идов – низкомолекулярных биорегуляторов важных патофизиологических реакций. Внешние клеточные содержащие нарушенные функциональные области стимулы, такие как факторы роста, цитокины, регули- генов: а) изоформы ядерного рецептора ppARг (ppARг руют уровень экспрессии генов cox-1 и cox-2. Повыше- d/n), б) IкB киназы Ikk-киназного белкового комп нием уровня экспрессии гена индуцибельной COX-2 лекса, ответственного за фосфорилирование процес сопровождается множество патологических и онколо- сингового протеина Nf-кB-зависимого сигнального пути (Ikk d/n). В качестве ингибиторов и эффекто гических заболеваний человека: ревматоидный артрит, опухоли желудка, кишечника, молочной железы. С це- ров указанных сигнальных процессов применяли SB лью определения возможности модуляции активнос- 202190 (ингибитор р38МАРк) и розиглитазон (селектив ти гена cox-2 с помощью гидроксилипинов грибного ный лиганд для рецептора ppARг). Трансфицирован ные Hela клетки были заражены c. albicans (мутанты происхождения было исследовано изменение уровня его экспрессии как под воздействием дрожжей can- с ослабленной вирулентностью cav2 и cav3, питавши dida albicans, в питательную среду которых добавля- еся АК) или обработаны жирнокислотными производ ли арахидоновую кислоту (АК), так и в присутствии ными 3(r/S)-НЕТЕ, либо 3(R)-НЕТЕ;

уровень экспрес 274 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел сии репортерных векторов измеряли по люциферазной тами cav2 или cav3. Данные следующей серии экспери ментов показали, что уровень экспрессии гена nf-кb, активности.

Результаты экспериментов показали, что мутанты индуцированный добавлением 3(r/S)-НЕТЕ, снижался candida albicans, питавшиеся АК, селективно повыша- в присутствии плазмиды Ikk d/n. Анализируя резуль ли уровень экспрессии гена cox-2 в Hela клетках. Пре- таты исследований с применением репортеров, можно инкубация трансфицированных Hela клеток с ингиби- выдвинуть гипотезу о том, что 3-НЕТЕ (аналогично тором р38МАРк SB 202190 перед добавлением инфекции арахидоновой кислоте) участвует как дополнительный c. albicans вызывала селективное снижение уровня экс- агент в формировании воспалительного ответа клеток прессии гена cox-2, индуцированного мутантом cav2. млекопитающих и воздействует на рецепторы, чувстви Было выявлено, что оксилипин 3(r,S)-HETE, добав- тельные к производным жирных кислот.

Таким образом, было показано, что и мутанты can ленный в инкубационную среду вместо инфекции, по вышал уровень экспрессии гена cox-2 дозозависимым dida albicans, питавшиеся арахидоновой кислотой, и образом, как было установлено ранее для арахидоновой 3-гидроксилипины, добавленные в среду инкубиро кислоты. Аналогичный опыт с применением препара- вания, способны модулировать передачу сигналов в клетках млекопитающих на модели кандидоза in vitro та оптически активного изомера 3(R)-HETE не показал изменений в уровне экспрессии гена cox-2. Также было и, следовательно, могут участвовать в формировании найдено, что уровень экспрессии гена cox-2, индуциро- воспалительного ответа по сценарию прооксидативно ванный ослабленной инфекцией c. albicans, снижался го стресса, как и арахидоновая кислота. Также было в присутствии плазмиды ppARг d/n. Преинкубация выявлено, что механизмы, связанные с ядерным рецеп трансфицированных Hela клеток с лигандом рецептора тором ppARг и транскрипционным фактором Nf-кB, ppARг розиглитазоном перед добавлением инфекции c. влияют на передачу сигналов, вызываемых микозной albicans вызывала повышение уровня экспрессии гена инфекцией или окисленными производными полине cox-2 по сравнению с уровнем, индуцированным мутан- насыщенных жирных кислот в животных клетках.

ВЛИЯНИЕ эКЗОМЕТАБОЛИТОВ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ НА РОСТОВЫЕ СВОЙСТВА БИФИДОБАКТЕРИЙ.

Иванова Е.В., Перунова Н.Б.

Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза, оренбург В последнее десятилетие актуальность приобрел ры B.longum без добавления экзометаболитов дрож кандидоз кишечника. Установлено, что наряду с уве- жевых грибов.

личением обсемененности биотопа желудочно-ки- Результаты: установлено разнонаправленное, но шечного тракта дрожжеподобными грибами, часто преимущественно подавляющее влияние экзометабо выявляется дефицит бифидофлоры. В этой связи це- литов дрожжевых грибов на ростовые характеристики лесообразным представляется изучение особенностей бифидофлоры. Грибы рода Rhodotorula ингибировали возможных механизмов взаимодействия бифидобакте- рост исследуемых микроорганизмов в 28 % случаев в рий и дрожжевых грибов в их ассоциациях. среднем на 30 % по сравнению с контролем. Был отме Цель: изучить влияние экзометаболитов дрожже- чен бактерицидный эффект в 33 % случаев (отсутствие вых грибов рода Candida и Rhodotorula на ростовые роста культур бифидобактерий). Стимуляция роста свойства бифидобактерий. бифидобактерий грибами наблюдалась в 8 % случаев в Материалы и методы: в работе использовано по среднем на 29 %. В ряде случаев ( 31 %) супернатанты 10 штаммов грибов рода Candida и Rhodotorula и 6 дрожжевых грибов не оказывали влияния на ростовые штаммов Bifidobacterium longum, выделенных от па- свойства B.longum. Грибы рода Candida чаще оказы циентов с дисбиозом кишечника 2–3 степени. Посев вали ингибирующий эффект на рост бифидобактерий, исследуемого материала осуществляли на элективные по сравнению с грибами рода Rhodotorula. Снижение питательные среды с последующей идентификацией роста B.longum отмечалось в 57 % случаев в среднем штаммов общепринятыми методами. экзометаболи- на 27 % по сравнению с контролем, в 27 % случаев – ты дрожжевых грибов получали путем пропускания наблюдалось бактерицидное действие. Стимуляция бульонной культуры исследуемых штаммов Candida роста анаэробов выявлена в 6 % случаев (в среднем spp. и Rhodotorula spp. через фильтры «Millipore» с на 17 %), в 10 % случаев бифидобактерии оказались диаметром пор 0,12 мкм. Фильтраты воздействующих индифферентны к действию супернатанта грибов рода штаммов (дрожжевых грибов) добавляли в питатель- Candida.

ный бульон с исследуемой культурой бифидобакте- Выводы: таким образом, грибы рода Candida и Rho рий. Исследование ростовых свойств бифидобакте- dotorula способны влиять на рост бифидобактерий.

рий проводили на фотометре ELx808 (BioTek, США). Выявлен преимущественно ингибирующий эффект эк В качестве контроля использовали бульонные культу- зометаболитов грибов (особенно рода Candida) на рос Биология дрожжей товые свойства B.longum. Полученные данные могут лесообразным представляется изучение особенностей иметь значение в регуляции численности бифидобакте- возможных механизмов взаимодействия бифидобакте рий при наличии в биоценозе грибов рода Candida, что рий и грибов рода Candida в их ассоциациях, с целью может усугублять микроэкологические нарушения при управления и осуществления эффективной профилак дисбиотических изменениях биотопа. В этой связи це- тики и лечения грибковых дисбиозов кишечника.

ОСОБЕННОСТИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРУППИРОВОК В ФИЛЛОСФЕРЕ СФАГНОВЫХ МХОВ Качалкин А.В., Глушакова А.М., Юрков А.М., Чернов И.Ю.

Московский Государственный Университет им. М.в. ломоносова, ф-т почвоведения, каф. биологии почв, Москва Дрожжи относятся к числу наиболее характерных ях. Основное отличие – незначительное присутствие эпифитных микроорганизмов, активно размножаю- красных пигментированных дрожжей и сравнитель щихся на поверхности растений. В последних работах но низкое обилие анаморфных тремелловых крипто нашей лаборатории показано, что на разных видах со- кокков, которые являются типичными эпифитами на судистых растений, независимо от их таксономической листьях сосудистых растений в умеренных и север принадлежности, в среднем доминируют одни и те же ных широтах и достаточно высокая численность и виды дрожжей. Однако дрожжевое население других разнообразие дрожжей из класса Microbotryomycetes групп растений изучено очень поверхностно. Сфагно- sensu Bauer et al., близкие к родам Leucosporidium и вые мхи широко распространены в разных природных Rhodotorula (в среднем около 12 %). Установлено, зонах, сфагновая дернина является обязательным ком- что особенности сфагновых мхов как местообитания понентом растительного покрова разных фитоценозов. дрожжей, не могут определяться только гидротерми эдификаторная функция сфагновых мхов проявляется ческим режимом, т.к. существуют сильные различия через модификацию факторов среды – запасание вла- в дрожжевых группировках в дернине сфагновых ги, понижение температуры, высокой буферности и мхов и на частях болотных сосудистых растений, связывание элементов питания. Большую роль в фор- произрастающих в той же дернине. Роль сфагновых мировании специфической среды играют также фи- мхов в формировании дрожжевых сообществ глав зиологические и биохимические свойства сфагновых ным образом заключается в изменении питательного мхов. Поэтому можно предположить, что дрожжевые режима: недостатке азота и микроэлементов, а также сообщества, формирующихся в моховой дернине, значительном присутствии в экссудатах органичес должны быть достаточно специфичны. ких, уроновых и ароматических кислот. Среди доми В данной работе образцы сфагнума и сосудистых нирующих таксонов, обнаруженных нами в моховой растений для исследований были отобраны из болот- дернине, преобладают дрожжи с широким ассимиля ных и лесных фитоценозов Московской, Тверской и ционным спектром и способностью к утилизации ор Тюменской областей России. Сфагновая дернина ана- ганических кислот и ароматических соединений. Мы лизировалась послойно, так же в работе изучались предполагаем, что мхи, в особенности сфагновые, отдельно верхняя часть и нижняя части болотных являются характерным природным местообитанием растений, произрастающих на дернине. Нами было для дрожжей из класса Microbotryomycetes и, воз показано, что дрожжевые сообщества сфагновой де- можно, содержат значительно более высокое видовое рнины значимо отличаются от эпифитных сообществ разнообразие представителей из этого класса, чем то на лесных, луговых и болотных сосудистых растени- которое известно к настоящему времени.


ВИДОВОЙ СОСТАВ РОДА zYGOWILLIOpsIs СОГЛАСНО ГЕНЕТИЧЕСКОМУ АНАЛИЗУ Кондратьева В.И., Наумов Г.И.

Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, Москва Дрожжи zygowilliopsis представляют большой разуемые ими токсины (микоцины/киллерные белки) интерес как возможные продуценты противодрожже- обладают высокой активностью и широким спектром вых медицинских и биологических препаратов. Об- действия по отношению к представителям различ 276 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел ных родов дрожжей [Вустин и др., 1988;

kimura et al., наковой. Генетический анализ не позволяет проводить 1995]. Молекулярное изучение большого количества дифференциацию z. californica на разновидности z.

штаммов zygowilliopsis различного географического californica var. californica, z. californica var. dimennae, происхождения выявило значительный полиморфизм так как нет достоверной разницы в жизнеспособнос этих дрожжей. На основании анализа нуклеотидных ти гибридных аскоспор при скрещивании дрожжей, последовательностей 5,8S-ITS фрагментов рДНК в принадлежащих к одной разновидности или к разным.

рамках вида z. californica были установлены три раз- Изучаемые штаммы, очевидно, относятся к разным новидности: z. californica var. californica, z. californica географическим популяциям одного вида.

var. dimennae и z. californica var. fukushimae [Наумо- zygowilliopsis sp.1 и zygowilliopsis sp.2 представ ва и др., 2006]. Рестриктазный анализ амплифициро- лены 5 штаммами, изолированными из почв Японии.

ванных ITS-фрагментов, анализ последовательностей Cкрещивания японских штаммов с эталонным штам ITS1–5.8S-ITS2 и домена D1/D2 26S рДНК японских мом z. сalifornica CBS 5760 показали их полную ге штаммов zygowilliopsis позволил установить два но- нетическую изоляцию: жизнеспособность гибридных вых таксона, вероятно, в ранге видов: zygowilliopsis. аскоспор 0–12 %, отсутствие двойных ауксотрофных sp.1 и zygowilliopsis. sp.2 [Наумова и др. 2003;

Газдиев, рекомбинантов при анализе случайной выборки спор.

2005]. Стерильные гибриды были получены также в скре Проведенный нами гибридизационный анализ щиваниях представителей видов zygowilliopsis sp.1 и дрожжей рода zygowilliopsis, исследованных ранее zygowilliopsis sp.2 между собой.

молекулярными методами, подтвердил существова- В подтверждение данным филогенетического ана ние 3-х видов в этом роде. Более распространенный лиза [kurtzman, Robnett, 1998;

Газдиев, 2005] нами вид z. сalifornica представлен различными изолята- показано, что дрожжи, выделеные из сокотечений то ми из Европы, Северной Америки, Азии, Австралии поля в Северной Америке и идентифицированые как Pichia (Hansenula) populi на основании ДНК-ДНК ре и Новой Зеландии, которые, несмотря на частичную генетическую изоляцию (жизнеспособность аскоспор ассоциации [phaff et al., 1983], хорошо скрещиваются с представителями всех трех видов zygowilliopsis, сле межштаммовых гибридов 8–38 %, внутриштаммо вых – 62–97 %), являются представителями одного и довательно принадлежат к этому роду. В межвидовых того же вида. Полученные гибриды имели нормаль- скрещиваниях отмечена низкая жизнеспособность ас ное мейотическое расщепление контрольных ауксо- коспор гибридов и отсутствие ауксотрофных рекомби трофных маркеров. Менее дивергентными оказались нантов в случайной выборке спор.

почвенные штаммы NRRL Y-1709 из Миннесоты, Молекулярные и генетические результаты указы США и NRRL Y-4269 из Новой Зеландии;

жизнеспо- вают на необходимость пересмотра видового состава дрожжей zygowilliopsis и родовой принадлежности собность гибридных аскоспор во внутриштаммовых и дрожжей известных как P. populi.

межштаммовых скрещиваниях была практически оди АДГЕЗИЯ И РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ШТАММОВ candida albicanS КАК ХАРАКТЕРИСТИКИ ПАТОГЕННОСТИ Лисовская С.А., Глушко Н.И.

казанский НИИ эпидемиологии и микробиологии, казань В последние годы распространение хронических отмечается относительная устойчивость некоторых форм заболеваний, вызванных грибами candida al- штаммов к действию стандартных доз противогрибко bicans, неуклонно увеличивается. Несомненно, это вых препаратов, причем такие штаммы заведомо от связано с усилением неблагоприятного воздействия носят к патогенным. На основании этого существует внешней среды (химические загрязнения, радиация), а мнение о разделении штаммов по уровню патогеннос также нерациональным применением кортикостерои- ти, в зависимости от резистентности штаммов.

дов и антибиотиков. С 2003 по 2007 год в микологической лаборатории Для лечения заболеваний, вызванных грибами c. КНИИэМ проводились работы по изучению уровня albicans разработаны и внедрены в лечебную практику чувствительности штаммов C. albicans диско-диф различные виды противогрибковых препаратов широ- фузионным методом, в сравнении с методом серий кого спектра действия (кетоконазол, флуконазол, итра- ных разведений. МИК определяли в соответствии со коназол, тербинафин). Антимикотики обеспечивают стандартами NCCLS. Исследовали 2780 клинических избирательный фунгистатический или фунгицидный штаммов, выделенных от больных с кандидозами эффект воздействуя, в основном, на клеточную стенку различной локализации. Было показано, что ко всем гриба. В основной массе работ, посвященных изуче- изученным антимикотикам существуют штаммы с раз нию влияния противогрибковых препаратов на грибы личным уровнем чувствительности. С 2003 по рода candida, в том числе и на штаммы c. albicans, год более 85 % штаммов грибов были чувствительны Биология дрожжей к действию тербинафина (МИК16 мкг/мл). Значи- Следует отметить, что среди чувствительных ко тельное количество штаммов (около 21 %) проявляло всем антимикотикам штаммов имелась группа штам относительную устойчивость к флуконазолу (МИК64 мов (около 26 %), обуславливающих проявление вы мкг/мл). Интересно отметить, что количество устой- раженных признаков кандидоза, при этом в посеве ко чивых штаммов дрожжеподобных грибов в 2006 году личество грибов значительно превышало допустимые выросло по сравнению с 2003 годом: к флуконазолу на нормы (более 104 КОЕ/мл), а средний уровень адгезии 20 %, итраконазолу – в 2–2,5 раза, кетоконазолу и тер- достигал 16 % – 27 %, в зависимости от места лока бинафину – в 3 и более раз. При этом отмечалась связь лизации штамма. В то же время, большинство чувс устойчивости грибов к антимикотику с курсом ранее твительных штаммов было выделено в незначитель проведенной антифунгальной терапии данным препа- ном (не более 102 КОЕ/мл) количестве от пациентов ратом. Все препараты широко применяются в клинике без клинических признаков кандидоза, а их адгезия не для лечения различных форм кандидоза, причем не- превышала 6 %.

редко в слишком низких дозах, что и обуславливает, Анализ группы пациентов, у которых выделялись по-видимому, рост числа устойчивых штаммов. устойчивые к антимикотикам штаммы, показал отсутс Можно предположить, что применение противо- твие у некоторых больных клинических проявлений грибковых препаратов влияет и на адгезины, которые заболевания и незначительное количество грибов в по локализованы на поверхности клеточной стенки. Ве- севах, по-видимому, связанное с проведенным ранее ус роятно, это влияние будет проявляться в изменении пешным противогрибковым лечением. Уровень адгезии адгезивной способности клеток – одного из основных таких штаммов был в 2–3 раза ниже уровня адгезии ос факторов патогенности. В связи с этим представляет новной группы штаммов. Основная группа устойчивых интерес оценить взаимосвязь резистентности штамма штаммов была выделена на фоне выраженных клини и его адгезивных свойств, для оценки которых исполь- ческих проявлений кандидоза, однако с различным ко зовали ранее разработанную модель на основе нитро- личеством грибов в посеве (от 103 до 106 КОЕ/мл), при целлюлозной матрицы с иммобилизованным гемогло- этом адгезия составляла 18–26 % для кожных штаммов, бином. а для штаммов из ротовой полости – 25–40 %.

Проведенные исследования адгезивной способнос- Полученные результаты показывают, что ориенти ти 80 штаммов с наиболее характерными отличиями роваться в патогенности штамма только в зависимости в степени резистентности (чувствительны к основным от резистентности штаммов нельзя. Необходимо более противогрибковым препаратам 100 – 80 %, и устой- полное изучение свойств гриба с проведением сопос чивы к противогрибковым препаратам менее 15 %) тавления всех факторов (проявление тяжести заболе показали связь между уровнем адгезии штамма и его вания, уровень обсемененности, чувствительность устойчивости к различным видам антимикотиков. Так, штамма). Изучение уровня адгезии штамма гриба поз у штаммов, обладающих устойчивостью к антимико- воляет более точно охарактеризовать его патогенность тикам, средний уровень адгезии (37 %) почти в 4 раза и выбрать правильный подход к лечению данного за превышал уровень чувствительных штаммов (9,6 %). болевания.

ДЕЙСТВИЕ Б-ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА НА АДГЕЗИЮ В СИСТЕМЕ «CANDIDA ALbICANs – БУККАЛЬНЫЕ эПИТЕЛИОЦИТЫ»

Лукова О.А., Заславская М.И., Махрова Т.В.

кафедра микробиологии и иммунологии, Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород Основным возбудителем оппортунистических чали на агаре Сабуро (20–24ч, 37 °С). Посевы смыва поверхностных микозов человека является Candida ли забуференным физиологическим раствором (ЗФР).

albicans. Развитие заболевания зависит от ряда пред- Клеточные агрегаты удаляли центрифугированием располагающих факторов, в том числе и от состоя- (30g, 2 мин). Клетки буккального эпителия получали ния колонизируемой ткани и адгезивности эпителия от взрослых 20–23 лет. Клетки трижды отмывали (40g, слизистых оболочек. Таким образом, особый интерес 5 мин) и готовили взвесь с концентрацией 106 кл/мл.

представляет поиск средств, позволяющих регулиро- В эксперименте эпителиоциты предварительно ин вать реактивность эпителиоцитов и влиять на их адге- кубировали (37С 1 час) с разовой терапевтической до зивность в системах с C.albicans. зой (3000 МЕ) препарата «Гриппферон» (ЗАО «ФИРН В работе изучали действие б-интерферона человека М» г.Москва). В контроле вместо препарата использо (коммерческий препарат «Гриппферон») на адгезию в вали забуференный физиологический раствор (ЗФР).

системе «C.albicans – буккальные эпителиоциты» in vi- Затем суспензию C. albicans (107кл/мл) инкубировали tro. В работе использовали типовой штамм C. albicans 30 мин с буккальными эпителиоцитами в равных объ штамм 601. Культуру кандид (в дрожжевой фазе) полу- емах (0,5 мл) в ЗФР. Готовили мазки из эпителиоцитов, 278 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел и подсчитывали среднее количество кандид в пересче- Таким образом, б-интерферон человека (препа те на один эпителиоцит (учитывали 100 клеток) и вы- рат «Гриппферон») способен влиять на реактивность ражали результаты в условных единицах (усл.ед). эпителиальных клеток в системе с C.albicans. Можно Обработка буккальных клеток препаратом «Грип- предположить, что использование б-интерферона че пферон» приводила к снижению адгезии кандид в ловека in vivo может приводить к нарушению процес системе и составляла 2,1±0,91 усл.ед, в то же время в са колонизации слизистых оболочек кандидами и сни контроле 4,19±1,01 усл.ед (p0,05). жать риск развития кандидоза.

БИОХИМИЧЕСКИЕ МОДИФИКАЦИИ В ДРОЖЖЕВЫХ КЛЕТКАХ, ИНДУЦИРОВАННЫЕ ВИДИМЫМ И НИЗКОИНТЕНСИВНЫМ КРАСНЫМ СВЕТОМ Пиняскина Е.В.

УРАН Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского научного центра РАН, Махачкала В связи с происходящими в настоящее время изме- света: облучение дрожжевых клеток видимым светом нениями в экологической обстановке, затрагивающими в присутствии гематопорфирина или протопорфирина облученность живых организмов, остро стоит вопрос приводило к инактивации клеток и повреждению плаз об устойчивости биологических систем к повреждаю- матических мембран, определяемому по изменению щему действию солнечного ультрафиолетового (УФ) проницаемости их к -нитрофенил-D-глюкопирано излучения (290–380 нм) и видимого света, достигаю- зиду. Поскольку действие света в присутствии сенси щего поверхности Земли. билизаторов направлено на те компоненты клетки, в В последнее время все большее внимание уделяет- которых сенсибилизатор локализуется, можно пред ся фотодинамическим деструктивным реакциям, про- положить, что первичные хромофоры локализованы в текающим в биологических системах под действием плазматических мембранах.

света длинноволновой ультрафиолетовой (УФ) и види- Для выяснения связи порфиринов с плазматичес мой областей спектра. это вызвано, с одной стороны, кими мембранами нами проведен спектрофлуоримет важной ролью фотодинамических процессов в реали- рический анализ этих структур после их выделения из зации фототоксических и фотоканцерогенных эффек- дрожжевых клеток.

тов в коже человека при действии солнечного излуче- Согласно спектральному анализу, проведенному ния, а с другой – с разработкой и усовершенствование нами на целых клетках, выявлено наличие в клетках способов направленного фотоповреждения клеток и двух флуоресцирующих типов порфиринов – копро биологических структур (при фототерапии опухолей порфиринов (главный максимум флуоресценции при видимым светом в присутствии сенсибилизаторов 620 нм) и протопорфиринов (главный максимум при порфириновой природы). 640 нм).

Установлено, что большинство порфиринов обла- Спектрофлуориметрический анализ изолированных дает существенной каталитической и ферментативной плазматических мембран дрожжей показал, что в плаз активностью, в силу которой они могут выступать как матических мембранах локализовано вещество, облада активаторы или сенсибилизаторы процессов. Исследо- ющее флуоресценцией в красной области спектра Фп683.

вания последних лет показали, что порфирины обла- Спектр этой флуоресценции имеет один максимум при дают уникальным свойством модифицировать радиа- 683 нм;

основной максимум в спектре ее возбуждения ционное поражение объектов. расположен в области 400 нм, что близко совпадает с Механизмы индуцируемых видимым светом фо- полосой Соре для порфиринов. Возбуждение света в УФ тодинамических реакций наиболее детально исследу- области спектра с максимумом при 280 нм, соответству ются в условиях облучения биологических объектов с ющим максимуму поглощения белков, приводило к по экзогенными порфиринами, и в этом направлении до- явлению той же флуоресценции с пиком при 683 нм.

стигнуты определенные успехи. Полученные результаты свидетельствуют о том, Что касается фотодинамических эффектов, сенси- что выявленная нами флуоресценция плазматических билизируемых эндогенными порфиринами (при облу- мембран обусловлена локализованным в них фотосен чении клеток низкоинтенсивным красным светом), то сибилизатором порфириновой природы, отличным от о молекулярных механизмах, лежащих в основе таких копро- и протопорфиринов, содержащихся в других эффектов, известно пока очень мало. это в значитель- клеточных структурах.

ной мере связано с отсутствием данных о внутрикле- Поскольку важную роль в фотосенсибилизирован точной локализации порфиринов, выступающих в ка- ном повреждении мембран играют процессы пере честве сенсибилизаторов. кисного фотоокисления липидов (ПФОЛ), были про экспериментальные данные, подтверждают, что ведены исследования этих процессов при облучении именно плазматические мембраны являются одной из клеток видимым светом. Показано, что с ростом дозы главных мишеней повреждающего действия видимого облучения видимым светом в мембранных структурах Биология дрожжей идут процессы перекисного окисления липидов, о чем Нами исследовано влияние каталазы, суперок свидетельствует увеличение концентрации ТБК-актив- сиддисмутазы на ПФОЛ. Оказалось, что ферменты, ных продуктов. Для выяснения механизма инициации перехватывающие перекись водорода и супероксид ПОЛ исследовали влияние тяжелой воды (D2O) и азида ный радикал, не влияют на кинетику фотоиндуциру натрия на этот процесс (NaN3). Показано, что при за- емого накопления ТБК-активных продуктов, однако мене Н2О на D2O количество ТБК-активных продуктов облучение клеток низкоинтенсивным красным све в облученных мембранах значительно возрастает, При том приводит к реактивации дыхательных ферментов (цитохромы а и а3, цитохромоксидаза) ферментов, облучении плазматических мембран в присутствии азида натрия (10 мМ) кинетика накопления ТБК-ак- что восстанавливает поток электронов в дыхательной тивных продуктов значительно замедляется. цепи и формирует трансмембранный потенциал мито Поскольку азид натрия не полностью ингибирует хондрий. это, в свою очередь, увеличивает продукцию этот процесс, нельзя исключить участия в его инициа- АТФ в клетках и активирует транспорт Са2+, что при ции и каких-то других активных форм кислорода. водит к стимуляции внутриклеточных процессов. Ге Одну из них ( о 2 ) мы попытались зарегистриро- нерируемые фотосенсибилизатором активные формы • вать методом эПР с помощью её специфической ло- кислорода, в частности 1О2, инициируют перекисную вушки – тайрона. Но в изолированных плазматических модификацию клеточных мембран.

мембранах фотоиндуцированного сигнала эПР – тай- Рассмотренные сенсибилизированные фотопов рона зарегистрировать не удалось. Поэтому фотосен- реждения мембран приводят к изменениям их важ сибилизированное образование ( о 2 ) в плазматичес- нейших функциональных характеристик: снижению • ких мембранах под действием видимого света и его барьерных свойств, подавлению активностей мембра участие в процессах ПОЛ представляется маловеро- носвязанных ферментов и транспортных систем, что, ятным. Очевидно, в этом случае имеет место второй в конечном счете, приводит к их деструктуризации и тип фотодинамических реакций – перенос энергии от гибели клеток.

сенсибилизатора к молекуле кислорода с переводом ее Более подробное изучение биохимических моди в электронно-возбужденное синглетное состояние 1О2, фикаций, индуцированных видимым и низкоинтенсив образовавшийся синглетный кислород затем окисляет ным красным светом являются темой наших дальней биологический субстрат. ших исследований.

ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ ГРИБОВ РОДА CANDIDA Тимохина Т.Х.1, Николенко М.В.1, Перунова Н.Б.2, Варницына В.В. 1 ГоУ вПо Тюменская государственная медицинская академия, Тюмень 2 Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уро РАН, оренбург Известно, что биологические процессы в природе принадлежность определяли по ассимиляционным ко протекают с достаточно четкой периодичностью. это лориметрическим тестам «Auxacolor 2» фирмы Bio-Rad.



Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 32 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.