авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 32 |

«НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ МИКОЛОГИИ ОБЩЕРОССИЙСКАЯ ОБЩЕСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ СОВРЕМЕННАЯ МИКОЛОГИЯ В РОССИИ ТОМ 2 ТЕЗИСЫ ДОКЛАДОВ ВТОРОГО ...»

-- [ Страница 9 ] --

сопровождалось повышением продукции пигментов. 2. Wheeler M.N. Comparison of fungal melanin bio При концентрации аскорбиновой кислоты 50 synthesis in ascomycetes, imperfect and basidiomycetes мкг/мл, активность полифенолоксидазы у грибов Ph. fungi // Trans. Brit. Mycol. Soc. – 1983. – vol. 81, № robustus M-10 и i. оbliquus В-26 увеличивалась в 1,2– 1. – Р. 29–36.

Физиология и биохимия грибов ИЗУЧЕНИЕ АДАПТАЦИОННОГО СТАТУСА НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ КСИЛОТРОФНЫХ БАЗИДИОМИЦЕТОВ Ильин Д.Ю.

ФГоУ вПо «Пензенская ГСХА», Пенза В последние годы группа ксилотрофных базидио- (моноеновые, диеновые). Следует отметить, что выяв мицетов привлекает внимание исследователей как пер- лено наличие изомеров, а также насыщенных жирных спективный объект для ряда отраслей биотехнологии. кислот с длинной углеродной цепью, помимо тривиаль В связи с этим, экология, физиология, биохимия кси- ных компонентов, что следует считать особенностью лотрофных базидиомицетов представляют существен- биохимии данных видов. С повышением температуры ный интерес. Известно, что на молекулярном уровне культивирования до 30 °С пропорции жирных кислот адаптационные явления проявляются, в частности, в менялись: существенно снижалась доля ненасыщенных изменении жирнокислотного состава мембран клеток жирных кислот (линолевой, линоленовой). Полученные (Cossins, Sinensky, 1984;

Shinitzky, 1984). Стабилиза- данные вполне иллюстрируются также выявленным ция динамических параметров мембран есть условие нами снижением активности ферментов дегидрогеназ.

нормального протекания физиологических и биохими- Ферменты дегидрогеназы (в частности, десатуразы) де ческих процессов в клетке. сатурируют ненасыщенные жирные кислоты. Для оцен Объектами нашего исследования стали мице- ки активности названной группы ферментов в наших лиальные культуры fistulina hepatica и Ganoderma экспериментах был использован краситель нитросиний applanatum, выделенные из плодовых тел, собранных тетразолий, который при восстановлении превращается в окрестностях г. Пензы. Метиловые эфиры жирных в синий формазан. Краситель добавляли в питательную кислот получали непосредственно из воздушно- сухой среду для глубинного культивирования в концентрации навески биомассы. Применение внутреннего стандар- 0,001 %. Последующее окрашивание мицелия оценива та (фенилпальмитата) позволило определить абсолют- лось визуально.

ное содержание жирных кислот в пробе. Исследование За период глубинного роста мицелий изученных ви проводили с использованием метода газожидкостной дов приобретал синюю окраску различной интенсив хроматографии (хроматограф НР 5890, кварцевые ка- ности. Для обоих видов выявлено, что при культиви пиллярные колонки 15 м Ч0, 25 мм Ч 0, 25 мкм, непод- ровании в условиях повышенной температуры степень вижная фаза – SpB – 1 полидиметилсилоксан) и супел- окрашивания мицелия была существенно ниже, чем в ковакс – 10 (термостойкий полиэтиленгликоль), режим оптимальных (23 °С). Межвидовые отличия заключа программирования температуры). Культивирование ми- ются в том, что в каждом из вариантов опыта мицелий целия проводилось в условиях глубинной культуры при fistulina hepatica имел более интенсивную окраску в температуре 23 °С (оптимум) и 30 °С (температурный сравнении с Ganoderma applanatum.

стресс). Последующий анализ липидной фракции мем- Таким образом, выявлена достоверная корреляци бран показал относительно равное качественное пред- онная зависимость между активностью дегидрогеназ ставительство насыщенных и ненасыщенных жирных (иллюстрированной степенью интенсивности окраски кислот. Однако обнаружено, что при оптимальной тем- мицелия) и содержанием в образцах мицелия ненасы пературе количественно преобладают ненасыщенные щенных жирных кислот.

АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ШТАММОВ ОПЕНКА ЗИМНЕГО Flammulina VeluTiPeS (CURT.: fR.) p. kARsT Кваско Е.Ю.1, Бисько Н.А.2, Паршикова Т.В. 1 киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, Биологический факультет, кафедра физиологии и экологии растений, киев 2 Институт ботаники имени Н. Г. Холодного НАН Украины, киев В последнее время расширяются исследования, подавляющих развитие патологических процессов, связанные с изучением оксидативного стресса у раз- индуцируемых активными формами кислорода – ос личных групп живых организмов. Во всем мире ведет- новной причиной оксидативного стресса. Поскольку ся поиск источников антиоксидантов – соединений, биологически активные вещества природного проис 130 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел хождения обладают рядом преимуществ по сравнению Проведенное ранее изучение динамики антиокси дантной активности исследуемых ранее штаммов F.

с их синтетическими аналогами, внимание исследова velutipes показало, что максимального значения пока телей в основном направлено на изучение природных источников веществ с антиоксидантной активностью. затель активности штаммов данного вида достигает В связи с интенсивным развитием грибных био- на 7 сутки культивирования. Установлено также, что технологий, возрос интерес к биологически активным антиоксидантная активность культуральной жидкости веществам, синтезируемых высшими базидиальными была выше, чем мицелиальной биомассы.

грибами. Одним из широко культивируемых съедоб- Для проведения анализа штаммы выращивали ных медицинских грибов является опенок зимний стационарно в колбах эрленмейера объемом 100 мл Flammulina velutipes (Curt.: fr.) p.karst, обладающий на жидкой глюкозо-пептонной среде (рН 5,5) в тече антибактериальной, противовирусной, антифунгаль- ние 7 суток при температуре 28 °С. В качестве био ной, противоопухолевой, иммуномодулирующей, логического материала использовали культуральную тромболитической активностями. жидкость.

Цель данной работы – изучение антиоксидантной Результаты работы позволяют сделать следующие активности штаммов F. velutipes. выводы. Изученные штаммы F. velutipes значительно Объектом исследований являлись 12 штаммов отличаются между собой по величине их антиоксидан опенка зимнего из коллекции культур шляпочных гри- тной активности. Так, например, активность штамма бов отдела микологии Института ботаники имени Н. 1884 была в 66 раз выше, чем штамма 1880. Уровень Г. Холодного НАН Украины (г. Киев). Чистые мице- антиоксидантной активности образцов культуральной лиальные культуры были выделены из дикорастущих жидкости был наиболее высоким у штаммов 1884, 318, плодовых тел, собранных в различных районах Укра- 1860, что в 2, 48–2, 75 р. превышает показатель актив ины и мира. ности аскорбиновой кислоты (1, 45 ± 0, 04 л/млхв).

Используемый метод определения антиоксидантной Необходимо отметить, что значение рН культуральной активности основан на изучении кинетики окисления жидкости в процессе культивирования незначительно восстановленной формы 2, 6-дихлорфенолиндофенола изменялось в щелочную сторону по сравнению с ис кислородом воздуха в присутствии и отсутствии био- ходным показателем.

логического материала и расчете величины константы Кроме этого нами не было отмечено корреляции ингибирования биологическим материалом окисления между уровнем активности и местом произрастания 2, 6-дихлорфенолиндофенола как показателя антиок- плодовых тел, являющихся источниками мицелиаль сидантной активности. ных культур изучаемых штаммов.

ПОЛУЧЕНИЕ МУТАНТОВ curVularia lunaTa ВКМ f- С ПОВЫШЕННОЙ 11-ГИДРОКСИЛАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ КОРТЕКСОЛОНА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ Коллеров В.В., Шутов А.А., Гулевская С.А., Донова М.В.

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.к. Скрябина РАН, Пущино Физиологическая активность 11-гидроксилиро- гена. Однако, мутагенез интактных клеток мицелиаль ванных стероидов определяет их широкое использова- ных форм грибов и селекция полученных мутантов не ние в терапии многих заболеваний в качестве проти- эффективны вследствие сложного строения клеточной вовоспалительных и антиаллергических препаратов. оболочки и многоядерности конидий и мицелиальных Введение гидроксильной группы в позицию 11 сте- фрагментов. Решением проблемы может быть получе роидной молекулы возможно с использованием ми- ние одноядерных протопластов.

целиальных грибов, при этом максимальная 11-гид- Целью работы являлась разработка процедуры про топластирования мицелиальных клеток curvularia lu роксилирующая активность показана для штаммов curvularia lunata (cochliobolus lunatus). nata ВКМ f-644 и получение кетоконазол-устойчивых Фермент, ответственный за введение гидроксиль- мутантов с повышенной 11-гидроксилазной актив ной группы в позицию 11, относится к семейству ностью.

цитохром-p-450-монооксигеназ (Cyt p-450). Ингиби- Установлено, что эффективность процедуры про тором Cyt p-450 является азольный фунгицид – кето- топластирования зависит от состава среды, исполь коназол. Точечная мутация в гене, ответственном за зованной для культивирования мицелия, возраста синтез Cyt p-450, может привести к азольной устойчи- культуры, состава осмостабилизирующего буфера вости, обусловленной суперэкспрессией мутантного и концентрации литического комплекса ферментов.

Физиология и биохимия грибов Максимальный выход протопластов (6,6х105/мл) по- штаммом, уровнем 11-гидроксилазной активности лучен при использовании мицелия логарифмической в отношении кортексолона. Получены также три му фазы роста в сочетании с применением 0,1М фосфат- танта, способные к активному восстановлению 20-ке ного буфера с 1М хлоридом аммония (рН 5.7) и кон- тогруппы кортексолона с последующим 11-гидрокси центрацией литического комплекса из Trichoderma лированием восстановленного стероида. Среди этих harzianum 5 мг/мл. Максимальную степень регенера- мутантов выявлен штамм, отличающийся по 11-гид ции протопластов (3,1 %) обеспечивало использование роксилазной активностью в отношении 21-ацетата- и 1М сахарозы. 17, 21-диацетата кортексолона: выход гидрокортизона Полученные после завершения процедуры мута- при его использовании на 5–10 и 15–20 % превышал генеза и регенерации протопластов 36 клонов были полученный при трансформации соответствующих протестированы на наличие 11-гидроксилазной актив- субстратов родительским штаммом.

ности в отношении кортексолона и его производных: Результаты свидетельствуют о перспективности 17-ацетата-, 21-ацетата- и 17, 21-диацетата-кортексоло- использования методов мутагенеза протопластов для на. В результате скрининга отобраны 2 мутанта, отли- получения эффективных биокатализаторов процесса чающиеся более высоким в сравнении с родительским 11-гидроксилирования стероидов.

ПРОТЕИНАЗА МИКРОМИЦЕТА aSPerGilluS ocHraceuS СО СВОЙСТВАМИ АКТИВАТОРА ПРОТЕИНА С ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С.

Биологический факультет МГУ им. М.в. ломоносова, Москва В конце 70-х годов прошлого столетия был от- но не обладающие высокой общей протеолитической крыт выделенный из плазмы крови человека протеин активностью, а также фибринолитической и активатор С (ПС) – профермент сериновой протеиназы, играю- ной по отношению к плазминогену активностями.

Из культуральной жидкости микромицета asper щий, как оказалось, важную роль в системе гемостаза.

gillus ochraceus 513 методами колоночной аффинной Было показано, что ПС активируется в крови путем ограниченного протеолиза тромбином или комплек- хроматографии на диасорб-бацитрацине, диасорб–ар сом тромбина с мембранным белком эндотелиальных гинине, ионообменной хроматографии на колонке клеток – тромбомодулином, превращаясь в активиро- с ДЕАЕ Toyopearl 650М, изоэлектрофокусирования ванный протеин С (ПСа). Последний проявляет как ан- были выделены две протеиназы с изоэлектрическими тикоагулянтные, так и профибринолитические свойс- точками 5,5 и 7,0, обладающие специфической актива тва, и его недостаточное содержание в крови может торной активностью по отношению к ПС. Ингибитор вызывать очень тяжелые тромботические заболевания, ный анализ подтвердил, что оба фермента являются вплоть до летальных исходов. сериновыми протеиназами (ингибируются ингибито Кроме известных активаторов ПС – тромбина и ром сериновых протеиназ – pMSf).

тромбомодулина – из яда редкого вида змей – щито- Молекулярная масса, определяемая методом SDS мордника agkistrodon contortrix contortrix в 1986 году электрофореза в ПААГ равна примерно 27 и 35 кДа.

был выделен активатор ПС, не требующий участия Для количественного анализа активаторной актив тромбомодулина. этот активатор ПС представляет со- ности был использован модифицированный нами ме бой также сериновую протеиназу с Мм 20–40 кДа (по тод определения ПС фирмы РЕНАМ с использованием разным данным). В настоящее время этот активатор синтетического хромогенного субстрата – pyr-pro-Arg (препарат «Протак») используется в диагностикумах pNA, который показал, что активаторная активность выделенных из aspergillus ochraceus 513 протеиназ со (в частности, фирмы РЕНАМ) для определения содер жания ПС в крови людей в биохимических клиничес- поставима с активностью препарата «Протак» из яда ких лабораториях. щитомордника.

На кафедре микробиологии биологического факуль- Таким образом, полученные данные свидетельству тета МГУ им. М.В. Ломоносова впервые в мире была ют о том, что и микроорганизмы, в частности, микро сделана попытка найти продуценты активаторов ПС мицеты способны синтезировать активаторы протеина среди микроорганизмов. В результате обследования С, близкие по свойствам с активаторами ПС животно большого количества штаммов микромицетов было об- го происхождения. В связи с этим, в дальнейшем, воз наружено несколько штаммов, синтезирующих внекле- можно их использование, в частности, в диагностику точные протеиназы со способностью активировать ПС, мах для определения ПС в крови людей.

132 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел МИКРОМИЦЕТЫ – ПРОДУЦЕНТЫ ВИТАМИНОВ И КОФЕРМЕНТОВ Кучмеровская Т.М.1, Супрун С.М.1, Пархоменко Ю.М.1, Черныш И.Ю.1, Харкевич Е.С. 1 Институт биохимии им. А.в. Палладина НАНУ, киев 2 Институт микробиологии и вирусологии им. Д.к. заболотного НАНУ, киев Промышленное производство витаминов и ко- дегидрогеназы. Было установлено действие предшес ферментов в основном осуществляется с помощью твенников биосинтеза витаминов – окситиамина на микробиологических технологий, которые представ- синтез тиамина, триптофана, на синтез никотиновой ляют реальную альтернативу химическому синтезу. кислоты и на биосинтез кофермента NAD+. В усло Микромицеты широко используются для получения виях стимуляции никотиновой кислотой биосинтеза ферментов, антибиотиков, витаминов и т.п. Например NAD+ наблюдали морфологические изменения, такие blakeslea trispora служит основой для получения в-ка- как раннее образование конидий, интенсификацию ротина. Современные технологии получения витами- роста мицелия. Обнаружено, что в условиях наших эк спериментов в безклеточном экстракте Fusarium sam нов и коферментов с использованием грибов являются bucinum, растущего в среде с никотиновой кислотой и перспективными. Следует отметить, что грибы сущес твенно отличаются от других микроорганизмов как по триптофаном активность фермента биосинтеза NAD+, способности синтезировать редкие природные формы NAD-пирофосфорилазы была заингибирована. Оцен биологически активных веществ убихинон Q10, хитин- ка активности фермента биосинтеза NAD+ – трипто глюкановый комплекс, так и по другим признакам, а фанпиролазы наряду с NAD-пирофосфорилазой дало именно: они достаточно технологичны, более устой- возможность обнаружить существование двух путей чивы к экологическим стрессам и для своего роста мо- биосинтеза NAD+ в клетке гриба-продуцента. При гут использовать дешевые субстраты. внесении в среду выращивания предшественников Целью работы было изучение роста и физиолого- синтеза витаминов и коферментов и аденозина при биохимических особенностей биосинтеза витаминов, водило к активации NAD+–пирофосфорилазы, что коферментов у грибов-продуцентов. приводило к стимуляции запасного пути сверхсин теза кофермента NAD+ у Fusarium sambucinum. По Нами были селекционированы атоксигенные штаммы микромицетов: Fusarium sambucinum –проду- лученные данные послужили основой для отработки цирующий никотиновую кислоту и ее коферментную условий культивирования с целью повышения выхода форму NAD+ – 6.0 мг/г сухого веса, а также другие никотиновой кислоты и ее производных, а также дру витамины, убихинон Q10;

mycelia sterilia – продуцент гих витаминов. Биомасса гриба Fusarium sambucinum, тиамина, его производных, а также других витаминов которая содержит такой важный кофермент как NAD+, группы В, витамина Е и ряда других полезных ве- который относится к окислительно-востановительным ществ. Содержание синтезированных витаминов опре- коферментам, а также другие биологически активные деляли химическим и микробиологическим методом. вещества (убихинон, ненасыщенные жирные кислоты) Биосинтез никотиновой кислоты был отмечен в экс- может стать основой для получения препаратов, ока поненциальной фазе роста гриба и он предшествовал зывающих благоприятное воздействие на обменные биосинтезу NAD+, содержание которого определяли процессы организма и способствующих поддержанию ферментативным методом с использованием алкоголь- его иммунитета.

ВЛИЯНИЕ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ГЛИКОПРОТЕИНОВ НА РАЗМЕР И ФОРМУ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ SaccHaromYceS cereViSiae Лейбо А.И., Егоров С.Н.

Московский государственный университет имени М.в. ломоносова, биологический факультет, Москва Общая масса клеточной стенки (КС) дрожжей мо- яснена. Схемы строения КС дрожжей до последнего жет достигать 25 % от массы всей клетки, толщина ее времени носили формальный характер и демонстриро колеблется в пределах 1000–2500 Ао. Она состоит при- вали лишь возможную компановку маннопротеинового близительно на 40 % из маннопротеинов и на 2 % – из и глюканового слоев без учета разнообразных функций, хитина, остальное приходится на глюкан. выполняемых этой органеллой. Подобную ситуацию от Несмотря на то, что строение клеточной стенки части можно объяснить недостаточным уровнем наших дрожжей является предметом многочисленных иссле- знаний о структурной роли белков в стенке дрожжей.

дований, структура этой органеллы до сих пор не вы- Совершенно очевидно, что без их участия невозможно Физиология и биохимия грибов представить устройство и функционирование такой ди- С.Н., 1990). Репрессибельная кислая фосфатаза экс намичной структуры, какой является клеточная стенка. кретируется в среду культивирования с помощью «лег Подавляющее большинство белков клеточной стенки кой» фракции секреторных везикул, а конститутивный дрожжей являются гликопротеинами. Лишь в несколь- фермен (кКФ) направляется в клеточную стенку при ких работах сообщается о наличии в клеточной стенке участии фракции «тяжелых» везикул (Е.И. Блиннико негликозилированных белков. ва, С.Н. Егоров и др.,.2002), Кислые фосфатазы дрожжей являются истинными Выявлены существенные различия в размерах кле внеклеточными гликопротеинами и обнаруживаются ток, лишенных возможности синтезировать кКФ и при только в клеточных структурах, связанных с процес- условии синтеза кКФ. Клетки, лишенные кКФ сильно сом везикулярного внеклеточного транспорта бел- варьируют в размере от гигантских до очень мелких, ков. Структурная и защитная роль кислой фосфатазы многие из них имеют уродливую, неправильную фор подтверждается также тем, что в клеточной стенке S. му, некоторые клетки агрегируют между собой, что cerevisiae было обнаружено большое количество это- указывает на существенные изменения в структуре го фермента, находящегося в энзиматически неактив- КС. После трансформации клеток плазмидой, несущей ной форме (Schweingruber, 1983). Также показано, что ген кКФ, они приобретали нормальные естественные кислая фосфатаза входит в состав выростов, обнару- формы. Мы делаем вывод о том, что гликопротеин живаемых на поверхности некоторых видов дрожжей, кКФ может влиять на структурную организацию КС которые, вероятно участвуют в межклеточных взаимо- двумя способами: либо непосредственно участвовать действиях (Walther et al., 1984). в организации клеточной стенки дрожжей, либо вы В нашей лаборатории показано, что два вида кис- полняя энзиматическую функцию катализировать гид лых фосфатаз, обнаруженных в клетках дрожжей Sac- ролиз фосфорных соединений, принимающих участие charomyces cerevisiae, транспортируются к клеточной в регуляции синтеза иных структурных компонентов клеточной стенки дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

поверхности разными путями (Шнырева М.Г. Егоров ВЛИЯНИЕ эФФЕКТОРОВ НА БИОСИНТЕЗ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ПЕРОКСИДАЗЫ PHellinuS robuSTuS k Макович О.М., Михайлова Р.В., Лобанок А.Г., Чихаева О.В.

ГНУ «Институт микробиологии НАН Беларуси», Минск Базидиальный гриб Phellinus robustus k продуци- Стимулирующий эффект на биосинтез фермента рует внеклеточную пероксидазу (КФ 1.11.1.7) при по- оказывают: ростстимулирующие добавки (повышают верхностном росте на среде Линденберга. уровень образования пероксидазы в 1,8–2,5 раз) – куку Цель работы: исследование влияния предшествен- рузный, дрожжевой и экстракт солодовых ростков, овся ников синтеза и метаболитов простетической группы ная мука и пивное сусло;

предшественники биосинтеза фермента, меланина, фенольных соединений, лигно- порфиринов (в 1,03–1,3 раз) – 0, 5 мМ глицин, 0,25–0, целлюлозных субстратов, поверхностно-активных и мМ д-аминолевулиновая кислота, 0, 5 мМ гемин;

лигно ростстимулирующих веществ на биосинтез внекле- целлюлозные субстраты (в 1,01–1,8 раз) – лигнин, поли точной пероксидазы Ph.robustus k. фепан, 0, 1 % целлюлоза, гуминовые кислоты, экстракты Установлено, что ингибирующий эффект на обра- коры дуба и бука;

0, 2 мМ мономеры-предшественники зование пероксидазы ph.robustus k оказывают: мемб- биосинтеза лигнина (в 1,02–1,5 раз) – некоторые фено ранодеполяризующие агенты (снижают уровень био- лы – фенол, гидрохинон, резорцин;

гидрокси- и метокси синтеза фермента на 29–99 %) – 0,1–0,5 % неионнные производные бензойной кислоты – п-гидроксибензойная, поверхностно-активные вещества – Твин-60, 80, Три- протокатеховая, ванилиновая, сиринговая, п-анисовая, тон Х-305, Х-405, Wp-1339 и 1–3 об. % полярные рас- вератровая кислоты и вератриловый спирт.

творители – метанол, этанол, пропанол;

Тритон Х-100, Следует отметить, что 20 мМ L- и DL-тирозин – Твин-20 и 1-бутанол полностью подавляют рост гриба;

предшественник синтеза меланинов – оказывает 0,2 мМ производные коричной кислоты (на 9–25 %) – максимальное стимулирующее действие, биосинтез п-кумаровая, феруловая, синаповая;

0,2 мМ фенолы фермента повышается в 7,2 раза. Показано, что гриб (на 4–35 %) – катехол, гваякол, пирогаллол;

0,2мМ использует тирозин в качестве единственного источ бензойная кислота и ее производные (на 1–44 %) – п- ника углерода, однако, повышение уровня образования аминобензойная, галловая и салициловая кислоты;

а фермента наблюдается только при совместном исполь также – 0,5 % б-кетоглутаровая кислота, 1 % карбокси- зовании тирозина и 0,5–1 % глюкозы.

метилцеллюлоза, 0,01–0,1 % танин, 0,2 мМ DL-трип- Выполненные исследования позволяют рекомендо тофан, 2 мМ L-диоксифенилаланин, 0,1–2 % kCl, 1 % вать 20 мМ тирозин для введения в питательную среду Ph.robustus k с целью повышения уровня биосинтеза дрожжевой экстракт, соевая мука, молочная сыворотка и пептон. внеклеточной пероксидазы грибом.

134 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел МОРФОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА Penicillium Piceum f-648 – ПРОДУЦЕНТА КАТАЛАЗЫ Мороз И.В., Михайлова Р.В.

ГНУ «Институт микробиологии НАН Беларуси», Минск Каталаза (Н2О2: оксидоредуктаза, КФ 1.11.1.6) ка- пушистые, край ровный, пушистый, обратная сторо тализирует метаболически значимую реакцию разло- на в центре темно-коричневая;

на агаре Чапека с 6 % жения пероксида водорода до молекулярного кислоро- глюкозы – колонии белые, круглые, выпуклые, пушис да и воды и является одним из главных компонентов тые, середина выпуклая, кремового цвета с желтова защитной антиоксидантной системы клеток аэробных тым ободком, край ровный, полупрозрачный, обратная организмов. Фермент применяется в процессах деток- сторона не окрашена;

на сусло-агаре – колонии белые, сикации остаточных количеств Н2О2, используемого в круглые, выпуклые, пушистые, радиально-складча технологиях легкой, химической и пищевой промыш- тые, середина вогнутая, обратная сторона темно-жел ленности. Перспективно применение каталазы совмес- тая, край ровный, полупрозрачный. Самая высокая тно с супероксиддисмутазой в медицине и косметоло- скорость роста Рenicillium piceum f-648 отмечена на гии. Фермент используется в научных исследованиях сусло-агаре, в этом случае диаметр колонии гриба со и в экологическом мониторинге. ставил 28,3 мм.

Ранее нами выделен высокоактивный продуцент Установлено, что гриб растет на агаризованных внеклеточной каталазы –Penicillium piceum f-648, оп- средах в диапазоне температур 20–40 °С, с оптимумом тимизирован состав питательной среды и определены при 30–35 °С. При 5 °С и 45 °С рост гриба отсутствует.

параметры культивирования гриба. Разработка эффек- Наиболее интенсивное спорообразование у Рenicillium тивных технологий получения ферментов при исполь- piceum f-648 отмечено на агаризованной среде Чапека зовании новых продуцентов требует всестороннего с 6 % глюкозы. Установлено, что жизнеспособность исследования их морфолого-биохимических особен- спор Рenicillium piceum f-648 зависит от температуры ностей. выращивания гриба, 100 %-ная выживаемость отмече Согласно описанию, изложенному в международной на при 26–35 °С.

базе данных по систематике грибов GABI Bioscience Показано, что образование каталазы Рenicillium and CDS Database of fungal Names (http://www. piceum f-648 не зависит от используемой для выра indexfungorum.org), мицелиальный гриб Рenicillium щивания гриба с целью получения спорового посев piceum Raper & fennell относится к типу ascomycota, ного материала агаризованной питательной среды.

под/типу Pezizomycotina, классу eurotiomycetes, поряд- При засеве среды конидиями, сформировавшимися ку eurotiales, семейству Trichocomaceae, подсемейству при 26–35 °С, отмечен максимальный уровень обра mitosporic Trichocomaceae. Рenicillium piceum выделя- зования каталазы грибом при глубинном культивиро ют из воздуха, почвы, лесной подстилки, компоста. вании.

Изучение морфологических особенностей колоний Таким образом, в результате выполненных иссле Рenicillium piceum f-648 проводили на 7-е сут роста дований установлены морфолого-физиологические гриба на агаризованных средах: Чапека, модифициро- особенности Рenicillium piceum f-648 – продуцента ванной среде Чапека с 6 % глюкозы и сусло-агаре. Ус- каталазы, показано, что для поддержания гриба наибо тановлены различия морфологических признаков ко- лее благоприятной является модифицированная среда лоний Рenicillium piceum f-648 на испытанных средах: Чапека с 6 % глюкозы, оптимальная температура для на агаре Чапека – колонии белые, круглые, выпуклые, роста гриба составляет 30–35 °С.

ЛИПИДЫ СПОРАНГИОСПОР ГРИБОВ mucor ramannianuS И mucor HiemaliS В СВЯЗИ СО СПОСОБНОСТЬЮ К ДИМОРФНОМУ РОСТУ Мысякина И.С., Фунтикова Н.С.

Институт микробиологии им. С.Н. виноградского РАН, Москва Мукоровые грибы обладают разной способностью дельные штаммы ранее считавшегося мономорфным вида mucor hiemalis способны к дрожжеподобному к диморфизму, который является адаптивной реакци ей на неблагоприятные условия и повышает шансы росту в аэробных условиях под влиянием хлорани на выживание. Основной формой существования му- линов или в результате длительного культивирования коровых грибов является мицелий. Показано, что от- спорогенного мицелия на пшеничных отрубях. Из Физиология и биохимия грибов менение характера прорастания спорангиоспор это- метилен-4, 14-диметилхолестерина, был очень низок го гриба, которое обусловлено многими факторами, (2 %), особенно в сравнении со спорами M. hiemalis, коррелировало с изменениями в составе их липидов, где их уровень достигал 13 %. Кроме того, среди де а именно, с изменениями уровней основных структур- метилированных предшественников эргостерина у M.

ных липидов (фосфолипидов, гликолипидов), резерв- ramannianus основную долю составлял фекостерин ных липидов (триацилглицеринов, эфиров стеринов) и (19 %), содержание которого у M. hiemalis было зна составом стеринов в условиях длительного культиви- чительно ниже (1,4 %). Соотношение метилированных рования спорообразующей культуры. Спорангиоспо- стеринов к деметилированным составляло 1:24 (для ры m. hiemalis с истощенным в процессе длительного сравнения, у M. hiemalis в спорах старой 20-суточ культивирования липидным пулом и низким содержа- ной культуры – 2:3). По-видимому, для способности нием эргостерина давали начало как мицелиальному, спорангиоспор прорастать в виде мицелия основное так и дрожжеподобному росту. значение имеет даже не столько уровень эргостерина, Представители вида m. ramannianus считаются мо- сколько низкий уровень его метилированных предшес номорфными, растут только в виде мицелия и не спо- твенников, неспособных к поддержанию необходимой собны к росту в виде почкующихся клеток (диморфиз- структуры мембран и осуществлению их функций.

му). Был исследован состав липидов спорангиоспор На основании представленных данных для оцен m. ramannianus, которые в процессе длительного ки потенциальной способности мукоровых грибов к выращивания спорогенного мицелия гриба не теряли дрожжеподобному росту предложено учитывать ка способности давать начало мицелиальному росту. По- чественные и количественные характеристики липи казано, что спорангиоспоры 20-суточной культуры m. дов их спорангиоспор и считать критериями способ ramannianus по сравнению со спорами m. hiemalis того ности спорангиоспор при прорастании давать начало же возраста имели в составе резервных липидов более дрожжеподобному росту: (1) отношение ФэА/ФХ;

(2) высокий уровень триацилглицеринов (ТАГ), в составе уровень эргостерина и отношение метилированных мембранных липидов – более высокий уровень фос- стеринов к деметилированным, а также (3) соотноше фатидилхолина (ФХ), а в составе стеринов – низкое ние фосфолипидов и гликолипидов (ФЛ/ГЛ) и (4) эте содержание метилированных предшественников эр- рифицированных и свободных стеринов (эС/С).

гостерина. Мукоровые грибы, спорангиоспоры которых име Относительное содержание эргостерина в споран- ют высокое содержание резервных липидов (ТАГ, эС), гиоспорах изучаемых видов было сопоставимо (64 и а также высокий уровень ФХ и эргостерина в мемб 51 % соответственно). У M. ramannianus уровень мети- ранах и низкий – метилированных предшественников лированных предшественников эргостерина, в том чис- эргостерина – растут преимущественно в виде мице ле С-14 метилированных – тритерпена эбурикола и 24- лия.

ВОЗРАСТАНИЕ ПЕРОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬТУРЫ Pl.oSTreaTuS (JacQ.:Fr.) Kumm. В ОТВЕТ НА СТРЕССОВОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ Нанагулян С.Г., Авагян И.А., Неркарарян А.В., Минасбекян Л.А.

ереванский государственный университет, биологический факультет, ереван, Армения Высшие базидиальные грибы обладают не только даза пpинимает участие в синтезе лигнина и в пpоцессе большой питатльной ценностью, но также служат ис- его pазpушения [3]. Уникальные свойства этого феp точником биологически активных веществ [1, 2], что их мента, хоpошая pаствоpимость в воде, высокая специ выдвигает на первый план в качестве дешевого сырья фичность по окислителю, устойчивость пpи хpанении, для получения фармакологически ценных компонен- шиpокий спектp биологической активности обусловли тов. Биополимеры клеточных стенок высших грибов вают ее пpименение в медицине, науке и технике. В ме недостаточно изучены, хотя обнаружено в них высокое дицине пеpоксидаза пpименяется для диагностики ос содержание полисахаридов, обладающих выраженной тpых, хpонических, бактеpиальных и виpусных (в том антираковой активностью, а также ряд растительных числе СПИД), инфекционных, аллеpгических, аутоим ферментов, присущим только некоторым видам расте- мунных, эндокpинологических заболеваний и злокачес ний. В pастительных клетках имеется особый вид оpга- твенных новообpазований методом иммунологического нелл, содеpжащих пеpоксидазу и выполняющих защит- анализа [3]. Пеpоксидаза используется также для пpояв ную антимикpобную функцию. Действие пеpоксидазы ления гликопpотеидов после пеpиодатного окисления, пpоявляется в пpисутствии пеpоксида водоpода, обpа- для синтеза меченых углеpод 14 – пеpоксидаз и в качес зующегося в pастительной клетке. Кpоме того, пеpокси- тве иммуногена пpи синтезе моноклональных антител.

136 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел Пероксидаза и нахождение дешевого сырья для вы- экспозициях и получены культуры с высокой перокси деления этого ценного фермента и послужили стиму- дазной активностью. Нами предполагается в дальней лом для наших исследований. Мы исследовали такой шем использовать такие возможности для модуляции распространенный в наших лесах дереворазрушающий условий выращивания культуры с целью получения гриб как Pl.ostreatus. Представляет интерес выделение высокопродуктивных штаммов базидиомицетных гри пероксидазы из дереворазрушающих грибов, посколь- бов для использования их в качестве дешевого фарма ку найдено [5], что гpибная пеpоксидаза не является кологичреского сырья.

лигнин – или Мп-зависимой пеpоксидазой, а отно- 1. Gunde-Cimerman N. Medicinal value of the genus сится к классу секpетоpных гpибных пеpоксидаз типа pleurotus / N. Gunde-Cimerman // Internationa Journal of классических пеpоксидаз pастений. Лигнинолитичес- Medicinal Mushrooms. 1999. p. 69–80.

кая система грибов белой гнили состоит из различных 2. kawagishi H. A lectin from mycelia of the fungus окислительных ферментов : лигнин пероксидаз, марга- Ganoderma lucidum / H. kawagishi, S.I. Mitsunaga, M.

нец-зависимых пероксидаз и лакказ. Белые плесневые Yamawaki // phytochemistry. 1997. v. 44. p. 7–10.

грибы pleurotus ostreatus вырабатывают как марганец- 3. Г.Ф. Давыдова, О.А. Ермаков, А.И. Панасенко, зависимые пероксидазы, так и гибридные пероксидазы А.М Тищенко Лекарственные препараты из раститель на пептонной среде (pM) [5]. Более того, гибридные пе- ного сырья. Пероксидаза.// Химия растительного сы роксидазы обладают каталитической активностью лиг- рья, 2 (1998) N1 стр.15– нин-пероксидаз и марганец-пероксидаз. [6]. 4. Cohen R., Hadar Y, Yarden O. Transcript and activ В данной работе нами использованы различные ity levels of different pleurotus ostreatus peroxidases are частоты крайне высоких частот электромагнитного из- differentially affected by Mn2+//Environmental Microbiol лучения для модуляции условий произрастания куль- ogy, volume 3 Issue 5 page 312–322, May 2001.

туры гриба на пептонной среде с целью получения 5. Gуmez-Toribiov., Martнnez A.T., Martнnez M.J., культуры гриба с повышенной ферментативной актив- Guillйn f. Oxidation of hydroquinones by the versatile ligninolytic peroxidase from Pleurotus eryngii H2O2 gen ностью в ответ на стрессовые воздействия окружаю щей среды. Нами были использованы крейне высокие eration and the influence of Mn2+.// European Journal of частоты эМИ в диапазоне 45–53 ГГц при различных Biochemistry, (2001), 268(17), 4787–4793.

СКРИНИНГ ГРИБОВ НА СПОСОБНОСТЬ УТИЛИЗИРОВАТЬ АЦК Никонов И.Н.1, Ячиновский И.С.2, Сафронова В.И.1, Белимов А.А. 1 всероссийский НИИ сельскохозяйственной микробиологии РАСХН, Санкт-Петербург 2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург АЦК (1-аминоциклопропан-1-карбоксилат) явля- коэффициентов на 7 сутки у вариантов без источника ется предшественником в биосинтезе фитогормона азота, с добавлением АЦК или минеральных форм.

Способность грибов рода alternaria утилизировать этилена у растений. Фермент АЦК-деаминаза (КФ:

4.1.99.4) обнаружен у бактерий и грибов и катализиру- АЦК не была обнаружена. Установлено, что грибы лигнотрофы родов coriolus и Trichoderma способны ет разложение АЦК до аммиака и альфа-кетобутирата.

Данный фермент играет важную роль в стимуляции утилизировать АЦК. У грибов-фитопатогенов рода Fu роста растений ризосферными бактериями (Belimov sarium выявлена значительная вариабельность по рос et al., 2001). Однако в настоящее время информация ту на среде с АЦК. Способность утилизировать АЦК проявилась у F.avenacium, F. culmorum, F. graminearum, о грибах, способных утилизировать АЦК, практичес F.equiseti, F. oxysporum, F.poae, F. solani, F. sporotrichoi ки отсутствует. Поэтому поиск грибов-продуцентов des. Обнаружено, что при культивировании на среде с АЦК-деаминазы является актуальным.

АЦК виды Fusarium можно разделить на три группы В работе использовали около 100 штаммов из кол лекций непатогенных микроорганизмов сельскохо- по культурально-морфологическим признакам. У 2-х штаммов F. culmorum АЦК-деаминазная активность зяйственного назначения ВНИИСХМ и лаборатории микологии и фитопатологии ВИЗР. Грибы культивиро- не выявлена.

вали при 25 °С в чашках Петри на агаризованной среде Таким образом, способность утилизировать АЦК Чапека с модификациями по источнику азота: без азо- является распространенным признаком у представи та;

NaNO3;

(NH4)2SO4;

или АЦК (300 мг/л). Опреде- телей изученных таксономических и экологических ляли скорость роста и культурально-морфологические групп грибов. Ряд штаммов отобран для количествен характеристики. На основе полученных данных расчи- ного определения активности АЦК-деаминазы.

тывали ростовой коэффициент по Бухало (1986). Ути- Работа поддержана грантом РФФИ № 06–04– лизацию АЦК оценивали путём сравнения ростовых 49486а.

Физиология и биохимия грибов ГЛИКОПРОТЕИНЫ В СОСТАВЕ ЛОНГОЛИТИНА Оккельман И.А., Шаркова Т.С., Серебрякова Т.Н., Подорольская Л.В.

Московский государственный университет им. М.в. ломоносова Москва Лонголитин представляет смесь протеаз, секре- ДЕАЕ- и СМ-целлюлозы в отличие от зимнего об тируемых сапрофитным низшим грибом Аrthrobotrys разца, где только жесткое воздействие 6М мочеви longa, из культуральной жидкости которого препарат ны позволило осуществить связывание препарата с выделен и частично очищен.Лонголитин нетоксичен, матрицей с последующей элюцией его градиентом имеет широкий диапазон активностей, а высокая спе- Nacl (0,2М).Гидрофобность, присущая обоим образ цифичность к белкам – компонентам тромба стиму- цам препарата, была исследована обращеннофазовой лировала поиск и исследование его как возможного хроматографией на Octyl-Sepharose, где вся проте тромболитического средства. Действительно тромбо- олитическая активность практически оставалась свя литический эффект лонголитина обнаружен и подроб- занной с колонкой.Постановка обращенноофазовой но описан нами in vitro и in vivo как в отношении круп- ВэЖХ на колонке phenomenex C Jupiter 300A выяви ных венозных тромбов у крыс в яремной вене после ла присутствие большой фракции белка, соединенно внутривенного введения, так и в опытах на поверхнос- го, вероятно, с углеводами, т.е. гликопротеина, но не тной краевой вене уха кролика при смазывании препа- обладающего протеолитической активностью. Трех ратом тромбированного сегмента сосуда. кратная рехроматография пика протеолитической Известно, что большинство протеаз, участвующих активности лонголитина приводила не к его разделе в тромбообразовании и тромболизисе, являются гли- нию, а к появлению одной и той же фракции (0 пика) копротеинами, белками с ковалентно привязанной к с уменьшающейся амплитудой. При спектрофотомет пептиду углеводной цепочкой, существенно влияющей рии этой фракции обнаружили спектр поглощения на многие биологические свойства гликопротеина, его 240–200 нм в отличие от типичного пептидного активность, клиренс, антигеннность и др. Возможно, нм.эксперимент позволил косвенно предположить что и лонголитин, состоящий из протеаз – тромболи- присутствие фракции гликопротеинов в составе лон тиков, также имеет в своем составе гликопротеины. голитина, содержащей, вероятно, большой компонент О процессах гликозилирования белков, синтези- углеводных остатков, которые при постоянной рех рующихся и секретирующихся грибом Аrth.longa нет роматографии при низких значениях рH постепенно данных, однако показано, что прилипание нематод, на «снимались « с поверхности белка, уменьшая высоту которых паразитирует род Arthrobotrys, к сетям, фор- пика на хроматограмме. Для прямого определения мируемыми гифами другого гриба A.oligospora, свя- присутствия гликопротеинов в составе лонголитина зано с наличием на поверхности гиф полисахарида был поставлен электрофорез в ПААГ с последующей лектина, образующего гликозидные связи с гликопро- специфической окраской реактивом Шиффа.Гли теинами кутикулы нематод. Несомненно, что глико- копротеины окрасились в виде 5 полос у «зимнего»

зилирование пептидов и образование гликопротеинов образца мол.массой от 66 до 44 кДа, в то время как существенно для A.longa, как для всех паразитирую- в» весенном» лонголитине была всего одна полоса щих микроорганизмов, хотя бы потому что один из 35кДа. Сопоставляя картину белкового электрофоре способов стабилизации структуры секретирующихся за с электрофорезом, окрашенном на гликопротеины, протеолитических ферментов (возможно и входящих в можно сказать.что большинство белков в «зимнем»

состав лонголитина) и защита их от аутолиза является препарате являются гликопротеинами. в то время связывание ферментов с углеводами с образованием как в «весеннем» их гораздо меньше.Более ранние гликопротеинов. эксперименты с зимографией ферментов выявили Цель работы – показать, что в состав препарата основной протеолитический компонент лонголити лонголитина входят гликопротеины, обладающие и не на – протеазу с мол.массой 35 кДа, которой сопутс обладающие протеолитической активностью твовал минорный компонент – протеаза с мол.массой Изучение свойств лонголитина при гелефильтра- 49 кДа.Прочие значения мол. масс, фиксирующихся ции на сорбентах Sephacryle S-200 и Sephadex G-100, при различных методах исследований, являются, ве на ионообменниках ДЕАЕ-целлюлоза и СМ-цел- роятно, результатом модификации основных протеаз люлоза в том числе в режиме ВэЖХ показало, что и взаимодействия с ними – частичная деградация, препарат не гомогенен, содержит белки не только с комплексообразование, образование агрегатов и др.

протеолитической активностью, все вместе образую- Поскольку значения 35кДа и 49кДа входят в интер щие довольно прочный гидрофобный комплекс.Со- вал мол. масс, полученных в работе для гликопротеи став белков нестабильный, меняется в зависимости нов, можно предположить, что протеазы лонголитина от условий культивирования, включая, возможно, и тоже являются углеводсодержащими белками, т.е. в сезонные влияния.Так препарат весеннего культи- состав лонголитина входят гликопротеины как обла вирования оказался более лабильным, в значитель- дающие, так и не обладающие протеолитической ак ной мере привязываясь к полисахаридной матрице тивностью.

138 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел ЛОКАЛИЗАЦИЯ В ПЛАЗМАТИЧЕСКИХ МЕМБРАНАХ ДРОЖЖЕЙ НОВОГО ТИПА ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРА ПОРФИРИНОВОЙ ПРИРОДЫ Пиняскина Е.В.

УРАН Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского научного центра РАН, Махачкала В последнее время все большее внимание уделяется билизаторов направлено на те компоненты клетки, в фотодинамическим деструктивным реакциям, протека- которых сенсибилизатор локализуется, можно пред ющим в биологических системах под действием света положить, что первичные хромофоры локализованы в длинноволновой ультрафиолетовой (УФ) и видимой об- плазматических мембранах.

ластей спектра. это вызвано, с одной стороны, важной Для выяснения связи порфиринов с плазматичес ролью фотодинамических процессов в реализации фото- кими мембранами нами проведен спектрофлуоримет токсических и фотоканцерогенных эффектов в коже че- рический анализ этих структур после их выделения из ловека при действии солнечного излучения, а с другой – с дрожжевых клеток.

разработкой и усовершенствование способов направлен- Согласно спектральному анализу, проведенному ного фотоповреждения клеток и биологических структур нами на целых клетках, выявлено наличие в клетках (при фототерапии опухолей видимым светом в присутс- двух флуоресцирующих типов порфиринов – копро твии сенсибилизаторов порфириновой природы). порфиринов (главный максимум флуоресценции при Установлено, что большинство порфиринов обла- 620 нм) и протопорфиринов (главный максимум при дает существенной каталитической и ферментативной 640 нм). Спектрофлуориметрический анализ изоли активностью, в силу которой они могут выступать как рованных плазматических мембран дрожжей показал, активаторы или сенсибилизаторы процессов. Исследо- что в плазматических мембранах локализовано вещес вания последних лет показали, что порфирины обла- тво, обладающее флуоресценцией в красной области дают уникальным свойством модифицировать радиа- спектра Фп683. Спектр этой флуоресценции имеет один ционное поражение объектов. максимум при 683 нм. Основной максимум в спектре ее О молекулярных механизмах фотодинамических возбуждения расположен в области 400 нм, что близко эффектов, сенсибилизируемых эндогенными порфи- совпадает с полосой Соре для порфиринов. Возбужде ринами (при облучении клеток низкоинтенсивным ние света в УФ области спектра с максимумом при красным светом) известно пока очень мало. это в зна- нм, соответствующим максимуму поглощения белков, чительной мере связано с отсутствием данных о внут- приводило к появлению той же флуоресценции с пиком риклеточной локализации порфиринов, выступающих при 683 нм.

в качестве сенсибилизаторов. Полученные результаты свидетельствуют о том, экспериментальные данные, подтверждают, что что выявленная нами флуоресценция плазматических именно плазматические мембраны являются одной из мембран обусловлена локализованным в них фотосен главных мишеней повреждающего действия видимого сибилизатором порфириновой природы, отличным от света: облучение дрожжевых клеток видимым светом копро- и протопорфиринов, содержащихся в других в присутствии гематопорфирина или протопорфирина клеточных структурах.

приводило к инактивации клеток и повреждению плаз- Более подробное изучение биохимических моди матических мембран, определяемому по изменению фикаций, индуцированных видимым и низкоинтенсив проницаемости их к -нитрофенил-D-глюкопирано- ным красным светом являются темой наших дальней зиду. Поскольку действие света в присутствии сенси- ших исследований.

БИОПОЛИМЕРЫ УГЛЕВОДНОЙ ПРИРОДЫ РАЗЛИЧНЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ГРИБОВ РОДА LENTINUs Пучкова Т.А., Смирнов Д.А., Щерба В.В.

Институт микробиологии НАН Беларуси, Минск Гриб Lentinus edodes обладает онкостатическим, полимеры углеводной природы, составляющие до гепатопротекторным, антиоксидантным, хемо- и ра- 50 % от сухой биомассы и представленные свободны диопротекторным, антимикробным, противовирус- ми и связанными сахарами, а также полисахаридами.

ным, гиполипидемическим и др. действием [1]. Его Исследование полисахаридов глубинного мицелия биологическое действие во многом определяют био- других представителей р. Lentinus позволит расши Физиология и биохимия грибов рить применение этих грибов в медицине и будет ды с Mr менее 10 кДа и 10–70 кДа, а в щёлочераство способствовать созданию новых лечебно-профилак- римых – высокомолекулярные Mr=500–2000 кДа. Мо тических препаратов и биологически активных доба- лекулярная масса водорастворимого экзополисахарида l. lepideus составила 200–500 кДа.

вок к пище.

Проведено сравнительное изучение полисахари- Полисахариды всех исследованных грибов явля дов глубинного мицелия и культуральной жидкости ются гетерогликанами, основным мономером которых грибов р. lentinus: l. edodes, l. lepideus и l. tigrinus. является глюкоза (43,696,4 %), также присутствуют Грибы выращивали в погруженной культуре на опти- манноза (1,522,2 %) и галактоза (4,6–11,0). В полиса мизированной питательной среде. эндополисахариды харидах L. lepideus обнаружена арабиноза (1,4–2,3 %).

из мицелия выделяли по [2], экзополисахариды – из экзополисахариды L. lepideus содержат высокое культуральной жидкости по [3]. Гельхроматографию (21,8 %), а L. tigrinus небольшое (1,4 %) количество полисахаридов осуществляли на Toyopearl HW-65, ксилозы. Все исследованные внутри- и внеклеточных колонка 1, 245 см. В качестве элюента использовали полисахариды грибов оказались пептидогликанами с фосфатный буфер, рН 7,2. Состав углеводов полисаха- содержанием белка 0,3–5,9 %. При этом более высокое ридов (после предварительного гидролиза) определя- его количество отмечено в экзополисахаридах.

ли методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) в Таким образом, проведенные исследования показа ли, что представители грибов р. lentinus различаются виде триметилсилильных производных сахаров.

Более быстрым накоплением биомассы (11,0–14,5 г/ как по скорости роста в погруженной культуре, так и л за 7–9 сут) отличались грибы L. lepideus и L. tigrinus. по образованию биополимеров углеводной природы и Для роста всех штаммов L. edodes требовалось 12–14 их физико-химическим характеристикам.

сут. Максимальное количество эндополисахаридов Литература (9,0–10,2 %) содержалось в биомассе L. lepideus, а са- 1. Reshetnikov S.v., Wasser S.p., Tan k.k. Higher basidiomycetes as a source of antitumour and immunos мый высокий синтез экзополисахаридов (4,0–5,2 г/л) наблюдался у L. edodes. timulating polysaccharides (Rewiev) // Int. J. of Medicinal В эндополисахаридах грибов присутствовали как Mushrooms. – 2001. – vol. 3, N 4. – p. 361–394.

высокомолекулярные: l. edodes 1000 кДа, l. lepide- 2. Mizuno T. // Int. J. of Medicinal Mushrooms. – us 200–300 кДа, l. tigrinus 500 кДа, так и низкомо- 1999. – vol. 1. – p. 9–29.

лекулярные фракции (Mr10кДа). В водорастворимых 3. Babitskaya v.G., Scherba v.v., Mitropolskaya N.Y., фракциях экзополисахаридов у грибов l. edodes и l. Bisko N.A. // Int. J. of Medicinal Mushrooms. – 2000. – tigrinus преобладают низкомолекулярные полисахари- vol. 2. – p. 51–54.


ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ГРУПП В АКТИВНОМ ЦЕНТРЕ б-L-РАМНОЗИДАЗ pENICILLIUM COMMUNE Рзаева О.Н., Варбанец Л.Д.

Институт микробиологии и вирусологии НАН Украины им. Д.к. заболотного, киев б-L-Рамнозидаза (б-L-рамнозид-рамногидролаза, обоих ферментов находился в кислой области (4,0 и К.Ф. 3.2.1.40) – фермент класса гидролаз, который 4,2 для б-L-рамнозидаз 1 и 2 соответственно), диапа характеризуется специфичностью по отношению к зон рабочей температуры от 4 до 70 °С с оптимумом терминальным б-1, 2-, б-1, 4-, и б-1, 6-связанным ос- при 60 °С.

таткам L-рамнозы, присутствующей в природных Для управления ферментативным процессом и гликоконъюгатах и синтетических гликозидах. эти смещения реакции в направлении увеличения выхода свойства фермента используются в фармакологии, кос- целевого продукта необходимо установить механизм метологии, медицине, кондитерской промышленности каталитического действия б-L-рамнозидазы. Одним из и виноделии, а также как аналитический инструмент подходов является идентификация функциональных в научно-исследовательских работах для установления групп активного центра фермента, которые принима структуры углеводсодержащих субстратов. ют непосредственное участие в катализе.

Очистку фермента проводили путем дробно- На основании анализа кинетических кривых зави го фракционирования белковой смеси из фильтрата симости скорости б-L-рамнозидазной реакции от вели penicillium commune 266 сульфатом аммония (от 30 до чины рН (рКв1 и рКа1 – 2,8 и 5,7;

рКв2 и рКа2 – 3,2 и 90 % насыщения), а также ионообменной хроматогра- 5,8, для б-L-рамнозидаз 1 и 2 соответственно), а также фией на DEAE-TSk 650 М геле. Получено два препа- результатов экспериментов по фотоокислению можно рата с б-L-рамнозидазной активностью. Оптимум рН предположить, что в активном центре б-L-рамнозида 140 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел зы 1 и 2 присутствуют карбоксильная групп С-концевой зидазы 2 на 53 % при действии на нее арсенита натрия, аминокислоты и имидазольная группа гистидина. Для возможно, обусловлено наличием близко расположен идентификации других функциональных групп в актив- ных SH-групп. Снятие ингибиторного эффекта, вызван ном центре был применен ингибиторный анализ фер- ного действием п-ХМБ на б-L-рамнозидазы 1 и 2, та ментативной реакции с использованием ионов метал- кими реактиваторами как L-цистеин, в-меркаптоэтанол лов и специфических химических реагентов. Наиболее и дитиотреитол дает возможность предположить, что существенное влияние на б-L-рамнозидазу 1 проявили вблизи активного центра присутствуют сульфгидриль катионы Сu2+, Mn2+, Ag+, Hg2+, которые угнетали ее ные групп, которые, хотя и не участвуют в катализе, активность на 45–55 %. б-L-Рамнозидаза 2 полностью однако играют важную роль в поддержании активной ингибировалась ионами Ba2+ и Mn2+, либо на 45 % – конформации молекул ферментов, способствуя прояв ионами Ag+и pb2+. Уменьшение активности б-L-рамно- лению б-L-рамнозидазной активности.

ШТАММЫ Penicillium lilacinum, ПРОДУЦИРУЮЩИЕ в-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ С ОПТИМУМОМ ДЕЙСТВИЯ В НЕЙТРАЛЬНОЙ СРЕДЕ Сапунова Л.И., Лобанок А.Г., Тамкович И.О., Костеневич А.А.

Институт микробиологии НАН Беларуси, Минск Непреходящий интерес исследователей к в-галак- ного синтеза ферментного белка указанной группой тозидазам (лактазам, в-D-галактозид-галактогидро- микроорганизмов.

лазам, К.Ф.3.2.1.23) обусловлен их физиологической Аналогичная закономерность была установлена и в ролью: в желудочно-кишечном тракте человека и жи- отношении большинства исследованных нами грибов вотных фермент катализирует процесс гидролиза лак- из Белорусской коллекции непатогенных микроорга тозы с образованием галактозы и глюкозы. Нарушение низмов (ГНУ «Институт микробиологии НАН Бела руси»), за исключением четырех штаммов P. lilacinum.

синтеза фермента является причиной наследственной непереносимости молока, основной углеводный ком- Как показали результаты проведенных исследований, понент которого представлен лактозой (молочным культуры указанных грибов активно росли на всех сахаром). При лактазной недостаточности взрослым испытанных средах с лактозой или молочной сыво и, особенно, детям, а также молодняку сельскохозяйс- роткой, в том числе содержащих как физиологически твенных животных, в рационе которых значительную кислые, так и физиологически щелочные источники долю составляет молоко, показано употребление мо- азотного питания. Отмечаемые при этом невысокий лочных и других продуктов, пищевых (кормовых) до- уровень синтеза в-галактозидазы и подщелачивание бавок с пониженным содержанием лактозы. культуральной среды до значений рН 8.4–8.5 явились Для получения диетических безлактозных молоч- физиолого-биохимической особенностью рассматри ваемых штаммов P. lilacinum. Кроме того, продуци ных продуктов, а из молочной сыворотки также глю козо-галактозного сиропа, заменяющего белый сахар руемый ими фермент предпочтительнее гидролизовал в хлебопекарной и кондитерской промышленности, специфический субстрат в нейтральной, чем в кислой используют препараты в-галактозидаз микробного среде. Так, например, каталитическая активность в происхождения. Препараты фермента высокой степе- галактозидаз указанных грибов при рН 7.0 была в 3– ни очистки являются также субстанцией для произ- 5 раз более высокой, чем при рН 4.2, что не является водства фармакологических препаратов, улучшающих характерным свойством ферментов, продуцируемых пищеварение. эукариотическими микроорганизмами.

Известно, что свойство синтезировать в-галакто- Таким образом, нами впервые выявлены предста вители мицелиальных грибов – штаммы Penicillium li зидазы широко распространено среди про- и эукари lacinum, синтезирующие -галактозидазу с оптимумом отических микроорганизмов. Однако коммерчески наиболее востребованными продуцентами в-галак- действия в нейтральной среде. Указанные эукариоты тозидаз являются мицелиальные грибы, в основном, из-за недостаточно высокого уровня синтеза фермен представители родов aspergillus и Penicillium, в том та не могут рассматриваться в качестве продуцентов числе различные природные, а также полученные с -галактозидазы, однако могут быть использованы в использованием методов традиционной генетики или работах про конструированию рекомбинантных штам технологий рекомбинантных ДНК штаммы. В отличие мов как доноры гена, кодирующего синтез нетипич от бактерий, грибы продуцируют ферменты, имеющие ного для грибов ферментного белка. Можно полагать, внеклеточную локализацию и, как правило, гидроли- что биокатализаторы с оптимумом действия в ней зующие специфический субстрат преимущественно в тральной среде окажутся особенно востребованными кислой среде. Повышенная кислотность питательной при производстве диетических безлактозных молоч среды является также необходимым условием актив- ных продуктов.

Физиология и биохимия грибов СЕКРЕТИРУЕМЫЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ И ИНГИБИТОРЫ ПРОТЕИНАЗ эНТОМОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ Семенова Т.А.1, Дунаевский Я.Е.2, Белозерский М.А.2, Белякова Г.А.1, Борисов Б.А.3, Семенова С.А. 1 Биологический факультет МГУ им. М.в. ломоносова, Москва 2 НИИ ФХБ им. А.Н. Белозерского, Москва 3 Центр паразитологии Института Экологии и Эволюции РАН, Москва 4 Химический факультет МГУ им. М.в. ломоносова, Москва В культуральной жидкости (КЖ) энтомопатоген- что синтез ферментов препятствует синтезу ингибиторов ных грибов cordyceps militaris, evlachovaea kintrischica, и наоборот. На среде, содержащей желатину, P. lilacinus Tolypocladium cylindrosporum, Paecilomyces lilacinus об- секретировал эффективный ингибитор субтилизинопо добных протеиназ, а T. cylindrosporum, выращенный на наружены протеолитические ферменты и ингибиторы протеиназ. Грибы выращивали на различных средах, этой среде, образовывал соединения, подавляющие ак являющихся модификациями среды Чапека, при этом тивность трипсина и бромелаина. Методом гель-хрома спектр секретируемых соединений определялся соста- тографии было показано, что в культуральную среду сек вом среды. Так, при выращивании на среде, содержащей ретировались два ингибитора с разной специфичностью.

кутикулу насекомых, наблюдалось резкое возрастание Все исследованные штаммы ингибировали цистеиновые ферментативной активности, а также секреция проте- протеиназы, при этом все секретируемые ингибиторы иназ, не выделяемых грибами в культуральные среды были устойчивы к действию пепсина.

без содержания кутикулы: значительная активность Таким образом, выращивание энтомопатогенных субтилизиноподобных протеиназ проявилась у P. lilaci- грибов на средах, содержащих кутикулу, обеспечивает nus, трипсиноподобных – у c. militaris и e.kintrischica, максимальный (как количественный, так и качествен аминопептидазная активность была обнаружена в КЖ ный) выход ферментов в культуральную среду, так как T. сylindrosporum. Активность цистеиновых протеиназ кутикула является оптимальным субстратом для энто не определилась ни в одном из образцов КЖ. мопатогенных грибов. Процессы синтеза ингибиторов Ингибиторная активность проявлялась только при и ферментов, по-видимому, являются взаимоисключа отсутствии ферментативной активности в образце КЖ. ющими. Предполагается, что ингибиторы играют роль Прогревание КЖ показало, что после разрушения фер- в защите грибов от фунгицидного влияния чужерод ментов определяется лишь незначительная ингибитор- ных протеиназ.


ная активность. это, возможно, свидетельствует о том, Работа поддержана грантами РФФИ и МНТЦ.

ЛИПИДЫ МИЦЕЛИАЛЬНЫХ ГРИБОВ КАК АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ ВИД ТОПЛИВА ДЛЯ ДИЗЕЛЬНОГО ДВИГАТЕЛЯ Сергеева Я.Э., Галанина Л.А., Феофилова Е.П.

Институт микробиологии им. С.Н. виноградского РАН, Москва В начале ХХI века человечество столкнулось с про- при трансэтерификации возобновляемых биологичес блемой постепенного и неизбежного исчерпания ми- ких ресурсов, таких как растительные масла или жи ровых запасов нефти. По оценке специалистов к 2030 вотные жиры.

году потребление энергии в мире вырастет на 60 %, Сегодня в мире широко используется биодизель что потребует значительного увеличения запасов топ- полученный на основе масел сельскохозяйственных лива. Таким образом, возникла проблема поиска иных, культур таких как соя (США, Бразилия), рапс (до 80 % альтернативных традиционному источнику энергии от всего биодизеля, произведенного в Европе), под нефти источников энергии и топлива, которые были солнечник (ряд стран Европы, в том числе Франция, бы регенерируемыми и экологически безопасными. Италия). Число работ по исследованию возможности Одним из наиболее перспективных альтернатив- получения биодизеля из различных возобновляемых ных источников энергии, привлекающим все большее природных источников постоянно растет. Наиболее внимание исследователей в последние годы, является изучены с этой точки зрения растительные масла (ко так называемый биодизель. Биодизель представляет косовое, соевое, рапсовое, оливковое, арахисовое и т.д.), собой смесь моноалкиловых (чаще всего метиловых животные жиры изучены в меньшей степени. В послед или этиловых) эфиров жирных кислот, полученных нее время в качестве исходного сырья для получения 142 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел биодизеля рассматриваются бактерии, водоросли, а держащей в качестве источника азота нитрат аммония, также олеагенные дрожжи и грибы. Особый интерес в способен накапливать до 16 г/л биомассы и более 7 г/л данном контексте представляют мукоровые грибы сем. липидов. Проведенный анализ состава липидов пока Cunninghamellaceae, способные к активному синтезу зал, что преобладающей фракцией являются триглице липидов, содержание которых в биомассе может дости- риды. В результате анализа жирнокислотного состава гать 50 % (от сухого веса биомассы). Относительно не- липидов установлено, что в сумме жирных кислот давно было предложено использовать липиды мукоро- преобладающей является олеиновая кислота (до 50 % вых грибов в качестве исходного сырья для получения от суммы жирных кислот). Также были установлены биодизеля [Ткачевская Е.П. и др., 2007]. такие показатели, характерные для биодизеля, как йод Цель данной работы – создание основ для биотехно- ное число, составившее 86.61 и теплоемкость липидов логического получения липидов мицелиального гриба (теплотворная способность) – 37.13 МДж/кг. Данные Cunninghamella japonica для их дальнейшего использо- показатели соответствует аналогичным показателям вания в качестве исходного сырья для биодизеля. Для наиболее широко используемого биодизеля, получен чего первоначально проведен скрининг мицелиальных ного на основе рапсового масла.

грибов – представителей различных систематических Из обезжиренной биомассы гриба был выделен хи групп по определению их олеагенной способности. тин. Наличие второго продукта ферментации делает По результатам скрининга выявлен суперолеагенный процесс получения из мицелиальных грибов альтерна продуцент липидов – мукоровый гриб Cunninghamella тивного вида топлива более экономически выгодным.

japonica. Проведена модификация питательной среды Таким образом, данное исследование открывает с целью ее удешевления. Установлено, что отобранный дальнейшие перспективы для создания биодизеля на мукоровый гриб на специально подобранной среде, со- основе липидов мукоровых грибов.

МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЕРМЕНТА ЛАНОСТЕРОЛ - 14 - АЛЬФА-ДЕМЕТИЛАЗЫ CANDIDA ALbICANs С ИМИДАЗОЛОМ.

Смолина Н.А.1, Маркозашвили Д.Т.2, Батагов А.О.2, Игнатьева С.М. 1 НИИ медицинской микологии им. П.Н. кашкина СПб МАПо, Санкт-Петербург 2 ФГУ «Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии им. в.А. Алмазова» ФАвМП, Санкт-Петербург Устойчивость к азолиновым антимикотическим Для верификации расчетных методов было про препаратам остается значительной проблемой для та- ведено моделирование связывания белка-гомолога кого распространенного грибного патогена как Candida ланостерол - 14 – альфа-деметилазы Mycobacterium albicans. Общей химической группой в молекулах азоли- tuberculosis CYp51. Полученное расчетное значение нов является остаток имидазола. Механизм анитимико- константы ингибирования у CYp51 совпало с экспе тического действия азолинов на C. albicans обусловлен их риментально измеренным с погрешностью, не превы химическим взаимодействием с белком ланостерол 14- шающей 5 %. Данное соответствие свидетельствует о альфа-деметилазой (ERG11). В данной работе предсказа- потенциальной применимости математических мето на третичная структура данного белка C. albicans, а также дов, использованных в настоящей работе для оценки построена математическая модель его взаимодействия с эффективности связывания азолиновых антимикоти имидазолом. На основании расчетных энергетических ческих препаратов с белком ланостерол 14-альфа-де характеристик химического связывания вычислена конс- метилазой.

танта ингибирования этого фермента имидазолом.

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЛЕКТИНА ТРУТОВИКА GriFola FrondoSa СО СПЕЦИФИЧЕСКИМИ И НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМИ АНТИТЕЛАМИ Степанова Л.В., Бурыгин Г.Л., Никитина В.Е.

Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов нами мицелиального лектина трутового гриба Grifola В настоящем исследовании с применением ком frondosa 0917 к взаимодействию с гомологичными плекса методических подходов исследована спо собность ранее полученного и охарактеризованного (специфическими, полученными на чистый препарат Физиология и биохимия грибов лектина) и негомологичными (неспецифическими;

к таковые в случае негомологичных антител. При этом О-антигенам некоторых бактерий) поликлональными величины изменения стандартной свободной энергии G0, рассчитанные через установленные константы антителами кролика, а также с коммерческим препара том г-глобулина человека. Результаты иммунофермен- образования (в биологическом смысле – аффиннос тного (ИФА) и иммунодот-анализа с использованием ти) и характеризующие прочность образующегося фрагментов протеолитически расщепленных антител комплекса реагентов, практически не отличались.

продемонстрировали связывание лектина с Fab-фраг- При образовании связи «лектин G. frondosa 0917–го мологичные антитела» G0 в среднем составила ментами (антигенсвязывающим центром) только гомо 51,109 кДж/моль при 25°С;

G0 комплекса «лектин G.

логичных антител, что свидетельствует о проявлении frondosa 0917– негомологичные антитела» в среднем специфического взаимодействия «антиген–антитело».

Таким образом, была доказана иммунохимическая спе- равна 50,121 кДж/моль при 25°С. Вероятно, с пози цифичность этого взаимодействия. Тогда как выявлен- ций энергетики молекулярных взаимодействий не ное взаимодействие лектина с негомологичными анти- льзя назвать взаимодействие лектина с одним типом телами осуществлялось, скорее всего, за счет контакта антител более специфичным, чем с другим, хотя, с углеводсвязывающей области лектина с углеводной учетом более высоких величин констант связывания частью антител (специфическая реакция «лектин–уг- с гомологичными антителами, последние, очевидно, левод»). более конкурентоспособны за образование связей с Поскольку как лектины, так и антитела являются лектином. Наши расчеты являются иллюстрацией к частью представляющих активный интерес биосис- решению вопроса о том, можно ли по результатам ис тем, установление параметров их взаимодействия с следований на уровне гомогенных веществ, уже не яв целью понимания явления двойственной биоспеци- ляющихся частью живой системы, однозначно судить фики лектина и уточнения понятия «специфичность» об их функционировании в системе? Контакт лектина в применении к наблюдаемым взаимодействиям до- с гомологичными антителами, осуществляемый, как статочно важно. С применением расчетных формул, было доказано, посредством антигенсвязывающих являющихся производными от закона действующих центров рецептора, в живой системе вызвал бы бло масс, метода серийных разведений, предложенно- кирование лектина как антигена, а контакт лектина с го С.А. Бобровником (2003;

2004) для установления негомологичными антителами посредством связей, параметров лиганд–рецепторного взаимодействия, основанных на случайной пространственной компле а также результатов ИФА мы рассчитали константы ментарности частей биомолекул определенной кон образования комплексов лектина G. frondosa 0917 с формации, провоцировал бы, очевидно, совсем иной гомологичными и негомологичными (к О-антигену отклик системы. В данном случае речь может идти, бактерии Sinorhizobium meliloti p221;

выбор произ- вероятно, только о биологической специфичности лектина и антител на уровне физиологических единиц вольный) антителами. Расчетные данные показывают, живой системы, а на молекулярном уровне имеет что величины констант связывания Kf лектина с гомо логичными антителами в среднем в 1,5 раза выше, чем место универсализм взаимодействий.

ПОИСК ПРОДУЦЕНТА ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ИНУЛИНАЗЫ ГРИБНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ Стойко В.И.1, Айзенберг В.Л.1, Захарченко В.А.1, Капичон А.П.1, Калашник С.Н.1, Бурбан А.Ф.2, Коновалова В.В. 1 Институт микробиологии и вирусологии им.

Д.к. заболотного Национальной академии наук Украины (ИМв НАНУ), киев 2 Национальный университет «киево-Могилянская Академия», киев эффективность биотехнологического производства Инулиназа гидролизует полифруктозид инулин с определяется использованием высокопродуктивных образованием фруктозы. Актуальность процесса обус штаммов грибов – продуцентов биологически актив- ловлена перспективой получения сахаристых веществ, ных веществ. Отдел физиологии и систематики микро- этанола, молочной кислоты путем гидролиза нетради мицетов ИМВ НАНУ владеет стратегического значения ционного сельскохозяйственного сырья. Инулиназа коллекцией мезо- и термофильных микромицетов, на- также может быть использована для получения фрук считывающей около 8 тыс. культур более 500 видов. тозы и определения ее содержания в пищевых продук Исследование направлено на поиск продуцента тах. Наиболее эффективный метод гидролиза инули фермента инулиназы (2, 1--Д-фруктозан-фруктано- на – ферментативный – под действием инулиназы.

гидролазы, КФ 3.2.1.7) грибного происхождения для В настоящее время в Украине производство инули дальнейшего использования в биотехнологии. назы не организовано, что лимитируется отсутствием 144 ii СъезД МИколоГов РоССИИ. Тезисы докладов. Раздел конкурентноспособных продуцентов фермента и при- тативной активности. Поскольку в отечественных и водит к необходимости импорта препарата инулиназы зарубежных изданиях отсутствует подробное описа высокой стоимости. Среди продуцентов инулиназы ние корректного метода определения инулиназной известны представители бактерий, грибов, дрожжей. активности с использованием реактива Самнера, экзо-инулиназа грибного происхождения является бо- нами была отработана, применительно к микромице лее технологичной в сравнении с бактериальной эндо- там как объектам исследования, методика определе инулиназой. ния активности инулиназы, основанная на принципе Работа по отбору активных изолятов – потенци- восстановления редуцирующих сахаров. Методика альных продуцентов фермента – проводилась в отделе опубликована в журнале «Биотехнология» (Москва), физиологии и систематики микромицетов ИМВ НАНУ. №5, 2007.

Способность к синтезу инулиназы определялась сре- Изучены некоторые физиолого-биохимические свойства селекционированых штаммов Penicillium ди 300 музейных культур микромицетов 40 родов sp. 225 и aspergillus sp.8ТХ 67968, в том числе: вли видов. Свойство к секреции экзо-инулиназы в среду культивирования обнаружено у микромицетов разных яние источников углерода, азота и фосфора, количес родов: Penicillium, aspergillus, acremonium, Fusarium. тва посевного материала на рост и ферментативную В результате направленного ступенчатого скрининга активность грибов. Наивысший синтез внеклеточной отобраны 2 штамма: Penicillium sp. 225 и aspergillus инулиназы у отобранных штаммов зафиксирован на sp.8ТХ 67968. Наибольшее количество активных средах с сахарозой, глюкозой, арабинозой, фруктозой штаммов обнаружено среди грибов, изолированных, в и цикорием.

основном, из почвенных образцов. Полученные данные будут использованы при под Биотехнология производства промышленно-цен- боре состава питательной среды и условий культиви ных ферментов, таких как инулиназа, требует при- рования микромицетов с перспективой их практичес менения корректных методов определения фермен- кого применения.

ИЗУЧЕНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ГРИБОВ РОДА TRICHODERMA ИЗ АНТРОПОГЕННО НАРУШЕННЫХ ПОЧВ РТ Тазетдинова Д.И., Тухбатова Р.И., Шишкин А.В., Рафаилова Э.А., Морозова Ю.А., Михайлова И.М., Скворцов Е.В.

ГоУ вПо «казанский государственный университет им. в.И. Ульянова-ленина», казань Виды рода Trichoderma применяются во многих об- гидролаз, в частности, целлюлаз и протеаз. Также из ластях промышленности. Из них получают целый ком- вестна способность Trichoderma к синтезу ферментов плекс гидролазных ферментов, которые используются ксиланаз, способных увеличивать перевариваемость в целлюлозно-бумажной и пищевой промышленности, кормов, содержащих рожь и используемых в кормоп в производстве моющих средств, в получении спирта и роизводстве как добавки в рационы животных.

кормовых добавок, для переработки отходов. Проведено сравнительное изучение протеазной, Целью исследования явился поиск штаммов-про- целлюлазной и ксиланазной активностей грибов рода дуцентов ферментов, перспективных для производства Trichoderma при росте на послеспиртовой зерновой биопрепаратов. барде, которая содержит значительное количество Нами были выделены изоляты грибов рода Tricho- сложных сахаров.

derma из антропогенно нарушенных почв Юго-Вос- Определение ксиланазной и целлюлазной актив точного региона республики Татарстан. ностей ферментных препаратов проводилось по kцnig Выделенные изоляты идентифицированы с использо- (2002), протеолитической активности – по Каверзне ванием морфологических (идентификация проводилась вой (1971).

по Samuel), физиолого-биохимических и молекулярно- В результате исследований показано, что штаммы генетических методов. Участок ядерной рибосомаль- обладали в большей степени гидролазной активнос ной ДНК, содержащий ITS1 и 2 был амплифицирован в тью. Высокая ксиланазная и целлюлазная активности реакции ПЦР с использованием комбинации праймеров отмечены только у двух штаммов.

SR6R (5’-AAG TAG AAG TCG TAA CAA GG-3’) и LR1 эти штаммы могут быть рекомендованы для про (5’-GGT TGG TTT CTT TTC CT-3’). изводства ферментных препаратов для применения в Активность штаммов Trichoderma, перспективных сельском хозяйстве, животноводстве и промышлен для сельского хозяйства, определяется активностью ности.

Физиология и биохимия грибов ФЕРМЕНТНЫЕ ПРЕПАРАТЫ МИКОЛОГИЧЕСКОЙ ПРИРОДЫ Телишевская Л.Я., Овчинников Р.С.

ФГУ «вГНкИ», Москва В последние десятилетия большое распростране- Металлопротеазы грибов также имеют широкую ние получили фермен-тые препараты микробиологи- субстратную специфичности. Например, протеаза p.

ческого происхождения: бактериального и грибного. roqueforty расщепляет казеин, гемоглобин, протамин, Широка область применения этих ферментов, как гистоны, слабо расщепляет эластин, желатин, фибрин для технических целей, так и для непосредственно- (Кислухина О.В., 2002).

го использования в качестве пищевых и кормовых В процессе культивирования продуценты обычно добавок. Высокая специфическая активность таких экспрессируют в питательную среду не один, а целый препаратов и многосторонность действия энзимов ряд ферментов. Так, внеклеточные протеазы грибов обусловили развитие исследований по изучению фер- входят в состав комплексных ферментных препаратов, ментативного спектра грибов-продуцентов, особен- таких как Амилоризин, Амилопроторзин и других.

ностей их культивирования и возможных способов Из культуры Streptomyces griseus получают активный применения. протеолитиче-ский препарат «проназа», который со Ферментные препараты получают как метаболиты держит комплекс сериновых протеаз, позволяющий при искусственном культивировании их продуцентов: расщеплять белок овальбумин до 87 % (Логинова Т.А.

в глубинной или поверхностной культуре, соответс- и др., 1981).

твенно в жидкой или на плотной питательной среде. Таким образом, протеолитические ферменты гри Препараты экзогенных гликозидаз грибного проис- бов гидролизуют те же белки, что и другие протеазы хождения (продуценты родов Trichoderma, Aspergillus, животного и растительного происхождения. Кроме Mucor, penicillum) и актиномицетного (продуценты того, имеются сообщения о способности грибных про родов Actinomyces, Streptomyces) – используются в теаз расщеплять такие белки, как коллаген, эластин и пищевой и легкой промышленности, в кормопроиз- кератин. эти белки практически не усваиваются желу водстве. Гликозидазы микологической природы эф- дочно-кишечным трактом высших животных и чело фективно гидролизуют высокомолекулярные трудно века, но могут расщепляться некоторыми микроорга расщепляемые соединения, которые выполняют в низмами.

растениях защитную функцию. это полисахариды, со- Коллаген, кератин и эластин – основные структур ставляющие основу клеточной стенки: целлюлоза, ге- ные белки животных (склеропротеины) – отличаются мицеллюло-зы, лигнин, пектин – которые не расщеп- механической прочностью и химической инертнос ляются высшими животными. тью, которая обусловливается их аминокислотным со Микроскопические грибы и актиномицеты проду- ставом и конформацией молекул.

цируют также активные протеолитические ферменты. Известны протеазы микологического происхожде Из числа протеаз микологического происхождения по ния, позволяющие расщеплять склеропротеины (про строению каталитического центра можно классифици- дуцируемые грибами родов Aspergillus, penicillum, ровать те же группы ферментов, которые характерны keratinomyces;

актиномицетов – A. albus, A. griseus и для других известных протеаз: сериновые, карбок- стрептомицетов – S. fraidiospirallis, S. griseus, S. fulvo сильные, металлопротеазы. Тиоловые протеазы у гри- viridis).

бов находят редко. При этом различают протеазы по специфичности Внеклеточные сериновые протеазы синтезируют их действия на структурные белки, как «истинные»

штаммы Acremonium, Alternaria, Aspergillus, Cephalo- и «неспецифические». «Истинные» склеро-протеазы sporium, fusarium, penicillium, Trichoderma, verticilli- действуют только на специфические для них субстра um и др. Сериновые протеазы актиномицетов являют- ты и не расщепляют других белков. Так, «истинные»

ся трипсинопо-добными. Расщепляют эфирные связи, коллагеназы, независимо от происхождения, гидро а также связи, образованные остатками ароматичес- лизуют коллаген, в том числе нативный, воздействуя ких аминокислот, лейцина, метионина. Известно, что на первичную структуру белка, и расщепляют амино некоторые сериновые протеазы грибов способны рас- кислотную цепь в неполярных участках молекулы по щеплять коллаген и эластин. связям (-х-гли-).



Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 32 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.