авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
-- [ Страница 1 ] --

Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова

Российский Фонд Фундаментальных исследований

Международный биотехнологический центр МГУ

МОО

«Микробиологическое общество»

К 90-летию Заслуженного профессора Московского университета Н.С.Егорова

Всероссийский симпозиум с международным участием

Биологически активные

вещества микроорганизмов:

прошлое, настоящее, будущее

Москва МГУ имени М.В.Ломоносова Биологический факультет 27-29 января 2011 г.

МАКС Пресс Москва - 2011 1 УДК 579.

ББК 28.4… Б63 Издание книги и проведение симпозиума осуществлено при содействии РФФИ, грант 11-04-06002г Оргкомитет симпозиума:

Председатель: Нетрусов А.И. (МГУ) Зам. председателя: Колотилова Н.Н. (МГУ) Члены оргкомитета:

Абрамов С.М., Баранова Н.А., Брюханов А.Л., Булгакова В.Г., Воробьева Л.И.,Данилова И.В., Егоров С.Н.,Егорова М.А., Захарчук Л.М., Ивановский Р.Н., Исмаилов А.Д.,Котова И.В., Крейер В.Г., Липей С.О.,Милько Е.С., Пискункова Н.Ф., Полин А.Н., Рыжкова Е.П.,Семенов А.М., Семенова Е.В., Стоянова Л.Г, Чердынцева Т.А., Юдина Т.Г. (МГУ).

Секретарь: Осмоловский А.А. (МГУ) Ответственные редакторы: Нетрусов А.И., Колотилова Н.Н.

Биологически активные вещества микроорганизмов: прошлое, настоящее, будущее: Всероссийский симпозиум с международным участием. Москва, МГУ имени М.В.Ломоносова. Биологический факультет. 27-29 января 2011 г. : Материалы / Отв.ред. Нетрусов А.И., Колотилова Н.Н. – М.: МАКС Пресс, 2011. - 160 с.

ISBN 978-5-317-03531- Сборник содержит материалы Всероссийского симпозиума с международным участием «Биологически активные вещества микроорганизмов: прошлое, настоящее, будущее», посвященного 90-летию Заслуженного профессора Московского Университета, Заслуженного деятеля науки РФ, Лауреата Государственной премии СССР Николая Сергеевича Егорова. Тематика симпозиума охватывает широкий спектр вопросов исследования и практического применения биологически активных соединений микробного происхождения: антибиотиков, ферментов, пробиотиков, витаминов, экологические аспекты изучения межмикробных взаимодействий, вопросы биотехнологии. Проведение симпозиума и издание материалов приурочено к 80-летию биологического факультета МГУ.

УДК ББК 28. Научное издание Напечатано с готового оригинал-макета Программа 27 января, четверг Заезд и регистрация участников симпозиума. Размещение стендов.

Экскурсия в Музей землеведения МГУ (для желающих).

28 января, пятница 9-45 – 11-00.

Регистрация участников симпозиума. Размещение стендов.

11-00 – 12-30.

Секционное заседание Горизонты науки и биотехнологии.

Доклады молодых ученых и студентов 1. Устюгова Е.А. (МГУ, Москва) Синитез антибиотического комплекса Lactococcus lactis ssp lactis 194. (10 мин) 2. Егорова А. С.(Москва). (10 мин) Исследование пигментов микроскопического гриба Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson 3. Дородникова Е. А. (Москва).

Действие оксилипинов на развитие Neurospora crassa. (10 мин) 4. Агевеец В. А. (С-Петербург) Тестирование медицинского препарата Энкад на антивирусную активность в системе «альгофаг-водоросль». (10 мин) 5. Якушев А. В. (МГУ, Москва).

Влияние комплекса биологически активных веществ сфагнума на рост бактерий, выделенных из различных биотопов. (10 мин) 6. Харченко Н.В. (МГУ, Москва). Зависимость динамики роста бактерий Escheriсhia coli от времени совместного культивирования с бифидобактериями. (10 мин) 7. Осмоловский А.А.(МГУ, Москва). Внеклеточные протеиназы Aspergillus ochraceus – активаторы протеина С плазмы крови. (10 мин) Стендовая сессия.

12-30-13-00.

Перерыв 13 -00 – 14-30.

Пленарное заседание 1. Нетрусов А.И. (МГУ, Москва). Антибиотики – взгляд в будущее.

2. Егоров Н.С. (МГУ, Москва). Микробная биотехнология (становление и состояние).

3. Егоров А.М. (Москва). Проблемы резистентности бактерий к антибиотикам.

4. Коробов В.П. (Пермь). Лантибиотики: вчера, сегодня, завтра.

5. Кожевин П.А. (МГУ). К вопросу об экологической роли антибиотиков.

14-30 – 15-00.

Перерыв 15-00 – 15-30.

Торжественное заседание Приветствия.

Суббота, 29 января Секционные заседания 10-00 – 11- Биологически активные вещества микроорганизмов и межмикробные взаимодействия 1. Ботвинко И.В. (Москва). Экзополисахариды бактерий: прошлое, настоящее, будущее (10 мин).

2. Рыжкова Е.П. (МГУ, Москва). Биологически активные вещества в биологии продуцентов: корриноиды в метаболизме пропионовокислых бактерий. (15 мин) 3. Дерябин Д.Г. (Оренбург).

Бактериальные ауторегуляторы как потенциальные иммуномодуляторы. (15 мин) 5. Захарченко Н.С. (Пущино) Роль ассоциативных микроорганизмов в повышении устойчивости растений к стрессовым факторам окружающей среды. (15 мин) 4. Широких А.А. (Киров).

Реакция меристемных растений картофеля на колонизацию метилотрофными бактериями. (10 мин) 6. Шестаков А.И. (МГУ, Москва). Разработка таблетированной и капсулированной форм пробиотического препарата на основе консорциума микроорганизмов пробиотиков. (10 мин) 7. Колотилова Н.Н. (МГУ, Москва). О вкладе российских ученых в Институте Пастера (Париж) в изучение биологически активных веществ. (10 мин) 11-30 – 12-00.

Кофе-брейк.

12-00 – 13-45.

Антибиотики 1. Юдина Т.Г. (МГУ, Москва). Антимикробные пептиды и белки: структурно функциональные особенности и перспективы исследования. (15 мин) 2. Ушакова Н.А. (Москва) Выделение соматостатин-подобного пептида Bacillus subtilis (10 мин) 3. Садыкова В.С. (МГУ, Москва).

Антимикробная и противоопухолевая активность штаммов рода Trichoderma (10 мин) 4. Стоянова Л.Г. (МГУ, Москва).

Селекция бактериоцин-продуцирующих лактококков, перспективных для создания биоконсервантов. (10 мин) 5. Полтавская О.А. (Киев) Скрининг штаммов бифидобактерий, синтезирующих специфические антимикробные вещества (10 мин) 6. Данилова И. В. (МГУ, Москва).

Пропионовокислые бактерии как продуценты антимикробных веществ. (10 мин) 7. Белявская Л. А. (Киев) Биологически активные вещества Streptomyces avermitilis УКМ АС-2179 – продуцента авермиктинов (10 мин) 8. Руденко Н. В. (Пущино) Детекция ботулинических нейротоксинов типов А, В, Е и F с помощью «сандвич» иммуноферментного анализа на основе моноклональных антител. (10 мин) 9. Полин А.Н. (МГУ, Москва). История изучения антибиотиков на кафедре микробиологии МГУ. (15 мин) 13-45 – 14-15.

Кофе-брейк.

14-15 – 15-45.

Бактериофаги. Ферменты 1. Васильев Д.А. (Ульяновск) Разработка биопрепарата на основе бактериофагов бактерии Pseudomonas putida для диагностики псевдомоноза рыб (15 мин).

2. Феоктистова Н.А. (Ульяновск) Разработка фаговых препаратов индикации и идентификации бактерий рода Bacillus в пищевом сырье и продуктах питания (10 мин).

3. Золотухин С.Н. (Ульяновск) Бактериофаги патогенных энтеробактерий как перспективные антимикробные препараты (15 мин).

4. Крейер В.Г. (МГУ, Москва) Исследование протеолитических ферментов микроорганизмов на кафедре микробиологии МГУ. (10 мин) 5. Кураков А.В. (МГУ, Москва). Поиск микроскопических грибов – продуцентов ферментов для биотехнологического применения и медицины. (10 мин) 6. Михайлова Р.В. (Минск) Интенсификация синтеза грибных оксидоредуктаз.(10 мин) 7. Красовская Л. А. (ИБФМ, Пущино) Получение рекомбинантных литических эндопептидаз AlpA и AlpB Lysobacter sp. XLI в гетерологичной системе Pseudomonas. (10 мин) 8. Кувичкина Т.Н. (Пущино).

Использование метилотрофных дрожжей, основанное на свойстве алкогольоксидазы окислять низкомолекулярные алифатические спирты (10 мин).

15-45 – 16-00.

Пленарное заключительное заседание.

Принятие решений.

Закрытие симпозиума Заседания симпозиума будут проходить на биологическом факультете МГУ в аудитории М-1. Регистрация и размещение стендов в фойе перед ауд. М-1.

Проезд до ст. м. «Университет», троллейбусом 34, автобусами 103, 130 и др. до остановки «Менделеевская улица».

Приветствия Оргкомитет и все участники симпозиума сердечно поздравляют Николая Сергеевича Егорова со славным юбилеем и желают ему здоровья, счастья и еще многих лет плодотворной творческой деятельности!

BIOTRANSFORMATION OF SCLAREOL BY IMMOBILIZED PENICILLII Cincilei A.G., Tolocichina S.A., Rastimesina I.O., Streapan N.V., Mamaliga V.C.

Institute of Microbiology and Biotechnology of ASM, Chisinau, R. Moldova;

angela_cincilei@yahoo.fr Nowadays, terpenes from natural sources and laboratory designed terpenoids have attracted great interest. Sclareol, a diterpenoid obtained from clary sage (Salvia sclarea L.), is a fungal-growth regulator and a plant-growth inhibitor and was reported to have a high antibacterial activity. We have been interested in the study of the microbial transformation of sclareol by the microorganisms for obtaining new substances with precious qualities.

Previously, we have reported that a filamentous fungus Penicillium camemberti CNMN-FP 03 was screened for its ability to biotransform the sclareol.

In the present communication we compare the biotransformation of sclareol by a P.camemberti CNMN-FP-03 using free and immobilized cell systems. Mycelium and spores of a P.camemberti strain taking separately were entrapped in calcium alginate beads.

After 7 days incubation period P.camemberti metabolized about 43% of the substrate with formation of 7 products as it was reported before. Transformation of sclareol by spores immobilized in alginate beads proved to be equal to free cell system and more efficient than by immobilized mycelium. Also, entrapment P.camemberti spores in alginate beads allowed us to apply them for 3-5 cycles of transformation (Laboratory’s Regulation, 2010). The results reveal that the oxidation of sclareol by active penicillii provides a mixture of 7 individual products - homodrimanic C(16) polyfunctionalized compounds (-CHO;

-COOH;

-OH and keto-, unsaturated). Among the transformation products great interest is presented by the dimer A-5 (C20H22O7), isolated from the acidic part of the nonpolar fraction of hydroxylated metabolites of sclareol. This amorphous compound was first isolated and described by us.

To obtain more information about biological activity of compound A-5, its antimicrobial activity was tested against some phytopathogens: Pseudomonas syringae, Corynebacterium michiganense, Corynebacterium citri, Erwinia carotovora, Xanthomonas campestris, Agrobacterium tumefaciens, Aspergillus niger and others. Their negative effect on tested pathogens was medium (zones of inhibition were within 13,0 – 15,2 mm), but exclusive persistent (more than 40 days);

X. campestris strain was the most sensitive one.

Thus, the microbial metabolites obtained after the sclareol transformation has proved to possess biological activity and their usage is perspective. The active strain was patented (Patent MD 2364).

BIOTRANSFORMATION OF L-ISOLEUCINE INTO 4-HIL USING L-ISOLEUCINE-4-HYDROXYLASE: OPTIMIZATION OF THE PROCESS BY METHODS OF METABOLIC ENGINEERING.

Kivero А. D., Novikova. A. E., Smirnov S. V.

Ajinomoto-Genetika Research Institute, 1st Dorozhny pr. 1, Moscow, 117545, Russia kiveroad@rambler.ru 4-hydroxyisoleucine (4-HIL) is a natural nonproteinogenic amino acid possessing insulinotropic biological activity. Previously we have suggested an original enzymatic method for effective bioconversion of L-isoleucine into 4-HIL by expression of stereo-specific L isoleucine-4-hydroxylase (L-isoleucine dioxygenase, IDO) in E. coli 2 strain lacking activities of -ketoglutarate dehydrogenase (EC 1.2.4.2), isocitrate liase (EC 4.1.3.1), and isocitrate dehydrogenase kinase/phosphatase (EC 2.7.11.5). Using the 2 strain, we could achieve 88 % efficiency of L-Ile/4-HIL conversion. This process was accompanied by consumption of 1.5 moles of glucose per 1 moles of the added L-isoleucine.

One of the main goal of further optimization of this process is decreasing of amount of glucose required for hydroxylation of given amount of L-isoleucine. From data obtained earlier we can suggest, that one of the possible way to do it is the inactivation of Entner Doudoroff pathway and oxidative branch of pentose phosphate pathway in 2 strain.

We constructed the 2 strain with inactivated genes: zwf, edd, eda - 2. Bioconversion process by new strain 2[IDO] was characterized by: i) smaller consumption of glucose (1. mol glucose per 1 mol hydroxylated L-isoleucine), ii) smaller (1.5 time) yield of biomass at same bioconversion efficiency. Thus, using the metabolic engineering approach we essentially optimized bioconversion process and obtained 20 % of glucose economy.

ТЕСТИРОВАНИЕ МЕДИЦИНСКОГО ПРЕПАРАТА ЭНКАД НА АНТИВИРУСНУЮ АКТИВНОСТЬ В СИСТЕМЕ «АЛЬГОФАГ-ВОДОРОСЛЬ»

Агеевец В.А., Квитко К.В., Шабанова М.Е. СПбГУ каф. микробиологии profKVK@mail.ru, 1РХТУ им. Д.И. Менделеева Отечественный препарат ЭНКАД является продуктом переработки дрожжевой суммарной РНК. Препарат представляет собой комплекс моно-олигорибонуклеотидов и применяется в настоящее время для лечения наследственных заболеваний сетчатки глаз – пигментного ретинита, дегенеративных заболеваний нервно-мышечной системы, язвенных болезней желудка и др. (1). Была выдвинута гипотеза о наличии у данного препарата противовирусной активности по отношению к группе крупных ДНК содержащих ядерно-цитоплазматических вирусов, таких, как представители семейства Herpesviridae. Исследование проводилось на модельной системе «альгофаг-водоросль».

Система представляет собой клетки зоохлорелл Chlorella variabilis (штамм NC64A) и специфичные лизирующие вирусы PBCV-типа, относящиеся к той же группе, что и вирусы герпеса (ICTVdB Index of viruses) (2, 3). Эффекты, оказываемые на клетки хозяина вирусом и препаратом в различных сочетаниях, регистрировались по изменению замедленной флуоресценции (ЗФ), являющейся интегральным показателем метаболического состояния клеток. Анализ ЗФ показал, что препарат ЭНКАД в данной системе способен вмешиваться в жизненный цикл вируса. Была найдена концентрация препарата, при которой ингибировался процесс разрушения клеток вирусом, но увеличение или уменьшение концентрации препарата приводило к стимулированию процесса репликации вируса. При «низких» и «высоких» концентрациях действие препарата не связано с подавлением онтогенеза вируса, но при «средних» значениях клетки сохраняют метаболическую активность. Отличия эффектов «средних» доз препарата от «низких» и «высоких», вероятно, связано со сложным составом самого ЭНКАДа. Есть основание предполагать, что в его составе присутствует фракция, обладающая выраженным противовирусным действием, но при отклонении от оптимальной концентрации её эффекты теряются под действием других активных компонентов.

1. Багров С.И., Шабанова М.Е. Механизм лечебного воздействия препарата энкад. – Нейроиммунология на пороге XXI века. – С-Петербург:

- 1992:

- С. 120.

2. Van Etten, J.L. and M.V. Graves (2008). Phycodnaviruses. In: Encyclopedia of Virology. III. Elsevier, Oxford. P. 116- 3. Агеевец В.А., Квитко К.В. Изучение Chlorella sp. и их вирусов как модельных объектов для тестирования противовирусных препаратов М., 2010 С. 449- ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И СИНТЕЗ ПРОМЫШЛЕННО ЦЕННЫХ ГИДРОЛАЗ КОЛЛЕКЦИОННЫМИ ШТАММАМИ МЕЗО- И ТЕРМОТОЛЕРАНТНЫХ МИКРОМИЦЕТОВ Айзенберг В.Л., Стойко В.И., Капичон А.П., Павличенко А.К.

Институт микробиологии и вирусологии НАН Украины, Киев, Украина e-mail: v_stoiko@mail.ru Омельчук Е.А., Красинько В.О., Борисенко А.В., Иванов А.А.

Национальный университет пищевых технологий, Киев, Украина В отделе физиологии и систематики микромицетов проводится многолетняя селекционная работа по поиску продуцентов разнообразных гидролаз среди коллекционных мезо- и термотолерантных микроскопических грибов. В отделе создан банк новых высокотехнологичных промышленно-ценных штаммов микромицетов продуцентов внеклеточных ферментов: липазы, пектинэстеразы, инулиназы, эндоглюканазы. Изучены морфологические и физиолого-биохимические особенности штаммов, оптимизированы условия их культивирования, определены пути получения ферментных препаратов из исследованных культур. Получены штаммы термотолерантных продуцентов с повышенной термостабильностью и щелочестойкостью.

Селекционирован новый эффективный продуцент щелочестойкой экзолипазы (КФ 3.1.1.3) термотолерантный гриб Rhizopus sp. 2000 ФМ, характеризующийся коротким циклом развития. Разработана малокомпонентная и дешевая среда для его культивирования, отличающаяся высокими технологическими свойствами.

Изучено образование внеклеточной эндоглюканазы (КФ. 3.2.1.4) микроскопическими грибами разных видов и родов. В ряду термотолерантных микромицетов – представителей родов Aspergillus и Corynascus – установлена высокая степень снижения вязкости 0,3%-го раствора Na-КМЦ от 40 до 52%.

Селекционированы два новых эффективных штамма-продуцента инулиназы (КФ. 3.2.1.7) Penicillium aculeatum 225 (мезофильная культура) Aspergillus sp. 8 TX (термотолерантная культура). Отобранные штаммы охарактеризованы по основным культурально-морфологическим и физиолого-биохимическим свойствам.

Отличительной способностью инулиназы из P. aculeatum 225 является повышенная термостабильность.

БАКТЕРИИ РОДА ZYMOMONAS КАК ПРОДУЦЕНТЫ БИОЭТАНОЛА Алескерова Л.Э., Татаринова Н.Ю., Захарчук Л.М., Нетрусов А.И.

МГУ имени М.В.Ломоносова, кафедра микробиологии;

zakharchuk@mail.ru Этанол можно получить химическим путем при высокой температуре в присутствии катализаторов из этилена, который получают из нефти или природного газа. Однако в связи с высокой ценой на нефть и газ экономически выгодным снова стало спиртовое брожение. Одними из главных продуцентов этанола в настоящее время остаются дрожжи рода Saccharomyces. Однако в последние годы ведутся исследования по получению этанола с помощью бактерий рода Zymomonas.

Целью работы являлось изучение параметров роста и биосинтеза этанола у двух штаммов бактерий Zymomonas mobilis DSM 424Т и DSM 3580.

Подобраны среды для роста штаммов бактерий, изучена морфология клеток при росте на плотной и жидкой питательной среде, установлены оптимальные значения рН и температуры роста, определен спектр потребляемых углеводных субстратов и их оптимальные концентрации для получения этанола. Определена скорость биосинтеза этанола при росте штаммов бактерий на глюкозе и сахарозе. Она оказалась в 2 раза выше, чем скорость биосинтеза этанола на этих субстратах дрожжами Saccharomyces cerevisiae.

Бактерии Zymomonas mobilis DSM 424Т были иммобилизованы в Са-альгинат.

Определены концентрации глюкозы, которые клетки бактерий DSM 424Т способны сбраживать в иммобилизованном состоянии. Иммобилизованные клетки Z. mobilis будут использованы для изучения процесса непрерывного получения этанола в специально сконструированном ферментере. Использование иммобилизованных клеток микроорганизмов в производстве этанола позволяет существенно повысить их производительность по сравнению со свободными клетками, а также уменьшить объем ферментера, что дает возможность повысить экономическую эффективность производства.

АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ХЛОРСОДЕРЖАЩИХ ФУРАНОНОВ Бабынин Э. В., Курбангалиева А. Р., Кудрявцева Д.Н., Гимадеева Р. М., Хасанова Л.М., Ежова А. С.

Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань;

Edward.Babynin@ksu.ru Адгезия микроорганизмов на поверхности имплантированных материалов и формирование биопленок затрудняют их уничтожение с использованием большинства известных антибактериальных агентов. Образование биопленок микроорганизмами регулируется посредством химических сигналов, выделяемых бактериальными клетками в механизме, известном как система «чувства кворума» (Quorum Sensing).

Таким образом, создание препаратов, способных предотвратить развитие биопленок, могло бы обеспечить новый подход для борьбы с инфекционными заболеваниями.

Возможными кандидатами на эту роль являются галогенизированные фураноны.

Естественные галогенизированные фураноны, продуцируемые красной морской водорослью Delisea pulchra, являются ингибиторами QS-системы. Получение новых производных фуранона, обладающих большей антибактериальной активностью, дает нам средство для борьбы с микроорганизмами, которые уже приобрели устойчивость к широко используемым антибиотикам.

Целью данной работы было оценка антибактериальной активности новых хлорсодержащих фуранонов на примере штамма ВА13 Salmonella thyphimurium. Нами были синтезированы следующие типы фуранонов: 1) 5-гидрокси-3,4-дихлор-2(5Н) фуранон (мукохлорная кислота), 2) 5-гидрокси-3,4-дихлор-3-пирролин-2-он (азотсодержащий аналог мукохлорной кислоты), 3) 3,4-дихлор-5-(2-хлорэтокси)-2(5Н) фуранон, 4) 3,4-дихлор-5-(1,3-дихлорпропан-2-илокси)-2(5Н)-фуранон.

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) синтезированных нами соединений определяли метод серийных разведений в жидких средах. Было установлено, что тестируемые соединения обладают бактерицидными свойствами, причем антибактериальная активность всех четырех соединений отличается в полноценной и минимально-глюкозной средах. Если в полноценном бульоне МИК веществ варьировала от 150 мкг/мл для соединения №1 до 600 мкг/мл для № 4, то в глюкозо-солевом растворе активность соединений возрастала в 80-400 раз. Наименьшая разница по МИК на разных средах была у соединения №2 (в 10 раз), которое характеризуется тем, что в кольце вместо кислорода, присутствует азот. Фураноны, содержащие в своей кольцевой молекуле кислород, по своей структуре являются сходными с N-ацил-гомосеринлактонами, сигнальными молекулами QS-системы.

Мы предполагаем, что цитотоксичность тестируемых фуранонов на разных средах имеет разные механизмы. На полноценной среде токсичность хлорсодержащих фуранонов может определяться их способностью реагировать непосредственно с ДНК, вызывая в ней одноцепочечные разрывы и другие повреждения. На минимальной среде, где клетке для роста требуется синтез всех необходимых метаболитов, на первое место выходит способность фуранонов инактивировать фермент рибонуклеотидредуктазу, который катализирует синтез дезоксирибонуклеотидов.

Ингибирование синтеза ДНК в условиях стресса может определять более сильное бактерицидное воздействие хлорсодержащих фуранонов на бактериальные клетки.

СПОСОБНОСТЬ СТРЕПТОМИЦЕТОВ ПОЧВ МОЛДОВЫ СИНТЕЗИРОВАТЬ РЕГУЛИРУЮЩИЕ РОСТ РАСТЕНИЙ ВЕЩЕСТВА.

Балцат К. К., Постолакий О. М., Плешка Т. А., Бурцева С. А.

Институт Микробиологии и Биотехнологии АНМ;

oleseap@yahoo.com Удовлетворение потребностей в продуктах питания растущего населения нашей планеты требует интенсификации растениеводства. Основным фактором плодородия почв является их микрофлора, которая характеризуется чрезвычайно высоким видовым разнообразием. Актиномицеты являются постоянным компонентом почвенных и ризосферных микробных сообществ. На сегодняшний день обзорные и экспериментальные работы, посвященные непосредственно актиномицетам прикорневой зоны, единичны. Между тем, актиномицеты, наряду с другими ризосферными микроорганизмами, могут играть важную роль в развитии растений, участвуя в снабжении последних элементами питания, фитогормонами, витаминами и другими факторами роста Целью наших исследований было изучение способности стрептомицетов, выделенных из почв Молдовы, синтезировать регулирующие рост растений вещества с фитогормональной активностью. Комплекс экзометаболитов (ЭМ) получали у растущих на жидкой комплексной среде М-I стрептомицетов после отделения биомассы от культуральной жидкости центрифугированием.

Проведенная нами обработка семян кукурузы растворами ЭМ изучаемых штаммов, способствовала увеличению длины корней по сравнению с контролем на 9,7 22,8% и колеоптелей на 9,4-38,1%. Вес корней также превышал показатели контроля на 27,5-71,4% (сырые корни), а колеоптелей - на 13,8-47,%. Под влиянием ЭМ увеличилась и длина стеблей на 5,4-38,1% по сравнению с контролем. Проведенные исследования показали, что почвенные стрептомицеты способны синтезировать вещества, стимулирующие не только корнеобразование, но и развитее стеблей, причем выявлены штаммы, обладающие способностью одновременно стимулировать и корнеобразование, и стеблеобразование.

Таким образом, установлено, что ЭМ стрептомицетов, выделенные из почв Молдовы существенным образом влияют на прирост длины корней и стеблей, а также на их массу, что позволяет рассматривать их как потенциальные продуценты регуляторов роста растений. Биопрепараты, приготовленные на их основе могут с успехом применяться в растениеводстве.

ЗАГРЯЗНЕНИЕ НЕФТЕПРОДУКТАМИ КАК ФАКТОР ФОРМИРОВАНИЯ МИКРОБНОГО СООБЩЕСТВА ПОЧВ Баранов М.Е., Воробьева С.В.

ФГОУ ВПО «Сибирский государственный аэрокосмический университет имени академика М.Ф. Решетнева»;

me_ baranov@mail.ru;

ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»;

sofi-kras@mail.ru В условиях активной антропогенной деятельности нефть и нефтепродукты являются одними из распространенных загрязнителей окружающей среды. Главную роль в деградации загрязнений играют микроорганизмы.

Настоящая работа посвящена изучению микробного сообщества в загрязненной мазутом почве в поселке Кедровый (ранее Красноярск-66, Емельяновский район Красноярского края, в 50 км западнее от города Красноярска). Пробы почвы отбирали методом конверта на глубине 10-15 сантиметров, на удалении 1, 3, 5, 10, метров от места разлива мазута. Температура культивирования составляла +22°С.

В пробах почвы обнаружены бактерии и микроскопические грибы (табл.1).

Штаммовый состав бактериальной микрофлоры более разнообразен, чем грибной.

Количество бактериальных штаммов в пробах составляет от 1 до 3, грибных –1.

Таблица 1 – Численность различных групп бактерий и грибов в почве загрязненной мазутом (тыс. КОЕ/ г почвы) Расстояние Бактерии Грибы от места ПД-агар Олиготро Среда ПД-агар Олиготро Среда разлива фная Чапека фная Чапека мазута, м среда среда 1 150000 26000 10000 6000000 5000 3 26000 26000 3500 2000 12000 5 18000 3000 5000 3000 500 10 26000 7000 500 500 500 15 85000 29000 1000 500 500 Во всех пробах почвы суммарная численность бактерий, учитываемых на перечисленных средах, варьирует от 107 до108 колониеобразующих единиц (КОЕ) на 1 г почвы. Суммарная численность грибной микрофлоры сильно изменяется в зависимости от удаления от места мазутного загрязнения. Так, в почвенных пробах взятых с участков на удалении 1 и 3 метра от разлива мазута, количество микромицетов составляет 1010 и 107 КОЕ/г почвы соответственно, на удалении 10 и 15 метров от загрязнения - 105 КОЕ/г почвы. Возможно, микроскопические грибы используют мазут в качестве источника углерода.

ДЕЙСТВИЕ ЛОВАСТАТИНА НА БИОСИНТЕТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ PENICILLIUM CHRYSOGENUM Баранова Н.А., Крейер В.Г., Осмоловский А.А., Пискункова Н.Ф., Кураков А.В., Егоров Н.С.

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова;

aosmol@mail.ru Ловастатин (мевинолин, монаколин К) – статин, образуемый некоторыми видами микромицетов, в частности, Aspergillus terreus, является конкурентным ингибитором гидроксиметил-глутарил-КоА-редуктазы (ГМГ-КоА-редуктазы), фермента, катализирующего превращение ГМГ-КоА в мевалонат – предшественник таких важных компонентов клеток как стеролы, долихолы, убихиноны. Известно, что в результате действия препаратов статинов на организм человека снижается уровень холестерина в крови, наблюдается положительный эффект при таких заболеваниях как инсульт и болезнь Альцгеймера, активизируется образование плазмина в крови.

Ранее нами было показано, что выращивание продуцента ловастатина A. terreus в среде с последним приводит к качественному и количественному изменению в составе вторичных метаболитов, выделяемых грибом в среду.

Микромицет P. chrysogenum известен как продуцент пенициллина и микотоксина цитринина, а также протеолитических ферментов. Детальное исследование действия ловастатина в форме соответствующей гидроксикислоты в динамике развития микромицета P. chrysogenum на рост, антибиотическую активность и биосинтез протеолитических ферментов показало, что ловастатин в концентрациях 25 мкг/мл, 50 мкг/мл и 100 мкг/мл не влияет на рост гриба, но существенно влияет на его биосинтетическую активность. Исследуемый штамм P. chrysogenum выделяет в среду антибиотики, подавляющие рост бактерий Staphylococcus aureus.

Антибиотическая активность в среде с ловастатином в логарифмической фазе роста P.

chrysogenum ниже, чем в контроле, а в стационарной фазе роста антибиотическая активность в средах с ловастатином сравнима с контролем. В среде с глицерином (7%), глюкозой (3%), соевой мукой (0,5%), мясным экстрактом и ловастатином протеолитическая активность значительно выше, чем в контроле, и максимум протеолитической активности наблюдается в более поздние сроки. Таким образом, показано, что ловастатин влияет на биосинтез внеклеточных ферментов (протеиназ) у низших эукариот – микромицетов. Механизм действия ловастатина на биосинтетическую активность обсуждается.

ИССЛЕДОВАНИЕ ПИГМЕНТОВ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА PAECILOMYCES LILACINUS (THOM) SAMSON Т.А.Белозерская, 1А.С.Егорова, 1Н.Н.Гесслер, 2Н.В.Гроза Учреждение Российской Академии Наук Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Москва Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, Москва;

tab@inbi.ras.ru Природные пигменты играют важную роль в защите грибного организма от стрессов абиогенной и биогенной природы, участвуют в межвидовых и межпопуляционных взаимодействиях. Многие хиноны обладают антибиотическими свойствами. Известны антиоксидантные и радиопротекторные свойства меланинов.

Paecilomyces lilacinus – гриб-убиквист. Показана его устойчивость к действию экстремальных факторов среды. Он способен к существованию в анаэробных условиях.

Этот вид может вызывать оппортунистические инфекции человека и животных. В связи с широким распространением этого вида, исследование его механизмов защиты представляет несомненный интерес. Ранее у P.lilacinus были обнаружены метаболиты, имеющие фармакологическое значение. Однако наиболее характерных для почвенных грибов хинонов и меланинов у данного вида обнаружено не было. Целью работы было исследование пигментов P.lilacinus, возможно обусловливающих его устойчивость к действию стрессорных факторов.

В работе использован штамм P.lilacinus 1941 из почвы зоны отчуждения ЧАЭС (уровень радиоактивного загрязнения 5,9*105 Бк/кг), а так же штаммы из фоновых местообитаний. Нами была проведена этилацетатная экстракция из мицелия. Анализ полученных экстрактов LC-APCI-MS с параллельным UV-детектированием показал устойчивое образование хиноидных соединений с m/z 268, 282 и максимумом поглощения при 227 нм. Присутствие меланиновых пигментов в мицелии разных штаммов P.lilacinus было установлено методом ЭПР-спектроскопии. Грибная масса содержала источник типичного для меланинов синглетного сигнала с шириной 0,5 мТл и g-фактором 2,0052. Для штамма из радиоактивно-загрязнённых местообитаний было характерно повышенное содержание меланинов.

Таким образом, у P. lilacinus было показано наличие пигментов хиноидной природы, а так же впервые обнаружены меланины.

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА STREPTOMYCES AVERMITILIS УКМ АC-2179 – ПРОДУЦЕНТА АВЕРМЕКТИНОВ Белявская Л.А., Козырицкая В.Е., Валагурова Е.В., Муквич Н.С., Иутинская Г.А.

Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного НАН Украины, ул. Заболотного, 154, Киев ГСП, Д03680, Украина E-mail: bilyuvskal@ukr.net, cenoz@serv.imv.kiev.ua В Украине из черноземной почвы выделен и селекционирован штамм Streptomyces avermitilis УКМ Ас – 2179 – продуцент авермектина на основе которого создан новый антипаразитарный препарат аверком. Исследования физиологической активности препарата методами специфического биотестирования показали, что аверком стимулирует всхожесть семян и развитие проростков.

В доступной нам литературе отсутствуют сведения о ростстимулирующих свойствах авермектинсодержащих препаратов.

Полученные нами данные свидетельствуют о способности S. avermitilis УКМ Ас- синтезировать, кроме авермектина, комплекс биологически активных веществ. В биомассе стрептомицета фитогормоны представлены (нг/г сухой биомассы): индолилуксусной кислотой (1105 2095), изопентениладенином (838-2182), зеатином (169-760), зеатин-рибозидом (907-4228) и гибберелловой кислотой (4500-23123).

При культивировании S. avermitilis УКМ Ас-2179 на синтетической среде в его биомассе и культуральной жидкости было выявлено 21 аминокислоту, относительное содержание отдельных незаменимых аминокислот (лизин, треонин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, аргинин) по процентному содержанию превосходило «идеальный белок». Привлекает внимание наличие -аминомаслянной кислоты, играющей важную роль в передаче нервного импульса у вредтелей.

В составе липидов, выделенных из биомассы продуцента, преобладали такие биологически активные фракции как стерины (до 34%) и фосфолипиды (до 22%).В спектре жирных кислот липидов биомассы S. avermitilis УКМ Ас-2179 обнаружено 23 кислоты. Среди жирных кислот преобладали линолевая (до 12%) и олеиновая (до 9%). Обнаружена также полиненасыщенная арахидоновая кислота.

Культура синтезировала также витамины группы В-пиридоксин, тиамин и биотин. Все эти биологически активные вещества обнаружены и в антипаразитарном препарате – аверкоме.

Таким образом, S. avermitilis УКМ Ас-2179 способен синтезировать комплекс биологически активных веществ как антипаразитарного, так и фитостимулирующего действия. Высокая ростстимулирующая активность препарата аверком, созданного на основе этого продуцента, обусловлена присутствием в его составе ауксинов, цитокининов, гиббереллинов, а также аминокислот, витаминов, стеринов, фосфолипидов и ненасыщенных жирных кислот.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРОТЕИНАЗ РАЗЛИЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ В СРЕДСТВАХ ПО УХОДУ ЗА ПОЛОСТЬЮ РТА.

Беляева О.Н., Кривова А.Ю.

ОАО «Косметическое объединение «СВОБОДА», ncdir@svobodako.ru Задачей нашего исследования являлось создание рецептуры зубной пасты (ЗП), обеспечивающей разложение, снятие зубного налета и окрашивания эмали посредством мягкого воздействия, за счет содержания в составе гидролитических ферментативных препаратов. В мировой практике для решения поставленной задачи используют ферменты протеолитического действия, при этом важен выбор целевого энзиматического комплекса и обеспечение его стабильности в суспензионной системе.

К исследованию были взяты препараты различных фирм, полученные из растительного, животного сырья и биотехнологическим путем со следующими протеолитическими способностями (ед/мг.белка): фитопаин – 5,6±0,2;

протепсин – 4,0±0,2;

КФПА-2 / КФПА-3 – 3,8±0,2 / 4,2±0,2 соответственно. За единицу активности принято количество фермента, эквивалентное образованию зоны просветления субстрата в 1 мм при 250 С, рН - 7,0. Оценка динамики процесса разжижения субстрата от концентрации протеиназ осуществлялась по коэффициенту изменения скорости ферментативной реакции Кс на стабильных участках ее проявления. Профиль проявления ферментативной активности имеет три стабильных участка при концентрации протеиназ (%): 0,005-0,02;

0,02-0,07;

0,07-0,10, при этом коэффициент Кс имел значение 50;

7;

0,2 соответственно. Пропорциональное увеличение зон активного гидролиза субстрата в зависимости от концентрации ферментных препаратов осуществлялось при интервале концентраций от 0,005-0,02%. Значимый визуальный эффект при оценке активности протеолитических ферментов в суспензии ЗП получен при концентрации равной 0,02 %. Отбеливающие свойства протеолитических ферментных препаратов оценивались по степени обесцвечивания стандартных растворов танинов при =380нм. Ферментные препараты вносили в модельную рецептуру ЗП в количестве 0,02 % и выдерживали изделие в течение двух месяцев при температуре 42±2 0С. Условия хранения ЗП обоснованы методологией ускоренного старения изделий, используемой для обоснования срока годности изделия. Два месяца хранения показали падение активности для всех протеолитических препаратов в 2,8- раза. Возможно, это связано со степенью пористости диоксида кремния, на котором происходит иммобилизация ферментных препаратов с потерей активности. Т.о.

нашими исследованиями было доказана необходимость поиска стабилизирующей системы для протеолитических ферментов в системах основ ЗП для обеспечения отбеливания и разложения зубного налета на эмали зубов.

ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ МОКРОТЫ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЕГКИХ Беляева Е.В., Ермолина Г.Б., Ильницкая А.С.

ФГУН ННИИЭМ им. академика И.Н. Блохиной Роспотребнадзора;

labnikif@yandex.ru Микробиологическое исследование мокроты 196 больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких выявило высокую частоту встречаемости помимо представителей нормальной микрофлоры ротоглотки - стафилококков, энтеробактерий и неферментирующих грамотрицательных бактерий (НГОБ). У данных культур была исследована биологическая активность, способствующая их персистенции на слизистых оболочках и обеспечению патогенного потенциала. Лизоцимную активность (ЛА), создающую селективные преимущества для патогенов в экологической нише, проявляли 93,8±6,2% штаммов S. aureus и все исследованные культуры P. aeruginosa. Ни один из исследуемых штаммов коагулазоотрицательных стафилококков (КОС) и энтеробактерий не показал наличия ЛА. Протеолитической активностью (ПА) по расщеплению казеина (при рН 8,0) и гемоглобина (при рН 4,0) обладали 81,3±10,1% и 62,5±12,5% штаммов S.aureus, 50,0±15,1% и 91,7±8,3% штаммов КОС, 45,0±11,4% и 30,0±10,5% штаммов энтеробактерий, соответственно. Половина исследованных культур стафилококков (56,3±12,8% S.aureus и 41,7±14,9% КОС) и лишь десятая часть энтеробактерий (10,0±6,9%) были способны к гидролизу обоих субстратов.

Высокую антилизоцимную активность (АЛА) более 2 мкг/мл проявляли 51,2±7,6% энтеробактерий, 44,0±10,1% S.aureus, 70,0±15,3% КОС и 11,1±7,6% НГОБ. Сравнение АЛА и ПА исследованных бактерий позволило выявить, что существует прямая корреляция между уровнями активности щелочных протеаз и АЛА у S.aureus и энтеробактерий и прямая корреляция между уровнем активности кислых протеаз и АЛА у S.aureus. Антилактоферриновую активность (АЛфА), направленную против железосвязывающего белка, обладающего бактерицидным действием, проявляли все исследованные бактерии, но наибольшие значения АЛфА были выявлены у НГОБ, выделенных при хронической обструктивной болезни легких. Сравнение уровней АЛфА и ПА бактерий выявило прямую корреляцию между уровнем АЛфА и активностью щелочных протеаз по гидролизу казеина, что может свидетельствовать о роли микробных протеиназ в инактивации лактоферрина.

Таким образом, наличие внеклеточных протеиназ у бактерий может способствовать их выживанию на слизистых оболочках респираторного тракта больных.

ОСОБЕННОСТИ БИОСИНТЕЗА ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ПРОТЕИНАЗ PROTEUS MIRABILIS Бондырева Н.М., Марданова А.М.

Казанский (Приволжский) Федеральный Университет;

nelyazamalutdinova@rambler.ru Целью настоящей работы было исследование особенностей биосинтеза внеклеточных протеиназ P. mirabilis, роли катаболитной углеродной репрессии в регуляции синтеза этих ферментов.

Известно, что бактерии P. mirabilis способны к инвазии в эукариотические клетки. Неизвестна роль внеклеточных протеиназ P. mirabilis в процессе инвазии.

Некоторые Гр- бактерии при инвазии используют цитоскелет эукариотической клетки, поэтому в качестве субстратов для определения активности использовали актин, выделенный из ацетонового порошка мышц кролика. Активность по отношению к актину определяли электрофоретически. Для определения общей активности использовали также казеин и азоказеин, а также специфические хромогенные субстраты для глутамилэндопептидазы и субтилизиноподобных протеиназ Z-Glu-pNa и Z-Ala-Ala-Leu-pNA соответственно. Исследование динамики роста бактерий Proteus mirabilis на среде LB показало, что культура выходит на стационарную фазу роста на 16 час культивирования. Протеолитическую активность в культуральной жидкости определяли, начиная с 1 и по 72 часы роста бактерий, через каждый час. Уже на 1 час культивирования бактерий в культуральной жидкости появляется протеолитическая активность, расщепляющая казеин, азоказеин и неограниченно расщепляющая в данных условиях актин. Протеолитическая активность достигает своего максимума на 12-14 час культивирования. Специфической протеолитической активности в отношении глутамилэндопептидазы и субтилизиноподобных протеиназ в культуральной жидкости обнаружено не было. Ингибиторный анализ показал, что основная протеолитическая активность в культуральной жидкости определяется металлопротеиназой (90% активности по азоказеину). 10% активности обусловлено сериновой протеиназой. Расщепление актина полностью подавляется 2 мМ о фенантролином и не подавляется 10 мМ PMSF. Показано, что 1,5% глюкозы в среде полностью подавляет актиность по азоказеину и актину, что доказывает участие механизма катаболитной углеродной репрессии в регуляции синтеза внеклеточных протеиназ. Уменьшение количества триптона в среде LB (до 0,2%) не влияет на продуктивность внеклеточных протеиназ.

ЭКЗОПОЛИСАХАРИДЫ БАКТЕРИЙ: ПРОШЛОЕ, НАСТОЯЩЕЕ, БУДУЩЕЕ.

Ботвинко И.В.

РГУ нефти и газа имени И.М.Губкина i.v.botvinko@mail.ru Эволюция представлений о функциях экзополисахаридов (ЭПС) бактерий при моём непосредственном участии происходила следующим образом.

Начало 70х годов прошлого века: «ЭПС – вещества». Внеклеточные полисахариды капсулы (чехла) и слизи считаются вторичными метаболитами бактерий и даже продуктами сточного метаболизма;

выполняют неспецифические защитные функции, связанные с физико-химической природой данных полимеров;

это биологически активные вещества, обладающие иммуномодулирующими, адъювантными и противовоспалительными свойствами.

Начало 80х: «ЭПС – структура клетки». Накопление сведений о беспредельном химическом разнообразии ЭПС, определяющем антигенную специфичность не только отдельных видов и штаммов бактерий, но даже диссоциантов, а также наблюдения за динамикой их развития приводят к пониманию важной роли ЭПС как структуры клеток бактерий.

Середина 80х: «ЭПС – матричная структура популяции». Приходит осознание роли межклеточного матрикса бактерий и ЭПС как его основы (у подавляющего большинства бактерий) в архитектонике колоний, дифференцировке популяций, в процессах обмена сигналами со средой обитания.

Девяностые: «ЭПС – структура гомеостаза популяции». Аналитические исследования ЭПС-матрикса приводят к мнению, что его физическая и химическая целостность необходимы для проявления этого уникального свойства.

Millenium edge и новый век: в биоэстетике «ЭПС – основа гармонии (от др. греч. ' – скрепа, связь, слаженность) популяции и микробиоценоза». ЭПС матрикс объединяет все модификации клеток штамма, согласует их функционирование, способствует цикличности онтогенеза бактерий и их «бессмертию». Матрикс специфических штаммов-продуцентов ЭПС способствует формированию микробиоценозов;

в микробиологии «ЭПС – информационная экологическая структура;

в философии биологии «ЭПС – аналог матричной сетевой структуры, основы горизонтального социума;

в биотехнологии «ЭПС – биотехнологический конструкт, реализующий принцип фрактальности».

ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ, МОДИФИЦИРУЮЩИХ ПЕПТИДОГЛИКАН КЛЕТОЧНЫХ СТЕНОК НА УСТОЙЧИВОСТЬ СТАФИЛОКОККОВ К АКТИНОМИЦИНУ D Булгакова В.Г., Орлова Т.И., Грушина В.А., Полин А.Н.

Биологический факультет МГУ им.М.В.Ломоносова;

e-mail:detectiv-2@mail.ru Один из механизмов устойчивости микроорганизмов к антибиотикам утолщение и уплотнение клеточных стенок в результате активации синтеза пептидогликана, а также изменения в биосинтезе предшественников пептидогликана, снижающие возможность клеточных стенок связывать антибиотик. Некоторые соединения, в том числе экзогенные аминокислоты, влияют на процесс биосинтеза пептидогликанов и, соответственно, на их состав. При этом уровень устойчивости бактерий к антибиотикам может изменяться – у устойчивых вариантов некоторых бактерий резко увеличивается способность связывать антибиотик, что приводит к снижению или полной потере устойчивости.

Полученный нами устойчивый к актиномицину D вариант Staphylococcus aureus характеризуется утолщением клеточной стенки и значительным увеличением содержания пептидогликана в биомассе. Для оценки роли пептидогликана в проявлении устойчивости этим микроорганизмом исследовано воздействие на растущую культуру устойчивого варианта стафилококка различных факторов, могущих влиять на синтез этого стеночного компонента.

Ранее нами было показано, что внесение в среду глицина, который, по данным ряда исследователей, способен замещать С-концевые остатки D-аланина в муропентапептидах пептидогликана, значительно снижает устойчивость стафилококка к актиномицину D и увеличивает связывание клетками антибиотика.

Проведены исследования с D-серином, который также может замещать С концевой остаток D-аланина в предшественниках пептидогликана. На рост исходного чувствительного штамма Staphylococcus aureus и устойчивого к актиномицину варианта D-серин не влияет. При росте устойчивого стафилококка на среде с D серином значительно повышается чувствительность штамма к антибиотику. При выращивании на жидкой среде 50%-ное подавление роста происходит при концентрации актиномицина 60-80 мкг/мл, а в присутствии 0,1-0,2М D-серина рост ингибируется уже при 20 мкг/мл антибиотика. На плотной среде устойчивый вариант способен расти при концентрациях актиномицина 40-50 мкг/мл, на среде же с добавлением 0,1М D-серина - при концентрациях не выше 7,5-15 мкг/мл. Видимо, структурные изменения, вызываемые в пептидогликане и его предшественниках глицином и D-серином, способствуют связыванию антибиотика и его проникновению к мишени действия – ДНК.

D-валин в концентрации 0,2М не влияет на уровень устойчивости варианта к актиномицину. Воздействие на растущую культуру мутанта -аланина также не вызывает снижения устойчивости к антибиотику. Эти аминокислоты, повидимому, или не вызывают изменений в пептидогликане (в его предшественниках), или происходящие изменения не затрагивают процессы связывания актиномицина устойчивыми клетками и его проникновения через клеточную стенку.

Субингибиторные концентрации антибиотика ванкомицина, специфически связывающегося с С-концевыми фрагментами пентапептидной части предшественника пептидогликана и блокирующего субстрат ферментной системы трансгликозилаза транспептидаза, в результате чего прекращается синтез муреина, на устойчивость стафилококка к актиномицину не влияют. Также не изменяет уровень устойчивости к этому антибиотику лизоцим, расщепляющий полисахаридные цепи пептидогликана клеточных стенок.

РАЗРАБОТКА БИОПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ БАКТЕРИОФАГОВ БАКТЕРИИ PSEUDOMONAS PUTIDA ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПСЕВДОМОНОЗА РЫБ.

Викторов Д.А., Васильев Д.А.

Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновской ГСХА;

e-mail: viktorov_da@mail.ru Возбудителями псевдомоноза рыб является целый ряд патогенных штаммов флюоресцирующих бактерий рода Pseudomonas. У рыб чаще встречаются виды:

Pseudomonas putida, Pseudomonas cyprinisepticum, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas aureofaciens, Pseudomonas chlororaphis, Pseudomonas dermoalba, Pseudomonas intestinalis. Такое обилие видов бактерий, способных вызывать псевдомонозы рыб, обуславливает существенные трудности при назначении правильного лечения. В настоящее время диагноз на псевдомонозы ставят на основании результатов бактериологического исследования с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патологоанатомических изменений. Типирование до вида при этом не производится.

Целью наших исследований явилось выделение и отбор наиболее активных культур бактериофагов бактерии Pseudomonas putida для дальнейшей разработки на их основе диагностического биопрепарата.

Выделение фагов бактерии Pseudomonas putida проводили по методикам Ревенко (1978). В качестве индикаторных культур были использованы два референс штамма Pseudomonas putida (№901 VI-89 070514;

АТСС 12633 IV-87), полученных из музея ГИСК им. Л.А. Тарасевича, и один полевой штамм (003). В результате было выделено 14 культур бактериофагов Pseudomonas putida, из которых отобраны наиболее активных штамма, обладающие следующими свойствами:

Штамм Титр по Спектр литической Специфичность (отсутствие бактериофага Грациа активности, % лизиса бактерий других видов) 8· 003F1 79 + 12633F1 6,5·10 84,8 + 9· 12633F6 79 + 12633F10 1,9·10 76 + Таким образом, выделенные фаги полностью удовлетворяют всем требованиям разработки на их основе биопрепарата для диагностики псевдомоноза рыб.

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ РИЗОБИЙ С ЭНДОГЕННЫМИ ФИТОГОРМОНАМИ БОБОВЫХ РАСТЕНИЙ Волобуева О.Г.

Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К.А.Тимирязева;

e-mail: ovolobueva@list.ru В условиях вегетационного и полевого опыта изучалось содержание и соотношение фитогормонов в листьях, стеблях и корнях с клубеньками бобовых растений разных сортов с недетерминированным (горох) и детерминированным (фасоль) типом клубенька в фазу бутонизации-начала цветения, семена которых были обработаны биопрепаратами ризоторфин, альбит и регуляторами роста корневином, эпином. В результате проведенных исследований установлена сортовая реакция бобовых растений на действие биопрепаратов и регуляторов роста. У растений гороха наиболее отзывчивым оказался сорт Мультик: в его листьях, стеблях и корнях с клубеньками значительно возрастало содержание ауксинов при обработке альбитом.


Ризоторфин повышал содержание цитокининов в корнях с клубеньками обоих сортов.

Совместная обработка альбитом и ризоторфином усиливала синтез гиббереллинов в листьях растений гороха обоих сортов и в корнях с клубеньками сорта Норд. Обработка альбитом и ризоторфином приводила к увеличению нитрогеназной активности и продуктивности растений гороха сорта Мультик по сравнению с контролем. У растений фасоли наиболее отзывчивым оказался сорт Гелиада: в её корнях с клубеньками значительно возросло содержание цитокининов, что сопровождалось увеличением нитрогеназной активности и урожайности при обработке альбитом. Экзогенная обработка растений этого сорта корневином и эпином приводила к повышению показателей ростовых процессов, количества и массы клубеньков, активности нитрогеназы, содержания белка в листьях и семенах и урожайности на фоне увеличения ауксинов в вегетативных органах и цитокининов в корнях с клубеньками. У сорта фасоли Шоколадница повышение нитрогеназной активности и продуктивности отмечено при обработке только ризоторфином. При этом эндогенный уровень гормонов в растении под влиянием ризоторфина изменялся следующим образом:

увеличивалось содержание ауксинов в листьях, цитокининов – в листьях, стеблях и корнях с клубеньками, гиббереллинов - в листьях и корнях с клубеньками.

Биологически активные вещества ризобий возможно, вызывали изменения активности собственных гормональных систем растений, а сами ризобии выступают как сигнальные молекулы на экзогенное внесение биопрепаратов и регуляторов роста.

ВНЕКЛЕТОЧНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ МИКРООРГАНИЗМОВ С РЕАКТИВИРУЮЩИМИ И ПРОТЕКТОРНЫМИ СВОЙСТВАМИ Воробьева Л.И., Новикова Т.М., Ходжаев Е.Ю., Мулюкин А.Л.

Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова;

E-mail:nvvorobjeva@mail.ru Стрессовые ответы микроорганизмов вызывают большой интерес, поскольку устойчивость к стрессам создает серьезные проблемы в антимикробной терапии и в биотехнологии. Механизмы адаптации микроорганизмов к стрессам в значительной степени изучены на внутриклеточном уровне, но исследования последних лет показали, что большая часть стрессовых ответов микроорганизмов опосредуется участием внеклеточных факторов.

В наших исследованиях впервые показано, что белковые экзометаболиты бактерий и дрожжей различных систематических групп участвуют не только в протекции, но и в реактивации клеток, подверженных действию стрессорных факторов разной природы.

Реактивация подверженных стрессам клеток, в присутствии этих экзометаболитов особенно эффективна при сильных, летальных стрессах.

Реактивирующий фактор (РФ) был изначально обнаружен и выделен из супернатанта бактерий Luteococcus casei, которые использовались в качестве модельного организма.

Установлено, что устойчивый к стрессам (нагреванию и УФ-облучению) белковый РФ образуется конститутивно клетками в нормальных условиях роста и действует в ничтожных (следовых) количествах в течение нескольких минут, что позволяет рассматривать изучаемое явление как типичный пример нанобиотехнологического исследования. Предполагается мембранный механизм действия РФ как сигнальной молекулы. Пептидные антистрессовые экзометаболиты нами впервые были обнаружены и выделены также из супернатанта галоархей и эукариотных клеток – дрожжей. Предынкубация клеток в присутствии РФ (протекторное действие) с последующим УФ-облучением увеличивает выживаемость представителей грамм-положительных, грамм-отрицательных бактерий и дрожжей различных филогенетических групп, по сравнению с контролем, в 5-20 и 4-6 раз соответственно. Показано перекрестное действие РФ различных штаммов бактерий, бактерий и дрожжей, бактерий и архей и архей и дрожжей, т.е. представители трех разных доменов способны взаимодействовать в стрессовых ситуациях с участием пептидных сигнальных молекул. Низкая видовая специфичность белковых сигнальных факторов не исключает возможность проявления их защитного и реактивирующего действия в отношении клеток млекопитающих, подвергнутых действию стрессоров, что предполагается проверить в дальнейших исследованиях..

МИКРОБНЫЕ СООБЩЕСТВА ПОВЕРХНОСТНЫХ ВОДОТОКОВ И КАРСТОВЫХ ПОЛОСТЕЙ АЛТАЕ-САЯНСКОЙ ГОРНОЙ ОБЛАСТИ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЙ ИСТОЧНИК ПРОДУЦЕНТОВ АНТИБИОТИКОВ Воробьева С.В., Ланкина Е.П., Хижняк С.В.

ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»;

sofi kras@mail.ru Несмотря на широкий спектр существующих антибиотиков, поиск новых продуцентов антибиотических веществ продолжает оставаться актуальным. Исходя из теоретических соображений, продуценты антибиотических веществ могут встречаться в сообществах, характеризующихся высокой степенью конкуренции за субстрат. В качестве подобных сообществ нами рассмотрены карстовые пещеры Средней Сибири, характеризующиеся редким и нерегулярным поступлением органического вещества, олиготрофные поверхностные водотоки Алтае-Саянской горной области.

В качестве тест-культур, для определения антибиотической активности, выделенных из этих сообществ микробных изолятов, использованы метициллин резистентный штамм Staphylococcus aureus (MRSA), как представитель грамположительных патогенных бактерий, и выделенные из патологического материала изоляты Proteus mirabilis и Pseudomonas aeruginosa, как представители грамотрицательных патогенных бактерий.

Из 9 выделенных в пещерах бактериальных изолятов 7 проявили ярко выраженную антибиотическую активность по отношению к MRSA, 4 – по отношению к P. mirabilis и 5 – по отношению к P. aeruginosa. При этом 4 изолята показали высокую активность по отношению ко всем перечисленным патогенам. Из 9 бактериальных изолятов, выделенных в олиготрофных водотоках, 7 проявили высокую антибиотическую активность в отношении MSRA, из них 3 были активны и в отношении P. mirabilis, изолятов, активных в отношении P. aeruginosa, не выявлено.

Среди бактерий, показавших высокую антибиотическую активность в отношении всех перечисленных тест-культур, следует отметить психрофильный штамм ВДР5м (место выделения – пещера "Водораздельная", 97,3% уровень сходства с Pseudochrobactrum saccharolyticum по результатам сиквенса 16S рРНК), психрофильный штамм УозК2 (место выделения – пещера "Женевская", 99,1% сходство с Sporosarcina globispora), штаммы БО4 и ТП3 (место выделения – пещера "Маячная") и штаммы А1, А2 и А3 (место выделения – верховья р. Абакан, Западный Саян).

ЭНДОФИТНЫЕ БАКТЕРИИ ЗЕРНОВЫХ ЗЛАКОВ - ПРОДУЦЕНТЫ ИУК Вотинова Ю.М., Широких А.А.

ГНУ Зональный НИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого Россельхозакадемии;

irgenal@mail.ru Образование веществ фитогормональной природы – одна из отличительных особенностей ризосферных, эпифитных и симбиотических бактерий, необходимых для установления связей с растениями и другими почвенными микроорганизмами (Каменева, Муронец, 1999). Ведущую роль в поддержании устойчивых симбиотических отношений с растениями играет синтез микроорганизмами ауксинов, в частности индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) (Кравченко и др., 1991;

Цавкелова и др., 2005). Способность к биосинтезу ИУК исследовали у природных изолятов эндофитных бактерий, выделенных из растений ярового ячменя Зазерский 85 и озимой ржи Вятка (по 6 культур из каждого источника), выращенных в гнотобиотических условиях.

Определение концентрации ИУК в культуральной жидкости бактерий проводили методом ВЭЖХ (LC-20AD, Shimadzu, Япония) на 2-е, 6-е и 13-е сутки культивирования на капустной среде с 200 мг/л триптофана.

В начале наблюдений наибольшее содержание ИУК было отмечено в культуральной жидкости изолятов, выделенных их корней ячменя (2,4±2,2 мкг/мл). Для изолятов, выделенных из корней озимой ржи (1,4±1,3 мкг/мл) аналогичный показатель был ниже в 1,7 раза. Ещё более низким накоплением ИУК отличались изоляты, полученные из листовых тканей обеих культур (0,99±1,27 мкг/мл). С увеличением продолжительности культивирования до 13 суток накопление ИУК бактериями, выделенными из листьев, возросло в 3 раза по сравнению со 2-ми сутками, тогда как в «корневых» культурах возрастание ИУК составило в среднем 1,2 (ячмень)- 2,3 (озимая рожь) крат. Динамика в накоплении ИУК у двух бактерий из корней ячменя, отнесенных к семейству Enterobacteriaceae, отличалась от других изолятов тем, что максимум в содержании ИУК (до 7,00 мкг/мл) в культуральной жидкости приходился на более ранний срок культивирования – 2-е сутки. Максимальным накоплением ИУК в завершающий период наблюдений (5,66 мкг/мл) отличался штамм Bacillus sp., тоже изолированный из корней ячменя.

Результаты проведенных исследований показали, что биосинтез ИУК у эндофитных бактерий «корневого» происхождения выше и начинается в более ранние сроки, чем у эндофитов «листового» происхождения. Бактерии, изолированные из растений яровой культуры, в сравнении с бактериями из озимой ржи, более активны в отношении синтеза ИУК.

ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА И БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВТОРИЧНЫХ МЕТАБОЛИТОВ АНТАГОНИСТИЧЕСКИ АКТИВНОГО ШТАММА STREPTOMYCES LATERITIUS 19/97 М Гайдашева И.И., Громовых Т.И.

Сибирский государственный технологический университет;

gaidashevaii@mail.ru Тенденция применения антибиотиков в пищевой промышленности и кормах животных способствует увеличению числа резистентных к антибиотикам микроорганизмов. Недопустимо применение антибиотиков (тетрациклина, стрептомицина, пенициллина, и др.), используемых в медицинской практике (СанПиН 2.3.2.1078-01). В связи с этим проводили анализ на наличие этих антибиотиков в культуральной жидкости и биомассе штамма. Исследования проводили в лаборатории Института по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе РАМН. В работе были использованы методы хроматографии (ТСХ и ВЭЖХ), электрофореза на бумаге в различных электролитах, спектральные методы.


Из почвы лесного питомника Красноярского края выделен штамм 19/97М Streptomyces lateritius (ВКПМ Ac 1637). Данный штамм признан перспективным продуцентом биологического препарата для стимулирования роста и защиты растений от возбудителей болезней, вызываемых грибами родов Fusarium и Alternari.

Спектрофотометрические, хроматографические и электрофоретические исследования не выявили наличия в культуральной жидкости и в кислых экстрактах тетрациклина. Для обнаружения в культуральной жидкости хлорамфеникола (левомицетина) проводили экстракцию этилацетатом при рН=8,65. В культуральной жидкости штамма левомицетин отсутствует. Анализ электрофоретическим методом показал, что штамм № 19/97-М антибиотиков аминогликозидной группы, как и стрептомицина не образует. Биологическая активность в основном сосредоточена в «красных» фракциях, незначительное количество окрашенного антибиотика проявляет антагонистические свойства в отношении тест-объектов. Пигментная часть накапливается в основном в мицелии продуцента, и может быть выделена экстракцией при кислых значениях рН. УФ-спектры полученных соединений свидетельствуют, что выделенные антибиотики красного цвета относятся к группам хинонов и антрациклинов. Анализ литературных данных по виду Streptomyces lateritius не обнаружил сходных спектров со спектрами полученных соединений.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ МИКРООРГАНИЗМОВ СО СТАТУСОМ GRAS Ганина В.И., Фильчакова С.А.

ГОУ ВПО Московский государственный университет прикладной биотехнологии E-mail: techmol@inbox.ru На современном этапе развития всего живого на Земле чрезвычайно важное значение приобретают исследования по изучению того, что происходит в окружающем нас мире, а также выявлению и использованию рационального и полезного, что создано самой природой. Изучением механизмов и направлений применения биологического потенциала микроорганизмов, которым присвоен статус GRAS, занимаются достаточно давно, но с интенсивным развитием современной науки и методов исследований открываются новые возможности в этой области деятельности. Именно поэтому в МГУПБ осуществляются работы с молочнокислыми бактериями, бифидобактериями, кефирными грибками, которые применяются в качестве стартовых культур в технологии молочных, мясных и других продуктов. Исследования проводятся в следующих направлениях: выделение, идентификация, изучение биотехнологических и антибиотических свойств, условий культивирования и факторов, влияющих на проявление биологического потенциала каждым штаммом бактерий. Ведутся исследования и в области изучения вирусов, поражающих молочнокислые бактерии, что может приводить к нарушению биотехнологического процесса при производстве кисломолочных продуктов и сыров.

В последние годы в МГУПБ выделены, изучены и депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов новые штаммы Lactococcus ssp., Lactobacillus ssp.,Bifidobacterium ssp., обладающие комплексом технологических, пробиотических и других уникальных свойств. Выделенные штаммы обладают не только антагонистической активностью за счет кислот, образуемых в ходе биохимических реакций, но и продуцирования специфических бактериоцинов, способствующих подавлению развития условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, а также некоторых грибов и дрожжей. Некоторые из изученных штаммов микроорганизмов обладают способностью к синтезу экзополисахаридов, повышенной способностью к синтезу ферментов -галактозидазы, супероксиддисмутазы. Результаты проводимых исследований позволили создать коллекцию микроорганизмов для использования в учебном процессе и биотехнологии.

АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ НОВЫХ АЛКАЛОФИЛЬНЫХ И ГАЛОТОЛЕРАНТНЫХ ГРИБОВ ИЗ ЩЕЛОЧНЫХ ЗАСОЛЕННЫХ ПОЧВ Георгиева М. Л.1, Толстых И. В.1, Биланенко Е. Н.2, Грум-Гржимайло А.А.2, Коновалова О.П.2, Катруха Г. С. 1-ГУ НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе РАМН (Москва) 2-Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова (Москва) i-marina@yandex.ru Проведение поиска организмов, способных синтезировать биологически активные вещества в настоящее время часто связывают с культурами, выделенными из необычных природных ниш — морей, рек, горячих и соленых источников (Berdy, 2005).

Мы исследовали спектр антимикробной активности у алкалофильных и галотолерантных изолятов доминирующих в содовых солончаках видов грибов:

Emericellopsis cf. pallida, Heleococcum alkalinum, Acremonium spp. Таксономическое положение которых определяли как при помощи морфолого-культуральных признаков, так и используя молекулярно-генетические методы. Изоляты грибов были выделены из образцов щелочных засоленных почв Центральной Азии (Кулундинская степь, Кункурская степь, Забайкалье, северо-восточная Монголия) и Африки (Танзания).

Биологическую активность изолятов сравнивали при культивировании их на двух разных средах (рН 10.0 и рН 6.5). Антимикробную активность определяли методом диффузии в агар (метод дисков). В качестве тест-объектов использовали 10 штаммов микроорганизмов (грамположительные (5) и грамотрицательные(2) бактерии, грибы (3)). Биологические испытания проводили с концентрированными экстрактами веществ, выделенных как из мицелия, так и из нативного раствора.

В результате работы было показано, что алкалофильные и галотолерантные изоляты грибов способны продуцировать антибиотические вещества, обладающие как антибактериальной активностью с широким и узким спектром действия, так и антифунгальной активностью. Исследованные изоляты оказались наиболее активными в отношении Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Aspergillus niger и практически неактивными в отношении Candida albicans и Escherichia coli.

АНТИБИОТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ CYT1A-БЕЛКА ИЗ ПАРАСПОРАЛЬНЫХ КРИСТАЛЛОВ BACILLUS THURINGIENSIS SUBSP. ISRAELENSIS НА МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ГРИБЫ.

Го Даньян (КНР), Залунин И.А. 1, Н.Ф. Пискункова, Юдина Т.Г., Нетрусов А.И., Егоров Н.С.

ГОСНИИГенетика;

МГУ им. М.В. Ломоносова, yudinatg@mail.ru Энтомопатогенные бактерии Bacillus thuringiensis образуют параспоральные кристаллы, состоящие из Cry-белков, высокоспецифичных токсинов беспозвоночных, а в некоторых случаях – и из Cyt-белков, синергически усиливающих эффект Cry-белков.

Ранее нами установлено антибиотическое действие этих белков на ряд бактерий и архей. Сделан вывод, что такая антимикробная активность защищает клетки молодых популяций B. thuringiensis, развивающихся из спор в организме погибших под влиянием Cry и Cyt-белков беспозвоночных, от микроорганизмов-конкурентов. В эконишах обитания B. thuringiensis встречаются и микроскопические грибы. Мы установили ранее возможность антибиотического влияния растворов кристаллов B.

thuringiensis, состоящих из Cry-белков, на бактерий и на дрожжи. Известно о различиях в составе клеточных стенок бактерий и грибов, поэтому интересно, способен ли и Cyt1A белок разрушать клеточные стенки и мембраны грибов. Объект нашего исследования - дрожжи Сandida guilliermondi и Saccharomyces pombe, а также мицелиальные микроскопические фитопатогенные грибы Botrytis cinerea.

Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) показала нарушение структуры клеток всех исследованных грибов под влиянием Cyt1A: нарушение структуры клеточных стенок, мембран, разбухание клеток, образование кольцевых мембранных структур, лизис. Подсчёт в СЭМ количества раздувшихся, лизирующихся дрожжевых клеток показал, что они составляют более 2/3 от общего числа клеток. Проверка жизнеспособности С. guilliermondi путём высева их на поверхность агаризованной среды показала, что клетки дрожжей практически полностью теряют свою жизнеспособность под влиянием Cyt1A белка.

Таким образом, впервые показано, что Cyt1A оказывает антибиотическое влияние на микроскопические грибы, картина лизиса их клеток в основных чертах сходна с картиной лизиса клеток бактерий, включающей разрушение клеточных стенок и цитоплазматических мембран.

ПРИРОДА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЦИАНОБАКТЕРИЙ В МЕЖВИДОВЫХ ВЗАИМООТНОШЕНИЯХ Гольдин Е.Б., Гольдина В.Г.

Южный филиал Национального университета биоресурсов и природопользования Украины ”Крымский агротехнологический университет”, e-mail: Evgeny_goldin@mail.ru Материалы мировых исследований последних двух десятилетий свидетельствуют об определенной специфике влияния вторичных метаболитов цианобактерий на различные организмы. По своей природе, составу и механизму действия эти вещества значительно отличаются от известных альготоксинов, поражающих гидробионтов и теплокровных животных во время вспышек размножения или «цветения» воды. По нашему мнению, правильнее рассматривать массовые виды цианобактерий, прежде всего как продуцентов биологически активных (или биоцидных) веществ защитного действия, а не токсинов. Об этом свидетельствуют результаты тестирования ряда соединений, выделенных из альгологически чистых культур и природных популяций Microcystis aeruginosa, на личиночных фазах насекомых (мухи-дрозофилы, американской белой бабочки и колорадского жука) и бактериальных штаммах (Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Escherichia coli и Vibrio paracholerae). Терпеновая фракция и ее компоненты (цитронеллол, нерол, гераниол, линалоол, линалилацетат, -фенилэтиловый спирт, терпинеол, эвгенол) характеризуются высокоизбирательным действием по отношению к различным тест объектам: для некоторых видов насекомых они служат репеллентами и детеррентами (колорадский жук), для других – токсинами (дрозофила, американская белая бабочка), или сочетать детеррентные и токсичные свойства (американская белая бабочка), а для определенных видов (по данным других авторов) – аттрактантами. Также терпены обладают бактериостатическим действием, выраженным в различной степени по отношению к тем или иным видам и штаммам. Липидная фракция характеризуется общим ингибирующим и специфичным действием на насекомых различных видов, которое проявляется в угнетении питании, роста и метаморфоза колорадского жука и в гибели американской белой бабочки. Повышение содержания липидов в культурах цианобактерий приводит к росту бактериостатического эффекта, но результаты тестирования не позволяют однозначно судить о том, что только эта фракция является носителем антибактериальных свойств.

ДЕЙСТВИЕ ОКСИЛИПИНОВ НА РАЗВИТИЕ NEUROSPORA CRASSA Гроза Н.В., 2Филиппович С.Ю., 2Бачурина Г.П., 2Дородникова Е.А., Гесслер Н.Н., 2Белозерская Т.А.

Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, Москва Учреждение Российской Академии Наук Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Москва;

miagkova@mail.ru Показано, что оксигенированные производные жирных кислот (оксилипины) относятся к биологически активным соединениям, которые способны функционировать как сигнальные молекулы в процессах онтогенеза грибов. Они участвуют в регуляции типа размножения у грибов, синтеза вторичных метаболитов, взаимоотношения паразит-хозяин.

В настоящей работе было проведено исследование действия 3 гидроксиэйкозатетраеновой кислоты (3-НЕТЕ, С20) и 18-гидроксиоктадекадиеновой кислоты (18-НОDЕ, С18) на морфологию, рост, половое и бесполое размножение гриба-аскомицета Neurospora crassa. Синтез 3-НЕТЕ и 18-НОDЕ проводили с использованием ацетиленовой стратегии синтеза, ключевым моментом которой является реакция кросс-сочетания терминальных ацетиленовых фрагментов и синтонов пропаргильного типа.

3-НЕТЕ в микромолярных концентрациях ингибировала рост гиф N.crassa и вызывала их агрегацию. Кроме того, применение 3-НЕТЕ приводило к ингибированию светозависимого образования конидий у гриба и стимулированию этого процесса в темноте. В то же время, в присутствии этого соединения происходило значительное стимулирование формирования протоперитециев в темноте (в 3-5 раз). При освещении мицелия синим светом (350-500 нм) эффект 3-НЕТЕ проявлялся слабее.

Действие оксигенированного производного линолевой кислоты (18-НОDЕ) также увеличивало количество протоперитециев. Однако добавление не окисленной линолевой кислоты в тех же концентрациях не сказывалось на образовании предшественников женских половых структур.

Таким образом, оксигенированные производные ненасыщенных жирных кислот влияли на все этапы индивидуального развития гриба N.crassa.

АНТИМИКРОБНЫЕ И АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА НОВОГО ШТАММА ГРИБА LAETIPORUS SULPHUREUS (BULL.FR) BOND.ET.SING Громовых Т.И., Иванова И.Е.

Московский государственный университет прикладной биотехнологии tigromovykh@rambler.ru В настоящее время интерес к базидиальным грибам как к источникам биологически активных компонентов возрастает. Один перспективных видов Laetiporus sulphureus или серно – желтый трутовик. Он содержит в своем составе все незаменимые аминокислоты, каротиноиды, ненасыщенные жирны кислоты, целый ряд витаминов и минеральных веществ. На основании чего представляет научный интерес изучать и отбирать новые штаммы, с наибольшей биологической активностью.

Исследование проводили с новым штаммом гриба Laetiporus sulphureus 1- (ВКПМF-982). Изучение антимикробной активности культуральной жидкости штамма проводили на тест-штаммах условно-патогенных бактерий. Установлено, что продукты метаболизма изученного штамма оказывают антимикробное действие в отношении изученных тест – культур. Так, наиболее чувствительными были Citrobacter freundii, Escherichia сoli, Pseudomonas aeruginosa и Salmonella typhimurium.

Таблица. Антимикробная активность культуральных жидкостей L. sulphureus Культура Laetiporus sulphureus Зона подавления роста, мм Bacillus subtilis 9±1, Citrobacter freundii 17±0, Escherichia coli 2 13±1, Pseudomonas aeruginosa-1 12±1, Pseudomonas aeruginosa 114 10±0, Staphylococcus aureus-2 12±1, Salmonella typhimurium 12±1, Listeria monocytogenes 11±0, Изучение антиоксидантной емкости биомассы мицелия проводили методом определения по отношению к пероксильному радикалу. Результаты исследования показали наличие в данном штамме биологически активных соединений, которые обладают антиоксидатным действием. Общая АОЕ/г биомассы мицелия L. sulphureus составила 37,9869±1,30829, причем в гидрофильной фракции – 32,9499±1,07318, липофильной - 5,0370±0,23511. Таким образом, исследуемый штамм может быть использован для получения биологически активных противомикробных добавок.

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА УГЛЕВОДОРОДНОЙ ПРИРОДЫ ПРЕСНОВОДНЫХ МИКРОВОДОРОСЛЕЙ Гусейнова В.П., Курейшевич А.В.

Институт гидробиологии НАН Украины, ztmc@ukr.net Эндо- и экзометаболиты водорослей углеводородной природы представляют большой теоретический и практический интерес не только как вещества, тесно связанные с биосинтезом каротиноидов и терпенов, но и как соединения, ответственные за образование привкусов и запахов воды. Однако, несмотря на то, что автохтонные углеводороды играют значительную роль в формировании качества воды, в связи с методическими трудностями они изучены недостаточно.

С помощью метода хромато-масс-cпектрометрии нами исследованы углеводородные комплексы пресноводных микроводорослей, находящихся в условиях альгологически чистых культур: Phormidium autumnale f. uncinata (Ag.) Kondrat. (= Phormidium uncinatum Ag.), Chlorella vulgaris Beijer., Desmodesmus armatus (Chod.) Hegew. (= Scenedesmus armatus (Chod.) Chod.). Анализ экстрактов из клеточной массы, смыва с поверхности клеток и культуральной среды показал наличие в них насыщенных, ненасыщенных, алициклических и ароматических углеводородов и их производных. Как известно, ароматические соединения токсичны, многие из них канцерогенны. Высокое содержание ароматических углеводородов (в том числе нафталина, фенантрена, антрацена и их производных) в культуральных средах некоторых видов водорослей (до 64% от общего содержания углеводородов) и существенные различия в их количестве в среде разных видов (более чем в 6 раз) могут свидетельствовать об аллелопатической роли этих соединений в жизнедеятельности представителей альгофлоры.

В экстрактах некоторых водорослей зарегистрированы такие высокоактивные биологические вещества углеводородной природы, как предшественники гормонов и алкалоиды, способные воздействовать на гидробионтов различных трофических уровней.

Идентифицированные вещества углеводородной природы различных видов микроводорослей, которые в результате прижизненных и постлетальных выделений попадают в воду, могут участвовать в формировании пула автохтонных углеводородов водоемов. Многие из них относятся к числу высокотоксичных соединений, ухудшающих качество воды и опасных для водопотребителей.

ПРОПИОНОВОКИСЛЫЕ БАКТЕРИИ КАК ПРОДУЦЕНТЫ АНТИМИКРОБНЫХ ВЕЩЕСТВ Данилова И.В.1, Шамрайчук И.Л. 1, Кураков А.В. 2, Рыжкова Е.П. Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, биологический факультет, кафедра микробиологии, е-mail: iridaniri@gmail.com Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, факультет почвоведения, кафедра биологии почв Бактерии, применяемые в пищевых производствах, целесообразно использовать и для микробиологической защиты разнообразных пищевых продуктов от микробной порчи. Пропионовокислые бактерии (ПКБ), важные биологические факторы сыроделия, способны подавлять ряд патогенных и портящих микроорганизмов.

Основным антимикробным метаболитом ПКБ бактерий является пропионовая кислота.

Считается, что антимикробный эффект слабых органических кислот, в том числе пропионовой кислоты, определяется количеством недиссоциированных молекул в среде и проявляется только при низком значении рН. Однако нами установлено, что пропионаты (соли пропионовой кислоты) способны подавлять развитие бактерий родов Bacillus, Pseudomonas и Escherichia, а также некоторых мицелиальных грибов и дрожжей, т.е. при нейтральном значении рН. Последнее важно для защиты «некислых»

пищевых продуктов (масло, сыры, колбасы и др.). Активность пропионата существенно зависит от среды, на которой растут подавляемые организмы. При этом нами показано, что и в «кислых» условиях, т.е. при рН ниже 5, пропионовая кислота более эффективна для подавления роста мицелиальных грибов и дрожжей, чем уксусная и молочная.

Поэтому мы считаем, что ПКБ более перспективны для защиты пищевых продуктов (как в «кислых», так и в «нейтральных» условиях), чем многие из молочнокислых бактерий.

Другими антимикробными веществами ПКБ являются бактериоцины. Мы показали, что некоторые штаммы ПКБ из нашей коллекции образуют бактериоцин подобные вещества, активные в отношении бацилл.

Нами было установлено, что антимикробный потенциал ПКБ обеспечивают высокую защитную эффективность культур ПКБ для хлебобулочных (белый хлеб) и молочных (йогурт, творог) продуктов.

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ АУТОРЕГУЛЯТОРЫ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ Дерябин Д.Г., Романенко Н.А., Свиридова Т.Г., Умудова Э.И.

Оренбургский государственный университет;

dgderyabin@ yandex.ru Внеклеточные бактериальные ауторегуляторы (АР) – небольшие сигнальные молекулы, осуществляющие процессы внутри- и межвидовой коммуникации. В связи с тем, что АР в значительных количествах синтезируются автохтонной и патогенной микрофлорой человека и животных, их присутствие в биологических жидкостях данных организмов может достигать нано- и микромолярных концентраций. В свою очередь известные механизмы действия АР позволяют предполагать возможность влияния на функциональные характеристики молекул и клеток высших эукариот.

Целью настоящей работы стало исследование эффектов бактериальных ауторегуляторов из групп алкилоксибензолов (АОБ) и гомосеринлактонов (ГСЛ) в отношении молекулярных и клеточных факторов иммунной системы человека.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.