авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

«Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова Российский Фонд Фундаментальных исследований Международный биотехнологический центр МГУ МОО ...»

-- [ Страница 4 ] --

Цель данной работы – анализ комплексного воздействия стабилизаторов и консервантов на активность фермента в образцах препарата «Глюкозооксидаза PFC» в процессе хранения.

Для экспериментальных исследований были подготовлены 38 образцов препарата «Глюкозооксидаза PFC» (с активностью 445-479 ед/мл), содержащих стабилизаторы (ДМСО,) и консерванты (тимеросаль, метилпарабен, пропилпарабен) в различных комбинациях. Хранение образцов осуществляли при + 4 °С.

При изучении влияния данных соединений на активность фермента установлено, что консерванты оказывают ингибирующее действие на глюкозооксидазу. В комбинации консервантов со стабилизаторами (ДМСО – 10 %, глицерин – 1,5 М, NaCl, KCl – 0,1 М, (NH4)2SO4 – 0,4 М, лизоцим – 16 мкМ) в образцах сохраняется 100 % активность.

Анализ стабильности образцов препарата «Глюкозооксидаза PFC», хранящихся в течение 3 мес показал, что максимальный стабилизирующий эффект (97-100 % сохранение активности) оказывают: глицерин, NaCl, KCl, (NH4)2SO4 со всеми вышеуказанными консервантами. После 6 мес хранения глюкозооксидазная активность в исследуемых образцах препарата снижалась на 2-57 %, а 9 мес – на 37-82 %. При этом максимальное сохранение ферментативной активности обеспечивали следующие комбинации консервантов и стабилизаторов: 1,5 М глицерин – 0,04 % пропилпарабен;

0,1 М NaCl – 0,04 % пропилпарабен;

0,1 М KCl – 0,04 % метилпарабен;

0,4 М (NH4)2SO – 0,04 % метилпарабен.

Таким образом, для стабилизации препарата «Глюкозооксидаза PFC» можно использовать глицерин, NaCl, KCl, (NH4)2SO4 в сочетании с метилпарабеном или пропилпарабеном.

РОЛЬ МИКРОБНЫХ РЕГУЛЯТОРОВ В РЕАЛИЗАЦИИ АНТАГОНИСТИЧЕСКИХ ОТНОШЕНИЙ МЕЖДУ БАКТЕРИЯМИ Семенов А.В.

ИКВС УрО РАН, г. Оренбург, e-mail: lever3@yandex.ru Традиционно антагонистическая активность рассматривается, как способность одного вида микроба подавлять развитие или задерживать рост других микроорганизмов (Егоров, 2004). Установлено, что проявление антагонизма у различных бактерий, у симбионтов макроорганизма в особенности, находится под контролем ауторегуляторов:

гомосеринлактонов (Хохлов, 1988, Whitehead et al., 2001), олигопептидов (Черныш, Ермоленко, Суворов, 2008, Kleerebezem et. аl., 1997, Nes, Diep, Holo, 2007), простых карбоновых и аминовых кислот (Вахитов, 2007), а также подвержено влиянию ассоциативных микроорганизмов (Несчисляев, Чистохина, 2004, Семенов, 2009, Yan et al., 2003, Dubuas, Haas, 2007), в том числе чувствительных культур (Семенов и др., 2007, Barefoot et al., 1994, Mearns-Spragg et.al., 1998, Maldonado et al. 2004). Природа гетерогенных регуляторов антагонизма изучена мало. Barefoot S.F. с соавторами показана роль «пептида индукции», а нами установлена роль пептидогликана клеточных стенок индикаторного штамма и других ассоциативных микроорганизмов в проявлении антагонизма активными культурами, которая заключалась в стимуляции продукции антимикробных факторов.

В итоге, регуляторные молекулы являются активными участниками антагонистических отношений, что позволяет рассматривать антагонистическую активность штамма не только как способность одного вида микроба подавлять развитие других микроорганизмов, а как результат межмикробных взаимодействий, эффекторами которых выступают антимикробные вещества и регуляторы их продукции. Предложено использовать микробные стимуляторы бактериального антагонизма в качестве новых противоинфекционных средств, механизм действия которых основан на способности усиливать антимикробную активность определенных представителей нормальной микрофлоры индивидуума и штаммов-пробиотиков (Семенов, 2009, 2010). Возможно использование индукторов антибиотикопродукции в промышленности, для оптимизации биосинтеза целевого продукта (Paquet et al., 1992).

Таким образом, показана активная роль микробных регуляторов в реализации антагонистических отношений меду бактериями и предложены пути их практического применения. Работа выполнена при поддержке РФФИ, проект № 08-04-99085.

МОДЕЛЬНАЯ АССОЦИАЦИЯ УГЛЕВОДОРОДОКИСЛЯЮЩИХ ОРГАНИЗМОВ, ЕЕ АКТИВНОСТЬ И МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ Е.В.Семенова, А.М.Семенов, О.В. Шеляков, А.И. Нетрусов каф. микробиологии МГУ имени М.В.Ломоносова, evsemenova@list.ru Основным поллютантом морских акваторий является нефть и нефтепродукты. В связи с этим проблема разработки экологически безопасных методов очистки приобретает особую актуальность. Наиболее перспективным в этом отношении методом является использование углеводородокисляющих (УВ) микроорганизмов.

Из накопительных культур, полученных при использовании в качестве посевного материала фрагментов таллома фукусовых водорослей Белого моря, были выделены чистые культуры УВ бактерий. Наиболее активные из них были идентифицированы на основании физиолого-биохимических признаков. Два штамма отнесены к роду Pseudomonas, три – к роду Rhodococcus. На 12-е сутки роста чистой культуры каждого из идентифицированных штаммов на среде с 1% (об.) нефти было показано ее использование штаммом Rhodococcus sp.шт.3 на 68%, штаммом Rhodococcus sp. шт. 4 на 72 %, штаммом Rhodococcus sp шт.1 - на 59 %, штаммом Pseudomonas sp.шт.2 – на % и штаммом Pseudomonas sp.шт.5 - на 50 %. Активность модельной ассоциация из 5-ти указанных штаммов не превышала 50 % окисления нефти в течение 12 суток.

В целях создания активного биопрепрата для очистки северных морских акваторий от нефти была предложена ассоциация из описанных выше штаммов и штамма Pseudomonas sp.-51 из коллекции МГУ, который не отличался высокой УВ активностью (до 30% разложения нефти), но обладал ярко выраженной способностью образовывать поверхностно активные вещества (ПАВ). Активность полученной ассоциации проверили в динамике ее роста на среде с 1% нефти в течение 12 суток.

Показано, что максимальный эффект деструкции нефти 6-ти компонентной ассоциацией достигался на 9-е сутки и достигал 80% окисления нефти. Устойчивость компонентного состава ассоциации из 6-ти штаммов проверяли в динамике роста ассоциации на 2-е, 4 е, 6-е, 9-е, и 12-е сутки. Было показано, что количество четко выраженных полос ДНК в геле при ДГГЕ анализе образцов, отбираемых в динамике роста ассоциации, соответствует количеству введенных в ассоциацию штаммов микроорганизмов, что свидетельствует об ее устойчивости в проверенном интервале.

ЛИПИДЫ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ЗИГОМИЦЕТОВ р. PILAIRA И ООМИЦЕТОВ р. PYTHIUM, КАК ИСТОЧНИКИ 3 И 6 ЖИРНЫХ КИСЛОТ Сергеева Я.Э., Галанина Л.А., Конова И.В.

Учреждение Российской академии наук Институт микробиологии им. С.Н.

Виноградского РАН;

yanaes2005@yandex.ru По составу жирных кислот (ЖК) липиды мицелиальных грибов представителей зигомицетов являются аналогами растительных масел, липиды представителей оомицетов содержат ЖК, которые отсутствуют в липидах растений, но являются характерными для жиров рыб. Эссенциальные С18 (линолевая (С18:26) и -линоленовая (С18:36)), эйкозаполиеновые С20 (арахидоновая (С20:46) и эйкозапентаеновая (С20:53)), а также С24 (докозагексаеновая (С24:63)) ЖК обладают различной биологической активностью, в том числе показан и их фармакологический эффект. Следует отметить, что эссенциальные ЖК, в частности полиненасыщенные ЖК (ПНЖК), являются важнейшим компонентом метаболизма клетки различных живых систем. Для микроорганизмов, в частности мицелиальных грибов, показана активная роль ПНЖК в адаптационных процессах при изменении жизненной стратегии организма.

При использовании различных вариантов сред при глубинном культивировании, показано, что мицелиальные грибы и оомицеты могут накапливать в клетках значительное количество ПНЖК и эйкозаполиеновых ЖК (ЭПК). Так представитель зигомицетов р. Pilaira, являясь активным синтетиком -каротина, образует более мг/л С18:26 и более 350 мг/л С18:36. Для представителей оомицетов р. Pythium отмечено высокое содержание как ПНЖК (от 21.5 до 52.4%), так и ЭПК (от 18.5 до 34.8%). Выход С18:26 превысил 600 мг/л, С20:46 и С20:53 составил более 150 мг/л. Показана возможность интенсификации синтеза ПНЖК путём изменения различных физиологических факторов. Например, при изменении концентрации экзогенного азота в среде с 46 мг% до 240 мг%, выход ПНЖК и ЭПК увеличивался в 1.7 и 2.5 раза соответственно.

Активный синтез микроорганизмами эссенциальных ПНЖК и ЭПК, возможность изменения состава и содержания ЖК, путем изменения различных физиологических факторов указывают на перспективность использования низших мицелиальных грибов и оомицетов в качестве продуцентов для биотехнологического получения биологически активных липидных соединений.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОБНОГО МЕТАБОЛИТА ЦИТРИНИНА В УЧЕБНОМ ПРОЦЕССЕ Скоробогатова Р.А, Жебрак И.С.

УО «Гродненский государственный университет им. Янки Купалы»

e-mail: ra@skorobogatov.com Продуцентами цитринина являются микроскопические грибы из родов Рenicillium, Aspergillus, Monaskus. Кроме того на одном из островов Австралии бобовое растение Crotalaria crispata синтезирует и выделяет цитринин на своей поверхности.

Цитринин действует на грамположительные и кислотоустойчивые бактерии, обладает также множественным биологическим действием на растения как фитотоксин с гербицидным эффектом. Нами изучено действие цитринина более чем на десять культурных и 24 сорных растений. Слабо чувствительны к нему бобовые и злаковые растения, но сильно подавляются растения из семейства капустные и сорные растения, такие как горчица полевая, гулявник высокий, щирица запрокинутая, аистник цикутный.

Цитринин проявляет фунгицидное действие на ряд фитопатогенных грибов Sclrotinium, Pytium, Botrytis, Phytophtora, Mucor, Rhizopus (Baratova, Betina, Nemec,1969) и обладает противовирусным эффектом, так как заметно подавляет размножение вируса табачной мозаики (Yasuda Yasushi, Masaoka Kataoka, 1971).

Для получения цитринина продуцент Penicillim citrinum Thom выращивается на среде Ролен-Тома с микроэлементами следующего состава: сахароза – 40 г;

глюкоза – г;

С4Н6О6(NH4)2 – 7 г;

KH2PO4 – 2,2 г;

K2SO4 – 0,6 г;

MgSO4·7H2O – 0,2 г;

дистиллированная вода – 1 л;

смесь микроэлементов (1мл на 1 л среды) MgSO4 – 8 мг;

CuSO4 – 40 мг;

ZnSO4 – 880 мг;

Co(NO3)2 – 10 мг;

FeSO4 – 100 мг;

NH4MoO4 – 30 мг;

H3BO3 – 6 мг;

CaCl – 100 мг;

дистиллированная вода – 100 мл.

После инокуляции среды споровой суспензией проводится инкубация её при 27о С в течение 10-14 дней. Затем культуральная жидкость подкисляется 20% HCl до pH 3.

Полученный осадок центрифугируют, высушивают и растворяют в 96% этаноле, подогретом до 40-50о С. Образующийся при этом осадок выбрасывается, а раствор ставят в холодильник для кристаллизации. Полученный кристаллический препарат используется в практикуме для изучения грибо-растительных отношений, фитотоксических свойств цитринина методом замочки семян растений, для изучения его антибактериальных и других свойств этого препарата. Возможно использование цитринина на практикуме по биотехнологии для демонстрации синтеза антибиотика.

НАКОПЛЕНИЕ ДИГОМО--ЛИНОЛЕНОВОЙ КИСЛОТЫ КЛЕТКАМИ МУТАНТА ЗЕЛЕНОЙ МИКРОВОДОРОСЛИ PARIETOCHLORIS INCISA (CHLOROPHYTA, TREBOUXIOPHYCEAE), ДЕФИЦИТНОГО ПО 5-ДЕСАТУРАЗЕ А.Е. Соловченко, О.Б. Чивкунова Биологический факультет МГУ имени М.В. Ломоносова;

wundy@mail.ru I. Khozin-Goldberg, Z. Cohen, S. Boussiba Microalgal Biotechnology Laboratory, The Jacob Blaustein Institutes for Desert Research, Ben-Gurion University of the Negev, Israel О.В. Соловченко РГМУ им Н.И. Пирогова Дигомо--линоленовая кислота (ДГЛК, C20:3 6) — фармакологически важное соединение, обладающее противовоспалительным действием, а также перспективное для терапии атопической экземы, псориаза, бронхиальной астмы и артрита. Исследовали накопление ДГЛК в клетках мутанта биотехнологически важной микроводоросли Parietochloris incisa comb. nov (Chlorophyta, Trebouxiophyceae), дефицитного по гену 5 десатуразы и накапливающего в цитоплазматических липидных включениях ДГЛК вместо арахидоновой кислоты (C20:4 6), характерной для дикого типа P. incisa.

Показано, что по сравнению с диким типом, продуктивность мутанта P. incisa по синтезу полиненасыщенных длинноцепочечных жирных кислот (ПНЖК) достигает максимума при более низкой (на 30%) освещенности. Максимальный выход биомассы мутанта P. incisa, обогащенной ДГЛК, достигается при культивировании водоросли на полной среде BG-11 при освещенности 270 мкЕ · м–2 · с–1 ФАР. Изменения спектров поглощения клеточных суспензий, сопровождающие накопление ПНЖК в клетках, характеризуются высокой корреляцией с содержанием как суммы ПНЖК, так и ДГЛК. Соотношение оптических плотностей культуры в синей и красной областях видимой части спектра может быть использовано для недеструктивной оценки содержания ценных ПНЖК в лабораторных и промышленных культурах мутанта микроводоросли P. incisa., который является перспективным продуцентом этого биологически активного вещества, Исследования выполнены при финансовой поддержке РФФИ (грант № 09-04-00419) ПОЛУЧЕНИЕ КОНЦЕНТРИРОВАННОГО ПРЕПАРАТА ИНУЛИНАЗЫ PENICILLIUM ACULEATUM Стойко В.И., Айзенберг В.Л., Курченко И.Н., Капичон А.П.

Институт микробиологии и вирусологии НАН Украины, Киев, Украина e-mail: v_stoiko@mail.ru Фермент инулиназа (2,1--D-фруктозанфруктаногидролаза, КФ 3.2.1.7) относится к классу гидролаз, что катализирует реакцию гидролиза инулина до фруктозы и незначительного количества глюкозы. Актуальность наших исследований обусловлена возможностью использования инулиназы в пищевой и микробиологической промышленности. В случае применения фермента для расщепления инулинсодержащего сырья в одностадийном процессе получают конечный продукт – 95% фруктозный сироп.

Другой путь использования инулиназы, и на наш взгляд более перспективный, это предварительная обработка инулинсодержащего сырья, в частности его сбраживание для получения этанола. В последнем случае нет необходимости использовать высокоочищенный ферментный препарат. Именно поэтому целью нашей работы стало получение и изучение некоторых свойств технического ферментного препарата инулиназы с P. aculeatum 225.

Для получения технического ферментного препарата использовали ультрафильтрацию, которая позволила нам получить концентрат культуральной жидкости и очистить инулиназу от низкомолекулярных примесей. Ультрафильтрацию проводили на установке непроточной типа Amicon (Millipore, США) при рабочем давлении 200 кПа. В работе использовали целлюлозные и полисульфоновые мембраны с отсекающей способностью по молекулярной массе (cut off) 10, 30 и 50 кДа.

Оптимальным вариантом оказалась полисульфоновая мембрана (cut off 30 кДа), что характеризовалась высокой средней производительностью и селективностью. В результате чего удалось достичь концентрирования в 3,5-4 раза. Показатель инулиназной активности препарата из концентрата был на уровне 72,2 ед/мл, степень очистки 2,2. Потери активности фермента при ультрафильтрации составили 12%.

Определены оптимальные условия действия ферментного препарата: рН 5 и температура 65 °С. Выделенная термостабильная инулиназа имеет значительные перспективы применения в биотехнологической промышленности.

СЕЛЕКЦИЯ БАКТЕРИОЦИН-ПРОДУЦИРУЮЩИХ ЛАКТОКОККОВ, ПЕРСПЕКТИВНЫХ ДЛЯ СОЗДАНИЯ БИОКОНСЕРВАНТОВ Стоянова Л.Г, Устюгова Е.А., Егоров Н.С., А.И.Нетрусов Биологический факультет Московского государственного университета им.М.В.Ломоносова E-mail: stoyanovamsu@mail.ru Молочнокислые бактерии используют в течение столетий при ферментации пищевых продуктов, благодаря их способности предотвращать рост патогенных микроорганизмов за счет синтеза антимикробных веществ, в частности, бактериоцинов.

Наиболее известен бактериоцин низин, продуцируемый Lactococcus lactis ssp. lactis и широко используемый в пищевой промышленности в качестве биоконсерванта (код Е234). Но низин эффективен только против грамположительных бактерий, к тому же активность его резко снижается при нейтральных значениях рН и под действием ферментов пищевого сырья. В настоящее время учёные многих лабораторий мира пытаются получить новые природные бактериоциногенные комплексы для использования в качестве биоконсервантов.

Проведен скрининг бактериоцин-образующих штаммов лактококков из молока, молочных продуктов и кисломолочных напитков лечебно-профилактического назначения. В результате селекции с помощью метода клеточной инженерии (слияния протопластов) и индуцированного мутагенеза получен ряд активных штаммов.

Наиболее перспективные были изучены и идентифицированы до вида как L. lactis subsp. lactis. Сравнительное изучение бактериоцинов, образуемых перспективными штаммами разного происхождения, показало, что некоторые бактериоцины не отличались от низина, другие, например, синтезируемый природным штаммом 194, выделенным из свежего коровьего молока Бурятии, и гибридными штаммами, полученными слиянием протопластов, обладали широким спектром антимикробного действия: эффективно подавляли рост не только грамположительных бактерий, но и грамотрицательных, а также микроскопических грибов Aspergillus, Candida, Fusarium, которые и являются основной причиной микробиальной порчи пищевого сырья при хранении. Фунгицидная активность является малоизвестным биологическим свойством бактериоцинов, синтезируемых L. lactis subsp. lactis.

Полученные результаты исследований позволяют предположить, что синтезируемые новыми штаммами L. lactis subsp. lactis метаболиты, обладающие бактерицидным и фунгицидным действием, являются новыми уникальными антибиотическими комплексами, ранее не описанными в литературе и не зарегистрированными в банке данных биологически активных веществ (BNPD), и могут быть рекомендованы в качестве эффективных биоконсервантов.

АНТАГОНИСТИЧЕСКАЯ И АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТИ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ КУРУНГИ Стоянова Л.Г1, Максимова О.В. 1, Брюханов А. В1., Пахомов Ю.Д. 2, Блинкова Л.П. -Биологический факультет Московского государственного университета им.М.В.Ломоносова E-mail: stoyanovamsu@mail.ru -НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Москва В последние годы увеличивается интерес исследователей, врачей к так называемым продуктам функционального питания, к которым относится лечебно профилактический напиток курунга, являющийся продуктом смешанного молочнокислого и спиртового брожения. Из курунги Бурятии были выделены и идентифицированы 2 штамма молочнокислых бактерий как: мезофильный лактококк Lactococcus lactis ssp. lactis К – 205 и лактобацилла Lactobacillus diolivorans KL-2.

Новые штаммы обладали широким спектром антибактериального действия: подавляли грамположительных и грамотрицательных бактерий, включая патогенные формы. Кроме того они проявляли фунгицидное действие, ингибируя рост Aspergillus spp, Penicillum spp, что является малоизвестным свойством для молочнокислых бактерий. Штамм L.

diolivorans KL-2 был более эффективен против дрожжей Candida guilliermondii. При совместном культивировании штаммов антибиотическая активность на бактерии и дрожжи увеличилась и составила на: Bacillus coagulans 1600МЕ/мл, E. coli 5,0х10-5 г/мл, A. repens 538 МЕ/мл и C. guilliermondii 584МЕ/мл.

Жизнеспособность микроорганизмов, попадающих в организм человека вместе с пищей, зависит от происходящих в нем биохимических процессов и, в том числе, антиокислительных. Интенсификация последних может быть вызвана как усилением образования активных форм кислорода и низкомолекулярных эндогенных прооксидантов (Н2О2, ROOH, HOCl, ONOOH), так и снижением эффективности действия биологических систем утилизации и детоксикации продуктов неполного восстановления, включающих ферменты антиокислительной защиты, в частности, супероксиддисмутазу (СОД). Изучение антиоксидантной активности у выделенных культур, опредяляемое по удельной активности СОД, показало, что у L. lactis ssp. lactis К–205 активность была достаточно высокой и составила 25,74 ед/мг белка, у L.

diolivorans KL-2 СОД была обнаружена в следовых количествах.

Сочетание высокого уровня антагонистической и антиоксидазной активностей является важнейшим фактором при создании пробиотиков и лекарственных препаратов.

ВЛИЯНИЕ ШТАММОВ BACILLUS SUBTILIS 7, 9 И 20 ДЛИТЕЛЬНОГО ХРАНЕНИЯ В ВИДЕ СУХОГО ПОРОШКА НА АНТАГОНИСТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПО ОТНОШЕНИЮ К МИКРОМИЦЕТАМ Сумская М.А., Безлер Н.В.

ГНУ ВНИИСС Россельхозакадемии, Е- mail:vniss@mail.ru Разработка биологических средств защиты растений – одна из основных проблем биологизации производства сахарной свеклы и получения экологически чистой продукции.

Особо перспективны в качестве потенциального биологического агента спорообразующие бактерии рода Bacillus, в частности Bacillus subtilis. Антагонистическое действие бактерий по отношению к патогенным микроорганизмам связывают с выработкой вторичных метаболитов (таких как антибиотики, литические ферменты). В ходе исследований, нами было установлено сохранение эффективности сухой препаративной формы штаммов Bacillus subtilis №№7,9,20 по отношению к возбудителям корнееда сахарной свеклы после длительного хранения в лабораторных условиях. По одной из модификаций мы вырезали блок с культурой антагониста (в данном случае один из штаммов 7, 9, 20) и ставили его в центр чашки Петри на слой питательного агара (среда Чапека). Тест – микробы (Fusarium Solani, Fusarium oxysporum, Fusarium semitectum, Fusarium gibbosum) подсевали по парам в виде прямого штриха по радиусам к блоку испытываемой культуры. Максимальное действие выделяющегося в среду антибиотика проявлялось на том микромицете, развитие которого начиналось на большем расстоянии от блока.

Высокую антагонистическую активность по отношению к Fusarium semitectum проявил штамм Bacillus subtilis 7, зона лизиса максимальной была 7 и 8 мм. По отношению к Fusarium gibbosum штамм Bacillus subtilis 7 был менее активен. Зона отчуждения варьировала от 2 до мм. Штамм Bacillus subtilis 9 сохранил высокую антагонистическую активность по отношению к микромицетам. Так для Fusarium semitectum максимальной зона сдерживания роста была мм, для Fusarium gibbosum зона сдерживания роста была 5-7 мм. Штамм Bacillus subtilis активно сдерживал рост микромицетов Fusarium semitectum. Максимальная зона действия выделяемого антибиотика составила 9 мм. По отношению к микромицету Fusarium gibbosum максимальной зона сдерживания роста была 7 мм. Все три штамма Bacillus subtilis проявили высокую антагонистическую активность по отношению к микромицету Fusarium oxysporum.

Зона лизиса варьировала от 7 до 15 мм. Наименьшему влиянию со стороны штаммов Bacillus subtilis 7,9,20 был подвержен микромицет Fusarium Solani. Зона сдерживания роста микромицета в среднем составляла не более 2-3 мм.

ГИДРОЛИЗ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ SACCHAROMYCES CEREVISIAE Тихонова О.В., Ибрагимова С.И., Синицын А.П., Цурикова Н.В., Зоров И.Н., Ефременкова О.В.

Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им.

Г.Ф. Гаузе РАМН;

ovefr@narod.ru Институт Биохимии им. А.Н. Баха РАН В последние три десятилетия в мире проводятся разработки технологий получения пищевых и кормовых белков из биомассы дрожжей. Пищевые изоляты белка, получаемые по этим технологиям, отличаются высокой биологической ценностью, однако производства по получению пищевого белка из дрожжей не получили широкого распространения вследствие проблем, связанных с удалением клеточной стенки (КС) и высвобождения содержимого протоплазмы.

Нами было установлено, что при глубинном культивировании пищевые базидиомицеты Lentinus edodes и Pleurotus ostreatus образуют ферменты, гидролизирующие клеточную стенку пекарных дрожжей (S. cerevisiae). Проведенный белковый электрофорез культуральных жидкостей показал, что они секретируют многокомпонентные белковые комплексы, которые, по-видимому, обеспечивают гидролиз клеточной стенки S. cerevisiae. Это действие специфично, поскольку гидролиз КС Candida famata проходит на низком уровне. Максимальный выход белка из S.

cerevisiae составлял 86,94% и 84,29% от максимально возможного, получаемого при гидролизе NaOH (100%). Сравнение с гидролизом КС сахаромицетов под воздействием промышленных гидролитических препаратов а также фильтратов культуральной жидкости микромицетов – известных продуцентов богатых гидролитических ферментативных комплексов Aspergillus japonicum, A. awamori и A. oryzae, показал преимущество применения ферментных систем базидиомицетов.

РОСТСТИМУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ НА РАСТЕНИЯ СОИ Тодираш В.Т., Присакарь С.И., Онофраш Л.Ф., Мельник М.В.* Институт Микробиологии и Биотехнологии АН РМ, Кишинэу;

Институт Зоологии АН РМ*, Кишинэу;

e-mai: prisacarisvetlana@rambler.ru Среди технических культур в Молдове соя занимает одно из ведущих мест. После аграрной реформы площади под этой культурой с каждым годом увеличивались и к настоящему времени достигли 50 тыс. га.

С целью увеличения продуктивности растений сои начат поиск по выявлению и селекции ризосферных бактерий-стимуляторов. Из ризосферы различных сортов сои (Аура, Букурия, Зодиак, Индра, Енигма), произрастающих в различных агроклиматических условиях страны, выделено около 300 культур, принадлежащих к родам: Pseudomonas, Azotobacter, Arthrobacter и др. Для опытов использовали суспензии метаболитов выделенных бактерий в разведениях: 1:100, 1:300, 1:500 и 1:1000. В зависимости от степени разведения культуральной жидкости бактерии проявляли различный стимулирующий эффект. В основном более активными были бактерии в концентрации метаболитов 1:300 – 1:1000. При этом в лабораторных опытах (в чашках Петри) всхожесть семян сои возрастала по сравнению с контролем на 5-11,6%, накопление сырой и сухой биомассы – на 5,1-10,9% и 10,2-17,3% соответственно. В вегетационных опытах всхожесть семян была на 6,6-13,3% выше чем в контроле, вес сырой массы – на 5,8-26,8%, сухой – на 3,7-11,4%.

Бактерии оказали влияние и на корнеобразование у черенков фасоли. Под воздействием метаболитов количество сформировавшихся корешков увеличивалось по сравнению с контролем от 35,5 до 69,1%, зона их заложения возрастала на 14,8-30,4%, сырой вес корешков – на 17,8-48,8%.

В процессе исследований выявлены бактерии (Pseudomonas sp. sp.1RRa, 1RRr, RRT10, RD6, Azotobacter chroococcum RRAS7), обладающие антагонистической активностью по отношению к фитопатогенному грибу Verticillium dahliae Kleb.

Совместно с сотрудниками Института Зоологии АНМ выявлены три псевдомонады, подавляющие развитие трех видов нематод, развивающихся в зоне ризосферы лука и чеснока.

ВЛИЯНИЕ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДОВ БАКТЕРИЙ PAENIBACILLUS POLYMYXA НА ВСХОЖЕСТЬ СЕМЯН И ФОРМИРОВАНИЕ ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ Трегубова К.В., Егоренкова И.В., Лихоронина А.В.

Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов, Россия, e-mail: room406@ibppm.sgu.ru Азотфиксирующие бактерии Paenibacillus polymyxa, образующие ассоциации с широким кругом растений и стимулирующие их рост и развитие, известны как продуценты ряда биологически активных веществ: фитогормонов, антибиотиков, ферментов, экзополисахаридов (ЭПС). Ранее нами была обнаружена активность препаратов ЭПС ряда штаммов P. polymyxa в индукции различных деформаций корневых волосков проростков пшеницы, являющихся одним из наиболее ранних откликов растения на присутствие в среде бактерий. Цель работы состояла в изучении влияния внеклеточных полисахаридов P. polymyxa на всхожесть и формирование проростков мягкой яровой пшеницы Triticum aestivum сорта Саратовская 29.

Стерилизованные семена обрабатывали 0,002 % водными растворами ЭПС и инкубировали в чашках Петри при температуре 25 °С в течение 7 суток. В процессе прорастания семян и роста проростков на 1, 3, 5 и 7-й день определяли всхожесть, измеряли длину корней и надземной части пшеницы. Использовали препараты ЭПС P.

polymyxa 1465 (как наиболее перспективные среди исследованных нами), полученные при выращивании бактерий на средах с глюкозой (ЭПСГЛ) и сахарозой (ЭПССАХ). ЭПС1465 – нерегулярные, гетерогенные по молекулярной массе (Мм) (7104–2106 Да) и заряду полисахариды, в состав которых входят Man, Glc, Gal, уроновые кислоты и аминосахариды, соотношение которых зависело от среды культивирования. Установлено также значительное доминирование в ЭПСГЛ высокомолекулярных кислых фракций, что коррелировало с более высокой вязкостью водных растворов ЭПС.

Расчет основных морфометрических параметров прорастающих семян проводили в соответствии с рекомендациями ГОСТ 12038-84. Показано, что исследованные экзогликаны в различной мере оказывали стимулирующее влияние на всхожесть и скорость прорастания семян, а также на размеры и суммарную массу корней (основного и др. корней) и надземной части пшеницы. Наибольший эффект ЭПС1465 наблюдался в отношении корневой системы проростков. Отмеченные нами некоторые различия в активности гликополимеров ЭПСГЛ и ЭПССАХ могут объясняться отличиями по Мм, составу и структуре данных полисахаридов.

ФАКТОРЫ, РЕГУЛИРУЮЩИЕ БИОСИНТЕЗ ЭРГОСТЕРИНА У ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CARLSBERGENSIS CNMN-Y- Усатый А., Молодой Е., Киселица О., Киселица Н., Ефремова Н.

Институт Микробиологии и Биотехнологии А.Н. Молдовы г. Кишинёв, Молдова ул. Академическая, e-mail: usatyi.agafia@gmail.com Из литературных данных известно, что содержание эргостерина у дрожжей меняется в зависимости от штамма и условий выращивания культуры. Целью данной работы стало определение влияния некоторых физико-химических факторов на биосинтез эргостерина у дрожжей. Объектом исследования являлась культура Saccharomyces carlsbergensis CNMN-Y-15, запатентованная как активный продуцент эргостерина. Различные источники углерода, некоторые соединения металлов в виде солей и координационных соединений, миллиметровые волны низкой интенсивности были использованы в качестве регуляторов биосинтетической активности исследуемого штамма дрожжей.

В результате проведенных исследований была продемонстрирована возможность направленного синтеза эргостерина у дрожжей при введении в питательную среду мелассы, глюкозы, некоторых соединений цинка и марганца в виде солей или комплексных соединений в качестве индукторов или предшественников стеринов. На основе методов математического планирования экспериментов были оптимизированы две питательные среды: MN-3, содержащая координационные соединения цинка [Zn(L ala)2], ацетат цинка и мелассу, которая позволяет увеличить продуктивность дрожжей, а также среда MN-S, в состав которой входит глюкоза и ацетат марганца, способствующая увеличению содержания эргостерина в несколько раз.

Впервые выявлен характер влияния миллиметровых волн низкой интенсивности на физиологические свойства дрожжей. Доказано, что миллиметровые волны вызывают изменения на уровне популяции и биосинтетической активности дрожжей.

Биологический эффект воздействия зависит от продолжительности облучения и фазы формирования культуры.

Установлено, что накопление эргостерина в клетках дрожжей зависит от таких факторов, как популяционный возраст культуры, температуры культивирования, режима аэрации, рН среды. Таким образом, были оптимизированы условия культивирования Saccharomyces carlsbergensis CNMN-Y-15 и разработаны эффективные способы направленного синтеза эргостерина в биомассе.

СПЕЦИФИКА СОДЕРЖАНИЯ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ В ПЛАНКТОННЫХ СИНЕЗЕЛЕНЫХ ВОДОРОСЛЕЙ Усенко О.М., Сакевич А.И.

Институт гидробиологии НАН Украины, e-mail: hydrobiol @ kw.ua Эфирные масла растений – метаболиты вторичного происхождения, к которым относятся летучие соединения, обычно имеющие определенный запах. Наиболее они изучены в наземных растений и применяются в парфюмерной, косметической, фармакологической и пищевой промышленности. Среди водорослей эфироносители встречаются реже, поэтому и изучены меньше. Целью наших исследований было изучение количественного и качественного состава эфирных масел синезеленых водорослей – возбудителей «цветения» воды. Объектами служили природные популяции Microcystis aeruginosa Ktz emend Elenk. и Aphanizomenon flos-aquae (L.) Ralfs. В результате наших исследований было установлено, что выделенные эфирные масла из биомассы синезеленой водоросли M. aeruginosa имели светло-коричневую окраску, а Aph. flos-aquae – коричнево-розовый оттенок с меньшей вязкостью. При этом эфирные масла из свежесобранных колоний M. aeruginosa характеризовались менее резким запахом, чем те которые были выделены из водоростей в начале автолиза. Ухудшение запахов усиливалось в процессе брожения и загнивания биомассы водорослей.

Газохроматографический анализ эфирных масел показал, что в их состав входит компонентов: ундекан, цитронераль, линалоол, изовальрьяновый альдегид, цитронелилформиат, геранилацетат, цитронерол и цитронелилацетат, нерол, гераниол, нонадекан. Присутствие в этом комплексе изовалерьянового альдегида существенно действует на формирование запаха, что может влиять на перспективность их использования в парфюмерной промышленности. Нами было установлено, что в биомассе природных популяций синезеленых водорослей содержится 0,1–0,3% эфирных масел, в составе которых выявлены: терпеновые спирты, эфиры, а также углеводороды, альдегиды и органические кислоты. Эфирные масла, которые содержатся в биомассе синезеленых водорослей могут прижизненно и посмертно выделяться в водную среду.

При этом терпеновые соединения появляются в воде в большом количестве там, где водоросли находятся в состоянии интенсивного функционирования. Количество эфирных масел, которые накапливаются в природных водах, коррелирует с количественным и качественным составом фитопланктона.

ВЫДЕЛЕНИЕ СОМАТОСТАТИН-ПОДОБНОГО ПЕПТИДА BACILLUS SUBTILIS Ушакова Н.А.

Учреждение Российской академии наук Институт проблем экологии и эволюции им.А.Н.Северцова РАН;

naushakova@gmail.com В экстрактах клеток и культуральной жидкости различных штаммов B. subtilis показано присутствие соматостатин-подобных пептидов. Растворы пептидов были получены из клеток и сухого продукта твердофазного сбраживания свекловичного жома B. subtilis В-8130 путем экстракции 0,2N HCl / 75% этанола. Концентрацию соматостатин-подобного пептида определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием готового набора реагентов для определения соматостатина и/или его аналогов в различных биологических жидкостях (EIA S-11179, Peninsula laboratories, LLC).

Обработку результатов осуществляли с помощью пакета программ SoftmaxPro 4.1. (http://www.moleculardevices.com/pages/softmax.html).

В экстракте дезинтегрированных клеток B. subtilis В-8130 присутствовал соматостатин-подобный пептид в количестве 0.060 нг/г сырой биомассы;

0.032 нг/г пептида обнаружено в лиофильно высушенных не разрушенных клетках бациллы. В продукте сбраживания свекловичного жома количество пептида составило 0.185 нг/г.

Результаты свидетельствуют, что штамм B. subtilis В-8130 способен внутриклеточно синтезировать иммуноактивный пептид и выделять его в окружающую среду, в том числе, в сбраживаемый субстрат на примере свекловичного жома.

Высказано предположение, что соматостатин-подобный пептид является фактором межклеточной коммуникации. Известно, что грамположительные бактерии осуществляют коммуникации, используя олигопептидные сигнальные молекулы. В литературе отмечается, что некоторые синтетические аналоги гормона соматостатина выступают опосредованными антагонистами по отношению к этому гормону, поскольку вызывают аутоиммунную нейтрализацию эндогенного соматостатина, в результате чего снижается его ингибирующее действие на гормон роста, инсулин и гастрин, и появляется ростостимулирующий эффект. Аналогичное влияние оказывают препараты, полученные с использованием B. subtilis В-8130, на животный организм. То есть, транзиторный микроорганизм B. subtilis выделяет специфические экзопептиды, которые, поступая с пищей, в качестве негормональных микробных регуляторных метаболитов, влияют на иммунную и опосредованно – на гормональную системы животного.

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРЕПТОГРАМИНОВОГО АНТИБИОТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА № 70, ВЫСОКОАКТИВНОГО ПРОТИВ МЕТИЦИЛЛИН РЕЗИСТЕНТНОГО Staphylococcus aureus (MRSA) Федорова Г.Б.1, Треножникова Л.П.2, Балгимбаева А.С.2, Катруха Г.С. 1.

Учреждение РАМН НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф.Гаузе РАМН, Москва, Россия, e-mail: gs-katrukha@mail.ru ДГП «Институт микробиологии и вирусологии» РГП «Центр биологических исследований» Комитета Науки Министерства Образования и Науки Республики Казахстан, г. Алматы, Казахстан, e-mail: Barahtian@yandex.ru В последние годы в клиниках мира получили широкое распространение формы патогенных микроорганизмов (MRSA, VRE, MRCNS, DRSP и др.) устойчивые к известным лекарственным препаратам. Поэтому в настоящее время поиск новых лекарственных препаратов против резистентных форм микроорганизмов является насущной необходимостью. С этой целью в Институте микробиологии и вирусологии (г. Алматы, Республика Казахстан) проведен микробиологический скрининг продуцентов, активных в отношении MRSA. В ходе скрининга из образца ила о.

Кызылколь выделен штамм-продуцент Streptomyces sp. ИМВ 70, который в процессе разработанных условий ферментации образует антибиотический комплекс А-70, выделенный нами из культуральной жидкости методами экстракции органическими растворителями. Установлено, что антибиотик № 70 проявляет антибактериальную активность в отношении широкого спектра тест-организмов и вирулентных культур Listeria monocytogenes, Erysipelothrix rhusiopathiae и др. Наиболее выражена активность в отношении стафилококков, стрептококков, энтерококков и микрококков. Была установлена высокая активность антибиотика № 70 в отношении клинических штаммов MRSA и MRCNS с множественной ассоциированной устойчивостью к основным группам антибиотиков – беталактамам, макролидам, аминогликозидам, фторхинолонам.

Антибиотик накапливается, в основном, в нативном растворе и в меньшей степени в мицелии продуцента и может быть выделен экстракционным методом. В зависимости от условий биосинтеза было получено два высокоактивных антибиотических комплекса – А-70 (260 нм) и А-70 (300 нм), различающиеся по компонентному составу. Методами хроматографии оба комплекса были разделены на компоненты, основные из которых получены в хроматографически чистом виде методом препаративной ВЭЖХ. Изучение физико-химических свойств (УФ- и масс-спектры, ТСХ, ВЭЖХ, электрофорез на бумаге и др.) антибиотиков комплекса позволило отнести их группе антибиотиков-пептолидов гетеропептидолактонов. Антибиотики этой группы –этамицин, пристинамицин, гризеовиридин и др. обладают высокой антибактериальной активностью и синергидным действием. Комплекс полусинтетических антибиотиков этой группы – «Synercid», в состав которого входят антибиотики Quinupristin и Dalfopristin, активен в отношении ряда устойчивых к ванкомицину болезнетворных бактерий и применяется в медицинской практике.

Прямое сравнение основного компонента 70-А и образца этамицина А методами ТСХ, ВЭЖХ, УФ- и масс-спектрометрии показало их идентичность. Компоненты 70-С и 70-D не имеют аналогов в базе данных BNPD и, можно полагать, являются ранее неописанными антибиотиками. Дальнейшее углубленное исследование антибиотиков 70-С и 70-D будет продолжено.

Таким образом, антибиотик № 70 является потенциально важным для медицины препаратом.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ БАКТЕРИОЛИТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ КАТИОННЫХ ПЕПТИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ Филатова Л.Б., Лемкина Л.М., Полюдова Т.В., Кононова Л.И., Коробов В.П.

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН;

filatoval@iegm.ru Механизмы выраженного антибактериального действия низкомолекулярных катионных белков и пептидов до сих пор изучены недостаточно.

Целью работы явилось проведение сравнительного анализа литического действия на бактерии Staphylococcus epidermidis 33 различных катионных пептидных соединений – ферментов лизостафина и лизоцима, обладающих пептидогликан гидролазной активностью, и лишенного какой-либо ферментативной активности низкомолекулярного(3кДа) пептида варнерина.

Бактерии выращивали на среде LB до плотности 0,8 (OD600), осаждали (6000 g, мин), дважды отмывали в том же режиме от среды и суспендировали в буферном растворе - 0,01 М Tris HCl, рН 7,2 до исходной плотности. Бактериолизис инициировали внесением в суспензии клеток препаратов лизостафина (2 мкг/мл) и лизоцима ( мкг/мл), нативных и кипяченых в течение 30 мин, и варнерина (100 мкМ). Пробы инкубировали при 37°С на планшетном шейкере Benchmark Plus (BioRad) в режиме встряхивания (20 с) через 10-минутные интервалы детекции оптической плотности бактериальных суспензий в течение 4 ч.

Результаты исследований показали, что через 1 ч инкубации бактерий с лизостафином, лизоцимом и пептидом происходило снижение OD600 их суспензий на 80, 71 и 72 %, соответственно. Литические свойства выявлялись и у денатурированных кипячением ферментов, составляя 67 и 59% от активности нативных препаратов лизостафина и лизоцима, соответственно. Через 4 ч инкубации литический эффект ферментов и варнерина приводил, практически, к просветлению бактериальных суспензий. Однако, действие нативных ферментов лишь в 1,2-1,3 раза превышало эффект их денатурированных форм.

Анализ полученных результатов позволяет рассматривать катионную природу молекул исследованных соединений в качестве самостоятельного фактора бактериолитического действия, возможно, за счет конкурентного вытеснения аутолизинов бактерий из мест их связывания в клеточных стенках.

Работа поддержана грантами РФФИ № 10-04-96086-р_урал_а, Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология», УрО РАН-офи-10-14-12 НАБ.

ЗАВИСИМОСТЬ ДИНАМИКИ РОСТА БАКТЕРИЙ ESHERICHIA COLI ОТ ВРЕМЕНИ СОВМЕСТНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ С БИФИДОБАКТЕРИЯМИ.

Харченко Н.В., Чердынцева Т.А., Нетрусов А.И..

Кафедра микробиологии Московского государственного университета им. М.В.

Ломоносова, Москва 119992;

taniacherd@yandex.ru Проводилось изучение влияния бактерий рода Bifidobacterium на динамику роста лабораторного штамма Esherichia coli. Бифидобактерии были выделены из кала взрослых людей. Совместное культивирование E.coli с Bifidobacterium sp. осуществляли в течение 2 и 5 часов при температуре 37С. Контролем служила суспензия клеток E.coli и Bifidobacterium sp. без предварительного культивирования. Совместную культуру разводили в 4 раза мясопептонным бульоном, отбирали пробы через равные промежутки времени, измеряли оптическую плотность на ФЭКе при длине волны 590 нм.

При предварительной совместной инкубации клеток Bifidobacterium sp.16 и E.coli в течение 2 часов и дальнейшем культивировании их, на кривых роста лаг-фаза равна часу, а в течение 5 часов – 1,5 часам. При культивировании тех же клеток без предварительной инкубации лаг-фазы не наблюдается.

При предварительной совместной инкубации клеток Bifidobacterium sp.55 и E.coli в течение 2 часов и дальнейшем культивировании их, на кривых роста лаг-фаза равна часу, а в течение 5 часов – 1,2 часам. При культивировании тех же клеток без предварительной инкубации лаг-фазы не наблюдается.

При предварительной совместной инкубации клеток Bifidobacterium sp.58 и E.coli в течение 2 часов и дальнейшем культивировании их, на кривых роста лаг-фаза практически отсутствует, а в течение 5 часов лаг-фаза равна 1,4 часа. При культивировании тех же клеток без предварительной инкубации лаг-фазы не наблюдается.

На примере трех штаммов Bifidobacterium sp. 16, 55, 58 показано, что чем длительнее воздействие культуры Bifidobacterium sp. на E.coli, тем позднее кишечные палочки восстанавливают свою жизнедеятельность при последующем культивировании на мясопептонном бульоне.

ВЛИЯНИЕ БИОГЕННЫХ НАНОЧАСТИЦ ГИДРОКСИДА ЖЕЛЕЗА НА ФИТОТОКСИЧНОСТЬ НЕФТЕПРОДУКТОВ В ПОЧВЕ Хижняк С.В., Мучкина Е.Я., Трухницкая С.М.

Красноярский государственный аграрный университет;

skhizhnyak@yandex.ru Ферригидрит и другие гидроксиды и оксиды железа в почве способны адсорбировать ионы токсичных тяжелых металлов и гербициды, в связи с чем происходит изменение их токсичности [1]. Настоящая работа посвящена оценке влияния наночастиц гидроксида железа микробного происхождения на фитотоксичность нефтепродуктов в почве. Объектом исследования служили наночастицы гидроксида железа, полученные в смешанной культуре бактерий Pseudomonas moorei, Delftia tsuruhatensis, Pseudomonas argentinensis и Bacillus mucilaginosus в лаборатории экологической биотехнологии Красноярского научного центра СО РАН под руководством д.ф.-м.н. Ю.Л. Гуревича. В качестве тест-объекта использовали кресс салат (Lepidium sativum), в качестве нефтепродуктов – отработанное компрессорное масло, являющееся отходом предприятий машиностроения. Работа выполнена при поддержке РФФИ (грант 10-08-01278).

Установлено, что внесение биогенных наночастиц в дозе 0,032 г/кг в загрязнённую нефтепродуктами (25 г/кг) почву статистически значимо снижает её токсичность для тест-культуры. Так, если в варианте с компрессорным маслом энергия прорастания была на 18% ниже, чем в контроле (p0,05), то в варианте "компрессорное масло + биогенные наночастицы" энергия прорастания не отличалась от контрольного варианта. Статистически значимый антитоксический эффект внесённых в почву биогенных наночастиц сохранялся в течение всего эксперимента (7 суток). Аналогичный эффект отмечен при внесении изучаемых наночастиц в почву, загрязнённую мазутом. В то же время сами наночастицы в изучаемой дозе не оказали влияния на тест-культуру.

Можно предположить, что эффект обусловлен сорбцией или каталитическим окислением нефтепродуктов на поверхности частиц, либо стимуляцией углеводородокисляющей почвенной микробиоты.

1. Hao Chen, Xiaomin He, Xingmin Rong, Wenli Chen, Peng Cai, Wei Liang, Shengqing Li and Qiaoyun Huang Adsorption and biodegradation of carbaryl on montmorillonite, kaolinite and goethite // Applied Clay Science, 2009, Vol. 46, Issue 1, P. 102 108.

ТРАНСФОРМАЦИЯ ОРГАНИЧЕСКОЙ ФОРМЫ СЕЛЕНА В КУЛЬТУРЕ БАЗИДИОМИЦЕТА LENTINULA EDODES Цивилева О.М.1, Лощинина Е.А.1, Бурашникова М.М.2, Панкратов А.Н.2, Казаринов И.А.2, Древко Б.И.3, Никитина В.Е. Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов, е-mail: tsivileva@ibppm.sgu.ru Саратовский государственный университет, Институт химии, е -mail: PankratovAN@info.sgu.ru, KazarinovIA@info.sgu.ru Саратовский государственный аграрный университет, е-mail: drevkobi@mail.ru Признано использование мицелия грибов как источника биологически активных веществ (БАВ), в том числе эссенциального микроэлемента селена, органические формы которого менее токсины по сравнению с неорганическими солями. В этой связи при выращивании обогащенного селеном мицелия важна информация о содержании разных форм селена среди БАВ гриба. Процесс восстановления Na2SeO3 культурой базидиомицета Lentinula edodes (шиитаке), в 2010 г. описанный J. Turlo c соавт. [1], протекает с появлением красной окраски - предположительно элементного Se. Влияние селенорганического препарата диацетофенонилселенида (ДАФС-25) - малотоксичного и внедренного в практику соединения - на мицелий высших грибов описано только в работах [2, 3]. В настоящем исследовании эффекта ДАФС-25 на L. edodes наблюдали, что при начальных концентрациях препарата в синтетической жидкой среде не ниже 10 -10-4 моль/л развивается красная пигментация мицелия, интенсивность и период возникновения которой зависят от концентрации ДАФС-25. Исследование БАВ, синтезируемым грибом при его культивировании в присутствии как ДАФС-25, так и неорганических форм селена (Na2SeO3 и Na2SeO4), проводили методом рентгеновской флуоресценции. Информация о содержании селена в образцах мицелия позволила судить о способности глубинной культуры шиитаке к сорбции и/или деструкции ксенобиотика селенорганической природы. Предстоит количественная характеристика системы метаболитов - селенсодержащих БАВ гриба, культивируемого c ДАФС-25.

1. Turo J, Gutkowska B., Herold F. // Food Chem. Toxicol. 2010. V. 48, is. 4. P. 1085-1091.

2. Tsivileva O.M., Nikitina V.E., Pankratov A.N., Drevko B.I., Loshchinina E.A., Garibova L.V. // Biotechnology in Russia. 2005. № 2. P. 70-79.

3. Poluboyarinov P.A., Vikhreva V.A., Leshchenko P.P., Aripovskii A.V., Likhachev A.N. // Moscow University Biological Sciences Bulletin. 2009. V. 64, № 4. Р. 164–168.

ОБРАЗОВАНИЕ ХИТИНОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ЭНТОМОПАТОГЕННЫМИ ГРИБАМИ Циркунова Ж.В., Михайлова Р.В., Лобанок А.Г., Войтко Д.В.1, Прищепа Л.И. ГНУ «Институт микробиологии НАН Беларуси», Минск, Беларусь;

1РУП «Институт защиты растений», e-mail: tsyrkunova@list.ru Хитин и хитозан являются природными биополимерами и их биосинтез, получение, модификация и деградация связаны с ферментными превращениями.

Деполимеризацию хитина и хитозана осуществляют: хитиназы (КФ 3.2.1.14) и N-ацетил -глюкозоаминидазы (КФ 3.2.1.52) и хитозаназы (КФ 3.2.1.132). В литературе представлены данные о гидролизе данных соединений неспецифическими ферментами, а именно: глюканазами, целлюлазами, протеазами, липазами. Синтез хитинолитических ферментов характерен для сапрофитных, паразитных, а также энтомопатогенных грибов.

Цель настоящей работы – изучение способности энтомопатогенных грибов синтезировать специфические и неспецифические ферменты гидролизующие хитин и хитозан.

В работе использовали 17 штаммов энтомопатогенных грибов, принадлежащих родам Lecanicillium, Beauveria, Paecilomyces. Грибы выращивали в течение 5 сут на питательной среде содержащей 0,5% хитина, затем анализировали способность грибов продуцировать внеклеточные хитиназы, хитозаназы, протеазы, амилазы, -глюканазы и целлюлазы. В результате проведенных исследований было установлено, что все протестированные культуры в условиях опыта синтезируют хитиназы, хитозаназы, ксиланазы и протеазы. Максимальный уровень образования хитиназ и протеаз отмечен у Lecanicillium lecanii № 2, хитозаназ – Beauveria bassiana №1 и № 2, а ксиланаз – Paecilomyces fumosoroseus. Показано, что все грибы родов Lecanicillium и Beauveria синтезируют внеклеточную -глюканазу, в то время как у 30% представителей рода Paecilomyces данный фермент не обнаружен. Максимальный уровень синтеза глюканазы отмечен у Lecanicillium lecanii № 2, Paecilomyces fumosoroseus П97 и Paecilomyces fumosoroseus 1/3. Амилолитические и целлюлолитические ферменты в условиях опыта либо не синтезируются грибами, либо образуются в следовых количествах.. По уровню продукции всех проверенных ферментов следует отметить Lecanicillium lecanii № 2.


СИНТЕЗ БЕТА-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ВАРИАНТАМИ ARTHROBACTER SPECIES Черная А.Н., Костеневич А.А., Лобанок А.Г., Сапунова Л.И.

Институт микробиологии НАН Беларуси, leonida@mbio.bas-net.by -Галактозидаза (-галактозид-галактогидролаза, КФ 3.2.1.23) используется в производстве продуктов и кормов с пониженным содержанием лактозы, олигосахаридов – селективных стимуляторов роста полезной кишечной микрофлоры человека и млекопитающих, а также глюкозо-галактозных сиропов из молочной и подсырной сыворотки.

Ранее нами в результате адаптационной селекции на средах с высоким содержанием лактозы были изолированы два морфологических варианта Arthrobacter species – потенциального продуцента бета-галактозидазы внеклеточной локализации.

Цель настоящего исследования – оценка ферментативной активности выявленных вариантов, растущих глубинно в средах с различным содержанием лактозы.

Установлено, что морфологический вариант желто-коричневого цвета плохо рос как в средах оптимального для исходного штамма Arthrobacter sp. состава с 1,5% лактозы, так и в средах с высоким ее содержанием (10%) и в обоих случаях был отрицательным по признаку продукции внеклеточной бета-галактозидазы. В аналогичных условиях роста вариант молочно-белого цвета отличался от исходного штамма повышенным в 1,5-1,6 раза уровнем накопления биомассы и существенно меньшей (в 58 и 33 раза в среде соответственно с 1,5 и 10,0% лактозы) бета галактозидазной активностью.

Методом тонкослойной хроматографии выявлено, что по завершении роста исходного штамма в среде с 1,5% лактозы в его культуральной жидкости (КЖ) обнаруживается только галактоза – продукт ферментативного гидролиза лактозы, в среде с 10,0% лактозы – лактоза и галактоза. Среди сахаридов, присутствующих в КЖ желто-коричневого варианта, идентифицируются лактоза и следы галактозы, независимо от исходной концентрации лактозы в среде культивирования. Не выявлено свободных углеводов в КЖ молочно-белого варианта, выросшего в среде с 1,5% лактозы, тогда как в случае его роста в среде с 10,0% в КЖ обнаруживаются лактоза и сахариды большей, чем лактоза, молекулярной массы.

Исследования частично финансировались Белорусским республиканским фондом фундаментальных исследований, проект № Б10М-160.

ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ МЕДИ И НИКЕЛЯ НА БИОСИНТЕЗ ВНЕКЛЕТОЧНОГО ГИДРОЛИТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА МИКРОМИЦЕТА ASPERGILLUS NIGER CNMN FD Чилочи A.А., Тюрина Ж.П., Клапко С.Ф., Лаблюк С.В., Стратан М.В., Дворнина Е.Г.

Институт микробиологии и биотехнологии АН Молдовы, Кишинёв, Молдова, e-mail: alexandra.ciloci @gmail.com Микромицет Aspergillus niger CNMN FD 10 отобран, как перспективный продуцент гидролитического ферментного комплекса целлюлазного (-глюкозидазы и эндоглюканазы) и ксиланазного действия.

В целях повышения биосинтетических способностей продуцента проведены исследования по использованию комплексных соединений микроэлементов, которые по своей структуре близки к биологическим макромолекулам (гемоглобин, хлорофилл и др.), менее токсичны и более эффективны, чем неорганические соединения. Данное направление исследования является новым в микробиологии. Анализ немногочисленных опубликованных материалов по изучению влияния координационных комплексов металлов на синтез биологически активных веществ микроорганизмами показывает перспективность их применения в качестве биостимуляторов и регуляторов ферментообразования [1, 2].

Из числа изученных, для микромицета Asp. niger отобраны два комплексных соединения меди и никеля (CuL1 и NiL1 – где L1 – метилизотиосемикарбазон ацетилацетона), использование которых в оптимально подобранной концентрации – мг/л обеспечивает повышение уровня накопления всех компонентов ферментного комплекса:

-глюкозидаз – на 23%;

эндоглюканаз – на 27,7-28,4%, ксиланаз – на 31,2 35,9%, а также ускорение проявления максимума биосинтеза этих ферментов на 24 часа по сравнению с контролем. Установлено, зависимость биологического еффекта от состава металлокомплекса (природа иона металла – комплексообразователя, биолиганда) и от применяемой концентрации.

Полученные результаты дают основание рассматривать данные соединения как потенциальные стимуляторы повышения биосинтеза целлюлолитисеских ферментов.

Литература:

1. Filippova I. G., Gherco O. A., Simonov Y. A., Deseatnic-Ciloci A. A., Clapco S. F., Tiurina J. P., Baca S. G. “Synthesis, structures and biological properties of nickel(II) phthalates with imidazole and its derivatives” Polyhedron. 2010, V. 29(3), p. 1102–1108.

2. Вербанец Л.Д., Рзаева О.Н., Авдиюк Е.В. и др. Влияние координационных соединений германия на активность ряда гликозидаз, Микробиол. журн., 2007, Т. 69, №3.

ОЦЕНКА СОХРАНЕНИЯ ЖЗНЕСПОСОБНОСТИ ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРИ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЙ КОНСЕРВАЦИИ Чукпарова А.У.

РГП «Государственная вневедомственная экспертиза проектов» АДС ЖКХ, г.

Астана;

Е-mail: chukparova72@mail.ru В настоящее время разработаны достаточно эффективные методы долгосрочного хранения большого количества микроорганизмов, обеспечивающие у них сохранение жизнеспособности, генетической и фенотипической стабильности. В большинстве коллекций микроорганизмов в последние годы используют методы лиофилизации, низкотемпературного замораживания и криоконсервации. Метод лиофилизации заключается в высушивании культур под вакуумом при низких температурах (-20o, -40oC). Лиофилизированные культуры могут храниться в течение длительного времени, если их хранить без доступа кислорода, влаги и света при пониженных температурах.

Известны способы длительного хранения микроорганизмов при низких температурах от -20 до -130oC. Многие микроорганизмы могут храниться в холодильниках при температуре ниже -60oC с сохранением высокого титра клеток.

Нами для эксперимента были взяты 2 штамма микроорганизмов с исходным титром клеток Bacillus thuringiensis А1 (1,67109±0,149), Bacillus polymyxa ДН (5,8109±8,79).

Данные штаммы нами были прокультивированы в течение от 1 до 4 суток на скошенной среде СПА при температуре 28 0С до спороношения. Затем культуры в стерильных условиях смывали консервантом, состоящим из СПБ, глицерина и поливинилпиролидона в пробирки Эпендорф объемом 1 мл. Подготовленные таким способом культуры клеток микрорганизмов хранили в пробирках при низкой температуре в -70 oC. Контроль изменения титра клеток хранящихся при низкой температуре микроорганизмов проводили через 0,5 и 1 мес., через 1,5 года. В результае было выявлено, что через 0,5 и 1 месяц титр клеток составил Bacillus thuringiensis А (1,25109±0,13), (1,84109±0,17).

Bacillus polymyxa ДН Через 1,5 года после незначительного снижения титра клеток изучаемых штаммов микроорганизмов в первый месяц хранения, титр клеток практически не изменился и составил Bacillus thuringiensis А1 (1,4109±0,13), Bacillus polymyxa ДН (1,9109±0,16). Таким образом, титр жизнеспособных клеток изучаемых штаммов при хранении в условиях низкой температуры стабильно сохранялся в течение года. Низкотемпературная консервация используется в последние годы во все возрастающих масштабах в связи с наличием и доступностью низкотемпературных холодильников, способных надежно поддерживать низкие температуры в течение длительного времени.

ПРИМЕНЕНИЕ КОНСОРЦИУМА УГЛЕВОДОРОДОКИСЛЯЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ОЧИСТКЕ НЕФТЕЗАГРЯЗНЕННЫХ ПОЧВ Чукпарова А.У.

РГП «Государственная вневедомственная экспертиза проектов» АДС ЖКХ, г.

Астана Е-mail: chukparova72@mail.ru Ни один другой загрязнитель, как бы опасен он ни был, не может сравниться с нефтью и нефтепродуктами по масштабам распространения, количеству источников загрязнения и степени нагрузок на все компоненты природной среды, так как нефть и нефтепродукты не локализуются на месте разлива, а проникают вглубь почв и водоемов, растекаются по поверхности, испаряются в атмосферу, нарушая баланс в существующих экосистемах. Применение углеводородокисляющих микроорганизмов в очистке загрязненных почв в настоящее время признано одним из экологически безопасных и экономически выгодных способов очистки нефтезагрязненных почв. Нами для очистки сильнозагрязненной почвы на месторождении Жанаталап Атырауской области применен консорциум микроорганизмов Micrococcus varians PR 69, Micrococcus roseus УД 6-4, Bacillus polymyxa Дн, Bacillus firmus S20, Bacillus subtilis PR28. До внесения консорциума на опытном участке были проведены агротехнические мероприятия и внесены минеральные и органические удобрения. Исходное содержание нефти в почве составило 47700 мг/кг. Химический анализ содержания нефти в почве проведенный через 3 месяца после внесения консорциума углеводородокисляющих микроорганизмов показал снижение содержания нефти до 14310 мг/кг. Также микробиологический анализа почвы до внесения консорциума микроорганизмов показал отсутствие мицелиальных грибов и подавление численности актиномицетов, низкую численность УОМ. Через 3 месяца после внесения консорциума микробиологический анализ показал увеличение численности УОМ на один порядок, увеличение численности актиномицетов в 5 раз, восстановление численности мицелиальных грибов по сравнению с исходным показателем. Внесение в почву консорциума привело к увеличению каталазной активности в 1,9 раз, активности уреазы и дегидрогеназы в 2,5 и 29,8 раз соответственно по сравнению с исходным показателем. Таким образом внесение консорциума микроорганизмов позволило укорить процесс деструкции нефти в почве и снизить содержание нефти в 3 раза, восстановить численность мицелиальных грибов и актиномицетов, нормализовать ферментативную активность почвы.


ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИМУТАГЕННЫХ И АНТИКАНЦЕРОГЕННЫХ СВОЙСТВ У СУХОГО КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА «КУРУНГОВИТЫ КУТУШОВА»

Шаблин П.А., д.м.н.1, Симаков Ю.Г., д.б.н., проф.2, Бабасанова О.Б., к.б.н. НПО «ЭМ-ЦЕНТР»;

Московский государственный университет технологий и управления им. К.Г.

Разумовского.

E-mail: shabli_59@mail.ru Целью данного исследования являлось выявление наличия антимутагенных и антиканцерогенных свойств у продукта функционального питания «Курунговиты Кутушова» (на основе бурятского национального напитка курунга, усиленного растительными компонентами) проведено с использованием аквариумной рыбки Brachydanio rerio путем проведения микроядерного теста. За последние годы лабораторные аквариумные рыбы Brachydanio rerio получили всеобщее признание у цитогенетиков [1,2] в виду их дешевизны и присутствия множества генов сходных с генами человека и других млекопитающих, среди которых ген-супрессор р53, ответственный за элиминацию из организма переродившихся раковых клеток [3].

В результате испытаний выявлено, что бихромат калия, используемый в качестве генотоксичного вещества, обладающий одновременно мутагенными и канцерогенными свойствами, в концентрации 0,5 мг/л приводит к возрастанию частоты встречаемости микроядер в эритроцитах более чем в 5 раз (5,85%) по сравнению с контролем (1,13 %).

Окраска ДНК в пораженных ядрах и микроядрах - красная, что говорит об изменении структуры ДНК. Тогда как у рыб, получавших с кормом «Курунговиты Кутушова», микроядра в эритроцитах встречаются только с частотой 2,32%. При этом окраска ДНК в ядрах и микроядрах зеленая, что указывает на защитное действие курунговитов от генотоксиканта по отношению к ДНК а, следовательно, и к антираковому гену р53. B растворах бихромата калия (1,0 мг/л) все рыбы, получавшие «Курунговиты Кутушова»

выжили.

Таким образом, продукт функционального питания «Курунговиты Кутушова»

обладает антимутагенными и антиканцерогенными свойствами, выявляемыми по частоте образованию микроядер в эритроцитах рыб и по цитохимии ДНК.

Исследования проведены в МГУТУ им. К.Г. Разумовского, факультет «Биотехнологии и рыбного хозяйства», кафедра «Биоэкологии и ихтиологии».

Литература 1.Traver D, Winterer A, et all., Effects of lethal irradiation in zebrafish and rescue by hematopoietic cell transplantation// Blood 1. 2004. 04, pp. 1298–1305.

2.Niethammer Ph., Clemens A et all. A tissue-scale gradient of hydrogen peroxide mediates rapid wound detection in zebrafish// Cell Death Differ. 2009 1: 431-442.

3.Oren M. Decision making by p53://Life, death and cancer. №3 -2003.

ТРОМБОЛИТИЧЕСКИЕ И НЕКОТОРЫЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА ЛОНГОЛИТИНА Шаркова Т.С., Оккельман И.А., Серебрякова Т.Н., Подорольская Л В.

Московский государственный университет им.М.В.Ломоносова;

Sharkova06@mail.ru Лонголитин представляет смесь протеаз, секретируемых сапрофитным низшим грибом Аrthrobotrys longa, из культуральной жидкости которого препарат выделен и частично очищен. Лонголитин нетоксичен, имеет широкий диапазон активностей, среди которых важнейшая - специфичность к компонентам тромба, что стимулирует поиск и исследование его как возможного тромболитического средства. Действительно, тромболитический эффект лонголитина обнаружен и подробно описан нами как в отношении крупных венозных тромбов у крыс в яремной вене после внутривенного введения, так и в опытах на поверхностной краевой вене уха кролика при смазывании препаратом тромбированного сегмента сосуда. В опытах in vivo препарат проявляет типичные для тромболитика свойства: локальность действия, высокую специфичность по отношению к тромбу, наибольшее влияние в отношении свежих тромбов и др.

Однако, есть эффекты, которые отличают его от известных тромболитических препаратов (сезонные влияния на тромболизис, отсутствие зависимости от концентрации препарата, редко наблюдаемый феномен сохранения активности после перорального введения и др.), объяснить которые возможно при более подробном исследовании его физико-химических свойств..

Изучение свойств лонголитина при гелефильтрации на сорбентах Sephacryle S 200, Sephadex G-100, на ионообменниках ДЕАЕ-целлюлоза и СМ-целлюлоза в том числе в режиме ВЭЖХ показало, что препарат не гомогенен. Он содержит различные белки, в том числе гликопротеины, все вместе образующие довольно прочный гидрофобный комплекс. Состав белков нестабильный, меняется в зависимости от условий культивирования и сезонных влияний. Так, препарат весеннего культивирования более лабильный, содержит меньше гликопротеинов, чем зимний комплекс.Основная протеаза препарата имеет молекулярный вес 35 кДа с минорным компонентом 49 кДа. Прочие молекулярные веса - результат методических модификаций.

Полученные данные о неоднородности лонголитина, его гидрофобности и сезонных эффектах требуют дальнейшего изучения комплекса.

СВОЙСТВА АНТИФУНГАЛЬНОГО ШТАММА Bacillus sp. Шерстобоев Н.К., Алексеенко Н.В., Мельничук Т.Н., Каменева И.А.

Южная опытная станция Института сельскохозяйственной микробиологии НААН Украины, e-mail: icxm@mail.ru Штамм Bacillus sp. 12501 (ІМВ В-7244) изолирован из микробоценоза целинной почвы (чернозем южный, АР Крым) по признаку подавления широкого спектра фитопатогенных микромицетов in vitro. Чувствительными к действию веществ, продуцируемых Bacillus sp. 12501, оказались ризобии, угнетения роста азотобактера и энтеробактерий не отмечалось.

Дальнейшие исследования показали, что Bacillus sp. 12501 продуцирует фитогормоны, преимущественно гиббереллиновой природы. Обработка проростков суспензией культуры Bacillus sp. 12501 в пятидесятикратном разбавлении способствовала увеличению длины гипокотилей огурца на 30% в сравнении с контролем (вода), что соответствовало действию ГК-5. В меньшей степени штамм продуцирует ауксины. Так, длина колеоптилей пшеницы в аналогичном разведении Bacillus sp. 12501 превышала контроль на 24%, но была меньшей чем в вариантах с индолилуксусной кислотой (ИУК 10-5).

Большинство почвенных бактерий продуцируют экзополисахариды, которым принадлежит защитная и адгезивная функции. Установлено, что Bacillus sp. продуцирует экзополисахариды до 33,6 мг/см3.

В условиях глубинного периодического культивирования Bacillus sp. разработана технология получения биопрепарата Экобацилл, с комплексом полезных для растения свойств.

Предпосевная обработка семян озимой пшеницы, сорта Подолянка, на фоновых дозах удобрений обеспечила прибавку урожая зерна на 9,2% в сравнении с контролем без обработки и на 3% - в сравнении с фунгицидом Витавакс 200 ФФ. В посевах нута сорта Пегас при совместной инокуляции семян препаратом Ризобофит, на основе высокоэффективного штамма Mesorhizobium ciceri 065, и Экобациллом урожайность зерна увеличилась на 18%. В условиях инфекционного фона Fusarium oxysporum, штамм Bacillus sp. 12501 уменьшал поражение растений нута сорта Память корневыми гнилями на 44,2% по отношению к контролю.

Таким образом, показано, что штамм Bacillus sp.12501 обладает комплексом полезных свойств, и на его основе разработан препарат Экобацилл для защиты растений и стимуляции их роста.

РАЗРАБОТКА ТАБЛЕТИРОВАННОЙ И КАПСУЛИРОВАННОЙ ФОРМ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ КОНСОРЦИУМА МИКРООРАНИЗМОВ-ПРОБИОТИКОВ Шестаков А.И.1,2, Ларина А.С.1, Нетрусов А.И. Научно – производственная фирма «Эвитон»;

2 Биологический факультет Московского Государственного Университета имени М.В. Ломоносова, кафедра микробиологии, лаборатория микробной биотехнологии.

Известно, что нормальная микробиота пищеварительного тракта играет исключительно важную роль в обеспечении жизнедеятельности организма. Нарушение микробного баланса, т.е. дисбактериоз, создает условия для развития многих хронических заболеваний.

В настоящее время применение пробиотических микроорганизмов для коррекции микробиоты кишечника считается наиболее перспективным.

Как показывают литературные данные эффективность поликомпонентных пробиотиков выше, пробиотиков на основе монокультур, при этом микроорганизмы, входящие в состав пробиотика, должны быть совместимы друг с другом и не вызывать антагонизма между собой.

Целью работы было создание консорциума микроорганизмов пробиотического действия, способных к совместному культивированию в молочной среде, а так же разработка пробиотического препарата в таблетированной и капсулированной формах на основе полученного консорциума.

В результате скрининга ряда национальных кисломолочных продуктов были отобраны Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides штамм RSH (VKPM B-8716) и Enterococcus durans штамм RSH (VKPM B-8717), способные к совместному росту в молочной среде. Полученный консорциум микроорганизмов способен наращивать высокий суммарный титр (2х109КОЕ/мл.) и формировать сгусток кислотностью не выше 70°Т в течение 4-5 часов. На следующем этапе работы, была разработана технология низкотемпературного распылительного способа высушивания полученного продукта.

Предлагаемый способ позволяет экономически эффективно, непрерывно, осуществлять высушивание микробной биомассы без заметного снижения титра микроорганизмов.

Полученный порошок микробной биомассы имеет высокую плотность и сыпучесть, что позволяет его легко таблетировать и капсулировать в конечные формы препарата.

Микроорганизмы консорциума E. durans и L. mesenteroides признаны безопасными и безвредными (IDF (International Dairy Federation) и EFFCA (European Food and Feеd Cultures Association)) и разрешены к применению в пищевой промышленности (СанПиН 2.3.2.2340-08).

Пробиотические свойства препарата подтверждены клиническими испытаниями.

Представленный консорциум микроорганизмов защищен патентом РФ № 2273662.

Исследования проведены при финансировании ООО НПФ «Эвитон».

КАЗАХСТАНСКИЕ ИЗОЛЯТЫ AUREOBASIDIUM PULLULANS ПРОДУЦЕНТЫ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ М.Х Шигаева, В.Л. Цзю, Т.Д. Мукашева, Л.В. Игнатова, Р.Ж.

Бержанова, Р.К. Сыдыкбекова Казахский национальный университет им. аль-Фараби;

ignat_lv@mail.ru В Республике Казахстан создана коллекция диморфных грибов рода Aureobasidium, служащих прекрасными моделями для изучения фундаментальных проблем морфогенеза, а также оказавшихся перспективным материалом для практического использования. Способность казахстанских изолятов A.pullulans к синтезу этих ценных вторичных метаболитов была доказана предыдущими исследованиями авторов, в результате которых получены штаммы, активно синтезирующие внеклеточные полисахариды, и по продуктивности, не уступающие известным мировым продуцентам.

С целью создания высокоактивных, конкурентоспособных казахстанских культур диморфных грибов дана оценка параметров роста и продуктивности штаммов, синтезирующих экзогликаны, в зависимости от основных источников питания, их соотношения, присутствия в среде факторов роста. Определена эффективность роста по выходу биомассы и целевого продукта наиболее перспективных штаммов.

Способность к образованию внеклеточных полисахаридов выявлена у всех коллекционных штаммов A.pullulans в ходе ферментации жидких питательных сред, различающихся компонентным составом. Выход нативного полисахарида (полисахарид + биомасса, г/л) составляет от 5,78±0,22 до 24,36±1,04 в зависимости от штамма и среды культивирования.

Исследования показали, что для накопления экзогликана более предпочтительными являются: сахароза и глюкоза как источники углерода и энергии, сдвиг соотношения основных источников питания в пользу углерода, а также наличие ростовых факторов в составе среды. Установлен оптимальный для получения целевого продукта источник азота. Большинство казахстанских изолятов предпочитает восстановленную форму азота.

Эффективность роста гриба в культуре на двух средах сравнивали по двум показателям – выходу биомассы и выходу продукта на единицу утилизированного субстрата. Учет расходования субстрата на рост, образование целевых и других продуктов метаболизма, а также на поддержание жизнедеятельности важен для оптимизации биотехнологического производства, оценки его эффективности. Показано, что большая часть углеводов идет на синтез экзогликана, меньшая – на создание клеточной массы. Эффективность конверсии субстрата в целевой продукт штаммом гриба-продуцента достаточно высока и составляет для глюкозы 38,8%, для сахарозы 47,9%. Как известно, максимальная величина конверсии для выпускаемых в промышленности полисахаридов, накапливающихся в условиях погруженной культуры A. pullulans, достигает 50%.

АНТАГОНИСТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ АКТИНОМИЦЕТОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ПОЧВ КАЗАХСТАНА Шигаева МХ., Мукашева Т.Д., Бержанова Р.Ж., Сыдыкбекова Р.К., Игнатова Л.В., Каргаева М.Т., Шимшиков Б.Е., Бражникова Е.В.

Казахский национальный университет им.аль-Фараби, e.mail - Ramza05@mail.ru Актиномицеты широко распространены в природе и основным местом их обитания является почва. Разные почвы содержат различное количество актиномицетов. Нами было установлено, что больше всего их находится в черноземе обыкновенном и темно каштановой карбонатной почве на глубине 0-10 см, а в более глубоких слоях почвы наблюдается резкое снижение количества микроорганизмов этой эколого-трофической группы. Возможно, в черноземе обыкновенном происходит активное превращение органических веществ. Серобурые пустынные и среднекаштановые почвы характеризуются бедным содержанием актиномицетов, что согласуются с литературными данными. Видовой состав бактерий актиномицетной линии в почвах Казахстана разнообразен и представлен следующими родами: Streptomyces, Actinomadura, Micromonospora, Chainia и Nocardia. Все выделенные актиномицеты были распределены на серии согласно принципу классификации, предложенной Г.Ф. Гаузе.

Большинство актиномицетов принадлежали сериям: Albus, Cinereus, Helvoflavus, Roseus и Imperfectus. Изучение антагонистических свойств актиномицетов проводили по общепринятой методике. В качестве тест-культур использовали представители различных групп микроорганизмов: грамположительные и грамотрицательные бактерии, дрожжеподобные грибы рода Candida. Результаты показали, что содержание актиномицетов-антагонистов в почвах Казахстана колеблется от 23,1 до 85,7%.

Изучение характера антагонизма актиномицетов, выделенных из различных типов почв Казахстана, показало, что большинство изученных культур в основном подавляют рост грамположительных бактерий, в частности стафилококки, бациллы - Bac. mycoides и Bac. subttilis, несколько меньше – микобактерии, а по отношению же к грамотрицательным бактериям антагонистов выявлено мало. Полученные данные подтверждаются и известными в литературе положением о преобладании спектра антагонистического действия актиномицетов по отношению к грамположительным, а не грамотрицательным бактериям. В отношении остальных испытанных тест-культур антагонистов встречается гораздо меньше.

ИЗМЕНЕНИЕ АНТИБИОТИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА СТРЕПТОМИЦЕТОВ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ТЯЖЁЛЫХ МЕТАЛЛОВ Широких И.Г.1,2, Соловьёва Е.С.1, Широких А.А. Лаборатория биомониторинга Института биологии Коми НЦ УрО РАН и Вятского государственного гуманитарного университета Зональный НИИСХ Северо-Востока РАСХН, irgenal@mail.ru Сохранение супрессивности почвы в отношении патогенных и оппортунистических видов микроорганизмов обеспечивается широким спектром антагонистически активной микробиоты, важнейшей составляющей которой являются почвенные актиномицеты. Способность к биосинтезу антибиотических веществ распространена наиболее широко у представителей рода Streptomyces. Как и другие живые организмы, стрептомицеты в условиях загрязнения окружающей среды могут изменять свою метаболическую активность. В связи с этим представляло интерес выяснить, как влияет добавление свинца (Pb2+) и кадмия (Cd2+) в среду для культивирования стрептомицетов на их антагонистическую активность в отношении других бактерий.

Исследовали по пять природных изолятов из двух экотопов с различной степенью загрязнения - урбанозёмов г. Киров и почвы Государственного природного заповедника «Нургуш» (Кировская область). Стрептомицеты выращивали на трёх средах 1) овсяный агар – ОА 2) ОА + 20 мкг/мл Pb2+ в форме сульфата 3) ОА + 2 мкг/мл Cd2+ в форме хлорида. В качестве тест-культур использовали Flavobakterium sp. L 30, Pseudomonas sepacia, Ervinia herbicola, Corynebacterium M1-1, Bacillus subtilis 26-Д и B. subtilis ИПМ 215. Антибиотическую активность определяли методом диффузии в агар (Егоров, 1979).

Метаболиты, продуцируемые стрептомицетами на среде 1, существенно влияли как на грамотрицательные, так и на грамположительные тест-бактерии, ограничивая их рост в 80% случаев попарных взаимодействий. Спектры антагонистической активности и величины зон ингибирования роста бактерий для изолятов из разных местообитаний существенно не отличались. На среде 2 антагонистическая активность стрептомицетов в отношении тест-культур чаще (в 18 из 60 попарных метаболических взаимодействий) снижалась или утрачивалась полностью, и только в пяти случаях появлялась de novo.

Среда 3 не обеспечила рост 40% исследуемых изолятов, у остальных культур наблюдалась задержка роста. Антагонистическая активность стрептомицетов при этом снижалась в 8, а появилась - в 6 из 36 попарных метаболических взаимодействий с тест культурами. Отмечен различный характер изменений антагонистической активности под воздействием тяжёлых металлов у культур, изолированных из разных экотопов.

РЕАКЦИЯ МЕРИСТЕМНЫХ РАСТЕНИЙ КАРТОФЕЛЯ НА КОЛОНИЗАЦИЮ МЕТИЛОТРОФНЫМИ БАКТЕРИЯМИ Широких И.Г.1, Широких А.А.1, Доронина Н.В.2, Леушина Л.С.3, Федоров Д.Н. Зональный НИИСХ Северо-Востока РАСХН, irgenal@mail.ru Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН Вятский государственный университет Накопленные к настоящему времени знания о способности ассоциированных с растениями метилотрофных бактерий к синтезу таких биоактивных соединений, как ауксины, цитокинины, витамины, а также 1-аминоциклопропан-1 карбоксилатдезаминазы - фермента, снижающего в растениях уровень стрессового гормона – этилена, обусловили практический интерес к использованию этой группы бактерий в растениеводстве и фитобиотехнологии.

В работе исследовали влияние способных к биосинтезу индолил-3-уксусной кислоты (0,57-1,26 мкг/мл) филлосферных штаммов Methylobacterium radiotolerans JCM 2831, M. extorquens AM1 ВКМ B-2064 и Methylophilus flavus ВКМ B-2547 на меристемные растения картофеля, выращиваемые на стандартной среде Мурасиге и Скуга (1962). Показано, что линейные размеры и облиственность меристемных растений сорта Петербургский увеличились в результате колонизации метилотрофами соответственно на 41-60 и 16-44% по сравнению с контролем в зависимости от штамма.

При этом коэффициенты клонального микроразмножения инокулированных растений возросли на 31, 36 и 61%. Эффект колонизации зависел также от плотности бактериального инокулята. Так, обработка культурой клеток M. radiotolerans с плотностью 5108 КОЕ/мл снижала на 16-38% морфометрические показатели растений, а при разведении вдвое (1:1), напротив, повышала их по сравнению с контролем.

Достоверный положительный эффект от инокуляции M. radiotolerans картофеля сорта Дарик прослеживался только при плотности клеток, не превышающей 105 КОЕ/мл.

Существенное увеличение морфометрических показателей и коэффициента микроразмножения картофеля Петербургский наблюдали при обработке культурой M.

flavus с плотностью клеток 2108 и 4108 КОЕ/мл.

Таким образом, изученные штаммы аэробных метилотрофных бактерий M.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.