авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 || 3 |

«Федеральное агентство по образованию УДК 612.1 591.11 612.42 591.144 ГРНТИ 34.39.27 34.41.01 Инв. № П1080 НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКИЙ ...»

-- [ Страница 2 ] --

Влияние ацидоза на морфологию внутренних органов изучалось [52-55]. Гистохимически ми и электронномикроскопическими методами было показано, что сдвиг рН от 7,4 в контроле до 6,5 в опыте приводит к деструктивно-дистрофическим изменениям сердца, легких и других орга нов. Ацидоз вызывает изменения стенки сосудов, отек соединительной ткани и нарушение мягко го остова внутренних органов. Ацидоз, по данным [54, 55] оказывает выраженное влияние на морфологию органов и тканей. При асфиксии, гипоксии и ацидозе плода у новорожденного отме чаются общие патологические признаки, выражающиеся в нарушении кровообращения, явлениях дистрофического характера в паренхиме и строме органов. При асфиксии плодов и новорожден ных с различными сроками жизни наблюдаются изменения в сосудах, характеризующиеся веноз ным полнокровием и стазами, наличием агрегатов тромбоцитов и сладжей эритроцитов, набухани ем стенок сосудов за счет отека их соединительнотканных компонентов. По данным [52, 54], лак тат-ацидоз, вызываемый дозированной внутривенной инъекцией молочной кислоты в эксперимен те на животных приводит к выраженным изменениям структуры внутренних органов. Динамика и характер наблюдаемых изменений зависят от продолжительности и степени сдвига рН в кислую сторону. Острый декомпенсированный лактат-ацидоз приводит к слущиванию эндотелия, отеку сосудистой стенки и околососудистого пространства. Неспецифические морфологические измене ния нарастают по мере изменения кислотно–основного баланса внутренней среды организма. На протяжении первых 5 – 30 минут ацидоза преобладают сосудистые поражения, а через 60 – мин (рН крови 7,0 – 6,5) нарастают деструктивно - дистрофические изменения в паренхиме орга нов. Они выражаются в нарушении структурной организации коллагеновых, эластических и рети кулиновых волокон. Наиболее выражены эти изменения в органах, ответственных за поддержание кислотно – основного равновесия (почки, легкие и др.).

В клинической практике наиболее характерными гипоксическими состояниями являются критические состояния организма и шок, где основной ареной патологии являются легкие и серд це. По данным исследований [52, 71, 72] в условиях молочно – кислого ацидоза, в легких отмеча лись дисциркуляторные явления, а по мере увеличения глубины и продолжительности ацидоза по являлись дистрофические и деструктивные процессы, касающиеся сурфактанта, альвеолоцитов и эндотелиоцитов аэрогематического барьера, а также волокнистого и основного компонентов ин терстиция. Это позволяет судить о нарушении газообменной и других функций легкого. По дан ным [8, 9] экспериментальный ацидоз приводит к образованию пристеночных тромбов, расслое нию крови, десквамации и отеку сосудов легких. В легочной ткани наблюдался отек, разрушение коллагеновых и ретикулярных волокон, ателектаз альвеол, набухание соединительнотканных кле ток, при сдвиге рН 7,0 и более отмечались некротические явления, пропитывание ткани легкого элементами крови.

Морфология почек при экспериментальном молочно-кислом ацидозе изучалась рядом ав торов [9]. Выраженные изменения при ацидозе претерпевают структурные элементы почки. При сдвиге рН крови до 7,2-7,0 в течении 5-30 мин возникает набухание цитоплазмы нефроцитов прок симальных канальцев;

выявляются зернистая дистрофия, жировая вакуолизация деструкция ще точной каемки. В отдельных участах коркового вещества наблюдается изменение структуры сосу дистого клубочка почечного тельца и появление белковой жидкости в полости капсулы. По дан ным [8, 9] были выявлены морфологические изменения различных отделов почечного сегмента на молекулярном, субклеточном и клеточном уровнях в условиях экспериментального ацидоза на ла бораторных животных. Данные экспериментов свидетельствуют о том, что в начальные стадии развития ацидоза в микроциркуляторном русле почек наблюдается образование эритроцитарных агрегатов в сосудах как коркового, так и мозгового вещества. Уменьшение активности дыхатель ных ферментов эпителиоцитов, углубление ацидоза и увеличение его продолжительности прояв ляется дистрофически-некротическими изменениями эпителиоцитов нефрона и его стромальных элементов. Стенки кровеносных сосудов подвержены плазматическому пропитыванию, появляет ся геморрагический компонент. Дальнейшее увеличение ацидоза сопровождается деструктивными процессами стромы, паренхимы, сосудистых компонентов коркового и мозгового вещества почки.

Дисциркуляторные и деструктивно-дистрофические изменения сосудисто-тканевого комплекса почки зависят от глубины и продолжительности этих состояний. Выраженные изменения возни кают в почке.

Исследование морфологии органов иммунной системы при ацидозе проводилось рядом ав торов. Изменение морфологии селезенки при газовом ацидозе изучалось. Исследования были проведены на беспородных собаках под общим гексеналовым наркозом. Путем увеличения в ды хательной смеси СО2 в крови создавали газовый ацидоз. На протяжении всего эксперимента из бедренной артерии забиралась кровь при различных значениях рН крови 7,4;

7,3-7,2;

6,95;

брались кусочки селезенки, фиксировались в 5% растворе нейтрального формалина и окрашивались ге матоксилин-эозином, по Ван-Гизону и Харту. По данным планиметрии внутриселезеночная со единительная ткань с проходящими в ней сосудами занимает 6,92% от общей площади селезенки.

Сдвиг рН крови до 7,2 приводил к уменьшению объема селезенки. Отмечалось достоверное уве личение площади соединительной ткани по отношению к паренхиме. Дальнейшее снижение рН крови 7,20-6,95 приводило к резкому сокращению селезенки, что можно расценивать как компен саторную реакцию, направленную на увеличение щелочного резерва крови. По данным [10] при сдвиге рН от 7,4 до 7,3-7,2 размеры селезенки уменьшаются недостоверно, но прослеживаются утолщения капсулы, подкапсулярных трабекул и общих сосудистых влагалищных оболочек. Из менения в структуре соединительной ткани характеризуется увеличением удельной части колла геновых волокон по отношению к эластическим и ретикулиновым волокнам. Исследования, про веденные [55], показали, что в условиях экспериментального лактат – ацидоза изменяются разме ры селезенки кошки.

Метаболический ацидоз (рН – 7,2 – 7,0) приводит во всех случаях к достоверному умень шению длины, ширины органа соответственно на 9,8%, 29,3% по сравнению с контролем. От мо мента введения молочной кислоты и на протяжении 1 часа отмечается значимое увеличение по перечника капсулы на 97,1%, подкапсулярных трабекул на 38,9% и недостоверное изменение толщины общих сосудистых влагалищных оболочек. В фиброзной оболочке капсулы селезенки прослеживается увеличение объема коллагеновых волокон на 96,2% на фоне достоверного сни жения процентных отношений содержания эластических на 43,2% и ретикулиновых волокон на 56,1% в поперечнике фиброзной оболочки капсулы.

При метаболическом ацидозе (рН 7,2-7,0) продолжительностью от 30 до 60 мин, вызванном внутривенной инъекцией молочной кислоты наблюдаются существенные изменения в соедини тельнотканных структурах, паренхиме и сосудистом русле вилочковой железы. По ходу фиброз ной оболочки капсулы коллагеновые волокна интенсивно окрашиваются кислым фуксином, одна ко появляются единичные участки с бледным окрашиванием в местах отека и набухания волокон.

В более глубоких слоях капсулы коллагеновые волокна также сохраняют способность окраши ваться кислым фуксином, при этом их структурная целостность не нарушается. На поверхности капсулы наблюдаются разрывы и отек фиброзной оболочки, происходит разделение капсулы на 2 3 слоя. В стенке сосудов аргирофильные волокна слабо импрегнируются серебром, встречаются утолщенные, фрагментированные волокна. Эластические волокна толщиной 0,8 мкм – 1,0 мкм слабо окрашиваются в коричневый цвет, многие из них отечны и утолщены. В просвете междоль ковых артерий и вен наблюдаются сладжи эритроцитов и лейкоциты, происходит расслоение кро ви на форменные элементы и плазму. Просвет междольковых артерий в пределах 50-75 мкм, тол щина стенки составляет 25-36 мкм. Междольковые вены имеют просвет 100-200мкм, толщина стенки варьирует от 18 до 28 мкм, встречаются вены с оптически пустым просветом. В мозговых зонах долек просвет капилляров расширен, они забиты форменными элементами крови, наблюда ется отек стенки сосудов, расширение межклеточных щелей мозгового вещества.

Были также исследованы лимфатические узлы 12 регионов. При этом наблюдались диф фузная или очаговая делимфатизация зародышевых центров. Коллагеновые волокна капсулы бы ли утолщены, разрыхлены с элементами нарушения их целостности. Лимфоциты обнаруживались также и в промежуточных синусах, что приводило к сглаживанию границ между корковым и мозговым веществом. При дальнейшем углублении ацидоза (рН крови 6,8 - 6,5) и его продолжи тельности явления делимфатизации нарастали как в центральных лимфатических узлах, так и в других группах лимфоузлов [55].

Ряд исслдеований посвящено изучению влияния молочнокислого ацидоза на структуру эн дотелиоцитов in vitro [3]. Одним из ранних признаков ишемии является увеличение концентрации лактата, которое происходит в результате интенсификации анаэробного метаболизма. Сдвиг рН среды от 7,4 до 6,8 не вызывает набухания эндотелиоцитов, а при рН ниже 6,6, 6,4 и 6,0 происхо дит существенный Н+-зависимый отек и вздутие клеток [3, 72].

Патологические процессы в легких при сдвиге рН в кислую сторону сопровождаются появ лением очагов эмфиземы и ателектаза, которые увеличиваются с нарастанием ацидоза. Авторы приходят к выводу, что динамика и характер наблюдаемых при экспериментальном ацидозе мор фологических изменений в различных органах зависят от продолжительности и степени сдвига рН в кислую сторону [72].

Тяжесть функциональных нарушений, а соответственно, и клинические признаки печеноч ной недостаточности коррелируют с выраженностью морфологических изменений при ацидозе.

Ацидоз при острой почечной недостаточности, пересадке печени, гипотермии, интоксикации гри бами, вирусной лихорадке сопровождается гиперкоагулемией, коагулопатией потребления и нарушением морфологии легких, сердца, печени, почек [4, 12-14, 33, 67, 83, 89].

Таким образом, в литературе имеются единичные работы, которые свидетельствуют о мор фологических изменениях в различных органах и тканях при метаболическим ацидозе. Показано, что эти изменения зависят от глубины и продолжительности ацидоза. В связи с вышеизло женным, изучение влияния сдвигов кислотно-основного равновесия на морфологию органов пи щеварения, гемокоагуляционный и сосудисто-тромбоцитарный гемостаз представляется весьма значимым.

2.2. Выбор и обоснование оптимального варианта направления ис следования.

Продукты анаэробного метаболизма, вызывающие ацидоз, представляют реальную опас ность для организма, т.к. способны нарушать не только функции, но и приводить к морфологиче ским изменениям в органах и тканях. Накопление молочной кислоты изменяет гемостатические свойства крови, усиливает гипоксию, уменьшает функцию энергообразования в клетке. Тем неме нее, морфология органов при ацидозе остается не изученной, до конца не ясны механизмы разви тия ДВС-синдрома при ацидозе, вопросы терапии остаются во многом открытыми. Этим объясня ется не угосающий интерес к проблеме лактат-ацидоза. В связи с этим, нам кажется важным изу чение роли ацидоза в развитии ДВС-синдрома, его морфологического эквивалента и нарушений структурной организации органов и тканей.

2.3. План исследования 1 этап:

3.1. Аналитический обзор 3.2. Экспериментальное исследование I этапа.

3. 2.1. Создать модель лактат-ацидоза в/в капельным введением 3% растора молочной кислоты и под контролем рН достич различных сдвигов рН от 7,2 до 6,8 в опытах на животных. Изу чить показатели КЩР в различных регионах сердечно-сосудистой системы.

3. 2.2. Изучить в условиях экспериментального лактат-ацидоза в опытах in vivo показатели си стемы сосудисто-тромбоцитарного, гемокоагуляционного гемостаза, фибринолиз в различных регионах сердечно-сосудистой системы 2 этап:

3.3. Экспериментальное исслдеование 2 этапа 3.3.1.Исследовать морфологию органов и тканей (сердце, печень, почки, легкие, органы им мунной системы) при различных сдвигах рН крови (рН от 7,2 до 6,8 и различной продолжитель ности ацидоза от 15 минут до 180 мин, а также после перенесенного ацидоза на 4, 10, 14 сутки) на уровне световой и электронной микроскопии.

3.3.2.Изучить морфологию нервной системы при различных сдвигах рН крови (рН от 7,2 до 6,8 и различной продолжительности ацидоза от 15 минут до 180 мин, а также после перенесенного ацидоза на 4, 10, 14 сутки) на уровне световой микроскопии.

3.3.3. Провести гистохимическое исследование морфологического материала 3.3.4. Провести морфометрическое исследование морфологического материала с использова нием компьютерных программ анализа в микроскопии «Мастер-морфология»

3.4. Написание и публикация статей.

Подготовка статей и публикаций с изложением полученных результатов по 2 этапу исследо вания и их публикация в зарубежных журнал или в рекомендованных Президиумом Высшей атте стационной комиссией. 1статья по каждому направлению, что составит 3 статьи в целом.

III этап 3.5. Изучить в условиях метаболического ацидоза влияние биологических пептидов (Ile-Trp, Lys-Glu-Val-Trp и Lys-Glu (вилон), Glu-Trp (тимоген) на гемостаз в эксперименте 3.6. Исследовать в условиях метаболического ацидоза влияние (Ile-Trp, Lys-Glu-Val-Trp и Lys-Glu (вилон), Glu-Trp (тимоген) на структурную организацию органов иммунной системы (ви лочковая железа, селезенка, лимфатические узлы различных регионов, лимфоидные образования пищеварительной системы) 3.7. В клинических условиях у пациентов с нарушениями кислотно-щелочного равновесия в сторону ацидоза изучить состояние иммунной системы и влияние (Ile-Trp, Lys-Glu-Val-Trp и Lys Glu (вилон), Glu-Trp (тимоген) на иммуните 3.8.Подготовка рекомендаций по теме исследования 3.9. Подготовка и публикация монографии «ДВС-синдром в клинике и эксперименте»

3.10. Подготовка и публикация статей в ретинговых журналах 2.4. Экспериментальное исследование I этапа.

2.4.1. Методика экспериментальной модели лактат-ацидоза.

Исследования проведены на беспородных животных (42 кошках), которые содержались в виварии на стандартном рационе. Животные (кошки) были разделены на 5 групп: 6 животных от носились к контрольной группе и 4 группы по 8 животных подвергались экспериментальному лактат-ацидозу. Дополнительно были использованы 4 животных для проведения электронной микроскопии. Лактат-ацидоз создавали введением 3% раствора молочной кислоты в изотониче ском растворе NaCl в бедренную вену под гексеналовым наркозом. Различный сдвиг рН в кис лую сторону достигали дозированным капельным введением лактата обычно от 20 до 38 капель в мин, и через каждые пять минут забирались порции крови для определения сдвига рН на рН метре. По достижении необходимого значения рН (от 7,2, 7,0, 6,8, 6,5), в течение 5 – 10 мин дозу вводимой молочной кислоты уменьшали до 3 – 5 капель в мин, и поддерживали необходимый уровень соответственно 30, 60, 120, 180 мин, затем брали пробы крови для изучения показателей системы гемостаза и кусочки органов для гистологических, гистохимических и электронномик роскопических исследований (В.В.Альфонсов и соавт., 1985). Выведение животных из опытов проводилось с соблюдением правил эвтаназии, предусмотренных приказом МЗ СССР № 78 от.

Морфологические изменения в органах и показатели гемостаза изучались в зависимости от про должительности и глубины ацидоза.

2.4.2. Методы исследования системы гемостаза Для характеристики системы свертывания крови, фибринолиза и функции тромбоцитов определяли следующие показатели:

1. Время рекальцификации (H.Bergerhof, L.Roka, 1954).

2. Протромбиновое время (A.Quick, 1937).

3. Тромбиновое время (E.Szirmai, 1957).

4. Содержание фибриногена (Р.А.Ретберг, 1972).

ПДФ (L.B.Naniga, M.M.Guest, 1967).

5.

6. Количество тромбоцитов (C.Brecher, 1953).

7. Тромбоэластография (H.Hartert, H.Lasch, 1958) 8. Электрокоагулография по У.А.Ватмахеру и др., Концентрация Н+-ионов (C.Saunier et al., 1961) на рН метре ЛПУ – 340.

9.

10. Определение электрокинетической подвижности тромбоцитов и эритроцитов в камере H.A.Abramson (1928) модификации В.В.Альфонсова (1977).

11. Разделение субклеточных фракций методом дифференциального центрифугирования (А.Ленинджер, 1985) и исследование их влияния на показатели гемостаза.

Пробы крови для исследования показателей гемостаза брали до, и после введения молочной кис лоты одновременно из бедренной артерии и селезеночной вены. Было проведено несколько серий опытов, в которых создавали ацидоз различной глубины от рН 7,2 до рН 6,5 и продолжительности от 30 до 180 минут. Пробы крови брали в силиконированные пробирки, содержащие 3,8% цитрат натрия, так, чтобы конечное соотношение цитрата и крови составляло 1 к 9. Для получения плаз мы кровь центрифугировали в течение 10 минут в центрифуге ЦЛК 1 при 1500 об/мин, а плазму богатую тромбоцитами для изучения дзета-потенциала и агрегации – при 1000 об/мин.

Для определения электрокинетических свойств тромбоцитов и эритроцитов была скон струирована камера. В основу предложенного метода положены принципы, разработанные С.С.Харамоненко, 1960 др. Определение электрофоретической скорости велось в прямоугольной горизонтальной термостатированной камере из стекла. Размеры камеры соответствовали следую щим параметрам: глубина – 0,8 мм, ширина – 14 мм, длина – 45 мм. Расстояние между электрода ми составляло 180 мм;

емкость камеры 4,5 мл. Источником постоянного электрического тока слу жит стабилизированный выпрямитель УИП – 1. В электрическую схему установки входят: милли амперметр МА II/5, вольтметр 359, коммутатор, потенциометр и неполяризующиеся электроды.

Термостатирование микрокамеры производилось при помощи термостата – Т–16, создававшего циркуляцию воды в кожухе, окружающем камеру. Наблюдение за передвижением клеток осу ществлялось через объектив с водной иммерсией и окулярмикрометр с общим увеличением в раз. Герметичность между термостатирующим кожухом и объективом обеспечивалась резиновым сальником.

Электрофоретическую скорость тромбоцитов определяли на участке, равном 4 деления микрометрической сетки окулярмикрометра. “Цена” деления сетки для данного увеличения мик роскопа устанавливалась с помощью микрометрической линейки. Обычно в одном опыте велось наблюдение за перемещением 10 – 20 клеток. Скорость движения каждой клетки измеряли в двух направлениях: справа налево и слева направо. Разность в скоростях движения тромбоцитов и эритроцитов в обоих направлениях не превышала 5%. В последующем высчитывалась средне арифметическая скорость движения клеток для данного опыта.

Параллельно с измерением скорости движения форменных элементов крови определяли удельную электропроводность, напряжение внешней сети при постоянной силе тока, равной 5 ма, и рассчитывали градиент потенциала внешнего электрического поля по формуле:

J H = q H – величина градиента потенциала (V/см);

J – сила тока (А);

удельная электропроводность среды ( -1) q – поперечное сечение камеры (см);

Электрофоретическую подвижность исследуемых клеток определяли по уравнению:

S V = ;

tH S – расстояние, на которое переместился исследуемый объект (мкм);

t – время (с), в течение которого велось измерение;

H – градиент потенциала (V/см);

V – электрофоретическая подвижность ( сек-1 -1 см-1).

При каждом измерении исследовали рН и вязкость. Диэлектрическая постоянная среды бралась за 81, ионная сила раствора составляла 0,145.

Электрофоретическая подвижность (V) может быть вычислена по формуле, предложенной Smoluchowski (1921):

HD V = Н – градиент потенциала внешнего электрического поля (V/см);

D – диэлектрическая постоянная среды;

- электрический потенциал клетки (дзета-потенциал) - вязкость среды;

4 - коэффициент.

При градиенте потенциала 1 V/см электрофоретическая подвижность измеряется в сек-1 - см-1. Это уравнение использовалось для определения дзета-потенциала тромбоцитов и эритроци тов:

4V = ;

HD V – электрофоретическая подвижность.

Для определения потенциала в милливольтах правую часть уравнения умножали на коэф фициент пересчета – 300, т.к. все величины выражены в абсолютных электростатических едини цах.

Методика приготовления клеточной суспензии к проведению опыта состояла в следующем.

Кровь животных смешивали с цитратом натрия. Для получения плазмы с богатым содержание тромбоцитов кровь центрифугировали 10 мин при 1000 об/мин в лабораторной центрифуге ЦЛК– 1. Плазму, богатую тромбоцитами, переносили в отдельную силиконированную пробирку и хра нили в течение всего эксперимента при температуре 37 0 С.

Суспензию тромбоцитов или эритроцитов для заполнения микрокамеры готовили посред ством разведения в 20 раз фосфатным буфером с рН 7,4 и ионной силой 0,145. Электрофоретиче скую камеру заполняли так, чтобы в нее не попадали пузырьки воздуха. В электродное простран ство вводили агаровые электроды и включали ток и определяли электрофоретическую подвиж ность. В дальнейшем по указанным выше формулам рассчитывали дзета-потенциал тромбоцитов.

Определение агрегации тромбоцитов по принципу G.V.R.Born (1962) в модификации 12.

В.В.Альфонсова (1977). Для определения агрегации тромбоцитов и эритроцитов в наших исследо ваниях был применен принцип турбодиметрии, основанный на исследовании меняющейся оптиче ской плотности плазмы, богатой кровяными пластинками (250 – 300 тыс. мм3) или содержащей около 600 тыс. эритроцитов в мм3.

Исследуемые образцы плазмы (1,5 мл) помещали в правую кювету калориметра (ширина 5 мм) и равномерно перемешивали с помощью поливиниловой мешалки со скоростью 360 об/мин, а левую заполняли физраствором. Агрегация тромбоцитов вызывалась микромолярными концентрациями АДФ (натриевая соль, аденозин-5-дифосфорной кислоты фирмы “Реанал”). Раствор АДФ готовили на физиологическом растворе.

После включения самопишущего потенциометра на протяжении 60с записывали спонтан ную агрегацию тромбоцитов. Затем, при помощи микропипетки, в кювету с тромбоцитами или эритроцитами вносили 0,2 мл раствора АДФ.

Рисунок. 1 Методика анализа кривой агрегации тромбоцитов.

1. СА – спонтанная агрегация, наличие или отсутствие (градусы);

2. ВН – время начала агрегации (с);

3. УА –, угол наклона агрегации (градусы);

4. ВА – время агрегации (с);

5. АА – агрегации (мм);

6. ВА2 – величина агрегатов (мм);

7. УД –, угол наклона дезагрегации (градусы);

8. ВД – время дезагрегации (с);

9. АД – амплитуда дезагрегации (мм).

На агрегатограмме определяли следующие параметры (Рисунок. 1 ): 1.Наличие или отсут ствие спонтанной агрегации клеток крови (без добавления агрегирующего агента в пробу). 2. Вре мя начала агрегации в секундах (время с момента внесения в исследуемую пробу агрегирующего агента до начала падения оптической платности суспензии форменных элементов) 3. Угол наклона агрегации. 4. Время агрегации (время с момента внесения агрегирующего агента до максимально го падения оптической плотности изучаемого образца) 5. Амплитуда агрегации (степень макси мального падения оптической плотности), выраженная в процентах или в мм, где 10 мм соответ ствует 4%, угол дезагрегации (обратный процесс, направленный на восстановление оптической плотности суспензии кровяных клеток). 6. Относительная величина образовавшихся агрегатов (по ширине линии в мм, записываемой прибором).

2.4.3. Методы исследования морфологического эквивалента ДВС – синдрома и структуры органов пищеварения Взятие материала для микроскопического исследования тканей осуществлялось у лабора торных животных под гексеналовым наркозом в контроле, и после введения 3% раствора молоч ной кислоты на 0,85% растворе хлорида натрия. Кусочки тканей и органов размером 0,5 – 1,0 см фиксировались в 10% забуференном нейтральном растворе формальдегида (рН 7,0) при темпера туре 18 - 20°С в течение 24 – 48 ч. Заливка осуществлялась с использованием парафина и целлои дина (Г.А.Меркулов, 1969).

Методы окрашивания морфологического материала:

1. Окраска гематоксилин-эозином.

2. Окраска гемотоксилин-пикрофуксином по Ван-Гизон.

3. Электронная микроскопия кусочков органов производилась при рН 7,4 (контроль), 7,2 и 7, (опыт) через 15 и 30 мин после начала ацидоза. Фиксация тканевых блоков размером 0,5 – мм2 и длиной 5 мм осуществлялась четырехокисью осмия в течение 1,5 – 2 часов с последую щей отмывкой в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) с добавлением кальция хлорида (из расчета 0,5 мл 1% раствора кальция хлорида на каждые 100 мл буфера) 4 свежие порции (по 15 мин в каждой). Для подготовки к пропитке водо-нерастворимыми смолами, отмытые от излишков фиксатора, тканевые блоки проводили через спирты возрастающей крепости (схема проводки:

50% - три свежие порции по 10 минут;

70% - три свежие порции по 10 минут;

80% - три свежие порции по 10 минут;

95% - три свежие порции по 10 мин;

100% - три свежие порции по мин). Далее обезвоженные кусочки тканей заливались в ЭПОН – 812. Полимеризацию матери ала производили ступенчато при температуре 37, 650С в течение 24 ч. Срезы блоков готовили на ЛКВ (III модель) с помощью стеклянных ножей. Для исследования отбирали ленты срезов серебристого цвета. Увеличение контрастности препаратов достигали при использовании не скольких методик: 1. Контрастирование материала в блоках уранилацетатом;

2. Контрастиро вание срезов сначала в 2 – 5% растворе уранилацитата, затем цитратом свинца;

3. Комбиниро ванными способами контрастирования материала в блоках и срезах. Ультраструктурный ана лиз тканей и фотографирование на фото пластинки для ядерных исследований производили с помощью микроскопа IEM – 7A (Япония) при ускоряющем напряжении 50 кВ и увеличениях на экране микроскопа 6000 – 30000 раз.

2.4.4. Статистическая обработка материала проводилась на ПЭВМ Pentium 5 с использованием па кета программ Microsoft Excel для операционной системы Windows-ХР. Достоверность различий показателей в группах оценивали по величине t – критерия Стьюдента.

2.5. Результаты экспериментального исследования 1 этапа 2.5.1. Влияние экспериментального лактат-ацидоза на показатели сосудисто тромбоцитарного, гемокоагуляционного гемостаза и фибринолиз в различ ных регионах сердечно-сосудистой системы 2.5.1.1.Влияние молочной кислоты на показатели свертывания крови и фибри нолиз в органах пищеварения в опытах in vivo.

Молочная кислота, образующаяся в организме, проходит вместе с кровью через различные органы, оказывая определенное влияние на их функцию. Интересно было проследить значение лактата, протекающего через печень, в регуляции свертываемости крови и фибринолиза. С этой целью нами были проведены исследования, в которых молочная кислота вводилась в портальную систему, а показатели свертывания изучались в крови печеночной вены. Эти опыты проводились на 9 беспородных взрослых собаках обоего пола. Под тиопенталовым наркозом по средней линии производился разрез брюшной стенки, края раны разводились и фиксировались при помощи рано расширителя. В одну из селезеночных вен вставлялась и закреплялась тонкая стеклянная канюля, соединенная эластической трубкой с перфузионным аппаратом. Под нижнюю полую вену ка удальнее места впадения в нее печеночной вены подводили лигатуру, позволяющую при необхо димости перекрывать приток крови от задней части туловища к грудной полости. На лонной по верхности левой задней лапы производили разрез кожи, тупым способом выделяли бедренную артерию, дистальный отдел ее перевязывали, а на проксимальный – накладывали мягкий зажим. В отрезке сосуда, заключенном между лигатурой и зажимом, делали надрез. Участок артерии отмы вали от крови, затем вводили в него стеклянную канюлю и фиксировали ее лигатурой. С мини мальными интервалами времени из бедренной артерии, воротной и нижней полой вены забирали по 9 мл крови, которую смешивали с 1 мл 3,8% цитрата натрия. Кровь из воротной и печеночной вены брали при помощи силиконированных игл и шприцев. В момент взятия оттекающей от пече ни крови ее приток по полой вене от туловища блокировали ранее подведенной лигатурой. Через 15 минут после взятия крови начинали инъекцию в одну из селезеночных вен 4% лактата в буфере (рН 6,5) со скоростью 10 мл в минуту. Перед окончанием введения молочной кислоты, на фоне инфузии, кровь брали повторно из тех же сосудов.

Судя по исходным данным, наиболее продолжительным время рекальцификации было в крови бедренной артерии, наибольшая скорость свертывания наблюдалась в крови, притекающей к печени. Тромбопластическая активность была ниже в крови из бедренной артерии и более вы сокой в крови воротной вены.

Кровь, взятая на фоне инъекции кислого буферного раствора, обладала иными коагуляци онными свойствами, а уровень рН сдвинут в кислую сторону. Одновременно с ацидозом наблю далась активация свертывания крови, взятой из портальной системы. Так время рекальцификации укорачивалось на 12,7% (р 0,2), утилизация протромбина увеличивалась на 61% (р 0,01). Эти данные свидетельствует о том, что к печени притекает кровь с высокой тромбопластической ак тивностью и низким уровнем рН. Между тем, в крови, оттекающей от печени, подобных сдвигов обнаружить не удалось. Более того, время рекальцификации, хотя и недостоверно, несколько удлинялось, а потребление протромбина осталось на прежнем уровне, при этом уровень рН оста вался смещенным в кислую сторону всего на 0,051 единиц.

Приведенные данные свидетельствуют о важной роли печени в регуляции свертывания крови, а также восстановлении рН среды до физиологических пределов. Время рекальцификации в артериальной крови уменьшилось с 106,6 до 97,8 с (р 0,05), уровень рН снизился с 7,444 до 7, (р 0,06), потребление протромбина изменялось незначительно с 16,9 до 17,6 с (р 0,4). Некото рая активация свертываемости крови, взятой из бедренной артерии, может быть объяснена не только сдвигом рН в кислую сторону, но и рефлекторными реакциями, проявляющимися в ответ на развитие ацидоза за счет поступления в кровеносное русло из сосудов и тканей различных ор ганов соединений, стимулирующих гемокоагуляцию.

Колебания толерантности плазмы к гепарину отражали ту же закономерность, что и время рекальцификации. Наименьшая устойчивость к гепарину наблюдалась в артериальной крови ( с), в крови, оттекающей от печени, она несколько повышалась (350 с) и наибольшей была в крови из воротной вены (308 с, р 0,01). Поскольку концентрация водородных ионов в крови, притека ющей и оттекающей от печени, в наших опытах была одинаковой, то вполне естественно сделать предположение, что замедление свертываемости и уменьшение толерантности крови к гепарину, связано с поступлением антикоагулянтов, синтезируемых в печени. Инъекция в селезеночную ве ну кислого раствора, прежде всего, отражается на свойствах крови воротной вены. Толерантность плазмы к гепарину в ней возрастает от 308 до 240 с (р 0,02). В значительной степени увеличива ется устойчивость плазмы к гепарину и в печеночной крови, в бедренной артерии эти сдвиги вы ражены слабее.

Антикоагулянтная активность до инъекции лактата была самой высокой в крови печеноч ной вены. Тромбиновое время в ней равнялось 43,5 с, между тем как в воротной вене и артерии оно соответствовало 39,8 и 40,4 с (р 0,02). Полученные данные подтверждают мысль, высказан ную нами ранее, о поступлении из печени антикоагулянтов, обладающих антитромбиновым дей ствием. Приток к печени крови, обогащенной молочной кислотой, значительно снижает уровень антикоагулянтов, в результате чего тромбиновое время уменьшается с 43,5 до 38,1с (р 0,02).

Снижение концентрации антитромбинов, возможно связано с комплексообразованием гепарина с другими соединениями в присутствии молочной кислоты. Аналогичную картину можно наблю дать и в тех случаях, когда в опытах использовался тромбин большой активности. Если в экспери ментах применялась гепаринизированная плазма, то нейтрализация антикоагулянтов также интен сивно осуществлялась в крови, полученной из бедренной артерии и нижней полой вены. Фибри нолитическая активность, по нашим данным, была на 39,8% выше в крови из воротной вены (р 0,01) по сравнению с артерией и на 25,5% (р 0,01) по сравнению с печеночной веной. Снижение фибринолиза может быть связано с поступлением в кровоток ингибиторов плазмина. Фибриназная активность была наибольшей в крови бедренной артерии, в венозной крови печени она была ниже на 13,4% (р 0,05). Введение кислого раствора в воротную систему печени сопровождалось сни жение фибриназной активности во всех изучаемых пробах крови. В большей степени активность фибриназы уменьшалась в крови из воротной вены. Между отдельными образцами крови сохраня лись существенные различия активности фибринстабилизирующего фактора. В артерии она была выше, а в воротной вене ниже, чем в полой (р 0,01).

На фоне введения молочной кислоты, в крови воротной вены появлялись продукты дегра дации фибриногена, что является признаком внутрисосудистой коагуляции. В крови, прошедшей через печень, можно было обнаружить увеличение ПДФ (р 0,1), свидетельствующее о внутрисо судистой коагуляции. В артериальной системе концентрация ПДФ оставалась на низком уровне (рисунок 2, таблица 2).

Влияние введения лактата в воротную вену на показатели свертывания крови, оттекающей от печени Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Опыт Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль Контроль в ор.в ена печ.в ена в ор.в ена печ.в ена в ор.в ена печ.в ена в ор.в ена печ.в ена в ор.в ена печ.в ена в ор.в ена печ.в ена в ор.в ена печ.в ена в ремя потребление Протромбинов ое Тромбинов ое Фибринолиз Фактор XIII ПДФ в мг% рекальцифик. протромбина в ремя в ремя контроль рН крови 7,39 опыт рН крови 7, Рисунок. 2. Показатели свертывания крови в воротной и печеночной венах при лактат-ацидозе.

Таблица 2. Влияние введения 4% раствора молочной кислоты в воротную вену на показатели свертывания крови, оттекающей от печени (М ± m).

Контроль Опыт Изучаемые До инъекции После инъекции показатели Бедрен- Нижняя Ворот-ная Бедрен- Нижняя Воротная ная полая вена ная ар- полая вена артерия вена терия вена рН 7,44 рН 7,39 рН 7,39 рН 7,38 рН 7,34 рН 7, Время ре- 106,6 ± 94,7 ± 87,2 ± 7,13 97,8 ± 3,22 97,4 ± 76,2 ± 7, кальцифика- р 0,05 р 0,05 р 0, 3,12 6,21 7, ции (с) р 0,1 р 0, n= Потребление 16,9 ± 17,8 ± 18,6 ± 17,6 ± 18,1 ± 29,4 ± протромбина 1,12 1,15 1,47 0,79 1,12 1, (с) n = 9 p 0,3 p 0,3 p 0,4 p 0,1 p 0, Протромби- 10,8 ± 11,8 ± 10,9 ± 0,18 9,9 ± 0,22 10,7 ± 10,3 ± 0, новое время р 0,01 р 0, 0,15 0,17 p 0,2 0, (с) р р 0, n=9 0, Тромбино-вое 40,4 ± 43,5 ± 39,8 ± 0,90 39,9 ± 38,1 ± 38,8 ± время (с) n = 9 0,90 0,90 p 0,1 0,68 1,34 0, р 0,02 р 0,1 p 0,02 p 0, Тромбино-вое 19,9 ± 21,9 ± 19,4 ± 18,3 ± 18,1 ± 18,7 ± время (с) n = 9 0,75 0,60 0,55 1,16 0,73 0, р0,02 р0,1 р0,3 р0,01 р0, Фибринолиз 73,6 ± 44,6 ± 61,8 ± 45,8 ± 36,4 ± 2, 58, (мин) ±3, 4,2 6,92 3,79 5,64 p 0, n=9 p 0,01 p 0,01 p 0,05 p 0, Фактор 105,5 ± 91,8 ± 84,4 ± 78,5 ± 59,1 ± 48,9 ± (c) 6,80 5,46 6,50 27,94 28,6 30, n=9 p 0,06 p 0,05 p 0,4 p 0,3 p 0, ПДФ (мг%) 3,9 ± 4,2 ± 6,2 ± 8,2 ± 10,4 ± 12,6 ± n=9 0,3 0,2 0,3 0,4 0,4 0, p 0,2 p 0,01 p 0,001 p0,001 p 0, Примечание: р - достоверность различий между контролем и опытом n - количество исследований.

На основании полученных данных можно прийти к выводу, что печень при ацидозе играет важную роль в регуляцию гемостатической функции крови. Это может быть связано, как со спо собностью печени восстанавливать рН почти до исходного уровня, так и выделять в кровоток фак торы свертывания крови и антикоагулянты.

2.5.1.2. Влияние лактат-ацидоза на гемостаз в общей циркуляции и в порталь ной системе кровообращения Молочная кислота является важнейшим продуктом метаболических процессов. У здоровых людей в состоянии покоя она содержится в небольших количествах (10-12 мг%), образуясь в ре зультате гликолиза и восстановления пирувата. При надкритических физических упражнениях кислородный запрос значительно превышает максимальное потребление кислорода, возникает кислородный долг, приводящий к преобладанию анаэробных процессов ресинтеза АТФ и увели чению содержания молочной кислоты до 200-300 мг%. Многие патологические процессы, такие как сахарный диабет, гипоксия плода, обширные травмы, инфекции и др. приводят к накоплению молочной кислоты, развитию ацидоза и сдвигу рН в кислую сторону. Известно, что лактат-ацидоз приводит к изменению гемостатических свойств крови в различных регионах сердечно сосудистой системы. Роль желудочно-кишечного тракта в изменении гемокоагуляционных свойств крови при ацидозе остается неизученной. Поэтому в следующей серии экспериментов бы ла поставлена задача: изучить свертывание крови и функции тромбоцитов в воротной вене при со здании экспериментального ацидоза в общей циркуляции путем капельного введения 3% молоч ной кислоты в бедренную вену. Нами было проведено четыре серии экспериментов с различной глубиной (рН 7,2;

7,0;

6,8;

6,5) и продолжительностью ацидоза (30;

60;

120;

180 мин).

Для достижения необходимого уровня рН в течение 3-5 минут капельно (20-40 капель/мин) вводили 3% раствор молочной кислоты, а затем поддерживали необходимую величину ацидоза введением 3-5 капель в минуту под контролем рН-метра ЛПУ-340. Измерение рН в опыте прово дили каждые 5 минут. Кровь для исследования брали до введения молочной кислоты (контроль), через 30 минут при рН 7,2;

через 60 минут при рН 7,0;

через 120 минут при уровне рН 6,8;

и через 180 минут при значении рН 6,5. Указанные параметры использованы, исходя из того, что коррек ция лактат-ацидоза тем продолжительнее, чем в большей степени нарушен кислотно-основный баланс и значительнее сдвиг рН в кислую сторону.

Результаты исследований показали, что в контроле имеются различия в показателях систе мы гемостаза, которые связаны с неодинаковыми значениями рН в крови бедренной артерии и во ротной вены. РН крови бедренной артерии составляет 7,4, а воротной вены – 7,36, что соответ ствует общепринятой норме. Время рекальцификации достоверно было короче в крови воротной вены на 13,3% (р0,05), тромбиновое время на 25,4% (р 0,001). Остальные показатели изменя лись недостоверно.

При создании ацидоза со сдвигом рН в бедренной артерии до 7,1, а в воротной вене до 7, скорость свертывания крови резко возрастала и составляла в артерии – 61,8 с, в вене – 57,0 с (р 0,001). Протромбиновое время достоверно удлинялось в артерии с 23,7 до 27,2 с (р 0,02) и недо стоверно в воротной вене с 22,8 до 25,8 с (р 0,1). Тромбиновое время в артерии, при сдвиге рН крови в кислую сторону до 7,0-7,1, укорачивалось с 41,0 с до 35,2 с (р0,1), а в вене с 31,0 до 27, (р 0,001). Сдвиг рН крови до 6,8 приводит к достоверному удлинению времени рекальцифика ции и протромбинового времени. Это вероятно связано с нарушением полимеризации фибрина.

Потребление протромбина по мере сдвига рН в кислую сторону возрастало более, чем в два раза, но в связи с большим разбросом значений достоверных результатов получить не удалось. Актив ность фибринстабилизирующего фактора при сдвиге рН в кислую сторону резко снижалась, время образования сгустка как в артерии, так и в вене значительно удлинялось, в отдельных опытах определить действие фибриназы не удалось.

В результате развития диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови уровень фибриногена закономерно уменьшался. Значительное падение концентрации фибриногена наблю далось уже при рН 7,1 в артерии и 7,0 в вене соответственно с 16,4 до 11,4 мг/мл (р 0,001) и с 18,9 до 12,6 мг/мл (р 0,01). При рН 6,8 наблюдалось дальнейшее уменьшение содержания фиб риногена в крови. Параллельно со снижением концентрации фибриногена пропорционально нарастал уровень продуктов деградации фибриногена и фибрина (таблица 3).

Таким образом, кровь, проходящая через органы желудочно-кишечного тракта при систем ном ацидозе, вызванном внутривенной инъекцией молочной кислоты, и поступающая в порталь ную систему подвержена существенным гемокоагуляционным сдвигам. Эти изменения могут быть расценены как развитие ДВС-синдрома при лактат-ацидозе.

Таблица 3. Влияние различной степени лактат-ацидоза на некоторые показатели гемокоагуляци онного гемостаза у кошек (М ± m).

Изучаемые Контроль Опыт показатели До введения лактата После введения лактата Бедренная Воротная Бедренная Воротная Бедренная Воротная артерия вена артерия вена артерия вена рН 7,4 рН 7,36 рН 7,0 рН 7,0 рН 6,8 рН 6, Время ре- 84,4 ± 3,8 73,2 ± 3,4 61,8 ± 1,6 57,0 ± 2,0 147,5 ± 9,0 138,3 ± кальцифи- р 0,05 р 0,001 р 0,001 р 0,001 10, кации (с) р 0, n = Протромби- 23,7 ± 1,1 22,8 ± 1,1 27,2 ± 1,4 25,8 ± 1,4 31,3 ± 2,9 38,0 ± 2, новое время р 0,1 р 0,05 р 0, p 0,4 p 0, (с) n = Тромбино- 41,0 ± 2,65 31,0 ± 2,85 35,2 ± 3,28 27,2 ± 0,98 нет нет вое время р 0,01 р 0,001 сгустка сгустка p 0, (с) n = Потребле- 42,6 ± 54,4 ± 108,8 ± 118,1 ± нет нет ние сгустка сгустка 8,7 10,7 42,5 48, протром- p 0,3 p 0,2 p 0, бина(с) n = Фактор 143,0 ± 133,7 ± 300 300 300 (c) n = 14 17,1 13,6 p 0,001 p 0,001 p 0,001 p 0, p 0, Количество 16,4 ± 18,9 ± 11,4 ± 12,6 ± 11,2 ± 10,3 ± фибриноге- 1,1 1,4 1,1 1,3 2,3 1, на(мг/мл) p 0,2 p 0,001 p 0,01 p 0,05 p 0, n = ПДФ (мг%) 3,9 ± 4,2 ±0,2 6,2 ± 0,3 8,2 ± 0,4 10,4±0,4 12,6±0, n = 12 0,3 p 0,2 p 0,01 p 0,001 p 0,001 p 0, Примечание: р - достоверность различий между контролем и опытом;

n - количество исследований.

2.5.1.3. Выделение тканевых факторов гемостаза из интактного изолированно го сердца, при аноксии и ацидозе.

Большой интерес представляет изучение аноксических состояний на механизм выделения тканевых факторов свертывания крови из сердца. Для исследования этого процесса были прове дены опыты на 7 изолировнных и активно сокращающихся сердцах. Аэрированную питательную жидкость начали собирать на 8 минуте. Через 3-5 минут перфузионный раствор заменяли на жид кость какого же состава, но обедненную кислородом и на 13,14,15, 20 минутах производили взятие проб перфузатов на фоне развивающейся гипоксии. В дальнейшем изучали влияние раствора на гемококоагуляцию (Таблица 4, рисунок 3).

Было обнаружено, что перфузаты, взятые до прекращения аэрации (фоновые пробы пер фузата), обладали незначительным тромбопластическим действием. Они увеличивали потребле ние протромбина на 15%. После замены перфузионной жидкости неаэрированным раствором ин тенсивность выхода соединений, ускоряющих свертывание крови, увеличивалась. При этом время рекальцификации плазмы подвоздействие перфузата по мере нарастания гипоксии прогрессивно увеличивалось и в конце опыта составило 68,8% (р0,001). Потребление протромбина возрастало на 45,8 % по отношению к контролю и на 26,4% по отношению к пробе, взятой до отключения аэрации.

Протромбиновое время в некоторых пробах перфузата, полученных во время гипоксии до стоверно укорачивалось с 15,1 до 14,1 сек (р0,05). Тромбиновое время незначительно удлиня лось под влиянием аэрированного физиологического раствора, прошедшего через сердца и со кращалось по сравнению с фоном при гипоксии. В гепаринизированной плазме тромбиновое вре мя укорачивалось в фоновых пробах и увеличивалось при развитии аноксии по отношению к фону на 28,3% (р0,1). Фибринолитическая активность плазмы при внесении проб перфузата увеличи валась. Максимальное сокращение лизиса эуглобулинов наступало при внесении пробы перфуза та, взятой на первых минутах гипоксии.

Во всех опытах оттекающая от сердца жидкость имела менее щелочную реакцию, чем ис ходный перфузионный раствор, рН которого равнялся 7,43. Известно, что гипоксия в условиях це лостного организма приводит к развитию гиперкоагуляции. В задачу наших исследований входи ло изучение роли гипоксии как местного фактора, воздействующего на сердце, в регуляции свер тывания крови и фибринолиза.

Полученные данные свидетельствуют о повышенной способности сердца в условиях гипо ксии выделять тканевые соединения тромбопластической активности. Фибринолиз усиливается на протяжении всего эксперимента, однако наиболее выраженный эффект отмечен на первых мину тах гипоксии. Это, видимо, связано с выбросом из работающего сердца активаторов плазминогена.

Гипоксия продолжалась 8-10 минут, на протяжении этого времени резкого смещения рН в кислую сторону обнаружено не было. Это можно объяснить медленным течением гликолитических про цессов в сердечной мышце.

Было изучено также влияние ацидоза на выход тканевых факторов свертывания крови из работающего сердца. С этой целью использовали молочную кислоту, которую вводили в перфу зионную жидкость в соотношении 1: 20000 (5 мг%) на 11-12 минуте перфузии, т.е. после взятия фоновых проб.

Присутствие молочной кислоты в перфузионной жидкости незначительно изменяло пока затели гемокоагуляции и метаболизма (таблица 5, рисунок 4). В частности отмечалось достовер ное увеличение толерантности плазмы к гепарину, активация фибринолиза и сдвиг рН раствора в кислую сторону. В тоже время внесение субстратной плазмы рН пробы возвращалось к контроль ному. Изменение других показателей (время рекальцификации, потребление протромбина) были лишь вероятными и свидетельствовали о начинающейся гиперкоагуляции. Приведенные данные свидетельствуют о стимулирующем действии даже незначительных концентраций молочной кис лоты на процессы свертывания крови.

Под влиянием перфузатов наблюдается ускорение процессов свертывания крови. На фоне пропускания молочной кислоты уже на первых минутах рН пробы изменяется от 7,067 до 6,62, хо тя содержание тромбопластина в перфузате остается на прежнем уровне. Влияние лактата на вы брос тромбопластина из сердца проявляется не сразу, а приблизительно через 4-5 минут. С наибольшей четкостью от проявляется в пробе, взятой на 6-ой минуте после введения кислоты.

При этом наблюдается максимальное по отношению к контролю укорочение времени рекальци фикации с 112,1 до 66,6 сек (р0,05). К данному сроку возрастает также потребление протромби на, толерантность плазмы к гепарину, а также укорачивается протромбиновое время. Фибриноли тическая активность крови прогрессивно увеличивается в пробах, взятых в более поздние сроки перфузии. Возможно, это связано, как со сдвигом рН крови, так и поступление в кровоток актива торов фибринолиза из работающего сердца.

Таким образом, лактат способен оказывать непосредственное влияние на систему сверты вания крови, а также стимулировать выход из сердца тканевых соединений, влияющих на гемоко агуляцию и фибринолиз.

Таким образом, аноксия, вызываемая прекращением аэрации жидкости, поступающей к сердцу, является мощным возмущающим фактором, способным привести к значительным сдвигам в свертывающей и фибринолитической активности крови, контактирующей с сердцем. Это может явиться предпосылкой для развития внутрисосудистого тромбообразования. В условиях гипоксии защитные противосвертывающие механизмы, по всей вероятности, работают не достаточно эф фективно. Сердце, являющееся органом с хорошо развитыми аэробными механизмами и слабыми гликолитическими процессами очень чувствительно к гипоксии. Поэтому на гипоксию сердце от вечает рядом биологических защитных реакций, накладывающих отпечаток и на процессы гемо коагуляции.

Таблица 4. Влияние перфузионной жидкости, пропущенной через сердце до и после отключенной аэрации, на свертываемость крови и фибринолиз.

Изучаемый Контроль (перфузионная жидкость Опыт (перфузионная жидкость после показатель на фоне аэрации) отключения аэрации) Время взя- - 8 9 10 13 14 15 тия пробы (мин) рН пробы рН 7,43 рН рН 7,31 рН рН рН рН рН 7,38 7,3 7,164 7,164 7,18 7, Время 93,1± 92,7± 92,7± 94,4± 86,2± 81,5± 63,8± 92, рекальци- ±5,1 5,13 4,7 6,33 9,82 8,87 9,3 4, фикации р0, Потребле- 45,4± 47,4± 52,8± 59,8± 59,1± 60,6± 77,3± 40, ние про- ±3,5 3,37 4,58 5,49 9,6 11,34 17,8 21, тромбина р0,2 р0,2 р0,1 р0,1 р0,2 р0, Протром- 15,1± 14,9± 14,7± 15,1± 14,2± 14,1± 14,5± 13,9± биновое 0,8 0,64 0,42 0,84 0,66 0,30 0,81 0, время р0,05 р0, Тромбино- 28,7± 29,9± 29,7± 29,4± 29,1± 27,5± 27,1± 26,9± вое время 0,82 1,76 1,15 1,4 1,21 0,82 0,25 1, р0, Тромбино- 48,8± 47,4± 44,7± 44,8± 45,2± 46,5± 50,5± 57,5± вое время 3,41 3,41 3,64 4,37 4,68 4,22 4,71 7, гепа- р0, рин.плазмы Фибрино- 55± 52 ± 44 ± 42 ± 44 ± 37 ± 40 ± 41 ± лиз 4,84 5,74 9,55 9,08 2,82 5,97 4,84 6, р0,05 р0,05 р0,05 р0, Примечание: р - достоверность различий между контролем и опытом, n – количество исследований.

Влияние перфузионной жидкости, пропущенной через сердце до и поле аэрации % Время рекальцификации Потребление протромбина Толерантность Отключена аэрация плазмы к гепарину Протромбиновое время Тромбиновое время Тромбиновое время геп.плазы Фибринолиз рН 7,43 7,38 7,31 7,3 7,164 7,164 7,18 7, Рисунок. 3. Влияние перфузионной жидкости, пропущенной через сердце до и после отключения аэрации на гемокоагуляцию.

Между действием аноксии и ацидозом на свертывание крови имеется общность. Тромбопластиче ская и антигепариновая активность по мере перфузии и оттекающей от сердца жидкости возраста ет. Уровень антикоагулянтов и фибринолитическая активность остаются относительно стабиль ными на протяжении всего опыта. Таким образом, свертывание крови и фибринолиз могут значи тельно изменяться в процессе прохождения крови через работающее сердце.

Таблица 5. Влияние перфузионной жидкости, пропущенной через сердце до и после добавления молочной кислоты, на свертываемость крови и фибринолиз.

Изучаемый по- Контроль Опыт казатель Перфузионная жид- Пробы перфузатов кость без лакта- с лак До добавления После добавления лактата в та татом лактата разведении 1:20 Время взятия - - 8 9 12 13 пробы (мин) рН пробы рН 7,328 рН 7,09 рН рН рН рН рН 7,07 7,06 6,62 6,44 6, Время 112,1± 92,1± 79,8± 77,4± 77,3± 68,6± 66,6± рекальцифика- 3,56 3,56 13,6 15,1 13,3 14,9 15, ции р0,1 р0,05 р0,05 р0,05 р0,05 р0, Потребление 18,4± 33,1± 36,3± 39,1± 36,1± 50,4± 45,4± протромбина 2,6 11,2 12,3 13,7 9,6 14,3 11, р0,2 р0,2 р0,2 р0,2 р0,1 р0, Протромбино- 10,1± 10,3 ± 9,9± 10,1± 10,3± 9,4± 9,3± вое время 0,6 1,16 0,6 0,81 1,1 0,91 1, Тромбиновое 36,3± 37,1± 36,4± 36,9± 33,9± 33,6± 32,6± время 1,4 0,94 1,4 0,71 1,05 1,4 1, р0,1 р0,2 р0, Тромбиновое 86,3± 79,1± 81,9± 83,4± 112,6± 95,3± 88,3± время гепа- 5,9 3,59 7,33 5,9 28,4 24,1 22, рин.


плазмы Фибринолиз 83± 83± 81± 78± 79± 76± 92± 3,36 3,62 3,04 3,36 5,61 6,0 5, р0,05 р0,05 р0,05 р0,05 р0,05 р0, Примечание: р - достоверность различий между контролем и опытом, n – количество исследований.

Вдияние перфузионной жидкости на некоторые показатели гемостаза до и после добавления лактата % Время рекальцификации Добавление лактата Потребление протромбина Толерантность 200 плазмы к гепарину Протромбиновое время 150 Тромбиновое время Тромбиновое 100 время геп.плазы Фибринолиз рН 7,32 7,09 7,07 7,06 6,62 6,44 6, Рисунок. 4. Влияние перфузионной жидкости, пропущенной через сердце до и после введения лактата на гемокоагуляцию.

2.5.1.4. Влияние лактат-ацидоза на агрегацию и дзета-потенциал тромбоцитов.

Метаболический ацидоз оказывает влияние не только на гемокоагуляционный гемостаз, но также существенно изменяет функции тромбоцитов.

Анализ кривых агрегаций в контрольных наблюдениях показывает, что тромбоциты без добав ления агрегирующего агента не склеиваются (рисунок 5). Через 9 секунд после внесения АДФ в кюве ту с плазмой начинается интенсивная агрегация пластинок, о скорости процесса можно судить по углу наклона агрегации, выраженного в градусах. По средним данным в контроле этот показатель равен 65,7°. На исходных кривых видно, что агрегация заканчивается в среднем через 132,7 сек, а затем начинается процесс дезагрегации тромбоцитов. В момент максимальной агрегации просветление плаз мы увеличивалось и составляло 35,7%, при этом величина агрегатов была равной 1,7 мм (по ленте са мописца). Дезагрегация, возникающая вслед за склеиванием кровяных пластинок, возможна лишь в том случае, когда концентрация АДФ в плазме, богатой тромбоцитами, соответствует строго опреде ленной величине в пределах от 0,0005 до 0,0015 мк/мл плазмы. В наших контрольных опытах во всех случаях исследо-вана именно такая концентрация агрегирующего агента. Угол дезагрегации при рН 7,50 равнялся 27,2° и свидетельствовал о ресуспензировании кровяных пластинок. Дезагрегация тром боцитов продолжалась около 450 секунд и никогда не заканчивалась полным восстановлением исход ной плотности плазмы. Это значит, что определенная часть тромбоцитов была соединена в агрегаты.

Амплитуда или степень дезагрегации составляла 19 мм. Если этот показатель вычесть из амплитуды агрегации, получится величина (равная 16,7 мм), отражающая степень просветления плазмы, связан ную с неполной дезагрегацией кровяных пластинок. Кривые агрегации, записанные при рН 7,4 - 7,5, характеризуют нормальную реакцию тромбоцитов на дозу АДФ, равную 0,0005 мк/мл плазмы.

Замена в изучаемых пробах физиологического раствора на различные концентрации молочной кислоты приводила к изменению характера агрегации тромбоцитов (рисунок 6).

При уменьшении рН до 7,34 в отдельных случаях появлялась спонтанная агрегация тромбоцитов, которая составляла по средним данным 2,5°, при этом время начала агрегации после внесения АДФ увеличивается, но не достоверно. Угол агрегации днижалея до 59,0°. Процесс становился более рас тянутым, он удлинялся до 369 сек., однако ввиду большой вариабильности результатов эти изменения не достоверны. Амплитуда агрегации пластинок уменьшалась, величина агрегатов оставалась практи чески неизменной. Сдвиг реакции среды в кислую сторону приводит также к снижению интенсив ности дезагрегации. Более выраженные изменения агрегации наблюдались, если рН пробы равнялся 7,18 (рис 16). При такой концентрации водородных ионов во всех опытах обнаружена спонтанная аг регация тромбоцитов. Внесение в кювету калориметра агрегирующего агента усиливало оклеива ние кровяных пластинок, однако средняя величина угла агрегации падала до 42° (p0,01), процесс агрегации становился бесконечным и через 900 сек. плотность плазмы достигала 33,5%. Величина агрегатов при рН 7,13 оставалась такой же, как в контроле, дезагрегация отсутствовала во всех экспе риментах. Дальнейшее подкисление среды приводило к более выраженным изменениям агрегации, основной особенностью которых являлось увеличение угла спонтанной агрегации в присутствии лакта та и блокирование специфического действия АДФ. При рН 6,92 угол спонтанной агрегации тромбоци тов возрастал до 11,3° (р 0,2), при 6,50 до. 16° (р 0,05), при 6,11 до 21,8° (р 0,05) (). Угол наклона агрегации под влиянием АДФ в пробе с рН 6,92 несколько увеличивался, при рН 6,5 и 6,11 внесение АДФ уже не приводило к дальнейшему изменению угла агрегации. "Спонтанное" склеивание кро вяных пластинок в кислой среде всегда было необратимым, амплитуда агрегации со временем увели чивалась.

Подводя итог проделанной серии экспериментов, можно сказать, что изменение реакции сре ды играет важную роль не только в процессах свертывания крови и фибринолиза, но также оказывает выраженное влияние на одно из важнейших звеньев системы гемостаза агрегацию кровяных пласти нок. Нарастание сдвига рН в кислую сторону нарушает естественную, обратимую под влиянием АДФ, агрегацию тромбоцитов. Процесс склеивания тромбоцитов в присутствии молочной кислоты тормо зится, а следовательно, гемостаз в этих условиях должен быть менее эффективным. Но с другой сто роны, обратимость процесса агрегации тромбоцитов при подкислении среды нарушается и ведет к образованию стабильных конгломератов кровяных пластинок. Замедление или нарушение дезагрега ции тромбоцитов при сдвиге рН в кислую сторону может заканчиваться вязким метаморфозом тром боцитов и приводить к повышению свертываемости крови благодаря высвобождению пластиночных факторов.

Таким образом, гиперкоагуляция, возникающая при сдвиге рН в кислую сторону, связана с ря дом факторов: инактивацией антитромбинов, выходом прокоагулянтов из эритроцитов и тромбоци тов, нарушением процессов дезагрегации кровяных пластинок, более быстрой полимеризацией фибрина.

Примеры агрегатограмм.

Рис.5. Варианты кривых агрегации тромбоцитов у здоровых людей под влиянием АДФ.

Кривая агрегации тромбоцитов при рН Кривая агрегации тромбоцитов при рН крови 7,5 (контроль) крови 7, Кривая агрегации тромбоцитов при рН Кривая агрегации тромбоцитов при крови 7,2 рН крови 7, Кривая агрегации тромбоцитов при Кривая агрегации тромбоцитов при рН крови 6, рН крови 6, Кривая агрегации тромбоцитов при рН Кривая агрегации тромбоцитов при рН крови 6,8 крови 6, Рис. 6 Агрегация тромбоцитов кошки под влиянием различных концентраций молоч ной кислоты.

Таким образом, сдвиг рН крови в кислую сторону парализует естественный биологический механизм агрегации тромбоцитов и вызывает спонтанное склеивание кровяных пластинок. Дан ный феномен можно связать с уменьшением дзета-потенциала тромбоцитов, так как избыток про тонов в пробе понижает степень диссоциации карбоксильных групп остатков сиаловых кислот и уменьшает величину электростатического заряда клеток, способствуя неспецифическому взаимо действию и склеиванию кровяных пластинок. Можно предположить, что подобные явления про текают и в целостном организме при ацидозе. Подтверждением этого является значительное уменьшение числа тромбоцитов в общей циркуляции при сдвиге рН в кислую сторону. Агрегаты кровяных пластинок при ацидозе, вероятно, не могут проходить через капилляры и оседать в микроциркуляторном русле.

В наших исследованиях показано, что АДФ-агрегация тромбоцитов in vitro подвержена вы раженному влиянию сдвига рН в кислую сторону. В то же время морфологические исследования свидетельствуют о нарушении структурной целостности эндотелиоцитов, сосудистой стенки, межклеточного матрикса и паренхимы органов. Различные компоненты клеток и тканей могут по падать в сосудистое русло оказывать влияние на гемокоагуляционный и сосудисто тромбоцитарный гемостаз. Для оценки агрегационной функции кровяных пластинок обычно ис пользуются АДФ, адреналин, коллаген, тромбин, ристоцитин.

В предыдущих сериях экспериментов было показано, что тромбоциты при сдвигах в кис лую сторону или ацидозе способствуют повышению гемокоагуляционных свойств крови и приобре тают способность к спонтанной агрегации. Мы решили изучить, как изменяется электрокинетиче ский потенциал кровяных пластинок при ацидозе, вызываемом внутривенной инъекцией молочной кислоты.

Для решения поставленной задачи производилось определение дзета-потенциала тромбоцитов из крови правого предсердия, легочной артерии, левого предсердия и аорты до и сразу после введе ния кислого буферного раствора с рН 6,5. При этом было обнаружено, что электрокинетический за ряд кровяных пластинок в различных отделах сердечно-сосудистой системы был неодинаковым. В крови правого предсердия и легочной артерии электрокинетический потенциал тромбоцитов был выше, чем в крови левого предсердия и аорты. Величина заряда тромбоцитов из крови правого предсердия равнялась 14,633 мв, легочной артерии -14,903, левого предсердия - 13,826 мв и аорты - 12,979 мв (таблица 6).

Таблица 6. Изменение дзета-потенциала тромбоцитов при ацидозе в различных регионах сердеч но-сосудистой системы (M±m).

До инъекции лактата После инъекции лактата Контроль n=8 n= Пра- Лег. Лев. Аор- Правое Лег. Лев. Аор вое арте- пред- та пред- арте- пред- та пред- рия сер- сердие рия сер сер- дие дие дие 14,63 14,903 13,826 12,97 12,343 12,51 12,45 10, ± ± 9± ± 3 5 8 ±0,49 ±0,52 ±0, + 0,44 0,38 0,60 0, p0,7 p0,3 p0,2 p0,1 p0,1 p0,1 p0, ±0,15 ±0,49 ±0,47 ±0,50 ±0,62 ±0, + p0,1 p0,1 p0,06 p0,0 p0,1 p0, 8 ±0,60 ±0,32 ±0,35 ±0,48 ±0, + p0,4 p0,15 p0,2 p0,2 p0, ±0,89 ±0,94 ±1,03 ±0, + p0,6 p0,7 p0,7 p0, ±0,06 ±0,16 ±0, + p0,6 p0,8 p0, ±0,15 ±0, + p0,9 p0, ±0, + p0, Примечание: р - достоверность различий между контролем и опытом и между опытными проба ми, n – количество исследований.


Таким образом, в аортальной крови - потенциал тромбоцитов имеет наименьшую величи ну. Внутривенное введение кислого буферного раствора с рН 6,5 в количестве 10 мл/кг веса живот ного (собаки) приводило к снижению электрофоретической подвижности кровяных пластинок. Об наруженное падение электрокинетического потенциала выражалось в следующих в правом предсер дии - на 15,7%, в легочной артерии на -16,1%, в левом предсердии - на 9,9% и в аорте - на I5,4%. Паде ние дзета-потенциала тромбоцитов в крови всех отделов сердечно-сосудистой системы было практи чески одинаковым и только в крови из левого предсердия оно проявлялось в меньшей степени. Со поставляя эти данные с изменением концентрации водородных ионов, можно прийти к заключению, что между рН и величиной дзета-потенциала имеется прямая зависимость: чем меньше показатель концентрации водородных ионов, тем меньше электрокинетический потенциал тромбоцитов. Из этого также следует, что ацидоз может приводить к снижению электрических сил распора между тромбоцитами и способствовать прилипанию кровяных пластинок к сосудистой стенке. Все это явля ется одним из ведущих факторов, создающих условия для адгезии тромбоцитов, нарушения микро циркудяции со всеми вытекающими отсюда последствиями.

2.5.1.5 Инструментальные методы исследования системы гемостаза при лак тат-ацидозе.

Инструментальные методы исследования свертывания крови при различных уровнях рН проводились с помощью тромбоэластографа и электрокоагулографа.

Для исследования использовали цитратную кровь. Свертывание в кювете, как в контроле, так и после внесения различных концентраций молочной кислоты вызывали внесением 1,29% рас твора хлорида кальция.

На тромбоэластограмме определяли следующие показатели:

R – момент от начала записи до расхождения краев ТЭГ на 1 мм. Этот показатель носит название времени реакции и характеризует I и II фазы процесса свертывания крови;

К – момент от конца времени реакции до расхождения краев ТЭГ до 10 мм – время образо вания сгустка крови. Этот параметр характеризует концентрацию образовавшегося тромбина и ко личество фибриногена;

R+К – константа коагуляции, отражает общую длительность свертывания крови;

t – константа свертывания крови, измеряется от конца периода К до максимальной ампли туды ТЭГ и соответствует периоду от конца видимого свертывания крови до начала ретракции кровяного сгустка;

Т – константа тотального свертывания крови, измеряется от начала записи ТЭГ до макси мального расхождения линий ТЭГ. Представляет собой арифметическую сумму R+K+t. Уменьше ние константы Т указывает на гипер-, а увеличение – на гипокоагуляцию;

угол – угловая константа, отражает динамику образования фибрина;

МА – максимальная амплитуда – расстояние между краями тромбоэластограммы;

Е – коэффициент эластичности, вычисляется по следующей формуле:

Е = (100 МА) : (100 – МА);

J – тромбоэластический индекс, вычисляется по формуле:

J = Р (мин) К (мин) / МА (мм), в норме он колеблется от 0,88 до 1,28;

Тромбоэластографические исследования были проведены в семи опытах при изменении рН крови животного (кошки) от 7,4 (контроль) до 6,5 в опыте. Кровь для изучения ТЭГ брали в кон троле из бедренной артерии, а в опыте также из печеночной вены. Молочную кислоту 3% концен трации вводили внутривенно до достижения необходимого рН и экспозиции ацидоза.

При рН 7,4 показатели ТЭГ характеризовались следующими величинами: R – 216 c;

k – с;

Р+k – 312 c;

MA – 34 мм;

угол – 8о;

Е – 51,5;

J – 1,6. Сдвиг рН до 7,2 характеризовался значи тельным изменением некоторых показателей ТЭГ (рисунок 7). В бедренной артерии длительность I и II фаз процесса свертывания крови момент (R) значительно укорачивалась и составила 66 с, время образования сгустка (k) уменьшалось до 48 с, константа коагуляции (R+k), зависящая от концентрации плазменных факторов (кроме VII и XIII) и уровня антикоагулянтов резко укорачи валась с 312 с (контроль) до 104 с в бедренной артерии и до 126 с в крови, оттекающей от печени.

Максимальная амплитуда, характеризует главным образом, содержание фибриногена, в крови при рН 7,2 увеличивается до 37 – 42 мм. Однако этот факт, скорее всего, связан не с увеличением кон центрации фибриногена, а с усилением его реакционной способности, проявляющейся при сдвиге рН крови до 7,2. В гемокоагуляционных тестах при таком рН наблюдается наибольшая скорость рекальцификации плазмы при некотором снижении уровня фибриногена и антикоагулянтов.

Угловая константа (), характеризующая скорость формирования фибринового сгустка при рН 7,2 возрастала с 8о до 14о в бедренной артерии и до 15о в воротной вене. Следовательно, про цесс фибринообразования при сдвиге рН крови под влиянием инъекции молочной кислоты воз растает почти в два раза.

Коэффициент эластичности фибринового сгустка (Е) крови бедренной артерии при рН 7, составляет 51,5, а при рН 7,2 в артериальной крови увеличивается до 58,7 и в воротной вене до 72,4. Поскольку количество фибриногена при данных значениях рН снижается, то эти изменения можно связать со снижением антикоагулянтной активности крови. Об этом свидетельствует уко рочение тромбинового времени при рН 7,2 в гемокоагуляционных тестах, которое также зависит от уровня фибриногена и антикоагулянтов крови. Тромбоэластографический индекс (J) резко уменьшается при сдвиге рН крови до 7,2, что свидетельствует о возникновении выраженной ги перкоагуляции и совпадает с изменениями гемокоагуляционных показателей (временем рекаль цификации, тромбиновым временем, потреблением протромбина). Другие показатели тромбоэла стограммы изменялись незакономерно, поэтому не были подвергнуты анализу.

В следующей серии экспериментов было исследовано влияние сдвига рН крови до 6,8 и экспозиции ацидоза 120 минут. По данным гемокоагуляционных тестов, такое изменение рН в кислую сторону приводило к выраженной гипокоагуляции. Время рекальцификации удлинялось в бедренной артерии с 54,4 с до 147,5 с (Р 0,001), тромбиновое время не определялось, а уровень фибриногена в крови бедренной артерии уменьшался на 5,3 мг/мл. Показатели ТЭГ, в отличие от гемокоагуляционных тестов, свидетельствовали об укорочении I и II фаз свертывания крови, по явление первых нитей фибрина. Однако, эластичность фибринового сгустка, исходя из значений максимальной амплитуды, очень незначительна и при визуальном определении времени рекаль цификации не определяется. Поэтому время рекальцификации плазмы при сдвиге рН до 6,8 реги стрируется значительно позднее, а в некоторых опытах визуально образование сгустка вообще не удается обнаружить (рисунок 8). Дальнейший сдвиг рН до 6,5 и экспозиции ацидоза 180 минут по данным ТЭГ первые нити фибрина появляются на 48 с, а максимальная амплитуда около 5 мм возникает на 108 с. Угол составляет при рН 6,5 5о, коэффициент эластичности (Е) 5,3. Все эти изменения свидетельствуют о возникновении фибринового сгустка очень низкой эластичности (рисунок 9).

Рисунок 7. Изменения параметров тромбоэластограммы при лактат-ацидозе.

1. – тромбоэластограмма крови бедренной артерии рН 7,4 (контроль).

2. – тромбоэластограмма крови бедренной артерии рН 7,2 (опыт).

3. – тромбоэластограмма крови печеночной вены рН 7,2 (опыт).

Рисунок 8. Изменения параметров тромбоэластограммы при лактат-ацидозе.

1. – тромбоэластограмма крови бедренной артерии рН 7,4 (контроль).

2. – тромбоэластограмма крови бедренной артерии рН 6,8 (опыт).

Рисунок 9. Изменения параметров тромбоэластограммы при лактат-ацидозе.

1. – тромбоэластограмма крови бедренной артерии рН 7,4 (контроль).

2. – тромбоэластограмма крови бедренной артерии рН 6,5 (опыт).

Таким образом, ТЭГ по многим показателям подтверждает данные, полученные гемокоагу ляционными методиками. Однако следует отметить, что в биохимических тестах, образование фибрина фиксируется визуально, это приводит к существенным различиям в определении начала свертывания крови по сравнению с данными ТЭГ. Во – первых время появления первых нитей фибрина при сдвиге рН крови до 6,8-6,5 на ТЭГ фиксируется значительно раньше, благодаря чему оценивается начало образования сгустка, даже там, где визуально при определении времени ре кальцификации его обнаружить не удается. Во-вторых, с помощью ТЭГ, удается установить, что лишь незначительная часть фибрин-мономеров полимеризуется, образуя рыхлый сгусток, неспо собный осуществлять надежный гемостаз. Данное явление, прежде всего, можно объяснить про тонированием гистидина (аминокислоты, расположенной на конце мономера фибрина) и наруше нием реакции между тирозином и гистидином в процессе полимеразации фибрина.

Электрокоагулографические исследования подтверждают данные, полученные коагулоло гическими методами.

Кровь для исследования брали у кошки в контроле и при ацидозе (рН 7,2 экспозиция мин) из бедренной артерии в силиконированную пробирку, а из воротной вены набирали в сили конированный шприц и засекали время на секундомере. В контроле в бедренной артерии начало свертывания (Т1) составляло 160 с (с учетом данных секундомера), конец свертывания (Т 2) состав ляло 230 с, продолжительность свертывания была равной 70 с. В опыте при сдвиге рН в кислую сторону до 7,2 начало свертывания в бедренной артерии укорачивалось до 50 с, а в печеночной вене 70 с. Продолжительность свертывания сокращалось в бедренной артерии и печеночной вене соответственно до 40 и 30 с (рисунок 10). Полученные данные согласуются с показателями време ни рекальцификации и тромбинового времени. Это свидетельствует о том, что сдвиг рН в кислую сторону до 7,2, приводит к развитию гиперкоагулемии.

Рис. 10. Изменения параметров электрокоагулограммы при различных уровнях рН.

1. – электрокоагулограмма крови бедренной артерии рН 7,4.

2. – электрокоагулограмма крови бедренной артерии рН 7,2.

3. – электрокоагулограмма крови печеночной вены рН 7,2.

2.5.2. Механизмы развития морфологического эквивалента ДВС – синдрома.

Для изучения морфологической картины сопутствующей коагулолитическим нарушениям в форме ДВС-синдрома исследовали гистологические, гистохимические и электоронномикроско пические изменения в крови, сосудистых стенках, межклеточном матриксе, клетках различных органов и субклеточных структурах. В этом аспекте были изучены сосуды и ткани тимуса, селе зенки, лимфатических узлов, сердца, печени, почек, легких, кишечника.

Было установлено, что при ацидозе различной глубины (от рН 7,2 до рН 6,5) и продолжи тельности (от 30 до 180 мин) всегда обнаруживались признаки нарушения микроциркуляции (микротромбозы и микрокровоизлияния), а в крупных сосудах сладжи эритроцитов и тромбы, фиксированные к субэндотелию (фото 1 - 12). Ацидоз приводит к изменению субклеточных и кле точных структур, компоненты которых попадают в межклеточную среду, лимфу, кровь.

Сдвиг рН крови до 7,2 продолжительностью 30 мин сопровождается полнокровием сосу дов органов, отеком сосудистой стенки и околососудистого пространства, лимфостазом, агрегаци ей форменных элементов крови. При оптической микроскопии наблюдаются явления застоя крови различной степени выраженности, начиная с эритроцитов, накопленных в капиллярах и кончая образованием тромбов и микротромбозов в различных участках сосудистой сети (фото 1, 4, 8, 9, 11). Морфологические изменения при сдвиге рН до 7,2 приводят не только к изменению агрегат ного состояния крови, но и вызывают нарушение структуры эндотелия сосудов. При электронной микроскопии наблюдается деформация поверхности эндотелиоцитов, образуются выросты из ци топлазматической мембраны, которые отрываются в виде небольших везикул и попадают в крово ток. Ацидоз ведет к нарушению структурной целостности клетки. Наиболее разнообразные изме нения отмечаются в митохондриях.

Сдвиг рН крови до 7,0 продолжительностью 60 мин приводит к стазу микроциркуляции, тромбозам в общей циркуляции (фото 2, 3, 5, 6, 12). В сосудистом русле нарастают явления диссе минированного внутрисосудистого свертывания, усиливаются тромботические и геморрагические явления. При рН 7,0 и ниже повреждение клеток эндотелия при сдвиге рН в кислую сторону, при водит к выходу во внеклеточную среду, а затем в кровь и лимфу, ферментов, органоидов (цито плазматических включений, лизосом, митохондрий и их разрушенных компонентов), обладаю щих, прежде всего, прокоагулянтной активностью.

При рН 6,8 – 6,5 (120 – 180 мин) происходит повреждение межклеточного вещества, клеток крови и лимфы. ДВС нарушает процессы микроциркуляции в различных органах (легкие, почки, печень, сердце, тимус, селезенку, лимфатические узлы, желудочно-кишечный тракт).

Нами была прослежена зависимость образования сладжей и тромбов в венозных и артери альных сосудах в зависимости от сдвига рН в кислую сторону и экспозиции ацидоза в органах пищеварения.

В печени при рН 7,2 образуются преимущественно сладжи эритроцитов в артериях, а так же в венозных и более мелких сосудах. По мере сдвига рН в кислую сторону, процентное соотно шение образования сладжей и тромбов сдвигается в сторону преобладания последних. При рН 7, (экспозиция ацидоза 30 минут) это соотношение в печени составляет 60% и 40%, при рН 7,0 (экс позиция ацидоза 60 минут) 40% и 60% (таблица 7). При уровне рН 6,8 и 6,5 – 20% и 80%. Анало гичная картина наблюдается в процентном соотношении сладжей и тромбов в сосудах поджелу дочной железы. Отличительной особенностью является большее количество тромбов, образую щихся при рН 6,5 (таблица 7).

В пищеводе уже при рН 7,2 соотношение сладжей и тромбов является одинаковым, а при рН 6,8 количество тромбов составляет 80%, это соотношение сохраняется и при рН 6,5 (фото 1, 2, 3;

таблица 7).

Кровь в сосудах желудка более устойчива к процессам тромбообразования при сдвиге рН во внутренней среде. Поэтому при рН в сосудах желудка 7,2 значительно преобладают сладжи, и только в 20% случаев образуются тромбы. При нарастании глубины и экспозиции ацидоза соот ношение меняется в сторону тромбообразования. При сдвиге рН до 6,5 количество тромбов в со судах становится равным 90% (фото 3, 4;

таблица 7).

В сосудах двенадцатиперстной кишки при рН 7,2 соотношение сладжей и тромбов состав ляет 70% и 30% соответственно. Сдвиг рН до 7,0 увеличивает число тромбов до 50%, а при рН 6, и 6,5 в основном наблюдается до 80-90 % тромбированных сосудов (таблица 7).

В тонком кишечнике исследовались сосуды всех слоев и сосуды адвентициальной обо лочки, в качестве примера использовали сосуды подвздошной кишки. В этом отделе пищевари тельного тракта наблюдается наиболее выраженное тромбообразование при самых незначитель ных изменениях уровня рН в кислую сторону (до рН 7,2 и экспозиции 30 минут). Аналогичные данные наблюдаются при рН 6,5, все изученные нами сосуды были тромбированы (таблица 7).

Сосуды толстого кишечника под влиянием ацидоза также подвержены тромбированию. При рН 7,2 соотношение сладжей и тромбов в различных отделах толстого кишечника (слепая, обо дочная, сигмовидная и прямая кишка) составляют соответственно 60-70% и 30-40% (фото 5). Ко личество тромбов по мере углубления ацидоза в этих отделах нарастает. Наименьшее количество тромбов при рН 6,5 выявлено в ободочной кишке (70%), а наибольшее – в прямой кишке (100%) (таблица 7).

Таблица 7.Процентное соотношение сладжей (С) и тромбов (Т) в различных органах пищеварения при лактат-ацидозе.

рН крови 7,2 7,0 6,8 6, Орган n С Т С Т С Т С Т Печень 40 60 40 40 60 20 80 20 Поджелудочная 40 60 40 40 60 30 70 10 железа Пищевод 40 50 50 40 60 30 70 10 Желудок 40 40 60 40 60 30 70 10 Двенадцатиперстная 40 70 30 50 50 20 80 10 кишка Подвздошная 40 20 80 20 80 30 70 0 кишка Слепая кишка 40 70 30 50 50 20 80 10 Ободочная кишка 40 60 40 60 40 30 70 30 Сигмовидная кишка 40 70 30 50 50 20 80 10 Прямая кишка 40 70 30 70 30 50 50 0 Таким образом, ацидоз сопровождается не только гемостатическими сдвигами крови, но также приводит к развитию морфологического эквивалента ДВС-синдрома. Между процессами тромбирования сосудов различных органов пищеварения имеются существенные различия, кото рые могут быть связаны как с особенностями тканей этих органов, так и со степенью нарушения их структуры при ацидозе, а также величиной рН крови.

Сосуды и ткани различных органов содержат соединения с прокоагулянтной, антикоагу лянтной и фибринолитической активностью. Повреждения, вызываемые различными факторами, могут привести к нарушению сосудистой стенки и структуры клеточных элементов органов.

Ацидоз, возникающий при различных патологических состояниях, ведет к нарушению структурной организации не только сосудов, но и клеток органов и субклеточных образований.

При рН 7,2-7,0 наблюдается полнокровие сосудов, отек сосудистой стенки и околососуди стого пространства, застой крови различной степени выраженности, микротромбозы и микрокро воизлияния. При более низком рН в отдельных сосудах выявляется десквамация эндотелия и нарушение структуры эндотелиоцитов, обнажение субэндотелия. Эти явления наблюдаются в поджелудочной железе (фото 6) и печени (фото 7).

Сдвиг рН в общей циркуляции до 7,2 по данным электронной микроскопии вызывает де формацию поверхности эндотелиоцитов, образуются выросты из цитоплазматической мембраны, микровезикулы, которые могут отрываться от поверхности клеток и попадать в просвет сосуда.

Учитывая наличие в мембранах эндотелия фосфолипидов с различной прокоагулянтной активно стью, можно сделать предположение об их важной роли в развитии гиперкоагулемии при лактат ацидозе (фото 8, 9). При рН 7,0 и продолжительности ацидоза 30 мин мембраны отдельных эндо телиоцитов полностью разрушаются, количество микровезикул резко возрастает, содержимое кле ток поступает в капиллярное русло (фото 10).

Фото 1. Пищевод. Тромбоз артериального сосуда. Отек мышечной оболочки при рН крови 7,15 и экспозиции ацидоза 41 мин. Окраска гематоксилин-эозин. Ув.: ок.7;

об.8.

Фото 2. Пищевод. Тромбоз артерии. Сгусток крови прикреплен к стенке сосуда в области десквамированного эндотелия. Отек околососудистого пространства и мы шечной оболочки при рН крови 7,0 и экспозиции ацидоза 180 мин. Окраска Ван Гизон. Ув.: ок.7;

об.8.

Фото 3. Желудок кошки, мышечная оболочка. Сладжи эритроцитов в артерии и отек мы шечной оболочки, расслоение и набухание коллагеновых волокон при рН 7,0 и экспозиции ацидо за 115 мин. Окраска Гематоксилин-эозин. Ув.: ок.8;

об.9. Микрофотография.

.

Фото 4. Желудок кошки. Сладжи эритроцитов и тромбоз сосудов слизистой оболочки стенки желудка при рН крови 7,2 и продолжительности ацидоза 30 мин. Гематоксилин-эозин.

Ув.: об. 8, ок.7. Микрофотография.

Фото 5. Слепая кишка. Тромбоз артерии адвентициальной оболочки при рН 7,0 и экспозиции ацидоза 40 мин. Окраска Ван-Гизон. Ув.: ок.7;

об.8.

Фото 6. Поджелудочная железа. Тромбоз и утолщение стенки междольковой арте рии и вены в зоне отека органа при рН крови 6,8 и экспозиции ацидоза 60 мин.

Окраска Ван-Гизон. Ув.: ок.7;

об.8.

Фото 7. Печень. Контакты между клетками сглажены. Диапедез эритроцитов в пространства Диссе. Жировая инфильтрация клеток при рН крови 7,1 и экспозиции ацидоза 60 мин. Окраска гематоксилин-эозином. Ув.: ок.7;

об.40.

Фото 8. Желудок. Эндотелиоцит при рН крови 7,2 и экспозиции ацидоза 30 мин.

Нарушение структуры цитоплазматической мембраны. Образуются выросты цито плазматической мембраны и микровезикулы. Перикапиллярный отек. Ув.: 20 000.



Pages:     | 1 || 3 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.