авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 || 3 |

«П.Ф. Забродский, Л.В. Мысник ВОЗДЕЙСТВИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ © П.Ф. Забродский, 2010 ...»

-- [ Страница 2 ] --

Глава 4. ВЛИЯНИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА СОДЕРЖАНИЕ ЛИМФОЦИТОВ В ОРГАНАХ СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА 4.1. Изменение лимфоидных индексов тимуса и селезенки ЛИ тимуса и селезенки характеризует функциональное состояние данных органов системы иммунитета. В тимус из костного мозга мигрируют протимоциты. Клетки, мигрирующие из костного мозга в тимус, называют также стволовыми кроветворными клетками, клетками предшественниками лимфопоэза, лимфоцитами - прекурсорами (Кемилева, 1984;

Галактионов, 1986;

Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002). Только один процент тимоцитов мигрирует в периферические лимфоидные органы и принимает участие в иммуногенезе, остальные Т-лимфоциты погибают в тимусе по механизму апоптоза либо уходят из тимуса живыми и разрушаются в печени, селезенке и кишечнике (Хаитов и др., 2002). Более 95% тимоцитов являются Т лимфоцитами, остальные клетки относятся к лимфобластам, макрофагам, эпителиальным клеткам, тельцам Гассаля, интердигитальным клеткам (Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д., 1980;

Петров, 1987;

Ройт и др., 2000).

Протимоциты (претимоциты) заселяют кортикальную часть долек вилочковой железы, где пролиферируют, после чего переходят в медуллярную часть, из которой происходит их выход в лимфатические сосуды, путем экстравазации в посткапиллярные венулы или транскапсуллярные артерии (Хаитов и др., 2000). Селезенка удаляет из кровотока утратившие функциональную активность эритроциты и лейкоциты, а также образует новые лимфоциты в ответ на попавшие из кровотока чужеродные антигены. Лимфоциты заселяют селезенку путем миграции из тимуса и костного мозга Т- и В-клеток (Петров и др., 1981а;

Петров, Хаитов, 1981б;

Ройт, 1991). ЛИ тимуса и селезенки является косвенным показателем содержания ядросодерщаших клеток в этом органе, в частности, лимфоцитов, в определенной степени он характеризует процессы апоптоза тимоцитов и миграцию их в циркулирующую кровь (Гольдберг и др., 1972;

Тихонов, 1981;

Александров, 1983;

Беликов, 2001).

Исследование влияния острой интоксикации НАК на ЛИ тимуса и селезенки крыс проводилось через 1, 3, 6 cут после отравления. Установлено, что при остром действии НАК через 1-3 сут происходит прямо связанное с дозой снижение ЛИ тимуса. Наибольшие изменения ЛИ тимуса и селезенки отмечались через 1 сут, значимое снижение показателей (р0.05) было зарегистрировано до 3 сут. Через 6 сут ЛИ исследуемых органов восстанавливался до контрольного уровня.

Оценка ЛИ тимуса и селезенки крыс после острого отравления НАК показала наличие дозозависимого действия этого токсиканта через 1 сут после отравления (табл. 4.1).

Таблица 4. Изменение ЛИ (усл. ед.) тимуса и селезенки крыс через 1 сут после острого отравления НАК в зависимости от дозы Доза, LD50 Тимус Селезенка Контроль 2.31±0.22 4.12±0. 0.25 2.05±0.18 3.60±0. 0.5 1.68±0.16* 3.14±0.26* 0.75 1.41±0.14* 2.90±0.30* Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. Установлено, что при действии НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 через 1 сут ЛИ тимуса крыс уменьшался соответственно в 1.13, 1.38 (р0.05) и 1. раза (р0.05), а в селезенке в 1.14, 1.31 (р0.05) и 1.42 (р0.05) раза соответственно.

При подостром и хроническом действии НАК в дозах 0.01 и 0.005 LD в течение 30 и 60 сут соответственно отмечалась приблизительно такая же супрессия показателей, как и при действии НАК в дозе 0.75 LD50 через 1– сут (рис. 4.1).

4, 3,5 * * * 2, * * * 1, 0, Контроль 1/7 LD50 х 6 0.01 LD5030 0.005 LD50 Рис. 4.1 – Изменение ЛИ тимуса и селезенки крыс под влиянием подострого и хронического воздействия НАК.

По оси ординат – показатель ЛИ тимуса и селезенки у крыс, усл. ед. По оси абсциссс – доза (LD50) и экспозиция (сут). В каждой серии использовалось от 8 до животных;

* - различие с контролем достоверно - р0. Зарегистрированные изменения реализуются вследствие действия НАК и его метаболитов на эстеразы и энзимы системы тканевого дыхания лимфоцитов, что может приводить к их апоптозу (Ройт и др., 2000).

Таким образом, под влиянием острой интоксикации НАК происходит дозозависимое существенное уменьшение ЛИ тимуса и селезенки (в диапазоне доз 0.25 – 0.75 LD50) в течение 3 сут с последующим восстановлением этих показателей к 6 суткам. При подостром и хроническом действии НАК отмечалась приблизительно такая же супрессия показателей, как и в дозе 0.75 LD50 через 1-3 сут.

4.2. Содержание лимфоцитов в органах системы иммунитета Нами показано (табл. 4.2), что под влиянием НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 происходит дозозависимое уменьшение содержания лимфоцитов в тимусе через 1 сут после интоксикации в 1.31, 1.65 и 1.91 раза соответственно. Эти изменения достоверны при дозах 0.5 и 0.75 LD (р0.05). Аналогично изменялось содержание лимфоцитов в селезенке, костном мозге и лимфоузлах. Статистически значимое снижение числа лимфоцитов отмечалось в селезенке, костном мозге и лимфоузлах при дозах НАК, составляющих соответственно 0.5 и 0.75 LD50;

0.75 LD50 и 0.5 и 0. LD50 (р0.05).

Таблица 4. Влияние острого отравления НАК на число лимфоцитов в органах системы иммунитета у крыс через 1 сут Органы системы иммунитета Доза, LD50 Тимус Селезенка Костный Лимфоузлы (109) (108) мозг(106) (108) Контроль 1.34±0.12 3.40±0.23 39.40±3.16 0.13±0. 0.25 1.02±0.11 2.82±0.20 36.10±3.20 0.11±0. 0.50 0.81±0.05* 2.32±0.21* 31.05±3.00 0.08±0.02* 0.75 0.70±0.06* 2.10±0.24* 29.00±3.10* 0.07±0.02* Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно – р0. После острого действия НАК в дозе 0.75 LD50, изменения числа лимфоцитов в органах системы иммунитета, выявленные через 1-6 сут, к сут восстанавливались до контрольных значений (рис. 4.2).

В крови и лимфоидных органах через 1 и 6 сут при дозе НАК 0.75 LD происходило снижение содержания лейкоцитов, статистически значимое в крови (через 1-4 сут), тимусе (через 1-6 сут), селезенке (через 1-6 сут), костном мозге (через 1 сут) и лимфоузлах (через 1 сут) (р0.05). Через 9 сут отмечалось восстановление параметров до контрольного значения (рис. 4.2, табл. 4.3).

* 10 * * 1 2 3 4 Контроль 1 3 4 6 (сут) Рис. 4.2 Влияние острого отравления НАК (0.75 LD50) на число лимфоцитов (109/л) в циркулирующей крови у крыс По оси ординат – число лимфоцитов (109/л) в циркулирующей крови у крыс. По оси абсцисс – время после отравления (сут). В каждой серии использовалось от 8 до животных;

* - различие с контролем достоверно - р0. Существующие в настоящее время данные литературы, позволяют высказать предположение, что возможные механизмы, определяющие снижение лимфоцитов в органах иммунной системы после интоксикации НАК, связаны с изменением функции ГГНС (Гурин, 1970;

Горизонтов, а, б) и симпатико-адреналовой системы (Дорошевич, 1971;

Денисенко, 1980), с действием НАК и его метаболитов на многочисленные энзимы иммуноцитов, инициацией ПОЛ.

Таблица 4. Изменение содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета крыс под влиянием острого отравления НАК (0.75 LD50) через 1-9 сут Срок наблюдения, сут Тимус Селезенка Костный Лимфоузлы (109) (108) мозг(106) (108) Контроль 1.34±0.12 3.40±0.23 39.40±3.16 0.13±0. 1 0.70±0.06* 2.10±0.24* 29.00±3.10* 0.07±0.02* 6 0.61±0.07* 2.19±0.22* 35.13±3.18 0.09±0. 9 1.30±0.11 3.03±0.20 37.06±3.12 0.14±0. Примечание: в каждой серии использовалось от 6 до 10 крыс;

* – различие с контролем достоверно - р0. Эти изменения могут вызывать нарушение гемопоэза и гибель иммуноцитов (апоптоз) (Мутускина и др., 2001;

Хаитов и др., 2002;

Claman, 1972, 1993;

Durant S., 1986;

Dhabhar et al., 1996).

Следует отметить, что изменение функционального состояния ГГНС под влиянием токсикантов приводит к перераспределению лимфоцитов (Горизонтов, 1981 б) и их гибели (Ройт и др., 2000;

Забродский, 2002).

При подостром и хроническом действии НАК в дозах 0.01 и 0.005 LD в течение 30 и 60 сут соответственно отмечалась приблизительно такая же редукция показателей, как и при действии НАК в дозе 0.75 LD50 через 1–6 сут (табл. 4.4).

Таблица 4. Влияние подострого и хронического действия НАК на число лимфоцитов в органах системы иммунитета у крыс (M+m) Дозы, LD50,;

Органы системы иммунитета экспозиция, сут Тимус Селезенка Костный Лимфоузлы (109) (108) мозг(106) (108) Контроль 1,34±0,12 3,40±0,23 39,40±3,16 0,13±0, НАК 0,68±0,07* 2,21±0,22* 28,09±3,12* 0,08±0,02* (1/7 LD50 х 6) НАК 0,71±0,05* 2,10±0,24* 27,79±3,20* 0,07±0,02* (0.01 LD5030) НАК 0.65±0.06* 2,15±0,23* 26,05±3,01* 0,06±0,03* (0.005 LD50 60) Примечание: в каждой серии использовалось от 9 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. При действии НАК снижение содержания лимфоцитов в лимфоидных органах происходит, вероятно, вследствие общетоксического эффекта – подавление пролиферации иммуноцитов в результате блокирования компонета а3 цитохромоксидазы системы ферментов тканевого дыхания (Ленинджер, 1974). Можно предположить, что при остром, подостром и хроническом действии НАК активация симпатико-адреналовой системы, ингибирование эстераз Т-лимфоцитов и инициация ПОЛ также приводят к апоптозу лимфоцитов (Забродский, 2002;

Маdden, Livnat, 1991).

Таким образом, под влиянием острой интоксикации НАК через 1-6 сут дозозависимо уменьшается содержание лимфоцитов в органах системы иммунитета. В течение 1-4 сут в крови после острого действия НАК (0. LD50) отмечается лимфопения. Через 9 сут содержание лимфоцитов в органах системы иммунитета восстанавливалось до контрольных значений. При подостром и хроническом действии НАК отмечалась приблизительно такая же редукция показателей, как и при остром действии НАК в дозе 0.75 LD через 1-6 сут.

4.3. Изменение под влиянием НАК цитограммы тимуса и селезенки При исследовании цитограммы тимуса нами установлено (табл. 4.5), что, под влиянием НАК в вилочковой железе через 6 сут отмечается тенденция к снижению относительного числа лимфобластов и средних лимфоцитов (р0.05), а также статистически значимое уменьшение малых лимфоцитов (p0.05). Но относительное количество незрелых и зрелых нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов, макрофагов, ретикулярных и плазматических клеток увеличивалось (p0.05).

После острого отравления НАК уменьшение количества лимфоцитов в тимусе сопровождалось закономерным увеличением других клеток.

Таблица 4. Влияние острого отравления НАК (0.75 LD50) на цитограмму тимуса крыс через 6 и 12 сут (M+m) Клетки, % Контроль Время после воздействия НАК, сут 6 Ретикулярные клетки 0.74+0.12 2.26+0.10* 0.79+0. Лимфобласты 3.02+0.31 2.00+0.25 2.9+0. Средние лимфоциты 7.04+0.62 6,50+0,53 7.3+0. Малые лимфоциты 88.05+1,25 84.03+1.32* 86.2+1. Моноциты 0.12+0.02 0.36+0.06* 1.01+0. Макрофаги 0.06+0.02 0.24+0.08* 0.08+0. Незрелые нейтрофилы 0.05+0.01 0.46+0.04* 0.09+0. Зрелые нейтрофилы 0.42+0.15 2.87+0.16* 0.85+0. Эозинофилы 0.04+0.02 0.21+0.02* 0.03+0. Плазматические клетки 0.52+0,18 1.15+0.21* 0.70+0. Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. Это, по-видимому, связано с ингибированием ферментов тканевого дыхания циан-ионом, действием НАК и его метаболитов на мембрану и энзимы лимфоцитов и реализацией их постинтоксикационного апоптоза.

После воздействия НАК через 6 сут в цитограмме селезенки в целом отмечались такие же изменения, как и в тимограмме (табл. 4.6): снижалось относительное число малых лимфоцитов (р0.05), отмечалась тенденция к уменьшению лимфобластов и средних лимфоцитов, тенденция к относительному увеличению незрелых нейтрофилов, статистически значимое (р0.05) повышение содержания зрелых нейтрофилов, тенденция к редукции эозинофилов, моноцитов, макрофагов, ретикулярных, эритроидных и плазматических клеток. Значимо (p0.05) возрастало относительное число ретикулярных клеток. Механизмы выявленых эффектов, видимо, такие же, как и обусловливающие изменение цитограммы тимуса.

Таблица 4. Влияние острого отравления НАК (0.75 LD50) на цитограмму селезенки крыс через и 12 сут (M+m) Клетки, % Контроль Время после воздействия НАК, сут 6 Ретикулярные клетки 1.05+0.11 2.07+0.13* 1.12+0. Лимфобласты 2.92+0.42 1.55+0.25 2.0+0. Средние 6.52+0.52 5.67+0.51 7.0+0. Лимфоциты Малые лимфоциты 78.10+1.41 73.00+1.34* 76.0+1. Моноциты 1.80+0.11 2.57+0.34 2.1+0. Макрофаги 1.08+0.12 1.90+0.33 1.17+0. Незрелые 1.06+0.09 1.70+0.17 1.19+0. Нейтрофилы Зрелые 2.55+0.27 5.43+0.27* 3.55+0. Нейтрофилы Эозинофилы 0.60+0.10 0.95+0.02 0.80+0. Плазматические 1.75+0.12 2.00+0.31 1.95+0. Клетки Эритроидные 2.65+0.22 3.20+0.32 3.10+0. Клетки Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0.05.

Через 12 сут показатели цитограммы тимуса и селезенки крыс после острого отравления НАК восстанавливались до контрольного уровня (см.

табл. 4.5, 4.6).

Таким образом, через 6 сут под влиянием острого действия НАК изменялись цитограммы тимуса и селезенки, а через 12 сут показатели восстанавливались до контрольного уровня. Вероятно, цитограммы лимфоидных органов после подострого и хронического действия НАК, учитывая данные разделов 4.1. и 4.2., будут сходны с таковыми при остром действии НАК в дозе 0.75 LD50.

* * * Полученные результаты позволяют заключить, что при остром действии НАК происходит дозозависимое существенное уменьшение ЛИ тимуса и селезенки (в диапазоне доз 0.25 – 0.75 ДЛ50) в течение 3 сут с последующим восстановлением этих показателей к 6 сут. При подостром и хроническом действии НАК отмечалась приблизительно такая же супрессия показателей, как и при действии НАК в дозе 0.75 LD50 через 1-3 сут.

Под влиянием острой интоксикации НАК через 1-6 сут дозозависимо уменьшается содержание лимфоцитов в органах системы иммунитета. В течение 1-4 сут в крови после острого действия НАК (0.75 LD50) отмечается лимфопения. Через 9 сут содержание лимфоцитов в органах системы иммунитета восстанавливалось до контрольных значений. При подостром и хроническом действии НАК отмечалась приблизительно такая же редукция показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50 через 1-6 сут.

Через 6 сут после действия НАК в дозе 0.75 LD50 изменялись цитограммы тимуса и селезенки, а через 12 сут показатели восстанавливались до контрольного уровня. Вероятно, цитограммы лимфоидных органов после подострого и хронического действия НАК, учитывая данные разделов 4.1. и 4.2., будут сходны с цитограммой при остром действии НАК в дозе 0.75 LD50.

Глава 5. ВОЗДЕЙСТВИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА ГУМОРАЛЬНЫЕ ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ 5.1. Влияние на тимусзависимый гуморальный иммунный ответ Оценка воздействия НАК на антителообразование к тимусзависимому антигену в динамике по титру антител в крови. В опытах на белых крысах оценивали действие острого отравления НАК в дозах 0.25, 0.5 и 0.75 LD50 на иммунный ответ к тимусзависимому антигену - ЭБ по титру антител через 5, 8, 14 и 20 сут при иммунизации ЭБ, проводившейся одновременно с интоксикацией за 3 сут до отравления. Через 5 сут после введения ЭБ отмечается пик иммунного ответа, связанный с синтезом IgM;

через 8 сут титр антител отражает синтез преимущественно IgG, и в меньшей степени – IgM, а через 14 и 20 сут - титр антител характеризует продукцию В-клетками (плазмоцитами) только IgG (Петров и др., 1981;

Хаитов и др., 2000).

Известно, что Th1-лимфоциты участвуют в продукции IgM, IgG2а, а Th2-ли мфоциты способствуют синтезу IgG1, IgA, IgE (Ройт и др., 2000;

Pfeifer et al., 1991;

Georgiev, Albright, 1993). Таким образом, использованный метод исследования гуморального звена иммунитета дает представление о функциональной активности как Th1-, так и Th2-лимфоцитов.

Нами установлено (табл. 5.1), что под влиянием острого, подострого и хронического действия НАК в индуктивной фазе иммунного ответа (введение яда одновременно с иммунизацией ЭБ) статистически значимо снижался ОДЛТА (-log2 титра антител) к ЭБ через 5, 8, 16 и 20 сут после иммунизации. Так, острая интоксикация НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD приводила к редукции ОДЛТА через 5 сут соответственно в 1.26, 1.40 и 1. раза (p0.05), а через 8 сут - в 1.20, 1.28 и 1.41 раза (p0.05), через 14 сут - в 1.19, 1.36 и 1.48 раза (p0.05), через 20 сут - в 1.15, 1.20 и 1.26 раза (p0.05) по сравнению с контролем соответственно. Полученные данные свидетельствуют о том, что при остром действии НАК иммуносупрессивные эффекты прямо связаны с дозой токсиканта.

Таблица 5. Влияние острого действия НАК на ОДЛТА у крыс к ЭБ в индуктивной фазе антителогенеза (НАК вводили одновременно с иммунизацией) (M+m) Время после интоксикации, сут Доза, LD 5 8 14 Контроль 4,9+0,2 (20) 5,5+ 0,2 (20) 6,8+ 0,2 (20) 5,4+ 0,2 (20) 0,25 3,9+ 0,3* 4,6+ 0,3* 5,7+ 0,3* 4,7+ 0, 0,50 3,5 + 0,3* 4,3 + 0,3* 5,0 + 0,2* 4,5 + 0,3* 0,75 3,1 + 0,2* 3,9 + 0,2* 4,6 + 0,2* 4,3 + 0,2* Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0.05.

При подостром и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 отмечалось снижение ОДЛТА (табл. 5.2) соответственно в 1.43, 1.65 и 1.61 раза (p0.05). Следует отметить, что данные воздействия НАК, оцениваемые по редукции иммунного ответа, существенно не отличались.

Таблица 5. Влияние подострого и хронического действия НАК на ОДЛТА у крыс к ЭБ (M+m) Доза, LD50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 5,0+0,3 (10) 5,1+0,2 (20) 5,3+ 0,2 (20) 1/7 LD50 х 6 3,5+0,3* - 0,01 LD5030 3,1+0,3* - 0,005 LD50 60 3,3+0,2* - Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0.05.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что НАК при остром воздействии дозозависимо снижает синтез IgM и IgG до 20 сут (Ройт и др., 2000;

Casale et al., 1983).

Учитывая, что Th1-лимфоциты участвуют в синтезе IgM (оценка ОДЛТА на 5 сут), а Th2-лимфоциты способствуют синтезу IgG1 и других иммуноглобулинов (Ройт и др., 2000;

Pfeifer et al., 1991;

Georgiev, Albright, 1993;

Abbas et al., 1996;

Fleisher, Oliveira, 2004;

Maekawa, Yasutomo, 2005), полученные результаты свидетельствуют о том, что НАК вызывает редукцию активности как Th1, так и Th2-лимфоцитов.

Подострое (1/7 LD50 в течение 6 сут) и хроническое действие НАК (0.01 и 0.005 LD50 в течение соответственно 30 и 60 сут) сопровождалось приблизительно таким же изменением показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50 через 5 сут (на синтез IgM и функцию Th1-лимфоцитов) и 8 и сут (на продукцию IgG и функцию Th2-лимфоцитов).

Таким образом, острая интоксикация НАК через 5-20 сут вызывала дозозависимое снижение антителообразования, оцениваемое по ОДЛТА. При подостром и хроническом действии НАК (0.01 и 0.005 LD50 в течение соответственно 30 и 60 сут) отмечалось такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50 через 5 и 14 сут.

Воздействия НАК на число АОК в селезенке, характеризующее синтез IgM. Нами установлено (рис. 5.1), что число АОК в селезенке к ЭБ у белых крыс через 5 сут после острой интоксикации НАК (при введении яда одновременно с ЭБ) дозозависимо снижалось.

25 * * * * * 1 2 3 Контроль 0.25 0.5 0.75 LD Рис. 5.1 Влияние острого действия НАК на число АОК к ЭБ (103), синтезирующим IgM, в селезенке крыс через 5 сут после иммунизации По оси ординат – показатель изменения АОК у крыс в индуктивной и продуктивной фазе. По оси абсцисс – доза (LD50). В каждой серии использовалось от 6 до 8 животных;

* - различие с контролем достоверно р0. Так, при дозах НАК, составляющих 0.25, 0.50 и 0.75 LD50, показатель снижался в 1.61, 2.05 и 2.96 раза (р 0.05) соответственно. Более выраженные изменения числа АОК к ЭБ были обнаружены при введении НАК через 3 сут после иммунизации. Так, в продуктивную фазу антителогенеза число АОК в селезенке при дозах НАК, составляющих 0.25, 0.50 и 0.75 LD50, снижалось соответственно в 2.25, 2.96 и 4.53 раза (р 0.05).

Редукция показателя в продуктивную фазу гуморальной иммунной реакции (введение НАК через 3 сут после ЭБ) по сравнению с индуктивной (введение НАК одновременно с ЭБ) вполне объяснима. Данный феномен обусловлен более выраженным действием НАК на пролиферацию, дифференцировку и синтез иммуноглобулинов В-клетками (плазмоцитами), перераспределением лимфоцитов между органами системы иммунитета в период максимальной антителопродукции – синтеза IgM (3-5 сут после иммунизации) в продуктивной фазе антителообразования по сравнению с воздействием НАК на распознавание антигена макрофагами, их переработку и представление Т- и В- клеткам, кооперацию макрофагов, Т- и В лимфоцитов, а также клональную селекцию Т- и В-клеток в индуктивной фазе антителопродукции (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002). Не исключено, что при одинаковом по силе супрессивном эффекте на указанные процессы действие в продуктивный период иммуногенеза обусловливает апоптоз клеток органов иммунитета, занимающихся антителопродукцией, что приводит к ингибированию синтеза антител. При этом на восстановительные процессы к моменту оценки действия НАК (через 2 сут после его введения) остается меньше времени, чем при его действии в индуктивной фазе антителогенеза.

При подостром (1/7 LD50 в течение 6 сут) и хроническом действии НАК (0.01 и 0.005 LD50 в течение соответственно 30 и 60 сут) отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50 через 5 сут (на синтез IgM и функцию Th1-лимфоцитов) (табл. 5.3).

Таблица 5. Влияние подострого и хронического действия НАК на число АОК к ЭБ (103), синтезирующим IgM, в селезенке крыс через 5 сут после иммунизации Доза, ЛД50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 47,0+4,3 55,8+ 6,0 50,1+5, 1/7 LD50 х 6 17,3+2,5* - 0,01 LD5030 23,2+2,8* - 0,005 LD50 60 21,5+2,7* - Примечание: в каждой серии использовалось 7 крыс;

* - различие с контролем достоверно – р0. Так, число АОК к ЭБ, синтезирующим IgM, в селезенке крыс при подостром и хроническом действие НАК (0.01 и 0.005 LD50) снижалось в 2.72, 2.41 и 2.33 раза (р0.05).

Супрессия функции Т-зависимого антителообразования под влиянием НАК может быть связана с реализацией различных механизмов иммунотоксических эффектов: на уровне систем – с активацией гипоталамо гипофизарно-адреналовой системы (данное предположение нуждается в подтверждении, так как активация ГГНС на стресс-эффект при действии НАК может быть сопряжена с ингибированием функции надпочечников НАК вследствии блокирования ферментативной системы тканевого дыхания), на уровне взаимодействия клеток – со снижением функции Th1-лимфоцитов, кооперации Т-и В-лимфоцитов, на субклеточном уровне – с инициацией ПОЛ, мембранотоксическим действием (Голиков и др., 1986;

Забродский, 2002). Основной механизм иммунотоксичности НАК обусловлен действием яда на молекулярном уровне и ингибированием железосодержащих энзимов тканевого дыхания митохондрий иммуноцитов (Ротенберг, 1982;

Tucek et al., 2002). Важную роль в данных процессах играет, видимо, не столько НАК, сколько его высокотоксические метаболиты (циановодород, глицидонитрил, 2-цианэтанол, циануксусная и акрилонитрилмеркаптуровая кислоты) (Tucek et al., 2002). В реализации супрессии гуморальных иммунных реакций НАК существенное значение имеет продукт биотрансформации циановодород, ингибирующий цитохром а3 цитохром-с-оксидазы системы ферментов тканевого дыхания митохондрий иммунокомпетентных клеток.

Иммунотоксический эффект НАК может быть обусловлен поражением биохимических систем не только клеток системы иммунитета, но и других органов (Забродский, 2002).

Таким образом, под влиянием острой интоксикации НАК происходит прямо связанная с дозой редукция Т-зависимого антителообразования (функции Th1-лимфоцитов), оцениваемого по числу АОК к ЭБ в селезенке, преимущественно в продуктивную фазу антителогенеза. При подостром (1/ LD50 в течение 6 сут) и хроническом (0.01 и 0.005 LD50 в течение соответственно 30 и 60 сут) действии НАК отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50 через 5 сут (на синтез IgM и функцию Th1-лимфоцитов).

Влияние НАК на синтез IgG. Установлено (рис. 5.2), что после острого отравления НАК через 8 и 14 сут происходит дозозависимое снижение синтеза IgG, оцениваемого по числу АОК, синтезирующих иммуноглобулины данного класса. Так, дозы НАК, составляющие 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 вызывали редукцию показателя через 8 сут соответственно в 1.31, 1.64 и 2.07 раза (р0.05), а через 14 сут - соответственно в 1.44, 1.85 и 2. раза (р0.05).

При подостром (1/7 LD50 в течение 6 сут) и хроническом (0.01 и 0. LD50 в течение соответственно 30 и 60 сут) действии НАК продукция IgG, оцениваемая по числу АОК через 8 сут после иммунизации, уменьшалась соответственно в 1.73, 1.57 и 1.89 раза (р0.05), а через 14 сут соответственно в 1.92, 2.13 и 1.77 раза (р0.05). При этом отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром действии НАК в дозах 0.50 и 0.75 LD50. (рис. 5.2). В этот период иммуногенеза происходит синтез IgG В-клетками при помощи Th2-лимфоцитов (Pfeifer еt al., 1991;

Georgiev, Albright, 1993).

* * * * * * * * * * * * 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 Рис. 5.2 Влияние острого, подострого и хронического действия НАК на число АОК, синтезирующим IgG, в селезенке у крыс через 8 и 14 сут после иммунизации.

По оси ординат – число АОК к ЭБ (х 103 ) в селезенке крыс. По оси абсцисс – доза (LD50) и экспозиция (сут). Варианты опытов: 1- контроль, 2- 0.25 LD50, 3 - 0.5 LD50, 4 -0. LD50, 5 - 1/7 LD50 6 сут, 6 - 0.01 LD50 30 сут, 7 - 0.005 LD50 60 сут. В каждой серии использовалось от 6 до 7 животных;

* - различие с контролем достоверно - р0. Снижение синтеза IgG при действии НАК может быть обусловлено нарушением функции стволовых кроветворных клеток, инактивацией ферментов, в частности, эстераз T-лимфоцитов (Забродский, 2002;

Кадушкин, 2007), супрессией продукции ИЛ-4 «фактора роста В-клеток» Т лимфоцитами (Th2-типа, ТCR+/CD4+/CD8-), в результате чего снижается дифференцировка В-лимфоцитов и синтез иммуноглобулинов, в частности, G1 (ИЛ-4 переключает синтез иммуноглобулинов на классы G1 и Е, способствует выживанию Th2-лимфоцитов и стимулирует их дифференцировку) (Хаитов и др., 2002). Не исключена также роль инициации ПОЛ в данном процессе (Забродский, 2002). Возможность реализации иммуносупрессивного эффекта КС в результате реализации стресс-реакции при действии НАК нуждается в подтверждении.

Таким образом, под влиянием острой интоксикации НАК происходит дозозависимое снижение синтеза IgG В-клетками и функции Th2 лимфоцитов, оцениваемых по числу АОК к ЭБ в селезенке. При подостром и хроническом действии НАК отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром в дозах 0.50 и 0.75 LD50.

5.2. Влияние на тимуснезависимый гуморальный иммунный ответ Оценка воздействия НАК на антителопродукцию к Т-независимому антигену по титру антител в крови. При оценке содержания титра антител к Vi-Ag у белых крыс после острой интоксикации НАК через 5 и 8 сут было установлено (рис. 5.3), что дозы НАК, составляющие 0.25, 0.50 и 0.75 LD дозозависимо снижали ОДЛТА через 5 сут в 1.12 (р0.05), 1.19 (р0.05) и 1.27 раза (р0.05) соответственно. Через 8 сут ОДЛТА в контроле и опыте существенно не отличались.

Полученные данные свидетельствуют, что через 5 сут НАК существенно снижает синтез IgM В-клетками (плазмоцитами) на Т независимый антиген (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002) при действии НАК в дозах 0.50 и 0.75 LD50. В реализации данной иммунной реакции Th1 и Th2-лимфоциты участия не принимают (Петров и др., 1981;

Хаитов и др., 2002;

Kimber et al., 1996;

Friedman et al., 2003).

Результаты проведенных экспериментов показывают, что НАК в сублетальных дозах оказывает значительно меньшее действие на Т независимый синтез IgM по сравнению с Т-зависимой антителопродукцией (см. табл. 5.1).

4, 3,5 * * 2, 1, 0, 1 2 3 Контроль 0.25 0.5 0.75 LD Рис. 5.3 Влияние острого действия НАК на ОДЛТА у крыс к Vi-Ag в индуктивной фазе антителогенеза (НАК вводили одновременно с иммунизацией) По оси ординат – показатель ОДЛТА (усл. ед.) в зависимости от дозы у крыс на и8 сутки. По оси абсцисс – доза (LD50). В каждой серии использовалось от 7 до животных;

* - различие с контролем достоверно - р0. При подостром и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 отмечалось снижение ОДЛТА к Vi-Ag (табл. 5.4) соответственно в 1.24, 1.30 и 1.27 раза (p0.05). Следует отметить, что данные воздействия НАК, оцениваемые по супрессии иммунного ответа, существенно не отличались.

Таким образом, острая интоксикация НАК через 5 сут вызывала дозозависимое снижение Т-независимого антителообразования, оцениваемое по ОДЛТА. При подостром и хроническом действии НАК отмечались такие же изменения показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50.

Таблица 5. Влияние подострого и хронического действия НАК на ОДЛТА у крыс к ЭБ (M+m) Доза, LD 50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 2,6+0,1 (20) 3,0+0,1 (20) 2,8+ 0,1 (20) НАК 2,1+0,2* - (1/7 LD50 х 6) НАК 2,3+0,2* - (0,01 LD5030) НАК 2,2+0,1* - (0,005 LD50 60) Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0.05.

Воздействие острого отравления НАК на число АОК в селезенке к Т независимому антигену. Нами при оценке содержания АОК к Vi-Ag в селезенке у белых крыс после острой интоксикации НАК через 5 суток было установлено (рис. 5.4), что дозы НАК, составляющие 0.25, 0.50 и 0.75 LD50, вызывали снижение АОК к Vi-Ag соответственно в 1.33, 1.77 и 2.13 раза (р 0.05).

* * 20 * Контроль 0.25 0.5 0.75 LD Рис. 5.4 Влияние острого действия НАК на число АОК к Vi-Ag (х 103), синтезирующим IgM, в селезенке крыс через 5 сут после иммунизации По оси ординат – изменение числа АОК (х 103 ) в зависимости от дозы. По оси абсцисс – доза (LD50). В каждой серии использовалось от 6 до 7 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. Полученные результаты показывают, что НАК в сублетальных дозах оказывает значительно меньшее действие на Т-независимый синтез В клетками IgM по сравнению с Т-зависимой антителопродукцией. Так, при воздействии яда в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 (см. рис. 5.1) супрессия Т независимой антителопродукции была соответственно в 1.21, 1.16 и 1.39 раза ниже редукции Т-зависимого антителообразования.

При подостром и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 отмечалось уменьшение числа АОК к Vi-Ag (табл. 5.5) соответственно в 2.06, 1.99 и 1.70 раза (p0.05). При этом данные воздействия НАК, оцениваемые по редукции иммунного ответа, статистически значимо не отличались и приблизительно соответствовали действию НАК в дозе 0.50-0.75 LD50.

Таблица 5. Влияние подострого и хронического действия НАК на число АОК к Vi-Ag (103), синтезирующим IgM, в селезенке крыс через 5 сут после иммунизации Доза, ЛД50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 38,5±3,0 35,0±3,2 33,9±3, 1/7 LD50 х 6 18,7±2,4* - 0,01 LD503) 17,6+2,7* - 0,005 LD50 60 20,0+2,1* - Примечание: в каждой серии использовалось 8 крыс;

* - различие с контролем достоверно – р0. Нарушение в большей степени Т-зависимого антителообразования по сравнению с Т-независимым под влиянием НАК обусловлено действием этого яда и продуктов его биотрансформации одновременно на макрофаги, В-лимфоциты и Т-клетки (в данной модели – на субпопуляцию Th1 лимфоцитов). Тимуснезависимый гуморальный иммунный ответ обеспечивается функцией В-клеток, активируемых антигеном в присутствии ИЛ-1 (Gillbert et al., 1985;

Delves, Roitt, 2000), секретируемом в основном макрофагами. Вполне естественно, что Т-зависимая гуморальная иммунная реакция требует больших затрат энергии, основным источником которой является АТФ. Генерирование этого соединения, вероятно, значительно снижается вследствие ингибирования компонента а3 тканевого дыхания при остром отравлении НАК, что приводит к уменьшению синтеза циклических нуклеотидов необходимых для реализации процессов пролиферации и дифференцировки иммуноцитов (Ройт и др., 2000).

Снижение иммунной реакции на тимуснезависимый антиген может быть обусловлено редукцией НАК поликлональной активации значительной части популяции В-лимфоцитов, а также снижением стимуляции пролиферации В-клеток за счет их собственной митогенной активности (Ройт, 1991;

Ройт и др., 2000).

Снижение Т-зависимой антителопродукции под влиянием НАК более выражено, чем Т-независимого антителобразования, так как для него не требуется синтеза ряда лимфокинов Т-клетками - цитокинов организаторов лимфоцитарного иммунного ответа (IL-2, IL-4, IL-12, IL-15, IFN-). Данные цитокины регулируют пролиферацию и дифференцировку Т- и В лимфоцитов и ЕКК в периферических лимфоидных органах и тканях. Их кроме лимфоцитов продуцируют также дендритные клетки и макрофаги (Хаитов и др., 2000). Так, ИЛ-2 продуцируется Т-лимфоцитами: как CD4+ (лимфоцитами Th0- типа), так и некоторыми CD8+, стимулируют пролиферацию В-клеток и синтез J-цепи молекулы иммуноглобулина, пролиферацию Т-лимфоцитов, ЕКК (Ройт, 1991;

Хаитов и др., 2002).

Таким образом, под влиянием острой интоксикации НАК происходит дозозависимое снижение Т-независимой антителопродукции В-клетками, оцениваемой по числу АОК к Vi-Ag в селезенке. При подостром и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 отмечалось уменьшение числа АОК к Vi-Ag приблизительно такое же, как и при остром в дозах 0.50-0.75 LD50.

* * * Острая интоксикация НАК через 5-20 сут вызывала дозозависимое снижение антителообразования, оцениваемое по ОДЛТА. При подостром и хроническом действии НАК (0.01 и 0.005 LD50 в течение соответственно 30 и 60 сут) отмечалось такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50 через 5 и 14 сут. Под влиянием острой интоксикации НАК происходит прямо связанная с дозой редукция Т-зависимого антителообразования (функции Th1-лимфоцитов), оцениваемого по числу АОК к ЭБ в селезенке, преимущественно в продуктивную фазу антителогенеза. При подостром (1/7 LD50 в течение 6 сут) и хроническом (0.01 и 0.005 LD50 в течение соответственно 30 и 60 сут) действие НАК отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50 через 5 сут (на синтез IgM и функцию Th1 лимфоцитов).

Острая интоксикация НАК вызывает дозозависимое снижение синтеза IgG В-клетками и функцию Th2-лимфоцитов, оцениваемых по числу АОК к ЭБ в селезенке. При подостром и хроническом действии НАК отмечалось приблизительно такое же изменение показателей, как и при остром в дозах 0.50 и 0.75 LD50.

При остром отравлении НАК через 5 сут происходит дозозависимое снижение Т-независимого антителообразования, оцениваемое по ОДЛТА.

При подостром и хроническом действии НАК отмечалось такое же изменение показателей, как и при остром в дозе 0.75 LD50.

Острая интоксикация НАК вызывает дозозависимое снижение Т-неза висимой антителопродукции В-клетками, оцениваемой по числу АОК к Vi Ag в селезенке. При подостром и хроническом действии НАК через 30 и сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 отмечалось уменьшение числа АОК к Vi-Ag приблизительно такое же, как и при остром в дозах 0.50-0. LD50.

Глава 6. ВЛИЯНИЕ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА КЛЕТОЧНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ 6.1. Оценка функции Т-лимфоцитов Изучение острого действия НАК на функцию Т-лимфоцитов проводили по РТМЛ периферической крови крыс в присутствии КонА через 1, 3 и 6 сут, а подострого и хронического соответственно – через 7, 30 и сут. Данная реакция обусловлена действием лимфокина воспаления (Фримель, Брок, 1986;

Германчук, 2000;

Кадушкин, 2007).

В экспериментальных исследованиях нами установлено (табл. 6.1), что после острой интоксикации НАК (0.25, 0.50 и 0.75 LD 50) у крыс через 1 и сут дозозависимо увеличивается РТМЛ (снижается функция Т-клеток).

Таблица 6. Влияние острого отравления НАК на РТМЛ, % Доза, LD50 Время после интоксикации, сут 1 3 9 Контроль 52,1±3,3 (30) 0,25 70,1±6,0* 67,0±6,0* 61,0±6,2 59,8±5, 0,50 87,5±6,8* 78,5±7,5* 71,3±5,7* 65,5±5, 0,75 95,0±7,1* 86,9±7,7* 78,4±6,4* 69,3±6, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 8 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно – р0. Так, дозы НАК, составляющие 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 уменьшали функцию Т-клеток через 1 сут соответственно на 19.0 (р0.05), 35.4 (р0.05), и 42.9% (р0.05). Снижение показателя сохранялось до 12 сут, причем оно было статистически значимым (р0.05) при дозе НАК, составляющей 0.5 и 0.75 LD50 в течение 9 сут.

Снижение функции Т-клеток обусловлено, по-видимому, ингибирующим действием основного метаболита циан-иона на дыхательные энзимы Т-клеток (Иванов, 1980;

Шустов и др., 1985;

Шустов, Довжанский, 1987;

Забродский, 2002). На клеточном уровне редукция функции Т-клеток может быть обусловлена действием супрессорных факторов (клеток и цитокинов) (Хаитов и др., 2002;

Забродский, 2002;

Tucher et al., 1987).

При подостром и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 (табл. 6.2) отмечалось снижение функции Т-клеток соответственно на 26.3, 36.9 и 33.8% (р0.05). Следует отметить, что данные воздействия НАК, оцениваемые по РТМЛ, существенно не отличались.

Таблица 6. Влияние подострого и хронического действия НАК наРТМЛ, % Доза, ЛД50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 52,1±3,3 (30) 52,1±3,3 (30) 52,1±3,3 (30) НАК 78,4±7,0* - (1/7 LD50 х 6) НАК - 89,0±7,3* (0,01 LD5030) НАК - - 85,9±7,6* (0,005 LD50 60) Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0.05.

Таким образом, под влиянием острой интоксикации НАК (0.25, 0.50 и 0.75 LD50) происходит дозозависимое снижение функции Т-клеток, оцениваемой по ингибированию миграции лейкоцитов до 12 сут. Подострое и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут существенно снижает функцию Т-клеток. Эта редукция показателя приблизительно соответствует острому воздействию НАК в дозах 0.50 - 0.75 LD50 (через 1-9 сут).

6.2. Изменение функции Th1-лимфоцитов Воздействие НАК на Th1-лимфоциты оценивали по реакции ГЗТ.

Реакция ГЗТ при остром, подостром и хроническом действии НАК позволяет также косвенно оценить продукцию Th1-клетками цитокинов – ИЛ-3, интерферона, -фактора некроза опухоли и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) лимфоцитов (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002;

Georgiev, Albright, 1993), а также на участвующие в реализации гиперчувствительности IV типа (ГЗТ) Т-клеток памяти и макрофагов (Ройт, 1991, Delves, Roitt, 2000).

В адаптивной реакции (связанной с переносом клеток) существует возможность оценить действие НАК на вторичный клеточный иммунный ответ и формирование Th1-лимфоцитов.

В результате экспериментов на крысах нами установлено (рис. 6.1), что при острой интоксикации НАК (0.25, 0.50 и 0.75 LD50) происходит дозозависимое снижение реакции ГЗТ соответственно в 1.57, 1.86 и 2.36 раза (р0.05) без переноса клеток и в 1.38, 1.57 и 1.72 раза (р0.05) соответственно при переносе клеток крысам-реципиентам.

* 60 * * * * 20 * Контроль 0.25 LD50 0.5 LD50 0.75 LD Рис. 6.1 Влияние острой интоксикации НАК на функцию Th1-лимфоцитов по реакции ГЗТ у крыс По оси ординат – показатель реакции ГЗТ, %: а) – реакция ГЗТ без переноса клеток, б) – реакция ГЗТ с переносом клеток после иммунизации крысам-реципиентам.

По оси абсцисс – доза (LD50). В каждой серии использовалось от 6 до 8 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. Выявленные изменения формирования ГЗТ позволяют заключить, что НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 вызывает супрессию Th1-лимфоцитов в реализации как первичного, так и вторичного клеточного иммунного ответа.

Известно, что Тh1-лимфоциты обеспечивают реализацию реакции ГЗТ путем активации макрофагов (Хаитов и др., 2002). В основном Тh1-клетки регулируют механизмы, обеспечивающие функцию клеточного иммунитета (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002;

Georgiev, Albright, 1993;

Kimber, 1996).

НАК, вероятно, снижает активность и других клеток, обеспечивающих формирование ГЗТ, в частности, Т-клеток памяти и макрофагов (Kimber, 1996;

Ройт и др., 2000). Полученные результаты косвенно свидетельствуют о том, что НАК уменьшает способность Th1-лимфоцитов синтезировать ИЛ-3, -интерферон и -фактор некроза опухоли (лимфотоксин), участвующие в реализации реакции ГЗТ (Хаитов и др., 2002;

Kimber, 1996).

При подостром и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 (табл. 6.3) отмечалось снижение функции Тh1-клеток в первичном клеточном иммунном ответе соответственно в 2.17, 2.72 и 2.23 раза (р0.05), а во вторичном - соответственно в 1.86, 1.84 и 1. раза (р0.05). Необходимо отметить, что интенсивность воздействия НАК при подостром и хроническом действии существенно не отличались и приблизительно соответствовали острому действию токсиканта при дозах 0.50-0.75 LD50.

Снижение функции Th1-лимфоцитов, оцениваемой по реакции ГЗТ, может быть обусловлено снижением активности этих клеток вследствие инициации ПОЛ мембран лимфоцитов (Забродский, 2002), ингибирования НАК эстераз, которые локализованы преимущественно в Т-хелперах (в частности, в Th1-лимфоцитах) (Хейхоу, Кваглино, 1983;

Германчук, 2000), а также нарушением функции стволовых кроветворных клеток и созревания пре-Т-клеток и Т-лимфоцитов в тимусе (Петров и др., 1981;

Ройт и др., 2000).

Таким образом, острая интоксикация НАК дозозависимо снижает функцию Th1-лимфоцитов. Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут вызыввает супрессию функции Тh1 клеток, приблизительно соответствующую острому действию НАК в дозах 0,50 - 0,75 LD50.

Таблица 6. Влияние подострого и хронического действия НАК на функцию Th1-лимфоцитов (по РТМЛ, %) Время после интоксикации, сут Доза, LD50;

экспозиция, сут 7 31 Контроль 1 39,1±3,7 40,6±3,8 36,3±3, 2 80,3+7,0 85,0+7,2 76,9+7, 1/7 LD50 х 6 1 18,0±2,0* - 2 43,2+5,5* - - 14,9±2,2* 0,01 LD 46,1+5,3* - - 16,3±2,3* 0,005 LD50 - - 40,5+5,4* Примечание: 1 - ГЗТ без переноса клеток;

2 - ГЗТ с переносом клеток после иммунизации реципиентам;

в каждой серии использовалось 6 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. 6.3. Оценка антителозависимой клеточной цитотоксичности В использованной нами модели эксперимента исследовалась вся система АЗКЦ: ЕКК (большие зернистые лимфоциты) и ПЯЛ.

Острое отравление НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 приводило к прямо связанной с дозой супрессией АЗКЦ спленоцитов соответственно в 1.50, 1.82 и 2.47 раза (р0.05), а АЗКЦ тимоцитов – в 1.48, 1.73 и 2.81 раза (р0.05) соответственно (рис. 6.2).

При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 (табл. 6.4) отмечалось уменьшение АЗКЦ спленоцитов соответственно в 1.93, 1.86 и 1.88 раза (р0.05), а тимоцитов - в 2.21, 1.94 и 2.03 раза (р0.05) соответственно.

% 15 * * * * * * 1 2 3 Контроль 0.25 0.5 0.75 LD Рис. 6.2 Влияние НАК на АЗКЦ По оси ординат величина АЗКЦ (%), спленоцитов и тимоцитов. По оси абсцисс – доза (LD50). В каждой серии использовалось 6-8 крыс;

* - различие с контролем достоверно – р0. Таблица 6. Влияние подострого и хронического действия НАК на АЗКЦ, % Доза, LD 50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 1 17,4±1,7 19,5±1,8 15,8±1, 2 11,5±1,2 13,0±1,4 12,0±1, 1 9,0±1,1* - 1/7 LD50 х 2 5,2+1,0* - - 10,5±2,0* 0,01 LD 6,7+1,1* - - 8,4±1,2* 0,005 LD50 - - 5,9+0,9* Примечание: 1 – АЗКЦ спленоцитов;

2 – АЗКЦ тимоцитов;

в каждой серии использовалось 6 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. НАК способен уменьшать АЗКЦ вследствие нарушения электролитного обмена клетки (перекисное окисление липидов мембран К клеток, нарушение их проницаемости), приводящему к изменению соотношения цАМФ/цГМФ (Trinchievi, de Marchi, 1976). Не исключена реализация общих механизмов иммунотоксичности, описанных в предыдущих разделах.

Таким образом, острая интоксикация НАК дозозависимо снижает АЗКЦ тимоцитов и спленоцитов. Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут вызывает редукцию АЗКЦ соответствующую острому в дозах 0.50 - 0.75 LD50.

6.4. Нарушение НАК функции естественных клеток-киллеров Предполагают, что ЕКК происходят из предшественников Т лимфоцитов (Ройт, 1991). Поверхность ЕКК имеет маркерные молекулы СD16, CD56, CD57 и CD94 (преимущественно ЕКК представлены клетками с маркерами СD16 и CD56) (Хаитов и др., 2002). Кроме данных маркеров на ЕКК обнаружены следующие рецепторы (СD-маркеры): СD2, СD11b, СD16, СD27, СD30, СD39, CD56, CD57, СD62L, СD87, CD94, СD119 и СD132. При этом рецепторы СD2, СD27, СD30, СD62L, СD87, CD являются общими для ЕКК и Т-лимфоцитов (Хаитов и др., 2002).

Ингибируют цитотоксическую активность ЕКК субпопуляции нормальных (естественных) киллеров СD158а, СD158b (Хаитов и др., 2000). При контакте с клетками опухоли и клетками, пораженными вирусами или паразитами, ксеногенными клетками ЕКК способны уничтожать их. ЕКК не обладают способностью к фагоцитозу (Петров, 1983;

Ройт, 1991).

При исследовании влияния на ЕКК НАК нами установлено (табл. 6.5), что при действии токсиканта через 1 и 9 сут происходит дозозависимое снижение активности ЕКК. Так, дозы НАК, составляющие 0.25, 0.50 и 0. LD50, вызывали уменьшение активности ЕКК через 1 сут в 1.37, 1.76 и 2. раза (р0.05), а на 9 сут – в 1.26, 1.50 и 1.63 раза (р0.05) соответственно. На 12 сут происходило восстановление активности ЕКК, однако отмечалась прямо связанная с дозой тенденция к редукции показателя.

Таблица 6. Влияние острого отравления НАК на активность ЕКК, % Доза, ЛД50 Срок наблюдения, сут 1 3 9 Контроль 30,2±1,4 (25) 0,25 22,0±2,5* 23,0±2,8* 24,0±2,4* 28,8±2, 0,50 17,2±2,1* 20,1±2,2* 21,2±2,5* 25,6±2, 0,75 12,1±1,7* 14,5±2,3* 18,5±2,7* 24,8±2, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 6 до крыс;

* - различие с контролем достоверно – р0. При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 (табл. 6.6) отмечалась редукция ЕКК соответственно в 1.89, 2.17 и 2.00 раза (р0.05).

Снижение активности ЕКК под влиянием НАК, вероятно, связано с ингибированием их эстераз, которые содержатся в ЕКК (Newcombe, 1991).

Не исключены эффекты катехоламинов вследствие последующей активации НАК симпатико-адреналовой системы (Забродский, 1993, 2000;

Szot, Murphy, 1970;

Tiefenbach et al., 1980, 1983, 1985), вызывающие редукцию активности ЕКК (Маdden, Livnat, 1991;

Claman, 1993).

Таблица 6. Влияние подострого и хронического действия НАК на ЕКК, % Доза, LD 50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 30,2±1,4 (25) 30,2±1,4 (25) 30,2±1,4 (25) 1/7 LD50 х 6 16,0±2,5* - 0,01 LD5030 - 13,9±2,4* 0,005 LD50 60 - - 15,1±2,0* Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. НАК способен снижать активность ЕКК вследствие нарушения механизмов порообразования перфорином и выделения в клетки мишени гранзимов (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2000;

Nogueira N., 1984), поражения как самой молекулой яда, так и ее токсичными метаболитами ферментных систем ЕКК (Ленинджер 1974;

Румянцев и др., 1981;

Страйер, 1985;

Голиков и др., 1986;

Забродский, 1998).

Кроме того, НАК, вероятно, вызывает супрессию функции ЕКК, связанной с уничтожением ксеногенной клетки путем реализации "дыхательного взрыва" (поражение активными радикалами кислорода, гидроксильного радикала и т.п.), вследствие ингибирования компонента а системы тканевого дыхания клетки, а также последующей индукцией апоптоза (Ройт, 1991;

Шуршалина и др., 2001;

Хаитов и др., 2002;

Scorrano et. al., 2002)..

Таким образом, при остром отравлении НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0. LD50 отмечалась дозозависимая супрессия ЕКК в течение 1-9 сут с восстановлением показателя практически до контрольного уровня на 12 сут.

Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и сут вызывает супрессию ЕКК соответствующую острому в дозе 0.75 LD50 в течение 1-3 сут.

* * * Под влиянием острой интоксикации НАК (0.25, 0.50 и 0.75 LD50) происходит дозозависимое снижение функции Т-клеток, оцениваемой по ингибированию миграции лейкоцитов до 12 сут. Подострое и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут существенно снижает функцию Т клеток. Эта редукция показателя приблизительно соответствует острому воздействию НАК в дозах 0.50-0.75 LD50 через 1-9 сут.

Острая интоксикация НАК дозозависимо снижает функцию Th1 лимфоцитов, АЗКЦ тимоцитов и спленоцитов. Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут вызывает супрессию функции Тh1-клеток, приблизительно соответствующую острому в дозах 0.50-0.75 LD50. При острой интоксикации НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD отмечалась дозозависимая супрессия ЕКК в течение 1-9 сут с восстановлением показателя практически до контрольного уровня через сут. Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут вызывает супрессию ЕКК соответствующую острому в дозе 0.75 LD в течение 1-3 сут.


Глава 7. МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА ПРИ ДЕЙСТВИИ НИТРИЛА АКРИЛОВОЙ КИСЛОТЫ 7.1. Влияние нитрила акриловой кислоты на миграцию колониеобразующих единиц в селезенку В течение длительного времени в качестве стволовых кроветворных клеток (СКК) рассматривали клетки, дающие колонии в селезенке облученных мышей – КОЕс. Однако в последние годы такое предположение было экспериментально опровергнуто. Примитивные СКК (П-СКК) в культуре созревают до стадии КОЕс за 4-6 недель. Несмотря на то, что ни КОЕс и ни одна из категорий клеток, способных к колониеобразованию в культуре, не относятся к классу П-СКК (Чертков и др., 1990), тем не менее, согласно теории клональной саксессии (последовательная смена кроветворных клонов в результате последовательного созревания одной за другой СКК) число КОЕс, мигрировавших из костного мозга (КМ) в селезенку, отражает функциональное состояние клона кроветворных клеток и, следовательно, функцию СКК, продуцирующей этот клон. Кроме того, по числу КОЕс можно судить и о функции лимфоидных стволовых клеток, обеспечивающих иммунопоэз (Петров и др., 1981а).

Содержание КОЕс после летального облучения мышей с экранированием голени отражает процесс миграции КОЕс из костного мозга в селезенку, который находится в прямой корреляции с выходом из костного мозга В-клеток и предшественников Т-лимфоцитов. Этот процесс характеризует индуктивную фазу иммуногенеза (Петров, Хаитов, 1972;

Петров и др.,1981а;

Корнева, 1990;

Забродский, 1993, 1998, 2000;

Забродский и др., 1997;

).

Нами показано (рис. 7.1), что острая интоксикация НАК в дозах 0.25, 0.50 и 0.75 LD50 вызывает дозозависимое снижение числа КОЕс соответственно в 1.52 (р 0.05), 2.19 (р 0.05), и 3.31 (р 0.05) раза.

КОЕс усл. ед.

* * 1 2 3 Контроль 0.25 0.5 0.75 LD Рис. 7.1 Влияние острой интоксикации НАК на число КОЕ в селезенке мышей По оси ординат – число КОЕс в зависимости от дозы. По оси абсцисс – доза (LD50). В каждой серии использовалось от 9 до 10 мышей;

* – различие с контролем достоверно – р0.05.

При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 (табл. 7.1) отмечалось снижение миграции КОЕс из костного мозга в селезенку соответственно в 2.46, 2.13 и 2.26 раза (р0.05).

При интоксикации НАК уменьшение числа КОЕс обусловлено, видимо, преимущественно специфическим действием данного вещества и его метаболитов, вызывающим редукцию пролиферации КОЕс и/или увеличения их гибели вследствие ингибирования тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования в СКК, лимфоидных стволовых клетках, КОЕс. Не исключено снижение КОЕс вследствии ингибирования эстераз этих клеток (Петров, Хаитов, 1981а;

Хейхоу, Кваглино, 1983;

Забродский, 1993;

Беликов, 2001).

Таблица 7. Влияние подострого и хронического действия на число КОЕс Доза, LD50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 15,3±3,4 17,5±3,7 12,9±4, 1/7 LD50 х 6 6,2±2,0* - 0,01 LD5030 - 8,2±2,7* 0,005 LD50 60 - - 5,7±2,0* Примечание: в каждой серии использовалось 9 мышей;

* - различие с контролем достоверно - р0.05.

Таким образом, под влиянием острой интоксикации НАК происходит дозозависимое уменьшение числа КОЕс. Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут вызывает редукцию КОЕс соответствующую острому в дозах 0.50-0.75 LD50. Полученные данные свидетельствуют о снижении миграции из костного мозга В-клеток и предшественников Т-лимфоцитов.

7.2. Оценка кооперации Т- и В-лимфоцитов Т-зависимое антителообразование прямо связано с процессом кооперации (взаимодействия) Т- и В-лимфоцитов (Петров, 1983;

Ройт, 1991;

Хаитов и др., 2002). Поэтому изучение влияния НАК на данный процесс может существенно дополнить понимание механизмов нарушения антителобразования на уровне взаимодействия иммуноцитов. При изучении кооперации Т- и В-лимфоцитов мышей СВА in vitro оценка функции этих популяций иммуноцитов в данной реакции осуществлялась по формированию АОК к ЭБ. Удельный вес Т- и В-клеток в обеспечении антителопродукции определяли путем сравнения числа АОК после инкубации той или иной популяции лимфоцитов, полученной от интактных мышей или животных, подвергавшихся воздействию НАК.

В наших исследованиях показано (табл. 7.2), что после действия НАК через 1 сут функция В-клеток в кооперации с Т-лимфоцитами снижалась соответственно в 1.36, 1.44 и 1.41 раза (р0.05), а функция Т-клеток - в 1.86, 2.01 и 1.88 (р0.05) раза соответственно по сравнению с контролем. Из данных, приведенных на рис. 5.4, следует, что НАК в большей степени снижает функцию Т-лимфоцитов (р0.05).

Таблица 7. Влияние острого отравления НАК (0.75 LD50) на нарушение кооперации Т- и В-лим фоцитов ex vivo через 1 сут (по формированию АОК иммуноцитами мышей линии СВА на 106 В-клеток) Клетки Контроль НАК В 51+6 – В+Т 432+37 – В0+Т – 312+ 25* В+Т0 – 215+ 23** Примечание: в каждой серии использовали клетки от 5-6 мышей. В0, Т0 – клетки получали через 1 сут от мышей, подвергавшихся действию НАК, В, Т – клетки получали от интактных животных;

* - p0.05 по сравнению с контролем (В+Т);

** - p0.05 по сравнению с В0+Т Эффект НАК, по-видимому, позволяет реализоваться определяющему механизму иммуносупрессии – ингибированию системы ферментов тканевого дыхания. Эффект НАК, возможно, обусловлен также ингибированием ацетилхолинэстеразы (АХЭ) и других эстераз Т лимфоцитов (Германчук, 2000;

Забродский, 2002). Известно, что именно данные клетки, наряду с моноцитами, макрофагами и нейтрофилами, являются эстеразопозитивными, а АХЭ содержат только Т-лимфоциты (Хейхоу, Кваглино, 1983;

Ferluga et al., 1972;

Li et al.,1973;

Kutty et al., 1976;

Кullenkampff et al., 1977).

Таким образом, под влиянием НАК на мышей нарушается функция Т клеток в большей степени по сравнению с функцией В-лимфоцитов в эффекте кооперации клеток.

7.3. Оценка способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ При исследовании способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ на крысах через 1 сут нами установлено (рис. 7.2), что острое действие НАК в дозе 0.75 LD50 снижает способность макрофагов к индукции антителообразования, оцениваемой по числу АОК к ЭБ в селезенке, в 2.28 раз (p0.05) по сравнению с контролем.

* * * * Контроль 0,75 1/7 х 6 0.01 х 30 0.05 х 60 LD Рис. 7.2 Влияние НАК на способность макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ у крыс (по числу АОК к ЭБ х 103) По оси ординат – число АОК к ЭБ х 103. По оси абсцисс – доза (LD50) и экспозиция (сут). В каждой серии использовалось 6 крыс;

* – различие с контролем достоверно – р0.05.

При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 (0.01 LD50) и 60 (0.005 LD50 ) сут (рис. 7.2) отмечалась редукция показателя соответственно в 1.68, 1.52 и 1.78 раза (р0.05). Существенных различий между острым, подострым и хроническим воздействием НАК при исследованных дозах и экспозициях не выявлено.

Таким образом, под влиянием острой, подострой и хронической интоксикации НАК происходит снижение способности макрофагов индуцировать гуморальный иммунный ответ. Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут вызывает редукцию параметра существенно не отличающуюся от острого действия токсиканта в дозе 0.75 LD50.

7.4. Оценка массы надпочечников Массовый индекс надпочечников после острого воздействия токсикантов (отношение массы надпочечника (мг) к массе тела животного (г)) в определенной степени отражает реакцию ГГНС (стресс-реакцию) на химический раздражитель. Существуют основания считать, согласно теории Г. Селье (1972), что под влиянием химических факторов из гипофиза секретируется АКТГ, который стимулирует синтез и инкрецию, главным образом, глюкокортикоидов, чему соответствует гипертрофия пучковой зоны коры надпочечников. В меньшей степени гипертрофируются зоны, секретирующие половые гормоны и минералокортикоиды (Лемус, Давыдов, 1974;

Горизонтов, 1981а). Ряд токсикантов, к которым относится, в частности, НАК (Szabo, Selye, 1971, 1972;

Szabo et al., 1980) и фармакологические препараты (дихлордифенилхлорэтан, ингибиторы синтеза белка, амфенон и др.) (Комиссаренко, Резников, 1972), цианокетон (2--циано-4,4,17--триметил-17--гидрокси-5- андростен-3-он) (Dhabhar et al., 1996) способны, напротив, ингибировать функцию коры надпочечников.

Таким образом, изменение массы надпочечников в определенной степени свидетельствует о реализации неспецифических механизмов (стресс реакции) под влиянием ядов.

Нашими исследованиями показано, что после острого отравления НАК (0.75 LD50) массовый индекс надпочечников через 1 сут существенно не изменялся, через 3 сут происходило его снижение, а через 6 сут показатель практически восстанавливался до контрольного значения (рис. 7.3).

0, 0, 0, 0, * 0, 0, 0, Контроль 1 3 6 (сут.) Рис. 7.3 Действие НАК (0.75 LD50) на массовый индекс надпочечников крыс.

По оси ординат – показатель массового индекса (усл. ед.). По оси абсцисс – время после интоксикации (сут). В каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через (0.01 LD50) и 60 (0.005 LD50) сут (табл. 7.3) отмечалось уменьшение параметра соответственно в 1.92, 2.27 и 2.50 раза. Это снижение было более выраженное, чем при остром действии НАК через 3 сут. Статистически достоверно массовый индекс надпочечников крыс отличался при остром действии НАК по сравнению с его хроническим воздействием.


Таблица 7. Подострое и хроническое действие НАК на массовый индекс (усл. ед.) надпочечников крыс Время после интоксикации, сут Доза, LD50;

экспозиция, сут 7 31 Контроль 0,25+ 0,02 (25) 0,25+ 0,02 (25) 0,25+ 0,02 (25) 1/7 LD50 х 6 0,13+ 0,03 * - 0,01 LD5030 - 0,09+ 0,02 * 0,005 LD50 60 - - 0,10+ 0,02 * Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. Снижение массы надпочечников после острого отравления НАК свидетельствует о том, что при действии токсиканта не происходит реализации стресс-реакции. Это может быть обусловлено ингибированием синтеза КС ядами общетоксического действия, и, в частности НАК, вследствие гипотрофии коры надпочечников (Szabo, Selye, 1971, 1972;

Szabo et al., 1980;

Dhabhar et al., 1996), вероятно, при этом концентрация адрено – кортикотропного гормона (АКТГ) в крови вследствие активации гипоталамуса и увеличения секреции данного гормона гипофизом возрастает (Селье, 1972). Подострое и хроническое действие снижает массовый индекс надпочечников вследствие гипотрофии коры надпочечников.

Массовый индекс надпочечников, естественно, не может в полной мере отражать функцию коры надпочечников. Более точный анализ влияния на секрецию КС НАК может быть проведен, исходя из содержания в крови данного гормона. Увеличение (уменьшение) массы надпочечников не всегда является свидетельством увеличения (уменьшения) продукции ими гормонов (Лемус, Давыдов, 1974).

Таким образом, острое отравление НАК (0.75 LD50), а также подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут снижали массовый индекс надпочечников. Исследованный параметр снижался при остром действии НАК в большей степени по сравнению с его хроническим воздействием.

7.5. Действие нитрила акриловой кислоты на концентрацию кортикостерона в плазме крови Данные литературы свидетельствуют, что физиологические концентрации КС необходимы для реализации полноценного гуморального имммунного ответа (Корнева, 1990). В то же время высокие концентрации КС, в частности, при интоксикации ФОС (Иванова, 1998;

Забродский, 2002;

Szot, Murphy, 1970) вызывают снижение показателей системы иммунитета (Хусинов и др., 1991;

Забродский, 1993;

Забродский и др., 2000;

Кадушкин, 2007;

Claman, 1993;

Tiefenbach et al., 1980, 1983, 1985).

Нами установлено (табл. 7.4), что острое отравление НАК вызывало повышение содержания КС в крови через 1 ч в 1.58 раза (p0.05) по сравнению с контрольным уровнем, видимо, в результате действия АКТГ, которое сменялось снижением синтеза КС через 3 и 24 ч, вероятно, в результате ингибирования основным метаболитом нитрилов циан-ионом компонента а3 цитохром-с-оксидазы системы энзимов тканевого дыхания митохондрий коры надпочечников (Dhabhar et al., 1996). Через 24 ч концентрация КС в плазме крови при действии НАК была ниже, чем в контроле в 1.62 раза (p0.05).

Таблица 7. Влияние острой интоксикации НАК (0,75 LD50) на содержание кортикостерона в плазме крови через 1-24 ч, нг/мл Серии опытов Время после воздействия,ч 1 3 Контроль 19,9+3,2 17,0+3,1 22,4+2, НАК 31,5+2,7* 14,7+2,8 13,8+2,1* Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0.05.

Через 3 сут острое отравление НАК (0.75 LD50) вызывало снижение КС в крови в 2.10 раза (p0.05) по сравнению с контрольным уровнем, а через сут концентрация КС существенно не отличалась от контрольного значения (табл. 7.5).

Таблица 7. Влияние острой интоксикации НАК (0.75 LD50) на содержание кортикостерона в плазме крови через 3 и 6 сут, нг/мл Серии опытов Время после воздействия, сут 3 Контроль 24,1+3,5 20,7+3, НАК 11,5+2,4* 17,6+2, Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 (табл. 7.6) отмечалось уменьшение концентрация КС соответственно в 1.79, 1.58 и 1.94 раза (p0.05). Данное снижение уровня КС приблизительно соответствует редукции показателя при действии НАК в дозе 0.75 LD50 через 3 сут.

Таблица 7. Подострое и хроническое действие НАК на содержание кортикостерона в плазме крови, нг/мл Доза, ЛД50;

Время после интоксикации, сут экспозиция, сут 7 31 Контроль 18,1+2,7 25,8+3,0 16,5+2, 1/7 LD50 х 6 10,1+2,4* - 0,01 LD5030 - 16,3+2,7* 0,005 LD50 60 - - 8,5+2,0* Примечание: ;

в каждой серии использовалось 7- 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. Более выраженное снижение массы надпочечников при остром действии НАК по сравнению с хроническим эффектом в отличие от редукции концентрации КС при тех же условиях связано, вероятно, с процессами адаптации к действию НАК, когда меньшей массой органа обеспечивается относительно больший синтез гормона. В то же время, при относительно большей массе надпочечников через 1 сут обеспечивается меньший синтез КС.

Таким образом, острое действие НАК (0.75 LD50) снижает концентрацию КС в крови через 1 и 3 сут, а подострое (в течение 6 сут) и хроническое через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD вызывает уменьшение концентрации КС в плазме крови. Данное снижение уровня КС приблизительно соответствует редукции показателя при действии НАК в дозе 0.75 LD50 через 1-3 сут.

7.6. Изменение активности эстераз Т-клеток, моноцитов и макрофагов под влиянием нитрила акриловой кислоты Эстеразы играют важную роль в реализации киллерной функции Т лимфоцитов (Ferluga et al., 1972;

Li et al., 1973). Изменение эстеразной активности в клетках отражает, с одной стороны, функциональную активность иммуноцитов, с другой - может служить количественным критерием Т-клеток в циркулирующей крови, так как именно эта субпопуляция лимфоцитов является эстеразопозитивной (Хейхоу, Кваглино, 1983;

Ferluga et al., 1972;

Li et al.,1973;

Kutty et al., 1976;

Кullenkampff et al., 1977;

Szelenyi et al., 1982). АХЭ на поверхности Т-лимфоцитов регулирует влияние ацетилхолина на холинореактивные структуры Т-лимфоцитов (Забродский, 2002).

Нами установлено (табл. 7.7), что НАК в дозе 0.75 LD50 через 3 сут снижает активность АХЭ Т-клеток тимоцитов и спленоцитов соответственно в 1.43 и 1.52 раза (р0.001). При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD (табл. 7.7) отмечалось приблизительно такое же снижение показателя, как и при остром через 3 сут.

Таблица 7. Воздействие НАК на активность ацетилхолинэстеразы в Т- лимфоцитах тимуса и селезенки у крыс (мЕд/109) Доза, LD50;

экспозиция, сут Тимус Селезенка Контроль 60,3±6,2 54,2±5, 42,0+5,1* 35,7+ 5,2* 0,75 LD 1/7 LD50 х 6 38,2+4,3* 37,0+ 4,3* 0,01 LD5030 43,0+4,8* 31,9+ 4,0* 0,005 LD50 60 35,0+4,3* 34,8+ 3,9* Примечание: в каждой серии использовалось от 6 до 8 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0. При остром действии НАК в дозах 0.25 и 0.50 LD50 число клеток (в основном Т-лимфоцитов, а также моноцитов и макрофагов), содержащих нафтил-АS-ацетатэстеразу в спленоцитах крыс практически не снижалось.

При действии НАК в дозе 0,75 LD50 число исследованных клеток уменьшалось в 1.28 раза (p0.05).

Содержание -нафтил-бутиратэстеразопозитивных клеток селезенки при действии НАК в дозах 0.25, 0.50 LD50 существенно не снижалось, а при дозе 0.75 LD50 - уменьшалось в 1.39 раза (p0.05) (табл 7.8).

Полученные результаты позволяют утверждать, что преимущественное снижение функции Т-клеток в гуморальных и клеточных иммунных реакциях под влиянием НАК, наряду с другими факторами, связано с ингибированием эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов.

Таблица 7. Влияние острой интоксикации НАК на содержание -нафтил-АS ацетатэстеразопозитивных и -нафтил-бутиратэстеразопозитивных клеток в спленоцитах крыс через 3 сут Доза, LD 50 Содержание -нафтил-АS- Содержание -нафтил ацетатэстеразопозитивных клеток, бутиратэстеразопозитивных % клеток,% Контроль 49,5±3,3 39,2±3, 0,25 45,0±3,6 37,2±3, 0,50 40,8±3,4 30,7±2, 0,75 38,7+2,9* 28,3+2,5* Примечание: в каждой серии опытов использовалось 6-7 крыс;

* - различия достоверны по сравнению с контролем (р 0.05) Таким образом, под влиянием НАК происходит снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов, а также дозозависимая редукция числа эстеразопозитивных клеток, к которым относятся преимущественно Т лимфоциты, а также моноциты и макрофаги.

7.7. Влияние нитрила акриловой кислоты на показатели перекисного окисления липидов ПОЛ мембран, в том числе и иммуноцитов, при остром отравлении различными токсикантами вызывает разрыхление гидрофобной области липидного бислоя мембран, разрушение веществ, обладающих антиоксидантной активностью (витаминов, стероидных гормонов, убихинона) и снижение концентрации тиолов в клетке;

образование гидроперекиси липидов трансмембранных перекисных кластеров, являющихся каналами проницаемости для ионов кальция. Формирование таких каналов патологической проницаемости может играть важную роль в возникновении избытка кальция в иммунокомпетентных клетках и реализации повреждающего действия этого катиона (Меерсон, 1984;

Абдрашидова, Романов, 2001;

Лукьянова и др., 2001;

Бурмистров и др., 2002;

Зарубина, Миронова, 2002;

Плужников и др., 2003 а, б, в).

В дальнейшем происходит изменением состава фосфолипидных мембран иммуноцитов, связанного с прямым окислением SH-групп в активных центрах мембраносвязанных ферментов с образованием внутри- и межмолекулярных "сшивок" (Арчаков, 1993). Гидроперекиси липидов способны также трансформировать активность ряда ферментов, а малоновый диальдегид (МДА) может образовывать ковалентные связи со многими амидами ИКК (Забродский, 2002;

Плужников и др., 2003 а).

Весьма высокотоксичным и относительно стабильным является супероксидный анион. С его прямым или опосредованным через другие активные формы кислорода действием связывают мутагенные и канцерогенные эффекты, а также нарушение многочисленных функций иммунитета (Голиков и др., 1986).

Исследование активности каталазы, пероксидазы и малонового альдегида является информативным показателем ПОЛ при интоксикациях (Клинцевич и др., 1994;

Забродский, 2002). При этом каталаза и пероксидаза характеризует антиперекисную защиту, а МДА и суммарная продукция радикалов (СПР) являются показателями активности процессов ПОЛ.

Наши исследования изменения ПОЛ под влиянием НАК показали (табл.

7.9), что токсикант при остром, подостром и хроническом действии инициирует ПОЛ. Так, при острой интоксикации НАК активность каталазы и пероксидазы, характеризующей антиоксидантную систему (АОС), уменьшалась соответственно на 32.1 и 37.1% (p0.05). Основной продукт ПОЛ МДА при остром отравлении НАК повышался на 22.1% (p0.05), а СПР – на 22.8% (p0.05). При подостром (в течение 6 сут) и хроническом действии НАК через 30 (0.01 LD50) и 60 (0.005 LD50) сут (табл. 7.9) отмечалось снижение каталазы соответственно на 35.6, 27.6 и 40.7% (p0.05), а активность пероксидазы – соответственно на 47.3, 27.4 и 38.2% (p0.05). СПР и содержание МДА изменялись приблизительно так же, как и при остром отравлении НАК.

Таблица 7. Влияние НАК на показатели ПОЛ у крыс Суммарная Малоновый Доза, ЛД50;

Каталаза, Пероксидаза, продукция диальдегид, экспозиция, сут ммоль/мин/л. мкмоль/мин/л радикалов, усл.

нмоль/мл ед.

Контроль 270,2+22,3 48,2+3,7 34,6+3,5 6,20+0, 0,75 ЛД50 183,4+20,0* 30,3+3,2* 42,5+3,6* 7,57+0,31* 1/7 LD50 х 6 174,0+18,2* 25,4+3,2* 47,0+3,2* 7,98+0,32* 0,01 LD5030 195,5+19,6* 35,0+3,4* 44,2+3,1* 8,09+0,33* 0,005 LD50 60 160,1+17,5* 29,8+3,0* 42,5+3,0* 7,91+0,30* Примечание: в каждой серии опытов использовалось 7-10 животных;

показатели при остром, подостром и хроническом (30 и 60 сут) действии НАК определяли соответственно через 3, 7, 30 и 60 сут;

* – p0.05 по сравнению с контролем При вычислении коэффициентов корреляции (r) между числом АОК к ЭБ при остром отравлении НАК и содержанием каталазы и пероксидазы в крови крыс установлено, что они составляли соответственно 0.77 + 0. (p0.05) и 0.76 + 0.09 (p0.05). Коэффициенты корреляции при действии токсиканта между числом АОК к ЭБ и содержанием МДА в крови составляли соответственно -0.755+0.073 (p0.05) и -0.711+0.094 (p0.05).

Значения r между другими параметрами системы иммунитета при остром действии НАК и показателями АОС находились в пределах от 0.69 до 0. (p0.05), а коэффициенты корреляции между содержанием МДА в крови и показателями иммунного статуса при действии НАК составляли от -0. до -0.784 (p0.05).

Изменения показателей ПОЛ в плазме крови, несомненно, отражают процесс свободно-радикального окисления липидов, как всех клеток различных органов в целом, так и органов системы иммунитета и, в частности, лимфоцитов.

Таким образом, острая, подострая и хроническая интоксикация НАК приводит к инициации ПОЛ, что проявляется снижением активности антиоксидантной системы (редукция каталазы и пероксидазы) и увеличением содержания малонового диальдегида и суммарной продукции радикалов в плазме крови. Инициация ПОЛ под влиянием НАК является одним из факторов, способствующим формированию постинтоксикационного иммунодефицитного состояния (выявлена обратная корреляции интенсивности инициации ПОЛ с формированием иммунных реакций).

7.8. Роль супрессии функции Тh1-, Th2-лимфоцитов в редукции иммунных реакций под влиянием нитрила акриловой кислоты Относительная роль редукции функции Тh1-, Th2-лимфоцитов в супрессии иммунных реакций под влиянием НАК изучали по иммунному ответу к Т-зависимому антигену в различные сроки иммуногенеза, активности ЕКК. Гуморальную иммунную реакцию к ЭБ, характеризующую способность Th1-лимфоцитов участвовать в продукции В-лимфоцитами (плазматическими клетками) IgM (Ройт и др. 2000, Хаитов и др., 2002;

Georgiev, 1993), определяли по числу АОК в селезенке, функцию Th1 лимфоцитов - по реакции ГЗТ и активности ЕКК. Реакции оценивали на сут. НАК вводили подкожно в дозе 1/4 LD50 в течение 4 сут. Функцию Th2 лимфоцитов оценивали по числу АОК, синтезирующие IgG к ЭБ, в селезенке на пике продукции данного иммуноглобулина (14 сут) методом непрямого локального гемолиза в геле (Ройт и др., 2000). При этом НАК вводили в течение 13 сут в дозе 1/13 LD50. Крыс иммунизировали ЭБ в дозе 2·108 клеток одновременно с первым введением токсиканта. Таким образом, при оценке всех иммунных реакций обеспечивалось получение животными эквилетальной дозы токсиканта, составляющей 1.0 LD50.

Нами установлено (табл. 7.10), что под влиянием подострого действия НАК происходило снижение гуморального иммунного ответа через 5 сут после иммунизации к тимусзависимому антигену (по числу АОК в селезенке), характеризующему функцию Th1-лимфоцитов, способствующих синтезу В-клетками IgM, по сравнению с контрольным уровнем, в 2.34 раза (p0.05).

На 14 сут после иммунизации (пик иммунного ответа, оцениваемый по IgG) отмечалось уменьшение продукции IgG (по числу АОК в селезенке) в 3.17 раза (p0.05), свидетельствующее о супрессии преимущественно функции Th2-лимфоцитов, а также В-клеток. При подостром действии НАК на 5 сут отмечалась существенная редукция активности ЕКК и реакции ГЗТ соответственно в 1.86 (p0.05) и 1.90 (p0.05) раза.

Таблица 7. Влияние подострой интоксикации НАК на показатели системы иммунитета крыс, характеризующие функцию Th1- и Th2-лимфоцитов Серии АОК к ЭБ, АОК к ЭБ, ЕКК на 5 сут, % Функция Th1 опытов синтезирую- синтезирую- лимфоцитов на щим IgM на 5 щим IgG на 14 сут (реакция сут, 103 сут, 103 ГЗТ), % Контроль 49,3±3,9 55,4±4,0 31,7±30 36,7±3, НАК 21,1±2,5* 17,5±1,9* 17,0±2,4* 19,3±2,2* Примечание: в каждой серии использовалось 6-9 крыс;

* - p0.05 по сравнению с контролем Согласно данным литературы (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002;

Georgiev, Albright, 1993), число АОК к ЭБ на 5 сут после иммунизации отражает синтез IgM В-лимфоцитами и функцию Th1-клеток. Активность ЕКК и формирование ГЗТ характеризует способность Th1-лимфоцитов влиять на данные иммунные реакции при помощи -интерферона, а число АОК к ЭБ в реакции непрямого локального гемолиза в геле на 14 сут после иммунизации связано с функцией Th2-лимфоцитов и отражает синтез IgG (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002;

Smialowicz et al., 1992;

Georgiev, Albright, 1993). Показатели, характеризующие различные иммунные реакции и связанную с ними функцию Th1- и Th2-лимфоцитов, при действии НАК в среднем снижались соответственно в 2.03 и 3.17 раза. Это свидетельствует о том, что НАК в существенно большей степени поражает функцию Th2 лимфоцитов по сравнению с действием яда на Th1-лимфоциты.

Более выраженный супрессирующий эффект НАК в отношении иммунной реакции, сопряженной с функцией Th2-лимфоцитов, вероятно, обусловлен тем обстоятельтвом, что при отравлении НАК снижается синтез КС, который способен существенно снижать функцию Th1-лимфоцитов по сравнению с лимфоцитами Th2-типа (Ройт и др., 2000). Концентрация данного гормона при действии НАК, как было нами установлено (см. раздел 7.5), существенно уменьшается. Одной из причин супрессии активности ЕКК под влиянием НАК может являться снижение продукции -интерферона и ИЛ-2 соответственно Th1- и Th0-клетками (Ройт и др., 2000;

Хаитов и др., 2002).

Таким образом, подострое отравление НАК вызывает редукцию иммунных реакций, обусловленных активностью Th2-лимфоцитов, в большей степени по сравнению с иммунным ответом, связанным с функцией Th1-клеток.

* * * Данные, изложенные в этой главе, позволяют заключить, что механизмами супрессии показателей иммунного статуса при острой, подострой и хронической интоксикации НАК являются: снижение миграции КОЕс, пре-Т-клеток и В-лимфоцитов в органы системы иммунитета из костного мозга, кооперации Т- и В-лимфоцитов, преимущественная супрессия активности Th2-лимфоцитов по сравнению с функцией Th1 клеток, ингибирование эстераз Т-лимфоцитов, моноцитов и макрофагов, снижение концентрации КС в крови и инициация ПОЛ. Так, под влиянием острой интоксикации НАК происходит дозозависимое уменьшение числа КОЕс. Подострое (в течение 6 сут) и хроническое действие НАК в течение и 60 сут вызывает редукцию КОЕс соответствующую острому действию НАК в дозах 0.50-0.75 LD50. Полученные данные свидетельствуют о снижении миграции из костного мозга В-клеток и предшественников Т лимфоцитов. Под влиянием НАК на мышей нарушается функция Т лимфоцитов в большей степени по сравнению с функцией В-лимфоцитов в эффекте кооперации клеток.

Острое отравление НАК (0.75 LD50), а также подострое (в течение сут) и хроническое действие НАК в течение 30 и 60 сут, снижали массовый индекс надпочечников. Исследованный параметр уменьшался при остром действии НАК в большей степени по сравнению с его хроническим воздействием.

Острое действие НАК (0.75 LD50) снижает концентрацию КС в крови через 1 и 3 сут, а подострое (в течение 6 сут) и хроническое через 30 и 60 сут в дозах соответственно 0.01 и 0.005 LD50 вызывает уменьшение концентрации КС в плазме крови. Данное снижение уровня КС приблизительно соответствует редукции показателя при действии НАК в дозе 0.75 LD50 через 1-3 сут. Уменьшение концентрации КС свидетельствует о том, что при воздействии НАК в супрессии иммунных реакций он участия не принимает (Корнева, 1990;

Ройт и др., 2000).

Под влиянием НАК происходит снижение активности АХЭ Т лимфоцитов, а также дозозависимая редукция числа эстеразопозитивных клеток, к которым относятся преимущественно Т-лимфоциты, а также моноциты и макрофаги.



Pages:     | 1 || 3 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.