авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

«П.Ф. Забродский, В. Г. Лим ИММУНОПАТОЛОГИЯ ПРИ ОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ СПИРТАМИ И ХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ...»

-- [ Страница 3 ] --

Сидельникова Н.М., 2004]. Описан также и упрощенный метод оценки содержания КОЕс в селезенке после сублетального тотального облучения в дозе 6 Гр [Петров Р. В. и соавт., 1970]. Метод эндогенного клонирования предусматривает введение сингенных клеток КМ от мышей-доноров, подвергшихся воздействию ксенобиотика, мышам-реципиентам, облученным в летальной дозе (8 Гр) [Till J. E., Mc Culloch E. A., 1961]. Чертков И.Л. и соавт. (1990) считают, что при остром воздействии токсикантов при определении КОЕс следует говорить не о влиянии ядов на СКК, а о действии их именно на КОЕс. Существуют основания полагать, что содержание КОЕс отражает митостатическое действие ядов при изучении лимфопоэтической функции КМ, обеспечивающей иммунопоэз [Петров Р.В., Хаитов Р.М., 1981а;

Забродский П.Ф., 2002].

Использованный нами метод исследования влияния спиртов и хлорированных углеводородов на миграцию КОЕс является одним из наиболее часто применяемых в прикладных областях иммунологии [Корнева Е.А., 1990;

Забродский П.Ф. и соавт., 1997;

Забродский П.Ф., 2002].

Проведенные нами исследования показали (рис. 4.1), что острое К К 12 * * 10 * * * 1 2 3 4 5 Рис. 4.1. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на число колониеобразующих единиц в селезенке мышей через 8 сут (M+m).

По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно;

по оси ординат: число КОЕс;

К – контроль (n=40);

в каждой серии использовалось 9- животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

отравление спиртами и хлорированными углеводородами существенно уменьшают миграцию КОЕс из КМ в селезенку (p0,05), за исключением эффекта этанола, редуцирующее действие которого незначительное и статистически незначимое - p0,05. Снижение КОЕс под влиянием острой интоксикации этиленгликолем, метанолом, трихлорэтиленом, тетрахлорметаном и дихлорэтаном составляло соответственно 31,2;

41,3;

44,2;

50,7 и 52,9%. При этом в среднем спирты снижали показатель в 1, раза, а хлорированные углеводороды – в 1,96 раза (p0,05).

Исследование КОЕс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное с дозой снижение данного параметра (рис. 4.2). Можно вполне обоснованно полагать, что аналогичный характер дозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированным углеводородам.

К К * * 10 * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 4.2. Изменение число колониеобразующих единиц в селезенке мышей через 8 сут после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат: число КОЕс;

К – контроль (n=40);

в каждой серии использовалось 9-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Анализируя результаты наших исследований, можно отметить, что при острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами уменьшение числа КОЕс обусловлено, видимо, как специфическим, так и неспецифическим действием веществ и их метаболитов. Выявленные токсические эффекты, связанные с ингибированием ферментных систем лимфоидной стволовой клетки и КОЕс, а также с реализацией стресс реакции, по всей видимости, приводят к редукции пролиферации КОЕс и/или увеличению их гибели, что не противоречит данным других авторов [Петров Р.В., Хаитов Р.М., 1981а;

Гаврилов О.К. и соавт., 1985;

Переверзев А.Е., 1986;

Беликов В.Г., 2001;

Василенко О.А., 2004].

Острое отравление хлорированными углеводородами, вероятно, вызывает инактивацию эстераз КОЕс [Забродский П. Ф., 1993, 2002]. О действии хлорированных углеводородов на неспецифические эстеразы КОЕс можно говорить лишь предположительно, так как в литературе наличие этих энзимов в КОЕс не описано. Это связано с методическими трудностями выделения КОЕс из КМ - в селезенке определяется не одиночная колониеобразующая клетка, а бляшка, сформировавшаяся за 8 сут и состоящая из пяти типов клеточных элементов: миелоидных, мегакариоцитарных, эритроидных, недифференцированных и смешанных [Петров Р.В. и соавт., 1981б]. Следует отметить, что среди клеток костного мозга эстеразопозитивными клетками являются мегакариоциты, монобласты, миэлобласты, промиелоциты [Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д., 1983].

Снижение числа КОЕс под влиянием спиртов может быть обусловлено ингибированием тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования в лимфоидных стволовых клетках, КОЕс (реализация одного их общих механизмов токсичности большого числа ксенобиотиков [Ротенберг Ю.С., 1982]), нарушением функции ферментов этих клеток в результате взаимодействия метаболитов токсикантов с их сульфгидрильными и аминогруппами [Iokobsen D., 1984;

Gabon P.A., 1986].

Инициация ПОЛ под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов, как одного их общих механизмов иммунотоксичности [Забродский П. Ф., 1998;

2002], также, вероятно, может приводить к снижению КОЕс.

Следует отметить, возможна активация парасимпатического отдела вегетативной нервной системы вследствие антихолинэстеразного эффекта хлорированных углеводородов [Тиунов Л.А., 1990а, 1990б]. При этом ацетилхолин, вероятно, способен активировать м-холинорецепторы КОЕс, что приводит к увеличению их миграции из костного мозга в селезенку с последующим образованием пяти типов колоний [Забродский П.Ф., 1993].

Многочисленные данные литературы косвенно подтверждают это предположение [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б;

Петров Р.В., Хаитов Р.М., 1981а;

Дешевой Ю. Б., 1984, 1985;

Kutty K. M. et al., 1976;

Maslinski W. et al., 1992]. Приведенные на рис. 4.1 и 4.2 данные свидетельствуют о том, что факторы, снижающие КОЕс, существенно превышают возможный стимулирующий миграцию КОЕс эффект ацетилхолина при действии хлорированных углеводородов (дихлорэтана, трихлорэтилена) [Тиунов Л.А., 1990а;

Забродский П.Ф. и соавт., 2004а].

Уменьшение числа КОЕс прямо связано с миграцией В-клеток из КМ [Петров Р.В. и соавт., 1981б], поэтому вполне обоснованно можно полагать, что спирты и хлорированные углеводороды снижают также и этот важный параметр индуктивной фазы иммуногенеза.

Таким образом, под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами снижается миграция КОЕс из костного мозга, что подтверждает нарушение функционального состояния клона кроветворных клеток, относящихся к КОЕс, и, следовательно, нарушение функции стволовых кроветворных клеток, продуцирующих этот клон.

Редуцирующий эффект токсикантов уменьшался в последовательности:

дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.

4.2. Определение лимфоидного индекса тимуса и селезенки Лимфоидный индекс тимуса и селезенки (относительная масса органов) является косвенным показателем содержания ядросодержащих клеток в этом органе, то есть в определенной степени характеризует процессы апоптоза тимоцитов и миграцию их в циркулирующую кровь [Гольдберг Е. Д. и соавт., 1972;

Тихонов В. Н., 1981;

Александров В. Н., 1983;

Беликов В.Г., 2001;

Мальцева Г.М., 2002;

Молотков А.О., 2002;

Сидельникова Н.М., 2004].

Известно, что тимэктомия приводит к существенному снижению содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета вследствие супрессии лимфоидного ростка кроветворения [Жданов В.В. и соавт., 2002].

Оценку влияния острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами на лимфоидный индекс тимуса и селезенки белых крыс проводили через 1-6 cут после введения ядов. В этот период при острых воздействиях ксенобиотиков на животных происходит снижение ЛИ тимуса [Забродский П.Ф., 1998;

Descotes J., 1986].

В проведенных нами исследованиях установлено (табл. 4.1), что при действии токсикантов через 1-3 сут ЛИ тимуса существенно снижался (р0,05). Острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородами приводила через 1 сут к уменьшению ЛИ тимуса в 1,30 раза (этанол), и в 1, раза (дихлорэтан). Спустя 6 сут масса тимуса после отравления ядами практически полностью восстанавливалась.

Таблица 4. Изменение лимфоидного индекса тимуса крыс под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 1-6 сут, усл. ед. (M+m) Токсиканты Срок наблюдения, сут 1 3 Контроль 2,35+0,10 (40) Метанол 1,63+0,18* 1,70+0,22* 2,43+0, Этиленгликоль 1,70+0,19* 1,75+0,23* 2,41+0, Этанол 1,80+0,20* 1,80+0,22* 2,32+0, Дихлорэтан 1,39+0,21* 1,60+0,16* 2,19+0, Тетрахлорметан 1,45+0,16* 1,64+0,17* 2,23+0, Трихлорэтилен 1,55+0,17* 1,73+0,18* 2,30+0, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Редуцирующий эффект токсикантов уменьшался в последовательности:

дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль этанол.

Оценка ЛИ тимуса крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном (их эффекты наиболее выражены) показала наличие дозозависимого действия этих ядов через 1 сут после отравления (рис. 4.3).

По всей видимости, такой же характер эффекта присущ и другим спиртам и хлорированным углеводородам.

2, К К * * * * 1, 0, 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 4.3. Изменение лимфоидного индекса тимуса крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат: ЛИ, усл. ед.;

К – контроль (n=40);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Исследования показали (табл. 4.2), что при действии спиртов и хлорированных углеводородов через 1 сут ЛИ селезенки крыс уменьшался в 1,16 раза (этанол) и в 1,42 раза (дихлорэтан). Аналогичное снижение параметра отмечалось и через 3 сут. В последующее время через 6 сут масса органа после отравления токсикантами практически полностью восстанавливалась.

Таблица 4. Изменение лимфоидного индекса селезенки крыс под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 1-6 сут, усл. ед. (M+m) Токсиканты Срок наблюдения, сут 1 3 Контроль 4,90+0,16 (40) Метанол 3,90+0,31* 4,07+0,35* 4,78+0, Этиленгликоль 3,71+0,33* 3,74+0,29* 4,98+0, Этанол 4,20+0,35 4,83+0,40 4,94+0, Дихлорэтан 3,44+0,32* 3,56+0,35* 5,01+0, Тетрахлорметан 3,52+0,29* 3,78+0,37* 4,85+0, Трихлорэтилен 3,98+0,36* 4,05+0,31* 5,06+0, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Супрессирующее действие ядов уменьшалось в последовательности:

дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол. Следует отметить, что различия в токсических эффектах спиртов и хлорированных углеводородов были статистически не значимы.

Исследование ЛИ селезенки белых крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном свидетельствует, что снижение показателя прямо связано с дозой яда через 1 сут после отравления (рис. 4.4).

Полученные данные подтверждают выводы других авторов, что установленный эффект токсикантов может быть связан с апоптозом клеток органов иммунной системы вследствие действия ядов и их метаболитов [Сидельникова Н.М., 2004], а также с действием кортикостероидов [Петров Р.

В. и соавт., 1981а, 1981б] вследствие реализации стресс-реакции после острого действия ксенобиотиков [Идова В.Г. и соавт., 2004]. Так, на 4 сут постреанимационного периода у крыс отмечали снижение ЛИ (относительной массы) тимуса на 44,7% [Мутускина Е.А. и соавт., 2001].

К К * * * 4 * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 4.4. Изменение лимфоидного индекса селезенки крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат: ЛИ, усл. ед., ;

К – контроль (n=40);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Таким образом, под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами дозозависимо в течение 1-3 сут снижаются лимфоидные индексы тимуса и селезенки, что в определенной степени свидетельствует о нарушении процессов апоптоза тимоцитов и миграции их в циркулирующую кровь. Показатели восстанавливались до контрольного уровня через 6 сут. Максимальное уменьшение показателя характерно для хлорированных углеводородов.

4.3. Оценка числа Т-лимфоцитов в тимусе и лимфоцитов в селезенке Проведенный анализ результатов исследования (табл. 4.3) по оценке числа Т-лимфоцитов в тимусе крыс свидетельствует о том, что под влиянием токсического действия спиртов и хлорированных углеводородов Таблица 4. Изменение содержания лимфоцитов в тимусе крыс под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 1-6 сут, 108 (M+m) Токсиканты Срок наблюдения, сут 1 3 Контроль 6,21+0,37 (32) Метанол 3,82+0,71* 4,02+0,73* 6,32+0, Этиленгликоль 4,03+0,63* 4,40+0,70* 6,08+0, Этанол 4,85+0,73 5,23+0,67 6,65+0, Дихлорэтан 3,49+0,61* 3,65+0,60* 6,12+0, Тетрахлорметан 3,67+0,65* 3,84+0,64* 5,59+0, Трихлорэтилен 4,17+0,67* 4,44+0,69* 6,50+0, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

уменьшалось число Т-лимфоцитов в тимусе через 1 сут в диапазоне от 21,9% (этанол) (p0,05) до 43,8% (дихлорэтан). В дальнейшем снижение показателя отмечалось в течение 3 сут. Существенных различий в уменьшении эффектов под влиянием ядов не выявлено. Восстановление показателя до контрольного значения было зарегистрировано через 6 сут после отравления.

Представленные в табл. 4.4 результаты позволяют сделать заключение о Таблица 4. Изменение содержания лимфоцитов в селезенке крыс под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 1-6 сут, 108 (M+m) Токсиканты Срок наблюдения, сут 1 3 Контроль 7,22+0,38 (32) Метанол 5,45+0,68* 6,62+0,60 7,01+0, Этиленгликоль 5,73+0,72* 6,05+0,62 7,45+0, Этанол 6,56+0,70 6,83+0,73 7,91+0, Дихлорэтан 5,12+0,61* 5,31+0,66* 6,87+0, Тетрахлорметан 5,35+0,65* 5,38+0,59* 6,25+0, Трихлорэтилен 5,51+0,67* 5,42+0,58* 6,94+0, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

том, что содержание лимфоцитов в селезенке после отравления спиртами и хлорированными углеводородами изменялось аналогично. Максимальная редукция показателя установлена после острого отравления дихлорэтаном (в 1,41 раза, p0,05), минимальная – для этанола (в 1,10 раза, p0,05).

Полученные данные показывают, что различий между параметрами редукции числа клеток выявлено не было. В селезенке под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами содержание лимфоцитов уменьшалось в наибольшей степени при действии хлорированных углеводородов (табл. 4.4).

Следует отметить, что только после действия тетрахлорметана отмечалась выраженная тенденция к снижению содержания лимфоцитов в лимфоидных органах через 6 сут. Это обусловлено, видимо, способностью данного яда к более длительному депонированию в органах богатых липидами по сравнению с дихлорэтаном, трихлорэтиленом и спиртами [Тиунов Л.А., 1990а, 1990б;

Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001].

Исследование содержания лимфоцитов в тимусе и селезенке после острого отравления метанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное с дозой снижение данного параметра через 1 сут (рис. 4.5, 4.6). Существуют основания полагать, что такой же характер дозозависимого эффекта в исследованном диапазоне доз присущ и другим спиртам и хлорированным углеводородам.

Известно, что содержание в тимусе и селезенке лимфоцитов является показателем, характеризующим способность данных органов обеспечивать иммуногенез, то есть реализацию клеточных и гуморальных иммунных реакций. Многие авторы считают, что спирты и хлорированные углеводороды способны снижать массу тимуса и селезенки, а также содержание в них лимфоцитов в результате реализации стресс-реакции (действие гормонов коры надпочечников, в частности, кортикостерона) [Мутускина Е.А. и соавт., 2001], уменьшая миграцию в эти органы К * * * * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 4.5. Изменение содержания лимфоцитов в тимусе крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через сут, (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат: 108 лимфоцитов;

К – контроль (n=32);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

К К * * * 6 * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 4.6. Изменение содержания лимфоцитов в селезенке крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы через сут, 108 (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат: 108 лимфоцитов;

К – контроль (n=32);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

лимфоцитов из костного мозга [Петров Р. В. и соавт., 1981а, 1981б;

Забродский П.Ф., 1998;

Молотков А.О., 2002], подавляя пролиферацию лимфоцитов в тимусе и селезенке [Петров Р. В., 1987], усиливая миграцию из тимуса и селезенки лимфоцитов в циркулирующую кровь (реализация перераспределения, вследствие действия кортикостероидов и катехоламинов) [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б;

Молотков А.О., 2002;

Dhabhar F. S. et al., 1996]. Кроме данных процессов после отравления возможен лизис лимфоцитов в органах системы иммунитета под влиянием кортикостероидов [Петров Р. В. и соавт., 1981а, 1981б;

Молотков А.О., 2002;

Петров Р. В., 1987;

Claman H.N., 1972, 1983]. Имеются сведения о том, что содержание Т лимфоцитов в тимусе снижают механическая травма [Александров В.Н., 1983] и другие стрессорные воздействия, приводящие к увеличению концентрации кортикостероидов в плазме крови [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б]. Такой же эффект оказывает ацетилхолин (стимуляция м холинорецепторов тимоцитов), вызывая выход зрелых Т-клеток из тимуса [Maslinski W. et al., 1992]. Можно предположить, что дихлорэтан, трихлорэтилен, оказывая антихолинэстеразный эффект [Тиунов Л.А., 1990а], снижают число клеток в тимусе не только вследствие апоптоза [Хаитов Р.М и соавт., 2000;

Durant S., 1986], но и в результате их миграции из органа.

Кроме того, содержание лимфоцитов в селезенке зависит от функционального состояния -адренорецепторных структур этого органа [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б]. Возможно, изменение активности ГГАС также приводит к снижению лимфоцитов в данном органе.

Существует мнение, что при действии спиртов и хлорированных углеводородов снижение содержания лимфоцитов в тимусе и селезенке происходит, вероятно, и вследствие их общетоксического эффекта – подавление пролиферации иммуноцитов в результате ингибирования ферментов тканевого дыхания митохондрий ИКК [Ротенберг Ю.С., 1982;

Забродский П.Ф., 1998], а также инактивации метаболитами токсикантов многочисленных ферментных систем лимфоцитов [Тиунов Л.А., 1990а].

Кроме того, токсиканты способны нарушать процесс позитивной (положительной) селекции Т-лимфоцитов [Fink P.J., Bevan M.J., 1995].

Необходимо отметить, что миграция лимфоцитов из органов системы иммунитета весьма динамичный процесс, зависящий от времени суток [Dhabhar F. S. et al., 1996] и различных факторов, в частности от изменения функционального состояния органов системы иммунитета под влиянием ГГАС, а также от содержания кортикостероидов [Горизонтов П. Д., 1981б;

Claman H.N., 1983;

Dhabhar F. S. et al., 1996], катехоламинов [Маdden K. S., Livnat S., 1991] и от состояния холинергической системы [Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2001].

Таким образом, под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами в прямой зависимости от дозы снижается содержание Т-лимфоцитов в тимусе и лимфоцитов в селезенке через 1-3 сут после интоксикации, что доказывает нарушение иммуногенеза и реализации клеточных и гуморальных иммунных реакций. Существенных различий между установленными показателями редукции, вызванной ядами, выявлено не было, хотя максимальное снижение показателя характерно для дихлорэтана, а минимальное - для этиленгликоля и этанола. В течение 6 сут после действия токсикантов содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке восстанавливалось до контрольного уровня.

4.4. Содержание лимфоцитов в лимфатических узлах, костном мозге и крови при действии спиртов и хлорированных углеводородов Результаты проведенных опытов позволили установить (табл. 4.5), что при остром токсическом действии хлорированных углеводородов в дозе 0, ЛД50 через 1-3 сут отмечается снижение лимфоцитов в костном мозге (р0,05). При действии спиртов выявлено незначительное снижение показателя, которое по сравнению с контролем было статистически не значимо.

Таблица 4. Изменение содержания лимфоцитов в костном мозге крыс под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 1-6 сут, 106 (M+m) Токсиканты Срок наблюдения, сут 1 3 Контроль 39,1+1,9 (32) Метанол 35,3+3,5 34,8+3,2 39,1+3, Этиленгликоль 34,0+3,4 33,7+3,5 40,2+3, Этанол 36,5+3,7 38,0+3,1 38,5+3, Дихлорэтан 30,6+3,3* 21,0+3,2* 37,5+3, Тетрахлорметан 31,1+3,0* 30,2+3,3* 35,0+3, Трихлорэтилен 33,2+3,1** 34,1+3,4 41,3+4, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

*;

**- различие с контролем достоверно - р0,05 (*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона-Манна- Уитни).

Затем в течение 6 сут после действия хлорированных углеводородов содержание лимфоцитов в КМ восстанавливалось до контрольного уровня.

Наши исследования выявили аналогичные изменения после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами содержания лимфоцитов в лимфатических узлах (табл. 4.6).

Таблица 4. Изменение содержания лимфоцитов в лимфоузлах крыс под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 1-6 сут, 106 (M+m) Токсиканты Срок наблюдения, сут 1 3 Контроль 12,4+0,8 (32) Метанол 9,3+1,5 9,0+1,4 14,2+2, Этиленгликоль 10,3+1,8 11,5+1,9 11,4+2, Этанол 13,7+1,9 12,1+2,0 12,4+1, Дихлорэтан 8,5+1,4* 8,0+1,5* 13,6+2, Тетрахлорметан 8,9+1,3** 8,4+1,6* 10,0+2, Трихлорэтилен 9,6+1,6** 9,8+1,7** 12,5+2, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

*;

**- различие с контролем достоверно - р0,05 (*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона-Манна- Уитни).

Кроме того, при отравлении тетрахлорметаном отмечалась тенденция к снижению содержания лимфоцитов в лимфоидных органах через 6 сут. Это обусловлено, по-видимому, способностью тетрахлорметана к более длительному депонированию в органах богатых липидами по сравнению с другими хлорированными углеводородами [Чиркова В.М., 1983;

Тиунов Л.А., 1990а, 1990б].

Изучение содержания лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах белых крыс после острого отравления дихлорэтаном (наиболее иммунотоксичным из исследованных токсикантов) показало, что снижение данных параметров прямо связано с дозой токсиканта через 1 сут после отравления (рис. 4.7 и 4.8).

35 * К 0,25 0,5 0, Рис. 4.7. Изменение содержания лимфоцитов в костном мозге крыс после острого отравления дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут, (M+m).

По оси абсцисс: К – контроль (n=32), ЛД50;

по оси ординат: 106 лимфоцитов;

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Однако это связь выражена незначительно. Так, при действии дихлорэтана в дозах 0,25 и 0,50 ЛД50 содержание лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах белых крыс уменьшалось несущественно.

Статистически достоверные различия с контролем исследованных показателей наблюдались только лишь при остром токсическом действии дихлорэтана в дозе 0,75 ЛД50 (р0,05).

* К 0,25 0,5 0, Рис. 4.8. Изменение содержания лимфоцитов в лимфоузлах крыс после острого отравления дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут, (M+m).

По оси абсцисс: К – контроль (n=32), ЛД50;

по оси ординат: 106 лимфоцитов;

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Анализируя результаты наших исследований, следует отметить, что под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов в дозе 0,75 ЛД50 через 1- сут наблюдалось снижение содержания лимфоцитов в крови только после острого отравления дихлорэтаном и трихлорэтиленом (табл. 4.7). Через 6 сут после действия этих хлорированных углеводородов содержание лимфоцитов в крови восстанавливалось до контрольного уровня.

Таблица 4. Изменение содержания лимфоцитов в крови крыс под влиянием острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 1-6 сут, 109/л (M+m) Токсиканты Срок наблюдения, сут 1 3 Контроль 7,4+0,1 (20) Метанол 8,0+0,3 7,9+0,3 7,6+0, Этиленгликоль 7,8+0,2 7,5+0,2 7,7+0, Этанол 7,6+0,3 7,3+0,2 7,5+0, Дихлорэтан 6,8+0,2* 6,7+0,2* 7,1+0, Тетрахлорметан 7,0+0,3 6,9+0,2* 7,2+0, Трихлорэтилен 7,1+0,2 7,3+0,3 8,0+0, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Так, исследование содержания лимфоцитов в крови крыс после острого отравления дихлорэтаном показало, что снижение показателя прямо связано с дозой токсиканта через 1 сут после отравления (рис. 4.9).

* 5 * К 0,25 0,5 0, Рис. 4.9. Изменение содержания лимфоцитов в крови крыс после острого отравления дихлорэтаном в зависимости от дозы через 1 сут (M+m).

По оси абсцисс: К – контроль (n=20), ЛД50;

по оси ординат: 109/л;

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Учитывая имеющиеся данные, что под влиянием постинтоксикационного стресса, вызванного отравлением спиртами и хлорированными углеводородами, число лимфоцитов снижается в тимусе и селезенке, а в других органах системы иммунитета этот феномен выявлен только при действии хлорированных углеводородов (в частности, после отравления дихлорэтаном и в меньшей степени после интоксикации тетрахлорметаном и трихлорэтиленом), можно предположить, что постинтоксикационный апоптоз характерен для хлорированных углеводородов в большей степени по сравнению со спиртами. Его реализация обеспечивается высокой концентрацией кортикостероидов после отравления (стресс-реакция) [Петров Р.В. и соавт., 1981а, 1981б;

Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2001;

Молотков А.О., 2002;

Петров Р.В., 1987;

Claman H.N., 1983], эффектом хлорированных углеводородов и их метаболитов [Забродский П.Ф., 2002;

Durant S., 1986].

При изучении содержания Т- и В-лимфоцитов под влиянием спиртов в органах системы иммунитета белых мышей установлено (табл. 4.8), что метанол и этиленгликоль через 2 сут после отравления уменьшают содержание Т-лимфоцитов в тимусе и В-клеток в селезенке. Выявлена максимально выраженная редукция числа В-клеток в селезенке под влиянием метанола. Этанол практически не влиял на содержание Т- и В-клеток в лимфоидных органах. Кроме того, отмечалась тенденция к снижению содержания данных популяций лимфоцитов в других органах системы иммунитета. Через 6 сут исследованные показатели восстанавливались до контрольных значений.

Полученные результаты наших исследований свидетельствуют о том, что при остром отравлении хлорированными углеводородами (табл. 4.9) существенно (p0,05) снижалось содержание Т-клеток в тимусе, селезенке и лимфатических узлах через 2 сут. Установлено уменьшение количества В лимфоцитов в селезенке, КМ и лимфатических узлах. В последующее время через 6 сут после отравления содержание лимфоцитов в лимфоидных органах восстанавливалось до контрольного уровня.

Таблица 4. Влияние острого отравления спиртами (0,75 LD50) на содержание Т- и В-лимфоцитов в лимфоидных органах мышей через 2 и 6 сут, 106 [M+m] Время после Содержание лимфоцитов Спирты Орган интоксикации, сут Т В Тимус 59,3+3,2 Контроль - Селезенка 68,2+4,5 72,3+4, КМ - 3,5+0, ЛУп 1,7+0,1 0,5+0, Тимус 47,1+3,1* 2 Селезенка 59,0+4,3 53,5+4,1* КМ - 3,0+0, Метанол 0,3+0, ЛУп 1,7+0, Тимус 64,1+3,5 6 Селезенка 70,0+4,2 75,1+4, КМ - 3,2+0, ЛУп 1,9+0,2 0,6+0, Тимус 49,2+3,2* 2 Селезенка 61,2+4,1 59,3+4,0* КМ - 3,1+0, Этиленгликоль 0,3+0, ЛУп 1,7+0, Тимус 55,8+3,7 6 Селезенка 65,0+4,0 67,1+4, КМ - 3,1+0, ЛУп 1,5+0,2 0,3+0, Тимус 55,8+3,7 2 Селезенка 65,0+4,0 67,1+4, Этанол КМ - 3,1+0, ЛУп 1,5+0,2 0,3+0, Тимус 56,1+3,3 6 Селезенка 65,0+4,3 69,5+4, КМ - 3,6+0, ЛУп 1,5+0,2 0,6+0, Примечание: КМ – костный мозг, ЛУп – паховые лимфоузлы;

в каждой серии использовалось от 9 до 13 мышей;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Таблица 4. Влияние острого отравления хлорированными углеводородами (0,75 LD50) на содержание Т- и В-лимфоцитов в лимфоидных органах мышей через 2 и 6 сут, 106 [M+m] Хлорированные Время после Лимфоциты углеводороды интоксикации, Орган сут Т В Тимус 59,3+3,2 Контроль - Селезенка 68,4+4,5 72,3+4, КМ - 3,5+0, ЛУп 1,9+0,1 0,7+0, Тимус 45,1+3,3* 2 Селезенка 56,0+4,0* 62,9+3,8* КМ - 2,8+0,2* ДХЭ 0,3+0,1* ЛУп 1,3+0,2* Тимус 55,8+3,7 6 Селезенка 65,0+4,0 67,1+4, КМ - 3,0+0, ЛУп 1,6+0,2 0,5+0, Тимус 44,9+3,9* 2 Селезенка 58,3+3,4* 60,2+4,1* КМ - 2,7+0,2* ТХМ ЛУп 1,4+0,1* 0,4+0,1* Тимус 56,1+3,3 6 Селезенка 63,0+4,3 67,5+4, КМ - 3,1+0, ЛУп 1,7+0,2 0,6+0, Тимус 49,1+3,5* 2 Селезенка 56,5+3,4* 60,5+3,8* КМ - 2,9+0,2* ТХЭ ЛУп 1,5+0,1* 0,4+0,1* Тимус 62,0+3,5 6 Селезенка 65,4+4,7 70,1+4, КМ - 3,3+0, 0,8+0, ЛУп 1,9+0, Примечание: КМ – костный мозг, ЛУп – паховые лимфоузлы;

в каждой серии использовалось от 9 до 13 мышей;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Как уже указывалось, существуют основания полагать, что снижение лимфоцитов между органами системы иммунитета связано с активацией ГГАС при действии хлорированных углеводородов, изменением характера холинергической иннервации лимфоидных органов при остром отравлении дихлорэтаном и тетрахлорметаном [Горизонтов П.Д., 1981а, 1981б;

Корнева Е А. и соавт., 1985, 1988, 1990;

Rey A. et al., 1984;

Maslinski W. et al., 1992].

Кроме того, спирты, хлорированные углеводороды и их метаболиты способны, ингибируя многочисленные энзимы ИКК и инициируя ПОЛ, вызывать нарушение гемопоэза и гибель иммуноцитов (апоптоз) [Хаитов Р.М и соавт., 2000;

Durant S., 1986].

Известно, что выраженное действие метанола на В-лимфоциты в отличие от эффектов других токсикантов обусловлено основным фолат-зависимым метаболизмом формиата [Румянцев А.П. и соавт., 1981]. Можно предположить, что при этом формиат является своего рода антагонистом фолиевой кислоты в связи с ее практически полным потреблением. В отличие от антиметаболита фолиевой кислоты (таковым является метотрексат), формиат, активно ее используя, снижает ресурсы дигидрофолатредуктазы. В результате реализуются такие же эффекты, как и у иммунодепрессанта метотрексата - уменьшается образование тетрагидрофолиевой кислоты, ингибируется перенос метильных групп, снижается синтез ДНК преимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000]. Вероятно, метанол способен нарушать и процесс селекции естественных аутореактивных В-лимфоцитов [Hayakawa K., 1999].

Таким образом, при исследовании влияния спиртов и хлорированных углеводородов в дозе 0,75 ЛД50 на число лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах установлено, что редукцию показателя вызывают через 1-3 сут только хлорированные углеводороды. Снижение количества лимфоцитов в крови обусловливает только дихлорэтан. Для дихлорэтана характер снижения лимфоцитов в органах носит дозозависимый характер. Через 2 сут после острого действия спирты – метанол и этиленгликоль - снижают содержание Т-лимфоцитов в тимусе и В-клеток в селезенке. Редукция числа В-клеток в селезенке максимально выражена под влиянием метанола. Этанол практически не влияет на содержание Т- и В-клеток в лимфоидных органах.

Хлорированные углеводороды уменьшают содержание Т-клеток в тимусе, селезенке, лимфатических узлах и В-лимфоцитов в селезенке, костном мозге и лимфатических узлах через 2 сут. В последующее время через 6 сут содержание лимфоцитов в лимфоидных органах восстанавливается до контрольного уровня.

Резюме Материалы данной главы свидетельствуют о снижении числа КОЕс и лимфоцитов в органах системы иммунитета после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами. В целом в порядке увеличения эффекта токсиканты располагались в последовательности: этанол, этиленгликоль, метанол, трихлорэтилен, тетрахлорметан, дихлорэтан.

Под влиянием острого действия спиртов и хлорированных углеводородов дозозависимо в течение 1-3 сут снижаются лимфоидные индексы тимуса и селезенки. Показатели восстанавливались до контрольного уровня через 6 сут. Максимальное уменьшение показателя характерно для хлорированных углеводородов.

Спирты и хлорированные углеводороды в прямой зависимости от дозы уменьшают содержание Т-лимфоцитов в тимусе и лимфоцитов в селезенке через 1-3 сут после интоксикации. Существенных различий между установленными показателями редукции, вызванной ядами, выявлено не было, хотя максимальное снижение показателя характерно для дихлорэтана, а минимальное - для этиленгликоля и этанола. Через 6 сут после действия токсикантов содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке восстанавливалось до контрольного уровня.

При исследовании влияния спиртов и хлорированных углеводородов в дозе 0,75 ЛД50 на содержание лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах, показано, что редукцию показателя вызывают через 1-3 сут только хлорированные углеводороды. Снижение количества лимфоцитов в крови обусловливает только дихлорэтан. Для дихлорэтана характер снижения лимфоцитов в органах носит дозозависимый характер. Через 2 сут после острого действия спирты – метанол и этиленгликоль - снижают содержание Т-лимфоцитов в тимусе и В-клеток в селезенке. Редукция числа В-клеток в селезенке максимально выражена под влиянием метанола. Этанол практически не влияет на содержание Т- и В-клеток в лимфоидных органах.

Хлорированные углеводороды уменьшают содержание Т-клеток в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, и В-лимфоцитов в селезенке, костном мозге и лимфатических узлах через 2 сут. Через 6 сут содержание лимфоцитов в лимфоидных органах восстанавливается до контрольного уровня.

ГЛАВА 5.

ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ СПИРТОВ И ХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ НА ГУМОРАЛЬНЫЕ ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ 5.1. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на Т-зависимый гуморальный иммунный ответ 5.1.1. Оценка воздействия токсичных химических веществ на антителообразование к Т-зависимому антигену в динамике по титру антител в крови В экспериментах на белых крысах оценивали действие острого отравления спиртами и ХУ на гуморальный иммунный ответ к тимусзависимому антигену эритроцитам барана по титру антител через 5, 8 и 11 сут при иммунизации ЭБ, проводившейся через 3 сут после интоксикации и практически одновременно с ней. Через 5 сут после введения ЭБ отмечается пик иммунного ответа, связанный с синтезом IgM, а через 8 и 13 сут титр антител отражает синтез преимущественно IgG, и в меньшей степени IgM [Петров Р.В. и соавт., 1981а, 1981б]. Учитывая то обстоятельство, что Th1 лимфоциты участвуют в синтезе Ig M, G2, а Th2-лимфоциты способствуют синтезу Ig G1, A, E [Pfeifer C. et al., 1991;

Georgiev V.St., Albright J.E., 1993], использованный тест дает представление о функциональной активности как Th1, так и Th2-лимфоцитов [Abbas A.K. et al., 1996;

Fleisher T.A., Oliveira J.B., 2004;

Maekawa Y., Yasutomo K., 2005].

Проведенные нами эксперименты показали (табл. 5.1), что после острой интоксикации спиртами и ХУ (0,75 ЛД50) отрицательный двоичный логарифм титра антител (ОДЛТА) к эритроцитам барана в периферической крови через 5 сут (токсиканты вводили одновременно с иммунизацией, в индуктивную фазу антителогенеза) существенно снижался, максимально в 1,67 (р0,05) раза при действии ДХЭ и минимально - в 1,13 раза (р0,05) при отравлении этанолом. Через 8 сут сохранялась редукция ОДЛТА при действии всех токсикантов, кроме этанола. К 11 сут статистически значимых отличий от контрольных значений при действии спиртов и ХУ на титр антител к ЭБ не выявлено. Сохранялась тенденция к снижению показателя при действии ТХМ, что обусловлено особенностями его токсикокинетики (медленное выведение из организма) [Чиркова В.М., 1983;

Тиунов Л.А., 1990а]. По степени редукции синтеза антител токсиканты в порядке снижения эффекта располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль - этанол. Выявлено, что в целом хлорированные углеводороды по сравнению со спиртами оказывали более выраженное действие на ОДЛТА. Так, через 1 сут среднее значение показателя при действии спиртов и ХУ составляло соответственно 5,0+0,2 и 4,0+0,2 (р0,05). Редукция ОДЛТА под влиянием ДХЭ была существенно ниже по сравнению с действием метанола, этиленгликоля и этанола.

Таблица 5. Изменение Т-зависимого гуморального иммунного ответа у крыс к ЭБ при остром отравлении спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) в индуктивной фазе антителогенеза, -log2 титра (токсиканты вводили одновременно с иммунизацией) (M+m) Время после иммунизации, сут Токсиканты 5 8 Контроль 6,0+ 0,3 4,3+ 0,3 3,5+ 0, Метанол 4,9+ 0,2* 3,4+ 0,3* 3,6+ 0, Этиленгликоль 5,0 + 0,3* 3,6 + 0,3* 3,4 + 0, Этанол 5,3+ 0,2 4,1+ 0,2 3,3+ 0, Дихлорэтан 3,6+ 0,3* 3,3+ 0,2* 3,4+ 0, Тетрахлорметан 4,0+0,2* 3,1+ 0,2* 2,9+ 0, Трихлорэтилен 4,4+ 0,2* 3,1+ 0,2* 3,0+ 0, Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05;

- различие с показателями при действии спиртов достоверно - р0,05.

Введение спиртов и ХУ через 3 сут после иммунизации ЭБ (в продуктивную фазу гуморального иммунного ответа) приводило к еще более выраженной супрессии ОДЛТА (табл. 5.2). При этом сохранялось более выраженное снижение синтеза антител к ЭБ при остром отравлении ХУ по сравнению с эффектом спиртов. Так, через 1 сут ОДЛТА при действии спиртов и ХУ составлял соответственно 3,47+0,19 и 4,43+0,21 (р0,05). ХУ через 1 сут оказывали более выраженный супрессирующий эффект по сравнению с ЭГ и Э. К 11 сут статистически значимых изменений ОДЛТА по сравнению с контролем не зарегистрировано. Сравнительная степень редукции синтеза антител (по ОДЛТА) токсикантами при их действии в продуктивный период антителогенеза была такая же, как и в индуктивной фазе.

Таблица 5. Изменение титра антител у крыс к ЭБ при остром отравлении спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) в продуктивной фазе антителогенеза, -log2 титра (токсиканты вводили через 3 сут после иммунизации) (M+m) Время после иммунизации, сут Токсиканты 5 8 Контроль 5,7+ 0,2 4,0+ 0,3 3,5+ 0, Метанол 3,9+ 0,3* 3,0+ 0,2* 3,4+ 0, Этиленгликоль 4,2+ 0,3* 3,2+ 0,3* 3,6 + 0, Этанол 5,2+ 0,2 3,8+ 0,2 3,3+ 0, Дихлорэтан 3,2+ 0,3* 2,9+ 0,2* 3,2+ 0, Тетрахлорметан 3,5+0,2* 3,1+ 0,2* 2,9+ 0, Трихлорэтилен 3,7+ 0,2* 3,0+ 0,2* 3,0+ 0, Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05;

- различие с показателями при действии ЭГ и Э достоверно - р0,05.

Проведенные нами экспериментальные исследования свидетельствуют, что при остром отравлении спиртами и ХУ в продуктивной фазе иммуногенеза их действие выражено в большей степени, чем в индуктивной фазе антителогенеза. Это может быть вызвано более выраженным поражающим эффектом спиртов и ХУ (особенно их метаболитов) на синтез IgM и IgG В-клетками (плазмоцитами) cпленоцитов, нарушением процессов дифференцировки В-лимфоцитов, перераспределения лимфоцитов между органами системы иммунитета в период максимальной антителопродукции (3-5 сут после иммунизации), а также ингибирующим синтез антител действием кортикостероидов [Claman H.N., 1983], концентрация которых в крови при действии различных токсикантов увеличивается (стресс – реакция) [Селье Г., 1972].

Таким образом, под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) происходит снижение Т зависимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА к ЭБ в крови через 5, 8 и 11 сут после иммунизации, в большей степени в продуктивную фазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом. По степени редукции синтеза антител токсиканты располагались в порядке снижения эффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.

5.1.2. Исследование действия острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами на число антителообразующих клеток в селезенке, синтезирующих IgM При исследовании содержания антителообразующих клеток (АОК) в селезенке к ЭБ у белых мышей после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 5 сут после иммунизации (при действии токсикантов в индуктивной фазе антителогенеза) было установлено (рис. 5.1) существенное уменьшение числа АОК. В наибольшей степени число АОК в селезенке мышей снижал ДХЭ (в 1, раза), в наименьшей – этанол (в 1,28 раза). В целом ХУ по сравнению со спиртами оказывали более выраженное действие на синтез IgM. Так, среднее значение показателя при действии спиртов и ХУ составляло соответственно 21,9+2,2 и 16,8+2,0 (р0,05). По степени снижения супрессии синтеза IgM токсиканты располагались в порядке: ДХЭ – ТХМ - ТХЭ – М – ЭГ – Э.

При введении спиртов и ХУ в продуктивной фазе иммуногенеза число АОК к ЭБ в селезенке мышей уменьшалось при действии ДХЭ, ТХМ, ТХЭ, М, ЭГ и Э соответственно в 1,87;

1,70;

1,55;

2,48;

2,20 и 1,90 раза. В среднем ХУ и спирты снижали число АОК в селезенке соответственно в 2,19 и 1, раза (р0,05).

К * * * * * * * 20 * * * * * 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 И П Рис. 5.1. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на число антителообразующих клеток к эритроцитам барана, синтезирующих Ig M, в селезенке белых мышей через сут в индуктивной и продуктивной фазах антителогенеза (M+m).

По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно;

И, П – индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно;

по оси ординат: число АОК, 103;

К – контроль (n=32);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* различие с контролем достоверно р0,05.

Наши исследования выявили, что сравнительная степень редукции синтеза IgM (по числу АОК) токсикантами при их действии в продуктивный период антителогенеза была такая же, как и в индуктивной фазе.

Все исследованные спирты и ХУ при их введении через 3 сут после иммунизации ЭБ (в продуктивной фазе антителогенеза) вызывали большее снижение АОК по сравнению с их действием в индуктивный период антителогенеза (введение ядов одновременно с проведением иммунизации).

Исследование Т-зависимого гуморального иммунного ответа после острого отравления наиболее иммунотоксичными из рассматриваемой группы токсикантов метанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное с дозой его снижение (рис. 5.2). Вполне логично заключить, что такой же характер дозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и ХУ.

К * * * * * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 5.2. Изменение содержания числа антителообразующих клеток к эритроцитам барана, синтезирующих IgM, в селезенке белых мышей через сут после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы в продуктивной фазе иммуногенеза (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат: число АОК, 103;

К – контроль (n=32);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Существуют основания полагать, что под влиянием спиртов и ХУ в продуктивной фазе иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом происходит более выраженная редукция функции Th1-лимфоцитов, индуцирующих синтез IgM, а также, в меньшей степени, Тh2-лимфоцитов [Pfeifer C. et al., 1991], участвующих в синтезе IgG плазмоцитами селезенки [Grandmont M.J. et al., 2003].

В литературе имеются сведения о том, что снижение функции Т зависимого антителообразования под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов может быть связано с реализацией различных механизмов иммунотоксических эффектов: на уровне систем – с активацией ГГАС, на уровне взаимодействия клеток – со снижением кооперации Т- и В лимфоцитов, на субклеточном уровне - с инициацией ПОЛ, ингибированием эстераз иммуноцитов, мембранотоксическим действием, в частности, с повреждением мембраны лизосом ИКК с высвобождением и активацией кислых гидролаз [Ахматова М.А. и соавт., 1982;

Голиков С.Н. и соавт., 1986;

Забродский П.Ф., 2002], на молекулярном уровне – с ингибированием энзимов тканевого дыхания митохондрий ИКК [Ротенберг Ю.С., 1980;

1982].

Кроме того, показано, что стресс-реакция вследствие психоэмоционального напряжения также может приводить к снижению АОК в селезенке мышей в раза [Идова В.Г. и соавт., 2004] вследствие увеличения содержания в крови глюкокортикоидов [Свирид В.Д., 2002]. Вполне логично полагать, постинтоксикационный стресс оказывает существенное влияние на супрессию гуморального иммунного ответа. Так, при действии ФОС (метафоса) удельный вес кортикостероидов в реализацию редукции Т зависимого гуморального иммунного ответа составляет более 35% [Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000].

Таким образом, под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами происходит дозозависимое снижение Т зависимого антителообразования (оцениваемого по числу АОК в селезенке, отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный период иммуногенеза по сравнению с индуктивной фазой антителогенеза. По степени редукции синтеза IgМ токсиканты располагались в порядке снижения эффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.

5.1.3. Оценка влияния острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами на число антителообразующих клеток в селезенке, синтезирующих IgG Исследование числа антителообразующих клеток в селезенке мышей, синтезирующих IgG, через 8 сут после острого действия спиртов и хлорированных углеводородов показало (рис. 5.3), что токсиканты снижают исследованный показатель в разной степени (иммунизацию ЭБ проводили одновременно с введением токсикантов).

К * 14 * * ** 12 * * * * * 10 * * * 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 И П Рис. 5.3. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на число антителообразующих клеток к эритроцитам барана, синтезирующих IgG, в селезенке мышей через 8 сут в индуктивной и продуктивной фазах антителогенеза (M+m).

По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно;

И, П – индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно;

по оси ординат: число АОК, 103;

К – контроль (n=28);

в каждой серии использовалось 7-8 животных;

*- различие с контролем достоверно - р0,05, ** - различие с метанолом достоверно - р0,05;

(*;

** для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона-Манна- Уитни).

Так, при действии этанола отмечалась тенденция к супрессии исследованного показателя. Наибольшую редукцию синтеза IgG в индуктивной фазе иммуногенеза вызывал ТХЭ (уменьшение числа АОК к ЭБ в 2,15 раза), наименьшую ЭГ (уменьшение числа АОК к ЭБ в 1,43 раза). В среднем спирты и ХУ снижали показатель соответственно в 1,46 и 1,83 раза.

По степени снижения числа АОК, синтезирующих IgG в селезенке, токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан - метанол – дихлорэтан - трихлорэтилен – этиленгликоль - этанол.

Аналогичные сдвиги показателя, но более выраженные, были зарегистрированы после действия спиртов и хлорированных углеводородов в продуктивной фазе иммуногенеза. Обращает на себя внимание наибольший иммунотоксический эффект ТХМ. Это связано с оценкой показателя на 8 сут после отравления. ТХМ, который, по сравнению с другими хлорированнами углеводородами и спиртами, выводится из организма более медленно [Чиркова В.М., 1983;

Тиунов Л.А., 1990а]. Именно на 8 сут ТХМ оказывает максимально выраженный по сравнению с другими ядами эффект.

К факторам, супрессирующим синтез IgG при острой интоксикации спиртами и ХУ (это относится и к другим ядам, не ингибирующим синтез гормонов надпочечниками), вероятно, относится эффект кортикостероидов [Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000;

Хусинов А.А. и соавт., 1991;

Szot R.J., Murphy S.D., 1970;

Tiefenbach B. et al., 1980, 1983, 1985;

Szelenyi J.G. et al., 1982;

Casale G.P. et al., 1983].

Установленное снижение синтеза IgG (а также IgM) под влиянием спиртов и ХУ, по всей видимости, обусловлены ингибированием многочисленных энзимов, в том числе неспецифических эстераз Т лимфоцитов (в основном, Th2) и макрофагов [Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д., 1983] как самими токсикантами, так и их метаболитами [Забродский П. Ф. и соавт., 2004б]. Кроме ингибирования эстераз данных клеток, редукция антителобразования может быть обусловлена снижением процессов тканевого дыхания вследствие взаимодействия метаболитов ТХВ с различными компонентами тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования митохондрий ИКК [Ротенберг Ю.С., 1980, 1982;

Забродский П. Ф., 1998, 2002].

Таким образом, под влиянием спиртов и ХУ уменьшается антителообразование, в частности, синтез IgG, что свидетельствует о снижении функции Th2-лимфоцитов. По степени уменьшения числа АОК, синтезирующих IgG в селезенке, токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан - метанол – дихлорэтан - трихлорэтилен – этиленгликоль - этанол.


5.1.4. Изучение действия острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами на число розеткообразующих клеток в селезенке Определение числа розеткообразующих клеток (РОК) в селезенке мышей через 8 сут после иммунизации ЭБ характеризует состояние В-звена иммунитета [Утешев Б. С., 1984;

Петров Р.В., 1987;

Ройт А., 1991;

Ройт А. и соавт., 2000]. В этот период после иммунизации Т-зависимым антигеном происходит переключение плазмоцитов с синтеза IgМ на продукцию IgG [Хаитов Р. М. и соавт., 2000].

Нами установлено (рис. 5.4), что под влиянием острой интоксикации различными спиртами и хлорированными углеводородами происходит существенное снижение числа РОК в селезенке белых мышей. Максимальное уменьшение РОК в индуктивной фазе иммуногенеза вызывал ТХМ (в 1, раза), минимальное – этанол (в 1,28 раз).

Аналогичные сдвиги параметра, но более выраженные, отмечались после действия спиртов и хлорированных углеводородов в продуктивной фазе иммуногенеза. Как и при оценке синтеза IgG обращает на себя внимание наибольший иммунотоксический эффект ТХМ. Это связано с отмеченными особенностями токсикокинетики ТХМ [Чиркова В.М., 1983;

Тиунов Л.А., 1990а].

К 40 * * * * 35 * * * 30 * * * * 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 И П Рис. 5.4. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на число РОК в селезенке мышей через 8 сут в индуктивной и продуктивной фазах антителогенеза (M+m).

По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно;

И, П – индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно;

по оси ординат: число РОК, 105;

К – контроль (n=28);

в каждой серии использовалось 7-8 животных;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

По степени снижения числа РОК в селезенке при действии токсикантов в индуктивной и подуктивной фазе иммуногенеза они располагались в последовательности: тетрахлорметан - метанол – дихлорэтан - трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол.

Выраженное действие метанола на В-лимфоциты (сходное по величине эффекта с действием ТХМ и ДХЭ) может быть обусловлено основным фолат зависимым метаболизмом его метаболита муравьиной кислоты (формиата) [Румянцев А.П. и соавт., 1981]. Как уже указывалось, вероятно, формиат можно рассматривать, как своего рода антагонист фолиевой кислоты в связи с ее практически полным потреблением в процессе метаболизма больших количеств метанола. При этом снижаются ресурсы дигидрофолатредуктазы.

В результате уменьшается образование тетрагидрофолиевой кислоты, ингибируется перенос метильных групп, снижается синтез ДНК преимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000].

Снижение РОК при остром токсическом действии различных спиртов и хлорированных углеводородов может быть связано с действием гормонов коры надпочечников (стресс-обусловленная активация ГГАС) [Горизонтов П.

Д., 1981а, 1981б;

Хусинов А.А. и соавт., 1991;

Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000;

Szot R.J., Murphy S.D., 1970;

Rey A. et al., 1984;

Tiefenbach B. et al., 1980, 1983, 1985;

Szelenyi J.G. et al., 1982;

Casale G.P. et al., 1983;

Dhabhar F. S.

et al., 1996], а также возможной инициацией апоптоза иммуноцитов или снижением их функции спиртами, хлорированными углеводородами и их метаболитами [Хаитов Р. М. и соавт., 2000;

Durant S., 1986;

Rinner I. et al., 1995].

Таким образом, под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов (0,75 ЛД50) снижается число РОК в селезенке крыс. В порядке снижения эффекта данного показателя токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан - метанол – дихлорэтан - трихлорэтилен – этиленгликоль - этанол. Различная степень иммунотоксичности спиртов и хлорированных углеводородов может быть обусловлена особенностями их токсикокинетики и токсикодинамики.

5.1.5. Нарушение кооперации Т- и В-клеток под влиянием спиртов, хлорированных углеводородов и их метаболитов in vitro При изучении кооперации Т- и В-лимфоцитов мышей СВА in vitro оценка функции этих популяций иммуноцитов в данной реакции осуществлялась по формированию АОК к ЭБ. Удельный вес Т- и В-клеток в обеспечении антителопродукции определяли путем сравнения числа АОК после инкубации той или иной популяции лимфоцитов в течение 2 ч с различными концентрациями спиртов и хлорированных углеводородов.

Кооперацию Т- и В-лимфоцитов можно рассматривать, как механизм на уровне взаимодействия клеток, определяющий антителопродукцию. В модели in vitro роль клеток, представляющих антиген Т-лимфоцитам, вместо макрофагов выполняют В-клетки [Хаитов Р.М. и соавт., 2000]. Ex vivo изучался данный процесс в модели, предусматривающей забор Т- или В клеток через 1 сут от сингенных доноров после воздействия на них ядов для изучения in vitro кооперации этих клеток соответственно с В- или Т лимфоцитами интактных животных.

В наших исследованиях показано (табл. 5.3), что спирты и хлорированные углеводороды в концентрациях 1, 10 и 50 мМ в прямой зависимости от дозы уменьшают функцию Т- и В-клеток в кооперации соответственно с В- и Т-лимфоцитами.

Таблица 5. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на кооперацию Т- и В лимфоцитов мышей in vitro (число АОК на 106 В-клеток) [М+m, n=7-8] В0+Т В+Т ТХВ 1мМ 10мМ 50мМ 1мМ 10мМ 50мМ М 365+37 301+30* 254+29* 349+35 287+28* 229+26* ЭГ 377+35 310+31* 236+28* 335+33 259+25* 206+21* Э 415+42 325+37 278+26* 368+37 295+29* 235+21* ДХЭ 298+30* 235+23* 157+17* 275+22* 214+24* 110+11** ТХМ 306+35* 250+24* 165+15* 287+27* 227+25* 124+13** ТХЭ 314+38* 273+29* 179+18* 306+29* 230+26* 140+14** Примечание: контроль: В-клетки - 60+7 на 106 В-клеток;

В+Т - 405+35 на 106 В клеток;

В0, Т0 - В- и Т-клетки в течение 2 ч до добавления ЭБ инкубировали с токсикантами;

*- различие с контролем (В+Т) достоверно – p0,05;

** p0,05 по сравнению с В0+Т.

В большей степени поражались под влиянием токсикантов Т-клетки. Так, при концентрации 50 мМ ЭГ снижает активность В- и Т-клеток соответственно в 1,72 и 1,97 раза, а ДХЭ - соответственно в 3,68 и 2,56 раза.

Максимальная супрессия активности Т- и В- клеток зарегистрирована под влиянием ДХЭ, минимальная - при действиии этанола. Так, при концентрации ДХЭ и Э, составляющей 10 мМ, активность В-клеток снижалась соответственно в 1,72 и 1,25 раза, а Т-лимфоцитов - в 1,89 и 1, раза соответственно. ХУ по сравнению со спиртами снижали кооперацию лимфоцитов в существенно большей степени. По мере снижения редукции кооперации Т- и В-клеток (при действии спиртов и ХУ как на Т-, так и В клетки) токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан тетрахлорметан - трихлорэтилен - метанол – этиленгликоль – этанол.

Следует отметить, что существенных отличий между действием на кооперацию клеток различных спиртов не отмечено. Аналогичные результаты получены и при изучении реакции под влиянием ХУ.

При исследовании кооперации Т- и В-клеток после выделения их у мышей через 1 сут после введения им спиртов и ХУ в дозах 0,25 и 0,75 LD50, установлено (табл. 5.4), что в прямой зависимости от дозы токсиканты поражали в большей степени Т-клетки по сравнению с В-клетками, за исключеним метанола, при действии которого наблюдали больший эффект в отношении В-лимфоцитов.

Зарегистрировано существенное снижение активности В-лимфоцитов в эффекте кооперации клеток после действия М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ и ТХЭ в дозе 0,75 LD50 соответственно в 3,01;

1,89;

1,48;

2,41;

2,27 и 1,99 раза, а Т клеток - соответственно в 1,63;

2,37;

1,55;

3,17;

2,96 и 2,68 раза. По степени снижения супрессии кооперации Т- и В-клеток при действии спиртов и хлорированных углеводородов на Т-лимфоциты токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан - трихлорэтилен этиленгликоль - метанол – этанол, а по степени уменьшения редукции кооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты - в последовательности: метанол - дихлорэтан - тетрахлорметан - трихлорэтилен - этиленгликоль - этанол.

Таблица 5. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами через 1 сут на кооперацию Т- и В-лимфоцитов мышей еx vivo (число АОК на 106 В-клеток) [М+m, n=7-8] В0+Т В+Т ТХВ 0,25 ЛД50 0,75 ЛД50 0,25 ЛД50 0,75 ЛД М 180+19* 138+20* 286+27* 255+23** ЭГ 270+25* 219+23* 236+20* 175+16** Э 328+37 281+30* 314+37 267+21* ДХЭ 220+22* 172+18* 198+18* 131+12** ТХМ 234+21* 183+15* 205+20* 140+14** ТХЭ 246+28* 208+22* 218+22* 155+13** Примечание: контроль: В-клетки - 63+7 на 106 В-клеток;

В+Т - 415+35 на 106 В клеток;

В0, Т0 – клетки получали через 1 сут от мышей, подвергавшихся действию яда;

* различие с контролем (В+Т) достоверно – p0,05;

** p0,05 по сравнению с В0+Т.

Исходя из имеющихся в литературе данных, можно полагать, что преимущественное поражение Т-клеток в эффекте кооперации обусловлено действием спиртов и хлорированных углеводородов на энзимы этих клеток, в частности, ТХЭ, ДХЭ способны оказывать действие на ацетилхолинэстеразу Т-клеток [Забродский П.Ф. и соавт., 1997]. Метанол оказывает больший поражающий эффект в отношении В-клеток только в эксперименте, где этот яд действовал на клетки in vivo. При инкубации В- или Т-клеток с различными концентрациями метанола в течение 2 ч отмечается поражение в большей степени Т-клеток, как и при действии других спиртов и ХУ.

Вероятно, Т-клетки более чувствительны к данным токсикантам, метаболизм которых in vitro не происходит и, следовательно, действие продуктов «летального синтеза», в частности, формиата при отравлении метанолом, исключено. Более высокая чувствительность Т-клеток к большинству ксенобиотиков, по сравнению с В-клетками, доказана многочисленными исследованиями [Смирнов В.С и соавт., 2000;


Забродский П.Ф. и соавт., 2001, 2002, 2004а;

Descotes G., 1986;

Luster M. J. et al., 1987;

Sullivan J. B., 1989;

Kimber I., 1996]. Метанол при метаболизме in vivo образует формиат, который поражает В-клетки, вследствие снижения ресурсов дигидрофолатредуктазы, образования тетрагидрофолиевой кислоты, что ингибирует перенос метильных групп, уменьшает синтез ДНК преимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000]. Вероятно, формиат является в определенной степени функциональным антагонистом фолиевой кислоты в связи с ее быстрой утилизацией.

Полученные нами результаты показывают, что воздействие in vitro спиртов, хлорированных углеводородов и их метаболитов в прямой зависимости от концентрации (10, 100, 500мМ) вызывает редукцию кооперации Т- и В-лимфоцитов, приводящую к ингибированию антителопродукции. Выявленный феномен связан с нарушением функции как Т-, так и В-клеток, причем активность Т-лимфоцитов снижалась в большей степени (табл.5.5).

Таблица 5. Влияние спиртов и их метаболитов на кооперацию Т- и В-лимфоцитов мышей in vitro (число АОК на 106 В-клеток) [М+m, n=7-8] В0+Т В+Т ТХВ 10мМ 100мМ 500мМ 10мМ 100мМ 500мМ М 260+27 208+21* 161+17* 221+22* 158+16** 127+12** МК 110+12* 87+7* 59+6* 141+14* 105+10** 78+8** ЭГ 277+30 215+24* 174+19* 232+23* 167+16** 123+13** ГА 169+17* 139+12* 108+10* 162+21* 131+13** 103+10** ГК 216+20 178+19* 132+15* 178+16** 124+12** 95+9** ГОК 137+14* 108+9* 70+7* 118+13* 80+8* 65+7* Э 286+31 237+23* 185+18* 242+24* 180+19** 138+12** АДГ 252+25* 184+18* 148+12* 205+19* 143+14* 115+11* Примечание: М – метанол, МК – муравьиная кислота, ЭГ – этиленгликоль, ГА – гликолевый альдегид, ГК – гликолевая кислота, ГОК – глиоксиловая кислота;

Э – этанол, АДГ - ацетальдегид;

контроль 1 и 2: В-клетки - 56+6 на 106 В-клеток;

В+Т - 345+35 на В-клеток;

В0, Т0 - Т- и В-клетки в течение 2 ч до добавления ЭБ инкубировали со спиртами или их метаболитами;

*- различие с контролем (В+Т) достоверно – p0,05;

** p0,05 по сравнению с В0+Т.

Характер снижения функции Т- и В-лимфоцитов в процессе кооперации по сравнению с контролем при действии М, ЭГ и Э в данном эксперименте был такой же, как при изучении данной реакции при концентрациях спиртов, составляющих 1, 10 и 50 мМ (табл. 5.3). При действии на Т - и В-лимфоциты метаболитов спиртов: муравьиной кислоты, гликолевого альдегида, гликолевой кислоты, глиоксиловой кислоты, ацетальдегида, отмечалась прямо связанная с дозой редукция их способности участвовать в кооперации лимфоцитов. Причем спирты по сравнению с их метаболитами поражали как Т-, так и В-лимфоциты в меньшей степени. Метаболит этиленгликоля глиоксиловая кислота оказывала более выраженное воздействие на Т-клетки, чем метаболиты метанола и этанола – муравьиная кислота и ацетальдегид при концентрациях 10, 100 и 500 мМ. Гликолевый альдегид и гликолевая кислота в эквимолярных концентрациях повреждали Т-клетки в меньшей степени, чем муравьиная кислота. По степени редукции функции Т-клеток в эффекте кооперации клеток метаболиты спиртов располагались в порядке уменьшения эффекта в последовательности: глиоксиловая кислота – муравьиная кислота – гликолевый альдегид – гликолевая кислота – ацетальдегид.

Метаболит метанола муравьиная кислота оказывала больший супрессирующий эффект на функцию В-лимфоцитов, чем другие продукты биотрансформации спиртов в эквимолярных концентрациях. В порядке снижения редуцирующего эффекта в отношении активности В-клеток при исследовании эффекта кооперации лимфоцитов метаболиты спиртов располагались в следующей последовательности: муравьиная кислота глиоксиловая кислота – гликолевый альдегид – гликолевая кислота – ацетальдегид.

Следует отметить, что число АОК при инкубации ЭБ только с В лимфоцитами (контроль 1) статистически значимо не отличалось от показателя, полученного при инкубации Т-, В-клеток и ЭБ после действия на В-клетки муравьиной кислоты и глиоксиловой кислоты, а также при инкубации лимфоцитов и ЭБ после воздействия на Т-клетки глиоксиловой кислоты в эквимолярной концентрации, составляющей 500 мМ. Это свидетельствует о практически полном нарушении кооперации лимфоцитов в процессе антителогенеза при действии этой концентрации токсикантов вследствие поражения В-лимфоцитов муравьиной и глиоксиловой кислотами и Т-клеток – глиоксиловой кислотой.

Как уже указывалось, более выраженное повреждающие воздействие муравьиной кислоты в отношении В-клеток обусловлено основным фолат зависимым метаболизмом формиата [Румянцев А.П. и соавт., 1981]. Мы предполагаем, что при этом муравьиная кислота является своего рода антагонистом фолиевой кислоты в связи с ее практически полным потреблением. В отличие от антиметаболита фолиевой кислоты (таковым является метотрексат) формиат, активно ее используя, снижает ресурсы дигидрофолатредуктазы. В результате реализуются такие же эффекты, как и у иммунодепрессанта метотрексата - уменьшается образование тетрагидрофолиевой кислоты, ингибируется перенос метильных групп, снижается синтез ДНК преимущественно в В-лимфоцитах [Ройт А. и соавт., 2000].

Патогенез редукции активности Т- и В-клеток в процессе их кооперации, вероятно, связан с нарушением их функции как в результате прямого мембранотоксического эффекта спиртов, так и вследствие взаимодействия с сульфгидрильными и аминогруппами энзимов лимфоцитов высокотоксичных продуктов их биотрансформации, ингибирования ими тканевого дыхания, окислительного фосфорилирования и синтеза белков [Iokobsen D., 1984;

Gabon P.A., 1986], уменьшения активации Т- и В-лимфоцитов вследствие снижения продукции циклических нуклеотидов и секреции Т-клетками ИЛ- [Сухих Г.Т. и соавт., 1984;

Козлов В.А. и соавт., 2001;

Parker D.C., 1993] и ИЛ-4 [Шуршалина А.В. и соавт., 2001], а также в результате повреждения токсикантами мембран лизосом ИКК с высвобождением и активацией кислых гидролаз [Ахматова М.А. и соавт., 1982].

Данные литературы свидетельствуют о том, что in vivo иммунотоксический эффект метаболита этиленгликоля глиоксиловой кислоты, по-видимому, минимальный. Это обусловлено тем, что наиболее токсичная глиоксиловая кислота определяется в биосредах в концентрации 1300 раз меньшей, чем гликолевая кислота [Chou S.Y., Richardson K.E., 1978], вероятно, вследствие ее быстрой биотрансформации.

Таким образом, по степени снижения редукции кооперации Т- и В-клеток (при действии спиртов и хлорированных углеводородов как на Т-, так и В клетки) токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.

Существенных различий между действием на кооперацию клеток различных спиртов и ХУ не отмечено. По степени снижения супрессии кооперации Т- и В-клеток при действии спиртов и ХУ на Т-лимфоциты при переносе in vitro клеток от мышей после отравления токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль – метанол – этанол, а по мере уменьшения редукции кооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты - в последовательности: метанол – дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. По степени редукции функции Т клеток в эффекте кооперации клеток спирты и их метаболиты располагались в порядке уменьшения эффекта в последовательности: глиоксиловая кислота – муравьиная кислота – гликолевый альдегид – гликолевая кислота – ацетальдегид, а по степени супрессии активности В-клеток – в последовательности: муравьиная кислота – глиоксиловая кислота – гликолевый альдегид – гликолевая кислота – ацетальдегид (эффект прямо зависел от концентрации токсиканта).

Нами установлено (табл. 5.6), что под влиянием ДХЭ и его метаболитов – 2-хлорэтанола (ХЭ), хлоруксусного альдегида (ХУА), хлоруксусной кислоты (ХУК) – в прямой зависимости от концентрации происходит снижение эффекта кооперации Т- и В-лимфоцитов, оцениваемого по антителообразованию, связанного с нарушением функции как В-лимфоцитов, так и Т-клеток.

Таблица 5. Влияние ДХЭ и его метаболитов на кооперацию Т- и В-лимфоцитов мышей in vitro (число АОК на 106 В-клеток) [М+m, n=7-8] Клетки Концентрация, ДХЭ и его метаболиты мМ ДХЭ ХЭ ХУА ХУК 1 345+30 295+22* 198+20* 148+15* В +Т 10 265+27* 218+16* 120+14* 95+11* 50 195+18* 135+12* 74+11* 45+5* 1 301+22* 229+21* 154+17* 115+12* В+Т0 10 234+24* 161+19* 121+10* 85+7* 50 160+15* 98+9* 63+8* 67+6* Примечание: контроль: В-клетки - 70+ 8 на 106 В-клеток;

В+Т - 398+37 на 106 В клеток;

В0, Т0 - Т- и В-клетки в течение 1 ч до добавления ЭБ инкубировали с ДХЭ или его метаболитами;

*- различие с контролем (В+Т) достоверно – p0,05.

Дихлорэтан, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид и хлоруксусная кислота при концентрациях, составляющих 1 и 10 мМ, оказывали более выраженное воздействие на Т-клетки. Так, при действии дихлорэтана, 2 хлорэтанола, хлоруксусного альдегида и хлоруксусной кислоты в концентрации 1 мМ активность В-лимфоцитов в эффекте кооперации снижалась соответственно в 1,15 (p0,05);

1,35;

2,01 и 2,69 (p0,05) раза, а Т лимфоцитов - в 1,32;

1,72;

2,58 и 3,36 раза (p0,05) соответственно. Функция В-клеток в эффекте кооперации при действии дихлорэтана, 2-хлорэтанола, хлоруксусного альдегида и хлоруксусной кислоты в концентрации 10 мМ уменьшалась соответственно в 1,50;

1,83;

3,32 и 4,19 раза (p0,05), а Т лимфоцитов - в 1,70;

2,47;

3,29 и 4,68 раза (p0,05) соответственно.

Статистически значимое снижение антителообразования, обусловленное нарушением функции В-лимфоцитов в эффекте кооперации при концентрации дихлорэтана, 2-хлорэтанола, хлоруксусного альдегида и хлоруксусной кислоты, составляющей 50 мМ, отмечалось соответственно в 2,04;

2,95;

5,38 и 8,84 раза (p0,05), а Т-лимфоцитов - в 2,49;

4,06;

6,31 и 6, раза (p0,05) соответственно.

Из полученных данных следует, что при действии хлоруксусной кислоты в концентрации, составляющей 50 мМ, снижение антителообразования обусловлено существенным нарушением функции В-клеток, которые не способны к кооперации с Т-лимфоцитами. При этой концентрации токсиканта нарушается также функция Т-лимфоцитов. Поэтому при их взаимодействии с интактными В-клетками реализуется антителопродукция, обусловленная только функцией В-лимфоцитов. Следует отметить, что число АОК при инкубации ЭБ только с В-лимфоцитами статистически значимо не отличающееся от показателя, полученного при инкубации Т-, В-клеток и ЭБ, свидетельствует о практически полном нарушении кооперации лимфоцитов в процессе антителогенеза. Так, о значительном ингибировании кооперации лимфоцитов можно утверждать не только по результатам действия хлоруксусной кислоты в концентрации 50 мМ, но и при концентрации данного метаболита, составляющей 10 мМ, вследствие поражения как Т-, так и В-клеток, а также при воздействии хлоруксусного альдегида в максимальной из использованных концентраций.

Сравнительная оценка действия ДХЭ и его продуктов биотрансформации на кооперацию Т- и В-лимфоцитов in vitro в процессе антителогенеза позволяет заключить, что увеличение их иммунотоксичности происходит в последовательности: дихлорэтан, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид и хлоруксусная кислота.

Результаты исследований, изложенные в данном разделе, позволяют заключить, что по степени снижения редукции кооперации Т- и В-клеток (при действии токсикантов in vitro как на Т-, так и В-клетки) токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль – этанол. Спирты и хлорированные углеводороды нарушают кооперацию Т- и В-лимфоцитов преимущественно вследствие иммунотоксического эффекта продуктов их биотрансформации.

Под влиянием токсикантов в большей степени поражаются Т-клетки, за исключением действия метанола при переносе in vitro Т- или В-клеток от мышей после отравления. По степени снижения эффекта кооперации Т- и В клеток при действии спиртов и хлорированных углеводородов на Т лимфоциты при переносе in vitro клеток от мышей после отравления токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол, а по степени уменьшения редукции кооперации клеток при действии ядов на В лимфоциты – в последовательности: метанол – дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. По степени снижения функции Т-клеток в реакции кооперации клеток спирты и их метаболиты располагались в порядке уменьшения эффекта в последовательности: глиоксиловая кислота, гликолевый альдегид, гликолевая кислота, муравьиная кислота, ацетальдегид, метанол, этиленгликоль и этанол, а по степени супрессии активности В-клеток – в последовательности:

муравьиная кислота, глиоксиловая кислота, гликолевый альдегид, гликолевая кислота, ацетальдегид, метанол, этиленгликоль и этанол, Увеличение иммунотоксичности дихлорэтана и его продуктов биотрансформации в реакции кооперации лимфоцитов in vitro происходит в последовательности:

дихлорэтан – 2-хлорэтанол – хлоруксусный альдегид – хлоруксусная кислота.

Действие ядов прямо связано с их концентрацией или дозой (при переносе клеток in vitro от мышей после их отравления спиртами и хлорированными углеводородами).

5.2. Исследование эффекта спиртов и хлорированных углеводородов на Т-независимый гуморальный иммунный ответ 5.2.1. Оценка воздействия на антителопродукцию к Т-независимому антигену в динамике по титру антител в крови Применение Vi-антигена позволяет рассмотреть влияние ядов на Т независимый иммунный ответ, а также оценить роль Т-хелперов в реализации гуморального иммунного ответа при сравнении Т-зависимого и Т независимого антителобразования [Утешев Б. С., 1984;

Descotes J.,1986].

Данный подход широко используется для оценки действия химических соединений на систему иммунитета [Плецитый К.Д., Сухих Г.Т., 1985;

Ройт А., 1991;

Молотков А.О., 2002;

Василенко О.А., 2004;

Сидельникова Н.М., 2004;

Забродский П.Ф., 1998, 2002;

Забродский П.Ф. и соавт., 2001, 2004а, 2004б]. При гуморальном иммунном ответе на Т-независимый антиген синтезируются только IgM [Фримель Х., Брок Й., 1986;

Ройт А. и соавт., 2000, Хаитов Р.М. и соавт., 2000].

При оценке содержания титра антител к Vi-Ag у белых крыс было установлено (табл. 5.7), Таблица 5. Изменение Т-независимой гуморальной иммунной реакции у крыс к Vi Ag (-log2 титра) при остром отравлении спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) в индуктивной фазе антителогенеза (токсиканты вводили одновременно с иммунизацией) (M+m) Время после интоксикации, сут Токсиканты 5 8 Контроль 4,2+ 0,2 3,8+ 0,2 3,1+ 0, Метанол 2,8+ 0,2* 3,2+ 0,3* 2,8+ 0, Этиленгликоль 3,2 + 0,2* 3,5 + 0,2 2,9 + 0, Этанол 3,8+ 0,2 3,7+ 0,2 3,3+ 0, Дихлорэтан 3,0+ 0,2* 3,4+ 0,2 3,2+ 0, Тетрахлорметан 2,9+0,2* 3,3+ 0,2 3,0+ 0, Трихлорэтилен 3,1+ 0,2* 3,4+ 0,2 3,1+ 0, Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

что после острой интоксикации спиртами и ХУ отрицательный двоичный логарифм титра антител к ЭБ в периферической крови через 5 сут (токсиканты вводили одновременно с иммунизацией в индуктивную фазу антителогенеза) существенно уменьшался в наибольшей степени в 1,50 раза при действии метанол и минимально в 1,35 раза при отравлении этиленгликолем. Этанол снижал ОДЛТА несущественно. Через 8 сут сохранялась статистически значимая редукция ОДЛТА только при действии метанола. К 11 сут статистически значимых различий от контрольных значений при действии токсикантов на титр антител к Vi-Ag не выявлено.

По степени редукции синтеза антител спирты и хлорированные углеводороды в порядке уменьшения показателя располагались в последовательности: метанол–тетрахлорметан - дихлорэтан - трихлорэтилен этиленгликоль - этанол. Существенных различий в супрессии показателя под влиянием различных ядов не выявлено. Отмечалась несущественная разница в среднем редуцирующем действии хлорированных углеводородов и спиртов.

Применение токсикантов через 3 сут после иммунизации Vi-Ag (продуктивная фаза гуморального иммунного ответа) приводило к более выраженной редукции ОДЛТА через 5 сут по сравнению с эффектом в индуктивной фазе иммуногенеза (табл. 5.8). Максимальное уменьшение антителопродукции через 5 сут наблюдалось под влиянием метанола в 1, раза, минимальное – под воздействием этанола в 1,18 раза. Через 8 сут сохранялась тенденция к супрессии синтеза антител при действии всех токсикантов. Метанол и дихлорэтан вызывали достоверное снижение показателя (р0,05). К 11 сут статистически значимых отличий от контрольных значений при действии токсикантов титра антител к Vi-Ag не выявлено.

По степени редукции синтеза антител спирты и хлорированные углеводороды в порядке уменьшения показателя располагались в последовательности: метанол – тетрахлорметан - трихлорэтилен - дихлорэтан - этиленгликоль - этанол. Существенные различия в эффектах токсикантов отсутствовали, за исключением действия этанола, которое было достоверно сниженным по сравнению с действием других спиртов и хлорированных углеводородов.

Таблица 5. Изменение Т-независимой гуморальной иммунной реакции у крыс к Vi-Ag (-log2 титра) при остром отравлении спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) в продуктивной фазе антителогенеза (токсиканты вводили через 3 сут после иммунизации) (M+m) Время после иммунизации, сут Токсиканты 5 8 Контроль 3,9+ 0,2 3,5+ 0,2 2,9+0, Метанол 2,4+ 0,2* 2,7+ 0,2* 2,5+0, Этиленгликоль 2,9 + 0,2* 3,2 + 0,2 2,7+0, Этанол 3,3+ 0,2* 3,3+ 0,2 3,1+ 0, Дихлорэтан 2,8+ 0,2* 2,9+ 0,2* 2,8+ 0, Тетрахлорметан 2,5+0,2* 3,0+ 0,2 2,6+ 0, Трихлорэтилен 2,7+ 0,2* 3,1+ 0,2 3,0+ 0, Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Обращает на себя внимание максимальная супрессия Т-независимого антителообразования под влиянием метанола по сравнению с другими ядами.

Известно, что Т-независимая антителопродукция осуществляется В-клетками без участия Т-хелперов (в данном случае Тh1-лимфоцитов) [Hausmann S., Wucherpfennig K.W., 1997;

Ройт А. и соавт., 2000]. Полученные данные подтверждают результаты наших экспериментов in vitro, в которых доказано поражение метанолом В-лимфоцитов в большей степени, чем Т-клеток, по видимому, вследствие нарушения обмена фолиевой кислоты метаболитом метанола формиатом [Ройт А. и соавт., 2000].

Таким образом, под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами происходит снижение Т-независимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА к Vi-Ag в крови через 5 и сут после иммунизации, преимущественно в продуктивную фазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом антителопродукции.

В порядке уменьшения редукции синтеза антител спирты и хлорированные углеводороды располагались в последовательности: метанол – тетрахлорметан - трихлорэтилен - дихлорэтан - этиленгликоль – этанол.

Существенные различия в действии токсикантов отсутствовали, за исключением эффекта этанола, который был ниже, чем иммунотоксичность других ядов.

5.2.2. Исследование действия острого отравления токсикантами на число антителообразующих клеток в селезенке к Т-независимому антигену При оценке содержания АОК к Vi-Ag в селезенке у мышей после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами через 5 суток после иммунизации в индуктивной и продуктивной фазах антителогенеза было установлено (рис. 5.5), что при введении токсикантов одновременно с Vi-Ag происходит существенное уменьшение числа АОК под влиянием метанола, дихлорэтана, тетрахлорметана, трихлорэтилена, этиленгликоля и этанола соответственно в 1,96;

1,59;

1,52;

1,46;

1,31 и 1,19 раза.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.