авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |

«П.Ф. Забродский, В. Г. Лим ИММУНОПАТОЛОГИЯ ПРИ ОТРАВЛЕНИЯХ ЯДОВИТЫМИ ТЕХНИЧЕСКИМИ ЖИДКОСТЯМИ. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ...»

-- [ Страница 4 ] --

При введении токсикантов через 3 сут после иммунизации (в продуктивной фазе антителогенеза) отмечалось более выраженное снижение иммунной реакции по сравнению с действием ядов в индуктивной фазе антителопродукции. Максимальная супрессия образования АОК к Vi-Ag наблюдалась при действии метанола (в 2,97 раза), а минимальная - при отравлении этанолом (в 1,19 раза). В порядке уменьшения редукции образования числа АОК, синтезирующих IgM к Vi-Ag в селезенке, спирты и ХУ располагались в последовательности: метанол – тетрахлорметан трихлорэтилен - дихлорэтан - этиленгликоль – этанол.

К * * * * 14 * * * 12 * * * * * 8 * 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 И П Рис. 5.5. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на число антителообразующих клеток к Vi-Ag, синтезирующих Ig M, в селезенке белых мышей через 5 сут в индуктивной и продуктивной фазах антителогенеза (M+m).

По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – метанол, этиленгликоль, этанол, дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен соответственно;

И, П – индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно;

по оси ординат: число АОК, 103;

К – контроль (n=28);

в каждой серии использовалось 7-9 животных;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Полученные результаты исследований позволяют полагать, что под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов в продуктивной фазе иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом происходит более выраженная редукция функции плазмоцитов селезенки, синтезирующих IgM [Хаитов Р.М. и соавт., 2000]. Максимальный поражающий эффект метанола в отношении В-клеток, как уже указывалось, вероятно, обусловлен общим снижением фолиевой кислоты (в том числе и в В-лимфоцитах) вследствие ее усиленного потребления при метаболизме метилового спирта.

Сравнительная оценка влияния спиртов и хлорированных углеводородов на Т-зависимое и Т-независимое антителообразование показывает, что под влиянием токсикантов наблюдается преимущественное нарушение Т зависимой антителопродукции. Так, в продуктивный период иммуногенеза дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен, метанол, этиленгликоль, этанол снижали число АОК к ЭБ в селезенке мышей соответственно в 1,87;

1,70;

1,55;

2,48;

2,20 и 1,90 раза (в среднем – в 1,95 раза), а число АОК к Vi-Ag в 1,59;

1,52;

1,46;

1,96;

1,31 и 1,19 раза соответственно (в среднем – в 1, раза). Это обусловлено, по нашему мнению, наряду с другими механизмами, действием токсикантов одновременно на макрофаги, В-лимфоциты и Т клетки (в использованной нами экспериментальной модели на субпопуляцию Th1), участвующие в реализации данной иммунной реакции, в то время как Т независимый гуморальный иммунный ответ обеспечивается в основном функцией В-клеток, активируемых антигеном в присутствии ИЛ-1, секретируемом макрофагами [Ройт А., 1991;

Ройт А. и соавт., 2000;

Gillbert R.V., Hoffmann M.K., 1985;

Sinha A.A. et al., 1987]. Вполне естественно, что иммунотоксическое действие на три элемента, взаимодействующих в процессе антителообразования, проявляется большим его угнетением, чем при поражении одного или двух элементов, если нет оснований предполагать реализации селективного иммунотропного эффекта. Следует отметить, что метанол не способен избирательно поражать только В-лимфоциты. Оказывая максимальный повреждающий эффект на эти клетки по сравнению с другими ядами, он, как показали наши эксперименты, действует и на Т-клетки. При этом суммарный редуцирующий эффект на Т- и В-клетки (Т-зависимый антителогенез) у метанола меньше, чем у дихлорэтана.

Исследование Т-независимого гуморального иммунного ответа после острого отравления наиболее иммунотоксичными из рассматриваемой группы токсикантов метанолом и дихлорэтаном в продуктивной фазе иммуногенеза показало прямо связанное с дозой его снижение (рис. 5.6).

Логично полагать, что такой же характер дозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированными углеводородами.

К К 16 * * * ** 8 * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 5.6. Изменение содержания числа антителообразующих клеток к Vi-Ag, синтезирующих IgM, в селезенке белых мышей через 5 сут после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы в продуктивной фазе иммуногенеза (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат: число АОК, 103;

К – контроль (n=30);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

*- различие с контролем достоверно - р0,05, ** различие с метанолом достоверно - р0,05;

(*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона-Манна-Уитни).

Таким образом, под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами происходит дозозависимое снижение Т независимого антителообразования (оцениваемого по числу АОК в селезенке, отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный период антителогенеза по сравнению с индуктивной фазой антителопродукции. По степени редукции синтеза IgМ В-клетками в Т-независимой гуморальной иммунной реакции токсиканты располагались в порядке снижения эффекта в последовательности: метанол, дихлорэтан, тетрахлорметан, трихлорэтилен, этиленгликоль и этанол.

Резюме Подводя итог результатам, изложенным в данной главе, можно заключить, что под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) происходит снижение Т зависимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА к ЭБ в крови через 5, 8 и 11 сут после иммунизации, в большей степени в продуктивную фазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом. По степени редукции синтеза антител токсиканты располагались в порядке снижения эффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол.

Спирты и хлорированные углеводороды дозозависимо снижают Т зависимое антителообразование (оцениваемое по числу АОК в селезенке, отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный период иммуногенеза по сравнению с индуктивной фазой антителогенеза. По степени редукции синтеза IgМ токсиканты располагались в порядке снижения эффекта в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол.

После острого действия спиртов и хлорированных углеводородов снижается число АОК в селезенке, характеризующих синтез IgG, что свидетельствует о редукции функции Th2-лимфоцитов. По степени уменьшения числа АОК, синтезирующих IgG, в селезенке токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан – метанол - дихлорэтан – трихлорэтилен - этиленгликоль - этанол.

Под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов (0,75 ЛД50) снижается число РОК в селезенке мышей. В порядке снижения данного показателя токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан – метанол - дихлорэтан – трихлорэтилен - этиленгликоль - этанол.

Наши исследования выявили различную степень иммунотоксичности спиртов и хлорированных углеводородов, что может быть объяснимо особенностями их токсикокинетики и токсикодинамики. Так, мы считаем, более выраженная иммунотоксичность метанола по сравнению с другими спиртами, а также дихлорэтана по сравнению с другими хлорированными углеводородами обусловлена относительно более высоким иммунотоксическим эффектом их метаболитов (муравьиная кислота, 2 хлорэтанол, хлоруксусный альдегид и хлоруксусная кислота). Как и при оценке синтеза IgG обращает на себя внимание наибольший иммунотоксический эффект тетрахлорметана. Это связано с отмеченными ранее особенностями токсикокинетики тетрахлорметана.

По степени снижения редукции кооперации Т- и В-клеток (при действии токсикантов in vitro как на Т-, так и В-клетки) токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол. Существенных различий между действием на кооперацию клеток различных спиртов (а также различных хлорированных углеводородов) не отмечено. Спирты и хлорированные углеводороды нарушают кооперацию Т- и В-лимфоцитов преимущественно вследствие иммунотоксического эффекта продуктов их биотрансформации.

Под влиянием токсикантов в большей степени поражались Т-клетки, за исключением действия метанола при переносе in vitro Т- или В-клеток от мышей после отравления. По степени снижения супрессии кооперации Т- и В-клеток при действии спиртов и ХУ на Т-лимфоциты при переносе in vitro клеток от мышей после отравления токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль - метанол - этанол, а по степени уменьшения редукции кооперации клеток при действии ядов на В-лимфоциты - в последовательности: метанол - дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. По степени снижения функции Т-клеток в эффекте кооперации клеток спирты и их метаболиты располагались в порядке уменьшения эффекта в последовательности: глиоксиловая кислота – гликолевый альдегид – гликолевая кислота – муравьиная кислота – ацетальдегид – метанол – этиленгликоль – этанол, а по степени супрессии активности В-клеток – в последовательности: муравьиная кислота – глиоксиловая кислота - гликолевый альдегид - гликолевая кислота ацетальдегид – метанол – этиленгликоль – этанол. Сравнительная оценка действия дихлорэтана и его продуктов биотрансформации на кооперацию Т и В-лимфоцитов in vitro в процессе антителогенеза позволяет заключить, что увеличение их иммунотоксичности происходит в последовательности:

дихлорэтан – 2-хлорэтанол – хлоруксусный альдегид – хлоруксусная кислота.

Действие ядов было прямо связано с их концентрацией или дозой (при переносе клеток in vitro от мышей после их отравления спиртами и хлорированными углеводородами).

Под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами происходит снижение Т-независимого антителообразования, оцениваемого по ОДЛТА к Vi-Ag в крови через 5 и 8 сут после иммунизации, преимущественно в продуктивную фазу антителогенеза по сравнению с индуктивным периодом антителопродукции. В порядке уменьшения редукции синтеза антител спирты и ХУ располагались в последовательности:

метанол – дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль этанол. Существенные различия в токсических эффектах ядов отсутствовали, за исключением эффекта этанола, который был ниже, чем токсоэффекты других ядов.

Острое отравление спиртами и хлорированными углеводородами вызывает дозозависимое снижение Т-независимого антителообразования (оцениваемого по числу АОК в селезенке, отражающему синтез IgМ) в большей степени в продуктивный период антителогенеза по сравнению с индуктивной фазой антителопродукции. По степени редукции синтеза IgМ В клетками в Т-независимой гуморальной иммунной реакции токсиканты располагались в порядке снижения эффекта в последовательности: метанол – дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол.

ГЛАВА 6.

ОЦЕНКА ВОЗДЕЙСТВИЯ СПИРТОВ И ХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ НА КЛЕТОЧНЫЕ ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ 6.1. Оценка функции Т-лимфоцитов Исследование функции Т-лимфоцитов проводили по реакции торморжения миграции лейкоцитов (РТМЛ) периферической крови белых крыс в присутствии конконавалина А (КонА). РТМЛ основана на способности сенсибилизированных Т-лимфоцитов в реакциях с антигеном или митогенами (ФГА, КонА) in vitro выделять биологически активные субстанции – лимфокины, в том числе фактор, ингибирующий миграцию лейкоцитов (один из лимфокинов воспаления) [Фримель Х., Брок Й., 1986;

Andrian U.H., Mackay C.R., 2000].

Установлено (табл. 6.1), что при оценке функции Т-лимфоцитов по РТМЛ (реакция обратно пропорциональна функции Т-клеток) у крыс после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0, ЛД50) происходит снижение функции Т-клеток до 6-9 сут. Так, через 1 сут параметр при действии метанола, этанола, этиленгликоля, дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена увеличился соответственно на 16,7;

13,8;

11,7;

28,7;

22,9 и 20,6% (p0,05). В последующее время через 3-6 сут супрессия функции Т-клеток уменьшалась, однако оставалась статистически значимо сниженной по сравнению с контролем (p0,05), за исключением действия этанола через 6 сут. Спустя 9 сут показатель РТМЛ восстанавливался практически до контрольного уровня.

По степени редукции функции Т-лимфоцитов, связанной с синтезом фактора ингибирования миграции лейкоцитов, спирты и хлорированные углеводороды в порядке уменьшения эффекта располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол. Существенных различий в супрессии токсикантами активности Т-клеток не выявлено, за исключением токсического эффекта дихлорэтана с эффектом этанола.

Таблица 6. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на функцию Т-лимфоцитов крыс, % (M+m) Время после интоксикации, сут Токсиканты 1 3 6 Контроль 55,3+ 1,8 (57) Метанол 72,0+ 4,9* 74,7+ 6,2* 65,2+ 5,6** 58,0+ 5, Этиленгликоль 69,1+ 5,1* 70,3+ 6,1* 63,0+ 5,4** 54,5+ 5, Этанол 67,0+ 5,0* 61,8+ 6,0* 59,5+ 5,2 53,1+ 5, Дихлорэтан 84,0+ 5,1* 68,7+ 6,1* 63,2+ 5,0** 59,5+ 5, Тетрахлорметан 78,2+ 6,3* 72,1+ 5,9* 65,0 +6,1** 57,0 + 6, Трихлорэтилен 75,9+ 5,9* 75,3+ 5,7* 61,4+6,0** 51,9+ 5, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 8 до крыс;

*;

**- различие с контролем достоверно - р0,05;

- различие эффекта дихлорэтана с этанолом достоверно - р0,05;

(*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона Манна- Уитни).

Снижение функции Т-лимфоцитов, по нашему мнению, обусловлено при отравлении спиртами и хлорированными углеводородами ингибирующим действием кортикостероидов [Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000;

Ficek W., 1997;

Tiefenbach B. et al., 1983, 1985], а также, возможно, иммунотоксическим эффектом хлорированных углеводородов и метаболитов спиртов, связанным с инактивацией многочисленных ферментов, в том числе эстераз Т-лимфоцитов [Хусинов А.А. и соавт., 1991;

Забродский П.Ф., 1993;

Fergula J. et al., 1972].

Как уже упоминалось, редукция активности Т-клеток может быть обусловлена снижением процессов тканевого дыхания и нарушением окислительного фосфорилирования спиртами, хлорированными углеводородами и их метаболитами [Ротенберг Ю.С., 1980]. Существенную роль в иммунотоксическом эффекте токсикантов играет также активация ими перекисного окисления липидов мембран иммуноцитов и их мембранотоксическое действие [Голиков С.Н. и соавт., 1986].

Таким образом, наши исследования выявили существенные нарушения функции Т-лимфоцитов при действии спиртов и хлорированных углеводородов. Под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) происходит снижение функции Т-клеток, оцениваемой по ингибированию миграции лейкоцитов, в течение 6-9 сут после отравления.

По степени выраженности редукции функции Т-лимфоцитов спирты и хлорированные углеводороды в порядке уменьшения токсического эффекта располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол - этиленгликоль - этанол.

6.2. Исследование реакции гиперчувствительности замедленного типа Изучение формирования ГЗТ под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов в модели, не связанной с переносом клеток, позволяет установить их действие на клеточный иммунитет, в частности, на функцию Th1 и продукцию ими ИЛ-1, ИЛ-3, -интерферона, -фактора некроза опухоли и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) лимфоцитов [Georgiev V.St., Albright J.E., 1993], а также на участвующие в реализации гиперчувствительности IV типа Т-клетки памяти и макрофаги [Ройт А., 1991]. В адоптивной реакции (связанной с переносом клеток, to adopt – принимать, присваивать) существует возможность оценить действие токсикантов на вторичный клеточный иммунный ответ, формирование Th1-лимфоцитов в селезенке.

Нами показано (табл. 6.2), что при острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) происходит снижение реакции ГЗТ (без переноса клеток) [p0,05], за исключением действия этанола.

Таблица 6. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на формирование гиперчувствительности замедленного типа у крыс по приросту массы задней стопы, % (М+m) Модели ГЗТ Токсиканты Реакция без переноса Реакция с переносом клеток спленоцитов после иммунизации ЭБ Контроль 26,5+1,0 (36) 78,4+2,7 (34) Метанол 18,1+2,1* 60,1+5,1* Этиленгликоль 20,2+1,9* 63,4+5,2* Этанол 23,5+2,3 66,5+5,0* Дихлорэтан 16,8+1,7* 50,2+5,4* Тетрахлорметан 19,5+2,0* 55,0+5,3* Трихлорэтилен 20,0+2,1* 61,2+5,5* Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до 9 крыс;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Максимальная редукция формирования ГЗТ отмечалась при действии дихлорэтана (снижение в 1,58 раза), а минимальная – при остром отравлении этиленгликолем (уменьшение в 1,31 раза). По степени снижения ГЗТ токсиканты в порядке уменьшения эффекта располагались в последовательности: дихлорэтан – метанол - тетрахлорметан – трихлорэтилен – этиленгликоль - этанол. Существенных различий между действием различных ядов не выявлено. В целом, иммунотоксичность хлорированных углеводородов была выше, чем иммунотоксичность спиртов. Так, в среднем показатель при действии хлорированных углеводородов снижался в 1,41 раза, а при действии спиртов – в 1,29 раза.

При переносе спленоцитов после иммунизации крыс-доноров Вистар реакция ГЗТ отражала формирование вторичного клеточного иммунного ответа, так как после введения этих клеток крысы-реципиенты за 4 сут до введения разрешающей дозы антигена (ЭБ), получали его путем внутрибрюшинной иммунизации. В этой реакции основную роль играли Th1 лимфоциты спленоцитов доноров после действия на них токсикантов.

Установлено, что в дозе 0,75 ЛД50 все токсиканты существенно снижали исследованную реакцию ГЗТ (p0,05). Максимальное уменьшение формирования ГЗТ отмечалась при действии дихлорэтана (снижение в 1, раза), а минимальное – при остром отравлении этанолом (редукция в 1, раза). По степени снижения ГЗТ яды располагались в последовательности:

дихлорэтан – метанол - тетрахлорметан - трихлорэтилен – этиленгликоль – этанол. Существенные различия между действием различных токсикантов не отмечались. В целом, действие хлорированных углеводородов на вторичный клеточный иммунный ответ в реакции ГЗТ было выше, чем эффект спиртов.

Так, в среднем параметр при действии хлорированных углеводородов снижался в 1,42 раза, а при действии спиртов – в 1,24 раза.

Выявленные изменения формирования ГЗТ в различных моделях позволяют заключить, что спирты и хлорированные углеводороды вызывает супрессию Th1-лимфоцитов как в первичном, так и вторичном клеточном иммунном ответе.

Известно, что Тh1-лимфоциты обеспечивают реализацию реакции ГЗТ путем активации макрофагов. В основном Тh1-лимфоциты регулируют физиологические механизмы, обеспечивающие функцию Т-звена иммунитета [Хаитов Р.М и соавт., 2000;

Georgiev V.St., Albright J.E., 1993;

Kimber I., 1996;

Ellmeier W. et al., 1999]. Полученные нами результаты косвенно свидетельствуют о том, что спирты и хлорированные углеводороды уменьшают способность Th1-лимфоцитов синтезировать ИЛ-1, ИЛ-3, интерферон и -фактор некроза опухоли (лимфотоксин), участвующие в формировании ГЗТ [Шуршалина А.В. и соавт., 2001;

Kimber I., 1996;

Antonopoulos C. et al., 2001;

Basketter D.A. et al., 2001]. Кроме того, испытуемые спирты и хлорированные углеводороды путем реализации различных иммунотропных механизмов, вероятно, снижают активность и других клеток, обеспечивающих формирование ГЗТ, в частности, Т-клеток памяти и макрофагов [Ройт А., 1991]. Исследование реакции ГЗТ после острого отравления наиболее иммунотоксичными из рассматриваемой группы токсикантов метанолом и дихлорэтаном показало прямо связанное с дозой ее снижение (рис. 6.1). Логично полагать, что такой же характер дозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированным углеводородам.

К К * * 20 * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ДХЭ Рис. 6.1. Изменение реакции гиперчувствительности замедленного типа (без переноса клеток) у крыс после острого отравления метанолом и дихлорэтаном в зависимости от дозы, % (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат, %;

К – контроль (n=36);

в каждой серии использовалось 6-9 животных;

*- различие с контролем достоверно - р0,05.

Таким образом, в результате наших исследований установлено, что острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородами дозозависимо снижает реакцию ГЗТ, характеризующую как первичный, так и вторичный клеточный иммунный ответ. Наименьшей активностью обладает этанол, токсическое действие остальных токсикантов существенно не отличается. В целом токсические эффекты хлорированных углеводородов превышают эффекты спиртов.

6.3. Изучение антителозависимой клеточной цитотоксичности Последние исследования в области иммунологии показали, что клетки киллеры - К-клетки (кроме миелоидных) - это ЕКК, использующие для усиления реакции антитела (IgG) [Ройт А. и соавт., 2000;

Хаитов Р. М. и соавт., 2000;

Delves P.J., Roitt I.M., 2000]. Естественные клетки-киллеры (ЕКК), активированные связанными с клеткой-мишенью (например, клеткой, пораженной вирусом) антителами, уничтожают ее. При этом антитела (IgG) привлекают своим Fc-хвостом ЕКК, имеющие для этого соответствующий FcRIII. Возникает комплекс клетка-мишень – антитело – ЕКК, в котором ЕКК реализует свою киллерную функцию в отношении клетки-мишени [Хаитов Р. М. и соавт., 2000]. Эта система получила название антителозависимая клеточная цитотоксичность (АЗКЦ). Помимо ЕКК в эту систему входят полиморфноядерные лейкоциты (ПЯЛ) – моноциты, базофилы, эозинофилы, сегментоядерные лейкоциты, а также другие фагоцитирующие и нефагоцитирующие миелоидные клетки [Ройт А., 1991].

В использованной нами модели эксперимента исследовалась через 5 сут после иммунизации ЭБ вся система АЗКЦ: ЕКК (большие зернистые лимфоциты) и ПЯЛ в индуктивной (введение спиртов и хлорированных углеводородов одновременно с иммунизацией) и продуктивной фазах иммуногенеза (введение токсикантов через 3 сут после иммунизации).

Проведенный анализ результатов исследований выявил, что при действии спиртов и хлорированных углеводородов в дозе 0,75 ЛД50 на АЗКЦ селезенки мышей в индуктивной фазе иммуногенеза происходит статистически значимое уменьшение активности К-клеток при остром отравлении всеми исследованными токсикантами (р0,05) кроме этанола (рис. 6.2).

Максимальная редукция АЗКЦ отмечалась при действии ТХМ (снижение в 1,80 раза), а минимальная – при остром отравлении метанолом (уменьшение АЗКЦ в 1,28 раза). Этанол не вызывал редукцию АЗКЦ. Существенные различия (p0,05) между эффектами супрессии АЗКЦ различными токсикантами не выявлены. В среднем хлорированные углеводороды вызывали редукцию показателя на 25,4% большую, чем спирты.

К * * ** * * 12 * * * * * * * 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 И П Рис. 6.2. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) в индуктивной и продуктивной фазах иммуногенеза на антителозависимую клеточную цитотоксичность спленоцитов мышей через 5 сут, % (M+m).

По оси абсцисс: 1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно;

И, П – индуктивная и продуктивная фазы антителогенеза соответственно;

по оси ординат: %;

К – контроль (n=30);

в каждой серии использовалось 7-9 животных;

*;

**- различие с контролем достоверно - р0,05 (*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона Манна- Уитни).

В продуктивный период иммуногенеза спирты и хлорированные углеводороды в дозе 0,75 ЛД50 статистически достоверно уменьшали активность К-клеток (р0,05). По степени снижения АЗКЦ токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан этиленгликоль - трихлорэтилен – метанол – этанол. Отмечались существенные различия (p0,05) между токсическими эффектами супрессии АЗКЦ при воздействии дихлорэтана и этанола, а также при действии тетрахлорметана и этанола.

Исследование АЗКЦ после острого отравления наиболее иммунотоксичными (по степени угнетения активности К-клеток) из рассматриваемой группы токсикантов этиленгликолем и дихлорэтаном в продуктивной фазе иммуногенеза показало прямо связанное с дозой его снижение (рис. 6.3). Можно полагать, что такой же характер дозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированным углеводородам.

К К * 12 * * 10 * 8 * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, ЭГ ДХЭ Рис. 6.3. Изменение антителозависимой клеточной цитотоксичности мышей через 5 сут после острого воздействия этиленгликоля и дихлорэтана в продуктивной фазе иммуногенеза в зависимости от дозы (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат, %;

К – контроль (n=30);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Помимо описанных в предыдущих разделах общих механизмов иммунотоксичности ТХВ, следует отметить, что спирты и ХУ, по-видимому, способны уменьшать АЗКЦ вследствие нарушения электролитного обмена клетки (перекисное окисление липидов мембран ИКК, нарушение их проницаемости), приводящего к изменению соотношения цАМФ/цГМФ [Trinchievi G., de Marchi M., 1976].

При анализе супрессии АЗКЦ в индуктивный и продуктивный периоды иммуногенеза обращает на себя внимание увеличение эффекта редукции параметра при введении спиртов и хлорированных углеводородов в продуктивный период формирования иммунного ответа. В наибольшей степени это характерно для дихлорэтана.

Таким образом, острое отравление спиртами и хлорированными углеводородами дозозависимо снижает АЗКЦ спленоцитов преимущественно в продуктивной фазе иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом.

Хлорированные углеводороды обладают более выраженными эффектами редукции АЗКЦ по сравнению со спиртами. Максимальная супрессия показателя характерна для дихлорэтана.

6.4. Влияние острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами на активность естественных клеток-киллеров 6.4.1. Действие токсикантов на активность ЕКК in vivo В связи с продолжающей интенсивно развиваться иммунологией меняются подходы к определению некоторых понятий и определений. В настоящее время иммунитетом называются только те защитные процессы, которые реализуются с участием лимфоцитов [Хаитов Р.М. и соавт., 2000].

Функцию ЕКК рассматривали как один из факторов неспецифической резистентности организма [Descotes J., 1986]. В настоящее время ЭКК в связи с их возможностью уничтожать как клетки опухоли, так и клетки, пораженные вирусами или паразитами, а также ксеногенные клетки без предварительного контакта с антигенами, находящимися на их поверхности, относят к клеточному иммунитету [Хаитов Р.М. и соавт., 2000].

К ЕКК, открытым в 1976 году, относятся клетки, не имеющие антигенных маркеров Т- и В-лимфоцитов (так называемые, О-клетки).

Предполагают, что ЕКК происходят из предшественников Т-лимфоцитов [Ройт А., 1991]. ЕКК и К-клетки - это одни и те же клетки, отличающиеся лишь механизмами реализации киллинга (убийства) клеток-мишеней. При контакте с клетками опухоли, клетками, пораженными вирусами или паразитами, ксеногенными клетками ЕКК способны уничтожать их без предварительного контакта с антигенами, находящимися на их поверхности.

Они узнают определенные структуры высокомолекулярных гликопротеидов, которые экспрессируются на мембране инфицированных вирусом клеток [Ройт А. и соавт., 2000].

Известно, что на поверхности естественных клеток-киллеров экспрессированы следующие СD-маркеры: СD2, СD11b, СD16, СD27, СD30, СD39, CD56, CD57, СD62L, СD87, CD94, СD119 и СD132. ЕКК представлены преимущественно клетками с маркерами СD16, CD56. Ингибируют цитотоксическую активность ЕКК субпопуляции нормальных (естественных) киллеров СD158а, СD158b [Хаитов Р.М. и соавт., 2000]. Цитолиз клетки мишени осуществляется проникновением ферментов из гранул ЕКК в цитоплазму клетки-мишени (порообразование перфорином) [Хаитов Р. М. и соавт., 2000;

Nogueira N., 1984]. Кроме того, ЕКК способны обеспечивать уничтожение чужеродной клетки путем реализации "дыхательного взрыва" (поражение активными радикалами кислорода, гидроксильного радикала и т.п.), а также индукцией апоптоза. Активность ЕКК повышается интерферонами, интерлейкинами (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-13) [Хаитов Р. М. и соавт., 2000;

Шуршалина А.В. и соавт., 2001;

Kimber I., More M., 1985]. ЕКК не обладают способностью к фагоцитозу [Петров Р.В., 1987;

Ройт А., 1991].

При изучении влияния на ЕКК (естественную цитотоксичность – ЕЦ) спиртов и хлорированных углеводородов нами установлено (табл. 6.3) статистически значимое уменьшение их активности после острого отравлении всеми использованными токсикантами (р0,05) в период интоксикации до 9 сут, за исключением метанола, эффект которого зарегистрирован только в течение 3-6 сут после отравления.

Таблица 6. Влияние отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0, ЛД50) на активность естественных клеток-киллеров мышей, % (M+m) Время после интоксикации, сут Токсиканты 1 3 6 Контроль 26,2+ 1,9 (31) Метанол 12,2+2,3* 14,2+2,7* 20,0+2,6** 25,2+ 2, Этиленгликоль 11,7+2,1* 16,4+2,5* 19,0+2,3** 23,9+ 2, Этанол 18,5+2,0* 20,1+2,1** 24,7+2,7 Дихлорэтан 8,5+1,7* 11,9+2,2* 15,9+2,4* 22,5+ 2, Тетрахлорметан 7,1+1,8* 10,1+2,3* 11,7+2,5* 20,2+ 2, Трихлорэтилен 10,0+1,9* 12,9+2,6* 19,9+2,4** 25,1+ 2, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 8 до мышей;

*;

**- различие с контролем достоверно - р0,05 (*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона-Манна- Уитни).

Максимальное снижение активности ЕКК отмечалась при действии ТХМ (супрессия через 1 сут - в 3,69 раза), а минимальная – при остром отравлении этанолом (уменьшение через 1 сут - в 1,42 раза). По степени снижения ЕЦ токсиканты располагались в последовательности: тетрахлорметан дихлорэтан - трихлорэтилен – этиленгликоль - метанол – этанол.

Существенных различий (p0,05) между эффектами супрессии активности ЕКК использованными ядами не отмечалось. В среднем хлорированные углеводороды вызывали редукцию показателя в 1,6 раз большую, чем спирты (p0,05).

Через 3 сут после интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами также зарегистрировано наибольшее уменьшение активности ЕКК при действии тетрахлорметана (снижение в 2,59 раз), наименьшее – при остром отравлении этанолом (уменьшение в 1,30 раза). Существенных различий между эффектами редукции ЕЦ различными ядами не выявлено.

Следует отметить, что через 6 сут максимальное снижение ЕЦ характерно для тетрахлорметана, при этом и через 9 сут отмечается тенденция к снижению параметра. Это обусловлено особенностями токсикокинетики тетрахлорметана, связанными со способностью данного хлорированного углеводорода к более длительному депонированию в органах богатых липидами по сравнению с дихлорэтаном, трихлорэтиленом и спиртами [Тиунов Л.А., 1990а, 1990б;

Маркизова Н.Ф. и соавт., 2001, 2004].

Кроме того, учитывая то, что печень является органом, в котором образуется большая часть ЕКК [Хаитов Р.М. и соавт., 2000], а тетрахлорметан обладает максимальным гепатотропным эффектом из использованных нами ядов [Тиунов Л.А., 1990а;

Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000;

Куценко С.А., 2004], наиболее выраженная редукция активности ЕКК именно данным токсикантом вполне объяснима. Именно поэтому все хлорированные углеводороды, являясь гепатотропными ядами, поражают ЕКК в большей степени, чем спирты.

Исследование активности ЕКК через 3 сут после острого отравления метанолом и тетрахлорметаном выявило прямо связанное с дозой ее снижение (рис. 6.4). Вполне логично допустить, что такой же характер дозозависимого эффекта присущ и другим спиртам и хлорированными углеводородами.

Снижение активности ЕКК под влиянием хлорированных углеводородов (и возможно спиртов), вероятно, связано с ингибированием их эстераз, которые, по-видимому, содержатся в ЕКК, как предполагаемых потомках предшественников Т-клеток [Ройт А., 1991]. Эффекты кортикостероидов и катехоламинов вследствие активации спиртами и хлорированными углеводородами гипоталамо-гипофозарно-адреналовой системы и увеличения концентрации в крови кортикостероидов и катехоламинов [Тиунов Л.А., 1990а, 1990б] также обусловливают редукцию активности ЕКК [Rey A. et al., 1984;

Маdden K. S., Livnat S., 1991;

Claman H.N., 1983;

Mc Even Bruce S. et al., 1997].

К К * 20 * * * * 0,25 0,5 0,75 0,25 0,5 0, М ТХМ Рис. 6.4. Изменение активности ЕКК мышей через 3 сут после острого воздействия метанола и тетрахлорметана в зависимости от дозы (M+m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат, %;

К – контроль (n=31);

в каждой серии использовалось 7-10 животных;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Вероятно, спирты, хлорированные углеводороды и их метаболиты способны снижать активность ЕКК вследствие поражения механизмов порообразования перфорином и выделения в клетки мишени гранзимов (или снижением их синтеза) [Ройт А. и соавт., 2000;

Хаитов Р. М. и соавт., 2000;

Nogueira N., 1984], а также индукцией апоптоза ЕКК [Хаитов Р. М. и соавт., 2000;

Kimber I., More M., 1985;

Durant S., 1986].

Таким образом, острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородами дозозависимо снижает активность ЕКК в течение 1-9 сут.

Этанол уменьшает параметр в течение 3-6 сут. Существенных различий между эффектами редукции ЕЦ различными токсикантами, кроме этанола, не отмечается. В целом хлорированные углеводороды вызывают большую редукцию ЕЦ по сравнению со спиртами.

6.4.2. Влияние спиртов и хлорированых углеводородов на активность ЕКК селезенки in vitro Результаты исследования по оценке влияния спиртов и хлорированых углеводородов в концентрациях, составляющих 1;

10;

50 и 100 мМ, на активность ЕКК белых мышей in vitro показывают (табл. 6.4), что при воздействии хлорированных углеводородов в концентрации 1,0 мМ происходит снижение ЕЦ (p0,05). Спирты уменьшают показатель несущественно. При концентрации ядов 10 мМ все испытуемые токсиканты снижали активность ЕКК. Наибольшее уменьшение ЕЦ выявлено при действии дихлорэтана (снижение в 2,62 раза), наименьшее – при действии этанола (редукция в 1,47 раза).

Таблица 6. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на активность ЕКК у мышей in vitro, % (М+m) Токсиканты Концентрация, мМ 1 10 50 Контроль 31,5 + 1,0 (32) Метанол 27,0+2,5 18,7 +1,7* _ 11,9+ 1,5* Этиленгликоль _ 28,4+2,8 19,3+ 2,3* 13,5+1,3* Этанол 29,6+3,0 _ 21,9+ 2,4* 15,8+1,7* Дихлорэтан 20,2+2,0* 12,0 +1,5* 7,1+1,4* _ Тетрахлорметан 21,5 + 2,2* 14,3+1,7* 8,5+1,6* _ Трихлорэтилен 23,4 + 2,1* 13,7+1,9* 9,3+1,3* _ Примечание: спленоциты в течение 4 ч инкубировали с ядами;

в скобках – число наблюдений;

в каждой серии использовали от 8 до 11 мышей;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

По степени снижения ЕЦ спирты и хлорированные углеводороды располагались в последовательности: дихлорэтан – трихлорэтилен – тетрахлорметан – метанол – этиленгликоль – этанол. При дальнейшем увеличении концентрации ядов их эффект увеличивался. Существенных различий между эффектами различных хлорированных углеводородов (и между эффектами различных спиртов) при эквимолярных концентрациях не выявлено. В среднем хлорированные углеводороды вызывали редукцию показателя в 1,31 и 1,50 раз большую, чем спирты (p0,05) при концентрациях соответственно 1,0 и 10 мМ.

Необходимо заметить, что в отличие от острого токсического действия токсикантов in vivo их токсический эффект in vitro обусловлен эффектом преимущественно неметаболизированной молекулы яда.

При исследовании функции ЕКК у мышей in vitro под влиянием дихлорэтана, 2-хлорэтанола, хлоруксусного альдегида и хлоруксусной кислоты установлено (табл. 6.5), что редукция их активности была прямо связана с концентрацией, и в целом в порядке увеличения иммунотоксичности данные соединения располагались в последовательности:

дихлорэтан, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид и хлоруксусная кислота.

Таблица 6. Влияние дихлорэтана и его метаболитов на активность ЕКК у мышей in vitro, % (М+m) ДХЭ Концентрация, мМ и его метаболиты 1 10 Контроль 31,5 + 1,0 (32) ДХЭ 24,2+2,0* 14,0+1,5* 9,1+1,4* ХЭ 18,4+2,5* 9,8+1,3* 7,2+1,2* ХУА 15,5+2,0* 10,1+1,4* 5,3+1,0* ХУК 10,2+1,7* 6,4+1,1* 4,0+0,8* Примечание: спленоциты в течение 4 ч инкубировали с ядами;

в скобках – число наблюдений;

в каждой серии использовали спленоциты от 8 до 11 мышей;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Так, при концентрации 1 мМ дихлорэтана, 2-хлорэтанола, хлоруксусного альдегида и хлоруксусной кислоты активность ЕКК статистически достоверно снижалась соответственно в 1,30;

1,71;

2,03 и 3,09 раза (р0,05), при концентрации 10 мМ - в 2,25;

3,12;

3,21 и 4,92 раза, а при концентрации 50 мМ - в 3,09;

4,37;

5,94 и 7,87 раза (р0,05) соответственно.

При исследовании влияния спиртов и их метаболитов в эквимолярных концентрациях на активность ЕКК in vitro установлено (табл. 6.6) прямо связанное с концентрацией исследованных соединений снижение функции ЕКК. Статистически значимая редукция активности ЕКК зарегистрирована при действии этиленгликоля, метанола и этанола при концентрациях 10 и мМ, а их метаболитов - во всем диапазоне исследованных концентраций.

Таблица 6. Влияние спиртов и их метаболитов на активность ЕКК мышей in vitro, % (М+m) Спирты и их метаболиты Концентрация, мМ 1 10 Контроль 31,5+1,0 (32) Этиленгликоль 28,4+2,8 19,3+ 2,3* 13,5+1,3* Гликолевый альдегид 19,3+2,4* 14,3+1,4* 7,3+1,4* Гликолевая кислота 22,2+2,0* 17,5+1,8* 8,5+1,1* Глиоксиловая кислота 15,1+1,9* 9,4+2,0* 5,2+0,8* Метанол 26,0+2,5 18,4+1,8* 11,9+1,3* Муравьиная кислота 17,9+2,0* 12,5+1,2* 6,6+0,9* Этанол 29,6+3,0 21,9+2,4* 15,8+1,5* Ацетальдегид 23,1+ 2,3* 17,2+ 1,5* 10,0+ 1,0* Примечание: спленоциты в течение 4 ч инкубировали с ядами;

в скобках – число наблюдений;

в каждой серии использовали от 8 до 11 мышей;

* - различие с контролем достоверно р0,05.

Действие этиленгликоля, метанола и этанола in vitro на функцию ЕКК практически не отличалось. Метаболиты спиртов снижали активность ЕКК в большей степени, чем сами спирты, причем более выраженный повреждающий эффект в отношении ЕКК отмечался при их высоких концентрациях. Продукты биотрансформации этиленгликоля по своему супрессирующему эффекту на ЕКК располагались в следующей последовательности: глиоксиловая кислота, гликолевая кислота и гликолевый альдегид. Причем при всех использованных концентрациях иммунотоксический эффект глиоксиловой кислоты был достоверно выше гликолевой кислоты (p0,05). Повреждающее действие муравьиной кислоты на ЕКК по сравнению с метанолом статистически значимо при всех использованных концентрациях (p0,05), а ацетальдегида по сравнению с этанолом – только при максимальной концентрации токсикантов.

Сравнительная оценка влияния на активность ЕКК продуктов биотрансформации этиленгликоля, метанола и этанола в эквимолярных концентрациях, составляющих 1, 10 и 100 мМ, свидетельствует об увеличении их иммунотоксичности в следующей последовательности:

ацетальдегид - гликолевая кислота - гликолевый альдегид - муравьиная кислота - глиоксиловая кислота. Вместе с тем статистически значимы различия супрессирующих эффектов только глиоксиловой кислоты и муравьиной кислоты по сравнению с действием гликолевой кислоты при концентрациях 10 и 100 мМ (р0,05). Снижение функции ЕКК под влиянием гликолевой кислоты, гликолевого альдегида и ацетальдегида (а также при действии муравьиной и глиоксиловой кислот) статистически значимо не отличалось.

Данные литературы свидетельствуют, что in vivo решающую роль в повреждении ЕКК играют, вероятно, не глиоксиловая кислота, а гликолевый альдегид и гликолевая кислота. Так как, несмотря на меньшую по сравнению с глиоксиловой кислотой токсичность гликолевой кислоты, ее концентрация в биосредах приблизительно в 1300 раз выше, чем глиоксиловой кислоты [Chou S.Y., Richardson K.E., 1978 ].

Полученные результаты свидетельствуют, что механизм супрессии активности ЕКК in vivo под влиянием этиленгликоля, метанола и этанола обусловлен преимущественно взаимодействием с ферментными системами ЕКК высокотоксичных продуктов биотрансформации этиленгликоля гликолевого альдегида, гликолевой и глиоксиловой кислот, метанола муравьиной кислоты, этанола – ацетальдегида, так как in vitro эффекты этиленгликоля, метанола и этанола на ЕКК в эквимолярных концентрациях существенно не отличались. Метаболиты этиленгликоля и метанола могут действовать на сульфгидрильные и аминогруппы энзимов ЕКК, а также ингибировать тканевое дыхание и окислительное фосфорилирование этих клеток [Parry M. F., Wallach M. D., 1974;

Iokobsen D., 1984;

Gabon P.A., 1986]. In vivo это может снижать активацию ЕКК также, вызывая недостаток продукции ИЛ-2 и -интерферона Тh1-лимфоцитами [Сухих Г.Т. и соавт.

1984;

Ройт А. и соавт., 2000;

Хаитов Р.М. и соавт., 2000].

Таким образом, in vitro редуцирующее действие спиртов и хлорированных углеводородов на активность ЕКК прямо зависит от концентрации, а иммунотоксичность ядов обусловлена преимущественно эффектами их метаболитов. По степени снижения ЕЦ токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан – тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол. В порядке увеличения супрессии ЕКК дихлорэтан и его метаболиты располагались в последовательности: дихлорэтан, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид, хлоруксусная кислота, а спирты и их метаболиты – в последовательности:

глиоксиловая, муравьиная кислота, гликолевый альдегид, гликолевая кислота и ацетальдегид.

6.5. Определение взаимосвязи концентрации продуктов биотрансформации дихлорэтана с показателями клеточного звена иммунитета in vivo После острого отравления собак дихлорэтаном в дозе 3 г/кг через 3 сут в селезенке животных определяли содержание 2-хлорэтанола, хлоруксусной кислоты и активность ЕКК и АЗКЦ. Установлено (рис. 6.5), что острое отравление дихлорэтаном через 3 сут приводило к редукции ЕЦ и АЗКЦ по сравнению с контролем соответственно в 1,99 и 2,40 раза (p0,05). При этом в селезенке зарегистрировано содержание основных метаболитов дихлорэтана 2-хлорэтанола и хлоруксусной кислоты, которое составляло соответственно 0,23+0,05 и 1,75+0,24 мг/кг.

* * К ДХЭ К ДХЭ ЕЦ АЗКЦ Рис. 6.5. Влияние острого отравления дихлорэтаном (3 г/кг) на ЕЦ и АЗКЦ спленоцитов собак через 3 сут, (М+ m).

По оси абсцисс: ЛД50;

по оси ординат, %;

К – контроль - интактные собаки (n=5);

отравление дихлорэтаном (ЕЦ и АЗКЦ, n=5);

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Установлена обратная корреляция между содержанием метаболитов дихлорэтана (2-хлорэтанола и хлоруксусной кислоты) в селезенке и ЕЦ и АЗКЦ спленоцитов собак (r составляли от - 0,767 до - 0,831 (p0,05).

Таким образом, острое отравление собак дихлорэтаном приводило к образованию его метаболитов - 2-хлорэтанола и хлоруксусной кислоты - в селезенке, которые находились в обратной зависимости с активностью ЕКК и АЗКЦ спленоцитов.

Резюме Материалы, приведенные в данной главе, позволяют заключить, что под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) происходит снижение функции Т-клеток, оцениваемой по ингибированию миграции лейкоцитов до 6-9 сут. По степени редукции функции Т-лимфоцитов, связанной с синтезом фактора ингибирования миграции лейкоцитов, спирты и хлорированные углеводороды в порядке уменьшения эффекта располагались в последовательности: дихлорэтан тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол.

Существенных различий в супрессии токсикантами активности Т-клеток не выявлено, за исключением действия дихлорэтана с эффектом этанола. Острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородами дозозависимо снижает реакцию ГЗТ, характеризующую как первичный, так и вторичный клеточный иммунный ответ. Наименьшей активностью обладает этанол.

Действие остальных токсикантов существенно не отличается. В целом токсический эффект хлорированных углеводородов превышает токсическое действие спиртов. Выявленные изменения формирования ГЗТ в различных моделях позволяют полагать, что спирты и хлорированные углеводороды вызывает супрессию Th1-лимфоцитов как в первичном, так и вторичном клеточном иммунном ответе.

Острое отравление спиртами и хлорированными углеводородами дозозависимо снижает АЗКЦ спленоцитов преимущественно в продуктивной фазе иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом. Хлорированные углеводороды обладают более выраженными эффектами редукции АЗКЦ по сравнению со спиртами. Максимальная супрессия показателя характерна для ДХЭ.

Спирты и хлорированные углеводороды дозозависимо снижают активность ЕКК в течение 1-9 сут. Этанол уменьшает параметр в течение 3- сут. Существенных различий между эффектами редукции ЕЦ различными токсикантами, кроме этанола, не отмечается. В целом хлорированные углеводороды вызывают большую редукцию ЕЦ по сравнению со спиртами.

In vitro редуцирующие эффекты спиртов и хлорированных углеводородов на активность ЕКК прямо зависят от концентрации.

Иммунотоксичность ядов обусловлена преимущественно действием их метаболитов. По степени снижения ЕЦ токсиканты располагались в последовательности: дихлорэтан - тетрахлорметан – трихлорэтилен – метанол – этиленгликоль – этанол. В порядке увеличения супрессии ЕКК дихлорэтан и его метаболиты располагались в последовательности:

дихлорэтан, 2-хлорэтанол, хлоруксусный альдегид, хлоруксусная кислота, а спирты и их метаболиты – в последовательности: глиоксиловая, муравьиная кислота, гликолевый альдегид, гликолевая кислота и ацетальдегид.

Роль метаболитов хлорированных углеводородов в реализации их иммунотоксичности подтверждена опытами на собаках, в которых установлена обратная корреляция между содержанием метаболитов дихлорэтана (2-хлорэтанола и хлоруксусной кислоты) в селезенке и ЕЦ и АЗКЦ спленоцитов собак (r составляли от – 0,767 до - 0,831 (p0,05).

ГЛАВА 7.

РОЛЬ ФУНКЦИИ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ, СИМПАТИКО-АДРЕНАЛОВОЙ СИСТЕМЫ, ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ И АКТИВНОСТИ ЭСТЕРАЗ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ФОРМИРОВАНИИ ИММУНОДЕФИЦИТА ПРИ ОСТРОМ ОТРАВЛЕНИИ СПИРТАМИ И ХЛОРИРОВАННЫМИ УГЛЕВОДОРОДАМИ 7.1. Влияние токсикантов на функциональное состояние коры надпочечников и симпатико-адреналовой системы 7.1.1. Изменение массового индекса надпочечников после острого воздействия токсикантов Известно, что среди факторов, определяющих патогенез химической патологии, относительная масса (массовый индекс) надпочечников после острого воздействия токсикантов (отношение массы надпочечника в мг к массе тела животного в г) в определенной степени отражает реакцию ГГАС (стресс-реакцию) на химический раздражитель. Поэтому существуют основания считать (согласно теории Г. Селье [1972]), что под влиянием химических факторов из гипофиза секретируется АКТГ, который стимулирует синтез и инкрецию главным образом глюкокортикоидов, чему соответствует гипертрофия пучковой зоны надпочечников. В меньшей степени гипертрофируются зоны, секретирующие половые гормоны и минералокортикоиды [Лемус В. Б., Давыдов В. В., 1974;

Горизонтов П.Д., 1981а]. Ряд токсикантов, к которым относятся, в частности, нитрилы [Забродский П.Ф., 1998;

Szabo S., Selye H., 1971, 1972;

Szabo S. et al., 1980], и фармакологических препаратов (дихлордифенилхлорэтан, ингибиторы синтеза белка, амфенон и др.) [Комиссаренко В.П., Резников А.Г., 1972], цианокетон (2--циано-4,4,17--триметил-17--гидрокси-5- андростен-3-он) [Dhabhar F.S. et al., 1996] способны ингибировать функцию коры надпочечников.

Таким образом, изменение массы надпочечников в определенной степени свидетельствует о реализации неспецифических механизмов (стресс-реакции) под влиянием токсикантов, в частности, спиртов и ХУ.

Нашими исследованиями показано (табл. 7.1), что после отравления спиртами и ХУ массовый индекс надпочечников через 1 сут статистически значимо увеличивался (р0,05). При этом статистически значимо редукция параметра под влиянием различных ядов не отличалась. В последующее время через 3 сут отмечалась тенденция к снижению относительной массы надпочечников под влиянием токсикантов с восстановлением показателя до контрольного уровня в течение 6 сут.

Таблица 7. Действие острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на относительную массу надпочечников мышей, усл. ед (M+m) Время после интоксикации, сут Токсиканты 1 3 Контроль 0,26+ 0,01 (27) Метанол 0,37+ 0,02* 0,21+ 0,02 0,29+ 0, Этиленгликоль 0,36+ 0,02* 0,20+ 0,03 0,28+ 0, Этанол 0,31+ 0,02* 0,25+ 0,03 0,27+ 0, Дихлорэтан 0,38+ 0,03 * 0,19+ 0,03 0,25+ 0, Тетрахлорметан 0,34+ 0,03 * 0,20+ 0,03 0,24+ 0, Трихлорэтилен 0,39+ 0,03 * 0,22+ 0,03 0,23+ 0, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до мышей;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

На основании полученных результатов мы считаем, что увеличение относительной массы надпочечников при действии спиртов и хлорированных углеводородов обусловлено активацией ГГАС и более высоким уровнем синтеза и выделения гипофизом АКТГ, который стимулирует пролиферацию клеток надпочечников (повышение их массы) и продукцию ими кортикостероидов [Селье Г., 1972;


Лемус В. Б., Давыдов В. В., 1974;

Мутускина Е.А. и соавт., 2001]. Увеличение массы надпочечников может быть обусловлено также под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов активацией симпатико-адреналовой системы [Сидорин Г.И. и соавт., 2004].

Тенденция к снижению токсикантами массового индекса надпочечников через 3 сут после воздействия (при объединении всех показателей в одну группу эта редукция достоверна (р0,05), показатель по сравнению с контролем уменьшался в 1,23 раза), вероятно, обусловлена поражением (ингибированием) многочисленных ферментных систем этого органа ядами и их метаболитами [Комиссаренко В.П., Резников А.Г., 1972;

Ленинджер А., 1974;

Szabo S., Selye H., 1971, 1972;

Szabo S. et al., 1980], в частности, 2 хлорэтанолом, хлоруксусным, гликолевым, уксусным альдегидами, хлоруксусной, глиоксиловой, гликолевой, муравьиной кислотами [Румянцев А.П. и соавт., 1981;

Тиунов Л.А., 1990а].

Следует отметить, что такой важный показатель, как массовый индекс надпочечников, естественно, не может в полной мере отражать функцию коры надпочечников, а также ее мозгового вещества. Поэтому анализировать влияние на ГГАС спиртов и хлорированных углеводородов следует, исследуя содержание в крови кортикостероидов и адреналина. Ранее было показано, что увеличение массы надпочечников не всегда является свидетельством повышения ими продукции гормонов [Лемус В.Б., Давыдов В.В., 1974].

Таким образом, анализируя результаты наших исследований можно отметить, что под влиянием острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами через 1 сут относительная масса надпочечников увеличивается, затем в течение 3 сут незначительно уменьшается, восстанавливаясь до контрольного значения в период времени до 6 сут после отравления.

7.1.2. Оценка содержания кортикостерона в плазме крови В литературе имеются сведения о том, что в формировании иммунного ответа роль кортикостероидов неоднозначна, а физиологические концентрации этих гормонов необходимы для реализации полноценного гуморального иммунного ответа [Корнева Е.А., 1990]. В то же время доказано, что высокие концентрации кортикостероидов, в частности, при интоксикации ФОС [Иванова А.С., 1998;

Szot R.J., Murphy S.D., 1970], вызывают супрессию ряда показателей системы иммунитета [Хусинов А.А. и соавт., 1991;

Забродский П.Ф., 1993;

Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2000;

Claman H.N., 1983;

Tiefenbach B. et al., 1980, 1983, 1985]. Все вышеизложенное послужило основанием для выявления значения кортикостероидов в патогенезе отравления спиртами и хлорированными углеводородами.

Нами установлено (табл. 7.2), что под влияние спиртов и хлорированных углеводородов содержание кортикостерона (КС) в плазме крови через 1-3 ч после интоксикации увеличивается.

Таблица 7. Влияние острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на содержание кортикостерона в плазме крови крыс, нг/мл (М + m) Токсиканты Контроль Время после воздействия, ч 1 3 Метанол 40,3+3,3* 28,9+3,1* 14,9+2, ЭГ 44,2+4,0* 31,1+2,4* 17,0+1, 19,7+1, Э 38,3+3,1* 30,7+3,3* 20,5+1, (23) ДХЭ 37,3+4,2* 35,5+3,2* 14,5+2, ТХМ 40,3+3,3* 27,5+3,0* 15,5+2, ТХЭ 42,1+4,7* 33,2+2,8* 16,2+2, Примечание: в скобках – число животных;

в каждой серии использовалось от 7 до 10 крыс;

* - различие с контролем достоверно - р0,05.

Так, под влиянием острой интоксикации токсикантами через 1 и 3 ч концентрация КС увеличивалась соответственно от 1,89 до 2,14 раза и от 1,40 до 1,68 раза, снижаясь до контрольного уровня через 24 ч.

Существенных различий между действием метанола, этанола, этиленгликоля, дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена не выявлено.

Анализируя экспериментальные данные, следует отметить, что увеличение КС в крови под влиянием ДХЭ и ТХМ, помимо общей для всех токсикантов активации ГГАС, может быть обусловлено стимуляцией ацетилхолином центральных м-холинореактивных структур, приводящей к увеличению продукции АКТГ [Гурин В.Н., 1970;

Денисенко П.П., Чередниченко Р.П., 1970;

Денисенко П.П., 1980], вероятно, вследствие их антихолинэстеразного эффекта.

При вычислении коэффициентов корреляции между концентрацией кортикостерона в крови и АОК к ЭБ (см. главу 8) при остром отравлении крыс метанолом и дихлорэтаном установлено, что они составляли соответственно –0,715 (p0,05) [n=8] и -0,727 (p0,05) [n=9]. Коэффициенты корреляции при острых отравлениях метанолом, дихлорэтаном между концентрацией кортикостерона в крови и реакцией ГЗТ составляли соответственно -0,708 (p0,05) [n=8] и –0,794 (p0,05) [n=9]. Значения r между АОК к ЭБ, реакцией ГЗТ крыс и концентрацией кортикостерона в крови при острых интоксикациях этиленгликолем, этанолом, тетрахлорметаном и трихлорэтиленом находились в пределах от –0,642 до – 0,785. При этом r для всех сравниваемых пар показателей после действия токсикантов были достоверны (p0,05), за исключением действия этанола (АОК к ЭБ и концентрация КС).

Таким образом, острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородами повышает концентрацию КС в плазме крови через 1 и 3 ч. В последующее время в течение 24 ч содержание КС в плазме крови после действия токсикантов восстанавливается до контрольного значения.

Установлена обратная корреляция между гуморальной иммунной реакцией, формированием ГЗТ и концентрацией кортикостерона в крови после острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами.

7.1.3. Исследование влияния кортикостерона на основные показатели системы иммунитета Данные литературы свидетельствуют, что высокие концентрации КС, в частности, при интоксикациях различными токсикантами, вызывают супрессию ряда показателей системы иммунитета [Лазарева Д.Н., Алехин Е.Н., 1985;

Корнева Е.А., 1985, 1990;

Claman H.N., 1983;

Tiefenbach B. et al., 1980, 1983, 1985]. Вполне закономерно, что перед нами появилась задача выяснить влияние КС в концентрациях, которые появляются в плазме крови при интоксикациях спиртами и хлорированными углеводородами, на основные показатели системы иммунитета. Это позволит определить удельный вес кортикостероидов в формировании иммунодефицитного состояния при отравлениях данными ТХВ.

Наши эксперименты позволили установить (рис. 7.1), что под влиянием двухкратного введения кортикостерона в дозах 1,0 и 0,5 мг/кг соответственно с интервалом 2 ч основные показатели системы иммунитета существенно снижаются. Следует отметить, что введение КС в указанных дозах вызывало увеличение данного гормона в крови через 1 ч до 45,2+4,5 нг/мл (n=7), а через 3 ч – до 26,9+3,7 нг/мл (контроль составлял – 19,7+1,4 нг/мл). Данные концентрации приблизительно соответствовали содержанию КС в плазме крови после интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами в дозе 0,75 ЛД50.

Супрессия Т-зависимого, Т-независимого антителообразования (число АОК к ЭБ и Vi-Ag cоответственно), Т-звена иммунитета (реакция ГЗТ), активности ЕКК (ЕЦ) и АЗКЦ под влиянием экзогенного КС в дозах 1,0 и 0, мг/кг соответственно с интервалом 2 ч составила соответственно 19,7;

21,7;

18,3;

25,1 и 25,4%. При этом достоверны только сдвиги числа АОК к ЭБ и ЕЦ (p0,05). Проведенные опыты доказывают определенную, причем крайне незначительную, роль КС в супрессии основных иммунных реакций при остром отравлении спиртами и хлорированными углеводородами.

* 25 * К КС К КС К КС К КС К КС АОК к ЭБ АОК к Vi-Ag ГЗТ ЕЦ АЗКЦ Рис. 7.1. Влияние кортикостерона (в дозах 1,0 и 0,5 мг/кг с интервалом 2 ч соответственно) на показатели системы иммунитета у крыс.

По оси абсцисс: К – контроль (n=5-7), действие КС (n=5-7);

по оси ординат: АОК к ЭБ, 103;

АОК к Vi-Ag, 103;

реакция ГЗТ, ЕЦ, АЗКЦ, %;

* - различия достоверны по сравнению с контролем –р0,05.

Данные, приведенные в предыдущих главах, показали, что иммунные реакции под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов снижаются в большей степени, чем в опытах под влиянием адекватных действию токсикантов КС. Так, максимальное снижение АОК к ЭБ составило 46,1%, а уменьшение - ЕЦ - 69,8% (под влиянием дихлорэтана). Следовательно, редукция гуморальных и клеточных показателей системы иммунитета обусловлена в основном действием спиртов, хлорированных углеводородов и их метаболитов на ИКК.

Существуют основания считать, что десинхронизация суточных колебаний концентрации КС под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов также способна изменять физиологическую регуляцию иммунного гомеостаза [Dhabhar F.S. et al., 1996].

Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют о том, что концентрация кортикостерона, соизмеримая с содержанием этого гормона в крови при острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами, играет весьма незначительную роль в супрессии гуморальной иммунной реакции и клеточного звена иммунитета (ЕЦ, АЗКЦ и реакции ГЗТ, характеризующей функцию Th1-лимфоцитов и макрофагов).

7.1.4. Влияние спиртов и хлорированных углеводородов на функциональное состояние симпатико-адреналовой системы В литературе имеются лишь отдельные сообщения, что активация ГГАС (стресс-реакция) при острой интоксикации ксенобиотиками (в частности, ФОС) вызывает увеличение в крови кортикостероидов, а также приводит к увеличению функциональной активности САС. Это сопровождается повышением содержания в крови катехоламинов (КА): адреналина (А), норадреналина (НА) [Brzezinski J., 1972]. В настоящее время роль САС, в частности, А и НА при остром отравлении различными токсикантами в реализации основных иммунных реакций исследовано не достаточно [Забродский П.Ф.,1998, 2002]. В целом, изучение реакции организма на острое отравление ТХВ является лишь частным исследованием постстрессорных изменений в организме и вопросов профилактики их последствий [Сухих Г.Т. и соавт., 1984].


Кроме того, существуют основания предполагать, что глюкокортикоиды способны модулировать иммунотропные эффекты ксенобиотиков и физических факторов. Так, при постинтоксикационной стресс-реакции КА, возможно, способны усиливать иммунодепрессивный эффект кортикостероидов [Rey A. et al., 1984]. Известно, что супрессирующее действие кортикостероидов на суммарную фагоцитарную активность фагоцитов частично отменяется блокадой -адренорецепторов [Шилов Ю.И., Ланин Д.В., 2001].

В наших исследованиях установлено (рис. 7.2), что спирты и хлорированные углеводороды в дозе 0,75 ЛД50 статистически значимо увеличивают концентрацию А и НА в плазме крови крыс.

* * * * 12 ** ** * * * * * ** К 1 2 3 4 5 6 К 1 2 3 4 5 А НА Рис. 7.2. Содержание адреналина и норадреналина в плазме крови крыс после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) через 3 ч, мкг/л (M+m).

По оси абсцисс: К – контроль;

1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно;

по оси ординат: концентрация А и НА в плазме крови, мкг/л;

в каждой серии опытов использовали 9-10 крыс;

*;

**- различие с контролем достоверно – р0, (*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона-Манна- Уитни).

Так, токсиканты через 3 ч после острой интоксикации повышали содержание А и НА в плазме крови от 1,46 раза (метанол) до 1,92 раза (дихлорэтан) и от 1,58 раза (этиленигликоль) до 2,06 раза (тетрахлорметан) соответственно. При этом, существенных различий между эффектами метанола, этанола, этиленгликоля, дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена не выявлено. Следует отметить, что именно через 3 ч адреналин и норадреналин оказывают максимальное воздействие на перераспределение иммуноцитов между органами системы иммунитета [Techima H.et al., 1991].

На основании результатов исследований, можно отметить, что увеличение КА в плазме крови под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов обусловлено реализацией стресс-реакции, активацией симпатико-адреналовой системы [Горизонтов П. Д., 1981б]. Кроме того, дихлорэтан и тетрахлорметан могут оказывать антихолинэстеразный эффект [Тиунов Л.А., 1990а], в результате которого ацетилхолин возбуждает н холинорецепторы мозгового вещества надпочечников [Судаков К.В., 1983;

Денисенко П.П., 1980;

Виноградов В.М. и соавт., 1986], что приводит к выделению адреналина в циркулирующую кровь.

Исследованиями многих авторов в настоящее время доказано наличие на лимфоцитах -адренорецепторов, на которые способны воздействовать КА, повышая в физиологических концентрациях иммунные реакции, за исключением активности ЕКК [Маdden K.S., Livnat S., 1991]. Также отмечено усиление дифференцировки незрелых лимфоидных клеток [Coffey R.G., Hadden J.W., 1985], в частности, В-лимфоцитов [Holte H., et al., 1988] под влиянием активации их -адренорецепторов.

Поэтому проблема нарушения САС при отравлениях различными ядами имеет важное теоретическое и практическое значение и нуждается во всестороннем исследовании. Проведенные эксперименты предполагают изучение изменения иммунных реакций под влиянием доз адреналина и норадреналина, которые способны создать концентрацию в крови, соизмеримую с содержанием КА под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов.

Коэффициенты корреляции между концентрацией адреналина в крови и АОК к ЭБ, реакцией ГЗТ при остром отравлении крыс дихлорэтаном составляли соответственно –0,708 (p0,05) [n=9] и -0,755 (p0,05) [n=9].

Коэффициенты корреляции при острых отравлениях другими спиртами и хлорированными углеводородами между концентрацией А в крови и реакцией ГЗТ, АОК к ЭБ составляли от -0,576 до -0,767. При этом r для всех сравниваемых пар показателей после действия токсикантов были достоверны (p0,05), за исключением действия этанола.

Таким образом, острая интоксикация спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) приводила к активации САС, что сопровождалось статистически значимым увеличением концентрации адреналина и норадреналина в плазме крови крыс. Существенных различий между эффектами метанола, этиленгликоля, этанола, тетрахлорметана, трихлорэтилена не выявлено. Установлена обратная корреляция между Т зависимым гуморальным иммунным ответом, ГЗТ и концентрацией адреналина в крови после острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами.

7.1.5. Влияние катехоламинов на показатели системы иммунитета В отдельной серии опытов на крысах проводилась оценка эффектов КА в концентрациях соизмеримых с содержанием А и НА в плазме крови после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0, ЛД50). Показано (табл. 7.3), что при введении А в дозе 0,025 мг/кг в крови обеспечивается концентрация соизмеримая с содержанием адреналина в крови после интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами.

Данная концентрация, составляющая 15,5+2,5 мкг/л, практически не влияла на активность ЕКК, незначительно повышала ГЗТ и статистически достоверно (p0,05) увеличивала Т-зависимый иммунный ответ (число АОК к ЭБ в селезенке), Т-независимый иммунный ответ (число АОК к Vi-Ag в селезенке), АЗКЦ в 1,38;

1,59 и 1,43 раза соответственно. При введении крысам НА в дозе 0,025 мг/кг (данная доза обеспечивала содержание НА в крови – 4,1+0,7 мкг/л – соизмеримое с концентрацией этого медиатора при действии спиртов и хлорированных углеводородов) происходило незначительное (p0,05) увеличение Т-зависимого иммунного ответа (число АОК к ЭБ в селезенке), Т-независимой иммунной реакции (число АОК к Vi Ag в селезенке) и АЗКЦ.

Таблица 7. Влияние адреналина и норадреналина на основные иммунные реакции в плазме крови крыс (М+m) Параметры Контроль Адреналин, мг/кг Норадреналин, мг/кг 0,025 1,0 0,025 1, А, мкг/л 6,82+1,03 15,5+2,5* - - Н, мкг/л 1,95+0,27 - - 4,1+0,7* ЕЦ,% 22,4+3,0 18,1+2,5 16,0+2,1* 17,4+2,3 12,4+2,3* АОК к ЭБ, 103 27,2+2,5 37,5+3,5* 20,2+2,2* 34,7+3,1 19,3+1,9* АОК к 18,4+1,9 29,2+3,2* 12,1+1,3* 25,0+2,3 12,1+1,1* Vi-Ag, АЗКЦ, % 9,5+1,4 13,6+1,3* 5,8+0,8* 13,1+1,2 6,0+0,7* Реакция ГЗТ % 28,3+2,6 35,7+3,1 18,8+1,8* 30,6+2,6 17,7+1,7* Примечание: А – адреналин, НА – норадреналин;

в каждой серии опытов использовалось 7-9 крыс;

* - различия достоверны по сравнению с контролем р 0,05.

По нашему мнению, менее выраженная активация иммунных реакций НА связана с тем, что данный медиатор в отличие от А стимулирует преимущественно -адренорецепторы иммуноцитов. Именно данные структуры, а не -адренорецепторы обеспечивают активацию лимфоцитов [Rinner I., et al., 1995]. Доза А, составляющая 0,025 мг/кг, вызывала менее выраженную стимуляцию Т-зависимого антителообразования по сравнению с тимуснезависимым (соответственно в 1,38 и 1,59 раза).

Установлено, что в дозе 1,0 мг/кг А и НА вызывали редукцию всех исследованных иммунных реакций. Следует отметить, что испытанная доза А и НА способна создать концентрацию в плазме крови, превышающую содержание данных КА после острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) более, чем в 30 раз (с учетом биотрансформации, взаимодействия с рецепторами и выведения эти значения могут быть несколько меньшими). Усиление дифференцировки незрелых лимфоидных клеток [Coffey R.G., Hadden J.W., 1985], в частности, В лимфоцитов [Holte H., et al., 1988] под влиянием активации их адренорецепторов объясняет выявленное нами и описанное в литературе увеличение антителопродукции преимущественно к Т-независимому антигену при введении А и НА в малых дозах [Gilbert R.V., Hoffmann M.K., 1985;

Holte H. et al., 1988].

Имеются данные, что стимулирующее действие КА опосредуется через - и -адренорецепторы иммуноцитов, путем синтеза цАМФ, приводящего к продукции соответствующих интерлейкинов, осуществляющих регуляцию иммунных реакций [Маdden K. S., Livnat S., 1991]. Кроме того, известно, что цАМФ стимулирует дифференцировку незрелых лимфоидных клеток [Coffey R.G., Hadden J.W., 1985], в частности, В-лимфоцитов [Holte H., et al., 1988].

Предполагают, что активация -адренорецепторов иммунокомпетентных клеток в первые 12 ч после (индуктивная фаза иммунного ответа) антигенного стимула увеличивает антителообразование.

Данные литературы свидетельствуют, что увеличение под влиянием адреналина L3T4 (Т-хелперов/Тгзт – Тh1) и особенно Lyt-1 (Т-хелперов/Тгзт), а также Lyt-2 (цитотоксических Т-лимфоцитов/Т-супрессоров – CD8) в селезенке мышей через 90 мин после его введения [Techima H.et al., 1991], видимо, обусловливает активацию индуктивной фазы иммуногенеза, сопровождающуюся увеличением числа АОК, реакции ГЗТ и АЗКЦ.

Существуют основания полагать, что увеличение А и НА в крови при острой интоксикации дихлорэтаном и тетрахлорметаном сопровождается их уменьшением в мозгу и надпочечниках вследствие действия ацетилхолина [Brzezinski J., 1972]. Угнетение иммунных реакций при высоких дозах КА [Денисенко П.П., 1980] объясняется тем обстоятельством, что эти дозы являются пусковым фактором В-клеточной активации, но одновременно подавляют Т-клеточную хелперную активность [Gilbert R.V., Hoffmann M.K., 1985]. Незначительная редукция ЕЦ под влиянием КА обусловлена увеличением соотношения цАМФ/цГМФ [Garoroy M.R. et al., 1975].

Доказано, при адреналэктомии функция ЕКК повышается [Маdden K. S., Livnat S., 1991]. Не исключено, что введение КА в продуктивную фазу иммунного ответа может приводить к сдвигам исследованных иммунных реакций существенно отличающихся от описанных.

Таким образом, при действии адреналина и норадреналина в концентрации соизмеримой с содержанием данных медиаторов после острой интоксикации спиртами и ХУ (введение А и НА в дозе 0,025 мг/кг) вызывает увеличение основных иммунных реакций. Следовательно, несмотря на выявленную обратную корреляцию между Т-зависимым гуморальным иммунным ответом, реакцией ГЗТ и концентрацией адреналина в крови после острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами, иммуносупрессивные эффекты данных токсикантов не связаны с увеличением концентрации при их остром действии в плазме крови А и НА.

Доза А и НА, составляющая 1,0 мг/кг, вызывает редукцию основных показателей гуморального и клеточного звена иммунитета.

7.2. Изменение активности эстераз Т-клеток и спленоцитов под влиянием спиртов и хлорированных углеводородов К настоящему времени достоверно установлено, что неспецифические эстеразы, как и кислые фосфатазы, являются лизосомальными ферментами.

Эти энзимы играют важную роль в реализации киллерной функции Т лимфоцитов [Ледванов М. Ю., Киричук В. Ф., 1996;

Fergula J. et al., 1972;

Li C.G., et al., 1983]. Изменение эстеразной активности в клетках отражает, с одной стороны, функциональную активность иммуноцитов, с другой - может служить количественным критерием Т-клеток в циркулирующей крови, так как именно эта субпопуляция лимфоцитов является эстеразопозитивной [Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д., 1983;

Ferluga J. et al., 1972;

Li C. G et al.,1973;

Kutty K. M. et al., 1976;

Кullenkampff J. et al., 1977]. Роль ацетилхолинэстеразы на поверхности Т-лимфоцитов [Kutty K. M. et al., 1976;

Szelenyi J.G. et al., 1982] до сих пор не ясна. Возможно, она регулирует влияние ацетилхолина на холинореактивные структуры Т-лимфоцитов [Забродский П.Ф., Германчук В.Г., 2001;

Gordon M.A. et al., 1975;

Richman D.P., Arnason B.G.W., 1979].

Данные литературы позволяют предполагать, что хлорированные углеводороды способны ингибировать эстеразы Т-клеток [Тиунов Л.А., 1990а;

Куценко С.А., 2004;

Куценко С.А. и соав., 2004]. Вышеизложенное послужило основанием для выполнения настоящего раздела исследования.

Проведенные нами опыты показали (табл. 7.4), что под влиянием хлорированных углеводородов активность ацетилхолинэстеразы (АХЭ) в Т лимфоцитах тимуса и селезенки у крыс через 3 сут существенно снижается.

Таблица 7. Влияние острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на активность ацетилхолинэстеразы в Т- лимфоцитах тимуса и селезенки у крыс (мЕд/109) через 3 сут (M+m) Токсиканты Тимус Селезенка Контроль 69,2+7,0 58,4+6, Метанол 61,4+6,9 51,0+ 5, Этиленгликоль 73,1+7,2 62,4+ 6, Этанол 64,7+6,8 55,2+ 5, Дихлорэтан 44,5+5,3* 37,5+ 4,5* Тетрахлорметан 48,0+6,1* 45,0+4,8** Трихлорэтилен 54,5+5,7** 48,4+4,7** Примечание: в каждой серии использовалось от 7 до 9 крыс;

*;

**- различие с контролем достоверно - р0,05 (*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона Манна- Уитни).

Так, острое отравление дихлорэтаном, тетрахлорметаном и трихлорэтиленом вызывало статистически значимое уменьшение активности АХЭ в Т-лимфоцитах тимуса соответственно в 1,55;

1,49 и 1,27 раза (р0,05).

В Т-клетках селезенки активность АХЭ снижалась под влиянием дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена соответственно в 1,56;

1, и 1,21 раза (р 0,05). В то же время интоксикация метанолом, этиленгликолем и этанолом на активность АХЭ Т-лимфоцитов влияния не оказывала.

Несомненно, что ингибирование ацетилхолинэстеразы Т-клеток дихлорэтаном, тетрахлорметаном и трихлорэтиленом, по нашему мнению, имеет существенное значение в формировании постинтоксикационного иммунодефицитного состояния. При этом Т-лимфоциты, возможно, существенно утрачивают свои функции, что приводит к редукции Т зависимого гуморального иммунного ответа, снижению цитотоксической активности Т-клеток. По-видимому, функция К-клеток (АЗКЦ) также снижается вследствие ингибирования ацетилхолинэстеразы, так как эти клетки являются потомками предшественников Т-лимфоцитов [Delves P.J., Roitt I.M., 2000].

Изучение активности неспецифических эстераз в селезенке по относительному содержанию эстеразопозитивных клеток в органе (преимущественно Т-клеток [Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д., 1983;

Ройт А. и соавт., 2000] показало (рис. 7.3), что острое действие дихлорэтана, тетрахлорметана и трихлорэтилена вызывало статистически значимое уменьшение активности -нафтил-АS-ацетатэстеразы соответственно в 1,45;

1,29 и 1,21 раза (р0,05), а -нафтилбутиратэстеразы - соответственно в 1,42;

1,31 и 1,20 раза (р0,05). Действие спиртов на активность -нафтил-АS ацетатэстеразы и -нафтилбутиратэстеразы спленоцитов влияния не оказывало.

Существенных различий в антихолинэстеразной активности отдельных хлорированных углеводородов не выявлено. При объединении показателей редукции в единую совокупность для различных ядов установлено, что дихлорэтан в среднем снижал активность эстераз на 32,9%, а тетрахлорметан и трихлорэтилен – на 21,9% (р0,05).

** * 40 * ** 30 * К 1 2 3 4 5 6 К 1 2 3 4 5 А Б Рис. 7.3. Влияние острой интоксикации спиртами и хлорированными углеводородами (0,75 ЛД50) на содержание -нафтил-АS-ацетатэстеразо- и -нафтилбутиратэстеразопозитивных клеток в спленоцитах крыс (M+m).

По оси абсцисс: К – контроль;

1, 2, 3, 4, 5, 6 – М, ЭГ, Э, ДХЭ, ТХМ, ТХЭ соответственно;

по оси ординат: содержание клеток, %;

в каждой серии опытов использовали 7-9 крыс;

*;

**- различие с контролем достоверно – р0,05 (*;

** - для расчета достоверности различий использовали соответственно t –критерий Стьюдента и непараметрический критерий U Вилкоксона-Манна- Уитни).

Данные литературы свидетельствуют, что инактивация эстераз в моноцитах, цитотоксических Т-лимфоцитах, интактных и активированных лимфокинами ЕКК ксенобиотиками, в частности, ФОС, ослабляет иммунологический контроль и эффекторные функции, опосредуемые данными видами клеток. Развитие лимфомы часто связано с присутствием вируса Эпштейна-Барра и человеческого герпесвируса-6, иммунитет к которым зависит от функции моноцитов, Т-лимфоцитов и ЕКК. Выдвигается гипотеза, что торможение активности эстераз иммунокомпетентных клеток, вызываемое токсикантами (например, ФОС), ослабляет процесс эстеразозависимой детоксикации, в результате чего способствует развитию процесса лимфомогенеза. Кроме того, снижение активности эстераз подавляет иммунитет к таким патогенам, способствующим развитию лимфом, как герпесвирусы [Newcombe D.S., 1991]. Учитывая изложенное предположение, можно считать, что кроме ФОС хлорированные углеводороды, обладающие антихолинэстеразным эффектом, способны вызывать лимфомы вследствие их способности ингибировать эстеразы Т клеток.

Коэффициент корреляции между активностью ацетилхолинэстеразы в Т лимфоцитах тимуса крыс и АОК к ЭБ, реакцией ГЗТ при остром отравлении крыс дихлорэтаном составляли соответственно 0,755 (p0,05) [n=9] и 0, (p0,05) [n=9]. Коэффициенты корреляции при острых отравлениях другими ХУ между активностью ацетилхолинэстеразы в Т- лимфоцитах тимуса крыс и реакцией ГЗТ, АОК к ЭБ составляли от 0,767 до 0,805, а между содержанием различных эстеразопозитивных клеток в спленоцитах и реакцией ГЗТ, АОК к ЭБ - от 0,756 до 0,798. При этом r для всех сравниваемых пар показателей после действия ТХМ и ТХЭ были достоверны (p0,05).

Таким образом, острое отравление дихлорэтаном, тетрахлорметаном и трихлорэтиленом вызывает существенное снижение активности -нафтил-АS ацетилхолинэстеразы в Т-лимфоцитах тимуса и селезенки, ацетатэстеразы и -нафтилбутиратэстеразы в спленоцитах крыс, при этом антиэстеразный эффект дихлорэтана в среднем выше действия других хлорированных углеводородов. Влияние спиртов на активность АХЭ, -нафтилбутиратэстеразы нафтил-АS-ацетатэстеразы и Т-лимфоцитов селезенки не выявлено. Установлена прямая корреляция между Т-зависимым гуморальным иммунным ответом, ГЗТ и активностью ацетилхолинэстеразы в Т- лимфоцитах тимуса, содержанием эстераз в спленоцитах крыс после острого отравления хлорированными углеводородами.

7.3. Изменение показателей перекисного окисления липидов после острого отравления спиртами и хлорированными углеводородами Процессы перекисного окисления липидов до сих пор привлекают внимание многих исследователей и интенсивно изучаются при отравлениях ксенобиотиками [Абдрашидова Н.Ф., Романов Ю.А., 2001;

Бурмистров С.О. и соавт., 2001] и самых различных патологических состояниях [Лукьянова Л.Д.

и соавт., 2001;

Зарубина И.В., Миронова О.П., 2001;

Плужников Н.Н. и соавт., 2003а, 2003в]. Известно, что перекисное окисление липидов мембран, в том числе и ИКК при остром отравлении различными ТХВ включает следующие стадии: разрыхление гидрофобной области липидного бислоя мембран, что делает белковые компоненты более доступными для протеаз;

появление в гидрофобном хвосте жирной кислоты гидрофильной перекисной группы, приводящее к конформационным изменениям в фосфолипиде и липопротеидном комплексе, что изменяет биофизические свойства мембраны и ферментативные функции липопротеидных комплексов;

разрушение веществ, обладающих антиоксидантной активностью (витаминов, стероидных гормонов, убихинона) и снижающих концентрации тиолов в клетке;

образование по мере накопления гидроперекиси липидов трансмембранных перекисных кластеров, являющихся каналами проницаемости для ионов, в частности для ионов кальция. Формирование таких каналов патологической проницаемости может играть важную роль в возникновении избытка кальция в иммунокомпетентных клетках и реализации повреждающего действия этого катиона [Меерсон Ф.З., 1984;



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.