авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |

«РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИHСКИХ HАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕHИЕ ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ФИЗИОЛОГИИ И ПАТОЛОГИИ ДЫХАHИЯ ФИЗИОЛОГИИ И ПАТОЛОГИИ ...»

-- [ Страница 4 ] --

3 и 4 группы – окисления сукцинатов, причем механизм производства подопытные, где животным перед охлаждением (время энергии, использующий сукцинаты, работает в сотни экспозиции – 3 часа) ежедневно внутрибрюшинно вво раз эффективнее, чем все другие механизмы производ дили, соответственно, Ремаксол в дозе 100 мг/кг и Ци ства энергии в организме [1]. Препараты сукцинатов тофлавин в дозе 100 мг/кг. Забой животных путем предупреждают процессы ПОЛ, поскольку янтарная декапитации производили на 7, 14 и 21 сутки. Интен кислота, являясь антиоксидантом, блокирует актив сивность процессов ПОЛ оценивали, исследуя содер ность свободных радикалов [2]. Учитывая вышесказан жание в крови животных гидроперекисей липидов ное, экспериментальное обоснование эффективности (ГП), диеновых конъюгатов (ДК), малонового диальде применения сукцинатсодержащих препаратов Ремак гида (МДА) и компонентов АОС – церулоплазмина, ви сол® и Цитофлавин®, разработанных научно-техноло тамина Е, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы гической фармацевтической фирмой «Полисан» и (Гл-6-ФДГ), каталазы по методикам, изложенным в апробированных на клинических базах кафедры ане ранее опубликованной нами работе [8]. Статистиче стезиологии и реаниматологии Санкт-Петербургской скую обработку результатов проводили с использова медицинской академии последипломного образования, нием критерия Стъюдента (t) с помощью программы для коррекции процессов ПОЛ, индуцированных воз Statistica v.6.0. Результаты считали достоверными при действием холода, является актуальным и открывает р0,05.

перспективы в регуляции различного рода стрессовых воздействий. Результаты исследования и их обсуждение Цель исследования – изучение влияния сукцинат- В результате проведенных исследований было уста содержащих препаратов на антиоксидантный статус новлено (табл. 1), что воздействие на крыс низких тем теплокровного организма в условиях холодового воз- ператур сопровождается активацией процессов ПОЛ и действия. накоплением продуктов пероксидации в крови охлаж Материалы и методы исследования даемых животных: увеличением содержания ГП – на 22% (7 день), 29% (14 день) и 20% (21 день экспери Работа выполнена на кафедре фармакологии Амур мента) в сравнении с аналогичным показателем в ской государственной медицинской академии. Экспе группе интактных крыс;

ДК – на 29% (7 день), 28% ( римент проводили на 120 белых беспородных день) и 35% (21 день эксперимента);

МДА – на 34% ( крысах-самцах массой 150-180 г в течение 21 дня.

день), 42% (14 день) и 21% (21 день эксперимента), что Протокол экспериментальной части исследования согласуется с результатами исследований, опублико на этапах содержания животных, моделирования пато ванных нами ранее [4, 5, 9]. В свою очередь, введение логических процессов и выведения их из опыта соот сукцинатсодержащих препаратов в условиях холодо ветствовал принципам биологической этики, вого воздействия сопровождалось достоверным сни изложенным в Международных рекомендациях по про жением содержания продуктов радикального характера ведению медико-биологических исследований с ис в сравнении с показателями в контрольной группе. На пользованием животных (1985), Европейской БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, фоне применения Ремаксола концентрация ГП умень- янтарной кислоты в организме, необходимое для обес шилась на 16% (7 день), 25% (14 день) и 20% (21 день печения жизнедеятельности в экстремальных усло эксперимента);

ДК – на 22% (7 день), 29% (14 день) и виях, способствует увеличению выхода тепла при 23% (21 день эксперимента);

МДА – на 31% (7 день), мышечном сокращении, позволяющего при сниженном 38% (14 день) и 21% (21 день эксперимента). На фоне уровне терморегуляторного тонуса увеличивать тепло введения Цитофлавина содержание ГП снизилось на продукцию на холоде, стабилизирует процессы липо 12% (7 день), 21% (14 день), 20% (21 день экспери- пероксидации в условиях холодовой мента), ДК – на 24% (7 день), 25% (14 день) и 24% (21 экспериментальной модели. Анализируя показатели день эксперимента), МДА – на 28% (7 день), 33% (14 продуктов ПОЛ в динамике в условиях коррекции день) и 20% (21 день эксперимента). Указанные изме- важно отметить, что наиболее выраженный стресс нения, на наш взгляд, вполне объяснимы и согласуются протективный эффект на фоне применения препаратов, с литературными данными [12], поскольку использо- содержащих янтарную кислоту, наблюдался к концу вание сукцинатсодержащих препаратов на фоне воз- второй недели эксперимента.

действия низких температур увеличивает превращение Таблица Содержание продуктов ПОЛ в крови экспериментальных животных (M±m) Показатели, Сроки Интактные Воздействие Холод и введение Холод и введение нмоль/мл эксперимента крысы холода Ремаксола Цитофлавина 7 день 26,0±1,8 33,2±1,1* 27,9±2,0 29,2±1, ГП 14 день 25,0±2,7 35,2±1,2* 26,4±1,3** 27,9±1,1** 21 день 28,6±1,5 35,6±1,1* 28,6±1,2** 28,4±1,0** 7 день 34,4±3,6 48,7±3,3* 37,8±1,9** 36,8±1,0** ДК 14 день 35,4±3,0 49,2±2,6* 35,1±1,4** 36,9±1,1** 21 день 31,2±2,6 48,1±3,4* 36,8±1,1** 36,6±0,7** 7 день 3,8±0,1 5,8±0,2* 4,0±0,1** 4,2±0,1** МДА 14 день 3,8±0,2 6,6±0,4* 4,1±0,2** 4,4±0,3** 21 день 4,4±0,3 5,6±0,3* 4,4±0,3** 4,5±0,2** Примечание: здесь и далее * – достоверность различия показателей по сравнению с группой интактных жи вотных (р0,05);

** – достоверность различия показателей по сравнению с группой животных, к которым приме няли только воздействие холода (р0,05).

Многочисленными литературными данными пока- и синтеза церулоплазмина путём введения экзогенного зано, что активация ПОЛ при холодовом воздействии сукцинатсодержащего препарата. Уровень витамина Е на крыс развивается на фоне напряжения и истощения при использовании Ремаксола в эксперименте досто АОС, характерные изменения которой включают верно увеличился на 17% (7 день), на 24% (14 день) и уменьшение содержания церулоплазмина и витамина 15% (21 день), при использовании Цитофлавина – на Е, а также снижение активности каталазы и Гл-6-ФДГ 14-19% относительно контрольных животных. В свою [4, 5, 7, 12]. Данные факты были подтверждены резуль- очередь, исследование активности ферментов АОС в татами нашего эксперимента, которые свидетельство- условиях коррекции введением препаратов, содержа вали о достоверном снижении уровня церулоплазмина щих янтарную кислоту, позволило констатировать по в крови контрольных крыс относительно интактных вышение активности Гл-6-ФДГ в среднем на 4-12%, животных на 24-34%, витамина Е – на 17-28%, Гл-6- каталазы – на 8-22%, однако различия показателей по ФДГ – на 13-19%, каталазы – на 15-27% (табл. 2). сравнению с группой животных, к которым применяли Использование сукцинатсодержащих препаратов только воздействие холода, были недостоверными, за для коррекции холодового воздействия способствовало исключением ферментной активности к концу экспе повышению активности АОС в крови подопытных жи- римента на фоне введения ремаксола. Таким образом, вотных: на фоне введения Ремаксола содержание церу- содержание основных компонентов АОС (церулоплаз лоплазмина выросло на 23% (7 день), 31% (14 день), мина и витамина Е) в сыворотке крови эксперимен 27% (21 день эксперимента) по сравнению с аналогич- тальных животных, получавших Ремаксол и ным показателем в группе контрольных крыс;

на фоне Цитофлавин в дозе 100 мг/кг внутрибрюшинно, указы введения Цитофлавина – на 19%, 25% и 22%, соответ- вает на антиоксидантную активность сукцинатсодер ственно, что, по-видимому, связано с восстановлением жащих препаратов, стабилизирующих процессы ПОЛ янтарной кислоты в дыхательной цепи митохондрий, в условиях холодового воздействия.

возрастанием антиоксидантной активности глутатиона БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, Таблица Содержание компонентов АОС в крови экспериментальных животных (M±m) Сроки Интактные Воздействие Холод и введение Холод и введение Показатели эксперимента крысы холода Ремаксола Цитофлавина 7 день 30,0±1,9 20,5±1,5* 26,6±2,8 25,4±0,9** Церулоплазмин, 14 день 28,8±1,4 19,1±1,2* 27,7±2,5** 25,4±1,4** мкг/мл 21 день 26,8±1,4 20,3±1,0* 27,7±2,1** 26,1±1,7** 7 день 48,7±3,6 37,3±1,5* 44,8±1,7** 43,5±1,5** Витамин Е, 14 день 47,5±2,2 34,0±1,6* 44,7±1,5** 42,2±1,0** мкг/мл 21 день 45,8±2,0 38,0±1,6* 44,8±1,4** 44,4±1,6** 7 день 6,9±0,2 5,6±0,2* 5,8±0,2 6,0±0, Гл-6-ФДГ, 14 день 6,8±0,2 5,9±0,2* 6,6±0,2 6,3±0, мкмоль НАДФН л-1с- 21 день 6,7±0,3 5,6±0,2* 6,4±0,2** 6,0±0, 7 день 93,0±2,7 78,6±4,1* 85,2±6,4 85,0±3, Каталаза, мкмоль 14 день 95,2±3,2 72,8±3,9* 86,8±4,8 88,8±5, Н2О2 г-1с- 21 день 97,0±3,5 71,0±4,2* 91,0±5,0** 81,4±4, В целом, впервые экспериментально доказана эф- холодового воздействия в эксперименте: автореф. дис.

фективность применения препаратов Ремаксол и Ци- … д-ра мед. наук. Ленинград, 1987. 48 с.

тофлавин, содержащих янтарную кислоту, в условиях 4. Эмоксипин в клинике и эксперименте / В.А.До холодового стресса, что позволяет рекомендовать дан- ровских [и др.]. Благовещенск: АГМА, 2005. 110 с.

ные лекарственные средства к использованию для кор- 5. Адаптогены и холодовой стресс: вчера, сегодня, рекции патологических состояний, протекающих на завтра… / В.А.Доровских [и др.]. Благовещенск:

фоне синдрома липидной пероксидации. АГМА, 2006. 214 с.

6. Ли О.Н. Антиоксидантные свойства арабинога Выводы лактана в условиях холодового стресса: автореф. дис.

1. Воздействие низких температур на теплокровный … канд. мед. наук. Владивосток, 2011. 25 с.

организм способствует формированию окислительного 7. Ли О.Н., Доровских В.А., Штарберг М.А. Анти стресса в условиях накопления продуктов ПОЛ и сни- оксидантные свойства арабиногалактана в условиях жения уровня основных компонентов АОС в крови холодового стресса // Дальневост. мед. журн. 2011. №2.

крыс. С.87–90.

2. Введение сукцинатсодержащих препаратов Ре- 8. Симонова Н.В., Доровских В.А., Штарберг М.А.

максол и Цитофлавин в дозе 100 мг/кг лабораторным Адаптогены в коррекции процессов перекисного окис животным снижает интенсивность процессов перокси- ления липидов биомембран, индуцированных воздей дации, индуцированных воздействием холода, что под- ствием холода и ультрафиолетовых лучей // Бюл.

тверждается уменьшением содержания продуктов физиол. и патол. дыхания. 2011. Вып. 40. С.66–70.

ПОЛ на фоне достоверного увеличения активности ос- 9. Симонова Н.В. Фитопрепараты в коррекции про новных компонентов АОС (церулоплазмина и вита- цессов перекисного окисления липидов биомембран, мина Е). индуцированных ультрафиолетовым облучением: ав 3. Исследование антиокислительной активности тореф. дис. … д-ра биол. наук. Благовещенск, 2012. препаратов, содержащих янтарную кислоту, в дина- с.

мике в течение 21 дня свидетельствовало о наиболее 10. Настой лекарственных растений и окислитель выраженном антиоксидантном эффекте Ремаксола и ный стресс в условиях холодового воздействия / Цитофлавина к концу второй недели опыта в условиях Н.В.Симонова [и др.] // Бюл. физиол. и патол. дыхания.

холодовой экспериментальной модели. 2013. Вып.48. С.76–80.

11. Проблемы северной пульмонологии (от знания ЛИТЕРАТУРА – к действию) / В.Ф.Ушаков [и др.]. Сургут: СурГУ, 1. Янтарная кислота – основное действующее ве- 2006. 118 с.

щество новых метаболических препаратов / Л.С.Алек- 12. Шаповаленко Н.С. Фармакологическая регуля сеева [и др.] // Врач. 2001. №12. С.29–30. ция холодового и теплового воздействия в экспери 2. Афанасьев В.В. Цитофлавин в интенсивной тера- менте: автореф. дис. … канд. мед. наук. Владивосток, пии. Пособие для врачей. СПб., 2005. 36 с. 2011. 25 с.

3. Доровских В.А. Фармакологическая коррекция БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, REFERENCES sis…candidate of medical sciences]. Vladivostok;

2011.

7. Li O.N., Dorovskikh V.A., Shtarberg M.A.

Dal'nevostochnyy meditsinskiy zhurnal 2011;

2:87–90.

1. Alekseeva L.S., Petrov A.V., Savateeva T.N., Ko valenko A.L., Golubev S., Romantsov M.G. Vrach 2001;

8. Simonova N.V., Dorovskikh V.A., Shtarberg M.A.

Blleten' fiziologii i patologii dyhaniy 2011;

40:66–70.

12: 29–30.

2. Afanas'ev V.V. Tsitoflavin v intensivnoy terapii. 9. Simonova N.V. Fitopreparaty v korrektsii protsessov Posobie dlya vrachey [Cytoflavin in the intensive care unit. perekisnogo okisleniya lipidov biomembran, indutsirovan nykh ul'trafioletovym oblucheniem: avtoreferat dissertatsii The Manual for physicians]. St. Petersburg;

2005.

3. Dorovskikh V.A. Farmakologicheskaya korrektsiya doktora biologicheskikh nauk [Herbal medicinal products kholodovogo vozdeystviya v eksperimente: avtoreferat dis- in the correction of lipid peroxidation of membranes in sertatsii doktora meditsinskikh nauk [Pharmacological cor- duced by ultraviolet irradiation: abstract of thesis…doctor rection of cold exposure in the experiment: abstract of of biological sciences]. Blagoveshchensk;

2012.

thesis…doctor of medical sciences]. Leningrad;

1987. 10. Simonova N.V., Dorovskikh V.A., Li O.N., Shtar berg M.A., Simonova N.P. Blleten' fiziologii i patologii 4. Dorovskikh V.A., Tseluyko S.S., Kodintsev V.V., dyhaniy 2013;

48:76–80.

Sayapina I.Yu., Klimova N.V., Zrazhevskaya S.G., Zhukovets I.V. Emoksipin v klinike i eksperimente [Emox- 11. Ushakov V.F., Zavalovskaya L.I., Dorovskikh V.A., Bashkatov V.A., Goborov N.D. Problemy severnoy pul' ipine in clinical and experimental]. Blagoveshchensk:

monologii (ot znaniya – k deystviyu) [Problems of Northern AGMA;

2005.

5. Dorovskikh V.A., Korshunova N.V., Krasavina N.P., рulmonology (from knowledge – to action)]. Surgut:

Simonova N.V., Tikhanov V.I., Simonova N.P. Adaptogeny SurGU;

2006.

i kholodovoy stress: vchera, segodnya, zavtra… [Adapto- 12. Shapovalenko N.S. Farmakologicheskaya reguly atsiya kholodovogo i teplovogo vozdeystviya v eksperi gens and cold stress: yesterday, today, tomorrow...].

mente: avtoreferat dissertatsii kandidata meditsinskikh Blagoveshchensk: AGMA;

2006.

6. Li O.N. Antioksidantnye svoystva arabinogalaktana nauk [Pharmacological regulation of cold and heat expo v usloviyakh kholodovogo stressa: avtoreferat dissertatsii sure in the experiment: abstract of thesis…candidate of kandidata meditsinskikh nauk [Antioxidant properties of medical sciences]. Vladivostok;

2011.

arabinogalactan in conditions of cold stress: abstract of the Поступила 15.07. Контактная информация Владимир Анатольевич Доровских, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии, Амурская государственная медицинская академия, 675000, г. Благовещенск, ул. Горького, 95.

Е-mail: agma@amur.ru Сorrespondence should be addressed to Vladimir A. Dorovskikh, MD, PhD, Professor, Head of Department of Pharmacology, Amur State Medical Academy, 95 Gor'kogo Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation.

Е-mail: agma@amur.ru БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, УДК 577.352.335:612.35]616-001.18:615.275.4- ИЗМЕНЕНИЕ ПРОДУКТОВ И СУБСТРАТНЫХ СОСТАВЛЯЮЩИХ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ТКАНИ ПЕЧЕНИ НА ФОНЕ ХОЛОДОВОЙ НАГРУЗКИ И ВВЕДЕНИИ НЕПРЯМЫХ МУСКАРИНЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ И НИКОТИНЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ ХОЛИНОМИМЕТИКОВ В.И.Тиханов1, Н.А.Лосев2, В.А.Доровских1, Д.П.Решодько1, И.В.Тиханов3, Р.А.Анохина1, Е.Г.Роговченко Амурская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения РФ, 675000, г. Благовещенск, ул. Горького, НИИ экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН, 197376, г. Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, Медико-санитарная часть №78 Федеральной службы исполнения наказаний России, 191014, г. Санкт-Петербург, набережная реки Фонтанки, 36А Амурская областная клиническая больница, 675028, г. Благовещенск, ул. Воронкова, SUMMARY РЕЗЮМЕ Цель исследования – изучение влияния непря- THE CHANGE OF LIPID PEROXIDATION мых холиномиметических средств (прозерин, фос- PRODUCTS AND SUBSTRATE COMPONENTS IN фокол) на содержание продуктов и субстратных THE LIVER TISSUE AGAINST THE COLD составляющих перекисного окисления липидов в EXPOSURE UNDER THE INTRODUCTION OF период кратковременной холодовой нагрузки. Объ- INDIRECT MUSCARIN-SENSITIVE AND ектом исследования служили 60 крыс, охлаждение NIKOTINE-SENSITIVE CHOLINOMIMETICS животных осуществляли ежедневно в течение V.I.Tikhanov1, N.A.Losev2, V.A.Dorovskikh1, часов в условиях климатокамеры, создавая темпе D.P.Reshodko1, I.V.Tikhanov3, R.A.Anokhina1, ратурный режим -12С. Определяли содержание ме E.G.Rogovchenko тиловых эфиров монокарбоновых жирных кислот Amur State Medical Academy, 95 Gorkogo Str., в общих липидах печени, молекулярного кисло Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation рода, определялась способность гомогената печени Research Institute of Experimental Medicine of продуцировать активные формы кислорода, про Northwest Branch RAMS, 12 akad. Pavlova Str., дукты перекисного (свободнорадикального) окис St. Petersburg, 197376, Russian Federation ления липидов при введении непрямых Medical Care Unit №78 of the Federal Penitentiary мускаринчувствительных и никотинчувствитель Service of Russia, 36А Fontanka River Emb., ных холиномиметиков (прозерин в дозе 0,2 мг/кг, St. Petersburg, 191014, Russian Federation фосфокол в дозе 0,02 мг/кг). Установлено, что крат Amur Regional Clinical Hospital, 26 Voronkova Str., ковременная холодовая нагрузка способствует уве Blagoveshchensk, 675028, Russian Federation личению содержания диеновых конъюгатов, при этом отмечается снижение гидроперекисей в общих The aim of the research is to study the influence of липидах печени и малонового диальдегида в гомо- indirect cholinomimetic substances (proserin, phospho генате печени, отмечены изменения в содержании col) on the content of products and substrate compo метиловых эфиров монокарбоновых жирных кис- nents of the lipid peroxidation at short exposure to cold.

лот в общих липидах печени, отмечается увеличе- 60 rats were the object of the research;

cooling of the ние содержания молекулярного кислорода в ткани animals was done daily during 3 hours in the climate печени. Введение прозерина на фоне кратковремен- camera with the temperature -12С. There was re ного холодового воздействия приводит к снижению vealed the content of methyl ether of monocarbonic содержания молекулярного кислорода в гомогенате fatty acids in liver common lipids, and of molecular печени, но отмечается увеличение способности го- oxygen;

the ability of liver homogenate to produce ac могената печени продуцировать активные формы tive forms of oxygen and products of lipid peroxidation кислорода. Введение прозерина и фосфокола на (free-radical) at introduction of indirect muscarin- and фоне кратковременной холодовой нагрузки в боль- nicotine-sensitive cholinomimetics (proserin in the dose шей степени увеличивает содержание малонового of 0.2 mg/kg, phosphocol in the dose of 0.02 mg/kg) was диальдегида в печени, снижая при этом уровень also determined. It was found out that short cold expo первичных продуктов пероксидации – диеновых sure contributed to the increase of diene conjugates;

at конъюгатов и гидроперекисей в общих липидах the same time there was the decrease of hydroperoxides печени. in the common liver lipids, and of malonic dialdehyde Ключевые слова: непрямые холиномиметики, про- in the liver homogenate;

there were also changes in the зерин, фосфокол, холодовой стресс, перекисное окис- content of the methyl ethers of monocarbonic fatty ление липидов биологических мембран, продукты acids in common liver lipids, the growth of molecular пероксидации, метиловые эфиры монокарбоновых oxygen in the liver tissue. The introduction of proserin жирных кислот, молекулярный кислород, активные and phosphocol against cold exposure (cold oxidative формы кислорода. stress) increases the content of malonic dialdehyde in БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, ных из опыта проводили путем декапитации с соблю the homogenate of the liver mostly decreasing the level дением требований гуманности согласно Приложению of primary peroxidation products – diene conjugates №4 «О порядке проведения эвтаназии умерщвления and hydroperoxides in the common lipids of the liver.

Key words: indirect cholinomimetics, proserin, phos- животного» к Правилам проведения работ с использо phocol, cold stress, biological membranes lipid peroxida- ванием экспериментальных животных (приложение к tion, products of peroxidation, methyl ether of Приказу МЗ СССР №755 от 12.08.1977). Исследование monocarbonic fatty acids, molecular oxygen, active forms одобрено этическим комитетом Амурской государст of oxygen. венной медицинской академии.

Охлаждение животных осуществляли ежедневно в Изменение содержания продуктов перекисного течение 3 часов в условиях климатокамеры, создавая окисления липидов (ПОЛ) клеток отмечается при мно температурный режим -12С с соблюдением адекват гих состояниях организма, в том числе и при холодо ных условий влажности и вентиляции [3]. Животные вой нагрузке [3, 9, 11, 13]. С воздействием холода были разделены на 4 группы, в каждой по 6 крыс: связывают и такое явление, как «окислительный группа – интактные животные, которых содержали в стресс» [4, 5, 6, 10]. На сегодняшний день данные ли стандартных условиях вивария;

2 группа – контроль тературы свидетельствуют – в реализации приспосо ная, где крысы подвергались воздействию холода в бительных реакций при стрессе участвует течение 3 часов;

3 и 4 группы – подопытные, где жи периферическое адренергическое звено [1], в работе вотным перед охлаждением (время экспозиции – которого присутствует холинергический компонент, яв часа) вводили внутрибрюшинно, прозерин в дозе 0, ляющийся одним из каналов управления не только об мг/кг и фосфокол в дозе 0,02 мг/кг, соответственно.

менными процессами, но и механизмом формирования Дозы вводимых препаратов подбирали эксперимен адаптационного потенциала, в том числе при длитель тально: критерием возбуждения периферических мус ной холодовой нагрузке [12]. В связи с этим, экспери каринчувствительных холинореактивных структур ментальное исследование влияния фармакологических являлась обильная саливация у животных, оценкой средств, вызывающих накопление эндогенного ацетил возбуждения периферических никотинчувствительных холина антихолинэстеразными механизмами, на спо холинореактивных структур являлись единичные мы собность к изменению содержания продуктов и шечные подёргивания поперечно-полосатой мускула субстратных составляющих окислительного стресса – туры. Интенсивность процессов ПОЛ оценивали, метиловых эфиров монокарбоновых жирных кислот, исследуя содержание диеновых конъюгатов (ДК), гид молекулярного кислорода, активных форм кислорода, роперекисей липидов (ГП), малонового диальдегида продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов, гидропереки (МДА) в гомогенате печени животных по методикам, сей липидов, малонового диальдегида) в печени при изложенным в ранее опубликованной нами работе [8].

холодовой нагрузке, является, на наш взгляд, актуаль Содержание метиловых эфиров монокарбоновых жир ным.

ных кислот (ЖК) определяли методом газовой хрома Цель исследования – изучение влияния непрямых тографии с использованием колонки ДВ-23, холиномиметических средств (прозерин, фосфокол) на позволяющей определять полярные соединения [14, содержание продуктов и субстратных составляющих 15, 16]. Статистическую обработку результатов прово ПОЛ при кратковременной холодовой нагрузке.

дили методом непараметрического дисперсионного Материалы и методы исследования анализа Краскела-Уоллиса, с применением парного критерия Манна-Уитни. Количественные значения Работа выполнена на кафедре фармакологии Амур представлены в виде медианы (Ме) и интерквартиль ской государственной медицинской академии. Экспе ного интервала [Q1 и Q3], где Q1 – 5 перцентиль, Q3 – римент проводили на 60 белых беспородных 95 перцентиль.

крысах-самцах массой 160-200 г.

Протокол экспериментальной части исследования Результаты исследования и их обсуждение на этапах содержания животных, моделирования пато Субстратным обеспечением приспособительных логических процессов и выведения их из опыта соот реакций, реализуемых биологической системой при ветствовал принципам биологической этики, окислительном стрессе, как правило, являются нена изложенным в Международных рекомендациях по про сыщенные жирные кислоты (НЖК) с количеством ведению медико-биологических исследований с ис двойных связей 2,3 и более, молекулярный кислород, пользованием животных (1985), Европейской активные формы кислорода и продукты ПОЛ (ДК, ГП, конвенции о защите позвоночных животных, исполь МДА) в исследуемых тканях, что позволяет трактовать зуемых для экспериментов или в иных научных целях холодовое воздействие в эксперименте и как проблему (Страсбург, 1986), Приказе МЗ СССР №755 от индуцирования холодового окислительного стресса.

12.08.1977 г. «О мерах по дальнейшему совершенство Результаты экспериментов свидетельствуют (табл.

ванию организационных форм работы с использова 1) – кратковременная холодовая нагрузка вызывает из нием экспериментальных животных», Приказе МЗ РФ менения в содержании полиненасыщенных ЖК №267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабо (ПНЖК) семейства -6: уменьшение cis-изомера C20: раторной практики».

6,8,11,14 – эйкозотетраеновой ЖК (Арахи), увеличе При завершении исследований выведение живот ние содержания ЖК семейства -3 cis-изомера C20: БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, 5,8,11,14,17 – эйкозопентаеновой ЖК (Эйкоза). Введе- большей степени – cis-изомера С20:4 6,8,11,14 эйкозо ние прозерина на фоне холодового воздействия уве- тетраеновой ЖК (Арахи).

личивает содержание вышеперечисленных ПНЖК и в Таблица Содержание полиненасыщенных жирных кислот семейства -6, -3 в общих липидах печени (мкг/мл гомогената) Метиловые эфиры ПНЖК Экспериментальные группы Интактные крысы (1) Воздействие холода (2) Холод и прозерин (3) ЖК семейства - 16,678 [15,324;

18,116] 4,018 [3,932;

4,981] cis-изомер C20:4 6,8,11,14 – 6,048 [5,427;

6,924] р3-1=0, р2-1=0, эйкозотетраеновой ЖК (Арахи) р3-2=0, ЖК семейства - 293,3 [257,3;

321,9] 111,75 [100,2;

146,8] 72,150 [65,4;

86,5] р3-1=0, cis-изомер C20:5 5,8,11,14,17 – р2-1=0, р3-2=0, эйкозопентаеновой ЖК (Эйкоза) Примечание: здесь и далее в таблицах количественные значения представлены в виде медианы (Ме) и интер квартильного интервала [Q1;

Q3], где Q1 – 5 перцентиль, Q3 – 95 перцентиль.

ЖК липидной массы мембран при стрессовых со- держание trans-изомеров ЖК семейства -6 С18:2 9, стояниях биологической системы принимают энерге- линолевой, диеновой ЖК (линолелаидиновая ЖК) тически удобную форму для своего дальнейшего (табл. 2). Изменение транс-изомеров отмечалось и в се существования, что сопровождается появлением липи- мействе ЖК -9. Так, если количество trans-изомеров дов с большим числом двойных связей, изменением их С18:1 9 олеиновой, моноеновой ЖК в группе живот физико-химических свойств (уменьшается темпера- ных, подвергавшихся холодовой нагрузке, соответство тура плавления ЖК, увеличивается количество trans- вало 27,897 мкг/мл гомогената, то введение прозерина изомеров ЖК). В результате проведенных на фоне воздействия низких температур способство исследований было установлено: прозерин на фоне вало росту содержания данного показателя в 2,25 раза кратковременной холодовой нагрузки увеличивает со- (табл. 2).

Таблица Содержание жирных кислот семейства -6, -9 в общих липидах печени (мкг/мл гомогената) Метиловые эфиры НЖК Экспериментальные группы Интактные крысы (1) Воздействие холода (2) Холод и прозерин (3) cis- С18:2 9,12 – 11340,7 [9574,3;

линолевая, диеновая 3595,5 [3282,1;

3912,6] 12114,6] 4725,1 [4216,5;

4911,8] ЖК ЖК р2-1=0,00394 р3-1=0, семейства р3-2=0, - trans- С18:2 9,12 – 22,266 [20,637;

24,123] линолевая, диеновая 16,565 [15,118;

18,901] 13,521 [12,613;

14,801] р3-1=0, (линолелаидиновая р2-1=0, р3-2=0, ЖК) cis- С18:1 9 – 6093,7 [4374,5;

6984,3] 2226,2 [1909,6;

2508,7] олеиновая, моноеновая 2646,7 [2516,7;

2812,3] р3-1=0, р2-1=0, ЖК ЖК р3-2=0, семейства trans- С18:1 9 – 62,85 [59,686;

69,724] - 27,897 [26,119;

32,921] олеиновая, моноеновая 40,15 [36,2;

42,6] р3-1=0, р2-1=0, (элаидиновая ЖК) р3-2=0, Таким образом, кратковременная холодовая на- нию НЖК семейства -3 cis-C20:5 5,8,11,14,17 – эй грузка способствует уменьшению содержания НЖК козопентаеновой ЖК (Докоза) и trans-изомеров С18: семейства -6 cis-изомеров C20:4 6,8,11,14 – эйкозо- 9,12 – линолевой, диеновой (линолелаидиновой) ЖК.

тетраеновой ЖК (Арахи) и trans-изомеров С18:1 9 – Прозерин на фоне холодового воздействия увеличивал олеиновой, моноеновой (элаидиновой) ЖК, увеличе- содержание не только НЖК семейства -3 и -6, но и БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, trans-изомеров ЖК семейства -3 и -9. активации процесса ПОЛ [2].

Полученные в эксперименте данные позволяют вы- Одним из условий работы ПОЛ в липидной среде сказать предположение: кратковременное холодовое является присутствия молекулярного кислорода [3].

воздействие и накопление на этом фоне эндогенного Ненасыщенные компоненты липидов (ЖК) при кон ацетилхолина увеличивает содержание ЖК с большим такте с молекулярным кислородом среды способны в количеством двойных связей, способствует росту ЖК алифатической цепочке ЖК предопределять появление с измененной пространственной конфигурацией али- метиленовой группы (рис. 1).

фатической цепочки, создавая энергетические условия Рис. 1. Образование метиленовой группы в присутствии молекулярного кислорода среды на примере ЖК се мейства -9 – С18:1 9 олеиновой, моноеновой ЖК.

Примечание: • - расположение метиленовой группы (СН) в алифатической цепочке ЖК.

Присутствием метиленовой группы, молекулярного кающим у экспериментальных животных, как правило, кислорода в липидной среде создают условия для воз- на фоне введения антихолинэстеразных средств. Но никновения феномена делокализации двойной связи важно отметить: введение прозерина увеличивает спо [2], требующей, как правило, равенства энергий угле- собность гомогената печени продуцировать активные родного атома образовавшейся метиленовой группы и формы кислорода на 6% (табл. 3).

атомов углерода, имеющих двойные связи в алифати ческой цепочке углеводорода (рис. 2). Возникновение этого феномена возможно в присутствии молекуляр ного кислорода среды.

Результаты исследований показывают: содержание молекулярного кислорода в гомогенате печени после трехчасовой холодовой нагрузки у животных возрас тает на 5,7% (табл. 3). Введение прозерина на фоне кратковременной холодовой нагрузки способствует Рис. 2. Возможность делокализации двойной связи уменьшению содержания молекулярного кислорода в на примере участка ЖК с образовавшейся метиленовой гомогенате печени на 7,7% (табл. 3). Мы обьясняем группой.

возникновение данного факта бронхоспазмом, возни Таблица Содержание молекулярного кислорода и активных форм кислорода в гомогенате печени Экспериментальные группы Показатели Интактные крысы (1) Воздействие холода (2) Холод и прозерин (3) 343,0 [328,4;

376,6] Молекулярный кислород 369,5 [365,1;

411,6] 349,3 [328,6;

376,7] р3-1=0, (мкмоль O2/мл гомогената) р2-1=0, р3-2=0, 10,41 [10,12;

10,61] Активные формы кислорода 9,81 [9,38;

10,35] 8,68 [8,2;

9,48] р3-1=0, (10-6 Амп/мл гомогената) р2-1=0, р3-2=0, В тканевой среде молекулярный кислород, взаимо- опытов по введению фосфорорганических блокаторов действуя с ненасыщенными компонентами липидов активности ацетилхолинэстеразы. Было установлено, клеточных мембран через формирование метиленовых что и введение фосфокола на фоне кратковременной групп и феномен делокализации двойной связи, спосо- холодовой нагрузки также приводит к снижению со бен создавать условия для существования энергетиче- держания ДК в общих липидах печени (табл. 4). На ски удобной формы данного вида липида клеточной наш взгляд, это связано либо с накоплением эндоген мембраны – способствовать формированию диеновой ного ацетилхолина в ткани печени, либо с уменьше конъюгации. В наших экспериментах прозерин на нием содержания молекулярного кислорода в тканевой фоне холодовой нагрузки уменьшал содержание ДК в среде с последующим снижением образования мети общих липидах печени (табл. 4). Результаты экспери- леновых групп и уменьшением феномена делокализа мента с прозерином нами сопоставлялись с данными ции двойной связи.

БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, Таблица 4 ЖК с увеличенным числом ненасыщенных связей, по Содержание диеновых конъюгатов вышение интенсивности перехода ЖК из cis-изомеров в trans-изомеры позволяет создать условия для актива в общих липидах печени ции ПОЛ в ткани печени.

Экспериментальные Диеновые конъюгаты, Наряду с сопоставлением этих фактов, мы выска группы нмоль/мг липида зываем рабочее предположение, что не только присут ствие эндогенного ацетилхолина в ткани печени Эксперимент с прозерином способно влиять на выраженность процесса ПОЛ. В Интактные крысы (1) 143,9 [118,2;

158,3] пользу версии о влиянии и молекулярного кислорода на окисление липидов говорят результаты, полученные 169,0 [159,5;

181,7] Воздействие холода (2) в контрольной и подопытной группах животных (табл.

р2-1=0, 1-4). Холодовая нагрузка увеличивает количество мо 134,2 [110,2;

156,9] лекулярного кислорода в ткани печени, растёт содер Воздействие холода и р3-1=0,336 жание cis С20:5 5,8,11,14,17 – эйкозопентаеновой ЖК введение прозерина (3) р3-2=0,00353 (Эйкоза) и отмечается повышение содержания ДК, а прозерин уменьшает содержание молекулярного кис Эксперимент с фосфоколом лорода в гомогенате печени, но повышается уровень cis С20:4 6,8,11,14 – эйкозотетраеновой ЖК (Арахи) и Интактные крысы (1) 164,3 [143,6;

174,6] cis С20:5 5,8,11,14,17 – эйкозопентаеновой ЖК (Эй 190,8 [179,6;

218,0] коза), но при этих фактах отмечается снижение ДК в Воздействие холода (2) р2-1=0,00394 общих липидах печени. Уменьшение содержания ДК в общих липидах печени при введении прозерина об 145,9 [103,8;

160,4] Воздействие холода и условлено, по нашему мнению, снижением формиро р4-1=0, введение фосфокола (4) вания метиленовых групп в ЖК (в тканевой среде р4-2=0, недостаточно молекулярного кислорода), и уменьше В пользу влияния эндогенного ацетилхолина на со- нием возможности делокализации двойной связи в держание ДК в общих липидах говорят результаты, от- ЖК. Увеличение ДК при холодовой нагрузке сопро раженные в таблицах 1 и 2, свидетельствующие, что вождается ростом количества НЖК, увеличением пе введение прозерина на фоне холодовой нагрузки уве- рехода ЖК из cis-изомеров в trans-изомеры, личивает содержание ЖК семейства -3 и -9 – cis увеличением содержания молекулярного кислорода в С20:4 6,8,11,14 – эйкозотетраеновую ЖК (Арахи) и cis тканевой среде. При этом, как правило, в своих экспе С20:5 5,8,11,14,17 – эйкозопентаеновую ЖК (Эйкоза), риментах мы отмечаем снижение ГП в липидах и МДА и trans-изомеры ЖК семейства -6 и -9. Рост уровня в ткани печени (табл.1, 2, 3, 5).

Таблица Содержание гидроперекисей в общих липидах печени, малонового диальдегида в гомогенате печени Гидроперекиси, Малоновый диальдегид, Группы животных нмоль/мг липида нмоль/мл гомогената Эксперимент с прозерином Интактные крысы (1) 7,415 [6,97;

8,1] 1,420 [1,280;

1,620] 6,06 [5,12;

6,81] 0,907 [0,716;

1,2] Воздействие холода (2) р2-1=0,00394 р2-1=0, 4,48 [3,875;

5,6] 1,485 [1,296;

1,92] Воздействие холода и введение прозерина (3) р3-1=0,0003 р3-1=0, р3-2=0,004 р3-2=0, Эксперимент с фосфоколом Интактные крысы (1) 7,685 [7,25;

8,03] 1,385 [0,92;

1,8] 6,07 [5,57;

6,72] 0,818 [0,777;

0,867] Воздействие холода (2) р2-1=0,004 р2-1=0, 4,683 [4,3;

5,2] 1,335 [0,880;

1,930] Воздействие холода и введение фосфокола (4) р4-1=0,00394 р4-1=0, р4-2 = 0,000297 р4-2=0, БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, Введение животным прозерина и фосфокола на лактика). Новосибирск: СО РАМН, 1993. 181 с.

фоне воздействия низких температур снижает содер- 7. Фенольные биоантиоксиданты / Н.К.Зенков [и жание ДК, в большей степени уменьшает количество др.]. Новосибирск: СО РАМН, 2003. 328 с.

ГП, однако увеличивает выраженность МДА в ткани 8. Сравнительная характеристика влияния дигид печени в 1,63 раза (табл. 5). рокверцетина и витамина Е на продукты перекисного В условиях холодовой нагрузки введение прозе- окисления липидов при холодовом воздействии / рина, фосфокола, накапливающих антихолинэстераз- О.Г.Круглова [и др.] // Бюл. физиол. и патол. дыхания.

ными механизмами эндогенный ацетилхолин, ускоряет 2011. Вып.40. С.71–73.

процесс перехода продуктов ПОЛ из одного пула в дру- 9. Оковитый С.В., Шуленин С.Н., Смирнов А.В.

гой – снижает содержание первичных продуктов пе- Клиническая фармакология антигипоксантов и анти роксидации, но увеличивает содержание вторичного оксидантов. СПб.: ФАРМиндекс, 2005. 72 с.

продукта ПОЛ – МДА. 10. Симонова Н.В., Доровских В.А., Штарберг М.А.

Адаптогены в коррекции процессов перекисного окис Выводы ления липидов биомембран, индуцированных воздей 1. Кратковременная холодовая нагрузка уменьшает ствием холода и ультрафиолетовых лучей // Бюл.

содержание ПНЖК семейства -6 cis- C20:4 6,8,11,14 физиол. и патол. дыхания. 2011. Вып. 40. С.66–70.

– эйкозотетраеновой ЖК (Арахи), trans-изомера С18:1 11. Настой лекарственных растений и окислитель 9 – олеиновой, моноеновой (элаидиновой) ЖК и уве- ный стресс в условиях холодового воздействия / личивает содержание ПНЖК семейства -3 cis- C20:5 Н.В.Симонова [и др.] // Бюл. физиол. и патол. дыхания.

5,8,11,14,17 эйкозопентаеновой ЖК (Эйкоза) и trans- 2013. Вып.48. С.76–80.

изомера С18:2 9,12 – линолевой, диеновой (линоле- 12. Тиханов В.И. Влияние центральных и перифе лаидиновой) ЖК. Прозерин на фоне холодовой рических М, Н-холиномиметиков и М, Н-холинобло нагрузки увеличивает содержание ПНЖК семейства - каторов на формирование холодовой адаптации:

3 cis С20:5 5,8,11,14,17 – эйкозопентаеновой ЖК (Эй- автореф. дис. … канд. мед. наук. Ленинград, 1988. коза), ЖК семейства -6 cis С20:4 6,8,11,14 – с.

эйкозотетраеновую ЖК (Арахи), и trans-изомеров ЖК 13. Проблемы северной пульмонологии (от знания семейства -6 trans-изомера С18:2 9,12 линолевой, – к действию) / В.Ф.Ушаков [и др.]. Сургут: СурГУ, диеновой ЖК и trans-изомеров ЖК семейства -9 trans- 2006. 118 с.

изомер С18:1 9 олеиновой, моноеновой ЖК. 14. Cameron G. Separate FAME cis and trans isomers 2. Содержание молекулярного кислорода при крат- with DB-23 // Separation Times. 2001. Vol.14, №3. P.13.

ковременной холодовой нагрузке в ткани печени воз- 15. Myher J.J., Kuksis A. Resolution of diacylglycerol растает. Введение прозерина вызывает moieties of natural glycerophospholipids by gas-liquid противоположный эффект – снижение содержания мо- chromatography on polar capillary columns // Can. J.

лекулярного кислорода, но увеличивается способность Biochem. 1982. Vol.60, №6. P.638–650.

гомогената печени продуцировать активные формы 16. A method for the gas chromatographic determina кислорода. tion of long and medium chain free fatty acids in serum / 3. Холодовая нагрузка, создаваемая животным в P.Radermacher [et al.] // J. Clin. Chem. Clin. Biochem.

течение 3 часов, приводит к увеличению содержания 1982. Vol.20, №11. P.813–815.

ДК, но к снижению ГП и МДА. Использование анти REFERENCES холинэстеразных средств в условиях низких темпера 1. Apchel V.Ya., Tsygan V.N. Stress i stressoustoy тур способствует снижению содержания ДК, chivost' cheloveka [Stress and stress resistance of a man].

уменьшает выраженность ГП в общих липидах печени, но увеличивает уровень МДА в ткани печени. St. Petersburg;

1999.

2. Vladimirov Yu.A., Archakov A.I. Perekisnoe okisle ЛИТЕРАТУРА nie lipidov v biologicheskikh membranakh [Lipid Peroxi 1. Апчел В.Я., Цыган В.Н. Стресс и стрессоустой- dation in Biological Membranes]. Moscow: Nauka;

1972.

чивость человека. СПб.: ВМА, 1999. 86 с. 3. Dorovskikh V.A. Farmakologicheskaya korrektsiya 2. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное kholodovogo vozdeystviya v eksperimente: avtoreferat dis окисление липидов в биологических мембранах. М.: sertatsii doktora meditsinskikh nauk [Pharmacological cor Наука, 1972. 250 с. rection of cold exposure in the experiment: abstract of 3. Доровских В.А. Фармакологическая коррекция thesis… doctor of medical sciences]. Leningrad;

1987.

холодового воздействия в эксперименте: автореф. дис. 4. Dorovskikh V.A., Tseluyko S.S., Kodintsev V.V., … д-ра мед. наук. Ленинград, 1987. 48 с. Sayapina I.Yu., Klimova N.V., Zrazhevskaya S.G., 4. Эмоксипин в клинике и эксперименте / В.А.До- Zhukovets I.V. Emoksipin v klinike i eksperimente [Emox ровских [и др.]. Благовещенск: АГМА, 2005. 110 с. ipine in clinical and experimental]. Blagoveshchensk:

5. Адаптогены и холодовой стресс: вчера, сегодня, AGMA;

2005.

завтра… / В.А.Доровских [и др.]. Благовещенск: 5. Dorovskikh V.A., Korshunova N.V., Krasavina N.P., АГМА, 2006. 214 с. Simonova N.V., Tikhanov V.I., Simonova N.P. Adaptogeny 6. Зенков Н.К., Меньщикова Е.Б., Шергин С.М. i kholodovoy stress: vchera, segodnya, zavtra… [Adapto Окислительный стресс (диагностика, терапия, профи- gens and cold stress: yesterday, today, tomorrow...].

БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, eskikh M, N-kholinomimetikov i M, N-kholinoblokatorov Blagoveshchensk: AGMA;

2006.

na formirovanie kholodovoy adaptatsii: avtoreferat disser 6. Zenkov N.K., Kandalintseva N.V., Lankin V.Z., Men'shchikova E.B., Prosenko A.E. Fenol'nye bioantiok- tatsii kandidata meditsinskikh nauk [The influence of the sidanty [Phenolic Bioantioxidants]. Novosibirsk: SB central and peripheral M, N-cholinomimetics and M, N RAMS;

2003. cholinergic antagonists on the formation of cold adapta 7. Kruglova O.G., Dorovskikh V.A., Tikhanov V.I., tion: abstract of thesis… candidate of medical sciences].

Kruglova T.G., Bocharnikova I.A., Reshodko D.P. Bl- Leningrad;

1988.

leten' fiziologii i patologii dyhaniy 2011;

40:71–73. 13. Ushakov V.F., Zavalovskaya L.I., Dorovskikh V.A., Bashkatov V.A., Goborov N.D. Problemy severnoy pul' 8. Zenkov N.K., Men'shchikova E.B., Shergin S.M.

Okislitel'ny stress (diagnostika, terapiya, profilaktika) monologii (ot znaniya – k deystviyu) [Problems of Northern [Oxidative stress (diagnosis, therapy, prevention)]. Novosi- рulmonology (from knowledge – to action)]. Surgut:

birsk;

1993. SurGU;

2006.

9. Okovityy S.V., Shulenin S.N., Smirnov A.V. Klinich- 14. Cameron G. Separate FAME cis and trans isomers eskaya farmakologiya antigipoksantov i antioksidantov with DB-23. Separation Times 2001;

14(3):13.

[Clinical pharmacology of antihypoxic agents and antiox- 15. Myher J.J., Kuksis A. Resolution of diacylglycerol idants]. St. Petersburg: FARMindeks;

2005. moieties of natural glycerophospholipids by gas-liquid chromatography on polar capillary columns. Can. J.

10. Simonova N.V., Dorovskikh V.A., Shtarberg M.A.

Blleten' fiziologii i patologii dyhaniy 2011;

40:66–70. Biochem. 1982;

60(6):638–650.

11. Simonova N.V., Dorovskikh V.A., Li O.N., Shtar- 16. Radermacher P., Grote H., Susanto F., Reinauer H.

berg M.A., Simonova N.P. Blleten' fiziologii i patologii A method for the gas chromatographic determination of dyhaniy 2013;

48:76–80. long and medium chain free fatty acids in serum. J. Clin.

12. Tikhanov V.I. Vliyanie tsentral'nykh i periferich- Chem. Clin. Biochem. 1982;

20(11):813–815.

Поступила 23.07. Контактная информация Виктор Иванович Тиханов, кандидат медицинских наук, доцент кафедры фармакологии, Амурская государственная медицинская академия, 675000, г. Благовещенск, ул. Горького, 95.

Е-mail: agma@amur.ru Сorrespondence should be addressed to Viktor I. Tikhanov, MD, PhD, Associate professor of Department of Pharmacology, Amur State Medical Academy, 95 Gor'kogo Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation.

Е-mail: agma@amur.ru БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, УДК 618.344/.36-06:612.646:578.825. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФОРМИРОВАНИЯ СВЯЗИ ЭМБРИОНА С ПЛАЦЕНТОЙ ПРИ ОБОСТРЕНИИ У БЕРЕМЕННОЙ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ М.Т.Луценко, И.А.Андриевская, И.В.Довжикова Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН, 675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, РЕЗЮМЕ nancy ended up with the abortion at the 6-8 weeks. A serotonin-mediated change of the immune response to У 25 беременных с хронической цитомегалови cytomegalovirus antigen was revealed, which was man русной инфекцией в стадии обострения, чья бере ifested in the increase of peripheral circulation of pro менность закончилась медицинским абортом при inflammatory markers TNF, IL-1, IL-4, IFN at the сроке гестации 6-8 недель, изучен нейрогормональ simultaneous decrease of IFN level, which caused a ный фон и иммунный статус, определена морфо local damage of fetoplacental barrier and the metabolic структура плаценты и сосудов эндометрия.

disorder contributing to its structural reconstruction.

Выявлено серотонин-опосредованное изменение While studying placentas the disorder in the formation иммунного ответа на присутствие цитомегалови of embryotroph and cytotrophoblastic elements trans русного антигена, что проявлялось в усилении пе formation into syntrophoblast, the delay in mes риферической циркуляции провоспалительных enchyme differentiation towards the formation of blood маркеров TNF, IL-1, IL-4, IFN при одновремен vessels endothelium were found out. Uterine arteries in ном снижении уровня IFN, что вызывало локаль most cases were spasming, which led to the decrease of ное повреждение фетоплацентарного барьера, systolic ratio parameters in them. The depression of нарушение обменных процессов, способствующих alpha-fetoprotein production was the most important его структурной перестройке. При исследовании cause of the revealed gestation disorders of differentia плацент установлено нарушение формирования эм tion of trophoblast structures and endometrium at re бриотрофа и трансформации цитотрофобластиче activation of cytomegalovirus infection and immune ских элементов в синцитиотрофобласт, задержка response disorders. The obtained results suggest the дифференцировки мезенхимы в сторону образова role of cytomegalovirus infection in the development of ния эндотелия кровеносных сосудов. Маточные ар dystrophic changes of chorion villi, insufficiency of терии в большинстве случаев были спазмированы, uterine blood circulation and the development of the что определяло снижение показателей систоло-диа spontaneous abortion at the early stage of gestation.

столического отношения в них. Важной причиной Key words: cytomegalovirus infection, pregnancy, villi, выявленных гестационных нарушений дифферен alpha-fetoprotein.

цировки структур трофобласта и эндометрия при Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) весьма реактивации цитомегаловирусной инфекции и на распространена среди людей. Инфицирование про рушении иммунного ответа явилось подавление исходит через сперму, слизь канала шейки матки, продукции альфа-фетопротеина. Полученные ре слюну, кровь, грудное молоко. К возрасту 45-50 лет зультаты указывают на роль цитомегаловирусной почти 75% взрослого населения инфицированы цито инфекции в развитии дистрофических изменений мегаловирусом (ЦМВ).

ворсинчатого хориона, недостаточности маточного Особое внимание привлекает ЦМВИ при беремен кровообращения и развития самопроизвольного ности. Как известно, наиболее тяжелые последствия аборта на ранних этапах гестации.

Ключевые слова: цитомегаловирусная инфекция, инфицирования отмечаются в I триместре беременно беременность, ворсинки, -фетопротеин. сти. При заражении плода в III триместре гестации но ворожденный не имеет симптомов инфекции, но в SUMMARY сыворотке его периферической крови обнаруживается MORPHOFUNCTIONAL CHARACTERISTIC IgM [1, 4, 5]. Отсутствие симптомов инфекции при OF PLACENTA AND FETUS CONNECTION рождении еще не означает дальнейшего благополучия.

FORMATION IN EXACERBATION OF При заболевании плода во время беременности, у ре CYTOMEGALOVIRUS INFECTION бенка возникают тяжелые поражения центральной нервной системы. ЦМВИ – одна из причин выкидышей M.T.Lutsenko, I.A.Andrievskaya, I.V.Dovzhikova на ранних сроках гестации. При внутриутробном зара Far Eastern Scientific Center of Physiology and жении погибает до 30% больных детей [2, 5]. Очень Pathology of Respiration of Siberian Branch RAMS, важно знать, как будет развиваться беременность, если 22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, обострение хронической ЦМВИ происходит на ранних Russian Federation сроках гестации.

Целью работы явилось изучение морфофункцио A neuroendocrine profile and immune status as well нального состояния плаценты и сосудов эндометрия as the morphology of placenta and endometrial vessels при сроке 6-8 недель в зависимости от иммунного ста were studied in 25 pregnant women with the exacerba туса и уровня -фетопротеина при различной степени tion of chronic cytomegalovirus infection whose preg БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, выраженности ЦМВИ. Исследование гемодинамики фетоплацентарного ком плекса проводилось с помощью ультразвукового ска Материалы и методы исследования нера Аloka SSD-1700 (Япония), состояние кровотока Обследовано 40 беременных на сроке гестации 6-8 оценивали по А.Н.Стрижакову и соавт. (1996).

недель в возрасте 18-25 лет с хронической ЦМВИ в Строение плаценты изучали на гистологических стадии обострения (основная группа) с титром антител срезах: полутонких, окрашенных толуидиновым 1:800 (n=20) и 1:1600 (n=20). В контрольную группу синим, альциановым синим, пикрофукцином по Ван вошли 20 беременных на тех же сроках гестации без Гизону. ДНК и полисахариды выявляли по Ван Дуйну, патологии. Симптоматически ЦМВИ проявлялась в гликозаминогликаны окрашивали по методу Стидмена, виде острого респираторного заболевания, сопровож- перекиси липидов выявляли по методу Винклера дающегося ринофарингитом. Диагноз обострения Шульце. Препараты изучали с использованием про ЦМВИ устанавливали при комплексном исследовании граммы Bio Vision (США).


периферической крови на наличие IgМ или четырех- Все расчеты производили с использованием про кратного и более нарастания титра антител IgG в пар- граммного пакета Statistica 6.0. Проверку нормально ных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса сти распределения проводили по критерию авидности более 65%, а также ДНК ЦМВ. Исследова- Колмогорова-Смирнова. Проверку гипотезы о стати ния проведены с учетом требований Хельсинкской дек- стической значимости различий двух выборок прово ларации Всемирной ассоциации «Этические принципы дили с помощью t-критерия Стьюдента. Показатели проведения научных медицинских исследований с уча- считали значимыми при р0,05.

стием человека» с поправками 2000 г. и нормативных Результаты исследования и их обсуждение документов «Правила клинической практики в Россий ской Федерации», утвержденных Приказом №266 от Вследствие обострения хронической ЦМВИ в ор 19.06.03 МЗ и СР РФ. ганизме беременной происходили следующие взаимо Верификация ЦМВ, определение типоспецифиче- связанные события:

ских антител, индекса авидности осуществлялись ме- 1. изменение иммунного статуса;

тодами ИФА на спектрофотометре Stat Fax 2100 2. увеличение периферической циркуляции серото (США) c использованием тест-систем ЗАО «Вектор- нина;

Бест» (Новосибирск), выявление ДНК ЦМВ методом 3. снижение уровня маточного кровоснабжения;

полимеразной цепной реакции проводили на аппарате 4. подавление синтеза плацентарных гормонов.

ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-техноло- Изменение иммунного ответа у беременных на при гия» (Москва). сутствие ЦМВ-антигена характеризовалось актива Содержание в сыворотке крови IL-2, IFN и IFN цией NK-лимфоцитов (CD16+) и усиленной оценивали с помощью наборов реактивов ООО «Про- продукцией иммунокомпетентными клетками каскада теиновый контур» (Санкт-Петербург), уровень TNF – провоспалительных цитокинов TNF, IL-1, IL-4, IFN с использованием наборов реактивов ООО «Цитокин» при альфа-интерферонодефиците, что поддерживало (Санкт-Петербург). Уровень IL-1 и IL-4 в сыворотке хронизацию инфекционно-воспалительного процесса крови определяли с помощью наборов реактивов ЗАО (табл.). Причем наиболее выраженные изменения кле «Вектор-Бест» (Новосибирск). Субпопуляцию NK- точного иммунитета были характерны для основной лимфоцитов (CD16+) изучали на проточном цитоф- группы беременных с титром антител IgG к ЦМВ люориметре Beckman Coulter Epics XL-MCL (США). 1:1600.

Таблица Показатели клеточного иммунитета, серотонина у беременных при хронической ЦМВИ в стадии обострения (M±m) Обострение ЦМВИ Показатели Контроль титр 1:800 титр 1: NK-лимфоциты (CD16+), % 13,10±0,47*** 18,50±0,80** 10,00±0, IL-1, пг/мл 20,0±0,9** 80,0±1,2*** 14,7±0, IL-2, пг/мл 5,0±0,7*** 12,0±0,5*** 38,5±0, IL-4, пг/мл 30,0±1,4* 41,0±1,9*** 25,0±1, TNF, пг/мл 95,5±2,0*** 200,0±12,0*** 20,0±1, IFN, пг/мл 75,5±2,3*** 35,0±1,7*** 46,0±1, IFN, пг/мл 150,6±2,5*** 390,5±18*** 139,8±2, Серотонин, мкмоль/мл 1,72±0,04*** 1,11±0,03** 0,86±0, Примечание: * – р0,05, ** – р0,01, *** – р0,001 – уровень статистической значимости различий показателей по сравнению с контрольной группой.

БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, Следует указать и на то, что при ЦМВИ усилива- внедряется в толщу слизистой оболочки матки. Трофо ется выработка серотонина, который оказывает регуля- бласт продолжает разрастаться. В процессе роста тро торное влияние на лимфоидные органы и фобласта разрушаются мелкие капилляры слизистой иммунокомпетентные клетки, повышая выработку оболочки матки, и материнская кровь свободно изли провоспалительных цитокинов [3]. Более того, высо- вается в просвет лакун (рис. 2а).

кий уровень серотонина (табл.), который определялся Железы слизистой активно выделяют секрет, не в крови беременных с ЦМВИ и соответствовал степени обходимый для питания зародыша (рис. 2б). Так про выраженности иммунного ответа, способствовал нару- исходит формирование эмбриотрофа (рис. 2в).

шению маточного кровообращения за счет увеличения При обострении хронической ЦМВИ на ранних сократительной функции гладкой мускулатуры маточ- сроках образование эмбриотрофа становилось недоста ных артерий [7], что проявлялось в росте систоло-диа- точным, что подтверждалось формированием неболь столического отношения до 2,80±0,08 при титре 1:1600 ших кровяных лакун и лакун с тканевой жидкостью, (р0,001) и до 2,20±0,08 при титре 1:800 (р0,05), в расположенных отдельно и на большом расстоянии контроле данный показатель составил 1,80±0,03. Ульт- друг от друга (рис. 2г). Более того, выявлялось недо развуковые исследования подтверждались гистологи- статочное поступление маточной крови в сформиро чески – на препаратах выявлялся спазм гладкой ванные лакуны (рис. 3), что приводило к снижению мускулатуры большей части маточных сосудов, что поступления кислорода и питательных веществ к заро препятствовало достаточному кровоснабжению деци- дышу.

дуальной оболочки и доставке крови к месту имплан- Одной из вероятных причин неполной гравидарной тации зародыша (рис. 1). трансформации эпителия и сосудов слизистой обо лочки матки, а также дифференцировки мезенхимы ворсин хориона в кровеносные сосуды явилось сниже ние выработки -фетопротеина [6, 8]. В перифериче ской крови беременных основной группы снижение показателей гормона происходило до 5,00±0,21 МЕ/мл при титре 1:1600 (р0,001) и до 10,00±0,87 МЕ/мл при титре 1:800 (р0,01), в контрольной группе содержание в крови -фетопротеина составило 15,2±1,2 МЕ/мл.

При исследовании морфоструктуры плацент от этих же женщин отмечалось нарушение дифференци ровки мезенхимы в сторону образования капилляров.

На одну ворсинку приходилось не более 1-2 сосудов, расположенных преимущественно в средней и цент ральной зонах. Часто встречались безсосудистые вор синки (рис. 4а) с элементами структурной Рис. 1. Маточная артерия при сроке 6-7 недель. дезорганизации трофобласта (рис. 4б), вплоть до их ги ЦМВИ в стадии обострения (титр антител IgG к ЦМВ бели (рис. 4в). Кроме того, выявлялось нарушение диф 1:1600). Маточная артерия спазмирована. Окраска аль- ференцировки трофобласта на синцитиотрофобласт и циановым синим по Стидмену. Увеличение: 1040. цитотрофобласт (рис. 5б), по сравнению с контролем (рис. 5а). Встречались цитотрофобластические клетки Как известно, оплодотворенная яйцеклетка, пройдя с элементами структурной дезорганизации ядра и ва по маточной трубе, попадает на слизистую оболочку куолизацией цитоплазмы. В синцитиотрофобласте об матки, которая на 14-15 день после начала предыду наруживались ядра неправильной формы, местами с щего менструального цикла становится наиболее бла элементами инвагинации. В центральной зоне строма гоприятной за счет гестационных изменений для рыхлая, местами отечная. Встречались единичные принятия оплодотворенной яйцеклетки. Попав на сли фибробласты, наблюдалось увеличение количества зистую оболочку матки, эмбрион еще покрыт защит макрофагов. Щеточная кайма представлена истончен ной оболочкой (zona pellucida), которая не позволяет ными и укороченными микроворсинками, что ослаб зародышу на первых порах внедряться в толщу слизи ляло обменные процессы между кровью матери и стой оболочки матки. Источником питания в это время плода. В тоже время, в наружном покрове ворсинок вы для зародыша становится секрет, вырабатываемый же являлась активная реакция на перекиси жирных кислот лезами слизистой оболочки матки. За это время заро (рис. 4г).

дыш проходит очень сложный путь – превращается из Таким образом, морфологические изменения фето многоклеточного узелка в бластодермический пузырек.

плацентарного комплекса при обострении хронической Zona pellucida начинает рассасываться, а трофобласти ЦМВИ на ранних сроках гестации выражаются непол ческие клетки вступают в контакт с клетками слизи ной дифференцировкой эпителия слизистой оболочки стой оболочки матки. Освободившиеся от pellucida матки. Недостаточность децидуализации приводит к клетки трофобласта прикрепляются к клеткам слизи слабой трофобластической инвазии в прилежащий эн стой оболочки матки и начинают внедряться, разрушая дометрий, что вызывает уменьшение объема геста децидуальные клетки. На 8-9 день зародыш полностью ционных изменений в маточно-плацентарных артериях БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, и задержку формирования эмбриотрофа. Подобные точности -фетопротеина, что усиливает воспалитель морфологические изменения характеризуются наруше- ные реакции, вызывает спазм маточно-плацентарных нием иммунного ответа беременной, которое сопро- сосудов, приводя к глубоким расстройствам микроцир вождается ростом показателей провоспалительных куляции и развитию угрозы раннего самопроизволь цитокинов (TNF, IL-1, IFN), серотонина и недоста- ного аборта.

в a б Рис. 2. Слизистая оболочка матки беременной при сроке 6-7 недель.

а – разрушение капилляров и формирование лакун. Контроль. Окраска толуидиновым синим. Обработка по программе Bio Vision. Увеличение:

1040.

б – высокая секретирующая способность эпителия слизистой матки.

Контроль. Окраска толуидиновым синим. Обработка по программе Bio Vi sion. Увеличение: 1090.

в – выделение тканевой жидкости. Контроль. Окраска толуидиновым синим. Увеличение: 10100.

г – формирование кровеносных сосудов () и лакун () из тканевой жид кости, расположенных отдельно и на большом расстоянии друг от друга.

ЦМВИ в стадии обострения (титр антител IgG к ЦМВ 1:1600). Окраска то луидиновым синим. Увеличение: 1540.

г Рис. 3. Слизистая оболочка матки беременной при сроке 6-7 недель. ЦМВИ в стадии обострения (титр анти тел IgG к ЦМВ 1:1600). Уменьшение кровоснабжения сли зистой оболочки матки и формирования эмбриотрофа.


Обработка по программе Bio Vision. Увеличение: 1040.

БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, в a б Рис. 4. Плацента беременной при сроке 6-7 недель. ЦМВИ в стадии об острения (титр антител IgG к ЦМВ 1:1600).

а – ворсинка хориона с развитой мезенхимальной основой, не имея признаков формирования сосудов. Окраска толуидиновым синим. Уве личение: 1040.

б – ворсинка с задержкой дифференцировки трофобластических эле ментов. Реакция по Ван Дуйну. Увеличение: 1040.

в – гибель ворсинки. Реакция по Ван Дуйну. Увеличение: 1040.

г – активная реакция на перекиси жирных кислот в наружной мембране синцитиотрофобласта ворсинки. Реакция по Винклеру-Шульце. Увеличе ние: 1040.

г б a Рис. 5. Плацента беременной при сроке 7-8 недель.

а – ЦМВИ в стадии обострения (титр антител IgG к ЦМВ 1:1600). Задержка дифференцировки структурных элементов трофобласта. Полутонкие срезы. Окраска толуидиновым синим. Увеличение: 1590.

б – контроль. Дифференцировка трофобласта на синцитиотрофобласт и цитотрофобласт. Полутонкие срезы.

Окраска толуидиновым синим. Увеличение 1590.

пес-вирусной инфекции во время беременности / ЛИТЕРАТУРА М.Т.Луценко [и др.]. Новосибирск-Благовещенск, 2010.

1. Ковалева Т.А. Факторы риска инфицирования ци 245 с.

томегаловирусом плода, новорожденных и детей пер 4. Луценко М.Т. Влияние цитомегаловирусной ин вого года жизни // Сиб. мед. журн. 1998. Т.13, №1-2.

фекции на характер течения беременности. Благове С.36–38.

щенск, 2012. 173 с.

2. Лещинская И.В., Мартыненко И.Н., Демидова 5. Клинико-иммунологические особенности актив С.А. Поражение центральной нервной системы у детей ной цитомегаловирусной и смешанной с ней инфекции при цитомегалии // Вопр. охр. мат. и дет. 1985. №5.

у детей грудного возраста / С.В.Мальцев [и др.] // Ка С.61–65.

занский мед. журн. 1998. Т.79, №6. С.411–415.

3. Фетоплацентарная система при обострении гер 6. Молдогазиева Н.Т., Терентьев А.А. Альфа-фето БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, Solov'eva A.S. Fetoplatsentarnaya sistema pri obostrenii протеин и факторы роста. Структурно-функциональ gerpes-virusnoy infektsii vo vremya beremennosti [Feto ные взаимоотношения и аналогии // Успехи биол.

химии. 2006. Т.46. С.99–148. placental system at the exacerbation of herpesvirus infec 7. Приходько В.Б. Маточно-плацентарное кровооб- tion during pregnancy]. Novosibirsk-Blagoveshchensk;

ращение у беременных с герпес-вирусной инфекцией 2010.

4. Lutsenko M.T. Vliyanie tsitomegalovirusnoy infektsii // Бюл. физиол. и патол. дыхания. 2008. Вып.30. С.29– na kharakter techeniya beremennosti [The influence of cy 32.

8. Строева О.Г., Панова И.Г. Особенности клеточ- tomegalovirus infection on the character of gestation ной пролиферации в период роста и становления спе- course]. Blagoveshchensk;

2012.

цифической дифференцировки пигментного эпителия 5. Mal'tsev S.V., Ozhegov A.M., Myakisheva L.S., Shakirova E.M. Kazanskiy meditsinskiy zhurnal 1998;

сетчатки (на модели животных) // Рос. педиатр. офталь мол. 2007. № 4. С.53–55. 79(6):411–415.

6. Moldogazieva N.T., Terent'ev A.A. Uspekhi bio REFERENCES logicheskoy khimii 2006;

46:99–148.

1. Kovaleva T.A. Sibirskiy meditsinskiy zhurnal 1998;

7. Prikhodko V.B. Blleten' fiziologii i patologii dy 13(1-2):36–38. haniy 2008;

30:29–32.

2. Leshchinskaya I.V., Martynenko I.N., Demidova 8. Stroeva O.G., Panova I.G. Rossiyskaya pediatrich S.A. Voprosy okhrany materinstva i detstva 1985;

5:61–65. eskaya oftal'mologiya 2007;

4:53–55.

3. Lutsenko M.T., Andrievskaya I.A., Dovzhikova I.V., Поступила 20.09. Контактная информация Михаил Тимофеевич Луценко, доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН, руководитель лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ, Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН, 675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22.

E-mail: Lucenkomt@mail.ru Сorrespondence should be addressed to Mikhail T. Lutsenko, MD, PhD, Professor, Academician RAMS, Head of Laboratory of Mechanisms of Etiopathogenesis and Recovery Processes of the Respiratory System at Non-Specific Lung Diseases, Far Eastern Scientific Center of Physiology and Pathology of Respiration SB RAMS, 22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation.

E-mail: Lucenkomt@mail.ru БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, УДК 618.3-06:612.111.12:578.825. ХАРАКТЕРИСТИКА ОКСИГЕНАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА В ЭРИТРОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БЕРЕМЕННЫХ ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ В ПЕРИОД ГЕСТАЦИИ О.Л.Кутепова Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН, 675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, SUMMARY РЕЗЮМЕ В работе представлены данные, отражающие со- THE CHARACTERISTIC OF HEMOGLOBIN стояние процессов оксигенации гемоглобина и при- OXYGENATION IN ERYTHROCYTES OF чины их нарушения в эритроцитах PERIPHERAL BLOOD OF PREGNANT WOMEN периферической крови 50 беременных с хрониче- AT CYTOMEGALOVIRUS INFECTION ской цитомегаловирусной инфекцией (ЦМВИ) в EXACERBATION DURING GESTATION стадии обострения на сроке гестации 20-22 недели O.L.Kutepova (основная группа). Контрольную группу составили Far Eastern Scientific Center of Physiology and 20 здоровых беременных на тех же сроках гестации.

Pathology of Respiration of Siberian Branch RAMS, При биохимическом исследовании эритроцитов пе 22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, риферической крови беременных основной группы 675000, Russian Federation выявлено изменение кислородсвязывающих свойств гемоглобина, что проявлялось в уменьше- The work presents the data which reflect the state нии концентрации оксигемоглобина до 95,20±0,45% of processes of hemoglobin oxygenation and the reasons (р0,05) при титре антител IgG к ЦМВ 1:800 и до of their damage in erythrocytes of the peripheral blood 90,15±0,35% (р0,001) при титре антител IgG к of 50 pregnant women with the exacerbation of chronic ЦМВ 1:1600 в сравнении с контрольной группой cytomegalovirus infection (CMVI) at 20-22 weeks of (98,00±0,65%). Данный факт явился следствием по- gestation (the main group). The control group consisted вышенного уровня аллостерического регулятора of 20 healthy pregnant women at the same stages of ges сродства гемоглобина к кислороду 2,3-дифосфогли- tation. Under biochemical research of erythrocytes of церата в основной группе до 5,96±0,4 мкмоль/мл the peripheral blood of pregnant women of the main (р0,01) при титре антител IgG к ЦМВ 1:800 и до group oxygen-binding hemoglobin properties were 6,7±0,07 мкмоль/мл (р0,001) при титре антител IgG found to be changed, which was revealed through the к ЦМВ 1:1600 (в контроле – 4,90±0,15 мкмоль/мл). decrease of oxyhemoglobin concentration till В периферической крови беременных основной 95.20±0.45% (р0.05) at antibody titer of IgG to CMV группы также отмечалось накопление неорганиче- 1:800 and till 90.15±0.35% (р0.001) at antibody titer ских анионов, снижающих рН крови до 7,32±0,03 of IgG to CMV 1:1600 in comparison with the control (р0,05) при титре антител IgG к ЦМВ 1:800 и до group (98.00±0.65%). This fact was the result of the in 7,25±0,02 (р0,01) при титре антител IgG к ЦМВ creased level of allosteric regulator of hemoglobin sen 1:1600 (в контроле – 7,40±0,07), что повышало веро- sitivity to oxygen of 2.3-diphosphoglycerate in the main ятность образования комплекса гема с 2,3-дифосфо- group till 5.96±0.4 mkmole/ml (р0.01) at antibody titer глицератом и снижало связывание гемоглобина с of IgG to CMV 1:800 and till 6.7±0.07 mkmole/ml кислородом. На этом фоне выявлялся рост показа- (р0.001) at antibody titer of IgG to CMV 1:1600 (in телей метгемоглобина до 0,90±0,03% (р0,05) при the control group it was 4.90±0.15 mkmole/ml). In the титре антител IgG к ЦМВ 1:800 и до 1,50±0,04% peripheral blood of pregnant women of the main group (р0,001) при титре антител IgG к ЦМВ 1:1600 (в there was also an accumulation of non-organic anions контроле – 0,60±0,015%) и снижение антиокисли- decreasing pH of the blood till 7.32±0.03 (р0.05) at an тельной функции глутатионпероксидазы до tibody titer of IgG CMV 1:800 and till 7.25±0. 9,60±0,13 Ед/гHb (р0,01) при титре антител IgG к (р0.01) at antibody titer of IgG to CMV 1:1600 (in the ЦМВ 1:800 и до 6,50±0,15 Ед/гHb (р0,001) при control it was 7.40±0.07), which increased the probabil титре антител IgG к ЦМВ 1:1600 (в контроле – ity of the formation of heme complex with 2.3-diphos 15,70±0,17 Ед/гHb). Полученные результаты указы- phoglycerate and worsened the binding of hemoglobin вают на важную роль активной ЦМВИ в развитии with oxygen. Against this background there was the нарушений процессов оксигенации гемоглобина и growth of methemoglobin till 0.90±0.03% (р0.05) at механизмов их регуляции в эритроцитах перифери- antibody titer of IgG to CMV 1:800 and till 1.50±0.04% ческой крови беременных, что создавало угрозу (р0.001) at antibody titer of IgG to CMV 1:1600 (in формирования гемической гипоксии, снижая, тем the control group it was 0.60±0.015%) and the decrease самым, передачу кислорода в кровь плода. of an antioxidant function of glutathione peroxidase till Ключевые слова: оксигемоглобин, 2,3-дифосфогли- 9.60±0.13 Un/rHb (р0.01) at antibody titer of IgG to церат, цитомегаловирус, гестация. CMV 1:800 and till 6.50±0.15 Un/гHb (р0.001) at an БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, tibody titer of IgG to CMV 1:1600 (in the control group хронической цитомегаловирусной инфекцией (ЦМВИ) it was 15.70±0.17 Un/гHb). The obtained data show an в стадии обострения.

important role of active CMVI in the development of Материалы и методы исследования disturbances of hemoglobin oxygenation processes and Обследовано 50 беременных на сроке гестации 20 mechanisms of their regulation in erythrocytes of the 22 недели в возрасте 18-25 лет с хронической ЦМВИ в peripheral blood of pregnant women, which could re стадии обострения (основная группа), и 20 беремен sult in the formation of hemic hypoxia decreasing the ных на тех же сроках гестации без патологии (конт transportation of oxygen into the fetus blood.

рольная группа). Симптоматически ЦМВИ Key words: oxyhemoglobin, 2.3-diphosphoglycerate, проявлялась в виде острого респираторного заболева cytomegalovirus, gestation period.

ния, сопровождающегося ринофарингитом. Клиниче Сродство гемоглобина к кислороду определяет ский диагноз – обострение ЦМВИ – устанавливали диффузию кислорода из альвеолярного воздуха в при комплексном исследовании периферической крови кровь, а затем на уровне капиллярной крови [3, 11]. на наличие IgМ или четырехкратного и более нараста Свойство гемоглобина обратимо связывать кислород ния титра антител IgG в парных сыворотках в дина является частным случаем общей закономерности мике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а взаимодействия протеинов с лигандами [9]. Субъеди- также ДНК ЦМВ. Исследования проводились с учетом ницы гемоглобина внутри тетрамера при переходе от требований Хельсинкской декларации Всемирной ме сильного (R) до слабого (T) взаимодействия Fe2+- гема дицинской ассоциации «Этические принципы прове с гистидином, обусловливают кооперативные свойства, дения научных исследований с учетом человека» с описываемые S-образной кривой деоксигенации. Такая поправками 2000 г. и «Правилами клинической прак ее форма обеспечивает процессы транспорта кисло- тики в Российской Федерации», утвержденными при рода кровью, максимально облегчая оксигенацию при казом МЗ РФ№266 от 19.06.2003 г.

относительно низких рО2, и деоксигенацию при высо Верификация ЦМВ, определение типоспецифиче ких рО2, улучшая доставку требуемых количеств кис ских антител, индекса авидности осуществлялись ме лорода в ткани при сравнительно малых величинах тодами ИФА на спектрофотометре Stat-Fax кровотока [5, 12].

(США) c использованием тест-систем ЗАО «Вектор Механизм кооперативности основан на стереохи Бест» (Новосибирск), выявление ДНК ЦМВ методом мической перестройке контактов субъединиц на мо полимеразной цепной реакции проводили на аппарате бильной аллостерической поверхности в зависимости ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-техноло от степени оксигенации. Аллостерические регуляторы гия» (Москва). Содержание 2,3-ДФГ и АТФ в эритро – 2,3-дифосфоглицерат (2,3-ДФГ), Cl-, H+, связываясь цитах определяли по методу И.С.Лугановой, с молекулой гемоглобина в Т-состоянии и облегчая, со М.Н.Блиновой [7]. Содержание оксигемоглобина оце ответственно, высвобождение кислорода, проявляют нивали по прописи Эвелина и Мэллой [4]. Кислотно свои эффекты в субэквивалентных количествах, то есть щелочное равновесие и газы крови определяли на намного меньших, чем гемоглобина [8]. Так, частой биохимическом анализаторе IRMA TruPoint (США).

причиной снижения влияния 2,3-ДФГ на сродство ге Определение метгемоглобина выполнялось спектрофо моглобина к кислороду является повышение уровня тометрическим методом по М.С.Кушаковскому [6]. Со неорганических анионов, уменьшающих вне- и внут держание глутатионпероксидазы определяли риклеточную рН [10]. По-видимому, они конкурируют реагентами «Sentinel Diagnostics» (Италия).

с органическими фосфатами за центры связывания в Все расчеты производились с использованием про молекуле гемоглобина, способствуя изменению срод граммного пакета Statistica 6.0. Проверку нормально ства гемоглобина к кислороду. Другим фактором, вы сти распределения проводили по критерию зывающим изменение кислородсвязывающих свойств Колмогорова-Смирнова. Проверку гипотезы о стати гемоглобина через увеличение мембранной проницае стической значимости различий двух выборок прово мости, усиливающей сдвиг прооксидантно-антиокси дили с помощью t-критерия Стьюдента. Показатели дантного состояния эритроцитов, является вирус считали значимыми при р0,05.

герпеса [1, 2].

Результаты исследования и их обсуждение В связи с этим, особый интерес представляет изуче ние взаимодействия 2,3-ДФГ с гемической группой Анализ полученных результатов исследования по дезоксигемоглобина и его влияния на процессы окси- казал, что у беременных основной группы наблюда генации при действии на организм беременной таких лись изменения кислородсвязывающих свойств факторов, как антигены цитомегаловируса (ЦМВ), гемоглобина, которые проявлялись в уменьшении кон обладающего более выраженным цитотоксическим и центрации оксигемоглобина в эритроцитах перифери цитодеструктивным действием по сравнению с виру- ческой крови до 95,20±0,45% (р0,05) при титре сом простого герпеса. антител IgG к ЦМВ 1:800, и до 90,15±0,35% (р0,001) Целью исследования явилось изучение процессов – при титре антител IgG к ЦМВ 1:1600 (в контроле оксигенации гемоглобина и механизмов регуляции 98,00±0,65%).

сродства к кислороду в эритроцитах периферической Нарушение кислородсвязывающих свойств гемо крови беременных на сроке гестации 20-22 недели с глобина можно объяснить увеличением концентрации БЮЛЛЕТЕНЬ Выпуск 50, внутриэритроцитарного 2,3-ДФГ, эффект которого на кислородтранспортных свойств гемоглобина эритро облегченное высвобождение кислорода реализуется цитов периферической крови беременных создавало только при субэквивалентных количествах, то есть, угрозу формирования гемической гипоксии, снижая, когда его количество меньше, чем гемоглобина. Более тем самым, передачу кислорода в кровь плода.

того, 2,3-ДФГ имеет большее сродство к дезоксигемог ЛИТЕРАТУРА лобину, чем кислород, что позволяет предполагать его 1. Андриевская И.А. Оценка дыхательной активно конкурирование за соответствующие участки на моле сти крови матерей и новорожденных в условиях гер кулах гемоглобина при изменении условий внутренней пес-вирусной инфекции // Бюл. физиол. и патол.

среды эритроидной клетки.

дыхания. 2007. Вып. 24. С.63–65.

Следовательно, наблюдаемый прогрессивный рост 2. Андриевская И.А., Луценко М.Т. Диагностика ре показателей 2,3-ДФГ, который при титре антител IgG зистентности мембран эритроцитов к окислительному к ЦМВ 1:800 составил 5,96±0,4 мкмоль/мл (р0,01), и стрессу у беременных с герпесной патологией // Бюл.

при титре антител IgG к ЦМВ 1:1600 – 6,7±0, физиол. и патол. дыхания. 2009. Вып.33. С.21–24.

мкмоль/мл (р0,001), при контрольных значениях 3. Борисюк М.В. Особенности регуляции кислород 4,90±0,15 мкмоль/мл, лимитировал возможность пол связывающих свойств крови в процессе ее циркуляции ноценного присоединения кислорода к гемоглобину, // Успехи физиол. наук. 1984. Т.15, №2. С.3–26.

что способствовало лишь частичной его оксигенации.

4. Биохимические методы исследования в клинике:

На изменение гем-глобиновых связей, а, следова справочник / под ред. А.А.Покровского. М.: Медицина, тельно, и увеличение взаимодействия гема с 2,3-ДФГ, 1969. 652 с.

указывало снижение рН крови беременных, которое 5. Галенко-Ярошевский П.А., Гацура В.В. Экспери при титре антител IgG к ЦМВ 1:800 составило ментальные аспекты оптимизации фармакотерапии 7,32±0,03 (р0,05), а при титре антител IgG к ЦМВ острой ишемии миокарда. М.: Медицина, 2000. 383 с 1:1600 достоверно снижалось до 7,25±0,02 (р0,01), 6. Кушаковский М.С. Клинические формы повреж при контроле 7,40±0,07.

дения гемоглобина. Л.: Медицина, 1968. 324 с.

Следует упомянуть и об участии системы глута 7. Луганова И.С., Блинова М.Н. Определение 2,3 тиона в модификации свойств гемоглобина через реак ДФГ неэнзиматическим методом и содержания АТФ в ции ферментативного восстановления трипептида.

эритроцитах больных хроническим лимфолейкозом // Одной из таких является глутатионпероксидаза, кото Лаб. дело. 1975. №11. С.625–654.

рая нейтрализует пероксид водорода, образующийся 8. Сторожок С.А., Санников А.Г., Захаров Ю.М. Мо при восстановлении окисленного глутатиона и метге лекулярная структура мембран эритроцитов и их меха моглобина. Снижение ее активности усиливает окис нические свойства. Тюмень, 1997. 140 с.

лительный стресс в эритроидной клетке, что также 9. Hsia C.C.W. Mechanisms of disease: Respiratory изменяет конформационное состояние гемоглобина.

function of hemoglobin // N. Engl. J. Med. 1998. Vol.338, Доказательством вышеизложенного явилось выявляе №4. Р.239–247.

мое снижение концентрации внутриэритроцитарной 10. Oxygen affinity of hemoglobin and red cell acid глутатионпероксидазы до 9,60±0,13 Ед/гHb (р0,01) base status / M.Rorth, P.Astrup (eds.). Copenhagen:

при титре антител IgG к ЦМВ 1:800, и до 6,50±0, Munksgaard, New York: Academic Press, 1972. 832 р.

Ед/гHb (р0,001) при титре антител IgG к ЦМВ 1: 11. Samaja M. Blood gas transport at high altitude // (в контроле 15,70±0,17 Ед/гHb), что приводило к на Respiration. 1997. Vol.64, №6. Р.422–428.

коплению внутриклеточного пероксида водорода, вы 12. Oxygen transport in blood at high altitude: role of зывающего денатурацию белковой субъединицы the hemoglobin-oxygen affinity and impact of the phenom гемоглобина с образованием метгемоглобина. Его уро ena related to hemoglobin allosterism and red cell function вень в эритроцитах периферической крови беременных / M.Samaja [et al.] // Eur. J. Appl. Physiol. 2003. Vol.90, основной группы достоверно увеличивался до №3-4. Р.351–359.

0,90±0,03% (р0,05) при титре антител IgG к ЦМВ 1:800, и до 1,50±0,04% (р0,001) при титре антител IgG REFERENCES к ЦМВ 1:1600 (в контроле 0,60±0,015%).

1. Andrievskaya I.A. Blleten' fiziologii i patologii dy Таким образом, на основании полученных резуль haniy 2007;

24:63–65.

татов исследования можно заключить, что хроническая 2. Andrievskaya I.A., Lutsenko М.Т. Blleten' fiziologii ЦМВИ в стадии обострения становится патогенетиче i patologii dyhaniy 2009;

33:21–24.

ски значимым фактором, влияющим на характер про 3. Borisyuk M.V. Uspekhi fiziologicheskikh nauk 1984;



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.