авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |

«ИД «АБВ-пресс» представляет Сепсис в торакоабдоминальной онкохирургии р Формат книги: 170 x 220 мм. ...»

-- [ Страница 4 ] --

89(6):1359–70. chemotherapy and immunotherapy, without 11. Shenkier T.N., Blay J.Y., O’Neill B.P. et al. 23. Olson J.J., Blakeley J.O., Grossman S.A., brain irradiation, in newly diagnosed patients Primary CNS lymphoma of T-cell origin: Weingart J., Rashid A., Supko J. et al. with primary CNS lymphoma: Results of A descriptive analysis from the international Differences in the distribution of CALGB 50202. Blood 2010;

abstr. 763.

primary CNS lymphoma collaborative group. methotrexate into high grade gliomas 34. Angelov L., Doolittle N.D., Kraemer D.F.

J Clin Oncol 2005;

23(10):2233–9. following intravenous administration, as et al. Blood-brain barrier disruption and intra 12. Bashir R., Freedman A., Harris N. et al. monitored by microdialysis, are associated arterial methotrexate-based therapy for newly Immunophenotypic profile of CNS with blood brain barrier integrity. Proc Am diagnosed primary CNS lymphoma: A multi lymphoma: A review of eighteen cases. Soc Clin Oncol 2006;

24(Suppl):1548. institutional experience. J Clin Oncol J Neurooncol 1989;

7:249–54. 24. Ferreri A.J.M., Guerra E., Regazzi M. 2009;

27(21):3503–9.

13. Bashir R., McManus B., Cunningham C., Area under the curve of methotrexate and 35. Doolittle N.D., Kraemer D.F., Lacy C.

Wiesenberger D. and Hochberg F. creatinine clearance are outcome- et al. Enhanced Delivery of Rituximab In Detection of Eber-1 RNA in primary determining factors in primary CNS Combination with Methotrexate-Based brain lymphomas in immunocompetent lymphomas. Br J Cancer 2004;

90:353–8. Blood-Brain Barrier Disruption for Patients and immunocompromised patients 25. Ferreri A.J., Reni M., Pasini F. et al. with Newly Diagnosed Primary CNS Journal of neuro-oncology 1994;

A multicenter study of treatment of primary Lymphoma Blood 2010;

abstr. 2792.

20:47–53. CNS lymphoma. Neurology 36. Soussain C., Hoang-Xuan K., 14. Levine A.M. Acquired 2002;

58(10):1513–20. Taillandier L. et al. Intensive chemotherapy immunodeficiency syndrome-related 26. DeAngelis L.M., Seiferheld W., followed by hematopoietic stem-cell rescue lymphoma. Blood 1992 Jul 1;

80(1):8–20. Schold S.C., Fisher B., Schultz C.J.;

for refractory and recurrent primary CNS 15. Fine H.A., Mayer R.J. Primary central Radiation Therapy Oncology Group Study and intraocular lymphoma: Societe francaise nervous system lymphoma. Ann Intern 93-10. Combination chemotherapy and de greffe de moelle osseuse-therapie Med 1993;

119:1093–1104. radiotherapy for primary central nervous cellulaire. J Clin Oncol 2008;

26(15):2512–8.

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ Характеристика перестроек 11q23 (MLL) у детей ’ первого года жизни с острым лимфобластным лейкозом Г.А. Цаур1,2, А.М. Попов1,2, О.В. Алейникова3, Э.Г. Бойченко4, Т.Ю. Вержбицкая1,2, Е.В. Волочник3, А.С. Иванова1,2, О.В. Каленник5, С.Ю. Ковалев6, К.Л. Кондратчик7, А.М. Кустанович3, Е.C. Лапотентова3, Д.В. Литвинов8, И.С. Мартынкевич9, Н.В. Мякова8, Т.В. Наседкина5, В.А. Овсепян10, Ю.В. Ольшанская8, О.М. Плеханова1, А.В. Попа11, Т.О. Ригер1,2, Л.И. Савельев1,2,11, О.В. Стренева1,2, М.В. Стригалева1, И.В. Шмунк12, Е.В. Шориков1,2, Л.Г. Фечина1, ГУЗ Областная детская клиническая больница № 1, Екатеринбург;

ГУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург;

ГУ Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии, Минск;

ГУЗ Детская городская больница № 1, Санкт-Петербург;

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва;

ФГАОУ ВПО Уральский федеральный университет имени первого Президента России Б.Н. Ельцина, Екатеринбург;

Морозовская детская городская клиническая больница, Москва;

ФГБУ Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздравсоцразвития России, Москва;

ФГУ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства, Санкт-Петербург;

ФГУ Кировский НИИ гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства;

ГОУ ВПО Уральская государственная медицинская академия, Екатеринбург;

ОГУП Челябинская областная станция переливания крови Контакты: Григорий Анатольевич Цаур tsaur@mail.ru Целью данной работы являлась характеристика перестроек 11q23 (MLL) у детей первого года жизни с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), включая частоту их выявления, взаимосвязь с различными иммунологическими вариантами О ЛЛ, а также опре деление структуры химерных транскриптов у пациентов исследуемой группы. Для этого нами обследовано 117 пациентов с О ЛЛ без синдрома Дауна в возрасте от 1 до 365 дней. Перестройки 11q23 (ML были выявлены у 74 (63,2 %) пациентов. В этой груп L) пе преобладала транслокация t(4;

11)(q21;

q23)/MLL-AF4 — 63,5 % случаев, реже встречались t(11;

19)(q23;

p13)/MLL-MLLT1 — 18,9 % случаев, t(10;

11)(p12;

q23)/MLL-MLLT10 и t(1;

11)(p32;

q23)/MLL-EPS15 — по 6,8 % случаев;

t(9;

11)(p22;

q23)/MLL MLLT3 — в 2,7 %. У пациентов младше 6 мес перестройки 11q23 (ML L) были выявлены достоверно чаще, чем у пациентов в возрасте 6–12 мес — 84,0 % и 47,8 % случаев соответственно (р 0,001). BI-вариант ОЛЛ статистически значимо чаще, а BII-ОЛЛ значительно реже встречались у пациентов с наличием аномалий 11q23 (ML по сравнению с теми, у кого эти транс L) локации не были выявлены (p 0,001 в обоих случаях). У 26 пациентов с различными перестройками гена ML L было проведено определение структуры химерного транскрипта. В зависимости от локализации точки слияния в гене ML L и генах-партнерах выявлено 7 вариантов химерного транскрипта MLL-AF4, 3 варианта MLL-MLLT1, 2 варианта MLL-EPS15. В 14 (53,8 %) слу чаях точка слияния располагалась в 11-м экзоне гена MLL.

Ключевые слова: острый лимфобластный лейкоз, дети первого года жизни, транслокации района 11q23, перестройки гена MLL Detection of 11q23 (MLL) rearrangements in infant acute lymphoblastic leukemia G.A. Tsaur, A.M. Popov1,2, O.V. Aleynikova3, E.G. Boychenko4, T.Yu. Verzhbitskaya1,2, Е.V. Volochnik3, A.S. Ivanova1,2, 1, O.V. Kalennik5, S.Yu. Kovalev6, K.L. Kondtratchik7, A.M. Kustanovich3, E.S. Lapotentova3, D.V. Litvinov 8, I.S. Martynkevich9, N.V. Myakova8, T.V. Nasedkina5, V.A. Ovsepyan10, Yu.V. Olshanskaya8, O.M. Plehanova1, A.V. Popa11, T.O. Riger1,2, L.I. Savelyev1,2,11, O.V. Streneva1,2, M.V. Strigaleva1, I.V. Shmunk12, E.V. Shorikov1,2, L.G. Fechina1, Regional Children’s Hospital № 1, Yekaterinburg;

Research Institute of Medical Cell Technologies, Yekaterinburg;

Belarusian Research Center for Pediatric Oncology and Hematology, Minsk;

Children’s Municipal Hospital № 1, St.-Petersburg;

Engelgardt Institute of Molecular Biology Russian Academy of Science, Moscow;

B. Eltsyn Ural Federal University, Yekaterinburg;

Morozov Pediatric Municipal Clinical Hospital, Moscow;

Federal Research Institute of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow;

Russian Research Institute of Hematology and Transfusiology, St.-Petersburg;

Kirov Research Institute of Hematology and Transfusiology;

Ural State Medical Academy, Yekaterinburg;

Chelyabinsk Regional Blood Transfusion Station 117 cases of infant acute lymphoblastic leukemia without Down syndrome (aged from 1 to 365 days) were included in the current tudy.

s Rearrangements of 11q23 (MLL) were revealed in 74 (63.2 %) patients. Among this group the most common rearrangement was t(4;

11) 58 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ (q21;

q23)/MLL-AF4 detected in 63.5 % cases, less frequently was found t(11;

19)(q23;

p13)/MLL-MLLT1 (in 18.9 % cases), t(10;

11) ’ (p12;

q23)/MLL-MLLT10 and t(1;

11)(p32;

q23)/ML L-EPS15 (each one in 6.8 %), t(9;

11)(p22;

q23)/MLL-MLLT3 in 2.7 %.

Children under 6 months of age had significantly higher incidence of 11q23 (ML L) rearrangements in comparison with infants olde r than 6 months (84.0 % vs. 47.8 %, p 0.001). P atients with translocations 11q23 (ML L) more frequently had BI-A LL and less fre quently BII-ALL than children without these rearrangements (p 0.001 for both). Fusion gene transcript w as sequenced in 26 MLL rearranged cases. Depending on breakpoint position within ML L and partner genes we detected 7 different types of ML L-AF4 fusion gene transcript, 3 types of MLL-MLLT1, 2 types of MLL-EPS15. The most common fusion site within MLL gene was exon 11, detected in 14 (53.8 %) patients.

Key words: acute lymphoblastic leukemia, infants, translocation 11q23, MLL rearrangements ления МОБ данным способом [18], а также раннего Введение Ген MLL (myeloid/lymphoid or mixed lineage достижения молекулярной ремиссии у пациентов с на leukemia), располагающийся на длинном плече 11-й личием различных перестроек гена MLL [19].

хромосомы в регионе 11q23, состоит из 37 экзонов [1] Целью данной работы являлась характеристика и кодирует гистоновую метилтрансферазу. Перестрой- перестроек гена MLL (11q23) у детей первого года жиз ки с вовлечением района 11q23 и участием гена MLL ни с ОЛЛ.

встречаются примерно в 10 % всех случаев острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) и в 3 % случаев остро- Материалы и методы го миелоидного лейкоза (ОМЛ) [2, 3]. Наиболее час- Проанализированы данные 117 пациентов с ОЛЛ тыми генами-партнерами MLL являются AF4, MLLT1 без синдрома Да уна в возрасте от 1 до 365 дней (медиана — 211 дней). Их подробная характеристика (ENL), MLLT3 (AF9), MLLT4 (AF6), MLLT10 (AF10).

Суммарно они встречаются более чем в 80 % всех слу- представлена в табл. 1. Диагноз ОЛЛ у станавливался чаев MLL-позитивных острых лейкозов у детей на основании стандартных цитоморфологических и взрослых [4]. показателей [20], дополненных данными иммуно Среди всех возрастных категорий наиболее часто фенотипирования согласно критериям группы EGIL перестройки гена MLL выявляются у детей первого (European Group for the Immunological Characterization года жизни с ОЛЛ [5, 6], где частота их выявления мо- of Leukemias) [21]. Все пациенты получали терапию жет достигать 79 % [7, 8]. Несмотря на относительную по одному из следующих химиотерапевтических про редкость ОЛЛ у детей данной возрастной группы, он токолов: MLL-Baby, ALL-MB-2002, ALL-MB-2008, представляет большой интерес для исследователей как ALL-BFM 90, ALL-MB 91, CO ALL в детских онко из-за неблагоприятного прогноза [9–13], так и из-за гематологических клиниках Российской Федерации особенностей биологии опухоли и наличия широкого спектра перестроек гена MLL [6, 14], которые могут Таблица 1. Инициальные данные 117 детей первого года жизни с ОЛЛ возникать in utero [10, 15].

% n По механизму образования все перестройки 11q (MLL) можно разделить на инверсии, делеции, внут- Возраст ренние тандемные повторы, вставки, транслокации Младше 6 мес 50 42, с вовлечением 3 и более хромосом, а также комбина ции различных вариантов, например транслокация Старше 6 мес 67 57, с одновременной делецией части гена MLL [4]. Наи Пол более часто встречаются реципрокные транслокации, на долю которых приходится более 80 % всех случаев Мужской 43 36, перестроек 11q23 (MLL) как при ОЛЛ, так и при ОМЛ Женский 74 62, [16]. На сегодняшний день на молекулярном уровне Иммунофенотип охарактеризовано 64 транслокации [4]. Столь большое число перестроек затрудняет проведение молеку ляр- Нет данных 3 – но-генетической диагностики и верификацию гена BI-ОЛЛ 59 51,8* партнера[12].

Необходимо отметить, что особую ценность при- BII-ОЛЛ 35 30,7* обретает выявление перестроек гена MLL в свете того, BIII-ОЛЛ 17 14,9* что они представляют собой удобную мишень для мо Т-ОЛЛ 3 2,6* ниторирования минимальной остаточной болезни (МОБ) методом полимеразной цепной реакции * Процент рассчитан от 114 пациентов, которым было проведено (ПЦР). Ранее, в рамках протокола MLL-Baby [17], нам иммунофенотипирование.

удалось показать прогностическую значимость выяв ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ Для выявления типа химерных транскриптов про Таблица 2. Число пациентов, обследованных разными методами ’ и их комбинациями водили секвенирование полученных ПЦР-продуктов в прямом и обратном направлении на генетическом Метод Число пациентов анализаторе «ABI Prism 3130» (Applied Biosystems, США) с использованием «BigDy e Terminator 3.1»

Цитогенетика как единственный метод (Applied Biosystems, США) согласно инструкции про изводителя.

ОТ-ПЦР как единственный метод При сравнении групп пациентов по качественным FISH как единственный метод 1 признакам применяли критерий 2 с поправкой Йетса.

Различия считали достоверными при р 0,05. Анализ Цитогенетика + ОТ-ПЦР результатов проводили с помощью программ для ста тистической обработки данных Statistica 6.0.

Цитогенетика + FISH Результаты ОТ-ПЦР + FISH В исследованной группе перестройки гена MLL Цитогенетика + ОТ-ПЦР + FISH 23 (11q23) выявлены у 74 из 117 (64,2 %) пациентов.

Частота выявления перестроек 11q23 ( MLL) при ис пользовании различных методов диагностики пред и Республики Беларусь. Информированное согласие ставлена в табл. 3. Сравнение частоты выявления на проведение диагностических и лечебных процедур перестроек 11q23 (MLL), проведенных разными мето было получено во всех случаях. дами, показало, что при использовании FISH пере Для цитогенетического анализа использовали стройки гена MLL выявлялись несколько чаще клетки костного мозга и периферической крови, ко- (73,3 %), но полученные результаты статистически не торые брали до начала терапии и куль тивировали 1 ч отличались от результатов цитогенетического (60,3 %) («прямые препараты») и/или 24–48 ч. Препараты и молекулярно-генетического (61,8 %) методов иссле окрашивали G-методом с предварительной обработ- дования (p = 0,303 и p = 0,326 соответственно).

кой трипсином. В большинстве случаев анализирова- Результаты цитогенетических и молекулярно ли не менее 20 метафазных пластинок. Кариотипиро- генетических исследований представлены в табл. 4.

вание проводили в соответствии с международной Таблица 3. Сравнение цитогенетического и молекулярно номенклатурой хромосом человека [22]. В 30 случаях генетических методов для выявления перестроек 11q23 (MLL) дополнительно проводили исследование методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с локус- Обследовано Выявлено Метод специфичным зондом LSI MLL Dual Color, Break Apart (n = 117) (n = 74) Rearrangement Probe (Abbott, США) согласно инструк Цитогенетическое исследование 73 44 (60,3 %) ции производителя.

Всем пациентам проводилось определение следую- ОТ-ПЦР 102 63 (61,8 %) щих химерных транскриптов: MLL-AF4, MLL-MLLT1, MLL-MLLT3, MLL-MLLT4, MLL-MLLT10, MLL-ELL. FISH 30 22 (73,3 %) У 11 пациентов с отсутствием вышеуказанных химерных транскриптов дополнительно определяли экспрессию MLL-SEPT9, MLL-MLLT11, MLL-EPS15. Выявление Таблица 4. Выявленные перестройки 11q23 (MLL) химерных транскриптов проводили методом гнездной % n обратно-транскриптазной полимеразной цепной реак ции (ОТ-ПЦР) или ОТ-ПЦР с последующей гибриди- Всего обследовано зацией на биочипе (набор реагентов «ЛК-Био чип», Биочип-ИМБ, Россия) по ранее описанным протоколам Всего выявлено перестроек гена MLL 74 63, [19, 23–25]. В дальнейшем оба метода представлены как t(4;

11)(q21;

q23) / MLL-AF4 47 40, метод ОТ-ПЦР.

Число пациентов, обследованных разными мето- t(11;

19)(q23;

p13) / MLL-MLLT1 14 12, дами и их комбинациями, приведено в табл. 2. Стан дартное цитогенетическое исследование проведено 73 t(9;

11)(p22;

q23) / MLL-MLLT3 2 1, пациентам, ОТ-ПЦР — 102, FISH — 30. Все 3 метода t(10;

11)(p12;

q23) / MLL-MLLT10 5 4, одновременно применены у 23 пациентов. Использо вание того или иного метода выявления перестроек t(1;

11)(p32;

q23) / MLL-EPS15 5 4, 11q23 (MLL) было обусловлено диагностическими воз можностями каждой из лабораторий, проводивших Неизвестный ген-партнер 1 0, обследование пациентов.

60 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ лось. Относительная частота выявления перестроек ’ 11q23 (MLL) представлена на рис. 1. На долю t(4;

11) (q21;

q23)/MLL-AF4 и t(11;

19)(q23;

p13)/MLL-MLLT приходилось 63,5 % и 18,9 % от числа выявленных перестроек MLL/11q23 соответственно.

Для исследования взаимосвязи между перестрой ками 11q23 (MLL) и возрастом пациентов все случаи ОЛЛ у детей первого года жизни были разделены на возрастных групп (рис. 2). Частота выявления t(4;

11) (q21;

q23)/MLL-AF4 постепенно снижалась с увеличе нием возраста пациентов (от 57,1 % в возрастной груп пе 0–2 мес до 25,0 % у детей в возрасте 10–12 мес), однако обнаруженные различия не достигли статисти Рис. 1. Относительная частота выявления перестроек 11q23 (ML L) ческой значимости (p = 0,088). Транслокация t(11;

19) у пациентов с ОЛЛ (q23;

p13)/MLL-MLLT1 наиболее часто фиксировалась у детей в возрасте 2–4 мес — в 7 (28,0%) из 25 случаев.

Четверо из 5 пациентов с t(10;

11)(p12;

q23)/ MLL MLLT10 были старше 6 мес. Случаи с наличием t(1;

11) (p32;

q23)/MLL-EPS15 практически равномерно пред ставлены во всех возрастных группах. Т ранслокация t(9;

11)(p22;

q23)/MLL-MLLT3 не выявлялась у пациен тов младше 8 мес.

При разделении пациентов на 2 группы — старше и младше 6 мес — выявлено, что у детей в возрасте младше 6 мес перестройки 11q23 (MLL) были обнару жены достоверно чаще (84,0 % случаев) по сравнению с пациентами в возрасте 6–12 мес (47,8 % случаев) (р 0,001). Статистически значимые различия сохра нялись для t(4;

11)(q21;

q23)/MLL-AF4 (54,0 % и 29,8 % соответственно) (p = 0,014) и t(11;

19)(q23;

p13)/MLL Рис. 2. Встречаемость перестроек 11q23 (MLL) в различных возраст MLLT1 (22,0 % и 4,5 % соответственно) (p = 0,009).

ных группах Результаты иммунофенотипирования опухолевых Самой частой была транслокация t(4;

11)(q21;

q23)/ клеток представлены в табл. 5. У 39 (83,0 %) из MLL-AF4, на 2-м месте — t(11;

19)(q23;

p13)/ пациентов с наличием t(4;

11)(q21;

q23)/MLL-AF4 был MLL MLLT1, другие перестройки гена MLL наблюдались обнаружен BI-ОЛЛ. Значительно реже у пациентов значительно реже. В 1 (0,9 %) случае методом FISH на с данной хромосомной аберрацией выявлялись BII интерфазных ядрах была выявлена перестройка гена и BIII-варианты (10,6 % и 6,4 % соответственно). Все MLL, однако идентифицировать ген-партнер не уда- пациенты с наличием t(1;

11)(p32;

q23)/ MLL-EPS15, Таблица 5. Число пациентов с различными иммунологическими вариантами ОЛЛ и наличием перестроек 11q23 (MLL) BI-ОЛЛ BII-ОЛЛ BIII-ОЛЛ Т-ОЛЛ Нет данных Всего t(4;

11)(q21;

q23) / MLL-AF4 39 5 3 0 0 t(11;

19)(q23;

p13) / MLL-MLLT1 5 3 5 0 1 t(9;

11)(p22;

q23) / MLL-MLLT3 0 2 0 0 0 t(10;

11)(p12;

q23) / MLL-MLLT10 2 0 3 0 0 t(1;

11)(p32;

q23) / MLL-EPS15 5 0 0 0 0 Неизвестный ген-партнер MLL 1 0 0 0 0 Нет перестроек 11q23 (MLL) 7 25 6 3 2 59 35 17 3 3 Всего ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ ’ Рис. 3. Локализация точек слияния в гене ML L и генах-партнерах у 26 пациентов. Белые прямоугольники — экзоны гена ML L, серые — экзоны генов-партнеров. Для всех генов-партнеров приведены номера референсных последовательностей (NM) нормальных транскриптов.

* Нумерация экзонов гена MLL дана по работе Nilson et al., 1996 [1]. Праймеры для проведения гнездной О Т-ПЦР схематически представлены в виде черных прямоугольников. Цифры внутри черных прямоугольников соответствуют местам начала и конца праймера по отношению к нормаль ной мРНК соответствующего транскрипта. Цифры под схематическим изображением экзонов соответствуют месту началу экзона t(10;

11)(p12;

q23)/MLL-MLLT10, а также с неопреде- выявлялся значительно реже, чем BI и BIII (p 0,001).

ленным геном-партнером MLL имели BI-ОЛЛ или Связи наличия BIII-ОЛЛ с выявлением перестроек BIII-ОЛЛ, в то время как оба пациента с t(9;

11) 11q23 (MLL) выявлено не было (p = 0,989). У пациен (p22;

q23)/MLL-MLLT3 — BII-ОЛЛ. При наличии тов с Т-ОЛЛ (n = 3) перестроек гена MLL (11q23) нами t(11;

19)(q23;

p13)/MLL-MLLT1 по 5 (38,5 %) из 13 па- не найдено.

циентов имели BI-ОЛЛ и BIII-ОЛЛ, а 3 (23,1 %) — Исследование методом секвенирования для вы BII-ОЛЛ. У пациентов с отсутствием перестроек явления структуры химерного транскрипта было вы MLL/11q23 в большинстве случаев (60,1 %) зафикси- полнено у 26 больных. Из этого числа 15 пациентов рован BII-ОЛЛ. имели MLL-AF4, 7 — MLL-MLLT1, 3 — MLL-EPS15, Таким образом, у пациентов с наличием пере- 1 — MLL-MLLT3. Среди всех транскриптных вариан строек 11q23 (MLL) BI-ОЛЛ встречался достоверно тов MLL-AF4 наиболее часто был обнаружен вариант чаще, чем другие иммунологические варианты со слиянием 9-го экзона гена MLL и 4-го экзона гена (p 0,001). В то же время BII-ОЛЛ у этих пациентов AF4 (e9e4) — в 4 случаях из 15. Реже выявлялись 62 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ MLL96 и MLL98, проводилось исследование методом ’ гибридизации по Саузерну [8]. Оба метода позволяют выявить любые перестройки MLL, в том числе крипти ческие. В то же время проведенное в рамках данной ра боты сравнение частоты выявления перестроек 11q (MLL) не выявило статистически значимых различий использования 3 диагностических методов. Однако это может быть связано с недостаточной мощностью иссле дования, в частности, небольшим количеством пациен тов, которым проводилась FISH.

Сравнение относительной частоты выявления раз личных перестроек 11q23 (MLL) показало, что наибо лее часто в исследованной нами группе встречались t(4;

11)(q21;

q23)/MLL-AF4 и t(11;

19)(q23;

p13)/MLL MLLT1, что полностью совпадает с ранее опублико ванными данными [4, 7, 8, 13, 26–28]. Данные литера Рис. 4. Распределение точек слияния в гене MLL. Представлены резуль туры по частоте встречаемости транслокации t(9;

11) таты определения точек слияния в регионе с 9-го по 12-й экзоны гена (p22;

q23)/MLL-MLLT3 противоречивы: ряд исследо MLL у 26 пациентов с О ЛЛ, включая 15 случаев ML L-AF4, 7 случаев вателей ставят ее на 3-е место по частоте обнаружения MLL-MLLT1, 3 случая MLL-EPS15, 1 случай MLL-MLLT у детей первого года жизни с ОЛЛ (11,2–15,6 %) [7, химерные транскрипты e11e4 — 3 случая, е10е4, e11e5, 8, 13], в то же время в работе C.-H. Pui et al. при ана e11e6 — по 2 случая каждого соответственно (рис. 3). лизе данных 11 кооперативных групп по лечению ОЛЛ Среди транскриптных вариантов MLL-MLLT1 пре- у детей младше 12 месяцев данная транслокация была обладал e11e2 — 4 случая из 7. У всех 7 пациентов точ- выявлена только в 3,7 % случаев от общего числа пере ка слияния в гене MLLT1 находилась во 2-м экзоне. строек 11q23 (MLL) [12]. В нашем исследовании t(9;

11) Среди 3 пациентов с наличием химерного транс- (p22;

q23)/MLL-MLLT3 встретилась только у 2 (2,7 %) крипта с MLL-EPS15 у 2 был выявлен вариант e11e2, пациентов.

у 1 — е10е2. Единственный пациент с MLL-MLLT3, Несколько чаще, чем это описывалось ранее (6,7 % у которого была определена структура хи мерного по сравнению с 2,3–3,0 %) [4, 12] нам встретилась транскрипта, имел точку слияния в 11-м и 6-м экзонах реципрокная транслокация t(1;

11)(p32;

q23), ведущая соответственно. Суммарно наиболее частой точкой к образованию химерного гена MLL-EPS15. Ген EPS слияния в гене MLL являлся 11-й экзон, на долю ко- (epidermal growth factor receptor pathway substrate 15), так торого приходится более половины всех исследован- же известный как AF1P, AF-1P, MLLT5, впервые описан ных нами случаев — 14 из 25 (рис. 4). Bernard et al. в 1994 г. [29]. Данный ген, расположенный на коротком плече 1-й хромосомы в регионе 1р32, коди рует один из рецепторов эпидермального фактора роста.

Обсуждение В настоящей работе проведено исследование час- В отличие от белков AF4, MLL T1, MLLT3 и MLLT10, тоты встречаемости различных перестроек 11q23 (MLL) которые располагаются в ядре клетки, EPS15 локализу у детей первого года жизни с диагнозом ОЛЛ. Эти пере- ется в цитоплазме, что обу славливает несколько иной стройки нами были выявлены у 74 (63,2 %) из 117 па- механизм взаимодействия с белком MLL [30]. При этом циентов. Оказалось, что частота обнаружения выше- происходит образование дву спиральных олигомеров указанных перестроек ниже, чем в международном EPS15, которые только в таком виде способны приво исследовании Interfant-99, где перестройки MLL были дить к лейкемической трансформации белка MLL. Сле зарегистрированы в 79,3 % случаев (расчет сделан от дует отметить, что t(1;

11)(p32;

q23)/MLL-EPS15 пример числа информативных исследований) [7], а также в 2 по- но с одинаковой частотой (2–3 %) описывается у детей следовательных исследованиях MLL96 и MLL98, где как при ОЛЛ, так и при ОМЛ [4, 31].

частота выявления перестроек гена MLL составила По нашим данным, частота выявления пере 78,4 % [8]. В то же время наши результаты соответствуют строек 11q23 (MLL) достоверно отличалась у детей данным, полученным в разное время в Бразилии — младше и старше 6 мес ( р 0,001);

при этом пик 58,1 % [26], Германии — 65,9 %, [27], Великобритании — приходится на возрастную группу 4–6 мес, где эта 66,0 % [28], США — 68,7 % [13]. Однозначно объяснить величина достигла 91,9 %. Сходные результаты по причину полученных различий не представляется воз- лучены и другими исследовательскими группами можным. При этом следует отметить, что большинство [32, 33]. Описанное в отдельных работах преоблада пациентов, включенных в исследование Interfant-99, на- ние частоты выявления перестроек гена MLL у детей ряду с цитогенетическим и молекулярно-генетическим в первые 3 месяца жизни по сравнению с более стар исследованиями были обследованы методом FISH [7], шими детьми первого года жизни [26] не нашло под а всем пациентам, получавшим терапию по протоколам тверждения в нашей работе.

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ Проведенный нами анализ иммунофенотипа опу- чением возраста пациентов [5, 7], а минимальная про ’ холевых клеток показал преобладание у детей первого должительность бессобытийной выживаемости зафик года жизни BI-варианта ОЛЛ, который был выявлен сирована у пациентов с лейкозом, манифестировавшим у 51,8 % пациентов, что хорошо согласу ется с ранее в течение первого месяца жизни [42].

опубликованными данными, в которых BI-ОЛЛ вы- Практически все исследовательские группы схо являлся с частотой 47,3–64,6 % [26, 27, 34]. Мы вместе дятся в том, что наличие любых перестроек 11q с другими авторами отмечаем доминирование этого (MLL) значительно ухудшает прогноз заболевания иммунологического варианта у пациентов с наличием [7–9, 12, 13]. В то же время существу ет мнение о не перестроек 11q23 (MLL) и, наоборот, более частое вы- равнозначной прогностической роли различных явление BII-ОЛЛ среди больных, у которых эти пере- аномалий 11q23 (MLL) при ОЛЛ у детей первого года стройки не были обнаружены [26, 27, 32, 34]. жизни. Традиционно считается, что наиболее небла Большая вариабельность точек разрыва в гене MLL гоприятной является транслокация t(4;

11)/MLL-AF4, и генах-партнерах значительно у сложняет выявление в то время как прогноз для пациентов с t(11;

19)/ отдельных перестроек и использование их в качестве ми- MLL-MLLT1 и t(9;

11)/MLL-MLLT3 — несколько луч шеней для мониторинга МОБ. В связи с этим чрезвы- ше [12, 36, 43]. С другой стороны, в рамках проспек чайно важно определять структуру химерных транскрип- тивного исследования Interfant-99 пациенты с любой тов для последующего качественного и количест венного из вышеперечисленных транслокаций имели сход анализа МОБ методом ПЦР в реальном времени. Из- ные показатели бессобытийной выживаемости [5].

вестно, что, в отличие от взрослых пациентов с ОЛЛ, Все это подчеркивает необходимость дальнейшего у детей первого года жизни наиболее частой зоной раз- накопления данных о связи конкретных перестроек рыва в гене MLL является интрон 11, на долю которого с исходами ОЛЛ у детей первого года жизни.

приходится до половины всех случаев перестроек гена MLL [4, 35]. На уровне матричной РНК (мРНК) это при- Выводы водит к образованию химерных транскриптов с точкой 1. Перестройки района 11q23 с вовлечением гена слияния в экзоне 11. В нашей работе это встретилось у 14 MLL выявлены нами у 63,2 % пациентов с ОЛЛ. Среди (53,8 %) из 26 обследованных пациентов. Кроме того, для пациентов исследованной группы преобладали t(4;

11) MLL-AF4, MLL-MLLT1, MLL-EPS15 нами выявлено (q21;

q23)/MLL-AF4 — 63,5 % случаев и t(11;

19) более 1 варианта химерных транскриптов. Наибольшей (q23;

p13)/MLL-MLLT1 — 18,9 % случаев.

гетерогенностью обладал MLL-AF4, для которого выяв- 2. Наиболее часто перестройки 11q23 (MLL) обна лено 7 транскриптных вариантов;

для MLL-MLLT1 было ружены в возрастной группе 4–6 месяцев, где частота найдено 3 варианта, для MLL-EPS15 — 2. При этом, если выявления достигла 91,9 %, а наиболее редко– у паци в MLLT1 и EPS15 точка слияния в гене-партнере была ентов в возрасте 10–12 месяцев (32,1 %).

постоянной (экзон 2 во всех случаях), то в AF4 было вы- 3. У пациентов в возрасте младше 6 месяцев пере явлено 3 точки слияния — экзон 4 (11 случаев), экзон 5 стройки 11q23 (MLL) были выявлены в 84,0 % случаев, (3 случая) и экзон 6 (2 случая). а в возрасте 6–12 месяцев — в 47,8 % случаев.

Исследование инициальных характеристик у паци- 4. BI-вариант ОЛЛ достоверно чаще, а BII-ОЛЛ ентов первого года жизни с ОЛЛ важно по ряду причин. значительно реже встречались у пациентов с наличием Показано, что такие параметры, как возраст, инициаль- перестроек 11q23 (MLL).

ный лейкоцитоз, наличие и тип перестроек 11q23 (MLL), 5. При исследовании структуры химерных транс иммунофенотип и ответ на терапию оказывают важное криптов выявлено, что наиболее часто точка слияния влияние на исход данного заболевания [7, 12, 36–39]. располагается в 11-м экзоне гена MLL.

Известно, что бессобытийная выживаемость детей Авторы выражают глубокую признательность младше 12 месяцев, больных ОЛЛ, значительно у сту- Е.В. Флейшман и О.И. Соковой за ценные советы и кри пает таковой детей старше 12 месяцев [12, 40, 41]. Име- тические замечания, полученные в процессе работы ются существенные различия и среди пациентов пер- над статьей, а также благодарят врачей-гематологов вого года жизни. Показано увеличение длительности и детских онкологов, предоставивших данные о пациен бессобытийной выживаемости в соответствии с увели- тах первого года жизни с острыми лейкозами.

ЛИТЕРАТУРА 1. Nilson I., Loechner K., Siegler G. et al. 3. Schoch C., Schnittger S., Klaus M. et al. 4. Meyer С., Kowarz E., Hofmann J. et al.

Exon/intron structure of ALL1 (MLL) gene AML with 11q23/MLL abnormalities New insights to the MLL recombinome of involved in translocations to chromosomal as defined by the WHO classification: acute leukemias. Leukemia 2009;

23:1490–9.

region 11q23 and acute leukemias. incidence, partner chromosomes, FAB 5. Reaman G., Zeltzer P., Bleyer W. et al.

Br J Haematol 1996;

94(4):966–72. subtype, age distribution, and prognostic Acute lymphoblastic leukemia in infants less 2. Armstrong S., Look A. Molecular genetics impact in an unselected series of 1897 than one year of age: a cumulative experience of acute lymphoblastic leukemia. cytogenetically analyzed AML cases. of the Children’s Cancer Study Group.

J Clin Oncol 2005;

23:6306–15. Blood 2003;

102:2395–402. J Clin Oncol 1985;

3:1513–21.

64 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ 6. Biondi A., Cimino G., Pieters R., Pui C.-H. protocol. Blood 2010;

116(21):1126. 31. Harrison C., Cuneo A., Clark R. et al.

’ Biological and therapeutic aspects of infant Abstr. 2731. Ten novel 11q23 chromosomal partner sites.

leukemia. Blood 2000;

96:24–33. 19. Цаур Г.А., Наседкина Т.В., Попов А.М. Leukemia 1998;

12:811–22.

7. Pieters R., Schrappe M., De Lorenzo P. и др. Время достижения молекулярной 32. Jansen M., Corral L., van der Velden V.

et al. A treatment protocol for infants ремиссии как фактор прогноза у детей et al. Immunobiological diversity in infant younger than 1 year with acute lymphoblastic первого года жизни с острым лимфо- acute lymphoblastic leukemia is related to leukaemia (Interfant-99): an observational бластным лейкозом. Онкогематология the occurrence and type of MLL gene study and a multicentre randomised trial. 2010;

2:46–54. rearrangement. Leukemia 2007;

21:633–41.

Lancet 2007;

370(9583):240–50. 20. Bennett J., Catovsky D., Daniel M. et al. 33. Lightfoot T. Aetiology of Childhood 8. Tomizawa D., Koh K., Sato T. et al. Proposals for the classification of the acute Leukemia. Bioelectromagnetics 2005;

Outcome of risk-based therapy for infant leukaemias. French-American-British (FAB) Suppl 7:5–11.

acute lymphoblastic leukemia with or co-operative group. Br J Haematol 34. Mathew S., Behm F., Dalton J., without an MLL gene rearrangement, with 1976;

33:451–8. Raimondi S. Comparison of cytogenetics, Southern blotting and uorescence in situ emphasis on late effects: a final report of two 21. Bene M., Castoldi G., Knapp W. et al.

consecutive studies, MLL96 and MLL98, of Proposals for the immunological hybridization as methods for detecting MLL the Japan Infant Leukemia Study Group. classification of acute leukemias. European gene rearrangements in children with acute Leukemia 2007;

11:2258–63. Group for the Immunological leukemia and with 11q23 abnormalities.

9. Chen C-S., Sorensen P., Domer P. at el. Characterization of Leukemias (EGIL). Leukemia 1999;

13:1713–20.

Molecular rearrangements on chromosome Leukemia 1995;

9(10):1783–6. 35. Burmeister T., Meyer C., Schwartz S.

11q23 predominate in infant acute 22. ISCN (2005): An International System et al. The MLL recombinome of adult lymphoblastic leukemia and are associated for Human Cytogenetic Nomenclature CD10-negative B-cell precursor acute with specific biologic variables and poor (2005). Editors: Shaffer L.G., Tommerup N. lymphoblastic leukemia: results from outcome. Blood 1993;

81:2386–93. Karger, Basel, Switzerland, 2005. the GMALL study group. Blood 2009;

10. Greaves M. Infant leukemia: biology, 23. Borkhardt A., Repp R., Haupt E. et al. 113:4011–5.

aetiology and treatment. Leukemia Molecular analysis of MLL/AF4 36. Pui C.-H., Gaynon P., Boyett J. et al.

1996;

10:372–7. recombination in infant acute lymphoblastic Outcome of treatment in childhood acute 11. Isoyama K., Eguchi M., Hibi S. et al. leukemia. Leukemia 1994;

8:549–53. lymphoblastic leukaemia with Risk-directed treatment of infant acute 24. Pallisgaard N., Hokland P., Riishoj D. rearrangements of the 11q23 chromosomal lymphoblastic leukaemia based on early et al. Multiplex reverse transcription- region. Lancet 2002;

359:1909–15.

assessment of MLL gene status: results of the polymerase chain reaction for simultaneous 37. Silverman L., McLean T., Gelber R.

Japan Infant Leukaemia Study (MLL96). screening of 29 translocations and et al. Intensied therapy for infants with Br J Haematol 2002;

118:999–1010. chromosomal aberrations in acute leukemia. acute lymphoblastic leukemia results from 12. Pui C.-H., Chessells J., Camitta B. et al. Blood 1998;

92:574–88. the Dana-Farber Cancer Institute Clinical heterogeneity in childhood acute 25. Dongen van J., Macintyre E., Gabert J. Consortium. Cancer 1997;

80:2285–95.

lymphoblastic leukemia with 11q23 et al. Standardized RT-PCR analysis of 38. Dordelmann M., Reiter A., Borkhardt A.

rearrangements. Leukemia 2003;

17:700–6. fusion gene transcripts from chromosome et al. Prednisone response is the strongest 13. Hilden J., Dinndorf P., Meerbaum S. aberrations in acute leukemia for detection predictor of treatment outcome in infant et al. Analysis of prognostic factors of acute of minimal residual disease. Leukemia acute lymphoblastic leukemia. Blood lymphoblastic leukemia in infants: report 1999;

13:1901–18. 1999;

94:1209–17.

on CCG 1953 from the Children’s Oncology 26. Emerenciano M., Arias D., Coser V. 39. Velden van der V., Corall L., Valsecchi M.

Group. Blood 2006;

108:441–51. et al. Molecular cytogenetic findings of et al. Prognostic signicance of minimal 14. Cimino G., Rapanotti M., Sprovieri T., acute leukemia included in the Brazilian residual disease in infants with acute Elia L. ALL1 gene alterations in acute collaborative study group of infant acute lymphoblastic leukemia treated within leukemia: biological and clinical aspects. leukemia. Pediatr Blood Cancer the Interfant-99 protocol. Leukemia Haematologica 1998;

83:350–7. 2006;

47:549–54. 2009;

23:1073–9.

15. Gale K., Ford A., Repp R. et al. 27. Borkhardt A., Wuchter C., Viehmann S. 40. Pui C.-H., Frankel L., Carroll A. et al.

Backtracking leukemia to birth: et al. Infant acute lymphoblastic leukemia — Clinical characteristics and treatment identification of clonotypic gene fusion combined cytogenetic, immunophenotypical outcome of childhood acute lymphoblastic sequences in neonatal blood spots. Proc and molecular analysis of 77 cases. Leukemia leukemia with the t(4;

11)(q21;

q23):

Natl Acad Sci USA 1997;

94:13950–4. 2002;

16:1685–90. A collaborative study of 40 cases.

16. Slany R. The molecular biology of 28. Chessells J., Harrison C., Kempski H. Blood 1991;

77:440–7.

mixed lineage leukemia. Haematologica et al. Clinical features, cytogenetics and 41. Mann G., Cazzaniga G., van der 2009;

94:984–93. outcome in acute lymphoblastic and myeloid Velden V. et al. Acute lymphoblastic 17. Fechina L., Shorikov E., Tsaur G. leukaemia of infancy: report from the MRC leukemia with t(4;

11) in children one year et al. Contribution of all-trans retinoic Childhood Leukaemia working party. and older: the ‘big sister’ of the infant acid to improved early relapse-free Leukemia 2002;

16:776–84. disease? Leukemia 2007;

21:642–6.

outcome in infant acute lymphoblastic 29. Bernard O., Mauchauffe M., Mecucci C. 42. Linden van der M., Valsecchi M., leukemia comparing to the chemotherapy et al. A novel gene, AF-lp, fused to HRX De Lorenzo P. et al Outcome of congenital alone. Blood 2007;

110(11):832А. in t(1;

11)(p32;

q23) is not related to AF-4, acute lymphoblastic leukemia treated Abstr. 2828. AF-9 nor ENL. Oncogene 1994;

9:1039–45. on the Interfant-99 protocol. Blood 2009;

18. Tsaur G., Popov A., Nasedkina T. et al. 30. DiMartino J., Cleary M. MLL 114:3764–8.

Minimal residual disease monitoring by rearrangements in haematological 43. Pui C.-H., Ribeiro R., Campana D. et al.

quantification of fusion gene transcript in malignancies: lessons from clinical and Prognostic factors in the acute lymphoid infant with MLL-rearranged acute biological studies. Br J Haematol and myeloid leukemias of infants. Leukemia lymphoblastic leukemia by MLL-Baby 1999;

106:614–26. 1996;

10:952–6.

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ Нарушения в системе белка р53 и их влияние на патогенез ’ хронических лимфопролиферативных заболеваний П.М. Кондратовский, А.И. Дубиков, А.Ю. Дорошевская Владивостокский государственный медицинский университет Контакты: Павел Максимович Кондратовский k855va@gmail.com В настоящее время активно обсуждается роль белков семейства р53 как в рамках патогенеза хронических лимфопролифератив ных заболеваний, так и в свете растущего интереса к терапевтическому потенциалу так называемых малых молекул, способных влиять на регуляторные «взаимоотношения» молекул р53, MDM2, p21 и PUM A. Представленная статья является попыткой обобщить данные экспериментальных моделей на тканях опухоли и мышиных моделях и доступных в литературе исследований с использованием материала лимфоидных опухолей человека. Рассмотрены как аспекты прогностической значимости экспрессии белков семейства р53 при лимфопролиферативных заболеваниях, так и возможные терапевтические подходы, использующие особенности взаимоотношений р53-молекулы с генами-регуляторами и эффекторами.

Ключевые слова: хронические лимфопролиферативные заболевания, лимфомы, хронический лимфолейкоз, апоптоз, р53, MDM2, p21, PUMA P53 pathway changes and their influence on chronic lymphoproliferative diseases pathogenesis P.M. Kondratovskiy, A.I. Dubikov, A.Yu. Doroshevskaya Vladivostok State Medical University The role of p53 family proteins, both in the pathogenesis of chronic lymphoproliferative disorders, and in aspects of the growi ng interest in the therapeutic potential of so-called small molecules capable of influencing the regulatory "relationship" of p53, MDM2, p21 and P UMA is cur rently actively debated. The article is an attempt to summarize the data on experimental tumor and mouse models and available ithe literature n results of studies using human lymphoid tumors. Prognostic significance of p53 family proteins expression in lymphoproliferativ e diseases and possible therapeutic approaches using the features of the p53 relationship with regulators and effectors genes are considered.

Key words: chronic lymphoproliferative diseases, lymphomas, chronic lymphocytic leukemia, apoptosis, р53, MDM2, p21, PUMA чательного становления автономной пролифера Введение Учение о лимфопролиферативных заболеваниях ции клеток (опухоли) необходимо наличие еще как (ЛПЗ) — пожалуй, самая обширная область гематологии минимум одного случайного неблагоприятного со и внутренних болезней. Поскольку клетки, составляю- бытия.

щие иммунную систему, являются широко распростра- В настоящее время активно обсуждается роль бел ненными и обладают значительной функциональной ков семейства р53 как в рамках патогенеза хронических гетерогенностью, ЛПЗ могут возникать фактически ЛПЗ, так и в свете растущего интереса к терапевти в любом органе и иметь различные гистологические ческому потенциалу так называемых малых молекул, черты, клинические проявления и прогноз. способных влиять на регуляторные «взаимоотноше Во всем мире наблюдается рост частоты неходж- ния» молекул р53, MDM2, p21 и PUMA. Данные кинских лимфом (НХЛ). В России, по данным РО НЦ в этой области проходят стадию первоначального на им. Н.Н. Блохина РАМН за 2004 год и отдельных публи- копления и представлены экспериментальными мо каций, показатель заболеваемости всеми формами лим- делями на тканях опухоли и мышиных моделях и до фом составил 8,0 на 100 тыс. населения, что на 3,9 % ступных в литературе исследований с использованием больше, чем в 2003 г. Заболеваемость хроническим лим- материала лимфоидных опухолей человека представ фолейкозом колеблется от 2,0 до 6,0 на 100 тыс. взрос- лены сравнительными описаниями частоты экспрес лого населения. Максимальный уровень заболеваемости сии различных белков семейства р53 с выводами об их приходится на возраст 70–79 лет за счет НХЛ. В целом вероятной прогностической значимости. Принимая во наблюдается линейная зависимость возраста и заболе- внимание лавинообразный рост подобных сообщений ваемости всеми формами лимфом. и привлекательность идеи использования воздействия Утрата контроля над пролиферацией, вызванная малых молекул на регуляторные механизмы естествен последствиями транслокаций хромосомного мате- ной клеточной гибели, особенно в такой широко рас риала, открывает путь к неоплазии, но сама по себе пространенной группе онкогематологических заболе недостаточна для злокачественной трансформации. ваний, возникает естественный интерес к анализу Имеющиеся данные свидетельствуют, что для окон- доступных литературных данных и проведению иссле 66 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ дований на материале опухолей человека с использо- гена P53R2, кодирующего рибонуклеотидредуктазу.

’ ванием современных технологий. Программа апоптоза включается при невозможности репарировать ДНК во время остановки клеточного цикла и/или дефиците белка p21W AFI. В некоторых Апоптоз и онкогенез Одним из важных патогенетических механизмов клетках генетически обусловлен приоритет программы онкогенеза является нарушение механизма програм- апоптоза при активации гена ТР53.

мируемой гибели клетки — апоптоза. Апоптоз регули- Основной функцией гена ТР53 следует считать руется белками р53 и Bcl-2. Дикий (т. е. нормальный) включение программы апоптоза при повреждении тип р53 индуцирует апоптоз, а Bcl-2 и Bcl-X его бло- клеточного генома, что можно рассматривать как за кируют. В результате мутации дикого типа ТР53 об- щитную реакцию организма от накопления генетиче разуется мутантный тип гена ТР53, клетка теряет спо- ски дефектных клеток. Снижение активности гена собность к апоптозу, вследствие чего может возникать ТР53 или мутация в нем, приводящая к потере спо опухоль. Дикий тип гена ТР53 является геном-супрес- собности к включению апоптоза, является серьез сором, продукт которого ингибирует трансформацию ным фактором, предрасполагающим к возникновению клеток, мутантный ген ТР53 — онкогеном, который опухолей и развитию резистентности к химиотерапии.

наряду с другими онкогенами участвует в механизмах Мутация гена ТР53 обнаруживается более чем в по канцерогенеза. Дикий тип белка р53 не только инду- ловине раковых опухолей, частота ее повышается при цирует апоптоз, но и блокирует клеточный цикл, воз- длительной химиотерапии.

можно, совместно с MY C протеином, в точке конт- Итак, ген ТР53 необходим для реализации про роля в фазе G1 или перехода фазы G1 в S-фазу. граммы апоптоза при повреждении ДНК и токсиче Продукты гена ТР53 нужны клетке для инициации ских воздействиях на клетку. Следующим шагом в про апоптоза в ответ на генотоксические повреждения. ведении проапоптотического сигнала по этому пути Этот фундаментальный путь позволяет организму является включение семьи Bcl-2 генов.

освобождаться от поврежденных и потенциальных Интерес к апоптозу резко возрос в середине 80-х опухолевых клеток [1] (рис. 1). годов, когда было выявлено [3, 4], что усиление актив Другие гены, контролирующие апоптоз, — это ности онкогена Всl-2, являющееся следствием обычной семейство Bcl-2. Первым белком, регулирующим апоп- для В-клеточной фолликулярной лимфомы человека тоз, был описан Bcl-2, кодиру емый протоонкогеном транслокации t(14;

18), приводит к образованию опу Bcl-2. Затем было выявлено целое семей ство генов холевого клона не за счет у силения пролиферации, Bcl-2, контролирующих апоптоз. а вследствие повышения выживаемости опухолевых Ген ТР53, располагающийся на коротком плече клеток. Позднее было показано, что при этой транс хромосомы 17, кодирует образование ядерного белка, локации онкоген Всl-2, изначально располагавшийся состоящего из 393 аминокислот, с молекулярной мас- на хромосомном сегменте 18q21, сливается с локу сом, сой 53 кД. Т етрамер p53 функциониру ет как транс- кодирующим тяжелую цепь Ig на хромосоме 14q32, что крипционный фактор, связываясь своим карбоксиль- приводит к его повышенной экспрессии. Молекулярно ным окончанием со специфическими регионами генетические исследования показали, что в так назы генов-мишеней [2]. Белок р53 находится в цитоплазме ваемую семью Bcl-2 генов, картированных у человека в латентном состоянии, активация его происходит не на хромосоме 18, входят и другие гены, экспрессирую только в ответ на поражение ДНК, но также может щие белки с противоположной функцией [5–7].

явиться следствием многих других процессов, проис- В настоящее время клонировано 16 генов, состав ходящих в клетке, в том числе, активации онкогенов, ляющих эту семью. Белки, производные этих генов, гипоксии, дефицита питания, старения и др. (рис. 2). объединяет сходный морфологический состав — каж При активации белок р53 способен инициировать дый из них имеет хотя бы одну из четырех консерва независимо друг от друга 2 программы: тивных аминокислотных последовательностей, харак • временную остановку клеточного цикла в G1- терных для Всl-2. Эти последовательности известны фазе с помощью белка p21W AFI, ингибирующего как регионы, гомологичные Bcl-2 (BH1–BH4). Функ циклин-зависимые киназы;

циональное значение этих регионов до конца не ясно, • стимуляцию апоптоза путем активации генов но, по мнению некоторых исследователей, именно Вах или Bid — проапоптотических генов семьи Bcl-2 они определяют реактивные способности белков это и/или активации образования свободных форм кис- го семейства.

лорода, способствующих выходу цитохрома из мито- Только 6 белков из 16 контролиру емых генами хондрий. семейства Bcl-2 оказывают антиапоптотическое дей Экспериментальные данные с выключением генов ствие: защищают клетки от широкого спектра физио позволяют предположить, что приоритетной для боль- логических и экспериментальных воздействий, направ шинства клеток является программа временной оста- ленных на индукцию апоптоза. К таким стимулам новки митотического цикла. Есть сведения и об уча- относятся повреждение ДНК, действие глюкокорти стии р53 в процессах репарации ДНК путем активации коидов, прекращение цитокиновой регуляции и др.

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ ’ I I 115 I3 I4 I5 I6 I7 I8 I9 I 92 755 81 567 342 92 2817 E1 E2 E3 E4 E5 E6 E7 E8 E9 E10 E 107 102 22 279 184 113 110 137 74 107 1 Рис. 1. Структура гена р53 человека: 22 000 пар оснований;

11 экзонов (синий цвет), кодирующих матричную РНК. Т рансляция начинается в экзоне 2. Размеры экзонов и интронов указаны в парах оснований Подавление опухолевого роста PUMA Апоптоз Созревание Модулирование стволовых клеток DRAM Аутофагия Фертильность p21 Остановка клеточного цикла R2 Репарация ДНК LIF Имплантация эмбриона p53 TSP1 Угнетение ангиогенеза TIGAR Угнетение ROS / Выживание IGAM-1 Врожденный иммунитет SCO2 Метаболизм Ишемия Синдром Тричера Коллинза MDM2 Регуляция p Нейродегенерация Старение PAI-1 Старение Рис. 2. Схема основных каскадов, в которых участвует р В дополнение к своей хорошо известной роли опухолевого супрессора, р53 также регулирует другие клеточные (справа) и физиологиче ские/па тологические процессы (слева). Эти процессы включают как положительные исходы (красная стрелка), так и заболевания и другие неблагопри ятные исходы (черная стрелка). Также показаны примеры генов-мишеней р53 (выделены синим цветом), регулируемые р53 и влекущие ук азанные клеточные ответы Некоторые из белков этой группы имеют СОО Н-кон- цию белков. Многие из проапоптотических белков так цевой гидрофобный регион, ответственный за прикре- же, как антиапоптотические белки этой семьи, имеют пление белков к наружной поверхности митохондриаль- концевой гидрофобный домен, но в отличие от послед ной мембраны. них не прикрепляются к митохондрии до получения Остальные 10 членов семьи Всl-2 вызывают апоп- проапоптотического сигнала.


тоз. Эти проапоптотические белки могут быть подраз- Восприятие анти- или проапоптотических сигналов делены на 2 подгруппы в зависимости от числа членами семьи Всl-2 происходит как на уровне генов ВН-регионов, которыми они располагают. Первые 3 (так, белок p53 повышает экспрессию гена Вах), так и на имеют по 2–3 ВН-региона, в то время как у 7 осталь- уровне посттранскрипционных белков (действие цито ных обнаруживается только 1 ВНЗ-регион. Именно кинов). При этом между самими белками наблюдаются с этим регионом связывают проапоптотическую функ- сложные взаимодействия, иногда антагонистические.

68 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ Значительное Умеренное ’ повреждение повреждение ДНК ДНК MDM2 hMOF p Модифицирующие TIP60 CBP K Ub E4F HIPK p белки K PCAF Ac S46 K120 K P Ac Ac L TAD TAD N С PP ДНК-связывающий домен Tet ++ I II Гены мишени AIP1 PUMA PUMA p Апоптоз Апоптоз Остановка клеточного Исход цикла Рис. 3. Основные функциональные домены р53 и основные механизмы его регуляции Основные домены р53 включают домены активации транскрипции (T AD I, остатки 20-40 и T AD II, остатки 40-60), пролиновый домен (РР, остатки 60-90), ДНК-связывающий домен (остатки 100-300), связывающий регион (L, остатки 301-324), домен тетрамеризации (T остатки et, 325-356) и основной С-терминальный домен (++, остатки 363-393). Приведены примеры, в которых есть некоторые остатки, модифициру е мые через фосфорилирование (Р), ацетилирование (Ас) или убиквинирование (Ub), что приводит к специфическим клеточным исходам в ответ на активацию р53 (для примера — апоптоз или остановка клеточного цикла), что в свою очередь зависит от преимущественной активац ии указанных генов-мишеней В процессе этих взаимодействий про- и антиапоптоти- Ниже приведены иллюстрации частоты мутацион ческие протеины могут образовывать гомо- и гетероди- ных событий и их распределение в гене ТР53 при меры как внутри своей группы, так и с протеинами В-клеточных лимфомах/лейкозах и В-клеточных НХЛ противоположной направленности действия. (рис. 4–7).

В результате многочисленных экспериментов к на- Ряд исследователей в своих работах указывают на стоящему времени сложилось впечатление, что реше- влияние экспрессии белка р53 и мутационного стату ние, жить или умереть клетке, принимается на уровне са ТР53 на прогноз, ответ на проводимую терапию семьи Всl-2 на основании относительного преоблада- у больных с ЛПЗ. Отмечено повышение экспрессии ния активных супрессоров или промоторов апоптоза р53 при Т- и NK-клеточных лимфомах с редко встре [7, 8] (рис. 3). чающимися мутациями гена [12]. С другой стороны, снижение экспрессии белка р53 и мутации гена ТР приводят к ухудшению ответа на терапию при кожных Р53 белок и хронические лимфопролиферативные лимфомах [13]. Выяснено, что мутации в ТР53 явля заболевания Известно, что от 50 до 80 % солидных опухолей ются спутниками озлокачествления MAL T-лимфом содержат мутации гена ТР53. Исследования, прове- [14], потеря экспрессии р53 и нарушения регуляции денные ранее, показали, что мутантный ТР53 опреде- гена приводят к резистентности к лечению и ухудше ляется в 16 % фолликулярных лимфом [9] и в 13 % пер- нию прогноза при лимфомах из клеток маргинальной вичных B-крупноклеточных лимфом средостения [10]. зоны селезенки [15], лимфомах из клеток зоны мантии По данным Gaidano et al., мутации ТР53 были выяв- [16] и фолликулярных лимфомах [17].

лены в опухолевой ткани MALT-лимфом высокой сте- Имеются данные, что уровень экспрессии р53 мо пени злокачественности [11]. В этих условиях именно жет отличаться в зависимости от степени злокаче врожденные полиморфизмы гена ТР53, приводящие ственности. В недавнем исследовании показано, что к нарушению функционирования соответствующего более высокий уровень экспрессии р53 имеют лимфо белка, могут обусловливать предрасположенность их мы высокой степени злокачественности и соответ носителей к развитию неходжкинских злокачествен- ственно более низкий — лимфомы низкой степени ных лимфом. злокачественности [18].

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ The UMD p53 database The UMD p53 database ’ Linn Hjortsbeg and Thierry Soussi, 2008 http://p53.free.fr Linn Hjortsbeg and Thierry Soussi, 2008 http://p53.free.fr 10 9 В-ХЛЛ / Лимфома 273 из малых лимфоцитов Частота мутаций, % Частота мутаций, % N = 6 175 N = 5 0 1 Кодон p53 393 1 Кодон p53 Рис. 4. Мутационные события в гене р53 при В-клеточных лимфомах/ Рис. 6. Мутационные события в гене р53 при В-клеточных НХЛ лейкозах The UMD p53 database The UMD p53 database Linn Hjortsbeg and Thierry Soussi, 2008 http://p53.free.fr Linn Hjortsbeg and Thierry Soussi, 2008 http://p53.free.fr 45 N = 236 N = В-ХЛЛ / Лимфома Неходжкинские из малых лимфоцитов лимфомы Частота мутаций, % Частота мутаций, % Изменения Изменения 30 CpG динуклеотида CpG динуклеотида 15 0 GС АТ AT GC GC CG GC TA AT CG AT TA GС АТ AT GC GC CG GC TA AT CG AT TA Прочие Прочие Мутационные события Мутационные события Рис. 5. Распределение мутаций р53 при В-клеточных лимфомах/лейкозах Рис. 7. Распределение мутаций р53 при В-клеточных НХЛ Что касается хронического лимфолейкоза, то экс- Белок PUMA: активный участник прессия р53 в подавляющем большинстве случаев для лимфопролиферации этого заболевания нехарактерна. Случаи заболевания Доминирующий взгляд на ключевую роль р с гиперэкспрессией р53 характеризуются более агрес- в развитии феномена программированной клеточной сивным течением, как правило, плохим ответом на смерти (апоптоз) не подвергается сомнению. Однако терапию, в том числе и пуриновыми аналогами, что неуклонно растет количество фактов, указывающих на происходит либо ввиду мутаций ТР53 с развитием то, что р53 обладает и другими функциями, сдержи множественной лекарственной у стойчивости, либо вающими процессы пролиферации и злокачествен со снижением апоптотической гибели клеток при воз- ного роста. То, что апоптоз не является единственным действии пуриновых аналогов [19]. феноменом в арсенале р53, стало очевидным с откры Практический интерес представляют потенциаль- тием белка PUMA (p53-upregulated modulator of ные возможности использования измененной экспрес- apoptosis). PUMA — единственный BH3 (Bcl- сии р53 при различных ЛПЗ у человека как в диагности- homology domain 3) протеин, инициирующий мито ческом, так и в терапевтическом аспектах. Очевидно, хондриальный путь апоптоза. Изучение мышей, не что само по себе изменение экспрессии р53 не имеет имеющих этого протеина, показало, что PUMA необ самостоятельного значения без изучения полиморфизма ходим для развития апоптоза в ответ на активацию ассоциированных с ним генов-эффекторов, каковыми р53-молекулы во многих тканях [20]. Т ем не менее являются молекулы PUMA, р21, MDM2. нулевые по белку PUMA мыши необязательно разви 70 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ вают злокачественные опухоли [21], хотя ряд иссле- опухолевого материала лимфомной ткани человека ’ дований показал, что потеря PUMA способству ет нам не встретилось. Т акже вызывают ряд вопросов канцерогенезу, определяемому онкогеном MYC [22]. противоречия, связанные с ролью нарушений в актив Становится ясным, что р53 может сохранять антипро- ности гена PUMA, а именно отсутствие однозначного лиферативные свойства даже в отсутствие апоптоти- эффекторного ответа при его инактивации или сни ческого ответа. жении экспрессии. Тем более актуальной становится В 2 исследованиях, результаты которых опублико- попытка комплексной оценки системы медиаторов ваны в журнале Genes & Development [23, 24], изучали и эффекторов системы р53 при ЛПЗ.

белок PUMA в условиях повреждения ДНК. Известно, что р53 не может инициировать процесс апоптоза в от- Белок р21 и р53: диалектика взаимодействия сутствие белка PUMA. Принимая во внимание этот и особенности экспрессии при лимфо факт, исследователи создали линию нокаутированных пролиферативных заболеваниях по гену PUMA мышей и подвергли их воздействию ра- Р53 содержит также другие возможности анти диации, вызывающей повреждение молекул ДНК. пролиферативного эффекта. Одной из них является Ученые ожидали увидеть быстрое развитие опухолей способность останавливать клеточную пролиферацию и гибель животных, но вместо этого мыши жили доль- и рост, эффективно останавливать клеточный цикл, ше, чем животные из контрольной группы. активируя транскрипцию ингибитора циклин-зави Другая исследовательская группа, под руководством симой киназы р21, хотя несколько других генов Андреаса Штрассера (Andreas Strasser), наблюдала этот мишеней р53-молекулы (14-3-3 sigma и GADD45) могут же феномен: отсутствие белка PUMA нисколько не вре- вносить свой вклад в этот феномен [27]. При этом дило мышам, подвергшимся воздействию радиации надо отметить, что р21 чрезвычайно чувствителен к са и, напротив, увеличивало продолжительность их жизни мым низким концентрациям р53 и ведет к немедлен в сравнении с нормальными животными, подвергавши- ной остановке клеточного цикла в фазе G1 при малей мися облучению [24]. Исследования проводились на шем повреждении клетки, позволяя ей пережить конкретном типе опухоли, а именно на тимической неблагоприятный период. Однако в случае канцеро лимфоме, которая была вызвана многократным воз- генеза (или нецелесообразной пролиферации) подоб действием радиации на экспериментальных животных ного рода реакция позволит сохраниться клеткам со в течение месяца. злокачественным потенциалом. Серия интереснейших В то же время другими авторами на модели лим- исследований высветила важность феномена старения фомы Беркитта у мышей было отчетливо показано, в ингибировании злокачественной пролиферации что делеция гена PUMA приводит к ускорению лимфо- и идентифицировала при этом ключевую роль р53 могенеза и 75 % клеток опухолевой линии избавляется молекулы в биологическом ответе подобного рода.


от его экспрессии [22]. Более того, в 40 % первичных В нескольких работах было показано, что ключевую опухолей вообще не выявлено какого-либо уровня роль в развитии феномена старения играет поврежде экспрессии PUMA [22]. ние ДНК через активацию онкогенов или в ответ на Анализ литературных данных, посвященных ис- дисфункцию теломер, что повышает активность р следованию экспрессии PUMA и его связи с белком протеина [28, 29].

р53 при ЛПЗ, позволяет предполагать, что наибольшее Более того, старение остается ключевым феноме значение нарушения в белке PUMA, со снижением его ном в ответ на активацию р53 при злокачественной экспрессии, имеют при В-клеточных ЛПЗ [21, 24]. пролиферации в далеко зашедших стадиях. В моделях Исследование экспрессии PUMA при хроническом на мышах реактивация р53 белка привела к суще лимфолейкозе в сопоставлении с уже достаточно извест- ственной регрессии различных типов злокачественных ными прогностическими факторами, такими как стадия опухолей, доказывая высокий терапевтический потен заболевания, экспрессия CD38, ZAP-70, уровни ЛДГ циал такого подхода к лечению [30–32]. Что интерес и 2-микроглобулина, а также неблагоприятными хро- но, при саркомах и карциномах в ответ на повышение мосомными аномалиями, отчетливо демонстриру ет активности р53-молекулы развивается прежде всего снижение уровня экспрессии PUMA при всех факторах феномен старения, а не апоптоза. Хотя исследования плохого прогноза [25]. Голландские исследователи про- на культурах тканей свидетельствуют о том, что раз демонстрировали, что терапия пуриновыми аналогами витие феномена старения является скорее цитостати вызывает индукцию проапоптотических генов ческим ответом, стабилизирующим заболевание, но Bax и PUMA, опосредованную р53, с более выраженным эф- не вызывающим его обратное развитие, исследования фектом в случае наличия мутаций в генах IgVH [26]. in vivo отчетливо показали возможность полной эра Следует отметить, что вышеприведенные исследо- дикации злокачественного клона при сопутствующей вания проводились на мышиных моделях В-клеточных стимуляции иммунной системы [32]. Одним из клю лимфом высокой степени злокачественности, а указа- чевых регуляторов р53 опосредованного старения яв ний на исследования в группе более распространен- ляется белок р21 [33]. Супрессия злокачественной ных В-зрелоклеточных лимфом с использованием пролиферации мутантной формой р53 R172P дефект-, ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ ной по апоптозу, сопровождается, прежде всего, акти- MDM2-молекула — негативный регулятор ’ вацией р21-молекулы и феномена старения [34, 35]. р53 белка Более того, введение мутантной формы р53-линии При нормальных условиях в клетке экспрессиру мышей нулевой по наличию р21 белка, приводило ются и белок р53, и белок MDM2. Функция белка к полной потере способности к остановке клеточного MDM2 первоначально была у становлена у мышей, цикла и ускоряло рост злокачественных опухолей [36]. отсюда название MDM2 (mouse double minute Все эти факты убедительно свидетельствуют, что р53 chromosome amplified oncogene — онкоген, который опосредованная активация р21-молекулы является был амплифицирован на хромосоме типа «double важным звеном в угнетении злокачественной проли- minute»).

ферации через феномен старения. N-концевой домен белка MDM2 связывается Складывается впечатление, что р53-зависимые с N-концевым трансактивирующим доменом белка феномен апоптоза и феномен старения являются сво- р53. Таким образом, белок MDM2 препятствует акти его рода страховкой друг для друга и развитие того или вирующему действию белка р53. Кроме того, комплекс иного определяется конкретным типом клеток и со- MDM2:р53 является ингибитором транскрипции (ве стоянием окружающей среды (тканевым контекстом). роятно, вследствие сохранения способности белка р На модели тимической лимфомы было показано, к присоединению к ДНК). Опубликованы детальные что снижение экспрессии р21 у мышей нока утных или обзоры о взаимодействии р53 с MDM2 [41–44].

гаплодефицитных по ТР53 сдерживает темпы прогрес- Недавнее исследование, показавшее, что потеря сирования опухоли и приводит к увеличению средней р53 приводит к снижению ранней летальности у мы продолжительности жизни [37]. Более того, выяснено, шей с мутацией MDM2 (отсутствует активность лигазы что снижение экспрессии р21 у облученных мышей сни- Е3), указывает на первичную роль MDM2 в деграда жает вероятность возникновения лимфомы, а уровень ции р53 [45]. Как было показано, MDM2 способен апоптоза у р21 дефицитных мышей выше, чем у мышей уменьшать ацетилирование белка р53, смещая остаток с достаточной (профицитной) экспрессией р21. р300, ингибируя и разрушая белок PCAF [46, 47].

Большое ретроспективное исследование, выпол- MDM2 также может рекрутировать гистоновые деаце ненное на гистологическом материале различного ти- тилазы HDAC1 и KAP1, которые являются дополни па ЛПЗ, достаточно четко дает понять, что повышение тельными инструментами, с помощью которых MDM экспрессии р21, напрямую коррелирующее в боль- репрессирует ацетилирование р53 или гистонов в ме шинстве случаев с повышенной экспрессией р53, стах связывания с р53. MDM2, экспрессиру емый из более характерно для анапластических вариантов эндогенных локусов, ассоциируется с р53 в зоне р лимфом, тогда как при CD30 негативных вариантах промотора [48, 49]. Гиперэкспрессируемый эктопиче лимфопролиферации экспрессии этих партнеров не ски MDM2 (MdmX) связывается с некоторыми други выявлено [38]. ми целевыми промоторами р53, за исключением са Исследователи из Китая на примере NK/Т- мого MDM2 промотора [49].

клеточной лимфомы показали, что интенсивность Повышение в 2 раза уровня MDM2 в клетках линии экспрессии р21 прямо коррелирует с экспрессией р53 H1299 в условиях тетрациклин-регулируемой экспрес и зависит от стадии заболевания и степени его злока- сии р53 сопровождается снижением уровня PIG3, но не чественности. Чем более продвинута стадия заболева- влияет на экспрессию р21 и Bax [48]. В связи с наличием ния и (или) имеется более злокачественный гистоло- способности смещать деацетилазы или убиквинировать гический вариант болезни, тем интенсивнее будет гистон H2B, а, возможно, и через другие механизмы экспрессия р21 и р53 [39]. MDM2, белок ассоцииру ется с р53-молекулой в зоне Данную тенденцию можно проследить и по мате- промоторов генов-мишеней, тем самым отрицательно риалам, представленным корейскими коллегами. Ана- влияя на трансактивацию р53 [50].

лиз экспрессии р21 и р53 в группе лимфом желудка Белок MDM2 является ферментом группы E3 систе продемонстрировал активность р21 и р53 белков прак- мы убиквитин-зависимого протеолиза, причем MDM тически только у В-крупноклеточных лимфом, тогда специфичен в отношении белка р53. Это означает, что как в группе В-зрелоклеточных MAL T-лимфом экс- белок MDM2 катализиру ет перенос активированного прессия р53 единичная, а р21 вовсе отсутствует [40]. убиквитина с фермента группы Е2 на белок р53. Таким Обзор литературных данных роли р21 при ЛПЗ рас- образом, белок MDM2 является Е3-лигазой. Маркиро крывает как минимум одну сторону вопроса, а именно, ванный убиквитином белок р53 является субстратом для экспрессия р21 в подавляющем большинстве случаев 26S-протеасомы, которая осуществляет протеолиз мо коррелирует с экспрессией р53 и характерна для быстро лекул белка р53. В нестрессовых у словиях постоянно растущих и продвинутых вариантов пролиферации. Это образуется комплекс MDM2:р53 и осуществляется про может оказаться полезным для определения дополни- теолиз р53. Этим объясняется низкая концентрация р тельных прогностических характеристик заболевания, в клетке в отсутствие стресса. Центральная роль белка и заставляет задуматься о р21-молекуле как о потенци- MDM2 в деградации белка р53 подтверждается и тем альной терапевтической мишени. фактом, что добавление к клеткам моноклональных 72 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ антител к комплексу MDM2:p53 приводит к значитель- MDM2, приводит к активации апоптоза в клетках опу ’ ному увеличению концентрации белка р53. Из приве- холи [55].

денных рассуждений становится понятным, что повы- Описано успешное применение новых терапевти шенная экспрессия белка MDM2 является онкогенным ческих агентов при хроническом лимфолейкозе.

фактором, а сам белок следу ет отнести к прото- Исходя из того, что в большинстве случаев хрониче онкогенам. ского лимфолейкоза имеется гиперэкспрессия MDM2, Анализ 87 случаев НХЛ и в более специализиро- препятствующая активации р53-опосредованного ванной группе В-клеточных MALT-лимфом на пред- апоптоза в ответ на стандартную химиотерапию, мет коэкспрессии р53, р21 и MDM2 [51, 52] выявил, Kensuke Kojima et al. предложили использовать малую что преимущество в коэкспрессии одновременно 3 молекулу Nutlin-3a, как антагонист MDM2-молекулы.

протеинов имели лимфомы более высокой степени Nutlin-3a вызывает как транскрипционно-зависимую, злокачественности. Авторы указывают, что в отсут- так и транскрипционно-независимую индукцию апо ствие экспрессии р53 не стоит ждать экспрессии р21 птотических механизмов, стимулируя, при сочетанном и MDM2, а одновременная экспрессия всех 3 белков применении с флударабином, значительное повы указывает на наличие, скорее всего, дикого (немутант- шение уровня р53 белка [56].

ного) р53. Вместе с тем дискордантная экспрессия Вполне очевидно, что самостоятельной роли в па р53 в отсутствие экспрессии р21 и MDM2 доказывает тогенезе хронических ЛПЗ MDM2 не играет. Несмо присутствие мутировавшего варианта р53 белка. тря на достаточно хорошо описанные общие механиз В свою очередь, отсутствие экспрессии MDM2 при со- мы взаимодействия в системе р53-MDM2, в доступных храненной экспрессии р53 и р21 не исключает как литературных источниках пока недостаточно данных, мутацию р53 с сохраненным (независимо) уровнем чтобы можно было сделать окончательный вывод р21, так и само нарушение регуляции MDM2 при ди- о роли подобного тандема в патогенезе лимфопроли ком типе р53. ферации.

На основании ретроспективного анализа ком плексного иммуногистохимического исследования Терапевтический потенциал гистологического материала 186 случаев фолликуляр- Несмотря на то что многие аспекты «жизни» мо ной лимфомы с использованием значительного коли- лекулы р53 еще не изучены, представляется вполне чества антител, в частности, к MDM2, p21 белкам, реальным использование регуляторных механизмов а также клинических данных, было отмечено, что слу- р53 в лечении многих заболеваний. Поскольку функ чаи с более высокой экспрессией MDM2 характери- ция р53 нарушена при многих пролиферативных зовались менее длительной общей выживаемостью. процессах, особенно злокачественного характера, не Это позволило включить ряд иммуногистохимических зависимо от морфологического типа ткани и лока критериев, в том числе уровень экспрессии MDM2, лизации, кажется логичным восстановление ингиби в международный прогностический индекс фоллику- торных свойств белка р53. Эта концепция получила лярной лимфомы [53]. наглядное подтверждение в экспериментальных мо Непосредственное участие MDM2 белка в лимфо- делях на животных, в которых реактивация нормаль могенезе было подтверждено в другом исследовании. ного белка р53 сопровождалась выраженной регрес На материале В-клеточных опухолей мышей показа- сией опухолевой массы [30–32].

но, что увеличенная экспрессия MDM2 способствует Каким же образом молекула р53 может быть реак пролиферации и уменьшает чувствительность к р53- тивирована? Одно из направлений, которое оказалось обусловленному апоптозу, что связано с угнетением успешным, это использование генной терапии для вве р53 и подавлением экспрессии р21. Отмечено также дения р53 в опухоль с использованием в качестве векто повышение уровня спонтанных генетических анома- ра аденовируса [57]. Существенно расширившееся по лий в клетках этих линий, что также способствовало нимание механизмов регуляции функций молекулы р В-клеточной трансформации in vivo [54]. привело к созданию препаратов (малых молекул), кото Недавнее исследование на материале анапласти- рые способны стабилизировать и активировать р53 про ческой крупноклеточной лимфомы, характеризую- теин. Недавно были идентифицированы клеточные щейся в большинстве случаев наличием транслокации ингибиторы сиртуина, белка, который может ограничи t(2;

5)(p23;

q35), которая кодирует, в свою очередь, про- вать диапазон активности р53 [58].

дукцию NPM-ALK белка со свойствами киназы, по- Надо отметить, что создание подобного рода казало, что вновь образованный белок обладает спо- лекарств вызвало большую диску ссию об их потенци собностью инактивировать и/или уменьшать уровень альной токсичности, обу словленной системной акти дикого р53. В связи с этим опухолевая линия с дан- вацией молекулы р53 в здоровых тканях. В экспери ной хромосомной аномалией обладает сниженной ментальных моделях на животных отсутствие MDM способностью к апоптозу и, несмотря на наличие не- в здоровых тканях, экспрессирующих р53, сопровож мутантного р53, — нормальной экспрессией MDM2. далось множеством побочных эффектов [59]. Авто Более того, применение Nutlin-3a, связывающего ры высказывают мнение, что, может быть, лекарства, ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЕ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ ингибирующие активность MDM2, будут менее эффек- Концепция реактивации нормальных функций ’ тивны, но с лучшей переносимостью в сравнении с пре- р53 белка в озлокачествленных клетках подтверждает паратами, удаляющими этот ген. Более того, поскольку ся экспериментальными исследованиями и рядом ис ингибиторы активности не являются генотоксичными, следований у человека, показавшими связь между они смогут избежать побочных эффектов, характерных мутациями р53-молекулы и плохим прогнозом [69].

для традиционной химиотерапии, также активирующей Однако клеточный ответ на стимуляцию р53 может функции молекулы р53 в клетках. Интересно, что в не- широко варьировать от смерти клетки до выживания, которых исследованиях было показано, что лечение что трудно предсказать. В самом деле, ингибирование ингибиторами MDM2 было эффективней, если в клетке функции р53 белка при раке молочной железы защи были запущены сигнальные механизмы, возникающие щает раковые клетки от некоторых видов химиотера при повреждении ДНК. Последнее обстоятельство от- пии и, таким образом, ассоцииру ется с плохим отве личает здоровую клетку от злокачественной [60]. Если том на лечение [70]. Возможно, подобного рода использование активаторов р53-молекулы кажется пер- эффект можно использовать как повод к изменению спективным при злокачественной пролиферации, сле- тактики терапевтического подхода. Отсутствие ответа дует оценить возможный побочный эффект ускоренно- опухолевой клетки на манипуляции с р53-молекулой го старения — следствие длительной системной терапии предполагает сохранение чувствительности к химио подобного рода препаратами. Восстановление функций терапевтическим препаратам, воздействующим на мутантного р53 в злокачественных опухолях — очень S-фазу или G2/M-фазу клеточного цикла. Эти лекар сложная задача, хотя описаны малые молекулы, способ- ственные препараты будут менее токсичными для нор ные реактивировать нормальные функции молекулы р53 мальной клетки [71]. Продолжением этой идеи явля [61]. Такого рода подход является наиболее трудным, но ется использование препаратов, активирующих р он обещает избирательное воздействие на злокачествен- с целью защиты здоровых клеток во время химиотера ные клетки с мутантной формой р53. пии [72, 73].

Одна из перспективных областей — это примене- Что интересно, идея хемопротекции нормальных ние малых молекул, способных угнетать активность клеток предлагает в том числе использовать лекар негативного регулятора р53-молекулы, — MDM2 бел- ственные препараты, ингибирующие р53-молекулу.

ка. Опубликовано достаточно большое количество Понятно, что большинство токсических эффектов работ по использованию таких малых молекул на мо- во время химиотерапии генотоксическими препара делях ЛПЗ у животных, и в частности мышей [62–68]. тами обусловлено активацией р53-молекулы и р53 Наиболее исследованы возможности одной из первых, индуцированной смертью радиочувствительных кле использованной в терапевтических целях, малой мо- ток гематопоэтической системы, эпителия кишечника лекулы Nutlin-3а. Изучены возможности нутлина в ак- и других тканей. В этом случае супрессия функций тивации апоптоза при лимфомах из клеток зоны ман- р53-молекулы в здоровых клетках поможет защитить тии как в монотерапии [62], так и в комбинации их от смерти и повысить толерантность больного с другими проапоптотическими препаратами, такими к более высоким дозам химиопрепаратов и лучевой как бортезомиб. При этом терапевтический ответ нагрузки [74, 75].

наблюдался даже в линии клеток, резистентных к мо- Что касается использования белка PUMA как ми нотерапии бортезомибом [63, 64]. Описаны терапевти- шени для потенциальных терапевтических воздей ческая активность Nutlin-3a на модели анапластиче- ствий, то препарат ABT-263, ингибирующий белок ской крупноклеточной лимфомы [65], у спешное его РUMA, недавно успешно прошел I фазу клинических применение в комбинации с другими цитостатически- испытаний [24].

ми препаратами при хроническом В-клеточном лим фолейкозе [66]. Выводы Проходят доклинические испытания и другие Таким образом, ЛПЗ являются широко распро малые молекулы, способные специфически угнетать страненными заболеваниями с тенденцией к постоян активность MDM2, отличаясь в большинстве своем ному росту. Они характеризуются значительной раз аффинностью действия, но имеющие сходные механиз- нородностью благодаря особенностям созревания мы и сопоставимую эффективность in vitro и in vivo. клеток иммунной системы, что в большинстве случа Подобные исследования, например, проведены на кле- ев ведет к фактической неизлечимости патологическо точной линии фолликулярной лимфомы с использова- го процесса, несмотря на разработанные в последнее нием малых молекул МI-319, MI-219 в сопоставлении время новые терапевтические агенты. Эти особенно с Nutlin-3a [67]. Описано эффективное применение сти диктуют необходимость разработки новых и кор малой молекулы MI-63, нарушающей взаимодействие рекции существующих подходов в терапии ЛПЗ.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.