авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |   ...   | 13 |

«ORGANIC TRACE ANALYSIS Klaus Beyermann Institute of Inorganic and Analytical Chemistry Mainz University Translated from the German: Organische Spurenanalyse Published by ...»

-- [ Страница 10 ] --

В аналитической химии следовых количеств органических веществ более важен специализированный вариант потенцио метрии, а именно связанный с установлением мембранного по тенциала. К числу мембранных электродов относятся стеклян ные (для определения Н+, К +, Na+, Ca 2 +, NH 3 и т. д.), жидкие и твердые.

Рис. 6.11. Ферментные электроды. (Воспроизведено с разрешения из работы [749] - © Springer Verlag.) А — стеклянный электрод, на поверхность которого нанесен слой фермента, им мобилизованного поперечными связями;

Б — электрод с тройной мембраной (внешняя мембрана — из целлюлозы, средняя мембрана — из газопроницае мого тефлона, внутренняя мембрана представляет собой ионселективную мем брану индикаторного электрода;

в случае СО2- или ЫН3-сенсоров — стеклянный рН-электрод).

Опубликован обзор по применению ионселективных элект родов в качестве биосенсоров [749]. Принцип их действия по казан на рис. 6.11. В ближайшие годы такие ферментные элект роды будут использоваться все шире и шире, чему должна способствовать их миниатюризация. Ферментные электроды и обладают высокой специфичностью, свойственной ферментатив ным реакциям. Их чувствительность зависит от типа реакции фермент — субстрат, конструкции мембраны и других парамет ров. Описаны 25 ферментных зондов, пригодных для опреде ления около 40 субстратов [750]. С их помощью, IB частности, можно определять «нгибирующие холинэстеразу инсектициды (фосфорорганичеокие соединения, карбаматы) в концентрациях порядка нанограммов на 1 мл. Мембранные электроды нуж даются в постоянном контроле их ферментативной активности, поскольку последняя может снижаться за счет бактериального загрязнения или по каким-либо другим причинам.

336 6. Методы определения и обнаружения Стеклянные мембранные микроэлектроды [751, 752] можно применять для прямого измерения рН биологических тканей [753]. Такие микроэлектроды могут оказаться полезными и в анализе следовых количеств органических веществ, например для контроля рН в каплях растворов.

В качестве примера применения потенциометрических мето дов можно привести методику определения следовых количеств пеницилламина (взаимодействием с избытком H g 2 + и опреде лением непрореагировавших ионов H g 2 + титрованием) [754].

Следовые количества фенолов (10~7—10~4 моль) можно опре делять реакцией с тирозиназой, иммобилизованной на поверх ности платинового электрода;

при этом образуются бензохино Fe(CN)6 4 ~ до Fe(CN) 6 3 ~, ны, которые окисляют ионы определяемого потенциометрически [755]. В другой работе для специфического определения летучих JM-нитрозаминов (в коли чествах около 10~8 моль) пробу пропускали через водный NaOH, раствор облучали ксеноновой лампой, а образовавшийся в результате фотолиза нитрозаминов нитрит-ион выделяли ионообменной хроматографией и определяли потенциометриче ски [75б] 6.10.2. Кулонометрические методы Основой кулонометрических методов является прямая про порциональная зависимость между количеством электричества и количеством окисленного или восстановленного вещества, об разующегося при прохождении электрического тока через электрохимическую ячейку. Количество электричества является, таким образом, мерой вызванных им химических изменений.

Кулонометрической ячейкой может быть реактор, в котором образуются очень малые количества реагентов, легко измеряе мые описанным выше способом.

Окончание реакции можно контролировать несколькими способами. Часто для этой цели используют потенциометриче ские или вольтамперометричеокие методы;

в этих случаях устанавливают два дополнительных индикаторных электрода и регистрируют изменение тока ИЛИ потенциала. Для определе ния конечной точки реакции могут применяться также фото метрия и почти любой другой метод, пригодный для регистра ции изменения состояния раствора [757].

Реагенты образуются непосредственно в кулонометрической ячейке, или их приготовляют отдельно и добавляют в ячейку [758, 759]. Описано несколько примеров использования куло нометрических методов в анализе следовых количеств органи ческих веществ. Кулонометрия применялась в сочетании с газо 6. Методы определения и обнаружения жидкостной хроматографией, особенно для определения следо вых количеств галогенсодержащих соединений.

Амины титруют точно так же, как и аммиак [760]. При этом в качестве фонового электролита используют боратный буфер ный раствор с рН 8,5, содержащий КВг, из которого образует ся гипобромит, быстро реагирующий с аминами или аммиаком.

Последние можно определять таким путем в субмикрограммо вых количествах [761].

Примерами применения кулонометрического титрования мо гут служить определения загрязняющих веществ [762], хлор содержащих примесей в воде [763], винилхлорида в воздухе в концентрации 1 млн- 1 [764]. Предлагалось определять перфе назин или флуфеназин в сыворотке путем экстракции гексаном, высокоэффективной жидкостной хроматографии и кулонометрим [765]i.

6.10.3. Вольтамперометрия Вольтамперометрические методы основаны на изучении ха рактеристик потенциал — ток помещенного в раствор поляри зуемого электрода. В отличие от потенциометрии (где сила тока равна нулю) в вольтамперометрии измеряют определенные токи. Для того чтобы вызвать прохождение электрического тока в течение всего процесса восстановления или окисления», должен быть обеспечен массоперенос в растворе. Существуют три механизма массопереноса:

1) конвекция, которая осуществляется перемешиванием или другим механическим воздействием на раствор;

2) диффузия в слое, примыкающем к поверхности электрода;

3) миграция ионов в растворе.

Разработано несколько вариантов вольтамперометрического»

метода. В полярографии применяется ртутный капающий элект род, поверхность которого постоянно обновляется, что способ ствует устранению побочных эффектов, свойственных другим вариантам вольтамперометрии. Полярографический процесс поддерживается за счет диффузионного механизма массопере носа. Компоненты раствора становятся электрохимически ак тивными при достижении определенного потенциала на электро де. Соответствующий так называемый потенциал полуволны является средством идентификации вещества. Специфичность вольтамперометрических методов повышается при правильно подобранных потенциалах. В некоторых вариантах вольтампе рометрии применяют твердые электроды.

В анализе следовых количеств органических веществ полез ны также специализированные варианты вольтамперометрии' (например, осциллополярография, импульсная полярография, 22— 338 6 Методы определения и обнаружения хронопотенциометрия), обеспечивающие во многих случаях бо лее высокую чувствительность. Повышению чувствительности способствует и применение дифференциальных методов.

Для аналитических целей лучше всего подходят перечис ленные ниже обратимые реакции:

1) восстановление хинонов:

2е~, 2Н+ о=/ )=о -( ' но-/ ^—он 2) восстановление азосоединений:

2е~, 2 Н + R—N=N—R ^ R—NHNH—R 3) восстановление N-нитрозосоединений:

2е~, 2 Н + 2е~, 2Н+ R_NO »- R — N H O H *• R — N H Вторая реакция происходит только в кислой среде.

В вольтамперометрии используются также следующие не обратимые реакции:

1) восстановление галогенсодержащих соединений, напри мер 2е~, 2Н+ RCH2Br RCH3 + Br" " 2) восстановление иитросоединений:

4е~, 4 Н + 2е~, 2Н+ RNO2 RNHOH *• R N H В случае ароматических соединений вторая стадия протекает только в кислой среде;

3) восстановление дисульфидов:

2Г, 2Н+ RSSR1 * RSH - RJSH Н 4) восстановление оксимов, гидразонов и азотистых гетеро циклических соединений со связью C = N :

+ 2с-, 2 Н =C=N— *• = С Н — N H — 5) восстановление гидразосоединений:

2е~, 2Н+ RCONHNH2 - R C O N H 2 + N H 6) восстановление N-оксидов:

2е~, 2Н+ N_ » = N + Н2О • S O 6. Методы определения и обнаружения Как видно из приведенных уравнений реакций, протекание мно гих из них в большой степени зависит от рН раствора.

Очевидно, не все функциональные группы электрохимически активны. Это обстоятельство способствует довольно высокой специфичности метода при определении соединений, обладаю щих электрохимически активными группами. Имеется несколь ко примеров применения электрохимических методов для опре деления тех или иных веществ в пробах, подвергшихся мини мальному обогащению, или даже вообще без каких-либо опера ций разделения.

При определении теофиллина (выделенного высокоэффек тивной жидкостной хроматографией) электрохимические мето ды по сравнению с детектированием по поглощению в ультра фиолетовой области обеспечивают большую гибкость и специ фичность [766]. Остаточные количества 2-фенилфенола в апель синовой кожуре в концентрациях около 1 млн" 1 могут быть определены электрохимическими методами после экстрагирова ния СН 2 С1 2 и очистки продуктов экстракции на колонке с фло риоилом [767]. 1,4-Бензодиазепины проще и удобнее определять методом дифференциальной импульсной полярографии, чем флуориметрическим методом, газо-жидкостной хроматографией (с пламенно-ионизационным детектором), спектрофотометрией или иммунологическими методами [768]. При определении ка техол аминов (выделенных высокоэффективной жидкостной хроматографией) электрохимические методы обеспечивают в 10 раз более высокую чувствительность по сравнению с флуо риметрией и ультрафиолетовой спектроскопией [769]1.

В ряде публикаций рассмотрены общие вопросы примени мости вольтамперометрических методов определения биологиче ски важных органических соединений [770] и пестицидов [771].

Уже в течение ряда лет промышленность выпускает обору дование для вольтамперометрических методов анализа, в том числе и для конструктивно очень сложных вариантов этих ме тодов. В последние годы наибольший интерес вызывает соче тание электрохимических методов с хроматографическими, осо бенно с высокоэффективной жидкостной хроматографией. Неко торые фирмы выпускают проточные ячейки объемом около 1 мкл. В электрохимических методах применяются электроды,, изготовленные из стеклообразного углерода, углеродной пасты»

амальгамированных золота или платины. В сфере органиче ских реакций наибольшую популярность завоевали электроды из углеродной пасты — смеси порошкообразного графита и си ликонового масла или парафина. В микроячейках такими электродами можно определять нанограммовые (и часто даже меньшие) количества веществ.

22* Таблица 6.19. Примеры электрохимического определения следовых количеств органических веществ Операции разделе- Лите Концентрация ния, предшествую Определяемое соединение Матрица или количество Метод определения ратура щие определению Обращенно-фазо Катехоламины и продукты их Жидкости биологическо- AM [782] метаболизма го происхождения вая ЖХ вэжх AM;

[783] Эпинефрин, норэпинефрин ПГ Обращенно-фазо 0,4—1 млн- Дигидроксифенилаланин, доф- Биологические ткани [784] AM амин, эпинефрин вая ВЭЖХ иох/жэ/жх AM 20 мкг/л Норметанефрин, 3-метокситир- Моча [785] амин Обращенно-фазо 50—200 нг AM Катехоламины [786] вая ВЭЖХ иох/вэжх AM Доли пикомолей Норэпинефрин, серотонин Ткани мозга [787] ЖХ AM 0, 2 пг Катехоламины Плазма [788] нг AM Эпинефрин, дигидроксифенил- [789] аланин Без разделения (I] AM Катехоламины Мозг [790] вэжх AM 2—900 нг/г Серотонин, дофамин Мозг [791] ЖЭ/ЖХ AM Ванилилминдальная кислота Моча [792] иох/вэжх материа- 25 пг AM Серотонин Биологические [793] лы ДИПГ N-Нитрозодиэтаноламин Шлифовальная жидкость мкмоль [794] ДИПГ 10~7 моль М-Нитрозамины [795] 8 ДИПГ ю- м жэ М-Нитрозамины [796] ДИПГ Охлаждающие жидкости, 0, 5 мкг N-Нитрозосоединения [797] применяемые при обра ботке металлов Нитрофенол, нитробензол 4 нг вэжх КРЭ жх Нитропиридины КРЭ Продукты нитрования приме- Вода КРЭ сей Пиридин-Ы-оксиды 0,5 мкг/мл ИПГ Имйдазо-1,4-бензодиазепины ЖЭ Кровь ДИПГ 5 0 нг/мл 1,4-Бензодиазепины Кровь ДИПГ 1 0 нг/мл ЖЭ Жидкости биологическо 1,4-Бензодиазепины ДИПГ го происхождения вэжх 1,4-Бензодиазепины 3 нг AM тех Сульфоксиды фенотиазинов 100 нмоль ИПГ Триамтерен 1 мкг/мл ПГ ДИПГ Паракват Моча, сыворотка 30 нг/мл вэжх Триптофан и продукты его нг AM метаболизма жэ/вэжх Мочевая кислота Зерновые продукты 2 мкг/г AM вэжх Теофиллин 10—20 млн- 1 AM Соединения фенольной приро- Вода 1 млрд- 1 Обращенно-фазо- AM ды вая ВЭЖХ жэ/жх 2-Фенилфенол Апельсины 1 млн- 1 AM Пентахлорфенолы ДИПГ Вода 0, 3 млн вэжх Галогенированные анилины пг Э (ацетон) 2-Меркаптобензимидазол ПТПГ Резина 0,1—3 мкг Диметилсульфид, диметилди- Вода 3 мкг/л ЖЭ ОПГ сульфид Дисульфирам ДИПГ 0, 2 мг/л пг Тиомочевина 10~ моль Продолжение табл в Операции разделе Концентрация Лите Матрица Определяемое соединение ния, предшествую- Метод определения или количество ратура щие определению вэжх Цистин 9 НГ AM [ 0,1 млн- Тетраметилтиурамдисульфид Растения пг [ Дитиокарбаматы Фрукты 0,5 мкг опг Метафос Вода 1 мкг/л допг 0,1 млн- Фосмет Яблоки пг Афлатоксины Пищевые продукты э/жх дипг Цефалоспорины 0,1 мкг/мл дипг [825) 30 млрд- Поверхностно-активные веще- ПГ (ВАМ) вэжх [826] ства 0,5 млн- Моющие средства Сточные воды ПГ (ВАМ) [827] 24 млн- Нитрилоуксусная кислота Вода дипг [828] Кухонные принадлежно Эмульгаторы ПГ (ВАМ) [829] сти ю- м Полициклические ароматиче- ДИПГ (в невод- [830] ных растворите ские углеводороды лях) жэ Вода мкг/л ДОПГ Фосмет, циклогексан [831] Акриламид (мономер) Полиакриламид ДИПГ э/жх 1 МЛН" 1 [832] Морфин, морфин-3-глюкуронид Кровь 1 нг AM 833] вэжх 0,5 млн- Сахарин Спиртные напитки ДИПГ 834] жэ Адриамицин Плазма 400 нг/мл 835] дипг жэ 0,1 млн" Робенидин Ткани цыпленка Катодная ПГ 836] жэ/иох/жх Робенидин Корм для животных 5 мг/л ДИПГ э Ацетаминофен Плазма 0, 2 мкг/мл AM жэ/вэжх [838] N- Фенил-1Ч-изопропилацетамид Почва 50 нг/кг ПГ э/жх J 4-Формилбензойная кислота Терефталевая кислота 0,1 мг/л пг ЖХ — жидкостная хроматография;

AM — амперометрия;

ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография;

ИОХ — Сокращения.

ионообменная хроматография;

Ж Э — Жидкостная экстракция;

ДИПГ — дифференциальная импульсная полярография;

КРЭ — капающий ртутный электрод;

ИПГ — импульсная полярография;

ТСХ — тонкослойная хроматография;

ПГ — полярография;

ПТПГ — п'еременнотоковая полярография;

Э — экстрагирование из твердой фазы;

ОПГ — осциллополярография;

Д О П Г — дифференциальная осциллополярография;

ВАМ — вольтамперометрия.

6. Методы определения и обнаружения В литературе рассмотрены общие проблемы использования электрохимических детекторов в высокоэффективной жидкост ной хроматографии [772—776] и критически оценены отдель ные типы таких детекторов [777—780]. Добавление к элюату электролитов позволяет применять электрохимические методы и при элюировании не проводящими ток растворителями [781].

Примеры применения электрохимических методов в анализе следовых количеств органических веществ приведены в табл. 6.19.

Для получения электрохимически активных производных •соединений, которые сами по себе не могут быть определены электрохимическими методами, предлагались ^некоторые реаген ты, содержащие одну или две нитрогруппы [841]. Соответствую щие реакции получения производных рекомендовалось осуще ствлять до хроматографического разделения пробы, а избыток реагента отделять в ходе операций разделения. Хроматографи Таблица 6.20. Реагенты, применяемые для введения электроактивных груп пировок Соединения, с которыми Реагент реагент образует произ- Литература водные Спирты, амины /=)-coci [842] NO Амины, аминокислоты O N-/~^-F [843],NO Амины, аминокислоты [844] O N-^J)-0S0 0H 2 Карбоновые кислоты [845] O2N-/ ))-CH2OC^ ^—^ \NHCH(CH3) Карбоновые кислоты [846] O2N-/~^—CH2Br /NO Альдегиды, кетоны [847] O N-Q_NHNH 2 344 6. Методы определения и обнаружения ческий процесс контролировали электрохимическими методами.

В табл. 6.20 приведены примеры таких реагентов. Шестиэлект ронное обратимое восстановление нитрогруппы обеспечивает высокую чувствительность определения.

В другом подходе определяемые соединения превращают в производные (часто путем окисления или восстановления) по завершении операций разделения. Таким путем можно опре делять нанограммовые количества катехоламинов. Окисляющий или восстанавливающий реагент добавляют к раствору опреде ляемого соединения «ли закрепляют на поверхности твердого электрода (обычно графитового или полупроводникового оксид ного) [849].

6.11. Химические методы обнаружения и определения Помимо различных методов инструментального анализа су ществуют полезные микрометоды обнаружения, основанные на химических реакциях. Предлагалось сочетать химические мето ды с газо-жидкостной хроматографией [850]';

при этом элюат направляют либо в реакционный сосуд, содержащий соответ ствующий реагент, либо на фильтровальную бумагу или пла стинку для тонкослойной хроматографии, импрепнированные этим реагентом [851]. В табл. 6.21 перечислены некоторые реагенты для функционального группового анализа (по данным работы [850]). Предел обнаружения в таких методах составляет 0,4 мкг/мкл. Опубликована обзорная статья по применению в газо-жидкостной хроматографии специфических реагентов для обнаружения соединений с определенными функциональными группами [852].

Разработана методика идентификации чистых (т. е. элюи рующихся в виде одного пика) соединений, выделенных мето дом газо-жидкостной хроматографии. В соответствии с этой методикой элюирующееся вещество концентрируют в центре стеклянного капилляра объемом 100 мкл, содержащего неболь шое количество катализатора [853]. Далее капилляр заполняют инертным газом или газом-реагентом (водородом, азотом, озо ном), запаивают и нагревают в течение 1—10 мин при 160— 300 °С. По завершении реакции капилляр помещают в систему ввода газо-жидкостного хроматографа и там вскрывают. Эта методика успешно применялась для идентификации летучих веществ, обусловливающих вкусовые качества пищевых продук тов [854—858].

Микрометоды химической идентификации (например, вос становлением L1A1H4 [860]) использовались также при обнару жении нанограммовых количеств веществ, сконденсированных 6. Методы определения и обнаружения Таблица 6.21. Обнаружение функциональных групп с помощью специфиче ских реагентов Обнаруживаемые соеди- Реагент Положительная реакция нения Голубое окрашивание К 2 Сг 2 0 7 —HNO Спирты Нитрат церия(IV) Желтое окрашивание Альдегиды 2,4-Динитрофенилгидра- Желтый осадок зин Реагент Шиффа Розовое окрашивание Кетоны 2,4-Динитрофенилгидр а- Желтый осадок зин Сложные эфиры Гидроксамат железа(Ш) Красное окрашивание Меркаптаны Нитропруссид натрия Красное окрашивание Изатин Зеленое окрашивание Ацетат свинца Желтый осадок Сульфиды Нитропруссид натрия Красное окрашивание Дисульфиды Нитропруссид натрия Красное окрашивание Изатин Зеленое окрашивание Амины Реагент Гинсберга Оранжевое окрашивание Нитропруссид натрия Красное окрашивание Голубое окрашивание Нитрилы Гидроксамат желе- Красное окрашивание за (III) — пропилен гликоль Ароматические соедине- НСНО—H 2 SO 4 Винно-красное окраши ния вание Алифатические ненасы- НСНО—H 2 SO 4 Винно-красное окраши щенные соединения вание Алкилгалогениды Белый осадок Спиртовый AgNCb Воспроизведено с разрешения из работы [850]. © Wiley-Interscience Inc.

при температуре жидкого азота [859]. Таким путем простые эфиры, спирты, фенолы и карбонильные соединения превраща ли в соответствующие углеводороды и последние затем анали зировали методом газо-жидкостной хроматографии.

6.12. Ферментативные реакции Для ферментативных реакций характерна высокая специ фичность [861]1 Понятно, что основная сфера применения фер ментативных методов ограничивается определением «физиоло гических» субстратов. Предел обнаружения таких веществ фер ментативными методами очень низок;

с помощью специальных, тщательно отработанных методик, например метода «фермент ного цикла», некоторые соединения удается определять в коли чествах до 10~16 вдоль. Весьма перспективным представляется также метод ферментативного введения радиоактивной метки, заключающийся в присоединении к субстрату той или иной Ф? Таблица 6.22. Примеры применения ферментативных реакций в аналитической химии следовых количеств органических веществ Концентра Применявшийся фермент Определяемое соединение ция или ко- Литература Метод определения личество [865] Половые феромоны альдегид- Люцифераза 20 пг Люминисценция ной природы [866] Медроксипрогестерон 30 фмоль 20р-Гидроксистероид-дегидрогеназа Флуориметрия [867] Тирозиндекарбоксилаза Пиридоксаль-5'-фосфат Сцинтилляция 10 пг [868] Альдегид-дегидрогеназа Ацетальдегид 120 млн- Фотометрия [869] Энитротион 1 нг Холинэстераза ТСХ, денситометрия [870] Параоксон Холинэстераза 0,3 нг ТСХ, денситометрия [871—876] Катехоламины Катехол-О-метилтрансфераза 1—10 пг Радиохимический [877] Норметанефрин Фенилэтаноламин-метилтрансфераза 5 пг Радиохимический [878] Катехол-метилтрансфераза Продукты метаболизма кате- 20 пг/мл Радиохимический холаминов, содержащие суль фогруппы [879] Катехол-метилтрансфераза Радиохимический 50 пг/мл Дигидроксифенилаланин [880] Гистамин-метилтрансфераза Радиохимический Гистамин 1 мкг/л 6. Методы определения и обнаружения группировки, меченной радиоактивным изотопом, выделении образующегося меченого соединения и определении его массы по степени радиоактивности.

В некоторых случаях ферментативными методами удается определять и синтетические соединения, представляющие инте рес для фармакологов, токсикологов или экологов. В частности, ферментативные методы применимы для определения веществ, угнетающих ферментные системы in vivo, например некоторых инсектицидов, ингибирующих холинэстеразу в концентрациях порядка нг/мл [863], некоторых гербицидов, подавляющих процессы окислительного фосфорилирования [864]. Другие при меры использования ферментативных методов для определения следовых количеств органических веществ приведены в табл. 6.22.

6.13 Иммунохимические методы При введении чужеродного соединения (антигена АГ) в ор ганизм животного в последнем вырабатываются молекулы ан тител (AT), связывающие введенный антиген. Антитела пред ставляют собой глобулярные белки иммуноглобулины, которые чрезвычайно специфично реагируют с соответствующими анти генами: АГ+АТ= (АГ—AT). При высоких концентрациях ис ходных веществ комплекс (АГ—AT) часто выпадает в осадок.

Применимость метода прежде всего определяется доступностью необходимых антител, представляющих собой своеобразный специфический реагент.

Обычно в иммунологических методах определения веществ используются так называемые субстехиометрические реакции, при которых к раствору определяемого соединения и его ана лога, содержащего радиоактивную метку, реагент добавляют в количестве, намного меньшем необходимого по уравнению реакции. Как немеченое, так и меченое соединения взаимодей ствуют с добавленным в недостатке реагентом абсолютно одина ково, поэтому отношение концентраций меченого и немеченого соединений будет одним и тем же в растворе и в связанном с реагентом состоянии. Таким образом, изучение продуктов реакции позволяет сделать выводы о составе раствора и, сле довательно, анализируемой пробы.

В иммунологии введение метки осуществляется путем добав ления антигена, содержащего радиоактивный изотоп;

этот ме тод называется радиоиммунохимическим анализом. Возмож ность применения метода зависит от доступности необходимого меченого антигена и, конечно, соответствующего антитела.

К последнему одновременно добавляют антиген из анализируе мой пробы и небольшое количество меченного радиоактивным 348 6 Методы определения и обнаружения изотопом антигена. В последующем конкурирующем взаимо действии меченого и немеченого антигенов с антителом высо кая концентрация определяемого (немеченого) соединения в пробе будет способствовать тому, что с антигеном свяжется не большое количество меченого антигена. Следовательно, степень радиоактивности выделенного комплекса антиген — антитело является прямой мерой концентрации антигена в пробе. Высо кая степень радиоактивности комплекса соответствует низкой концентрации определяемого (немеченого) следового компонен та в пробе.

В повседневной работе радиоактивные изотопы обычно ста раются не применять из-за опасности радиоактивного пораже ния, а также из-за сложностей в обращении с ними В связи с этим были предприняты поиски других методов маркирова ния Предлагалось, например, использовать флуоресцирующие маркирующие группы. Маркированное соединение (М с л —Фл) получают путем введения в определяемый следовый компонент (М сл ) флуоресцирующей группировки (Фл) (обычно остатка флуоресцеина [881, 882]). В ходе анализа (М с л ) из пробы и (Мсл—Фл) конкурируют в реакции с антигеном. По окончании реакции измеряют интенсивность флуоресценции комплекса ан тиген— антитело или раствора, оставшегося после отделения этого комплекса. Конечно, предварительно следует убедиться, что антиген-связывающие активности (М с л ) и (М с л —Фл) оди наковы.

В люминисцентном иммунохимическом анализе в молекулы определяемого соединения вводят хемилюминисцентный мар кер, например остаток изолюминола, выполняющий ту же роль, что и остаток флуоресцеина во флуориметрическом иммунохи мичеоком анализе. Относительное содержание маркированного соединения в комплексе антиген — антитело определяют реак цией с Н2Ог и пероксидазой.

Для аналогичных целей предлагалось маркирование путем введения электрохимически активных группировок, которые могут быть затем определены высокочувствительными электро химическими методами [883, 884].

В качестве маркеров применяют также ферменты. Основан ная на этом принципе специальная аппаратура для высокочув ствительного ферментативного иммунохимического анализа EMIT выпускается серийно. В этой аппаратуре определяемый лекарственный препарат маркируют ферментом (рис. 6.12).

С антителами взаимодействует как свободный, так и связанный с ферментом лекарственный препарат, причем в результате реакции связанного с ферментом лекарственного препарата ак тивность фермента подавляется (или иногда усиливается).

349 6. Методы определения и обнаружения Определение осуществляется путем измерения активности фер мента по отношению к определенному субстрату С. Чем выше концентрация немаркированного лекарственного препарата а анализируемой системе, тем меньше фермента связывается ан тителами и тем больше субстрата С- модифицируется фермен том.

Реакцию антигенов с антителами осуществляют или в гомо генной среде, или в гетерогенной системе;

в последнем случае гетерогенность обеспечивается связыванием антител с внутрен Фермент Фермент Лекарственный Лекарственный Лекарственный препарат препарат препарат (в пробе) Фермент недоступен Зля субстрата;

Субстрат доступен ферменту;

;

фермент неактивен фермент активен Рис. 6.12. Схематическое представление принципа действия аппаратуры EMIT;

применяемой для определения лекарственных препаратов методом гомогенного ферментативного иммунохимического анализа. (Воспроизведено с разрешения»

из работы [89]. © National Bureau of Standards, Washington, D. C.) ней стенкой реакционного сосуда. Такие сосуды можно изготав ливать заранее, выпускать серийно и продавать. Одна из таких гетерогенных систем носит название «ELISA» (система для ферментативного иммуносорбционного анализа). Иммунохими ческий анализ в гомогенной среде чаще применяют для опреде ления низкомолекулярных антигенов;

высокомолекулярные ан тигены в большинстве случаев анализируют в двухфазной си стеме.

Опубликовано несколько литературных обзоров по флуори метрическому [885—887] и ферментативному [888—895] ва риантам иммунохимичеокого анализа. В других статьях обзор ного характера рассмотрены последние достижения методов гомогенного иммунохимичеокого анализа [896, 897], проблемы надежности результатов в различных методах иммунохимиче ского анализа [898]', применение радиоиммунохимического ана лиза для определения антибиотиков и хемотерапевтических препаратов [899], лекарственных препаратов [900] и для ана лиза зерновых культур [901].

350 6. Методы определения и обнаружения Для получения иммунохимических реагентов, т. е. антител, химику-аналитику приходится использовать специфическую ме тодологию, с которой он в большинстве случаев не знаком.

В частности, для получения антител, специфичных по отноше лию к низкомолекулярным соединениям, последние обычно прежде всего должны быть присоединены к тем или иным бел кам-носителям, поскольку сами по себе такие соединения чаще всего не дают иммунной реакции. В качестве белка-носителя часто применяют бычий альбумин [902]1 В реакции антигена с белком-носителем не должны затрагиваться те группировки молекул антигена, которые участвуют в образовании комплекса антиген—антитело и которые, следовательно, необходимы для индуцирования образования специфических глобулиновых ан тител в организме животного после введения комплекса анти ген—альбумин. Процесс присоединения альбумина часто осу ществляют с помощью водорастворимого карбодиимида, связы вающего свободные аминогруппы альбумина с антигеном амид ными связями.

В аналитических методиках образовавшийся комплекс анти ген — антитело нужно отделять от непрореагировавшего мар кированного соединения. Эту операцию выполняют с помощью гель-фильтрации, осаждения полиэтиленгликолем (с молекуляр ной массой 6000), адсорбции на стенках специальных сосудов, а также посредством фиксации на покрытом слоем декстрана активированном угле или на особой магнитной твердой фазе, •состоящей из оксида железа, на который нанесен слой целлю лозы (эту твердую фазу можно легко собрать с помощью маг нита).

Альтернативный интересный метод отделения комплекса антиген — антитело (метод «второго антитела» или «двойного антитела») заключается в осаждении глобулина AT (и ком плекса антиген — антитело АГ—AT) вторым антителом. Роль специфического реагента и первого антитела обычно выпол няет глобулин кролика, вырабатываемый его организмом после введения антигена. При последующей реакции с антителами лошади или козы осаждается как иммуноглобулин кролика, так и комплекс АГ—AT.

Примеры применения иммунохимических методов анализа в определении следовых количеств органических веществ при ведены в табл. 6.23. Эти примеры показывают, что для имму нохимических методов (особенно для радиоиммунохимического анализа) характерны очень низкие пределы обнаружения.

О растущей значимости и популярности этих методов свиде тельствует тот факт, что из цитированной в табл. 6.23 литера туры приблизительно три четверти работ было опубликовано за три последних года — с 1980 по 1982 г. и только одна чет верть— за период с 1975 по 1979 г.

Таблица 6.23. Примеры применения иммунохимических методов для опре деления следовых количеств органических веществ Концентрация Метод опре Определяемое соединение Литература или количество деления [903] З'-Иодтиронин РИА [904] 12 фмоль 3,5-Дииодтиронин РИА [905] Тироксин, трииодтиронин ФИА [906] Тироксин 20 нг/л ФИА [907—913 J Трииодтиронин, тироксин РИА Трииодтиронин РИА [914] Тироксин РИА [915, 916J Тироксин [917] 2 мкг/л ФИА Тироксин [918] 50 мкг/л ФМИА Альдостерон [919— РИА Андростендион 925— РИА Кортизол 928— РИА Коотизол 936— ФИА Кортизол 939, 20 пг ЛИА 11-Дезоксигидрокортизон 941, РИА [943] Дезоксикортикостерон РИА 10 пг [944] Дегидроэпиандростерон ФИА 25 пг Эквилин РИА 5 пг [945, 17-Эпимет и лтестостерон 6 пг РИА [947] 2-Гидроксиэстрадиол [948] 10 пг/мл РИА 17- Гидроксипрогестерон [949] 40 пг/мл РИА 4-Гидроксиэстрон [950] 5 нг/мл РИА Эстриол [951] РИА 17р-Эстрадиол [952] 2 пг ЛИА 17|3-Эстрадиол [953] 8 пг/мл РИА Эстрон [954, 955J 10 пг РИА Эстрон-3-глюкуронид 25 пг ФИА [956] Прогестерон 8 пг РИА [957, 958] Прогестерон 5 пг [959, 96С?

ФИА Прогестерон 15 пг [961, 962{ ЛИА Преднизолон [963] РИА Некоторые стероиды [964, 965).

РИА Тренболон 24 пг в [966] 1 мл РИА мочи Простагландин F 2 a 20 пг [967-969J РИА Простагландин F 2 a пмоль [970, 971J ФИА Простагландин Е 2 РИА [972] Производные простагландина Ei РИА [973] Производные простагландина Е 2 РИА [974, 975J Производные простагландинов F i a [976—979 } и F2a Тромбоксан В 2 0 пг/мл [980, РИА 12-Гидрокси-ь-эйкозатетраен- [982] РИА 5,8,10,14-овая кислота Эпикефрин, норэпинефрин [983] РИА Норметанефрин [984] РИА ' НГ Ювенильные гормоны насекомых [985] 5 фмоль РИА Дигоксин [986—989 } РИА Дигоксин [990] ФИА или РИА Дигоксин [991] ФИА Дигоксин [992] ФМИА Дигитоксин [993] РИА, ФИА 35 Продолжение табл. 6 Концентрация Метод опре Определяемое соединение Литература или количество деления [994] Дигидродигоксин РИА [ Амитриптилин, кломипрамин РИА [ Амфетамин РИА [ Метиламфетамин нг РИА [ Ацебутолол 10 пг РИА Бензодиазепины [ ФИА Бензодиазепины 1000] РИА Карбамазепин-10,11-эпоксид 1001] ФИА Картеолол 0 4 нг/мл, 1002] РИА Кокаин РИА Колхицин 70 пг РИА Хлордиазепоксид 2 нг/мл РИА Флуфеназин 50 пг РИА •Флунизолид 20 пг/мл РИА Галоперидол 1008] 2 нг/мл РИА Гидроморфон, гидрокодон 1009] РИА.Метилэргометрин 0,5 нг/мл 1010] РИА Метадон 1011] 3 нг/мл РИА Леворфанол [1012] 1 нг/мл РИА Перфеназин [1013] 50 пг РИА Пропилтиоурацил [1014] РИА Фенциклидин [1015, 1016] 2 нг/мл РИА Пропранолол [1017] ФМИА Трифлуперазин 0,2 нг/мл [1018] РИА Тобрамицин ФМИА, ФИА [1019, 1020] Стильбэстрол 50 пг [1021] ФИА Антиэпилептические и наркотиче- [1022] ФИА ские препараты Некоторые лекарственные препа- [1023] ФМИА раты Теофиллин, фенитоин и другие 1024, 1025] лекарственные препараты Наркотические средства [1026] ФИА Афлатоксин В ( [1027] РИА Афлатоксин Е^ 1028, 1029] ФИА Токсин Т2 [1030] 0,5 млрд- РИА Охратоксин А [1031] 25 пг ФИА Фузикокцин [1032] 1 нг РИА Витамин А [1033] 1 нг РИА Витамин В 6 [1034] пмоль РИА 1035, 1036] 1,25-Дигидроксихолекальциферол 5 пг РИА [1037] 4-Ацетамидобифенил 66 пг РИА [1038] Диацетилбензидин 6 пг РИА [1039] Доксорубицин 10 мкг/л РИА [1040] Гентамицин 50 мкг/л ФМИА Пенициллин 10 нг/мл РИА 1041] Пенициллин 10 нг/мл ФИА 1042] Гентамицин 1043] ФМИА Гентамицин 1044] ФИА Пеплеомицин 50 пг 1045] ФИА Дауномицин, адриамицин пмоль 1046] ФИА Ванкомицин 40 пг/мл 1047] РИА Митомицин С 0,2 нг 1048] ФИА Серотонин 2 нмоль 1049, 1050] РИА. 6. Методы определения и обнаружения Продолжение табл. 6 Метод опре Концентрация Литература Определяемое соединение или количество деления [105Г 0,1 нг РИА 5-Метилтетрагидрофолат Холилглицин 25 мкг/л РИА [ Аденозинтрифосфат 10 фмоль РИА [1053] Каннабиноиды нг/мл ФИА [1054—1056' Никотин 10 нг/мл РИА [1057] Цитокинины пг РИА [1058] Абсцизовая кислота 25 пг ФИА [1059] 5-Гидроксииндолил-З-уксусная 100 пг РИА [1060, 1061] кислота Паратион РИА 10 нг Полихлорбифенилы РИА 2,3,7,8-Тетрахлордибензофуран 20 пг РИА Неионные моющие средства 15 нг/мл ФИА РИА — радиоиммунохимический анализ;

ФИА —ферментативный им Сокращения мунохимический анализ;

ФМИА —флуориметрический иммунохимический анализ, ЛИА — люминесцентный иммунохимический анализ.

Промышленность выпускает наборы реагентов для иммуно химического определения наиболее часто анализируемых ве ществ. Опубликованы результаты сравнительного изучения и общей оценки таких наборов. Примерами могут служить рабо ты по исследованию наборов для определения тироксина [908, 910, 911], альдостерона [924], кортизола [928, 932, 933, 935], р-эстрадиола [986], дигоксина [987, 989—991, 993], амфетами на [996], бензодиазепинов, [999, 1000], тобрамицина [1019], наркотических средств [1026], доксорубицина [1039], гентами цина [1044], каннабиноидов [1054, 1055].

Предложен быстрый и удобный вариант иммунохимического анализа, в котором реагенты закрепляют на полосках бумаги [1066, 1076].

В ряде случаев сообщалось о перекрестных реакциях, т. е. о неспецифических реакциях с соединениями, отличающи мися от определяемого вещества. Примерами пар определяе мое соединение — вещество, мешающее определению, являются З^-дииодтиронин/ЗЗ'.б-трииодтиронин [904], тироксин/трииодти ронин [911], кортизол/другие стероиды [928], кортизол/декса метазон [933], кортизол/различные стероиды [936], экви лин/эстрон-3-сульфат [946], преднизолон/20-дигидропреднизо лен [963], 6-оксопростагландин Ei/простагландин Ei [973], ди гитоксин/дигоксвн [993], карбамазепин-10,11-эпоксид/карбама зепин [1001], колхицин/люмиколхищш [1104]1, фенциклидога/не которые лекарственные препараты [1026], 1,25-дигидроксихоле кальциферол/другие продукты метаболизма холекальциферола 23— 354 6. Методы определения и обнаружения [1035, 1036], серотонин/триптамин [ 1049]', 2,3,7,8-тетрахлорди бензофуран/близкие по структуре соединения [1064]. В некото рых других случаях не было получено доказательств наличия перекрестных реакций. В тщательно подобранных условиях им мунохимического анализа, используя в качестве антигена энан тиомерное соединение, можно даже стереоспецифически опреде лять только этот э-нантиомер.

Перекрестные реакции могут быть причиной ложных поло жительных иммунологических реакций. В методах скрининга, например при скрининге лекарственных препаратов, наличие перекрестных реакций не является определяющим фактором, поскольку пробы, давшие положительную реакцию, далее в любом случае изучаются другими методами. В то же время из экономических и организационных соображений следует избе гать слишком большого числа перекрестных реакций. Приве денные выше данные свидетельствуют о том, что определению веществ иммунохимическими методами мешают только очень близкие по химической структуре соединения. Такая ситуация, в частности, характерна для изучения метаболизма веществ, когда структурно родственные соединения являются либо пред шественниками, либо продуктами последующих метаболических превращений определяемого вещества.

Несмотря на очень высокую специфичность иммунохимиче ских методов анализа, в литературе все чаще и чаще упоми наются те или иные операции разделения, вводимые для предо твращения перекрестных реакций или устранения других по мех. Примеры применения операций разделения в иммунохими ческих методах анализа приведены в табл. 6.24.

Результаты определения следовых количеств веществ им мунохимическими методами сравнивались с результатами, по лученными другими методами. Некоторые примеры такого срав нительного изучения приведены в табл. 6.25.

6.14. Связывание белками В некоторых случаях определение следовых количеств орга нических соединений" основывается на специфическом связы вании определяемого вещества белком. В общих чертах бази рующиеся на этом принципе методики аналогичны методикам иммунохимического анализа, и различие между ними заклю чается лишь в том, что при связывании белками не стимули руется образование антител, а используются уже готовые при родные белки. Здесь также применяется субстехиометрический подход. Пределы обнаружения в методе связывания белками и в иммунохимическом анализе примерно одинаковы. Метод связывания белками использовался при определении витамина Таблица 6.24. Примеры применения операций разделения, предшествующих иммунохимическому определению веществ Определяемое соединение Матрица 1 Операции разделения Литература Альдостерон Сыворотка Жидкостная экстракция [921, 922] Андростендион Сыворотка Жидкостная экстракция или хроматогра- [923, 926, 927] фия Кортизол Сыворотка Жидкостная экстракция [928, 933, 938, 940] Кортизол Моча Высокоэффективная жидкостная хрома- [929] тография 11 -Дезоксигидрокортизон Сыворотка Жидкостная экстракция/гель-хромато- [941, 942] графия 11-Дезоксигидрокортизон Плазма Жидкостная экстракция/хроматография Дегидроэпиандростерон Плазма Жидкостная экстракция/хроматография Эквилин Плазма Хроматография 2-Гидроксиэстрадиол Плазма Жидкостная экстракция/хроматография 17-Гидроксипрогестерон Плазма Жидкостная экстракция 4-Гидроксиэстрон Моча Хроматография на XAD 2 950] Эстрон Плазма [954] Хроматография на сеппак Q Прогестерон Слюна Жидкостная экстракция [958] Стероиды Простатическая ткань Экстрагирование из твердой фазы/жид- [964] костная экстракция Кортикостероиды Плазма Жидкостная экстракция/хроматография [965] Простагландины Плазма Жидкостная экстракция [972] Производные простагландинов Плазма Хроматография на сеппак Ci 8 [979] Тромбоксан В2 Плазма Жидкостная экстракция [ Дигоксин Сыворотка Жидкостная экстракция [ Кломипрамин, амитриптилин Плазма Жидкостная экстракция [ Амфетамин Пятна крови, спермы Жидкостная экстракция [ Бензодиазепины Биологические жидкости и Жидкостная экстракция [999, 1000] ткани Метилэргометрин Молоко, плазма Жидкостная экстракция [1010] Сыворотка, молоко Токсин Т Жидкостная экстракция [1030] Сыворотка 1,25-Дигидроксихолекальциферол [1035] Каннабиноиды Жидкости организма человека Жидкостная экстракция/хроматография Высокоэффективная жидкостная [1056] хроматография Полихлорбифенилы Молоко Жидкостная экстракция/хроматография [1063] Таблица 6.25. Результаты сравнения иммунохимических методов анализа с другими методами Метод иммуно* Определяемый следовый компо- Сравниваемый метод Результаты сравнения химического Литература нент анализа [1068] ВЭЖХ или МС (эта- Погрешность ВЭЖХ меньше, чем РИА Кортизол лонный метод) РИД [1069] Результаты РИА на 25% выше ре РИА МС Кортизол зультатов МС [1070] 6(3-Гидроксикортизол РИА Хорошая корреляция результатов, вэжх метод РИА прост, быстр [1071] Производные простагландина РИА ГЖХ—МС, ТСХ РИА наименее специфичен Е тех [1072] EMIT быстрее, чем ТСХ EMIT Бензодиазепины [1073] Бензодиазепины EMIT При повышенных концентрациях ди гжх азепинов результаты EMIT часто за нижены [1074] Результаты РИА выше примерно на РИА гжх Диазепам 60 нг/мл гжх Хорошее соответствие результатов [1075] EMIT Диазепам [1076] Бупропион РИА Отличное соответствие результатов вэжх Хорошая корреляция результатов (г= [1077] Доксэпин РИА вэжх = 0,99) гжх [1078] Хорошее соответствие результатов РИА Галоперидол только в тех случаях, когда РИА предшествует операция экстрагирова ния [1079] РИА Результаты всех трех методов согла гжх, гжх—мс Имипрамин суются между собой [1080] Номифензин РИА Результаты согласуются между собой гжх Результаты согласуются между собой [1081] Прокаинамид EMIT вэжх (г=0,98) гжх [1082] РИА Прокаинамид Хорошая корреляция результатов [1083] Фенициклидин РИА Приемлемая корреляция результатов гжх, EMIT трех методов Фенициклидин EMIT гжх Хорошая корреляция результатов [1084] (г=0,98) Фенобарбитон, фенитоин EMIT Корреляция результатов (/-=0,99 и вэжх [1085] 0,97) Метотрексат ВЭЖХ, EMIT РИА Соответствие результатов [1086] Гентамицин ВЭЖХ, ФМИА Наилучшие результаты обеспечивает РИА [1087] ФМИА Гентамицин EMIT, микробиологи- Наиболее высокие результаты при РИА [1088] ческое определение, РИА;

результаты других методов со гласуются между собой аденилирование Индолил-3-уксусная кислота Соответствие результатов, если РИА РИА ГЖХ—МС [1089] предшествует хроматография EMIT предпочтительнее по сравнению Каннабиноиды РИА, ГЖХ—МС EMIT [1090] с РИА и ГЖХ Д -Тетрагидроканнабинол РИА Результаты согласуются между собой ГЖХ—МС [1091] Тобрамицин Результаты согласуются между собой EMIT Микробиологическое [1092[ определение Тобрамицин EMIT, микробиологи- Наиболее точный метод EMIT РИА [1093] ческое определение ГЖХ—МС Наркотические средства В большинстве случаев отличное со EMIT [1094] ответствие результатов ГЖХ Результаты РИА выше Морфин РИА 1095] ГЖХ Результаты ГЖХ точнее Морфин EMIT 1096] ФМ Метод EMIT более специфичен Хинидин EMIT 1097] ВЭЖХ Результаты EMIT выше, метод ВЭЖХ Хинидин EMIT 1098] более специфичен ВЭЖХ Метод ВЭЖХ более специфичен, кор Хинидин EMIT [1099] реляция (г=0,95) РИА-—радиоиммунохимический анализ, ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография^ МС — масс спектромет Сокращения ^ рия, ТСХ — тонкослойная хроматография, ГЖХ — газо жидкостная хроматография, EMIT — ферментативный иммунохимический анализ (см, ел текст), ФМИА — флуориметрическиЙ иммунохимический анализ, ФМ — флуориметрия 358 6. Методы определения и обнаружения D [1100, 1101], 25-гидроксикальциферола [1102, 1103], 1,25-ди гидроксивитамина D [1104, 1105], ретиноевой кислоты [1106], 5-гидрокситриптамина [1107], кортизола [1108], прогестерона [1109], кортикостерона [1110], преднизолона [1111], нуклеино вых кислот [1112}, нитразепама и триазолама [1113].

6.15. Биологические методы С помощью биологических методов удается определить не которые вещества в чрезвычайно малых концентрациях, часто с поразительно высокой селективностью. Принцип биологиче ских методов определения сводится к контролю реакции биоло гической системы (клеток, интактных растений и животных) на определяемый следовый компонент.

Так, рибофлавин,.никотиновую кислоту, лантотеновую кис лоту, тиамин, пиридокоин и n-аминобензойную кислоту опреде Рис. 6.13. Упрощенный детектор для определения веществ по запаху. [Воспро изведено с разрешения из работы: Ettre L. S., McFadden W. H. (eds.), Ancillary Techniques of Gas Chromatography, p. Э67. © Wiley Interscience, Inc.] ляли в нанограммовых -количествах, а биотин, фолиевую кис лоту и витамин Bi2—-в пикограммовых количествах по их влия нию на рост некоторых микроорганизмов [1114].

Выделенные методом тонкослойной хроматографии фунгици ды можно обнаруживать по их способности замедлять рост микроорганизмов, например грибов. Для этой цели пластинку для тонкослойной хроматографии накладывают на культураль ную среду соответствующих грибов и инкубируют в течение 6. Методы определения и обнаружения -Время,мин Рис. 6.14. Оценка запахов продуктов хроматографического разделения «аромат ного яблочного экстракта». [Воспроизведено с разрешения из работы:

Flath R. A., Black D. R., Guadogni D. G., McFadden W. H., Schultz Т. Н., J. Agr.

Food Chem, 15, 29 (1967). © 1967 American Chemical Society.!

определенного времени, затем в культуре грибов отмечают признаки замедления роста.

Гладкая мускулатура сокращается при введении нанограм мовых количеств гистамина. Присутствие антигистаминных ве ществ подавляет этот эффект. На этом принципе (с помощью подвздошной кишки морской свинки) основан метод определе ния как гистамина, так и антигистаминных препаратов. Анало гичный метод определения небольших количеств окситоцина базируется на его способности сокращать матку беременных животных. Простагландины также действуют на гладкую мус кулатуру [1115].

Если в небольшую клетку, расположенную на выходе газо жидкостного хроматографа, поместить самцов совки хлопковой, а в хроматографическую колонку ввести продукты экстрагиро вания абдоминальных сегментов самок этой бабочки, то появ ление пика активного вещества на выходе колонки сопровож 360 6. Методы определения и обнаружения дается «поднятием усиков, дрожанием крылышек и попытками копулировать друг с другом» [1116]. Такой оригинальный мето дический прием существенно облегчает весьма специфическую работу по поиску природных или синтетических половых аттрак тантов.

Очень чувствительным «детектором» по отношению к паху чим веществам является нос человека. Человек по запаху мо жет обнаружить присутствие 106 молекул ионона, этилдисуль фида, скатола, ванилина, кумарина или масляной кислоты в 1 см3 воздуха [1117]. Перечисленные вещества можно обнару живать таким методом и после газо-жидкостной хроматографии (рис. 6.13 и 6.14);

В частности, так определяли соединения, об условливающие запах сырой и питьевой воды [1118], вина [1119] и навоза [1120]. Во всех перечисленных работах детек тирование по запаху сочетали с газо-жидкостной хроматогра фией. Пороговые концентрации приведены в перечисленных выше публикациях.

Возможно и количественное определение пахучих веществ с помощью так ^называемых «нюхательных ящиков», содержа щих газообразную пробу с примесью следовых количеств опре деляемого вещества. На выходном отверстии ящика химик аналитик проверяет наличие или отсутствие запаха. Находя щуюся в ящике смесь разбавляют чистым газом до тех пор, пока не перестанет ощущаться запах определяемого вещества.

Затем по количеству добавленного газа-разбавителя можно определить первоначальную концентрацию пахучего следового компонента (или компонентов). Для такого анализа нет необ ходимости в какой-либо специальной подготовке. «Любая по нятливая и внимательная девушка может стать отличным ис пытателем» [1121].

Литература 1. Baker D. R., Williams R. С, Steichen I. C, J. Chromatog. Sci., 12, (1974).

2. Jupille T. J., J. Chromatog. Sci., 170, 160 (1979).

3. Beyermann K., Fortschritte Chem. Forschung, 11, 473 (1969).

4. Geick R., Z. Anal. Chem., 288, 1 (1977).

5. Ferraro J. R., Basile L. J., Fourier Transform IR Spectroscopy, 2 Vols., Academic Press, New York (1979).

6 Cournoyer R., Shearer J. C, Anderson D. H., Anal. Chem., 60, (1977).

7. McDonald R. S., Anal. Chem., 54, 1250 (1982).

8. Sloan H. J., Obremski R. J., Appl. Spectrosc, 31, 506 (1977).

9. Kopec С R., Washington W. D., Midkiff С R., J. Forensic Sci, 23, (1978).

10. Miller R. G. J. (ed.), Laboratory Methods in Infrared Spectroscopy, Hey den, London (1965).

11 Berthelemy J. P., Chopin A., Deleu R., Closset J. L., Talanta, 26, (1979).

12. Maulhardt H., Kunath D., Talanta, 29, 237 (1982).

6. Методы определения И обнаружения 13. Fuwa К. (ed.), Recent Advances in Analytical Spectroscopy, pp. 285^ 289. Pergamon Press, Oxford (1982).

14. Mamiya M., Jshii E., Murakami Т., Bunseki Kagaku, 30, 385 (1981).

15. Fuller M. P., Griffiths P. R., Appl. Spectrosc, 34, 533 (1980b 16. Beyermann K, Z. Anal. Chem., 226, 16 (1967).

17. Beyermann K-, Clin. Chim. Acta, 18, 143 (1967).

18. Beyermann K., Roder E., Z. Anal. Chem., 230, 347 (1967).

19. Beyermann K-, Z. Anal. Chem., 230, 414 (1967).

20. Beyermann K., Dietz J., Z. Anal. Chem., 268, 192 (1974).

21. Katon J. E, Phillips D. В., Appl. Spectrosc., Rev., 7, 1 (1974).

22. Brickell W. S., Proc Anal. Div. Chem. Soc, 15, 343 (1978).

23. Freymann R., Bullier A., Capderroque G., Selim M., Analusis, 6, (1976).

24. Lynch P. F., Tang S., Brown С W., Anal. Chem., 47, 1696 (1975). 25. Hallam H. E., Vibrational Spectroscopy of Trapped Species, Wiley, New York (1973).

26. Meyer В., Low Temperature Spectroscopy, Elsevier, Amsterdam (1971).

27. Mamantov G., Wehry E. L, Kemmerer R. R., Hinton E. R., Anal. Chem „ 49, 86 (1977).

28. Stroupe R. C, Tokousbalides P., Dickinson R. В., Wehry E. L., Maman tov G,, Anal. Chem., 49, 701 (1977).

29. Wehry E. L, Mamantov G., Anal Chem., 51, 643A (1979).

30. Reedy G. Т., Bourne S.,.Cunningham P. Т., Anal. Chem, 51, 1535 (1979.

31. Bourne S., Reedy G. Т., Cunningham P. Т., J. Chromatog. Sci., 17, (1979).

32. Шпольский Э. В. Успехи физ. наук, 68, 51 (1959).

33. Kirkbright G. F., Lima G. C, Analyst,-99, 338 (1974).

34. Wall D. L., Mantz A. W., Appl. Spectrosc, 31, 525 (1977).

35 Griffiths P. R., Appl. Spectrosc, 31, 284 (1977).

36. Krishnan K-, Curbelo R., Chiha P., Noonan R. С, J. Chromatog Sei 413 (1979).

37. Hanna D., Hangac G., Hohne В. Л., Small G. W., Wieboldt R. C, Isen hour T. L., J. Chromatog. Sci., 17, 423 (1979).

38. Low M. I. D., Freeman S. K., Anal. Chem., 39, 194 (1967).

39. Freeman K,., in Ettre L. S., McFadden W. H (eds), Ancillary Techniques of Gas Chromatography, p. 227, Wiley, New York (1969).


40. Lephardt D., Bulin B. J., Anal. Chem., 45, 70,6 (1973).

41. Low С W., Richards J. F., Appl. Spectrosc, 29, 15 (1975) 42. Katlafsky В., Dietrich M. W., Appl Specrosc, 29, 24 (1975) 43. Brady R. F., Anal. Chem., 47, 1425 (1975).

44. Rossiter V., Intern. Lab., 12, No. 2, 42 (1982).

45. Krishnan K., Brown R, H., Hill S. L., Simonoff S. C, Olson M L Kuehl D., Intern. Lab., 11, No. 4, 66 (1981).

46. Williams S. S., Lam R. В., Sparks D. Т., Isenhour T. L., Hass I R., Anal Chim. Acta, 138, 1 (1982).

47. Lowry S. R., Huppler D., Anal. Chem, 53, 889 (1981) 48. Kizer K. L., Am. Lab, 5, No. 6, 40 (1973).

49. Azarraga L. V., McCall A. C, FTIR-Spectrometry of GC Effluents, Envi ronmental Protection Technology, EPA Series 660/2-73-034 (1974).

50. Mattson D. R., Julian R. L., J. Chromatog. Sci., 17, 416 (1979).

51. Gomez-Taylor M. M., Griffiths P. R., Anal. Chem., 50, 422 (1978).

52. Griffiths P. R., Appl. Spectrosc, 31, 284 (1977).

53. Krishnan K., Curbelo R, Chiha P., Noonan R. C, J. Chromatoa1 Sci 413 (1979). " ' 54. Shafer K. H., Lucas S. V., Jakobsen R. J., J. Chromatog. Sci 17 K1979).

362 6. Методы определения и обнаружения 55. Gomez-Taylor М. М., Kvehl D., Griffiths R., Intern. J. Environ. Anal.

Chem.,51, 103 (1978).

56. Uden P. C, Carpenter A. P., Hackett H. M., Henderson D. E., Siggia S., Anal. Chem., 51, 38 (1979) 57. Malissa H., Z. Anal. Chem., 311, 123 (1982).

58. Hembree D. M., Garrison A. A., Crocombe R. A., Yokley R. A., Wehry E. L, Mamantov G., Anal. Chem., 53, 1783 (1981).

59. Shafer K. #., Cooke M., DeRoos F., Jakobsen R. J., Rosario 0., Mulik J. D., Appl. Spectrosc, 35, 469 (1981).

60. Rossiter V., Intern. Lab., 12, No. 2, 42 (1982).

61. Gurka D. F., Laska P. R., Titus R., J. Chromatog. Sci., 20, 145 (1982).

62. Podolak G. E., McKenzie R. M., Rinehart D. S., Mazur J. F., Am. Ind. Hyg.

Assoc. J., 42, 734 (1981).

63. Gomez-Taylor M. M., Kuehl D., Griffiths P. R., Appl. Spectrosc, 30, (1976).

64. Lemar M., Versaud P., Porthault M., J. Chromatog., 132, 295 (1977).

65. Parris N. A., J. Chromatog. Sci., 17, 541 (1979).

66. Cassidy R. M., Niro С. М., J. Chromatog., 126, 787 (1976).

67. Kuehl D., Griffiths P. R., J. Chromatog. Sci., 17, 741 (1979).

68. Kizer K. L., Mantz A. W., Bonar L. C, Am. Lab., 7, No. 5, 85 (1975).

69. Fuller M. P., Griffiths P. R., Am. Lab., 10, No. 10, 69, 1978;

Anal. Chem., 50, 1906 (1978).

70. Oba K., Miura K., Sekiguchi H., Yagi R., Mori A., Water Res., 10, (1976).

71. Kunkel., Peitscher G., Espeter K-, Tenside, 14, 199 (1977).

72. Hellmann H., Z. Anal. Chem., 295, 393 (1979).

73. Hellmann H., Z. Anal. Chem., 293, 359 (1978).

74. Hellmann H., Z. Anal. Chem., 294, 379 (1979).

75. Gag J. A., Merck N. F., J. Forens. Sci., 22, 358 (1977).

76. Brannon W. L., Benson W. R., Schwartzman C, J. Assoc. Off. Anal. Chem., 59, 1404 (1976).

77. Vilcins G., Beitr. Tabaksforsch., 8, 181 (1979).

78. Luskus L. J., Kilian H. J., Lackey W. W., Biggs J. D., J. Forens. Sci., 22, 500 (1977).

79. Diaz-Rueda J., Sloane H. J., Obremski R. J., Appl. Spectrosc., 31, (1977).

80. Baker В. В., Am. Ind. Hyg. Assoc. J., 43, 98 (1982).

81. Freund S. M., Maier W. В., Holland R. F., Beattie W. H., Anal. Chem., 50, 1260 (1978).

82. Карнишин А. А., Федорова Т. С, Царфин Я. А., Зорина Н. И. Ж. аналит.

химии, 32, 2250 (1977).

83. Lowry S. R., Banzer I. D., Anal. Chem., 50, 1187 (1978).

84. Wilkinson D. R., Pavlikowski F., lenson P., J. Forens. Sci., 21, (1976).

85. Moffat A. C, Proc. Anal. Chem. Soc, 13, 355 (1976).

86. Blackpowders V., Washington W. D., Kopec R. J., Midkiff С R., J. Assoc.

Off. Anal. Chem., 60, 1331 (1977).

87. Kahn L., Dudenbostel B. F., Speis D. N., Karras G., Intern. Lab., May/June, 74 (1977).

88. Caddy D. E., Proc. Anal. Div. Chem. Soc, 13, 45 (1976).

89. Brajerovd H., Knizek J., Chem. Prum., 30, 601 (1980).

90. Riley R. G., Beyn R. G., in Trace Organic Analysis, pp. 33—40 NBS, Washington (1979).

91. Zurcher F., Thuer M., Environ. Sci. Technol., 12, 838 (1978).

92. Worley J. W., Rueppel M. L, Rupel F. L., Anal. Chem., 52, 1845 (1980).

93. Ganguly S. K., Bhattacharya K. P., Kar P., Sci. Cult. (Calcutta), 43, (1977).

6. Методы определения и обнаружения 94. Coutselenis A., Kentarchou P., Boukis D., Forens. Sci., 8, 251 (1976).

95. DeBeer J. О., Van Peteghem С H., Hendrickx A. M., J. Assoc. Off. Anal.

Chem., 61, 1140 (1978).

96. Cotugno M., Sansone G., Gallone U., Barone E., Rossi L, Biondi A., Boll. Soc. Hal. Biol. Sper., 58, 295 (1982).

97 Erickson M. D, Newton D. L., Pellizzari E. D., Tomer К- В., Dropkin D. D., J Chromatog. Sci., 17, 449 (1979).

98. Manura J. J., Chao J. M., Saferstein R., J. Forens. Sci., 23, 44 (1978).

99. Trinler W. A., Reuland D. J., J. Forens. Sci., 23, 37 (1978).

100. Shafer K. H., Lucas S. V., Jakobsen R. L, J. Chromatog. Sci., 17, (1979).

101. Gallaher K. L, Grasselli J. G., Appl. Spectrosc, 31, 456 (1977).

102. Loader J., Basic Laser Raman Spectroscopy, Heyden-Sadtler, New York (1970).

103. Anderson M. E., Muggli R. Z., Anal. Chem., 53, 1772 (1981).

104. Rogers L. В., Stuart J. D., Gross L. P., Mallory Т. В., Carreira L. A., Anal. Chem., 49, 959 (1977).

105. Van Haverbeke L., Herman M. A., Anal. Chem., 51, 932 (1979).

106 Etz E. S., Wise S. A., Heinrich K. F. J., in Trace Organic Analysis, pp. 723—729. NBS, Washington (1979).

107. Nakamura H., Yoshimori K-, Itoh J., Takagi M., Ueno K., Mikrochim. Acta,, 131 (1981 11).

108. Ikeda K-, Higuchi S., Tanaka S., Bunseki Kagaku, 30, 701 (1981).

109. Van Haverbeke L., Janssens J. F., Herman M. A., Intern. J. Environ. Anal.

Chem., 10,205 (1981).

110. Hoskins L. C., Alexander V., Anal. Chem., 49, 695 (1977).

111. Morris M. D., Anal. Lett., 9, 469 (1975).

112. Udenfriend S., Fluorescence Assay, 2 Vols. Academic Press, New York (1969).

113. Guilbault G. G., Fluorescence, Dekker, New York (1967).

114. Zander M., Phosphorimetry, Academic Press, New York (1968).

115. Wehry E. L., Modern Fluorescence Spectroscopy, 4 Vols. Plenum Press, New York (1976, 1981).

116. Hershberger L. W., Callis J.B., Christian G. D., Jr., Anal. Chem., 51, (1979).

117. Herman T. S., Harvey R, S., Appl. Spectrosc, 23, 435, 451, 461, (1969).

118. Mathiasch В., Anal. Lett., 4, 519 (1971).

119. Colmsjo A., Stenberg L., Anal. Chem., 51, 145 (1979);

J. Chromatog., 205 (1978).

120. Miller J. N., Bridges I. W., in Reid E. (ed.), Blood Drugs and Other Analy tical Challenges, Horwood, Chichester (1978).

121. Parker R. Т., Freelander R. S., Dunlap R. В., Anal. Chim. Acta, 120 (1980).

122. Parker R. Т., Freelander R. S., Dunlap R. В., Anal. Chim. Acta, 119, (1980).

123. Miller J. N.. TrAC, 1, 31 (1981).

124. Ward J. L., Walden G. L., Winefordner J. D., Talanta, 28, 201 (1981).

125. Donkerbroek J. J., van Eikema Hommes N. J. R., Gooijer C, Velthorst N. H Frei R. W., Chromatographia, 15, 218 (1982).

126. Gifford L. A., Miller J. N.. Burns D. Т., Bridges J. W., J. Chromatog., 15 (1975).

127. Dekirmenjian H., Javaid J. I., Liskevych U., Davis J. M., Anal Biochem 105, 6 (1980).

128. Tokunaga H., Kimura Т., Kawamura J., Chem. Pharm Bull, 30 (1982).

129. Muhiddin K. A., Johnston A., Br. J. Clin. Pharmacol., 12, 283 (1981).

364 6. Методы определения и обнаружения 130. Folestad S., Johnson L., Josefsson В., Galle В., Anal. Chem., 54, (1982).

131. Luten J. В., J. Food Sci., 46, 958 (1981) 132. Lewis S. J., Fennessy M. R., Agents Action, 11, 228 (1981).

133. Myers G., Donlon M., Kaliner M., J. Allergy Clin. Immunol, 67, (1981).

134. lino M., Yu R. S. Т., Can D. J., Plant Physiol., 66, 1099 (1980).

135. Furusawa M., Tachibana M., Tsuchiya Т., Bunseki Kagaku, 29, (1980).

136. Brown J. C, Duncanson J. A., Small G. J., Anal. Chem., 52, 1711 (1980).

137. Richardson J. H., Larson K- M., Haugen G. R., Johnson D. C, Clark son J. E., Anal. Chim. Acta, 116, 407 (1980).

138. Attiyat A. S., Christian G. D., Jr., Callis J. В., Microchem. J., 26, (1981).

139. Lai E. P., Inman E. L., Winefordner J. D., Talanta, 29, 601 (1982).

140. Strojny N., de Silva J. A. F., Anal. Chem., 52, 1554 (1980).

141. Aaron J. J., Ward J. L., Winefordner J. D., Analusis, 10, 98 (1982).

142. Kitzrow W., Franke L., Uebelhack R., Seidet K., Acta Biol. Med. Ger., 39, 489 (1980).


143. Ramasamy S. M., Hurtubise R. J., Anal. Chem., 54, 1642 (1982).

144. Hirauchi K, Fujishita A., Chem. Pharm. Bull., 28, 1986 (1980).

145. Vo-Dinh Т., Gamage R. В., Martinez P. R., Anal. Chim. Acta, 118, (1980).

146. Inman E. L,, Jurgensen A., Winefordner J. D., Talanta, 29, 423 (1982).

147. Pao Y. H., Optoacoustic Spectroscopy and Detection, Academic Press, New York (1977).

148. Rosencwaig A., Photoacoustics and Photoacoustic Spectroscopy, Wiley, Chichester (1980).

149. Beadle B. C, Donoghue B. R., U. K. At. Energy Res. Establ. Rept., AERE-R 9568 (1980).

150. Lloyd L. В., Yeates R., Eyring E. M., Anal. Chem., 54, 549 (1982).

151. Castleden S. L., Elliott С M., Kirkbright G. F., Spillane D. E. M., Anal.

Chem., 51, 2152 (1979).

152. Ashworth С M., Castleden S. L., Kirkbright G. F., Spillane D, E, M., J. Photoacoust., I, 151 (1982). -«4 • 153. Schneider S., Moeller U., Koest H. P., Coufal H., J. Photoacoust, 1, (1982).

154. Voigtman E., Jurgensen A., Winefordner J. D., Analyst, 107, 408 (1982).

155. Adams M. J., Beadle B. C, Kirkbright G. F., Anal. Chem., 50, (1978).

156. Kreuzer L. В., Anal. Chem., 50, 597A (1978).

157. Chalmers J. M., Stay B. J., Kirkbright G. F., Spillane D. E. M., Beadle В. С, Analyst, 106, 1179 (1981).

158. Krishnan K-, Appl. Spectrosc, 35, 549 (1981).

159. Feser K., Kogler W., J. Chromatog. Sci., 17, 57 (1979).

160. Milberg R. M., Cook J. C, J. Chromatog. Sci., 17, 17 (1979).

161. Ten Noever de Brauw M. C, J. Chromatog., 165, 207 (1979).

162. Scott R. P. W., in Trace Organic Analysis, pp. 637—645. NBS, Washing ton (1979).

163. Burlingame A. L., Shackleton С H. L., Howe I., Chizhov O. S., Anal. Chem., 50, 346R (1978).

164. Seibl J., Ann. Chim. (Rome), 67, 599 (1977).

165. Reynolds W. D., Anal. Chem., 51, 283A (1979).

166. Leinster P., Perry R., Young R. J., Talanta, 24, 205 (1977).

167. Keith L. H., J. Chromatog. Sci., 17, 48 (1979).

168. Pierce S. K-, Gearhart H. L., Payne-Bose D., Talanta, 24, 473 (1977).

169. Vander Velde G., Ryan J. F., J. Chromatog. Sci., 13, 322 (1975).

6. Методы определения и обнаружения 170. Alford A., Biomed. Mass. Spectrom., 5, 259 (1978).

171. Jahr D., Binnemann P., Z. Anal. Chem., 297, 341 (1979);

298, 337 (1979).

172. Kubelka V., Mitera J., Novak /., Mostecky L, Sci. Papers Prague Inst.

Chem. Technol., F 22, 115 (1978).

173. Gough T. A., Analyst, 103, 785 (1978).

174. Poole С F., Zlatkis A., J. Chromatog. Sci., 17, 115 (1979).

175. Cattabeni F., Ann. Chim. (Rome), 71, 77 (1981).

176. Anal. Proc, 17, 320 (1980).

177. Gaskell S. J., TrAC, 1, 110 (1982).

178. Gilbert J., Self R., Chem. Soc. Rev., 19, 255 (1980).

179. Dougherty R. C, Biomed. Mass Spectrom., 8, 283 (1981).

180. Mahle N. H., Shadoff L. A., Biomed. Mass Spectrom., 9, 45 (1982).

181. Remane H., Herzschuh R., Massenspektrometrie in der organische Chemie, Vieweg, Braunschweig (1977).

182. de Leenheer A. P., Roncucci R. R. (eds.), Quantitative Mass Spectrometry in Life Sciences, Elsevier, Amsterdam (1977).

183. Frlgerio A., Castagnoli N. (eds.), Advances in Mass Spectrometry in Biochemistry and Medicine, Vol. 1, Wiley, New York (1976).

184. Frigerio A. (ed.), Advances in Mass Spectrometry in Biochemistry and Medicine, Vol. II, Wiley, New York (1977).

185. Metzner K., Gaschromatographische Spurenanalyse, Akad. Verlag, Leipzig (1976).

186. Scott R. P. W., Liquid Chromatography Detectors, Elsevier, Amsterdam (1977).

187. Facchetti S. (ed.), Application of Mass Spectrometry to Trace Analysis, Elsevier, Amsterdam (1982).

188. Frigerio A. (ed.), Recent Developments in Mass Spectrometry in Bioche mistry, Medicine and Environmental Research, Elsevier, Amsterdam (1981).

189. Middleditch B. S., Missler S. R., Hines H. В., Mass Spectrometry of Prio rity Pollutants, Plenum Press, New York (1981).

190. Middleditch B. S., Practical Mass Spectrometry, Plenum Press, New York (1979).

191. Porter С J., Bey поп J. H., Ast Т., Org. Mass Spectrom., 16, 101 (1981).

192. Page J. A., Anal. Proc, 19, 307 (1982).

193. Dougherty R. C, Anal. Chem., 53, 625A (1981).

194. Wood P. J., Biomed. Mass Spectrom., 9, 302 (1982).

195. Roboz J., Greaves J., Holland J. F., Bekesi G. J., Anal. Chem., 54, (1982), 196. Dougherty R. C, Wander J. D., Biomed. Mass Spectrom., 7, 401 (1980).

197. Schulten H. R., Lehmann W. D., Mikrochim. Acta, 113 (1978 11).

198. Soltmann В., Sweeley С. С, Holland J. F., Anal. Chem., 49, 1164 (1977).

199. Peele G. L, Brent D. A., Biomed. Mass Spectrom., 5, 180 (1978).

200. Matsuo Т., Matsuda H., Katakuse L, Anal. Chem., 51, 69 (1979).

201. Olson K. L, Cook J. C, Rinehart K. L., Biomed. Mass. Spectrom., 1, (1975).

202. Wood G. W., Lau P. У'., Rao G. N. S., Biomed. Mass. Spectrom., 2, (1976).

203. Hundt D. F., Shabanowitz L, Botz F. K., Brent D. A., Anal. Chem, 49, 1160 (1977).

204. Schulten H. R., Z. Anal. Chem., 293, 273 (1978).

205. Sphon J. A., Dreifuss P. A., Schulten H. R., J. Assoc. Off. Anal. Chem., 60, 73 (1977).

206. Prome J. C, Puzo G., Organ. Mass Spectrom, 12, 28 (1977).

207. Carroll D. I., Dzidic I., Stillwell R. N.. Horning E. C, in Organic Trace Analysis, pp. 655—671. NBS, Washington (1979).

208. Mitchum R. K., Althaus J. R., Korfmacher W. A., Rowland K. L, Nam K., Young J. F., Biomed. Mass Spectrom., 8, 539 (1981).

366 6 Методы определения и обнаружения 209 Vogt Н, Нетеп Н J, Meier S, Wechsung R, Z Anal Chem, 308, (1981) 210 Heinen H J, Meier S, Vogt H, Wechsung R, Z Anal Chem, 308, (1981) 211 Day R J, Zimmermann J, Hercules D M, Spectroscop Lett, 14, (1981) 212 Busch К L, Utiger S E, Vincze A, Cooks R G, Keough T, J Am Chem Soc, 104, 1507 (1982) 213 Ryhage R, Anal Chem, 48, 1829 (1976) 214 Mdberg R M, Cook J C, J Chromatog Sci, 17, 17 (1979) 215 Feser K, Kogler W, J Chromatog Sci, 17, 57 (1979) 216 McLafferty F W, Ace Chem Res, 13, 33 (1980) 217 Maqum F, Fraisse D, Tabet J С, Spectra 2000, 9, 25 (1981) 218 Cooks R G, Glish G L, Chem Eng News, 59, 40 (1981) 219 McLafferty F W, Biomed Mass Spectrom, 8, 446 (1981) 220 McLafferty F W, Lory E R, J Chromatog, 203, 109 (1981) 221 Davis D V, Cooks R G, J Agr Food Chem, 30, 495 (1982) 222 Karasak F W, Onuska F I Anal Chem, 54, 309A (1982) 223 Lacey M J, Macdonald С G, Anal Chem, 54, 135 (1982) 224 Zakett D, Ciupek J D, Crooks R G, Anal Chem, 53, 723 (1981) 225 Bozorgzadeh M H, Morgan R P, Beynon J H, Analyst, 103, 613 (1978) 226 McLafferty F W, Bockhoff F M, Anal Chem, 50, 69 (1978) 227 Cooks R. G, Intern Lab, No 1, 79 (1979) 228 Boyd R K, Beynon J H, Org Mass Spectrom, 12, 163 (1977) 229 Milhngton D S, Smith J A, Org Mass Spectrom, 12, 264 (1977) 230 Greenway A M Simpson С F,i Phys,13, 1131 (1980) 231 ten Noever de Brauw M С, J Chromatog, 165, 207 (1979) 232 Etzweder F, J Chromatog, 167, 133 (1978) 233 Henneberg D Hennchs U Husmann H, Schomburg G, J Chromatog, 167, 139 (1978) 234 Grob K, Chromatographia, 9, 509 (1976) 235 Durbeck W H, Buker I, Leymann W, Chromatographia, 11, 295, (1978) 236 McFadden W H J Chromatog Sci, 17, 2 (1979) 237 Arpino P J, Guiochon G, Anal Chem, 51, 683A (1979) 238 Baldwin M A, McLafferty F W Org Mass Spectrom, 7, 1111 (1973) 239 Hemon J D, Anal Chem, 50, 1687 (1978) 240 Arpino P J, Guiochon G Knen P Devant G, J Chromatog, 185, (1979) 241 Imabayashi S Nakamuro T Sawa Y, Hasegawa J, Sakaguchi K, Fujita T, Mori Y, Kawabe К Anal Chem, 51, 534 (1979) 242 Blakley С R, McAdams M J Vestal M L J Chromatog, 158, (1978) 243 Takeuchl T, Hirata Y, Ohumura Y Anal Chem, 50, 660 (1978) 244 Scott R P W, Scott С G, Munroe M, Hess J, J Chromatog, 99, (1974) 245 McFadden W H Schwartz H L, Evans S, J Chromatog, 122, (1976) 246 McFadden W H Bradford D С Egltnton G, Nicolaides H, J Chromatog Sci, 17, 518 (1979) 247 Carroll D I Dzidic I Stillwell R N, Haegele К D, Horning E C, Anal Chem, 47, 2369 (1975) 248 Jones P R, Yang S K, Anal Chem, 47, 1000 (1975) 249 Haahh E, Nikan T, Acta Chem Scand, 17, 2565 (1963) 250 Blakley С R, McAdams M J, Vestal M L J Chromatog, 158, 2fi?

(1976).

6. Методы определения и обнаружения 251. Vestal M. L., in Trace Organic Analysis, pp. 647—654. NBS, Washington (1979).

252. Chaigneau M., Chastagnier M., Bull. Soc. Chim. France, 40 (1976).

253. Chester S. N.. Gump B. H., Hertz H. S., May W. E., Wise S. A., Anal. Chem., 50, 80,5 (1978).

254. Shinohara R., Hori Т., Koga M., Bunseki Kagaku, 27, 400 (1978).

255. Matsushima H., Hanya Т., Bunseki Kagaku, 24, 505 (1975).

256. Albaiges ]., Albrecht P., Intern. J. Environ. Anal. Chem., 6, 171 (1979).

257. Middleditch B. S., Basile В., Chang E. S., J. Chromatog., 142, 777 (1977).

258. Shinohara R., Koga M., Shinohara J., Hori Т., Bunseki Kagaku, 26, (1977).

259. Grimmer G., Bohnke H., Browitzky H., Z. Anal. Chem., 289, 91 (1978).

260 Benoit F. M., Lebel G. L, Williams D. Т., Intern. J. Environ. Anal. Chem., 6,277 (1979).

261. Bellar T A., Lichtenberg J. J., Eichelberger J. W., Environ. Sci. Technol., 10,926 (1976).

262. Sherman P. L, Kemmer A. M., Metcalfe L, Toy H. D., Parris G. E., in Trace Organic Analysis, pp. 205—212. NBS, Washington (1979).

263. Fujii Т., Anal. Chim. Acta., 92, 117 (1977).

264. Ingram L. L., McGinnis G. D., Parkin S. V., Anal. Chem., 51, 1077 (1979).

265. Fujii Т., J. Chromatog., 139, 297 (1977).

266. Burgasser A. J., Colaruotolo J. F., Anal. Chem., 51, 1588 (1979).

267. Freudenthal J., Intern. J. Environ. Anal. Chem., 5, 311 (1978).

268. Rivera J., Cuberes M, R., Albaiges J., Bull. Environ. Contam. Toxicol., 18, 624 (1977).

269. Fujii Т., Anal. Chem., 49, 1985 (1977).

270. Erickson M. D., Michael L. C, Zweidinger R. A., Pellizzari E. D., J. Assoc.

Off. Anal. Chem., 61, 1335 (1978).

271 McNeill E. E., Otson P., Miles W. F., Rajabalee F. J. M., J. Chromatog., 132, 277 (1977).

272. Veith G. D., Kuehl D. W., Puglisi F. A., Glass G. E., Eaton J. G., Arch.

Environ. Contam. Toxicol., 5, 487 (1977).

273. Harless R. L, Harris D. E., Sovocool G. W., Zehr R. D., Wilson N. K-, Oswald E. O., Biomed. Mass Spectrom, 5, 232 (1978).

274. Nakamura H., Suido Kyokai Sasshi, 37 (1977).

275. Hon-Nami H., Hanya Т., J. Chromatog., 161, 205 (1978).

276. Coutts R. Т., Jones G. R., Liu S. F., J. Chromatog. Sci., 17, 551 (1979).

277. Tatsukawa R., Itoh J., Wakimoto Т., J. Agr. Chem. Soc. Japan, 51, (1977).

278 Yasuhara A., Fuwa K., J. Chromatog., 172, 453 (1979).

279. Bergert К. Н., Betz V., Chromatographia, 7, 681 (1974).

280. Schuetzle D., Biomed. Mass Spectrom., 2, 288 (1975).

281. Dong M., Locke D. C, Ferrand E., Anal. Chem., 48, 368 (1976).

282. Rietz E. В., Anal. Lett., 12, 143 (1979).

283. Hoffmann D., Brunnemann K. D., Schmeltz I., Wynder E. L., In Trace Organic Analysis, pp. 131—141. NBS, Washington (1979).

284. Briggs С D., Hawthorne S. J. A., Proc. Anal. Div. Chem., 15, 181 (1978).

285. Bartle K. D., Lee M. L., Novotny M., Proc. Anal. Div. Chem. Soc, 13, (1976).

286. Lao R. C, Thomas R. S., Monkman J. L., J. Chromatog., 112, 681 (1975).

287. Lee M. L., Vassilaros D. L., Pipkin W. S., Sprensen W. L., in Trace Organic Analysis, pp. 731—738. NBS, Washington (1979).

288. Lee M. L., Novotny M., Bartle K. D., Anal. Chem., 48, 1566 (1976).

289. Grimmer G., Bohmke H., Glasser A., Erdol, Kohle, Erdgas, Petrochemie, 30,411 (1977).

368 6. Методы определения и обнаружения 290. Walters D. В., Chamberlain W. L, Akin F. L, Snook M. E., Chortyk О. Г., Anal. Chim. Acta, 99, 143 (1978).

291. Lee M. L., Novotny M., Bartle K. D., Anal. Chem., 48, 405 (1976).

292. Seuerson R. F., Snook M. E., Chortyk О. Т., Arrendale R. F., Beitr. Tabaks forsch., 8, 273 (1976).

293. Schmeltz I., Tosk J., Hoffmann D., Anal. Chem., 48, 645 (1976).

294. Kuwata K., Bunseki Kagaku, 27, 650 (1978).

295. Pellizari E. D., Bunch J. E., Berkley R. E., McRae J., Anal. Chem., 48, (1976).

296. Harsch D. E., Rasmussen R. A., Anal. Lett, 10, 1041 (1977).

297. Tatsukawa R., Okamoto Т., Wakimoto Т., Bunseki Kagaku, 27, 164 (1978).

298. Ciupe R., Fagarasan E., Prop L., Rev. Chim. (Bucharest), 28, (1977).

299. Tyson B. J., Anal Lett., 8, 807 (1975).

300. Cronn D. R., Harsch D. E., Anal. Lett., 9, 1015 (1976).

301. Grimsrud E. P., Rasmussen R. A., Atmos. Environ., 9, 1010 (1975).

302. Jellum E., J. Chromatog., 143, 427 (1977).

303. Vanhaelen M., Vanhaelen-Fastre R., Geeraerts J., J. Chromatog., 144, 108 (1977).

304. Janlstyn В., Z. Naturiorsch. C, Biosci., 36, 193 (1981).

305. Moneti G., Pazzagli M., Fiorelli G., Serio M., J. Steroid Biochem., 13, (1980).

306. Kobelt R., Wiesener G., Kuehn R., J. High Resolut. Chromatog., Chroma tog. Commun., 4, 520 (1981).

307. Suzuki M., Nishizawa M., Miyatake Т., Kagawa Y., J. Lipid Res., 23, (1982).

308. Eiceman G. A., Fuavao V. A., Doolittle K. D., Herman С A., J. Chromatog., 236,97 (1982).

309. Mita H., Yasueda H., Shida Т., J. Chromatog., 221, Biomed. Appl., 10, (1980).

310. Vogt W., Jacob K., Ohnesorge А. В., Schwertfeger G., J. Chromatog., 199, 191 (1980).

311. Louis D., Belleville F., Nabet P., Paysant P., Ann. Med. Nancy Est, 20, 1097, 1100 (1981).

312. Stan H. J., Scheutwinkel-Reich M., Lipids, 15, 1044 (1980).

313. Tetsuo M., Markey S. P., Cotburn R. W., Kopin I. J., Anal. Biochem., 110, 208 (1981).

314. Jimerson D. C, Markey S. P., Oliver J. A., Kopin I. J., Biomed. Mass Spectrom., 8, 256 (1981).

315. Durden D. A., Juorio A. V., Davis B. A., Anal. Chem., 52, 1815 (1980).

316. Andersson В., Sandberg G., J. Chromatog., 238, 151 (1982).

317. Canfell C, Binder S. R., Khayam-Bashl H., Clin. Chem., 28, 25 (1982).

318. Iwai M., Kanno H., Hashino M., Suzuki J., Yanaihara Т., Nakayama Т., J. Chromatog., 225, Biomed. Appl., 14, 274 (1981).

319. Niwa Т., Maeda K-, Ohki Т., Saito A., Tsuchida I., J. Chromatog., 225, Bio med. Appl., 14, 1 (1981).

320. Mueller H., Mongrovius R., Seyberth H. /., J. Chromatog., 226, Biomed.

Appl., 15, 450 (1981).

321. Megargle R. G., Slivon L. E., Graas J. E., Andrist A. H., Anal. Chim. Acta, 120, 193 (1980).

322. Miyazaki H., Ishibashi M., Yamashita K-, Nishikawa Y., Katori K., Biomed.

Mass Spectr., 8, 521 (1981).

323. Ferretti A., Schoene N. W., Flanagan V. P., Lipids, 16, 800 (1981).

324. Suzuki M., Morita I., Kawamura M., Murato S., Nishizawa M., Miyatake Т., Nagase H., Ohno K., Shimizu H., J. Chromatog., 221, Biomed. Appl., 10, 361 (1980).

6. Методы определения и обнаружения 325. Chiabrando С, Noseda A., Noe M. A., Fanelll R., Prostaglandins, 20, (1980).

326. Min В. И., Рао ]., Garland W. A., de Silva J. A. F., Par sonnet M., J Chro matog., 183, Biomed. Appl., 9, 411 (1980).

327. Markey S. P., Colburn R. W., Johannessen J. N., Biomed. Mass Spectrom., 8, 301 (1981).

328. Gaskell S. J., Pike A. W., Griffiths K., Steroids, 36, 219 (1980).

329. Larsson L, Mardh P. A., Odham G., Westerdahl G., J. Chromatog, 182„ Biomed. Appl., 8, 402 (1980).

330.. Baker G. В., LeGatt D. F., Coutts R. Т., J. Neurosci. Methods, 5, (1982).

331. Smith R. M., Intern. Lab., May/June, 115 (1978).

332. Novotny M., Lee M. L., Low С. Е., Raymond A., Anal. Chera., 48, (1976).

333. Jindal S. P., Lutz Т., Vestergaard P., Anal. Chem, 51, 269 (1979).

334. Beggs D. P., Day A. G., J. Forens. Sci., 4, 891 (1974).

335. Van der Ark A. M., Theeuwen A. B. E., Verweij A. M. A., Pharm. Weekbl.,, 112, 977 (1977).

336. Saferstein R., Manura J. J., De P. K., J. Forens. Sci., 23, 29 (1978).

337. Cole W. J., Parkhouse J., Yousef Y. Y., J. Chromatog., 136, 409 (1977).

338. Hunt D. F., Crow F. W., Anal. Chem., 50, 1781 (1978).

339. Hunt D. F., Crow F. W., in Trace Organic Analysis, pp. 601—607. NBS,.

Washington (1979).

340. Ulrich R. W., Bowerman D. L., Wittenberg P. H., McGaha B. L., Schis ler D. K., Anderson J. A., Levisky J, A., Pflug J. L., Anal. Chem., 47, (1975).

341. Stone I. C, Lomonte J. N., Fletcher L. A., Lowry W. Т., J. Forens. Sci., 23„ 78 (1978).

342. Arndts D., Rominger K. L., Arzneim. Forsch., 28, 1951 (1978).

343. Houghton E., Teale P., Biomed. Mass Spectrom., 8, 358 (1981).

344. Watanabe H., Nakano S., Ogawa N., Suzuki Т., Biomed. Mass Spectrom.,.

7, 160 (1980).

345. Eckert M., Hinderling P. H., Agents Action, 11, 520 (1981).

346. Hasegawa J., Tomono Y., Tanaka M., Fujita Т., Sugiyama K.., Hirose N., Arzneim. Forsch., 31, II, 1215 (1981).

347. Stueber W. H., Moeller W. H., J. Chromatog., 224, Biomed. Appl., 13, 32Г (1981).

348. Ehrsson H., Eksborg S., Wallin I., Marde Y., Joansson В., J. Pharm. Sci., 69,710 (I960).

349. Kuhnert B. R., Kuhnert P. M., Reese A. L. P., J. Chromatog., 224, Biomed.

Appl., 13, 488 (1981).

350. Thompson J. A., Leffert F. H., J. Pharm. Sci., 69, 707 (1980).

351. Hayasaka Y., Murata S., Umemura K., Chem. Pharm. Bull., 29, (1981).

352. Murray S., Waddell K. A., Dames D. S., Biomed. Mass Spectrom., 8, 500 (1981).

353. Chinn D. M., Crouch D. J., Peat A. M., Finkle B. S., Jennison T. A, J. Anal. Toxicol., 4, 37 (1980).

354. Lhoest G., Mercier M., Pharm. Helv. Acta, 55, 316 (1980).

355. Holdiness M. R., Israili Z. H., Justice J. В., J. Chromatog., 224, Biomed.

Appl., 13, 415 (1981).

356. Tetsuo M., Axelson M., Sjovall J., J. Steroid Biochem., 13, 847 (1980).

357. Lin S. N.. Wang T. F., Caprioli R. M., Mo P. N. В., J. Pharm. Sci., 70, 1276 (1981).

358. Isomura H., Higuchi S., Kawamura S., J. Chromatog., 224, Biomed. App].,.

13,423 (1981).

24- 370 6. Методы определения и обнаружения 359. Ottoila P., Taskinen J., Sothmann A., Biomed. Mass Spectrom., 9, (1982).

360. Idzu G., Ishibashi M., Miyazaki H., Yamamoto Y., J. Chromatog., 229, Bio med. Appl., 18, 327 (1982).

361. Kapetanovic I. M., Kupferberg H. J., J. Pharm. Sci., 70, 1218 (1981).

362. Phillipou G., Fritz R. G., Clin. Chim. Acta, 103, 129 (1980).

363. Kang G. L, Abbott F. S., J. Chromatog., 231, Biomed. Appl., 20, (1982).

364. Chan Y. M., Soldin S. J., Swanson J. M., Deber С M., Thiessen J. J., MacLeod S., Clin. Biochem., 13, 266 (1980).

365. Ichimura K-, Nozaki Y., Kato K., Harada Т., Ishii K., Koenshu-Iyo Masu Kenkyukai, 5, 181 (1980).

366. Smith R. G., Cheung L. K-, J. Chromatog., 229, Biomed. Appl., 18, (1982).

367. Bjorkhem I., Ek #., J. Steroid Biochem., 17, 447 (1982).

368. Gielsdorf W., J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 20, 65 (1982).

369. Ihn W., Schade W., Mueller В., Peiker G., Pharmazie, 35, 598 (1980).

370. Van Langenhove A., Costello С E., Biller J. E., Biemann K-, Browne T. R., Clin. Chim. Acta, 115, 263 (1981).

371. Gorsen R. M., Weiss A. J., Manthei R. W., J. Chromatog., 221, Biomed.

Appl., 10, 309 (1980).

372. Midha K. K., Charette C, McGilveray I. J,, Webb D., McLean M. C, Clin.

Toxicol., 18, 713 (1982).

373. Forney R. В., Carroll F. Т., Nordgren I. K., Pettersson В, М., Holmstedt В., J. Anal. Toxicol., 6, 115 (1982).

374. Suzuki Т., Tsuzurahara K., Murata Т., Takeyama S., Biomed. Mass Spect rom., 9,94 (1982).

375. Lapin A., Eur. J. Mass Spectrom. Biochem. Med. Environ. Res., 1, (1980).



Pages:     | 1 |   ...   | 8 | 9 || 11 | 12 |   ...   | 13 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.