авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 ||

«Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского Национальный исследовательский университет Всероссийская общественная ...»

-- [ Страница 12 ] --

Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород, simonov@neuro.nnov.ru Удобной моделью для изучения механизмов обработки информации, адаптивного поведения и обучения являются нейро-электронные системы, а именно диссоциированные нейрональные культуры, выращенные на мультиэлектродной матрице. Такой подход подразумевает использование регистрируемой активности нейрональной культуры для управления внешним устройством, реальным или виртуальным, и реализацию обратной связи с этим устройством для модификации активности сети с целью её обучения. Принципиально важным моментом здесь является разработка математической модели сети нейронов и исследование её динамики в процессе обучения. Сравнение экспериментальных и модельных данных позволит сделать предположения о той или иной архитектуре сети, интерпретировать результаты эксперимента, корректировать экспериментальные протоколы. Для модельного описания диссоциированных нейрональных культур использовалась сеть синаптически связанных нейронов Ходжкина-Хаксли с учётом аксональных задержек. Скорость распространения потенциала действия от одной клетки к другой считается постоянной, таким образом, время задержки оказывается пропорциональным расстоянию между клетками. В таких сетях нейроны способны самоорганизовываться в многочисленные функциональные группы различной пространственной конфигурации.

В модели помимо мембранных потенциалов всех клеток возможно также регистрировать усреднённую полевую активность с некоторой области, что соответствует расположению в данной области металлического макроэлектрода. Вычисление потенциала на электроде производится на основе построения эквивалентных радиотехнических схем контакта поверхности электрода с близлежащими клетками. Для верификации адекватности предложенных моделей использовались записи многоэлектродной регистрации вызванных потенциалов, полученные с диссоциированных культур гиппокампа. Экспериментальные данные фильтровались от шумов, на основе порогового критерия с использованием методик сортировки спайков выделялся растр событий. Модельные реализации, полученные в данной работе, хорошо согласуются с экспериментом. В работе рассмотрена фундаментальная задача поиска соответствия между топологической и функциональной организацией нейронной сети. На основе результатов сопоставления многоэлектродных записей потенциала с диссоциированных культур гиппокампа и модельных реализаций можно подобрать архитектуру межклеточных взаимодействий в модели для определения реальной топологии нейрональной культуры.

Работа поддержана РФФИ (08-02-00724, 08-04-97109, 09-04-12254, 09-04-12304, 09-02-92611, 09-04-97090,) и программой МКБ Президиума РАН, Ведомственной целевой программой "Развитие научного потенциала высшей школы", проект 2.1.1/6223.

ЛОКАЛЬНАЯ ЛАЗЕРНАЯ ГИПЕРТЕРМИЯ ОПУХОЛЕЙ С ЗОЛОТЫМИ НАНОЧАСТИЦАМИ ПОД КОНТРОЛЕМ ОПТИЧЕСКОЙ КОГЕРЕНТНОЙ ТОМОГРАФИИ 1,2 2 2 3 Сироткина М.А., Елагин В.В., Ширманова М.В., Денисов Н.Н., Агрба П.Д.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА Нижегородский государственный университет им. Н.И.Лобачевского, Н.Новгород, Sirotkina_m@mail.ru;

Нижегородская государственная медицинская академия, Н.Новгород Институт химической физики РАН им. Н.Н. Семенова, Москва Институт прикладной физики РАН, Н.Новгород Локальная лазерная гипертермия - современный метод термического лечения онкологических заболеваний, ос нованный на нагреве опухоли до 41-47°С в течение десятков минут. Для обеспечения локального воздействия и повышения термочувствительности опухоли перспективным является применение плазмонно-резонансных золо тых наночастиц. Целесообразно проводить гипертермию при максимальном содержании в опухоли наночастиц.

Для того, чтобы установить оптимальное время начала воздействия мы использовали метод оптической коге рентной томографии (ОКТ), поскольку он чувствителен к изменению поглощающих и рассеивающих свойств биоткани.

Целью работы являлось прижизненное и неинвазивное исследование времени максимального накопления нано частиц в опухоли методом ОКТ для повышения эффективности проведения лазерной гипертермии опухолей.

Исследование выполнено на самках мышей линии CBA с опухолевой моделью рак шейки матки. Золотые нано частицы с плазмонным резонансом в области 800-950 нм, вводили внутривенно (108 частиц/животное). Накопле ние наночастиц в опухоли исследовали in vivo методом ОКТ по изменению интенсивности сигнала на изображе ниях, которые получали каждые 30 минут до достижения максимально высокого уровня ОКТ сигнала. Затем провели лазерную гипертермию: лазер 810 нм, 1.5Вт/см2, при 44-45°С в течение 20 минут, с непрерывным кон тролем температуры ИК-термографом. Противоопухолевый эффект лазерной гипертермии оценивали по тормо жению роста опухоли (ТРО, %). Верификацию наночастиц в опухоли выполняли методом электронной микро скопии.

Через 2-2,5 часа после инъекции наночастиц наблюдали постепенное возрастание сигнала на ОКТ – изображени ях опухоли. Максимальный уровень сигнала отмечен через 4-5 часов после введения наночастиц. В этот период проведена лазерная гипертермия опухолей.

Анализ полученных термограмм показал, что нагрев опухоли с наночастицами происходил локально, без повы шения температуры окружающих здоровых тканей. Нагрев опухоли с наночастицами до температуры 44 оС про исходил за 3-3.5 минуты, а опухоли без наночастиц – за 10 минут. Для поддержания температуры в опухоли с наночастицами на постоянном уровне плотность мощности пришлось уменьшить с 1.5 Вт/см2 до 1.1 Вт/см2.

Торможение роста опухоли составило 66% на 5-е сутки после воздействия.

Методом электронной микроскопии золотые наночастицы были обнаружены как в цитоплазме опухолевых кле ток рядом с митохондриями, так и внутри ядра.

В работе показана эффективность использования метода ОКТ для in vivo исследования накопления наночастиц в опухоли. Применение золотых наночастиц привело к локальному, быстрому нагреву опухоли при меньшей плотности мощности лазерного излучения. Данные ТРО демонстрируют положительный лечебный эффект.

Работа выполнена при финансовой поддержке Федерального агентства по науке и инновациям № 02.740.11.0713, грантов РФФИ (09-02-97072, 09-02-12215, 09-02-00539), грант президента МД-3018.2009.7.

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РИСКА МАЛЫХ ДОЗ КОСМИЧЕСКОЙ РАДИАЦИИ В МОДЕЛЬНЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАХ НА МЫШАХ Сорокина С.С., Заичкина С.И., Розанова О.М., Аптикаева Г.Ф., Смирнова Е.Н., Романченко С.П.

Учреждение Российской Академии Наук Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино, sv0723@yandex.ru В последние годы в связи с активным освоением дальнего космоса, увеличением дальности и высоты авиапере летов, поиском и использованием новых видов излучений для радиотерапии рака повышенный интерес исследо вателей вызывают биологические эффекты малых доз плотноионизирующей радиации. Известно, что при высот ных полетах экипажи самолетов облучаются протонами и электронами радиационных поясов и галактическим космическим излучением. Помимо этого, существует риск острого облучения протонами солнечных вспышек.

Поэтому при увеличении частоты и дальности авиаперелетов создаются потенциальные условия для переоблу чения экипажей, что может существенно повлиять на общую лучевую нагрузку и создать предпосылки для недо оценки риска. Основные данные о влиянии космических излучений на человека накоплены при исследовании космонавтов и астронавтов после космических полетов. В эксперименте подобные результаты можно получить только с помощью моделирования радиационных нагрузок высотных полетов на ускорителях заряженных час тиц.

Хроническое облучение самцов мышей линии SHK проводилось в поле излучения за верхней бетонной защитой Серпуховского ускорителя протонов с энергией 70 ГэВ (У-70 ИФВЭ, г. Протвино), моделирующего компонент БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА ный и спектральный состав высокоэнергетического радиационного поля, формируемого в атмосфере на высоте 10-30 км.

Наш постоянный интерес к изучению биологически значимых эффектов малых доз радиации с различными зна чениями линейной потери энергии требует таких подходов, как изучение дозовой зависимости, адаптивного от вета и генетической нестабильности – важных радиобиологических феноменов, существование которых нельзя было предсказать, исходя из эффектов, наблюдаемых при больших дозах облучения.

В результате проведенных экспериментов нами было показано, что исследованное низкоинтенсивное плотноио низирующее излучение приводит к значительному увеличению уровня цитогенетических повреждений по срав нению со спонтанным;

не приводит к индукции радиационного адаптивного ответа;

вызывает радиационно индуцируемую генетическую нестабильность в потомстве облученных самцов;

увеличивает скорость роста со лидной формы асцитной карциномы Эрлиха. Кроме этого, цитогенетическими методами была выявлена возмож ность модуляции радиационного адаптивного ответа и генетической нестабильности с помощью варьирования мощности облучения и обработки родительских особей мышей такими иммуномодуляторами, как дибазол и хлористый кальций.

Эти результаты важны для понимания пусковых событий, приводящих к индукции генетической нестабильно сти, трансмиссии радиационно-индуцируемой генетической нестабильности от поколения к поколению, а также возможных механизмов защиты потомства от отдаленных эффектов малых доз плотноионизирующей радиации.

В практическом отношении полученные данные могут быть использованы для оценки радиационных рисков при долговременных высотных авиаполетах, при подготовке пилотируемых космических полетов, при работе персо нала на высокоэнергетических ускорителях, а также для разработки теоретических основ адаптационной меди цины.

ВЛИЯНИЕ НИТРОКСИЛЬНОГО РАДИКАЛА НА ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ЦИСПЛАТИНА Ступина Т.С.1, Конышев И.В.2, Комлева Н.В.3, Костюк Г.В.3, Сень В.Д. 3, Терентьев А.А. Ивановский государственный университет, Иваново, stupina.tat@gmail.com Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Н.Новгород Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка Химиотерапия опухолей с применением цисплатина и его производных сопряжена с тяжелыми побочными эф фектами, связанными с высокой токсичностью комплексов платины. Поэтому высокую актуальность имеют ис следования, посвященные поиску новых противоопухолевых соединений или их комбинаций, которые позволя ют снизить токсическую нагрузку на организм больного при сохранении высокой противоопухолевой активности.

Нитроксильные радикалы вызывают большой интерес, поскольку они могут выступать как самостоятельные противоопухолевые агенты и вместе с тем проявляют антиоксидантную активность. Антиоксидантные свойства могут быть использованы для снижения токсичности химиотерапии терапии.

Настоящая работа посвящена исследованию цитотоксичности цисплатина и нитроксильного радикала 4-амино 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксила. Цитотоксичность исследовалась как при их раздельном, так и при ком бинированном применении. Влияние химических соединений и их комбинаций на клетки HeLa (аденокарцинома шейки матки человека) исследовали с помощью МТТ-теста. Клетки обрабатывали исследуемыми соединениями или их комбинациями, и через 24 ч окрашивали красителем МТТ. Из данных «доза-эффект» получали значения IC50. Для определения цитотоксических эффектов соединений в комбинации применяли алгоритм математиче ского моделирования комбинационного индекса.

Цисплатин обладает высокой цитотоксичностью для клеток HeLa (IC50 составляет около 10 мкМ). Нитроксиль ный радикал проявляет цитотоксичность в очень высоких дозах (IC50 около 1.8 мМ). Нитроксильный комплекс платины, в котором нитроксильный радикал объединен с цисплатином, проявляет цитотоксичность с дозой IC около 100 мкМ. Исследование цитотоксических свойств комбинации цисплатина с нитроксильным радикалом показало, что эти два соединения являются сильными антагонистами.

В связи с известными антиоксидантными свойствами нитроксильных радикалов, сильный антагонизм цисплати на и нитроксильного радикала показывает, что цитотоксическое действие цисплатина во многом обусловлено его способностью вызывать в клетках окислительные повреждения, вероятно, за счет инактивации компонентов ан тиоксидантной системы. Полученные данные показывают также нецелесообразность применения этой комбина ции в клинике. Однако введение нитроксильного радикала непосредственно в комплекс платины позволяет по лучить соединение с довольно высокой цитотоксичностью. Это предполагает возможность использования нитроксильного комплекса платины для противоопухолевой химиотерапии, поскольку он может иметь снижен ную токсичность, либо отличаться от цисплатина профилем побочных эффектов.

Работа поддержана грантом РФФИ 09-03-01187а.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ СЕРА-НИТРОЗИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ЖЕЛЕЗА РАЗНОЙ СТРУКТУРЫ Ступина Т.С.1, Руднева Т.Н.2, Санина Н.А. 2, Терентьев А.А. Ивановский государственный университет, Иваново, stupina.tat@gmail.com Институт проблем химической физики РАН, г. Черноголовка Сера-нитрозильные комплексы железа (ЖСК) общей формулы [Fe2(SR)2(NO)4] являются аналогами природных соединений, обнаруженных у микроорганизмов, растений и млекопитающих. Являясь донорами оксида азота, [Fe-S] комплексы способны усиливать противоопухолевые эффекты известных цитостатиков, подавлять образо вание метастазов и активировать системы репарации ДНК на генетическом уровне. Кроме того, доноры оксида азота влияют на пролиферацию и гибель клеток. Таким образом, доноры оксида азота обладают высоким потен циалом для разработки на их основе терапевтических средств.

Настоящая работа посвящена исследованию влияния на опухолевые клетки новых сера-нитроксильных комплек сов железа. Были исследованы комплексы с тетрагональным и гексагональным железо-серным ядром и с различ ными боковыми группировками R.

Исследование проводилось на клетках HeLa и H1299. Влияние на клетки исследовалось с помощью МТТ-теста:

клетки обрабатывали исследуемыми ЖСК, а затем окрашивали красителем МТТ. Интенсивность окрашивания измеряли спектрофотометрически. Для всех комплексов были получены кривые «доза-эффект» и вычислены дозы IC50.

Полученные данные показывают, что цитотоксичность ЖСК зависит от структуры комплексов и типа клеток.

Дозы IC50 варьируют от 10 до 200 мкМ. Наибольшей цитотоксичностью обладают два из исследованных ЖСК:

комплекс с фенильной и с этиламинной группировкой R. Замена этиламинной группировки на валин снижает цитотоксичность комплекса в несколько раз. Самую низкую цитотоксичность проявляет ЖСК с гексагональным железо-серным ядром.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОЛИФЕРАЦИИ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК КОРЫ БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИЙ НА ПОЛИМЕРНЫХ ПОВЕРХНОСТЯХ.

Трифонова А.С.

Нижегородская государственная медицинская академия, Н. Новгород, nansy.trifonova@mail.ru Последнее время все шире используются новые методы, основанные на применении клеточной трансплантоло гии и тканевой инженерии для восстановления утраченной структуры или функции органов и тканей. Такие ме тоды подразумевают создание конструкций, состоящих из биосовместимого носителя (матрицы), осуществляю щего структурную функцию, и клеточного наполнителя, который зависит от конечной области применения.

В связи с этим, целью данной работы явилось проведение сравнения пролиферативной способности и цитострук турных особенностей культивируемых нейрональных клеток КБП на культуральном пластике и на матрице «Реперен».

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1) Приготовление диссоциированной культуры нейрональных клеток КБП 17-дневных эмбрионов белой беспо родной мыши 2) Определение оптимальных условий подготовки матриц, при которых клетки проявляют наиболее здоровую морфологию и равномерное прикрепление 3) Анализ пролиферативной способности культуры в зависимости от материала подложки.

Материалы и методы: Материалом для исследования служили нейрональных клеток КБП 17-дневных эмбрионов белой беспородной мыши. Культура коры механически измельчалась и помещалась в 0,025% раствор трипсина на 20 минут для разрушения связей между клетками. Затем ткань несколько раз промывалась буферным раство ром (PBS), ресуспензировалась в необходимом количестве питательной среды NBM1 (92,5% NBM, 5% FCS, 2% B27, 0,5% L-glutamin), Суспензия раскапывалась по 40 мкл на все чашки Петри и матрицу «Реперен», выдержи валась в инкубаторе 2 часа, после чего заливалась NBM1.

Жизнедеятельность культуры поддерживалась в условиях CO2 инкубатора. Смена среды производилась на пер вые сутки культивирования и в дальнейшем питательная среда по мере надобности с использованием NBM3.

Оценка цитоструктурных особенностей и динамики роста культур проводилась под инвертированным микро скопом DM1000 (Leica) Результаты. В конце первых суток культивирования большая часть жизнеспособных клеток прикрепилась к суб страту изолированно или небольшими группами во всех чашках Петри. Причем на матрице «Реперен» плотность культуры была выше, чем на пластике.

БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА При сравнительном анализе данных микроскопирования была выявлена большая пролиферативная способность монослойной диссоциированной культуры на матрице «Реперен», чем на пластике. Наблюдалась большая плот ность культуры, более развитая нейронная и глиальная сети.

Вывод: В данной работе показано, что полимерная механически прочная матрица «Реперен» обладает хорошей адгезивной способностью, лучше сохраняет прогениторные клетки, способствует их дифференцировке, стимули рует рост, что служит основанием для дальнейшего внедрения данного материала в клиническую практику.

КОМПЬЮТЕРНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ВТОРИЧНОЙ И ТРЕТИЧНОЙ СТРУКТУРЫ НЕКОТОРЫХ КАРБОГИДРАЗ Холявка М.Г.1, Беленова А.С.1, Макарова Е.Л. 1,2, Ковалева Т.А.1, Артюхов В.Г.1, Кожокина О.М.2, Битюцкая Л.А. Воронежский государственный университет, Воронеж, holyavka@rambler.ru;

Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко, Воронеж Проведено сравнение пространственных структур глюкоамилаз из Aspergillus awamori и Saccharomycopsis fibuli gera. Построены модели белковых глобул ферментов с указанием положения функционально-значимых групп.

Анализ глюкоамилаз из микромицетов рода Aspergillus (A. niger, A. awamori X 100, A. awamori var. kawachi, A.

shirousami, A. оryzae) показал степень гомологии их аминокислотных последовательностей 86,1%. Установлено, что в состав консервативных областей полипептидных цепей входят остатки аспарагиновой и глутаминовой ки слот, карбоксильные группы которых участвуют в разрыве гликозидных связей в молекуле крахмала, и остаток триптофана, выполняющий субстратсвязывающую функцию.


При сравнении аминокислотных последовательно стей глюкоамилаз из A. awamori и S. fibuligera выявлено, что они гомологичны на 39,2%. Путем компьютерного моделирования показано, что для одной субъединицы глюкоамилазы из A. awamori характерна плотная упаковка ядра в виде 13 спиралей, 11 -тяжей и 19 неупорядоченных участков. Обнаружено, что молекула глюкоамилазы из S. fibuligera включает 13 спиралей, 13 -тяжей и 23 аморфных участка. Анализ результатов, полученных мето дами компьютерного моделирования, ИК-спектрофотометрии, а также данных литературы, позволяет сделать заключение об упорядоченности глобул глюкоамилаз и отнести их к -спиральным белкам (43-46% остатков в спиралях, ~5% в -тяжах). С помощью программы MolScript на основе данных рентгеноструктурного анализа (http://www.RCSB.org/pdb) получена объемная модель молекулы глюкоамилазы из A. awamori X100. Показано, что активный центр фермента расположен в полости (~1,5 нм), ограниченной следующими аминокислотными остатками: Leu58, Leu130, Leu177, Leu319, Trp178, Trp417, Phe187. С одной стороны активного центра глюкоа милазы сосредоточены Asp55 и Glu179, а с противоположной – Glu400, карбоксильные группы которых осуще ствляют гидролиз -1,4-гликозидных связей крахмала. В состав активного центра фермента из S. fibuligera вхо дит остаток Glu456, являющийся аналогом Glu400 в молекуле глюкоамилазы из A. awamori. Микроокружение активного центра, вероятно, образуют Gly467, Gly353, Ala468, Tyr63. Изучение пространственных моделей субъ единиц молекул глюкоамилазы из A. awamori и S. fibuligera позволило выявить следующие черты сходства тре тичной структуры этих ферментов: 1) аналогичную плотную упаковку гидрофобного ядра;

2) положение актив ного центра в полости (щели), наличие в ней молекул воды;

3) участие в каталитическом акте карбоксильной группы Glu. Подобные результаты могут свидетельствовать о сходстве в механизмах катализа реакции гидролиза крахмала, осуществляемой изучаемыми ферментами. Исследование надмолекулярного уровня организации глю коамилаз показало, что молекулы имели в своем составе 2 тождественные субьединицы с молекулярными мас сами 53,6 кДа. Таким образом, компьютерное моделирование структуры сложных олигомерных ферментов в сочетании с энзиматическими методами анализа и ИК-спектрофотометрией позволяет дать более корректную трактовку результатов исследования структурно-функциональных свойств карбогидраз и способствует выявле нию молекулярных механизмов реакции гидролиза полимерных субстратов.

ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РАННИХ ЭМБРИОНОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ IN VITRO С ПОМОЩЬЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ -ЭНДОРФИНПОДОБНЫХ ПЕПТИДОВ Чернов А.С., Ковалицкая Ю.А.

Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино, c.h.e.r.n.o.v@rambler.ru БИОФИЗИКА И БИОМЕДИЦИНА Известно, что 35% беременностей заканчивается гибелью эмбрионов еще до их имплантации в матку. Решить эту проблему возможно с помощью современных технологий ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение) и ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида). Одним из этапов этих методов является культиви рование ранних эмбрионов in vitro. Для снижения процента гибели ранних эмбрионов и повышения их жизне способности на протяжении всего периода культивирования, необходимо проведение исследований, направлен ных на выявление факторов, определяющих развитие эмбрионов in vivo. Одним из факторов, влияющих на раннее развитие, является опиоидный нейропептид -эндорфин, который секретируется фолликулярными клет ками и клетками эндометрия во время имплантации эмбриона. Целью данной работы было исследование влия ния -эндорфина и -эндорфинподобных пептидов на раннее развитие эмбрионов мыши in vitro.

Нами было изучено действие -эндорфина, пентарфина (VKGFY) и циклопентарфина (cyclo(VKGFY)), на разви тие 2-, 4- и 8-клеточных эмбрионов мыши. Работа была выполнена на мышах линии SHK, культивирование эм брионов проводилось в среде М16 (Sigma, США) при 37оС и 5% СО2. Были исследованы физиологические кон центрации пептидов (10-5 – 10-8М). Для определения механизма действия исследуемых пептидов в среду культивирования вводили налоксон - блокатор опиоидных рецепторов. Также было проведено исследование воз действия -эндорфина и пентарфина на изменение уровня внутриклеточного Са2+, с использование Са2+ специфичного флуоресцентного зонда (Fluo-3 AM).

В ходе проделанной работы было установлено, что наиболее активным из всех исследуемых веществ является циклопентарфин (10-7М). Установлено, что при культивировании эмбрионов с исследуемыми пептидами увели чивается процент выживаемости эмбрионов, количество зрелых бластоцист и случаи выхода бластоцист из обо лочек оплодотворения по сравнению с контролем. Исследования с налоксоном показали, что действие пептидов на ранние эмбрионы мыши осуществляется через неопиоидный рецептор -эндорфина. Отмечено, что в присут ствии циклопентарфина наблюдалось ускорение развития эмбрионов, снижение числа аномально развитых эм брионов, что свидетельствовало об отсутствии патологических процессов во время развития.

Было показано, что взаимодействие пентарфина с неопиоидным рецептором -эндорфина сопровождается вы бросом Са2+ в цитоплазму. После добавления пентарфина происходило постепенное увеличение интенсивности свечения эмбрионов в первые 30 минут в среднем приблизительно на 50%, после чего наблюдался спад до кон трольного значения. В случае с -эндорфином, наблюдали резкий скачок (в 1,5-2 раза) изменения уровня внутри клеточного Са2+ по сравнению с контролем, в течение 2 – 3 минут.

Таким образом, исследуемые пептиды могут выступать в роли неспецифических факторов роста, которые обес печивают нормальное развитие ранних эмбрионов мыши. Было показано, что действие синтетических эндорфинподобных пептидов на ранние эмбрионы опосредованно через неопиоидные рецепторы -эндорфина.

-эндорфин, вызывая увеличение уровня внутриклеточного Са2+, стимулирует раннее развитие эмбрионов. Это воздействие осуществляется как через опиоидные, так и через неопиоидные рецепторы -эндорфина. Однако механизм действия через неопиоидные рецепторы до конца не ясен. Поэтому представляется интересным в дальнейшем продолжить изучение внутриклеточной сигнализации -эндорфина.



Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 ||
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.