авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 11 | 12 || 14 | 15 |   ...   | 19 |

«Doc. RNDr. PhMr. Magda SAR50NOVA, DrSc. RNDr. Vladimir SCHWARZ, CSc. RNDr. Cestmir MICHALEC A kolektiv CHROMATOGRAFIA NA TENKYCH VRSTVACH VO FARMACII A V ...»

-- [ Страница 13 ] --

351. Munier R. L., Gervais Ch., Drapier A. M., C. R. Acad. Sci., ser. D, 281, 1757 (1975).

352. Myszkowska K-, Deptula S., Lutoclawska G., Sawicka Т., Acta Polon. Pharm., 32, 623 (1975).

353. Леслякас И. И. и сотр. Изв. АН СССР (сер. хим.), 1974, 1872.

354. Szumilo H., Soczewinski E., J. Chromatogr., 124, 394 (1976).

355. Tarr G. E., Anal. Biochem., 63, 361 (1975).

356. Weise M., Oken D. R., J. Chromatogr., 152, 172 (1978).

357. Wesenberg J. C., Thibert R. J., Microchim. Acta, 1, 469 (1977).

358. Avigad В., J. Chromatogr., 139, 343 (1977).

359. Bailey D. S., J. Chromatogr., 130, 431 (1977).

360. Walkley J. W., Tillman J., J. Chromatogr., 1977, 132, 172.

361. Бочваров Я-, Комиссаренко Н. Ф. Хим. природн. соед., 1977, 581.

362. Ellnain-Wojtaszek M., Kowalewski Z., Lutomski J., Skrzypczakowa L., Herba polon., 21, 377 (1975);

Chem. Abstr., 85, 68337a (1976).

363. Faber D. В., De Kok A., Brinkman U. A. Th., J. Chromatogr., 143, 95 (1977).

364. Георгиевский В. П., Пушкова Е. И. Фарм. ж. (Киев), 30, № 5, 84 (1975).

365. Kartnig Th., Kobosil P., J. Chromatogr., 138, 238 (1977).

366. Szabo A., Tomorkeny., J. Chromatogr., 151, 90 (1978).

367. Власенко Л. М. Фармация, 25, № 4, 45 (1976).

368. Власенко Л. М. Фармация, 26, № 2, 45 (1977).

369. Zullich G., Braun W., Lisboa B. P., J. Chromatogr., 103, 396 (1975).

5.7. Вспомогательные и диагностические вещества 5.7.1. Красители Сорбенты. Синтетические и природные красители удается ус­ пешно хроматографировать практически на всех известных хро матографических материалах. Вследствие того что они не тре­ буют специального обнаружения, ими пользуются как удобным средством для изучения разделяющей способности различных сорбентов и в некоторых работах теоретического значения. Для красителей — главным образом для сложных смесей и смесей из природных источников — очень часто применяют распределитель­ ную хроматографию, причем в качестве носителя неподвижной Специальная часть фазы служит силикагель или целлюлоза [29], сахароза [35], крахмал [14], кремнезем [11, 29] и т. д. Наилучшие результаты были получены с целлюлозой;

такие сорбенты, как окись алюми­ ния и кремнезем, обладают одинаковой разделительной способ­ ностью, но для них характерно быстрое выцветание пятен. Сили­ кагель дает менее удовлетворительные результаты. Удобно поль­ зоваться смешанными материалами, которые, как правило, дают лучшие результаты, чем индивидуальные. Пригодны, например, смеси полиамида и кремнезема [33], силикагеля и кремнезема [35] или полиамида и силикагеля [26, 31]. Удобна также адсорб­ ционная хроматография на слоях полиамида [13, 54, 89, 91] и сефадекса [26, 30, 52];

гель-проникающая хроматография на се фадексе оказалась пригодной и для определения молекулярной массы красителей [30]. Из менее обычных сорбентов необходимо упомянуть сахарозу [45] и гидроокись железа [59].

Системы растворителей и применение. Обзор хроматографиче ского разделения ряда синтетических красителей приведен в табл. 67. Финские авторы Сало и Сальминен [68] для идентифи­ кации отдельных красителей помимо значений RF пользовались также спектральными данными (после элюирования красителя из слоя) при измерении в щелочном и кислом растворах.

Выделение красителя проводят при помощи высококачественной шерстяной ткани. 5—10 г исследуемого пищевого продукта, содержащего крахмал, смеши­ вают с раствором аммиака (5%-ный раствор в 70%-ном эталоне), смесь центри­ фугируют, отделяют жидкость, упаривают досуха и остаток растворяют в 30 мл воды. Добавляют 5 мл 10%-ного раствора бисульфата калия и смесь кипятят с полоской шерстяной ткани, пока краситель не адсорбируется на ней. Для из­ влечения красителя из ткани применяют 5%-ный раствор аммиака. Аммиачный раствор упаривают до небольшого объема и наносят на пластинку. Таким же образом можно выделить красители из пищевых продуктов, содержащих жела­ тин, из фруктовых соков, мармелада и засахаренных фруктов.

Монтаг [49] описал определение некоторых жирорастворимых природных и синтетических красителей, выделенных из различных пищевых продуктов.

Жиры или масла отделяют экстракцией петролейным эфиром и вытяжку пропускают через колонку с окисью алюминия. Жировые вещества вымывают петролейным эфиром, а красители элюируют этанолом. Масляный желтый, ко­ торый также элюируется петролейным эфиром, можно снова адсорбировать из элюата на окиси алюминия, которую затем отфильтровывают и краситель из нее извлекают этанолом.

Некоторые синтетические красители (индофенол, желтый Мар циуса, судан красный, жировой оранжевый, жировой красный, жировой желтый и масляный желтый) можно разделить на си ликагеле G в смеси равных объемов бензола и четыреххлористо го углерода (1:1). Если окажется необходимым, дальнейшее раз­ деление можно проводить бензолом.

Значения hRF некоторых синтетических красителей Поглощение2 Поглощение" Целлюлоза MN Целлюлоза Краситель 0,1 н. NaOH 0,1 н. НС1 0,1 н. NaOH 0,1 н. НС1 сз сз С С — 595 420 Новый голубой 610 Индантреновый синий — — — Индигокармин 610 — 440 И Гвинея зеленый 620 420 Патентный зеленый 610 620 — 430 Кислотный желтый 395 — 390 490 42 Тартразин 395 430 — — 9.иега-Оранжевый 440 480 — — 43 пара-Оранжевый 450 — — 480 41 Азорубин 500 — 515 400 Нафтоловый пурпуровый 465 505 — — 25 Амарантовый S 495 520 360 Бриллиантовый пунцовый 4 RC — — 440 510 65 Пунцовый 6 R — — 430 520 71 Огненно-красный 460 490 — — 81 Сине-черный 580 570 390 410 Кислотный фиолетовый — 595 620 420 Фенил-фиолетовый 380 600 600 Пунцовый SX 480 500 360 370 Эритрозин 525 — — — 86 5 Хинолиновый желтый Метиловый оранжевый Первый максимум, нм [68].

СЗ та же система [99];

Второй максимум, нм [68]. С4 ацетоуксусный эфир — метанол — В, г, С5 ацетоуксусный эфир — пиридин — С6 этилацетат — пиридин — вода (7:

hRp отнесено к метилоранжу.

С7 4%*ный раствор сульфата натрия С8 вода [52].

Обозначения:

С1 2%-ный раствор цитрата натрия в 5%-ном аммиаке [68];

С2 трег-бутанол — пропионовая кислота — вода (50: 12:38;

0,4 КС1) [68];

406 Специальная часть Природные красители (каротин и красящие вещества зелени и овощей) можно разделять в системе хлороформ — уксусный ан­ гидрид (75:2) или метилэтилкетон — уксусная кислота — мета­ нол ( 4 0 : 5 : 5 ).

Биксин из маргарина экстрагируют бензолом и жировые примеси отделяют с помощью окиси алюминия (жиры затем элюируют из колонки бензолом).

Биксин вымывают из сорбента смесью этанол — уксусная кислота (10:1). При выделении каротина из маргарина 3 г последнего кипятят 20 мин с 30 мл '0,5 н. КОН в метаноле, смесь разбавляют водой, экстрагируют петролейным эфи­ ром и экстракт наносят на пластинку. Каротин и биксин делят двумерной хро­ матографией;

сначала элюируют бензолом, потом смесью метилэтилкетон — уксусная кислота — метанол (40 : 5 : 5 ).

Красители сыра выделяют следующим образом: 25—30 г сыра смешивают с песком и смесь экстрагируют ацетоном. После отгонки ацетона остаток сме­ шивают с бензолом, отделяют отслоившуюся воду и бензольный слой обезжири­ вают на колонке с окисью алюминия. Таким же образом можно выделить кра­ сители куркумы и красного перца из салями (экстракция эфиром) и разделить их двумерным хроматографированием.

Другие сорбенты (табл. 67 и 68) также пригодны для удовлет­ ворительного разделения синтетических, преимущественно пище­ вых, красителей. Давидек и Яничек [14] разделяли растворимые в жирах пищевые красители распределительной хроматографией на слое крахмала, обработанного 10%-ным раствором парафи­ нового масла, в системах С1 и С2 (табл. 68). Экстракцию пента ном проводили после щелочного гидролиза изучаемого материала.

Приготовление слоя. К 10%-ному раствору парафинового масла в петролей ном эфире прибавляют крахмал (около 10 г) до образования суспензии, кото­ рую удобно наносить на пластинку. Затем петролейному эфиру дают испариться при комнатной температуре.

Для разделения некоторых пищевых красителей применяются также незакрепленные слои окиси алюминия (системы СЗ—С7 в табл. 68) [17].

25 г жира кипятят с обратным холодильником с 200 мл 50%-ного едкого кали в 90%-ном спирте в течение 30 мин. Смесь разбавляют 100 мл воды и экстрагируют трижды с помощью 50 мл пентана. После высушивания пентан отгоняют в вакууме, остаток растворяют в 2 мл этанола и наносят на пластинку.

Шнейдер и Хофштеттер [78] -разделяли «а слоях целлюлозы некоторые водорастворимые пищевые красители, применяемые также в фармации.

Выделение красителя из драже. 10 шт. драже заливают 8 мл 1 н. НС1 и смесь оставляют стоять, пока не растворится сахарный слой (сердцевину драже быстро отделяют от жидкости). Смесь центрифугируют и 5 мкл раствора нано­ сят непосредственно на старт хроматографической пластинки. Элюируют смесью 2,5%-ного раствора цитрата натрия и 25%-ного NH4OH в отношении ( 4 : 1 ).

Значительное число различных водорастворимых красителей де Клер и Массар [102] хроматографировали в системах диметил сульфоксид — пропанол-2 (7:3) (с добавкой 1% сернокислой Специальная часть Таблица Значения HRF некоторых пищевых красителей Крахмал/па­ Окись алюминия рафиновое масло Поглоще­ ние, нм Краситель [17] С С1 С5 С С2 СЗ С 440 57 41 Желтый ОВ 61 67 442 71 68 43.

Желтый АВ 63 480 Оранжевый SS 38 29 74 518 03 04 43 Масляный красный OS Судан I 472 41 42 43 36 Судан II 485 28 72 66 50 Судан III 50 498 24 10 54 Судан IV 10 22 510 04 88 Судан красный G 40 490 53 58 12 Судан желтый SG 396 33 48 95 32 Масляный желтый 94 75 403 66 59 Судан GN 16 74 396 64 72 Обозначения:

С1 метанол — вода — уксусная кислота ( 1 6 : 3 : 1 ) [14];

С2 метанол — вода — уксусная кислота ( 8 : 1 : 1 ) [14];

СЗ четыреххлористый углерод [17];

С4 петролейный эфир [17];

С5 петролейный эфир — бензол ( 4 : 1 ) [17];

С6 петролейный эфир — бензол (1 : 1) [17];

С7 петролейный эфир — четыреххлористый углерод (1 : 1) [17].

меди). Тевари и сотр. [115] хроматографировали 27 красителей из алкогольных напитков. Они работали на- силикагеле в системе н-бутанол — уксусная кислота — вода ( 4 : 1 : 5 ). Мак-Кейми и Спицнагл [108] анализировали некоторые фенотиазиновые кра­ сители и сопровождающие их загрязнения. Гудлесс и сотр. [28} опубликовали обширную статью, посвященную хроматографии водорастворимых красителей на микрокристаллической целлю­ лозе в 15 системах растворителей.

Для разделения 10 различных водорастворимых красителей оказались удобными слои полиамида;

в качестве системы поль­ зовались смесью аммиак — метанол-—вода в различных соотно­ шениях [13].

Выделение красителей. Слабо кислую вытяжку или подкисленную жидкую пробу смешивают с 10 г полиамида и смесь отфильтровывают. Порошок поли­ амида с адсорбированными красителями промывают 50%-ной уксусной кисло 408 Специальная часть той, чем удаляют природные красители. Когда начнет стекать бесцветный филь­ трат, отдельные красители элюируют 5%-ным раствором аммиака в метаноле, растворитель выпаривают досуха, остаток растворяют в воде и наносят на пла­ стинку.

Китайские исследователи [33] разделяли ряд пищевых кра­ сителей на смеси полиамида и кремнезема.

10 г полиамида, 80 мл 90%-ной муравьиной кислоты и 20 мл дистиллиро­ ванной воды нагревают при постоянном перемешивании до температуры около 40 °С. Сразу после образования однородного раствора охлаждают до комнатной температуры и прибавляют 40 г кремнезема.

" Помимо уже упомянутых Шнейдера и Хофштеттера [78] хро­ матографией красителей, применяемых в фармации, занимались и другие авторы [43, 53, 103]. Леман и Колле [43] идентифици­ ровали красители в лекарственных формах, содержащих крахмал и пектин, и в желатиновых капсулах;

они адсорбировали краси­ тели из кислого раствора на колонке полиамида, а собственно разделение проводили на целлюлозе, обработанной буферным раствором. Пеннер [53] работал со слоями микрокристаллической целлюлозы. В статье [113] описан анализ красителей, допускае­ мых фармакопеей.

Пинтер и Крамер [56] разделяли красители, применяемые в косметике, на силикагеле в верхней фазе смеси бутанол — уксус­ ная кислота — вода (50:12:38), содержащей 0,4%.хлорида ка­ лия, а Пердих [54] хроматографировал их на целлюлозе, сили­ кагеле, окиси алюминия и полиамиде. Автор этой большой рабо­ ты анализировал красители в губной помаде.

Триазиновые красители и метиленовый голубой можно разде­ лить на силикагеле в смеси этанол — хлороформ — уксусная кис­ лота (85:10:5). Проявление следует вести в темноте во избежа­ ние фотохимической деградации [44].

Анвар [1] и Роллинз [62] описали выделение и хроматогра­ фию некоторых растительных пигментов. Роллинз пользовался предметными стеклами для микроскопии;

каротины, хлорофилл а и хлорофилл b и ксантофиллы он разделял на силикагеле с крахмалом. Пигменты хлоропластов из листьев и водорослей удобно хроматографировать на слоях из различных материалов, нанесенных на пластмассовую подложку [74]. Для разделения хлорофиллов а и Ь пригодны сахароза с крахмалом и система петролейный эфир— хлороформ (3:1) [45].

Пластинки готовят, нанося хорошо перемешанную суспензию 50 г сахарозы, содержащей 3% крахмала в 100 мл хлороформа, на чистое стекло с помощью приспособления Шталя для вырав­ нивания насыпного слоя (рис. 10).

Хмель [34] изучал влияние лабораторных условий, главным образом температуры, на хроматографию красителей. Влажность оказывает сильное влияние на подвижность гидрофобных веществ Специальная часть и особенно проявляется в слабополярных системах. Значения RF обычно возрастают с увеличением влажности. Нередко можно улучшить разделяющую способность сорбентов добавлением воды к слою. Ретти и Хейнз [60] опубликовали обширную обзорную статью о тонкослойной хроматографии красителей. Брейн и сотр.

[101] описали количественное определение некоторых фармацев­ тических красителей денситометрическим методом на приборе Vitatron TLD 100.

5.7.2. Вспомогательные вещества, применяемые в технологии лекарственных средств К вспомогательным веществам, употребляемым в технологии препаратов, относятся вкусовые и ароматизирующие добавки, антиоксиданты, консервирующие вещества, противомикробные средства, синтетические красители, поверхностно-активные ве­ щества для получения лекарственных препаратов различной кон­ систенции, составные части мазевых основ и т. д. Тонкослойная хроматография синтетических красителей и некоторых антиокси дантов из группы витамина С упоминается в соответствующих разделах.

5.7.2.1. Синтетические сладкие вещества Разделению синтетических сладких веществ методом ТСХ по­ священо большое число работ [12, 24, 36, 40—42, 50, 61, 64, 76, 78, 119].

Сорбенты. Многие авторы разделяли синтетические сладкие вещества на силикагеле [24, 41, 42, 50, 98]. Другие исследователи пользовались модифицированной целлюлозой, например микро­ кристаллической целлюлозой авицел или ДЭАЭ-целлюлозой [50], смешанными слоями 60% ацетилцеллюлозы и 40% полиамида [66] и этой же смесью с флуоресцентным индикатором (9 г аце­ тилцеллюлозы и 6 г полиамида с 0,3 г флуоресцентной добавки ZS-cynep) [98]. Первые из упомянутых авторов [50] пользова­ лись также слоями окиси алюминия и слоями полиамида.

Системы растворителей. Гувен и сотр.,[24] для разделения синтетических сладких веществ пользовались системой бутанол — уксусная кислота — вода ( 3 : 1 : 1 ). Вальди '[97] работал с сили кагелем в системе хлороформ — ледяная уксусная кислота (9:1), другие исследователи [24] — на том же слое в системе м-бута нол —95%-ный этанол — 28%-ный аммиак — вода (40:4:1:9).

Для слоев ацетилцеллюлозы и полиамида удобной оказалась система Shell S. А. (смесь изомерных метилбензолов)—м-пропа нол — уксусная кислота — муравьиная кислота ( 4 5 : 6 : 7 : 2 ). На гасава и сотр. [50] подвергали разделению синтетические сладкие вещества на слоях микрокристаллической целлюлозы и полиами 27— 410 Специальная часть да в системе бензол—этилацетат—муравьиная кислота ( 5 : 1 0 : 2 ) ;

при делении на ДЭАЭ-целлюлозе они пользовались 0,5 М фор миатом аммония с рН 6,5, а на окиси алюминия — системой про панол-2 — аммиак (4:1).

Обнаружение. Синтетические сладкие вещества можно обна­ руживать 0,1%-ным раствором пинакриптолового желтого (Д 167) в ультрафиолетовом свете, раствором азотнокислого серебра и пирогаллола (Д64), метилротом в фосфатном буферном растворе (Д 146) и другими реактивами [50]. Удобным для их детектиро­ вания оказался также родамин В (Д175]. После опрыскивания этим реактивом применяют раствор азотнокислого серебра (Д55) [24]. В этой же статье описано обнаружение сахарина, циклама та натрия и о-сульфанилбензойной кислоты смесью 10%-ного раствора сернокислой меди и 10%-ного раствора аммиака (5:1).

Применение. Упомянутые выше синтетические сладкие веще­ ства Гувен разделял тонкослойной хроматографией на силикаге ле [24]. Вальди [97] разделял сахарин и дульцин на силикагеле.

Перед разделением в упомянутой системе оба вещества извлекали из подкисленного раствора этилацетатом. Отделенный слой этил ацетата содержал сахарин, тогда как из водного слоя после под щелачивания извлекали этилацетатом дульцин. Почти все упо­ минавшиеся авторы отделяли друг от друга сахарин, дульцин и цикламат натрия [22, 24, 42, 50, 66, 97, 98]. Обнаружение син­ тетических сладких веществ в пищевых продуктах и лекарствен­ ных препаратах описывается в статьях [118, 120].

Количественное определение. Дас, Мэтью и Митра [12] опре-.

деляли цикламат натрия после выделения на силикагеле в системе этилацетат — пропанол-2 — ацетон — метанол — вода ( 5 0 : 1 5 : 1 5 : 4 : 1 6 ) по интенсивности флуоресценции в УФ-свете при длине волны 540 нм (см. также статью [121]).

5.7.2.2. Антиоксид анты, консервирующие и противомикробные добавки Сорбенты. Синтетические антиоксиданты были подвергнуты разделению на силикагеле G одномерным [57, 88] и двумерным [97] хроматографированием. При одномерном хроматографиро вании применяли слои полиамида [17, 51] и кремнезема [46, 47].

Пользовались также силикагелем, к которому добавляли двунат риевую соль бис-р-аминоэтилового эфира этилендиаминтетраук сусной кислоты [72], и смешанными слоями полиамида и сили кагеля (1:1) [25].

Консервирующие вещества подвергали разделению на силика­ геле с флуоресцентным индикатором [22, 57, 86]. Некоторые ав­ торы обнаруживали консервирующие добавки из группы сложных эфиров n-оксибензойной кислоты на силанизированном силикаге Специальная часть ле HF254 (Merck) [58], а вместе с другими консервантами — на полиамиде с силикагелем [32, 51]. Для деления этих веществ применяли также смешанные слои силикагеля и кремнезема [55, 77] и слои полиамида [46, 98].

Шаршунова разделяла противомикробные добавки на сили­ кагеле и окиси алюминия [81], Вагман и Бейли [96]—-на смеси 70% кремнекислоты и 30% стеклянного волокна (в виде готовых пластинок хром AR 500 фирмы Mallinckrodt).

Системы растворителей. Зеер [70] разделял антиоксиданты на силикагеле двумерным хроматографированием: в первом направ­ лении-— в хлороформе, во втором — в бензоле. Некоторые иссле­ дователи подвергали делению эти вещества на силикагеле в системе хлороформ — уксусная кислота (65:35) и (80:20) [15, 16] или в системах бензол — хлороформ и хлороформ — диметил формамид — муравьиная кислота (99:11:4) [93] и хлороформ — метанол— уксусная кислота (90:10:2) [75]. На смешанных слоях силикагеля и кремнезема антиоксиданты разделяли в сис­ теме гексан — ледяная уксусная кислота (4:1) или (6:1) [48].

При делении на полиамиде для этой группы веществ пользова­ лись эфиром [18], системой четыреххлористый углерод — этанол (7:3) [18] и метанол'—ледяная уксусная кислота — вода (6 : 1 : 3) или соответственно (6:0,5:3,5) [17]. Некоторые авторы [69] подвергали разделению антиоксиданты на слоях целлюлозы, поль­ зуясь смесью я-пропанол— уксусная кислота — муравьиная кис­ лота — AC Shell Sol (6 : 3 : 3 : 45).

Консервирующие добавки были разделены в системе н-пен тан — ледяная уксусная кислота (88:12) [22] или хлороформ — этанол—-ледяная уксусная кислота (95:2,5:2,5) [86]. Пинелла и сотр. [55] для разделения этих веществ на смешанном сорбенте кремнезем — силикагель GF254 [20] пользовались системой н-гек сан — уксусная кислота (96:4), Войдих [98] работал на слоях целлюлозы с системами ацетон — уксусная кислота — бензол (45:1:5) и (3:1:60) и н-пентан — н-гексан — уксусная кислота (10: 10:3).

Противомикробные вещества делили в системах бензол — эта­ нол и др. (табл. 69), пользуясь силикагелем или окисью алюми­ ния {81].

Обнаружение. Для обнаружения антиоксидантов пригоден сульфат железа с красной кровяной солью (Д100). Пользова­ лись также хлоридом железа (III) и а,а'-дипиридилом (Д 49), аммиачным раствором азотнокислого серебра (Д57а), диазоти рованной сульфаниловой кислотой (Д25) и другими реактивами [100, 116].

Для обнаружения консервирующих добавок можно применять 1%-ный раствор хлорида железа(III) (Д97), 0,1%-ный раствор роданида аммония в этаноле (Д177), 3%-ную перекись водорода 27* Специальная часть Таблица Отделение септонекса от составных частей глазных капель [81] Значения hRp в различных системах сз С С С Вещество А Б А А А Б 0 10 8 15 Септонекс 0 0 0 0 Адреналин 0 0 12 17 Атропин 8 0 0 27 Эфедрин 5 25 68 Этилморфин 57 Физостигмин 70 5 17 8 Гоматропин 0 30 5 Кокаин 60 5 8 Пилокарпин 30 50 20 Скополамин 25 10 52 10 Тетракаин (дикаин) 62 5 66 Обозначения:

А щелочная окись алюминия активности III;

Б силикагель G (Merck);

С1 бензол — этанол (9: 1);

С2 хлороформ — этанол (95:5);

СЗ бензол — этанол (8:2);

С4 хлороформ — этанол (9: 1).

и диазотированную сульфаниловую кислоту (Д26), смесь бром фенолового синего и метилового красного в этаноле (Д13), а так­ же раствор бихромата калия.

Для обнаружения противомикробных добавок типа четвертич­ ных оснований пригодны пары иода (Д104), подкисленный раст­ вор иода и иодида калия (Д 108) и реактив Драгендорфа, моди­ фицированный по Мюнье (Д53а). Другие виды этих веществ детектировали 0,5%-ным раствором перманганата калия (Д 142) [81].

Применение. При помощи двумерной хроматографии были разделены синтетические антиоксиданты: бутилокситолуол (БОТ), дибутилоксианизол, дифенил-я-фенилендиамин, а-токоферол, тет раэтилтиурамдисульфид, пентаметилоксихроман, бутилоксиани зол, моноглицерилцитрат, бутоксианизол, гваяковая смола, про пилгаллат, нордигидрогваяретовая кислота и пальмитат аскорби­ новой кислоты. Для их количественного определения служила эталонная смесь стандартных веществ фирмы Desaga, которую Специальная часть хроматографировали одновременно с исследуемой пробой [70].

Гувен и сотр. [104] также разделяли ряд антиоксидантов.

На полиамиде хроматографировали многие синтетические ан тиоксиданты, например нордигидрогваяретовую кислоту, пропил галлат, аскорбилпальмитат и трег-бутилоксианизол;

даже значи­ тельные количества токоферолов не мешали их разделению [18].

На этом же сорбенте другие исследователи [21] разделяли доде цилгаллат, нордигидрогваяретовую кислоту, этилгаллат, бутилок сианизол, бутилокситолуол, октилгаллат и галловую кислоту.

Антиоксиданты выделяли из жиров перед хроматографическим разделением.

Жир или масло растворяли в петролейном эфире, раствор смешивали с си ликагелем, не содержащим следов железа, и оставляли стоять в течение 30 мин.

Антиоксиданты из жира адсорбировались силикагелем, откуда их извлекали взбалтыванием с эфиром.

На слоях целлюлозы MN 300 (Macherey — Nagel) удалось раз­ делить нордигидрогваяретовую кислоту, пропилгаллат, октилгал­ лат и додецилгаллат [93].

Из консервирующих веществ методом ТСХ на силикагеле Q разделяли сложные эфиры /г-оксибензойной кислоты, так назы­ ваемые парабены — метиловый, этиловый, пропиловый и бутило­ вый [13];

в другой работе [105] описано разделение метоксибен зойных эфиров. Способ разделения метилового и пропилового эфиров галловой кислоты разработали другие авторы [86]. Оба вещества они обнаруживали после замены элюирующеи системы в присутствии глицерина в глицериновой мази по Чехословацкой фармакопее, изд. 3, в смягчающей мази по Чехословацкой фарма­ копее, изд. 3, в мази Хольта в смеси со стеариновой кислотой,.

холестерином, ментолом и глицерином, а также со стеариновой кислотой в стеариновой мази.

Экстракция мазевой, основы. 1 г мази смешивают с 4 мл дистиллированной воды. Из водного раствора содержащиеся в нем вещества извлекают эфиром трижды порциями по 5 мл. Эфирные вытяжки объединяют, упаривают досуха на водяной бане и остаток растворяют в 0,5 мл 96%-ного спирта. Этот рас 1вор наносят на пластинку в количествах, соответствующих 25—50 мкг иссле­ дуемых веществ.

Хроматографирование. Разделение проводят на слоях силикагеля G или на готовых пластинках силуфол с крахмалом в качестве связующего и флуоресцент­ ным индикатором для длины волны 254 нм или в камере, -предварительно насы­ щенной парами растворителя (30 мин) (слой силикагеля с крахмалом активи­ руют нагреванием в течение этого же времени при температуре 110 °С). Для разделения указанных веществ в глицериновой мази удобна система хлоро­ форм— ацетон — аммиак ( 1 : 8 : 1 ) ;

вещества, содержащиеся в мази Хольта и в смягчающей мази, делят в системе петролейный эфир — хлороформ — ледяная уксусная кислота (10: 1 :4), а вещества стеариновой мази — в этой же системе или в системе хлороформ — этанол — ледяная уксусная кислота (95:25:2,5).

Флуоресцирующие вещества и вещества, появляющиеся в виде темных пя­ тен на флуоресцирующем фоне, можно наблюдать в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 и 366 нм, холестерин и стеариновую кислоту — опрыскиванием 414 Специальная часть слоя концентрированной серной кислотой. Для обнаружения стеариновой кисло­ ты служит также раствор натриевой соли флуоресцеина (0,1 г в 100 мл этано­ ла). При действии паров брома на хроматограмму образуются коричнево-розо­ вые пятна, отчетливо видимые в ультрафиолетовом свете.

Кислоты бензойная, о-хлорбензойная, я-хлорбензойная, дегид рацетовая, салициловая, сорбиновая и и-оксибензойная были разделены на силикагеле, активированном в течение 60 мин при температуре 120 °С [57]. Пюттер и сотр. [111] обнаруживали производные салициловой кислоты в крови и плазме. Портых [ПО] подвергал разделению на готовых пластинках силикагеля фирмы Merck некоторые оксикислоты, а именно молочную, яб­ лочную и лимонную, являющиеся составными частями инфузион ных растворов. Другие авторы [106] исследовали методом ТСХ взаимодействие вспомогательных веществ с лекарственными.

Нагасава и сотр. [51] разделяли двумерной хроматографией на слоях полиамида салициловую, бензойную, дегидрацетовую, и-оксибензойную кислоты и их алкиловые эфиры, содержащиеся в жирах, другие исследователи [46] выделяли эти вещества из жиров перед хроматографированием на полиамиде при помощи перегонки с перегретым водяным паром и экстракции дистиллята эфиром.

Противомикробные добавки подвергали разделению во мно­ гих системах на слоях окиси алюминия и силикагеля (табл. 70) [81]. Эти вещества обнаруживали также в офтальмологических препаратах в присутствии других веществ.

Слой окиси алюминия готовят обычным образом. Септонекс, метил-га-окси бензоат и пропил-я-оксибензоат, так же как и составные части и продукты разложения глазных капель, обнаруживают парами иода. Хлорид бензалкония и мертиолат натрия обнаруживают 0,5%-ным раствором перманганата калия.

Пятна бензалкония красные, а мертиолата белые.

Определяемые пробы наносят микропипетками Винтерроба. На слоях окиси алюминия вещества делят после насыщения камеры парами растворителя в те­ чение 2 ч (чашка Петри диаметром 30 см). Слои силикагеля активируют в те­ чение 30 мин при температуре 110 °С в сушильном шкафу, а камеру при упот­ реблении этого сорбента насыщают парами системы растворителей в течение 30 мин. Глазные капли наносят в количествах, соответствующих 25—50 мкг оп­ ределяемых веществ. Отделение бромида! а-карбэтоксипентадецилтриметиламмо ния (септонекса) от обычных составных частей глазных капель проводят на незакрепленных слоях окиси алюминия в системе бензол — этанол (9:1) или (8:2) и в системе хлороформ — этанол (9:1) (табл. 70). Метиловый и пропи ловый эфиры ге-оксибензойной кислоты хорошо отделяются на слоях силикагеля G от септонекса, мертиолата натрия и хлоргидратов этилморфина, пилокарпина и дикаина в системах бензол — этанол (9:1) и хлороформ — этанол (95:5). Их можно разделять и на слоях окиси алюминия в системе хлороформ — этанол (95:5), но отделение от прочих составных частей глазных капель в этом случае менее удобно. Авторы определяли физостигмин, кокаин, гоматропин, скополамин, эфедрин и пилокарпин в присутствии метил-п-оксибензоата и пропил-га-оксибен зоата (табл. 70).

Все исследованные консервирующие вещества можно обнаруживать на си­ ликагеле в системе хлороформ — этанол (95:5). Однако этим способом в их присутствии можно открывать только гоматропин и этилморфин. Система хло Специальная часть Таблица Обнаружение консервирующих добавок в глазных каплях [81] Значения hRp в различных системах сз С С С1 С Вещество А А Б А А А Б 8 15 8 Септонекс Н 55 н 5 н н Н Мертиолат натрия 55 72 63 48 Метиловый эфир я-оксибензой- Н ной кислоты н 67 74 66 57 Пропиловый эфир п-оксибен зойной кислоты 5 52 42 н н Хлорид бензалкония 0 0 0 0 Адреналин 48 12 17 0. Атропин 27 8 0 14 Эфедрин 57 10 68 Этилморфин 65 77 Физостигмин 8 70 30 Гоматропин 17 0 30 Кокаин 8 60 5 93 Пилокарпин 16 50 20 Скополамин 45 52 10 25 Дикаин 8 62 5 66 Обозначения:

А щелочная окись алюминия активности III;

Б силикагель G (Merck);

н система непригодна;

С1 бензол — этанол ( 9 : 1 ) ;

С2 хлороформ — этанол (95 : 5);

СЗ бензол — этанол ( 8 : 2 ) ;

С4 хлороформ — этанол ( 9 : 1);

С5 хлороформ — этанол — ледяная уксусная кислота ( 9 5 : 2, 5 : 2, 5 ).

роформ — этанол — ледяная уксусная кислота (95 : 2,5 : 2,5) пригодна лишь для разделения действующих составных частей глазных капель и неприменима для обнаружения исследуемых консервирующих веществ.

Консервирующие добавки в глазных каплях идентифицировали и другие авторы [107].

Количественное определение. Мартелли и сотр. [47] разрабо­ тали способ количественного определения антиоксидантов бутил оксианизола, бутилокситолуола, а-токоферола, пропилгаллата, октилгаллата, лаурилгаллата, аскорбиновой кислоты, аскорбил пальмитата и аскорбата натрия после их разделения фракциони 416 Специальная часть рованием на три группы и злюирования различными растворите­ лями с обнаружением по флуоресценции или поглощению в уль­ трафиолетовом свете. Майлз [109] определял антиоксиданты после разделения и злюирования из слоя.

Полуколичественное определение сложных эфиров п-оксибен­ зойной кислоты после их разделения на готовых пластинках си ликагеля описал Тилеман [117]. Он же [116] показал возмож­ ность выделения и полуколичественного определения 4-окси-З-ме токсибензальдегида (ванилина).

Японские исследователи [90] количественно определяли раз­ личные эфиры n-оксибензойной кислоты спектрофотометрическим путем;

определению предшествовало выделение этих веществ из лекарственных препаратов посредством экстракции водой и сер­ ной кислотой, эфиром и метанолом, затем следовало хроматогра фическое разделение. Рангоне и Амброзио [58] и Таммилехто и Бюхи [92] пользовались спектрофотометрией для определения консервирующих веществ в фармацевтических препаратах после разделения методом ТСХ. Также спектрофотометрическим путем определяли фенолокислоты после хроматографического разделе­ ния в тонких слоях [112]. Противомикробные вещества опреде­ ляли с помощью биоавторадиографии [96].

5.7.2.3. Прочие вспомогательные вещества Многие исследователи [5, 21, 32, 71, 84] подвергали полиэти ленгликоли разделению тонкослойной хроматографией. Тома и сотр. [94] делили поверхностно-активные вещества, именно про­ изводные полиэтиленгликолей, двумерным и проточным хромато графированием. Они работали на слоях силикагеля, активирован­ ных в течение 45 мин при температуре 110°С. Для разделения они пользовались системой н-бутанол— этанол — 25%-ный амми­ ак ( 1 4 : 3 : 5 ), а при двумерном хроматографировании — во втором направлении системой хлороформ — метанол — вода (3:25:12).

Определяемые вещества в зависимости от их природы наносили в количествах 20—300. мкг. Для обнаружения разделенных ве­ ществ оказалась удобной смесь модифицированного реактива Драгендорфа и 20%-ного раствора хлорида бария (2:1). Другие авторы [84] выделяли различные типы полиэтиленгликолей из смесей на слоях силикагеля. В мази макро-голь по Фармакопее ЧССР, изд. 3, и в полиэтиленовой мазевой основе, обычно упо­ требляемой для косметических средств, они обнаружили биоло­ гическую серу, салициловую кислоту, сульфатиазол и т. д.

Бахтина и сотр. [5] для разделения полиэтиленгликолей поль­ зовались слоями окиси алюминия и системой хлороформ — этанол (92:8). Им удалось разделить полиэтиленгликоли до молекуляр­ ной массы 200. Эрхард и сотр. [20] разделяли сахара и их мно Специальная часть гоатомные спирты на слое силикагеля, к которому добавляли 60 мл 0,1 н. борной кислоты (на 30 г силикагеля), в системе м-пропанол — метилэтилкетон — вода — этилацетат ( 5 : 5 : 1 : 3 ).

При обнаружении восков [25] пользовались силикагелем и системой бензол — н-гептан — изооктан ( 2 : 1 : 1 ). Хартсоу [25] на слоях силикагеля в системе н-бутанол — 5 н. аммиак — мета­ нол ( 6 : 2 : 2 ) обнаруживал жидкий парафин, сесквиолеат сорби тана и стеарат магния. Для обнаружения этих веществ он при­ менял серную кислоту с последующим опрыскиванием 0,5% -ным водным раствором перманганата калия, а для остальных ве­ ществ— только 0,5%-ный раствор перманганата. Масло какао, цетиловой спирт, спермацет и другие вещества он делил в систе­ ме циклогексан — ацетон (4:5) или хлороформ — этанол (9:1) и обнаруживал их указанным раствором.

Обнаружение пропиленгликоля, глицерина и сорбита в мазях было осуществлено на слоях силикагеля и на готовых пластинках силуфол [114]. В этой же статье описано обнаружение холестери­ на и лаурилсульфата натрия в косметических препаратах и ис­ следована возможность детектирования консервантов метилового и пропилового эфиров я-оксибензойной кислоты в присутствии холестерина, эмульгаторов и восков.

5.7.3. Рентгеноконтрастные средства В рентгенодиагностике преобладают гетероциклические соеди­ нения с одним атомом азота и 1—3 атомами органически связан­ ного иода в молекуле [122].

Шталь и Пфайфле [80] подвергали разделению эти вещества на силикагеле HF254 с крахмалом в качестве связующего. Они пользовались системами этилацетат — пропанол-2 — аммиак (55:35:20) или ацетон — пропанол-2 — аммиак ( 4 : 4 : 2 ), а также системой хлороформ — уксусная кислота (95:5). Для обнаруже­ ния использовали фотохимическое расщепление соединений, содер­ жащих органически связанный иод, после их хроматографирова ния и.последующего опрыскивания хроматограммы 50 % -ной уксус­ ной кислотой и облучения коротковолновым ультрафиолетовым светом с расстояния 5 см. Отщепляющийся при этом иод реагиро­ вал с крахмалом с образованием синих пятен. При таком способе обнаружения предел обнаружения составляет 5 мкг вещества (табл. 71).

Другие исследователи [27] пользовались тем же сорбентом,' но в ином соотношении (0,5 г крахмала, 30 г силикагеля HF и 70 мл дистиллированной воды) для разделения рентгеноконт растных веществ, описанных в Швейцарской фармакопее, изд. 6.

Они работали в системе этилацетат — пропанол — 25%-ный ам­ миак (55:35:20). Разделенные вещества обнаруживали по ту 418 Специальная часть Таблица Разделение некоторых рентгеноконтрастных веществ [6] на силикагеле HF Значения hRp в различных системах Вещество С1 С Адипиодон (билигност) Амидотризоевая кислота (триомбрин — кислота) Иофеноевая кислота Ацетризоевая кислота Метиодал (сергозин) Диодон (кардиотраст) Иобензамовая кислота 31 [37] Иоподат натрия (билимин Фенобутиодил Пропилиодон Обозначения:

С1 этилацетат — пропанол-2 — аммиак (55:35:20);

С2 хлороформ — уксусная кислота (15:5).

шению флуоресценции в ультрафиолетовом свете. Разделенные вещества проявляли реактивом, содержавшим сульфат церия и мышьяковую кислоту, и зафиксированные таким образом пятна опрыскивали 2%-ным этанольным раствором и-аминобензойной кислоты, 1%-ным водным раствором ос-нафтиламина и т. д. Ве­ щества, содержавшие свободную аминогруппу, обнаруживали нингидрином.

Харламов и сотр. [37] определяли спектрофотометрически иодогност, меченный 131 1, и исследовали в нем положение метки.

5.7.4. Растворы реактивов До последнего времени анализу растворов реактивов методом ТСХ уделялось мало внимания. Лишь Шаршунова, Сючова и Лу качова опубликовали статью [87], в которой описали разрабо­ танный ими способ определения составных частей избранных растворов реактивов — сульфосалициловой кислоты и соответст­ венно салициловой кислоты в 20%-ном растворе сульфосалици­ ловой кислоты, а также составных частей растворов Тюрка и Эс баха, альдегидного реактива Эрлиха, раствора Фелинга II и Ни Таблица Обнаружение составных частей некоторых растворов реактивов [85] Значения Прочие Исследуемые hRp иссле­ Название реактива Сорбент Система растворителей присутствующие составные части дуемых вещества веществ 20%-ный раствор Силикагель G Хлороформ — диоксан — ле­ Салициловая кислота сульфосалицило- дяная уксусная кислота сульфосалициловая вой кислоты (70 : 26 : 4) кислота Реактив Эсбаха — Силикагель — крем­ Бутилацетат — ледяная ук­ Пикриновая кислота, гипсом сусная кислота — дистил­ незем с лимонная кислота лированная вода (1:1) ( 3 0 : 2 0 : 10) Реактив Тюрка Силикагель с гипсом я-Бутанол—дистиллирован­ Уксусная кислота Метиловый фиолето­ 0,98% вый ная вода — ледяная ук­ сусная кислота ( 5 0 : 2 0 : 10) реак­ То же Бензол — этилацетат—ледя­ Соляная кислота л-Диметиламинобен Альдегидный тив Эрлиха ная уксусная кислота 20% зальдегид (90 : 5 : 5) Силикагель G—крем­ Бутилацетат — 85%-ная му­ Едкий натр 2 5 % Раствор Фелинга II Виннокислый калий— незем ( 1 : 1 ) равьиная кислота (30 : 20) натрий Едкий натр 9,4%, Виннокислый калий— Раствор Ниландера То же Бутилацетат — муравьиная основной азот­ кислота (30 : 2 0 ) натрий нокислый вис­ мут 420 Специальная часть ландера, и исследование стойкости этих растворов при их хране­ нии. Хроматографическому разделению составных частей приве­ денных растворов на наливных слоях и обнаружению возможных продуктов их разложения посвящена статья [85] (табл. 72).

Обнаружение салициловой кислоты как продукта разложения в растворах сульфосалициловой кислоты. Для этой цели применяют силикагель с гипсом в качестве связующего в системе хлороформ — диоксан — ледяная уксусная кис­ лота ( 7 0 : 2 6 : 4 ). По окончании проявления хроматограмму высушивают в тече­ ние 15 мин при температуре 110 °С. Разделенные вещества обнаруживают 1% ным раствором хлорида железа(III). Отдельные вещества дают фиолетовые пят­ на на белом фоне.

Хроматографическое обнаружение л-диметиламинобензальдегида в альде­ гидном реактиве Эрлиха проводят на силикагеле с гипсом в системе бензол— этилацетат — ледяная уксусная кислота ( 9 0 : 5 : 5 ). Пробу для разделения гото­ вят следующим образом: 5 мл раствора упаривают на водяной бане и под ко­ нец под инфракрасной лампой. Остаток растворяют в 5 мл 96%-ного спирта.

После разделения и сушки выделенные вещества обнаруживают парами иода.

Пятна окрашены в желто-коричневый цвет.

Для выделения метилового фиолетового из раствора Тюрка удобно пользо­ ваться силикагелем с гипсом и системой к-бутанол — ледяная уксусная кислота— вода ( 5 : 1 : 2 ). Пятна веществ обнаруживают по характерной окраске.

При выделении пикриновой и лимонной кислот из раствора Эсбаха поль­ зуются смешанным сорбентом-—силикагелем G и кремнеземом (1:1) и системой этилацетат—уксусная кислота — вода ( 3 : 2 : 1 ). По окончании хроматографи ческого разделения пластинку сушат в течение 1 ч при температуре 120 °С, что­ бы удалить уксусную кислоту. Пятна пикриновой кислоты обнаруживают по их собственной окраске, пятна лимонной кислоты детектируют реактивом Мунка (Д173).

При обнаружении виннокислого калия — натрия в реактивах Фелинга II и Ниландера на слоях силикагеля G и кремнезема (1:1) в системе бутилаце тат—85%-ная муравьиная кислота (3:2) поступают следующим образом: по окончании проявления слой сушат в течение 1 ч при 120 °С. Для обнаружения применяют водный раствор перманганата калия. Сразу после опрыскивания на хроматограмме появляются также пятна сопутствующих веществ, однако через 10 мин они исчезают, и остаются только светло-желтые пятна сегнетовой соли.

ЛИТЕРАТУРА 1. Anwar М. #., J. Chem. Educ, 40, 29 (1963).

2. Ates О., Amal #., Istanbul Univ. Eczacilik Fak. Мест., 2, 82 (1966);

Chem.

Abstr., 66, 118894 (1967).

3. Ates 0., Amal. #., Istanbul Univ. Eczacilik Fak. Мест., 3, 75 (1967);

Chem.

Abstr., 69, 24531 (1968).

4. Ates 0., Amal #., Istanbul Univ. Eczacilik Fak. Мест., 4, 36 (1968);

Chem.

Abstr., 70, 60886 (1969).

5. Бахтина Ю. А., Окунев П. А., Тараканов О. Г. ЖАХ, 21, 630 (1966).

6. Bancher., Scherz #., Prey V., Microchim. Acta, 1963, 712.

7. Barrett J. F., Ryan A. J., Nature, 199, 372 (1963).

8. Breitburd P., Puisieux F., Le Hir A., Ann. pharm. franc, 24, 191 (1966).

9. Copius-Peereboom J. W., Beekes H. W., J. Chromatogr., 14, 417 (1964).

10. Cuzzoni M. Т., Farmaco (Pavia), Edizione Pratica, 19, 323 (1964).

11. Daley R. J., Gray С. В. J., Brown S. R., J. Chromatogr., 76, 175 (1973).

12. Das D. К., Mathew Т. К-, Mitra S. N.. J. Chromatogr., 52, 334 (1970).

13. Davidek J., Davldkovd E., J. Chromatogr., 26, 529 (1967).

14. Davidek I., Janicek G., J. Chromatogr., 15, 542 (1964).

Специальная часть 15. Davldek J., Janieek G., Davidkovd E., Z. Lebensmittel. Unterss., 131, (1969).

16. Davidek J., Janieek G., Davidkovd E., Z. Lebensmitt. Unterss., 130, (1967).

17. Davidek J., Pokorny J., Z. Lebensmitt. Unterss., 115, 113 (1961).

18. Davidek J., Pokorny J., Janieek G., Z. Lebensmitt. Unterss., 116, 13 (1962).

19. Dickes G. J., Z. analyt. Chem., 223, 153 (1960).

20. Ehrhard L., Sucker H., Pharm. Ind., 32, 92 (1970).

21. Freimuth /., Foerster K-, Ludwig E., Nahrung, 9, 569 (1965).

22. Glinshir H., Morianz K-, Arch. Pharm., 293, 1065 (1960).

23. Gossele J:A. W., J. Chromatogr., 63, 433 (1971).

24. Gaven K. C, Oezsari G., Bayraktar G., Istanbul Univ. Eczacilik Fak. Мест., 2, 104 (1966).

25. Hartsaw P. E., цит. по Comer J. P., Comer J., J. pharm. Sci., 56, (1971).

26. Hayes W. P., Nyaku N. Y., Burns D. Т., J. Chromatogr., 71, 585 (1972).

27. Holvel-Kestermann M., Muhlemann H., Pharm. Acta Helv., 47, 394 (1972).

28. Hoodless R. A., Pitman K. G., Stewart T. E., Thomson I., Arnold J. E., J. Chromatogr., 54, 393 (1971).

29. Horobin R. W., Gardiner J., J. Chromatogr., 43, 545 (1969).

30. Hoodless R A., Thomson J., Arnold J.., J. Chromatogr., 56, 332 (1971).

31. Chiang H. Ch., J. Chromatogr., 40, 189 (1969).

32. Chiang H. Ch., J. Chromatogr., 44, 203 (1969).

33. Chian gH. Ch., Lin S. L., J,. Chromatogr., 44, 203 (1969).

34. Chmel K., Chem. Listy, 66, 1305 (1972).

35. Jones I. D., Butler L. S., Gibbs E., White R, C, J. Chromatogr., 1972, 70, 87.

36. Kamp W., Pharm. Weekbl., 101, 57 (1966);

Chem. Abstr., 64, 18429 (1966).

37. Харламов В. Т., Хуснидина 3. С. Методы анализа радиоактивных препара­ тов, 107 (1965);

Chem. Abstr., 64, 22 (1966).

38. Kigasawa К., Ikari N.. Ohkubo K-, Haga S., Yakugaku Zasshi, 93, (1973).

39. Kojima S., Ichibagase H., Yakuzaigaku, 26, 115 (1966);

Chem. Abstr., 70, 2486 (1969).

40. Komoda Т., Takeshita R., Eiseikagaku, 13, 204 (1967);

Chem. Abstr., 68, 58577 (1968).

41. Korbalak T. J., J. Assoc. Of fie. Agr. Chem., 52, 487 (1969).

42. Korbelak T, J., Bartlett J. N.. J. Chromatogr., 41, 124 (1969).

43. Lehmann G., Collet P., Arch. Pharm., 303, 855 (1970).

44. Loach K- W., J. Chromatogr., 60, 129 (1971).

45. Loewenschuss H., Wakelyn P. J., Analyt. Chim. Acta, 63, 230 (1973).

46. Ludwig E., Freimuth U., Nahrung, 9, 751 (1965).

47. Mathelli A., Nano G. M., Farmaco (Pavia), Edizione Pratica, 22, (1967).

48. Mayer H., Dtsch. Lebensm.-Rundschau, 57, 170 (1961).

49. Montag A., Z. Lebensmitt. Unterss., 116, 413 (1962).

50. Nagasawa K-, Yoshidama H., Anry K-, J. Chromatogr., 52, 173 (1970).

51. Nagasawa K-, Yoshidama H., Anry K-, J. Chromatogr., 43, 473 (1969).

52. Parrish J. R., J. Chromatogr., 33, 542 (1968).

53. Penner M. H., J. pharm. Sci., 57, 2132 (1968).

54. Perdih A., 1. Analyt. Chem., 260, 278 (1972).

55. Pinella S. J., Tala A. D., Schwartzman G., J. Assoc. Offic. Agr. Chem., 49, 829 (1966).

56. Pinter I., Kramer M., Parf. und Kosmetik, 50, 129 (1969);

Chem. Abstr., 71, 42167 (1969).

57. Pinzon R., Kapetanidis I., Microchim. Inchnoanal. Acta, 1965, 269.

58. Rangone R., Ambrosio C, J. Chromatogr., 50, 436 (1970).

422 Специальная часть 59. Reiners W., Z. analyt. Chem., 229, 406 (1967).

60. Rettie G. #., Haynes C. G., J. Soc. Dyer. Col, 80, 629 (1964).

61. Richardson M., Talanta, 14, 385 (1967).

62. Rollins Ch., J. chem. Educ, 40, 32 (1963).

63. Rowe Colour Index, 2nd. Ed., Bradford, Yorks, 1956.

64. Sadamatsu A., Kina Т., Arioshi Т., Takabatake E., Shokuhin Eiseigaku Zasshi, 1966, 7, 50;

Chem. Abstr., 67, 98989 (1967).

65. Sahasra Brudke M. R., J. Assoc. Ofiic. Agr. Chem., 47, 889 (1964).

66. Salo Т., Airo N.. Salminen K, Z. Lebensmitt. Unterss., 125, 20 (1964).

67. Salo Т., Makinen R., Salminen K-, Z. Lebensmitt. Unterss., 125, 167 (1964).

68. Salo Т., Salminen K, Suomen Kemistilehti, B35, 146 (1962).

69. Salo Т., Salminen K-, Z. Lebensmitt. Unterss., 125, 450 (1964).

70. Seher A., Fette, Seifen. Anstrichmittel, 61, 345 (1959).

71. Seher A., Fette Seifen. Anstrichmittel, 66, 37 (1964).

72. Seher A., Nahrung, 4, 466 (1960).

73. Sherma J., Hood L. V. S., J. Chromatogr., 17, 307 (1965).

74. Sherma J., Lippstone G. S., J. Chromatogr., 41, 220 (1969).

75. Scheldt S. A., Conroy H. W., J. Assoc. Offic. Agr. Chem., 49, 806 (1966).

76. Schildknecht E., Konig #., Z. analyt. Chem., 207, 269 (1965).

77. Schmid J., Pharm. Zentralh., 107, 653 (1968).

78. Schneider H., Hofstetter J., Dtsch. Apoth-Ztg., 103, 1423 (1963).

79. Schoideret K-, Kapetanidis I., Mirimanoff A., Pharm. Acta Helv., 41, (1966).

80. Stahl E., Pfeifle J., Z. analyt. Chem., 200, 377 (1964).

81. Sarsunova M., Cs. farm., 17, 20 (1968).

82. Sarsunova M., Cs. farm., 22, 259 (1973).

83. Sarsunova M., Negyi E., Lek. listy, 49, 103 (1974).

84. Sarsunova M., Hegyi E., Cs. farm., 23, 16 (1974).

85. SarSdnova M., Lukacova 0., Sziicsova S., Celadnikova L., Gremehova В., Rimanova., Hudakova G., Cs. farm., 20, 174 (1971).

86. Sarsunova M., Schwarz V., Krasnec L., Nguyen thi Kim Chi, Chem. zvesti, 22, 1 (1968).

87. Sarsunova M., Sziicsova S., Lukacova 0., Cs. farm., 19, 175 (1970).

88. Takeshita R., J. Chromatogr., 66, 283 (1972).

89. Takeshita R., Itoh H., Sakagami Y., J. Chromatogr., 57, 437 (1971).

90. Takeshita R., Sakagami Y., Itoh H., J. Chromatogr., 45, 269 (1969).

91. Takeshita R., Yamashita Т., Itoh N.. J. Chromatogr., 73, 173 (1972).

92. Tammilehto S, Buchi J., Pharm. Acta, Helv., 44, 290 (1969).

93. Ter Heide R., Seifen, Fette, Wachse, 92, 890 (1966).

94. Thoma K-, Rombach R., Ullmann E., Arch. Pharm., 298, 19 (1965).

95. Van der Heide R., J. Chromatogr., 24, 239 (1966).

96. Wagman G. H., Bailey I. V., J. Chromatogr., 41, 263 (1969).

97. Waldi D., в кн. Stahl E., Dunnschicht-Chromatogr., 1. Aufl. Springer-Verlag, Berlin, 1962.

98. Woidich H., Gnauer #., Galinovsky E., Z. Lebensmitt. Unterss., 139, (1963).

99. Wollenweber P., J. Chromatogr., 7, 557 (1962).

100. Bencze K-, Wildbrett G., Z. analyt. Chem., 271, 177 (1974).

101. Brain K. R., Jones B. E., Turner T. D., J. Chromatogr., 109, 383 (1975).

102. De Clercq #., Massart D. L., J. Chromatogr., 93, 243 (1974).

103. Galczynska M., Kwiatkowska M., Mikucka В., Szotor J., Herba Pol., 20, (1974);

Chem. Abstr., 83, 84925 (1975).

104. Guven K. C., Guven N.. Eczacilik Bui., 16, 6 (1974).

105. Chirikdjian J. J., Sci. Pharm., 43, 9 (1975).

106. Keipert S., Voigt R., Pharmazie, 30, 589 (1975).

107. Ludwikowska K-, Kowalska A., Fiebig A., Szczygiel E. A., Farm, pol., 1975,. 31, 37;

Chem. Abstr., 82, 175291 (1975).

Специальная часть 108. McKamey M. R., Spitznagle L. A., J. pharm. Sci., 64, 1456 (1975).

109. Miles D. Т., Analyst, 99, 1184, 724 (1974).

110. Portych J., Farm, obzor, 44, 358 (1975).

111. Putter J., Daniels R., Arzneimittel-Forsch., 24, 1883 (1974).

112. Schmidtlein J., Herrmann K-, J. Chromatogr., 115, 123 (1975).


113. Stark A., Scholz F., Rothig J., Zbl. Pharm., Pharmakotherap., Lab. Diagnostik, 114, 169 (1975).

114. Sarsunova #., Hegyi E., Cs. farm., в печати.

115. Tewari S. N.. Sharma S. C, Sharma V. K-, Chromatogr., 7, 308 (1974).

116. Thielemann #., Sci. Pharm., 43, 31 (1975).

117. Thielemann #., Pharmazie, 30, 337 (1975).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 118. Lemieszek-Chodorowska K-, Roczn. Panstw. Zakl. Hig., 29, 271 (1978);

Chem.

Abstr., 89, 178198w (1978).

119. Nasierowska Z., Pharm. Pol., 31, 940 (1975).

120. La Rotonda M. /., Ferrara L., Boll. Soc. Ital. Buol. Sperim., 51, 690 (1975).

121. Thielemann #., Sci. Pharm., 42, 93 (1974).

122. Felder E., Zingales M. F., Tiepolo Z., 11 Farmaco, Edizione Pratica, 31, (1976).

5.7.5. Исследование стабильности лекарственных средств Устойчивость лекарств является предметом постоянной забо­ ты фармацевтов. В последнее время значительное внимание уде­ лялось изучению факторов, которые влияют на стойкость состав­ ных частей лекарств и могут ее повысить или влияют на качест­ во вспомогательных средств, необходимых для приготовления ютовых лекарственных форм. Благодаря быстроте определения и простоте приборов тонкослойная хроматография оказывается наиболее употребительным аналитическим методом при исследо­ вании стабильности лекарственных средств.

Сорбенты. Для исследования устойчивости лекарственных ве­ ществ применяли силикагель с гипсом в качестве связующего [1—24, 26, 27, 30—34, 36, 38], готовые пластинки силикагеля, си луфол UV254 [31, 33, 34] и окись алюминия — кислую [25, 31, 35] или щелочную [26, 28—32, 35—38].

Системы растворителей. Для отделения кокаина от продуктов его разложения пользовались системой метанол — ацетон — гли­ церин (5:4:0,5) [9]. Продукты разложения атропина выделяли в системе этанол — н-бутанол—10%-ный аммиак (1:1:1). Для обнаружения троповой кислоты удобной оказалась система цик логексан — хлороформ — уксусная кислота ( 3 : 1 : 1 ). Разложение атропина в глазных мазях исследовали на щелочной окиси алюми­ ния в системе бензол — этанол (9:1] [29], эфиры никотиновой кислоты разделяли на слоях силикагеля в системе н-бутанол — ледяная уксусная кислота (10:1) [19]. Для выделения ниаци намида (никотинамида) на этом же сорбенте служила система н-пропанол—10%-ный аммиак (95:5). Продукты разложения 424 Специальная часть элениума подвергали разделению в системе метанол — ацетон — триэтаноламин (10:10:0,3) и в других системах. При исследо­ вании разложения раствора Фрезера и растворов, содержащих иод, иодид калия, салициловую и бензойную кислоты, а также лекарственных средств, содержащих камфору, пользовались, с одной стороны, силикагелем или силуфолом в системе хлоро­ форм— диоксан — ледяная уксусная кислота (70:26:4), а с дру- гой — окисью алюминия в системе бензол — этанол (8:2) [31].

Продукты разложения в глазных каплях, содержавших салицилат физостигмина, исследовали в системе бензол — этанол (9:1) [29]. Для обнаружения салициловой кислоты в продуктах разло­ жения таблеток от кашля или порошков [35] и в растворах каль мопирина [25] применяли окись алюминия с рН 4,6 и систему хлороформ — ледяная уксусная кислота (96:4), а для определе­ ния амидопирина в присутствии следов антипирина как продукта разложения пользовались щелочной окисью алюминия и систе­ мой бензол — этанол (9:1) [36].

Для исследования составных частей мазей с целью обнаруже­ ния возможных изменений при хранении оказались пригодными многие системы растворителей [33, 34]. При определении продук­ тов разложения кортикоидов пользовались слоями силикагеля со связующим и системой этилацетат — ксилол — метанол (90 : 5 : 5 ), а продукты разложения фторированных кортикоидов в мазях об­ наруживали в системе бензол — этанол (95 : 5) [27].

Обнаружение. Разделенные описанным способом вещества идентифицировали соответствующими реактивами в зависимости от их природы.

Применение. Методом тонкослойной хроматографии была ис­ следована стойкость некоторых нейролептиков [3, 20], растворов сульфата неостигминия [1], дикаина [5] и щелочных растворов хлорида мезокаиния (тримекаина) [28]. Этот метод оказался пригодным и для обнаружения продуктов разложения в медика­ ментах, содержавших алкалоиды спорыньи [14, 15], для иссле­ дования устойчивости или разложения таблеток, содержавших оксиэстрин [7], и для расщепления диастереомерных ( + )-1-окси 2-бутиламидов о- и ь-лизергиновых кислот и D- и ь-изолизерги новых кислот и доказательства их возможной изомеризации [26].

Другие исследователи пользовались тонкослойной хроматогра­ фией для изучения устойчивости глазных капель, содержащих ацетат фторированного преднизолона [11], а также для оценки качества препаратов с ацетатом диоксикортизона [12] и мазей с фторированными кортикоидами [27].

Дексаметазон и триамцинолон извлекают из 0,5 г мази повторным нагре­ ванием со спиртом. Мазевую основу отделяют вымораживанием. Вытяжки соеди­ няют, доливают этанолом точно до объема 10 мл и в количествах, соответству­ ющих 25 мкг исследуемых веществ, наносят микропипетками Винтерроба на Специальная часть пластинки с силикагелем GF254, имеющие размер 20x10 см, предварительно подвергнутые активированию при 110°С в течение 30 мин. Хроматографируют в системе хлороформ — этанол (95:5). Хроматографическую камеру (чашку Петри 30X30X5 см) в течение 30 мин насыщают парами растворителя. Пятна разде­ ленных веществ наблюдают в ультрафиолетовом свете с фильтром 254 нм;

для устранения возможных ошибок при идентификации изолированных пятен кор тикоидов помимо стандартных образцов этих кортикоидов на пластинку нано­ сят также образцы одинаковым образом экстрагированной мазевой основы и присутствующих в мази консервирующих добавок, именно метилового эфира гс-оксибензойной кислоты, если основой служит аквасорб.

Тонкослойная хроматография на силикагеле пригодна для качественной оценки стабильности препаратов, содержащих ни­ котиновую кислоту [8]. Тома [39] обнаруживал ж-аминофенол в растворах натриевой соли /г-аминосалициловой кислоты, другие авторы изучали образование салициловой кислоты как продукта разложения аспирина [35], в растворах кальмопирина [25] и сульфосалициловой кислоты [30] или исследовали стабильность сердечных гликозидов в препаратах, содержащих гельветикозид [17]. В разложившихся глазных каплях салицилата физостигми на в присутствии септонекса как противомикробной добавки были обнаружены продукты разложения азеролин и рубросерин [29]. Иодсалициловая кислота, образующаяся в спиртовых раст­ ворах салициловой кислоты, содержащих иод, иодид калия и др., при их хранении, была идентифицирована способом, описанным в статье [31]. Методом тонкослойной хроматографии оценивали разложение обычно употребляемых растворов реактивов [30].

Аве и сотр. [2] исследовали разложение растворов, содержавших производные пиразолина. Этим же вопросом в отношении других лекарственных форм занимались несколько авторов [3, 20, 28].

Лундгрен [16] исследовал устойчивость алкалоидов белладонны в антацидных таблетках, Кайнер и сотр. [13] занимались отде­ лением антибиотиков от их эпимеров и продуктов разложения.

Исследование папаверина и продуктов его разложения провел Гундерман [40]. Разложение тетрациклина исследовал Вилле кенс [41].

Количественное определение. Для определения составных ча­ стей исследованных лекарственных препаратов после хроматогра фического разделения и элюирования из слоя сорбента в ряде работ пользовались спектрофотометрическим [6, 8], в других фотометрическим [17, 22] или радиометрическим [6] методами.

ЛИТЕРАТУРА 1. Amand D. R., Pharm. Zentralh., 104, 370 (1965).

2. Awe W., Tracht H. G., Pharm. Ztg., (Frankfurt), 108, 1365 (1963).

3. Baumler J., Praxis, 50, 84 (1961).

4. Bjorklund A., Gram F., Waller Т., Pharm. Acta, Helv., 44, 745 (1965).

5. Breinlich J., Pharm. Ztg. (Frankfurt), 110, 579 (1965).

6. Comer J. D., Hartsaw P. E., J. pharm. Sci., 54, 524 (1965).

28— 426 Специальная часть 7. Fokkens J., Poldermann J., Pharm. Weekbl., 96, 657 (1959).

8. Ganshirt H., Malzacher F., Arch. Pharm., 293, 925 (1960).

9. Guven K, Altinkurt Т., Eczacilik Bui., 7, 119 (1965);

Chem. Abstr., 64, (1966).

10. I to S., Iryo (Tokyo), 22, 846 (1968);

Chem. Abstr., 69, 10980 (1968).

11. Jensen E. H., Lamb D. 1., J. pharm. Sci., 53, 402 (1964).

12. Jucker E., Lindermann A., Helv. chim. Acta, 44, 1249 (1961).

13. Keiner 1., Huttenrauch R., Poethke W., Pharm. Zentralh., 105, 705 (1966).

14. Klavehn M., Rochelmeyer H., Seyfried 1., Dtsch. Apoth.-Ztg., 101, 75 (1961).

15. Linser M., Baumgartl 1., Arch. Pharm., 297, 158 (1964).

16. Lundgren P., Acta pharm. suec, 3, 397 (1966).

17. Lutomski 1., Korovalewski 1., Kortius M., Dissertationes Pharm. Pharmacol., 18, 409 (1966);

J. pharm. Abstr., 1967, Vol. 4, cit. 309.

18. Mohelskd 0., Machoviiovd E., Parrdk V., Radejovd E„ Proc. 25th Congr. Sci.

Pharm., Prague, 1965, Vol. 2 (1966), 249;

Chem. Abstr., 69, 99337 (1968).

19. Nurnberg E., Dtsch. Apoth-Ztg., 101, 142 (1964).

20. Nurnberg E., Arch. Pharm., 292, 610 (1959).

21. Pechtold F., Arzneimittel-Forsch., 14, 258 (1964).

22. Pechtold F., Arzneimittel-Forsch., 14, 972 (1964).

23. Regdon G., Selmeczi В., Kedvessy Gy., Pharm. Zentralh., 105, 658 (1966).

24. Seno S., Kesster W. V., Christian 1. E., J. pharm. Sci., 53, 1101 (1964).

25. Szucsovd S., Sarsunova M., Farm, obzor, 38, 25 (1969).

26. Sarsunova M., Semonsky M., Cerny 1., 1. Chromatogr., 50, 442 (1970).

27. Sarsunova M., Kraus L., Ludva 1., Krausovd M., Schwarz V., Cs. farm., 18, (1969).

28. Sarsunova M., Spiska L., Farm, obzor, 38, 158 (1970).

29. Sarsunova M., Kahay J., Kadlecovd 0., Salava M., Cs. farm., 17, 58 (1968).

30. Sarsunova M., Lukdlovd 0., Sciicsovd S., Celadnikovd L., Gremeno vd В., Rimanova E., Hudakovd G., Cs. farm., 20, 174 (1971).

31. Sarsunova M., Ldszloovd H., Cs. farm., 22, 310 (1973).


32. Sarsunova M., Struc. Sdel. SOKL No. 9—10, 88 (1973).

33. SarSunovd M., Gremenovd В., Lukdlovd 0., Rimanova E., Hudako­ vd G., Cs. farm., 23, 49 (1974).

34. Sarsunova M., Gremenovd В., Schusterovd S., Cs. farm., 23, 139 (1974).

35. Sarsunova M., Schwarz V., Farm, obzor, 37, 261 (1968).

36. Sarsunova M., Schwarz V., Krasnec L., Nguyen thi Kim'Chi, Chem. zvesti, 22, 118 (1968).

37. Sarsunova M., Chlddekovd K-, Farm, obzor, 42, 205 (1970).

38. Sarsunova M., Kakdc В., Pharmazie, 27, 447 (1972).

39. Thoma P., Tuberk.-Arzt, 16, 362 (1962).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 40. Gundermann P., Pohloudek-Fabini R., Pharmazie, 33, 205 (1978).

41. Willekens G., J. Pharm. Sci., 66, 1419 (1977).

5.8. Вещества растительного происхождения Название этого раздела гораздо шире, чем это соответствует его содержанию, вследствие того что многим веществам расти­ тельного происхождения, например углеводам, липидам, белкам, натуральным красящим веществам, стероидам, кардиотоническим гликозидам, алкалоидам и др., в книге посвящены специальные разделы. Вместе с тем название нельзя сузить, так как в главе Специальная часть объединены вещества различного характера, химическая струк­ тура которых до настоящего времени точно не определена и, кро­ ме того, их фармакологическое действие не является достаточно специфичным, хотя они и находят широкое применение в фарма­ ции.

Эти вещества образуют в растениях и растительном сырье очень сложные комплексы, которые до развития хроматографических методов не удавалось ус­ пешно выделять и идентифицировать в них отдельные вещества. Применение хроматографии в этой области служит, с одной стороны, для выделения таких сложных комплексов из растений, составные части которых можно затем ближе изучить с помощью специфических реакций и физических методов исследования (УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-апектрометрия и т. д.), а с другой — для подтвержде­ ния подлинности известных веществ, комплексов или растительного сырья. В по­ следнем случае обычно достаточно убедиться в наличии наиболее характерной составной части, например какого-либо определенного алкалоида, гликозида и т. п., пренебрегая всеми остальными сопутствующими веществами (если только их присутствие не свидетельствует об определенных загрязнениях или разложе­ нии, как, например, репонтицина в Radix Rhei). Именно с этой точки зрения она применяется в фармакогностичеоком анализе. У растительного сырья определен­ но выраженного состава можно надежно установить его подлинность по морфо­ логическим и микроскопическим признакам;

по ним, однако, невозможно судить о роде действующего начала, доказывать подмену одного сырья близко родст­ венным другим, особенно в порошкообразном виде, когда микроскопическая идентификация затруднительна и ненадежна. У аморфного растительного сырья и растительных продуктов микроскопическое и органолептическое исследования вообще недостаточны. Хроматография, в том числе и тонкослойная, помогает идентифицировать коммерческие сорта растительного сырья и нередко оказы­ вается единственным методом для идентификации различных химических групп, неразличаемых по морфологическим признакам.

Растительные вещества можно классифицировать различным образом. Наиболее логичной является, конечно, биогенетическая система — по основным веществам, от которых происходят вто­ ричные растительные вещества;

здесь, однако, нецелесообразно последовательно проводить такую систему. Анализ растительного сырья на практике имеет дело с конечными продуктами расти­ тельного метаболизма, поэтому удобнее и целесообразнее класси­ фицировать растительные вещества не по их биогенетическим связям, а по их основным структурам. Эфирные масла, смолы и бальзамы как смеси веществ различного характера выделены в самостоятельный раздел.

5.8.1. Фенольные гликозиды К этой группе веществ относятся вещества из листьев растений Uva ursi и Vitis idaea, плодов Vanilla и салициловые гликозиды.

Родственные лигнаны упоминаются в специальном разделе.

В листьях растений Uva ursi и Vitis idaea содержатся арбу­ тин, метиларбутин и гидрохинон. Их подвергают хроматографи рованию либо непосредственно, либо после гидролиза, причем 28* 428 Специальная часть метиларбутин, если он присутствует, отщепляет метилгидрохинон, который легко идентифицировать.

Экстракция растительного сырья. 0,1 г измельченного сырья кипятят 15 мин с обратным холодильником со смесью 5 мл метанола и 5 мл воды, фильтруют горячей водой, по охлаждении прибавляют к фильтрату 0,2 мл 10%-ного раство­ ра уксуснокислого свинца и снова фильтруют. На пластинку наносят 5—10 мкл фильтрата [37, 69, 80, 112, 150]. Для гидролиза 5 мл фильтрата нагревают с обратным холодильником с 5 мл 6 н. НС1. По охлаждении извлекают с по­ мощью 5 мл эфира. 2 мл эфирной вытяжки выпаривают досуха, остаток раство­ ряют в 0,2 мл метанола и на пластинку наносят 10 мкл этого раствора [37, 69].

Такой же результат получают и в методе ИР (испарение — разделение, разд. 3.4.3), при котором несколько миллиграмм сырья нагревают при 250 °С в течение 90 с и продукты термического разложения арбутина и метиларбутина вводят непо­ средственно на старт хроматограммы.

Результаты представлены в табл. 73.

Для подтверждения присутствия арбутина в некоторых видах сырья пользовались полиамидом и системой эфир — 96%-ный эта­ нол (20:5) [62]. Обнаружение проводили насыщенным раствором углекислого натрия и после высушивания хроматограммы — ди азотированной сульфаниловой кислотой (Д25). Метилгидрохинон обнаруживали аммиачным раствором азотнокислого серебра (Д 59) и метиларбутин — дибромхинонхлоримидом (Д 27);

Фарма­ копея ГДР, изд. 7, рекомендует обнаружение диазосульфаниловой кислотой (Д 25) с последующим опрыскиванием КОН (Д 78).

Таблица Значения hRF составных частей листьев растений -Uva ursi Значения hRp в системах Обнаружение реактивами растворителей Вещество Д С1 Д С2 С1— 2 Д с 95 К-Кр Метилги др охинон 45 65—70 СФ с к Гидрохинон 10 50 КрК Метиларбутин 0 СвЖ 20 с Арбутин 0 СвС Кр Обозначения:

С1 этилацетат — метанол — вода (100: 17: 13) [159];

С2 хлороформ — метанол (95 : 5) [37];

С1—2 трехкратное хроматографирование, 2 раза элюируют до середины пластинки на расстояние 5 см в С1, 1 раз — на всю длину пластинки 10 см в С2 |[112].

Сокращения:

Кр — красная, К — коричневая, Ф — фиолетовая, С — синяя, Ж — желтая, Св — светло-зе­ леная, О — оранжевая, T — темная, Б — белая, Ч — черная, Р — розовая, Ср — серая. Тир»

между обозначениями окрасок, например О — К, означает изменение цвета от оранжевого до красного;

слитные обозначения относятся к одному тону, например ТЗ означает темно зеленую окраску, ОКр — оранжево-красную.

Эти сокращения используются также в последующих таблицах.

Специальная часть Вещества растительного сырья семейства Salicaceae были под­ вергнуты хроматографированию на силикагеле в системе бен­ зол— диоксан — уксусная кислота (72:20:4) и обнаружены в ультрафиолетовом свете [122]. Полифенолы и флавоноиды в Harpaphyllum cafrum разделили Эль Шербейни и сотр. [162].

Ванилин из плодов Vanillae был выделен двукратным хроматогра фированием на силикагеле GF254— сначала в дихлорметане и за­ тем после пятиминутного высушивания на воздухе — в бензоле;

при обнаружении о-дианизидином (Д 20) образовывал желтое, а с фосфорномолибденовой кислотой — синее пятно, hRF 20—30 [112].

5.8.2. Лигнаны Действующим началом растительного сырья корней и смолы Podophyllum (подофиллин) являются лигнаны, которые в исход­ ном материале нередко присутствуют в форме гликозидов.

Растительный материал извлекают либо из Podophyllum peltatum L., либо из P. hexandrum Royle (так называемый эмоди-подофиллин). Лишь некоторые фармакопеи допускают смолы из обоих видов растений. Различие основывается на обнаружении а- и Р-пельтатинов, содержащихся только в смоле из P. pel­ tatum.

Шталь и Кальтенбах [114] разделяли подофиллиновые лигна­ ны и их гликозиды двукратным хроматографированием на сили­ кагеле в системах, содержащих хлороформ, именно в первой ступени хлороформ — метанол (9:1) и во второй хлороформ — ацетон (65:35). В первой ступени (элюируют до середины пла­ стинки) разделяются гликозиды;

агликоны, которые перемещают­ ся с фронтом растворителя, разделяют затем менее полярным растворителем второй ступени (хроматографирование ведут на всю длину пластинки), в котором гликозиды далее не передвига­ ются (hRF 0—30). Значения HRF следующие: 4'-деметилподофил лотоксин 50—55, а-пельтатин 55—60, подофиллотоксин 65—70, р-пельтатин 75—80, дезоксиподофиллотоксин 85—95 [112]. Если необходимо отделить только а- и р-пельтатин, для силикагеля следует пользоваться смесью хлороформ — метанол (97:3), при­ чем лигнановые и флавоновые гликозиды остаются неразделен­ ными на старте [120].

При действии 0,1 н. раствора азотнокислого серебра а-пель­ татин и деметилподофиллотоксин образуют черное, а р-пельтатин черно-коричневое пятно, остальные вещества остаются невиди­ мыми. Поэтому лучше работать с силикагелем с добавкой люми­ нофора (силикагель GF254) и производить обнаружение в ультра­ фиолетовом свете или с помощью смеси серной кислоты и мета­ нола (Д130), которая окрашивает пельтатины в красный, а остальные вещества от серо-коричневого до красно-коричневого цвета [112]. Удобно также детектировать опрыскиванием смесью 430 Специальная часть серной кислоты и уксусного ангидрида (1:3) с последующим нагреванием в течение 15 мин при 100 °С {63, 114]. Этот способ обнаружения рекомендует также Фармакопея ГДР, изд. 7.

Подофилловые гликозиды можно разделять на силикагеле в системе хлороформ — метанол — вода (75 : 25 : 5) и обнаруживать реактивом Зонненшейна (Д18). Расположение пятен по возра­ стающим значениям hRF следующее: 2 неизвестных вещества, флавон (?), 4'-диметилподофиллотоксинглюкозид, глюкозид а-пельтатина, лигнан J, глюкозид подофиллотоксина, глюкозид р-пельтатина, лигнаны F и Н [65].

Препарат прорезид фирмы Sandoz, содержащий действующие начала смолы Podophyllum, хроматографируют на силикагеле в системе хлороформ — метанол — ацетон (100:0,5:40) и обнару­ живают смесью серной кислоты и этанола (1:3) с последующим нагреванием пластинки в течение 5—20 мин при 120—130 °С.

Выделение подофиллотоксин-О^р-О-пиранозида из подофиллина было осуществлено путем ферментативного расщепления непо­ средственно на пластинке после опрыскивания раствором р-глю козидазы и инкубации во влажной камере. После высушивания пластинки продукты расщепления хроматографировали в смеси бензол — метанол (4:1) [127]. Субраманиан и сотр. [163] раз­ деляли лактоны лигнанов Cleistanthus collinus.

5.8.3. Кумарины Кумарины являются производными а-пирона. В зависимости от степени и рода замещения они подразделяются на окси- и метоксикумарины, фуранокумарины и пиранокумарины. Окси- и метоксикумарины встречаются также в форме гликозидов. Сам кумарин (бензо-а-пирон) не содержит пригодных для образова­ ния гликозидов групп, однако образуется из гликозидных пред­ шественников. Хромоны, о которых упоминается в этом разделе, являются бензо--у-пиронами.

До настоящего времени известно около 200 кумаринов. Они распространены почти во всем растительном царстве, особенно в семействах Daucaceae, Rutaceae, Asteraceae, Fabaceae, Lamia ceae.

Хроматографические свойства производных кумарина при ис­ пользовании силикагеля иллюстрируются несколькими примера­ ми в табл. 74. Скополин, скополетин, эскулин, эскулетин, фра ксин и фраксетин подвергали разделению также на смеси поли­ амида и целлюлозы (10: 1) в системах этанол — метилэтилкетон— вода — ацетилацетон ( 3 : 3 : 13 : 1), метилэтилкетон — хлороформ— метанол (14:60:26) и в водном метаноле. Обнаружение прово­ дили 5%-ным раствором едкого кали в метаноле [28]. Карльсен и сотр. [54] разделяли фуранокумарины двумерным хроматогра Специальная часть Таблица Значения hRr кумаринов в разных системах растворителей на силикагеле Значения hR „ в различ­ Обнаружение ных системах Вещество Заместители сз С1 С2 С4 УФзв5 Д тж к Эскулетин 6,7-ОН 0 7-ОН Умбеллиферон 27 с 59 9 СвЖ Ксантотоксол 6,7-фуран, 8-ОН 63 22 6 ТСр тс ТФ Изопимпинеллин 6,7-фуран, 5,8-ОСНз 70 36 20 СвК жз Ксантотоксин 65 39 6,7-фуран, 8-ОСНСз Кр сз 68 Бергаптен 6,7-фуран, 5-ОСНз 42 31 ф Псорален 6,7-фуран 69 75 47 СрС ФКр 7-ОСН3 Эрниарин 42 с ф жза — 71 78 53 Кумарин — 73 жз ож Императорин 79 49 8-ОСН2СН = С(СН 3 ) 78 то Остол 82 60 ф 7-ОСНз, 8-СН 2 —СН=С(СН 3 ) Сфондин 6-ОСНз, 7,8-фуран с жз Ангелицин 7,8-фуран свж Изобергаптен 5-ОСНз, 7,8-фуран Пимпинеллин ж 5,6-ОСНз, 7,8-фуран к 5-ОСНз, 6,7-фуран, Феллоптерин 8-ОСН2—СН = С(СНз) Флуоресценция наблюдается после опрыскивания спиртовым раствором КОН.

Обозначения:

С1 толуол — этилформиат — муравьиная кислота ( 5 : 4 : 1 [115];

С2 бензол — ацетон (9: 1) [1];

СЗ бензол — этилацетат (9: 1) ![1];

С4 дибутиловый эфир;

стационарная фаза — силикагель G, смешанный с 3 частями смеси формамид — вода (1:2);

пластинки сушили 18 ч при комнатной температуре.

Сокращения обозначения окрасок см. в примечаниях к табл. 73.

фированием на окиси алюминия G, активированной нагреванием в течение 6 ч при 110°С (табл. 75) (см. также [165—167]). О раз­ делении кумаринов на забуференных слоях см. в статье [168].

Виснагин, келлин и другие природные хромоны хроматографи ровали в условиях, приведенных в табл. 76 {82].

Обнаружение различных производных кумарина и хромона позволяет удостовериться в подлинности сырья и его возможной подмене. Для наиболее обычного растительного сырья — травы Специальная часть Таблица Значения hRr некоторых фуранокумаринов при двумерной хроматографии на окиси алюминия [54] Вещество С2 Вещество С С1 С 46. 51 Ангелицин Псорален 43 51 Изобергаптен Бергаптен 40 33 Сфондин Ксантотоксин 42 Пимпинеллин Изопимпинеллин 20 54 Обозначения:

С1 хлороформ;

С2 дибутиловый эфир — этилацетат (88: 12).

Таблица Значения hRF природных хромонов на силикагеле [82] Значения hR с. в различных Обнаружение системах Вещество сз С1 С2 С4 Д 80 Д 123 Д 44 47 70 Висамминол СвС СвЖ СвЖ тж тж 15 18 38 Аммиол С 11 ж 10 43 Келлол С тЖ СвО 48 64 Изоэвгенитол ТКр СвЖ с-ж жз 23 Элейтеринол 55 ТКр СвЖ с 8 Сифулин 50 18 С 13 жз ж Асперксантон 22 17 28 ТС тж ТКр тж Руброфузарин 15 50 9 2-Метил-5-оксихроманон 82 86 67 зж ТО ТКр тж ТКр СвЖ Изоэвгенитин 68 72 зж ОКр СвЖ Эвгенин 70 70 с ж Виснагин 24 26 61 60 СЗ тс тж ТКр Келлин 25 62 Келлинол 63 70 60 ТКр ТКр ТКр Обозначения:

С1 ксилол — ацетон (4 : 1);

С2 ксилол — этилацетат — уксусная кислота (15 : 15 : 1);

СЗ ксилол — этилацетат — пиридин (6 : (18 : 1);

С4 ксилол — пиридин — муравьиная кислота (23 : 5 : 2).

Сокращения обозначения окрасок см. в примечании к табл. 73.

Специальная часть ясменника (Asperula) и донника (Melilotus) и семян Топсо — рекомендуется следующий способ [79].

0,3 г измельченного материала нагревают до кипения с 3 мл метанола, ох­ лаждают и фильтруют. На слой силикагеля наносят 50 мкл фильтрата;

заведо­ мые образцы вещества для сравнения, растворенные в метаноле, наносят в ко­ личествах, соответствующих 20 мкг. В качестве системы берут верхнюю фазу смеси эфир — бензол — 2 н. уксусная кислота ( 5 : 5 ;

1), а для обнаружения пользуются 2 н. спиртовым раствором едкого кали (Д 78). Пятна о-кумаровой кислоты (IIRF 40) непосредственно после опрыскивания обнаруживают в ульт­ рафиолетовом свете сильную желто-зеленую флуоресценцию, в отличие от ку­ марина, у которого подщелачивание приводит к размыканию лактонного цикла и образованию аниона кумариновой кислоты, которая изомеризуется в о-кума ровую кислоту только при ультрафиолетовом облучении. Пятна кумарина (hRF 62) после этого также обнаруживают интенсивную желто-зеленую флуо­ ресценцию. Скополетин (hRp 35) обладает синей флуоресценцией;

в семенах Топсо он обнаружен не был.

Шталь и сотр. [169], а также Трковник и сотр. [170] и Верж ховска-Ренке [171] подвергали разделению методом ТСХ кума рины из различных природных источников.

Абдель-Хай и сотр. [1] хроматографировали эфирную вытяж­ ку плодов Ammi majus на силикагеле. Им удалось обнаружить таким образом мармезин (после кислотного гидролиза гликози дов), изопимпинеллин, ксантотокснн, бергаптен, императорин и неизвестное вещество, обладавшее желтой флуоресценцией в уль­ трафиолетовом освещении при 365 им. В системе бензол — ацетон (9:1) эти вещества обладали более высокими значениями R*-, и изопимпинеллин менее резко отделялся от ксантотоксина, чем в системе бензол-—этилацетат. Для обнаружения они пользова­ лись реактивами Д79, Д 105, Д 123, Д 125 и ультрафиолетовым светом с длиной волны 365 нм. Императорин и некоторые фура нокумарины из этого сырья были определены количественно спектрофотометрическим путем в элюатах пятен после хромато графирования в бутиловом эфире на силикагеле, обработанном формамидом [5]. Обнаружение фуранокумаринов, содержащихся в плодах Ammi majus, и фуранохромонов, присутствующих в пло­ дах Ammi visnagae, позволяет различать два этих вида сырья.

2,2 г измельченного в порошок материала нагревали до кипения с 10 мл метанола. По охлаждении смесь отфильтровывали и 50 мкл фильтрата наносили на пластинку с силикагелем. Хроматографировали в системе хлороформ — мета­ нол (100 : 4) или хлороформ — абсолютный этанол (100:1,5) и обнаруживали в ультрафиолетовом свете при 365 нм и действием хлорида сурьмы(Ш) (Д87а).

Плоды Ammi majus идентифицируют по наличию бергаптена (пятна, флуоресци­ рующие светло-серым цветом, а после опрыскивания светло-желтым), изопим пинеллина,. ксантотоксина и императорина (желто-коричневая флуоресценция-, после опрыскивания светло-коричневая). Значения RF ЭТИХ веществ выше, чем у веществ, содержащихся в плодах Ammi visnagae;

среди них келлин флуоресци­ рует коричневым цветом до и после 'опрыскивания и обладает желтым цветом при дневном освещении, виснагин обладает бледно-желтой и после опрыскива­ ния реактивом ярко-желтой флуоресценцией [43, 69].

434, Специальная часть При помощи хроматографии на силикагеле в смеси эфир — бензол (1:1), насыщенной 10%-ной уксусной кислотой, Хёрхам меру и сотр. [38] удалось различить коренья Angelica archange lica, A. silvestris, Rad. Levistici, Pimpinellae, Heraclei, Apii, Petro selini, imperatoriae, а в дальнейшей работе [39]—R. Pimpinellae от кореньев Heracleum sphondylium L.

При изучении биосинтеза фуранокумаринов в Rata graveolens Капорале и сотр. [21] разделили псорален, бергаптен и ксанто токсин на силикагеле в смеси циклогексан — этилацетат (2:1);

псорален отделяли от ксантотоксина хлороформом. Термофракто графии (см. разд. 3.4.3) кумаринов, флавоноидов и антраценовых производных посвящена статья Бромбеера и Шталя [164].

5.8.4. Флавоноиды Флавоноиды — производные 2-фенилхромона — весьма широко распространены в растениях, большей частью в форме глико­ зидов.

Разделению гликозидов и агликонов методом ТСХ посвящены многочисленные работы. Для разделения гликозидов в качестве сорбента оказался удобным силикагель, а из систем — смеси н-бутанол — уксусная кислота — вода ( 4 : 1 : 5 ) или этилацетат — метилэтилкетон — муравьиная кислота — вода ( 5 : 3 : 1 : 1 ) и про­ сто этилацетат [95]. Этот же автор применял полиамид и систе­ мы этанол—-вода ( 3 : 2 ), этанол — вода — ацетилацетон ( 4 : 2 : 1 ), а для разделения агликонов на силикагеле — насыщенную водой систему хлороформ — уксусная кислота (2,5: 1 или 3:1), а также смеси этилацетат — этанол (95:5) и соответственно изопентан — гексан — уксусная кислота — вода ( 3 : 1 : 3 : 3 ) [95].

Флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты подвергали разделе­ нию на смешанных слоях целлюлозы и полиамида в 15, 40 и 60%-ной уксусной кислоте [ПО]. Подобный же носитель, т. е.



Pages:     | 1 |   ...   | 11 | 12 || 14 | 15 |   ...   | 19 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.