авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 |

«Doc. RNDr. PhMr. Magda SAR50NOVA, DrSc. RNDr. Vladimir SCHWARZ, CSc. RNDr. Cestmir MICHALEC A kolektiv CHROMATOGRAFIA NA TENKYCH VRSTVACH VO FARMACII A V ...»

-- [ Страница 18 ] --

Количественное определение. После переноса пятен исследуемого образца, холостого опыта и эталона в центрифужные пробирки объемом 15 мл их дву­ кратно промывают по 1,5 мл 50%-ного метанола. Объединенные вытяжки экст­ рагируют в пробирках объемам 10 мл с притертой пробкой с помощью 6 мл метиленхлорида;

после центрифугирования в течение 1 мин при скорости 3000 об/мин верхний слой отделяют и дихлорметановую фазу взбалтывают 2 мин со смесью концентрированной серной кислоты и этанола ( 3 : 1 ). После инкуба­ ции при 22 °С в течение 15 мин и последующего охлаждения ледяной водой верхний слой отделяют и интенсивность флуоресценции нижнего слоя измеряют при длине волны 436 нм, учитывая результат холостого опыта.

Количество кортизола рассчитывают по калибровочной кривой, построенной по эталонным растворам кортизола обычным способам в интервале 0,2—4 мкг.

В статье Станчаковой [52] описано разделение свободного кортизола, кор­ тизона и их сульфатов на готовых пластинках силуфол.

Количественное определение тестостерона в моче по Середаю и Заксу [25] Приготовление слоя. Слой готовят обычным способом из водной суспензии силикагеля G (толщина слоя 0,3 мм).

Приготовление вытяжки из мочи. 100 мл мочи очищают двукратным извле­ чением эфиром, «носят р-глюкуронидазу и инкубируют в течение 48 ч при 37 °С (рН 4,6). Гидролизат трижды извлекают равными объемами эфира. Соединен­ ные вытяжки концентрируют и промывают 1 н. NaOH и водой. После выпари­ вания остаток растворяют в 0,1 мл этанола и прибавляют 0,2 мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина (20 мг растворяют в 10 мл этанола и прибавляют 0,15 мл концентрированной соляной кислоты). После 15-минутного нагревания на водяной бане при 60 °С реакционную смесь выпаривают досуха и остаток растворяют в хлороформе.

Хроматографирование. Раствор гидразона в хлороформе наносят на пластин­ ку одновременно с эталонными образцами гидразонов тестостерона и этиохола нолона и элюируют смесью хлороформ — ацетон (9 : 1).

Количественное определение. Желтые пятна гидразона тестостерона перено­ сят в центрифужные пробирки, заливают 1 мл хлороформа, перемешивают и центрифугируют. Окрашенную жидкость фотометрируют при 410 нм и сравни­ вают с холостым опытом.

Если пятна недостаточно четко разделены, необходимо повторное хрома­ тографирование.

Количественное определение прегнандиола в моче по Бангу [3] (см. также [35]) Приготовление слоя. Слой готовят обычным образом из силикагеля G.

Приготовление пробы. 100 мл мочи (возможно и меньшее количество в за­ висимости от концентрации прегнандиола) гидролизуют соляной кислотой (10 мл) в течение '10 мин при 90 "С на водяной бане и по охлаждении проточ­ ной водой экстрагируют в делительной воронке 3 раза по 125 мл циклогексана.

Соединенные вытяжки промывают дважды по 100 мл 1 н. NaOH, затем дваж­ ды по 150 мл дистиллированной воды и сушат безводным сульфатом натрия.

Растворитель отгоняют в вакууме при 40 СС досуха и остаток растворяют в 0,5 мл хлороформа.

Хроматографирование. 50 мкл раствора наносят на пластинку;

одновремен­ но хроматографируют и эталоны (например, 30 и 50 мкл 0,1%-ного раствора прегнандиола в хлороформе). Элюируют смесью хлороформ — ацетон (9:1) до расстояния 10 см и высушивают хроматограмму.

Обнаружение. Хроматограмму слегка увлажняют дистиллированной водой, очерчивают пятна и снова сушат.

568 Специальная часть Количественное определение. Пятна переносят в центрифужные пробирки и прибавляют по 3 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое перемеши­ вают, после 10-минутного стояния при комнатной температуре центрифугируют и жидкость фотометрируют при 430 нм. Холостой опыт проводят с пятном си­ ликагеля равной площади. Эталоны определяют таким же способом, как и ис­ следуемую пробу. Окрашивание устойчиво в течение 40 мин после прибавления серной кислоты;

калибровочная кривая линейна в интервале 20—120 мкг прег нандиола.

Разделение сопряженных эстрогенов по Крокеру и Лоджу [7] Приготовление слоя. Слой готовят из суспензии 40 г силикагеля G в 100 мл 15%-ного водного раствора AgNOe. Сушат в темноте при комнатной температуре и сохраняют в эксикаторе.

лроматографирование. 4—5 мнг конъюгатов в форме водного раствора на­ носят в виде полосок на старт и четырежды элюируют на расстояние 15 см (после каждого хроматографирования пластинку сушат при комнатной темпера­ туре) в смеси изооктан — хлороформ — этанол (40:70:18). Камеру необходимо насытить парами системы в течение не менее чем 1 ч перед проявлением (табл.

123).

Таблица Значения hRF сопряженных эстрогенов [7] hRp hRF Вещество8 Вещество Na-Эстрон-сульфат Na-a-Дигидроэквиленин сульфат Na-Эквиленин-сульфат Na-a-Дигидроэквилин Na-Эквилин-сульфат сульфат Na-a-Эстрадиол-сульфат Na-p-Эстрадиол-сульфат Na-JJ-Дигидроэквилин сульфат 'Свободные фенолы передвигаются практически с фронтом растворителя.

Обнаружение. Хроматограмму опрыскивают 50% -ной серной кислотой в этаноле и нагревают в течение 15 мин при 100 °С. Пятна окрашены в желто-ко­ ричневый цвет, за исключением а-эстрадиолсульфата, который образует розова­ то-коричневое окрашивание на почти бесцветном фоне.

Определение эстрогенов в моче по Луизи и сотр. [20] Приготовление слоя. Слой (20X20 см) готовят из суспензии силикагеля Q в дистиллированной воде.

Приготовление пробы. Мочу гидролизуют 10%-ной соляной кислотой при кипячении. Полученный гидролизат экстрагируют бензолом и после промывания бензольной вытяжки 9%-ным раствором NaHC0 3 эстрогены извлекают 2 н.

NaOH. После подкисления НС1 стероиды снова извлекают бензолом. После вы­ сушивания безводным сульфатом натрия и фильтрования растворитель выпари­ вают II остаток растворяют в абсолютном этаноле.

Специальная часть Хроматографирование. 0,5—5 мкг раствора эстрогенов наносят на пластинку на расстоянии 1,5 см от края. Хроматографирование ведут горизонтально в ка­ мере BN (разд. 3.1.2) (производство фирмы Desaga, Гейдельберг) в течение при­ близительно 20 мин в омеси циклогексан — этилацетат (35 : 65).

Значения hRF: эстрон 87, 17р-эстриол 73, 16-эпиэстриол 45, эстриол 17.

Обнаружение. После сушки на воздухе и 10 мин при 60 "С производят об­ наружение свежеприготовленным 0,5%-ным раствором 2,4-динитрофенилгидра зина в этаноле с добавлением 10% серной кислоты.

Определение эстрогенов в моче по Деттеру и сотр. [8] Приготовление слоя. Суспензию 50 г силикагеля G в 100 мл дистиллиро­ ванной воды наносят на стеклянные пластинки размером 20X20 см. Сушат 30 мин при 105 °С или 24 ч при комнатной температуре.

Приготовление вытяжки из мочи. 100 мл мочи разбавляют 50 мл дистил­ лированной воды, прибавляют 15 мл концентрированной соляной кислоты и ки­ пятят с обратным холодильником 60 мин. Охлажденный гидролизат экстраги­ руют в делительной воронке трижды по 100 мл эфира (если образуется эмуль­ сия, ее разрушают, добавляя еще эфир или разбавляя водой).

Кислотную фракцию получают экстракцией объединенных эфирных вытяжек 50 мл насыщенного раствора Na 2 C0 3 —NaHC0 3 (рН 10,5). Затем извлекают 10 мл 2 н. NaOH и 50 мл 8%-ного NaHC0 3. Эстрогены снова переходят в эфир, тогда как большая часть хромогенов остается в водном слое. Эфирный слой промывают 20 мл 8%-ного NaHC0 3 и 10 мл воды и после сушки безводным NaaS04 выпаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл 90%-ного этанола, прибавляют 20 мл бензола и 20 мл петролейного эфира. Бензольно-петролейно эфирный слой взбалтывают трижды с 20 мл 1 н. NaOH. Нейтральные стероиды остаются в органическом слое. Водный слой подкисляют концентрированной НС1 и трижды экстрагируют по 50 мл эфира. После промывания 8%-ным NaHC0 3 и 10 мл воды снова сушат безводным сульфатом натрия и выпарива Таблица Значения hRF эстрогенов и окрашивание после реакции с фосфорной кислотой [8] Флуоресценция сз Ьещество С1 С2 С4 Н 3 РО Эстриол 16 23 К р К - Ф Фиолетовая 8 17|3-Эстрадиол 48 50 49 От оранжевой до ОКр желтой 52 жо Зелено-желтая Эстрон 53 69 Обозначения:

С1 бензол — этанол (90: 10);

С2 бензол — уксусная к и с л о т - лапол ( 8 7 : 3 : 10);

СЗ хлороформ — уксусная кислота ('.10: 10);

С4 хлороформ — ацетон — уксусная кислота (85: 1 0 : 5 ) ;

Сокращения:

КрК — красно-коричневая;

Ф — фиолетовая;

О — оранжевая;

Кр — красная;

Ж О — желто-оранжевая.

670 Специальная часть •Ют в вакууме досуха. Остаток растворяют в 0,5 мл 90%-ного этанола при сла­ бом подогревании.

Хроматографирование. 10—50 мкл раствора наносят на расстоянии 1,5 см от края пластинки одновременно с эталонами эстрогенов. Элюируют в течение 45 мин смесью хлороформ — ацетон — уксусная кислота (85:10:5) на расстоя­ ние 15 см. Если при одномерном способе присутствующие хромогены мешают, проводят двумерную хроматографию;

в первом направлении элюируют выше­ приведенной смесью, а во втором — смесью бензол — этанол (90:10).

Обнаружение. После высушивания в течение 5 мин хроматограмму опрыс­ кивают 30%-ной фосфорной кислотой и нагревают приблизительно 30 мин при 120 °С.

Определению эстрогенов в моче беременных посвящена статья ван Безе и Боша [53].

ЛИТЕРАТУРА 1. Avigan J., de Witt S., Goodman J., Steiberg D., J. Lipid Res., 4, 100, (1963).

2. Azarnoff D. L., Turner D. R., Biochim. biophys. Acta, 70, 589 (1963).

3. Bang H. 0., J. Chromatogr., 14, 520 (1964).

4. Bruinvels J., Experientia, 19, 551 (1963).

5. Cargill D. I., Analyst., 87, 865 (1962).

6. Crepy 0., Judas D., Lachesa В., J. Chromatogr., 16, 340 (1964).

7. Crocker L.., Lodge B. A., J. Chromatogr., 69, 419 (1972).

8. Better F., Dietrich J., KUngmuller V., Klin. Wschr., 44, 100 (1966).

9. Eastwood M. A., Hamilton D., Mowbray L., J. Chromatogr., 65, 407 (1972).

10. Eneroth P., J. Lipid Res., 4, 11 (1963).

11. Frosch В., Arzneimittel-Forsch., 15, 178 (1965).

12. Frosch В., Wagner H., Z. Klin. Chem., 2, 7 (1964).

13. Gerdes H., Staib W., Klin. Wschr., 43, 744 (1965).

14. Gerdes H., Staib W., Klin. Wschr., 43, 789 (1965).

15. Hakl I., Chromatogr., 61, 183 (1971).

16. Hamman B, L., Martin M. M., J. clin. Endocr., 24, 1195 (1964).

17. Hara S., Takeuchi M., J. Chromatogr., 11, 565 (1963).

18. Kaufmann H. P., Makus Z., Deicke F., Fette, Seife, Anstrichmittel., 63, (1961).

19. Kent J. R., Rawitch А. В., J. Chromatogr., 20, 614 (1965).

20. Luisi M., Savi C, Coti F., Marescotti V., Folia endocr. (Pisa), 15, 672 (1962).

21. Michalec С, неопубликованные данные.

22. Morris L. J., J. Lipid Res,, 4, 357 (1963).

23. Morris L. J., J. Lipid Res., 7, 717 (1966).

24. Oertel G. W., Tornero M. C, Groot K., J. Chromatogr., 14, 509 (1964).

25. Szereday Z., Sachs L., Experientia, 21, 166 (1965).

26. Tichy~ J., Dencker S. J., J. Chromatogr., 33, 262 (1968).

27. Tichy J., Z. Ges. inn. Med., 27, 21 (1972).

28. Treiber 1., Oertel G. W., Z. klin. Chem. klin. Biochem., 5, 83 (1967).

29. Wagner H., Prosch В., Klin. Wschr., 41, 1094 (1963).

30. Wolfmann L., Sachs B. A., J. Lipid Res., 5, 127 (1964).

31. Zollner N.. Kirsch K., Amin G., Verh. Dtsch. Ges. inn. Med., 66, 678 (1960).

32. Zollner N.. Wolfram G., Klin. Wschr., 40, 267 (1962).

33. Zollner N., Wolfram G., Klin. Wschr., 40, 1090 (1962).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 34. Batla A. K-, Salen G., Shefer S., J. Chromatogr., 168, 557 (1979).

• Г. Frlwr Т., Feher K. G., Bodrogi L., Acta Med. (Budapest), 27, 289 (1970).

Ч.4(). Frrnltel Z., Stud. Cercet. Endocrinol., 23, 53 (1972).

57 Г Специальная часть 37. Goswami S. К-, Frey С. F., J. Chromatogr., 89, 87 (1974).

'38. Goswami S. K-, Frey C. F., J. Chromatogr. Biomed. Appl., 145, 147 (1978).

39. Hakl J., J. Chromatogr. Biomed. Appl., 143, 317 (1977).

40. Herkner K-, Novotny P., Waldhausl W., J. Chromatogr. Biomed. Appl., 143, 273 (1978).

-41. Chavez M. N., J. Chromatogr. Biomed. Appl., 162, 71 (1979).

42. Челнокова И. С, Микоша А. С, Вопр. мед. хим., 17, 88 (1971).

43. Chmel К-, Biochem. clin. bohemoslov., 2, 211 (1974).

44. Ikawa S., Goto M., J. Chromatogr., 114, 237 (1975).

45. Крехова М. А., Чехранова М. K-, Вопр. мед. хим., 17, 93 (1971).

46. Leung F. Y., Griffiths J., Clin. Chim. Acta, 37, 423 (1972).

47. Nakagaki M., Nakayama F., J. Chromatogr., (в печати).

' 48. Parmentier G., Eyssen #., J. Chromatogr., 152, 285 (1978).

49. Peter F., Reynolds R. G., J. Chromatogr. Biomed. Appl., 143, 153 (1977).

50. Sable-Amplis R., Agid R., Abadie D., J. Chromatogr., 94, 287 (1974).

51. Segura R., Gotto A. M. Jr., J. Chromatogr., 99, 643 (1974).

52. Stancdkovd A. 5., Biochem. clin. bohemoslov., 4, 109 (1975).

53. Van Bezeu M., Bosch M. W., J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 13, 381 (1975).

54. Votruba M., Sakarovd V., Biochem. clin. bohemoslov., 1, 40 (1972).

6.8. Прочие биологически важные соединения Продуктом разрушения красящего вещества крови гемоглоби­ на является билирубин. Это красящее вещество образует две формы — свободную и связанную (сопряженную). В организме он может связываться с одной или двумя молекулами глюкуро новой кислоты, образуя моно- и диглюкуронид билирубина. На­ ряду с этими связанными формами встречается еще и другая форма — билирубинсульфат.

Раздельное определение обеих форм — свободной и связан­ ной — в моче, крови и желчи имеет огромное диагностическое значение. Существует несколько способов, наиболее употребитель­ ным из которых является диазореакция (реакция с диазотирован ной сульфаниловой кислотой с образованием азокрасителей). Бо­ лее затруднительным оказывается взаимное разделение разных типов связанных форм. Для этой цели подходят хроматографиче ские способы;

весьма перспективной является тонкослойная хро­ матография.

Количественное определение билирубина и его связанных форм по Тенхунену [7] Приготовление слоя. Суспензию 30 г силикагеля G в 60 мл дистиллирован­ ной воды наносят на стеклянные пластинки размером 76X26X1 мм. После суш­ ки и активации (30 мин при 1Ю°С) пластинки сохраняют в эксикаторе.

Приготовление проб. Краситель желчи в анализируемом материале (желчь, моча, плазма) превращают обычным способом в азопроизводные, которые очи­ щают смесью «-гептан-н-бутанол (7:3) и петролейным эфиром от избытка желчных кислот. Образцы наносят в форме полосок 1—2 см на стартовую ли­ нию на расстоянии 1—1,5 см от нижнего края пластинки.

Хроматографирование. Для разделения пользуются двумя системами:

572 Специальная часть 1. Метилэтилкетон— пропионовая кислота — вода (10:2,5:2,5), которая раз­ деляет красители желчи на 4 фракции: фракция I (RF 0,57) — свободный били­ рубин;

фракция II (RF 0,37) соответствует моноглкжурониду билирубина и фрак­ ция III (RF 0,20) тождественна диглкжурониду билирубина;

фракция IV (Rp 0,09) соответствует билирубинсульфату.

2. Система к-бутанол— ацетон — пропионовая кислота — вода ( 7 : 4 : 3 : 3 ), которая также делит красители желчи на 4 фракции со следующими значения­ ми RF: I 0,70, II 0,58, III 0,43, и IV 0,20.

II Рис. 114. Разделение красящих ве­ ществ желчи [7].

IV Сорбент: силикагель G;

системы: а—ме­ тилэтилкетон — пропионовая кислота — во ца (10:2,5:2,5), б — к-бутанол — ацетон — пропионовая кислота — вода ( 7 : 4 : 3 : 3 ) ;

Cmapm (— билирубин;

II — моноглюкуронид били­ рубина;

III — диглкжуронид билирубина;

IV — билирубинсульфат.

Ь — биливердин.

Биливердин в обеих системах имеет RF 0,72—0,80. В некоторых пробах ис­ следуемого материала можно определять небольшие количества других диазопо ложительных производных (рис. 114).

Количественное определение. Окрашенные производные элюируют смесью равных объемов метанола и воды и после центрифугирования силикагеля фото метрируют при 540 нм.

Февер и сотр. [4] для разделения диазотированных производ­ ных красящих веществ желчи пользовались силикагелем и си­ стемой хлороформ — уксусная кислота (100:3);

аналогично Якобсен [5] определял образующиеся азокрасители после разде­ ления на слое силикагеля в смеси метилэтилкетон — пропионовая кислота — вода (15:5:6) фотометрически при 454 нм.

Выделение билирубина и его производных по Томпсону и Гофману [10, 11] Приготовление слоя. Слой толщиной 0,5 мм (6X6 или 20X20 см) готовят из смеси силикагеля Н (Merck) и воды в отношении 1 : 3 и после сушки при' комнатной температуре активируют в течение 30 мин при 110°С. Сохраняют в эксикаторе над CaS04.

Приготовление проб. Свежезамороженную желчь разбавляют фосфатным бу­ ферным раствором рН 7,5 (0,1 М);

полученный таким способом образец наносят на пластинку. Сыворотку (а иногда и желчь) смешивают с 96%-ным этанолом и отношении 1 : 5, оставляют при комнатной температуре на 30 мин и центри­ фугируют. Жидкость выпаривают в вакууме при 50 °С и остаток растворяют, например, в метаноле и хроматографируют. Желчные камни растирают в ступ Специальная часть Рис. 115. Разделение красящих веществ желчи [10, 11].

Сорбент: силикагель Н;

система: 88%-ный фенол — вода (41 : 9).

/ — эталоны;

2 — желчь человека;

3 — плазма больного с нарушениями функции печени;

а — двусвязанная. форма билирубина;

б — одногвязанная форма билирубина;

в — биливер дин+уробилин;

г — билирубин.

ке с небольшим количеством диметилсульфоксида и наносят на пластинку оп­ ределенную часть вытяжки.

Хроматографирование. Пробы наносят на расстоянии 1 см от края пластин­ ки и хроматографируют в смеси 88%-ный фенол — вода (41:9, рН 4,6) в тем­ ноте при комнатной температуре. Указанная концентрация фенола оптимальна.

Обнаружение. По окончании разделения вещества можно обнаружить пря­ мо на дневном свету (желтые или зеленые пятна) или при ультрафиолетовом свете после опрыскивания насыщенным раствором уксуснокислого цинка в ме­ таноле и 0,006%-ным раствором иода в метаноле (образуются пятна с красной или желтой флуоресценцией).

Диазоположительные красящие вещества можно обнаруживать, опрыскивая перед нагреванием свежеприготовленным диазореакгивом (0,1%-ный водный рас­ твор сульфаниловой кислоты — 0,5%-ный водный раствор нитрита натрия — 96%-ный этанол;

реагенты смешивают перед употреблением в отношении 10:

:0,3:5).

Углеводную составляющую производного можно обнаруживать, опрыскивая аиилин-дифениламиновым реактивом (4 г дифениламина, 4 мл анилина и 20 мл 85%-ной фосфорной кислоты смешивают и после полного растворения разбав­ ляют ацетоном до 200 мл) и нагревая затем в течение 10 мин при 110°С.

38— 574 Специальная часть Таблица Подвижность и цветные реакции красящих веществ желчи с некоторыми реактивами [10, 11] Диазо- Анилин Уксуснокислый hRF реактив Вещество дифенил­ цинк и иод Д 21 амин Д + + (красная флуоресцен­ Билирубин 70—85 — ция) + (красная флуоресцен­ Биливердин 60 — — ция) Уробилин + (желтая флуоресцен­ 60 — — ция) Моноглюкуронид били­ 38 + (красная флуоресцен­ + + ция) рубина Диглюкуронид билиру­ 24 +(красная флуоресцен­ + + бина ция) Типичный пример разделения красящих веществ желчи приведен на рис.

115, а цветные реакции — в табл. 125.

Определению связанных форм билирубина в желчи посвящены статьи Фе вера и сотр. [12, 13].

Другими важными красящими веществами являются порфи рины. Эти вещества в повышенных количествах выделяются с мочой, с одной стороны, при порфирии, с другой стороны, при симптоматической (вторичной) порфиринурии. В ряде случаев полное разделение отдельных типов порфиринов является хоро­ шим подспорьем обычным лабораторным способам их обнаруже­ ния. Разработан целый ряд методик, описание которых, однако, выходит за рамки этой монографии. Опишем лишь принцип, на котором основывается способ, предложенный Клоттеном [1] и который должен найти широкое применение в практике.

После выделения из мочи порфирины сначала делят в зависи­ мости от числа карбоксильных групп методом высоковольтного электрофореза на ацетате целлюлозы. После извлечения отдель­ ные фракции можно разделить на изомеры методом тонкослойной хроматографии по Доссу и сотр. [2, 3] и пятна затем определить количественно. Для обследования выделительной функции ге пато-билиарной системы благодаря легкости обнаружения и про­ стоте, применения получили широкое распространение некоторые синтетические диагностические препараты. Широко пользуются бромсульфалеиновой пробой. Бромсульфалеин в организме свя­ зывается с цистеином, глутамином и, вероятно, также с глутами новой кислотой, глицином и глутатионом. Определение соотноше­ ния выделившегося, связанного и свободного бромсульфалеина в сыворотке, моче и желчи может оказать 'большую помощь при диагностике нарушений функции печени.

Специальная часть Определению порфиринов в моче посвящены статьи Пинелли и сотр. [15], копропорфиринов I и II в моче — статья Шермули и сотр. [17] и [16].

Количественное определение метаболитов бромсульфалеина [9] Приготовление слоя. Суспензию 15 г целлюлозы MN 300 (Maeherey— Na gel) в 90 мл дистиллированной воды наносят на стеклянные пластинки (20Х Х20 см) и сушат в течение 30 мин при 110°С.

Приготовление пробы. 2—5 мкл желчи, полученной из печени через фисту­ лу, наносят на пластинку в форме полоски 2,5—3 см.

Хроматографирование. Для элюирования пользуются верхним слоем смеси м-бутанол — уксусная кислота—вода ( 4 : 1 : 5 ). Хроматографируют в камере, насыщенной парами растворителя. Через 2—3 ч, когда фронт растворителя до­ стигнет 10—13 см, хроматограмму высушивают при комнатной температуре.

Обнаружение. Сухую хроматограмму выдерживают в парах аммиака или опрыскивают ее смесью 1 части 10%-ного NaOH и 9 частей метанола. В обоих случаях образуется фиолетовое окрашивание. При ультрафиолетовом освещении пятна обнаруживают красную флуоресценцию.

Количественное определение. После обнаружения пятна переносят в про­ бирки, добавляют 3 мл 0,1 н. NaOH, перемешивают и оставляют стоять 15 мин.

После центрифугирования прозрачную жидкость фотометрируют при 570 им, сравнивая с 0,1 н. NaOH.

Описанным способом удается разделить метаболиты на 5—6 фракций.

Подобным же принципом пользовались Рантурян и сотр.,[6], подвергавшие разделению производные бромсульфалеина на силикагеле G в системе я-бута нол — уксусная кислота — вода ( 4 : 1 : 6, верхняя фаза) из сыворотки крови на две и из желчи на три фракции.

Полуколичественное определение алкоголя в крови по Вальди [8] Приготовление слоя. Слой (20X20 см) приготовляют из суспензии силика геля G в дистиллированной воде.

Приготовление проб. 1 мл исследуемой крови смешивают с 10 мл 0,9%-ного NaCl и спирт извлекают в 50-мл делительной воронке 5—6 раз по 10 мл не содержащего этанола эфира (обычный эфир кипятят 60 мин с избытком 3,5-ди нитробензоил — хлорида с обратным холодильником). Избыток хлорангидрида удаляют, прибавляя после охлаждения 30 мл дистиллированной воды и под­ щелачивая 5—10%-ным NaOH до рН 9—'10. После взбалтывания в делительной воронке эфирный слой, содержащий этилдинитробензоат, отделяют, а водный еще 3—4 раза экстрагируют бензолом, не содержащим этанола. Соединенные бензольные и эфирные вытяжки сушат безводным сульфатом натрия и после фильтрования упаривают до объема около 5 мл;

раствор переносят затем коли­ чественно в мерную колбочку на 10 мл и доливают до метки бензолом.

Одновременно готовят эталонный раствор этил-3,б-динитробензоата из 1 мл точно 0,1%-ного водного этанола. 1 мкл эталона соответствует ОД мкг этанола.

• Хроматографирование. На приготовленную пластинку в точках стартовой линии, обозначенных цифрами 1, 3, 5, 7 и т. д., наносят 50 мкл этилдинитробен зоата, полученного из пробы исследуемой крови. В точках, обозначенных циф­ рами 2, 4, 6, 8 и т. д. наносят от 1 до 10 мкл эталона (в пересчете 0,1—1,0 мкг этанола, что соответствует 0,2—2%0 спирта в крови). После высушивания при комнатной температуре элюируют восходящим способом в смеси четыреххлори стый углерод — циклогексан — этилацетат (75:10:15), пока фронт не пройдет 10 см от старта.

Обнаружение. Хроматограмму опрыскивают раствором родамина В (Д 175).

Количественное определение. Определение проводят визуальным сравнени­ ем площади пятен исследуемых проб и эталонов.

38* 576 Специальная часть Пример расчета. Если площадь пятна исследуемой пробы соответствует пло­ щади пятна эталона «0,4 мкг спирта», исследуемый образец крови содержит 0,8% спирта.

Определение термелен-положительных меланогенов в моче описали Павел и сотр. [14].

ЛИТЕРАТУРА 1. Clotten R., J. Chromatogr., 63, 185 (1971).

2. Doss M., Dormston W. K-, Hoppe-Seylers Z. physiol. Chem., 352, 725 (1971).

3. Doss M., Meinhof W., Dtsch. med. Wschr., 96, 1006 (1971).

4. Fever 1., Jansen F. H., Neuwissen J. A., Clin. chim. Acta, 21, 401 (1968).

5. Jacobsen 1., Acta chem. scand., 23, 3023 (1969).

6. Ranturean M., Lemonnier F., Mowszowicz I. F., Chenderowith J., Rev. franc.

Etud. clin. biol., 9, 197 (1964).

7. Tenhunen R., Acta chem. scand., 17, 2127 (1963).

8. Waldi D., in: Stahl E. Diinnschicht-Chromatographie. l.Aufl. Springer-Verlag.

Berlin, 1962.

9. Wernze H., Z. exp. Med., 138, 485 (1964).

10. Thompson R. P. H., Hofmann A. F., Clin. chim. Acta, 35, 517 (1971).

11. Thompson R. P. H., Hofmann A. F., J. Clin. Lab. Med., 82, 483 (1973).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 12. Feverу 1., Van Hees G. P., Leroy P., Compernolle F., Heirwegh К- Р. М., Biochem. J., 145, 185 (1975).

13. Heirwegh K- P. M., Feverу 1., Michiels R., Van Hees G. P., Compernolle F., Biochem. J., 125, 803 (1971).

14. Pavel S., Schwippelovd Z., DuchoU J., J. Chromatogr., 154, 117 (1978).

15. Pinelli /4., Gespari R., Clin. Chim. Acta, 39, 135 (1972).

16. Samuels S., Veliz G., Clin. Chem., 17, 51 (1971).

17. Schermuly E., Dose M., J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 13, 299 (1975).

18. Schwippelovd Z., Pavel S., DuchoU I., MatouS В., Vulterin K.., J. Chromatogr., 154, 122 (1978).

Реактивы для обнаружения Д 1 Ализарин Хроматограммы опрыскивают 1%-ным раствором ализарина в 1 мл NaOH и действуют на них парами аммиака. Образуется крас­ но-фиолетовое окрашивание.

Д 2 Амидочерный Насыщенный раствор амидочерного 10 В в смеси метанол — ле­ дяная уксусная кислота (9:1). Хроматограммы погружают в этот раствор.

Д 3 (З-Аминоэтиловый эфир дифенилборной кислоты 1 г р-аминоэтилового эфира дифенилборной кислоты растворя­ ют в 100 мл метанола. Хроматограмму опрыскивают приблизитель­ но 10 мл раствора и наблюдают флуоресценцию при УФ-свете.

Пригоден для обнаружения а- и 7-пиронов.

Специальная часть Д 4 Уксусный ангидрид — серная кислота К 9 мл уксусного ангидрида постепенно приливают 1 мл кон­ центрированной серной кислоты. После опрыскивания хроматог рамму наблюдают в ультрафиолетовом свете при 366 нм.

Д 5 Анилинфталат 0,93 г анилина и 1,66 г фталевой кислоты растворяют в 100 мл м-бутанола, насыщенного водой. Хроматограммы после опрыскива­ ния нагревают в течение 10 мин при температуре 105 °С.

Реактив на редуцирующие сахара.

Д 6 Анилиновый реактив 1 г анилина и 1 г дифениламина в 100 мл ацетона. 10 мл этого раствора перед употреблением смешивают с 1 мл 85%-ной фосфор­ ной кислоты. Хроматограммы нагревают при температуре 120 °С;

окрашивание появляется через 5 мин.

Д 7 Анисовый альдегид а) 0,5%-ный раствор в концентрированной серной кислоте.

б) К свежеприготовленному раствору 0,5 мл анисового альдеги­ да в 50 мл уксусной кислоты прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты. После опрыскивания этим реактивом хроматог­ раммы нагревают при 100—105 СС до получения максимальной ин­ тенсивности окрашивания.

в) 0,5 мл анисового альдегида смешивают с 10 мл уксусной кислоты, 85 мл метанола и 5 мл серной кислоты. После опрыски­ вания хроматограммы нагревают 10 мин при 100—110°С.

Д 8 Анизидин — фталевая кислота 0,1 М раствор анизидина и 0,1 М раствор фталевой кислоты. Пос­ ле опрыскивания хроматограммы нагревают при 100°С. Сахара и уроновые кислоты дают характерное окрашивание.

Д 9 Антроновый реактив 0,3 г антрона растворяют в 10 мл ледяной уксусной кислоты и ж раствору прибавляют смесь 20 мл 96%-ного этанола 3 мл фосфорной кислоты (уд. масса 1,7) и 1 мл воды. Раствор устой­ чив 'в течение недели при хранении в холодильнике. Хроматограм­ мы после опрыскивания нагревают 5—6 мин при 110°С.

Реактив на кетозы. Олигосахариды с кетозной составляющей дают желтое окрашивание.

578 Специальная часть ^ Д 10 Арсеназо III (2,7-бис-0-арсенофенилазо-1,8-диоксинафталин 3,6-дисульфокислота) а) 0,5%-ный раствор арсеназо III в этаноле.

б) 0,05%-ный раствор арсеназо III в этаноле.

Д 11 Бензидин — метапериодат натрия Раствор I. 0,1%-ный водный раствор метапериодата натрия.

Раствор II. К раствору, (приготовленному растворением 2,8 г бензидина © 80 мл 96%-ного этанола, прибавляют 70 мл 1 н. со­ ляной кислоты.

После опрыскивания раствором I слегка 1влажную хроматог рамму опрыскивают раствором II.

Д 12 Бензилцианид — тритон В Хроматограмму опрыскивают сначала смесью бензилцианид — ацетон (1:1) так, чтобы хроматограмма стала прозрачной, затем 40%-ным метанольным раствором тритона В (гидрата окиси бен зилтриметиламмония). Вещества образуют пятна от серых до сине-серых.

Д 13 Бромфеноловый синий — метиловый красный а) Раствор I. 20 адг бромфенолового синего и 60 мг (метилово­ го красного растворяют -в 100 мл этанола.

Раствор II. 100 мл фосфатного 'буферного раствора, рН 7,2.

Перед употреблением оба раствора смешивают в отношении 1:1.

б) 0,3 г бромфенолового синего и 0,1 г метилового красного растворяют в 100 мл метанола. Кислоты образуют светло-крас­ ные пятна на синем фоне.

Д 14 Бромкрезоловый красный 0,1%-ный раствор бромкрезолового красного в этаноле, дове­ денный разбавленным раствором аммиака до щелочной реакции.

Д 15 Бромкрезоловый зеленый а) 0,1%-ный водный раствор бромкрезолового зеленого.

б) 0,04%-ный раствор бромкрезолового зеленого в этаноле, до­ веденный при помощи 0,1 н. NaOH до щелочной реакции.

Д 16 Бромциан Подготовка хроматограммы. Перед опрыскиваяием хроматог­ рамму помещают на 1 ч в герметичную камеру, в которой находится сосуд с бромцианом (осторожно — яд!). Раствор бром циана приготовляют из охлажденной льдом бромистоводородной Специальная часть кислоты, к которой прибавляют столько 10%-ного водного раство­ ра цианида натрия, чтобы исчезла окраска брома.

Раствор для обнаружения. 2 г я-аминобензойной кислоты рас­ творяют в 75 мл 0,75 н. соляной кислоты. Раствор доливают эта­ нолом до 100 мл (реактив Кёнига).

Д 17 Бромтимоловый синий 40 мг бромтимолового синего в 100 мл 0,01 н. NaOH.

Д 18 Реактив Зонненшейна 1 г азотнокислого церия-аммония растворяют в 100 мл 50%-ной серной кислоты.

Д 19 Вольфрамомолибденовый реактив 1 г вольфрамата натрия и 2,5 г молибдата натрия растворяют в 70 мл ©оды. Раствор смешивают с 5 мл концентрированной фос­ форной кислоты и 10 мл соляной кислоты и нагревают с обратным холодильником в течение 10 ч. Прибавляют 15 г сернокислого лития, 5 мл воды и 1 каплю брома, а после охлаждения доливают водой до 100 мл. Раствор не должен быть окрашен в зеленый цвет.

Перед употреблением 1 часть реактива смешивают с 3 частями дистиллированной воды.

Д 20 о-Дианизидин (3,3'-диметоксибензидин) 2,5 г о-дианизидина растворяют в 10 мл уксусной кислоты.

Д 21 Диазореактив (реактив Братона — Маршала) Раствор I. Свежеприготовленный 1%-ный раствор нитрита нат­ рия в 1 «. НС1.

Раствор II. Свежеприготовленный 0,2%-ный раствор а-яафто ла в 1 н. КОН.

Хроматограмму опрыскивают раствором I, через 1 мин раст­ вором IL Раствор аннафтола можно заменить 0,4%-ным раство­ ром дихлор'Ида Ы-(1-метил)-этилендиаммония.

Д 22 Диазотирование сульфонамидов Хроматограмму сначала опрыскивают свежеприготовленным раствором 1 г нитрита натрия в 100 мл 1 н. НС1, затем, раствором р-нафтола в 1 н. КОН и нагревают до 60°С.

Д 23 бис-Диазотированный бензидин 0,18 г бензидина растворяют в 50 мл 0,5 н. НС1. Аликвотную часть раствора смешивают с равным объемом 1%-ного раствора нитрита натрия, спустя 3 мин к нему прибавляют равный объем 580 Специальная часть 5%-iHoro раствора мочевины и еще спустя 3 мин весь раствор раз­ бавляют семикратным количеством дистиллированной воды. Пе­ ред опрыскиванием хроматограмму подщелачивают фосфатным буферным раствором (рН 9).

Д 24 Диазотированный п-нитроанилин а) 5 мл 0,5%-наго раствора п-нитроанилина смешивают с 65 мл 5%-,ного раствора нитрита «атрия. По охлаждении смесь разбавляют 15 мл 20%-ного раствора уксуснокислого натрия.

б) 0,8 г п-нитроанилина растворяют в 20 мл 25%-ный соляной кислоты, разбавляют 250 мл дистиллированной воды, прибавляют к раствору нитрит натрия до обесцвечивания. Хроматограмму опрыскивают 0,5 н. КОН и нагревают 15 мин при 60°С. Затем проводят обнаружение вышеописанной смесью.

в) Раствор I. 0,8 г и-нитроанилина растворяют в 250 мл воды и 20 мл 25%-ной соляной кислоты.

Раствор II. 5%-ный раствор нитрита натрия.

Перед употреблением раствор II прибавляют по каплям к раствору I до получения бесцветного раствора. После опрыскива­ ния этой смесью хроматограмму можно опрыскивать еще 20%-ным раствором Na 2 C0 3.

Д 25 Диазотированная сульфаниловая кислота 25 г сульфаниловой кислоты растворяют в 125 мл 10%-ного водного раствора едкого кали. Раствор охлаждают и смешивают со 100 мл 10%-ного раствора нитрита натрия. Реакционную смесь приливают к 40 мд охлажденной льдом соляной кислоты (уд. мас­ са 1,19), разбавленной 20 мл воды. 'Соль диазония отсасывают, промывают водой и эфиром и оушат «а воздухе. Соль необходимо сохранять в холодильнике. Для обнаружения пользуются раство­ ром 0,1 г соли диазония в 20 мл 10%-ного раствора углекислого натрия.

Д 26 Диазотированная сульфаниловая кислота (реактив Паули) Раствор I. 25 мл 0,3%-ного раствора сульфаниловой кислоты в 8%-ной соляной кислоте смешивают с 1,5 мл 5%-ного раствора нитрита натрия. • Раствор II. 20%-ный раствор Na 2 C03.

Хроматограмму опрыскивают сначала раствором I, затем раст­ вором II.

Д 27 2,6-Дибромхинонхлоримид 0,1—0,4%-ный раствор й.б-дибромхинонхлоримида в метаноле или этаноле. После опрыскивания реактивом хроматограмму вы Специальная часть держивают в ларах аммиака или опрыскивают 10%-ным раство­ ром углекислого натрия.

Д 28 Дифениламин — хлорид цинка Реактив готовят смешиванием 20 мл 10%-ного этанольного раствора дифениламина в 100 мл (концентрированной соляной кис­ лоты и 80 1мл уксусной кислоты с 10%-1ным (раствором хлорида цинка в отношении 1:1.

Д 29 Дифенилкарбазид 1%-ный раствор дифенилкарбазида в 80%-ном этаноле.

Д 30 2,6-Дихлорхинонхлоримид 0,1—'1%-ный раствор 2,6-дихлорхинонхлоримида в абсолютном этаноле.

Пригоден для адреналина и его производных, а также для антиоксидантов.

Д 31 2,6-Дихлорфенолиндофенол 0,1%-ный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола. Вещества обра­ зуют «еомрашенные пятна на розовом фоне.

Д 32 2,6-Дихлорфенолиндофенолят натрия — азотнокислое се­ ребро 0,2 г 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия растворяют в 100 мл 96%-ного этанола, прибавляют 3 г азотнокислого серебра и пос­ ле перемешивания фильтруют.

Д 33 Дихлорфлуоресцеин а) 0,1%-ный раствор 2,7-дихлорфлуоресцеина в 50%-ном вод­ ном этаноле. Хроматограммы наблюдают в ультрафиолетовом свете.

б) 0,2%-ный раствор 2,7-дихлорфлуоресцеина в 96%-ном этано­ ле. Хроматограммы наблюдают в ультрафиолетовом свете. Ве­ щества дают желтую флуоресценцию.

Д 34 Дихлорхинонхлоримид 0,1—1 г 2,6-дихлорхинонхлоримида растворяют в 100 мл абсолютного спирта. При хранении в холодильнике раствор ус­ тойчив в течение 3 недель.

582 Специальная часть Д 35 2,6-Дихлорхинонхлоримид — щелочь 0,1—0,4%-ный метанольный или этанольный раствор 2,6-ди хлорхинонхлоримида. |После опрыскивания этим (раствором хро матограмму выдерживают в парах аммиака или опрыскивают 10%-ным водным раствором углекислого натрия. Образуются синие пятна. Если для опрыскивания применить )2%-ный раствор брома в 40%-ном этаноле, некоторые антиоксиданты дают характерное окрашивание.

Д 36 n-Диметиламинобензальдегид (реактив Эрлиха) а) 1%нный спиртовой раствор п-димегиламинобензальдегида.

После опрыскивания хроматопрамму выдерживают 3—5 мин в па­ рах хлорида водорода.

б) 1 т п-диметиламинобензальдегида растворяют в 50 мл кон­ центрированной соляной кислоты и полученный раствор смешива­ ют с 50 мл этанола. Хроматограммы, полученные в кислой систе­ ме, опрыскивают через 2—5 мин.после извлечения из камеры так, чтобы слой стал (прозрачным. Хроматограммы, полученные в ще­ лочной системе, нагревают в течение 5 мин при 50°С, опрыскивают реактивом и дают действовать на них парам царской водки.

Д 37 Реактив Эрлиха а) 1%-ный раствор п-диметиламинобензальдегида в 50%-ной уксусной кислоте.

б) 1 г п-диметиламинобензальдегида растворяют в смеси 25 мл 36%-ной НС1 и 75 мл метанола. Полезно нагреть хрома тограмму в течение нескольких минут при 100°С.

в) 1 г п-диметиламинобензальдегида растворяют в 100 мл 96%-ного этанола. Опрысканную реактивом хроматопрамму по­ мещают на 3—5 мин в камеру, насыщенную парами хлорида во­ дорода, или опрыскивают 25%ной соляной кислотой. И в этом случае полезно нагреть хроматограмму, как указано в л.«б».

Д 38 Модифицированный реактив Эрлиха В реактиве соляная кислота заменена на 85%-ную фосфорную кислоту. Хроматограмму после опрыскивания нагревают в тече­ ние 10 мин при 150°С и еще горячую опрыскивают 0,2%-ным раствором нингидрина в этаноле.

Д 39 п-Диметиламинобензальдегид 0,5 г п-диметиламинобензальдегида растворяют в смеси 53 мл концентрированной серной кислоты и 50 мл дистиллированной во­ ды. Добавляют 0,5 мл 10,5%-ного раствора хлорида железа (III).

Специальная часть Д 40 п-Диметиламинобензальдегид 1%-ный раствор в 92%-мой серной кислоте.

Д 41 п-Диметиламинобензальдегид — хлорид сурьмы(Ш) 1 г я-диметиламинобензальдегида и 20 г хлорида сурьмы (III) растворяют в 25 мл концентрированной соляной кислоты и 100 мл 95%-ного этанола.

Д 42 ^М-Диметил-п-фенилендиамин а) 0,5 г хлоргидрата 1М,М-диметил-/г-фенилендиамина раство­ ряют в растворе этилата натрия (1 г натрия растворяют в 100 мл этанола). После опрыскивания хроматограмму увлажняют водой и рассматривают в ультрафиолетовом свете.

б) 1,5 г хлоргидрата Г^М-диметил-п-фенилвндиамина раство­ ряют в смеси 130 мл метанола, 25 мл дистиллированной воды и 1 мл ледяной уксусной кислоты.

Д 43 Диметилглиоксим 29%-ный водный раствор аммиака и 1%-ный этанольный рас­ твор диметилглиоксима смешивают в отношении 1:9.

Д 44 Диметилнафтидин Смешивают равные объемы 1%-ного водного раствора K3Fe(CN) 6 и насыщенный раствор 3,3'-диметилнафтидина.

Д 45 1,3-Динитробензол (реактив Циммермана) 25%-ный этанольный раствор 1,3-динитробензола смешивают с 5 н. NaOH в отношении 2:1.

Д 46 Динитрофенилгидразин а) 0,4%-ный раствор 2,4-динитрофенилгидразина в 2 н. соля­ ной кислоте.

б) 0,4%-ный раствор 2,41ДИ1Нитрофенилгидразина в 0,5 н. спир­ товом растворе едкого кали.

в) 0,2 г 2,4-1ДинитрофениЛ(ГИдразина растворяют в смеси 40 мл ' уксусной кислоты, 40 мл соляной кислоты и 20 мл метанола.

Д 47 Динитрофенилгидразин 150 мг 2,4-динитрофенилгидразина растворяют в 25 мл воды и к раствору прибавляют 22 мл концентрированной соляной кислоты.

584 Специальная часть Вещества со свободной карбонильной группой образуют желтые пятна на бледно-желтом фоне.

Д 48 Дипикриламиновый реактив 0,2 г дипикриламина растворяют в смеси 50 мл дистиллирован­ ной воды и 50 мл ацетона. Холин и его производные с этим реак­ тивом образуют красные пятна «а желтом фоне.

Д 49 2,2'-Дипиридил — хлорид железа(Ш) Смешивают перед употреблением 0,5%-ный раствор 2,'2'-дип« ридила в этаноле и 0,2%-ный раствор хлорного железа в этано­ ле в равных отношениях. Вещества с этим реактивом образуют красные пятна на белом фоне.

Д 50 Дитиол 0,1%-ный раствор дитиола в 0V25 н. NaOH. При обнаружении Mo, Re, W хроматограмму сначала опрыскивают дитиолом, затем разбавленной соляной кислотой.

Д 51 Дитизон а) 1%-ный раствор дитизона четыреххлористом углероде.

в б) 0,1%-ный раствор дитизона в хлороформе.

Пятна большей частью окрашены в красно-фиолетовый цвет.

Д 52 Реактив Драгендорфа по Тису, Рейтеру и Вагуйфальви Запасный раствор. 2,6 г основного (углекислого висмута и 7 г иодида натрия кипятят течение нескольких IMHH с 25 мл ледяной в уксусной кислоты. Приблизительно через 12 ч отфильтровывают выпавший кристаллический ацетат натрия через стеклянный фильтр. 20 мл красного прозрачного раствора смешивают с 80 мл этилацетата и добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. Рас­ твор сохраняют в темной склянке.

Раствор для обнаружения. 10 мл запасного раствора разбавля­ ют 100 мл ледяной уксусной кислоты. После опрыскивания 5— 10 мл этого реактива вещества, содержащие азот, антигистамин ные вещества, производные фенотиазина, алкалоиды и т. д. дают оранжевые пятна.

Раствор для повышения чувствительности реакции. Чувстви­ тельность повышается, если пятна, окрашенные описанным реак­ тивом, опрыскать 0,05—0,1 я. H2SO4. Наиболее удобную концент­ рацию определяют в предварительном опыте. Пятна обнаружи Специальная часть ваемых таким способом веществ интенсивно окрашены в цвет от оранжевого до красного.

Пригоден для алкалоидов, антипиретиков, местных анестети­ ков и т. д, Д 53 Реактив Драгендорфа а) Модификация Мюнье Раствор I. Растворением 17 г азотнокислого висмута и 200 г винной кислоты в 800 мл дистиллированной воды готовят раствор основного азотнокислого висмута.

Раствор II. Растворяют 160 г иодида калия в 400 мл воды.

Смешивают оба раствора. К 50 мл полученной смеси прибав­ ляют 100 г винной кислоты и 500 мл воды. Запасный раствор устойчив в течение нескольких месяцев, разбавленный — несколь­ ких недель.

б) Модифицированный реактив Драгендорфа Раствор I. 1,7 г основного азотнокислого висмута растворяют в 100 мл 20%-ной уксусной кислоты.

Раствор II. 40 г иодида калия растворяют в 100 мл воды.

Перед употреблением смешивают 20 мл раствора I с 5 мл раствора II и 40 мл воды.

Удобный реактив для кофеина, алкалоидов, амидопирина, ан­ типирина, местных анестетиков, противогистаминных агентов, ата рактиков и др. Реактив Драгендорфа, модифицированный по Д1юнье, наиболее удобен для обнаружения этих веществ при раз­ делении на основной окиси алюминия;

вещества дают окрашива­ ние от оранжевого до красно-оранжевого.

Д 54 Азотнокислая ртуть 1%-ный раствор азотнокислой ртути удобен для обнаружения теобромина и теофиллина, которые образуют белые пятна на сером фоне, тогда как барбитураты и гида«тоины обнаруживаются в виде серых пятен на белом фоне. Вещества обнаруживают на влажной хроматограмме.

Д 55 Азотнокислое серебро нейтральное 1 мл насыщенного раствора азотнокислого серебра при пос­ тоянном перемешивании приливают к 20 мл ацетона. Затем по каплям приливают воду, пока азотнокислое серебро не перейдет снова в раствор. Хроматограмму хорошо опрыскивают этим рас­ твором, помещают в герметичную камеру и подвергают действию аммиака в отсутствие света. Под конец напревают до 80°С, пока не образуются отчетливо видимые темные пятна.

586 Специальная часть Д 56 Азотнокислое серебро 0,1 М раствор азотнокислого серебра. Фосфаты обнаруживают­ ся в виде желтых, а ареенаты — шоколадно-коричневых пятен.

Д 57 Азотнокислое серебро а) Сухую хроматограмму опрыскивают 5%-ным раствором азотнокислого серебра в 10%-ном водном аммиаке. Хроматограм му нагревают в темноте 3—5 /мин при 140°С.

б) Хроматограмму опрыскивают 0,5 М спиртовым раствором едкого кали и нагревают 20 мин три 140°С. Затем опрыскивают 1%-ным раствором азотнокислого серебра в 30%-ной азотной ки­ слоте. Хроматограмму наблюдают в ультрафиолетовом свете Д 58 Азотнокислое серебро — раствор аммиака 1 часть 0,1 М раствора азотнокислого серебра смешивают с 5 частями 5 М раствора аммиака. Приготовляют перед самым употреблением, так как при стоянии или выпаривании образуется взрывчатый азид серебра.

Д 59 Азотнокислое серебро — раствор аммиака а) 2%-ны.й водный раствор AgN0 3 и разбавленный раствор ам­ миака смешивают в отношении 3:1.

б) К 0,1 М водному раствору AgNOe приливают 2 М раствор аммиака до растворения образующегося чсадка.

Д 60 Азотнокислое серебро — бромфеноловый синий (реактив Вуда) 0,2 г бромфенолового синего растворяют в 50 мл ацетона. К раствору прибавляют 50 мл 2%нного водного раствора азотнокисло­ го серебра. Раствор устойчив в течение 1 недели.

Д 61 Азотнокислое серебро — этаноламин Хроматограмму опрыскивают этаноламином и нагревают в те­ чение 20 мин при 100 °С. Затем опрыскивают 0,1 М раствором AgiNCb и разбавленной азотной кислотой (1 : 10).

Д 62 Азотнокислое серебро — флуоресцеин а) Хроматограмму опрыскивают сначала 10%-ным раствором азотнокислого серебра, затем 0,2%-ным раствором флуоресцеина в этаноле (NJ).

I Специальная часть б) 10%-ный раствор азотнокислого серебра смешивают с 0,2%-ным раствором флуоресцеина в этаноле в отношении 1:5.

в) 3,3%-ный раствор азотнокислого серебра смешивают с 0,3%-ным водным раствором натриевой соли флуоресцеина.

При наблюдении в ультрафиолетовом свете анионы дают тем­ ные пятна на флуоресцирующем фоне.

Д 63 Азотнокислое серебро кислотное Раствор приготовляют из 10 частей 0,1 М раствора AgN0 3 и 1 части азотной кислоты. После опрыскивания хроматограмму про­ сматривают в ультрафиолетовом свете.

Д 64 Азотнокислое серебро — пирогаллол Раствор I. 0,17 г азотнокислого серебра растворяют в 1 мл дис­ тиллированной воды и смешивают с 5 мл 10%-ного раствора ам­ миака. Раствор разбавляют этанолом точно до 200 мл.

Раствор II. 0,01%-ный раствор пирогаллола в этаноле.

Хроматограмму опрыскивают сначала раствором I, затем рас­ твором II.

Д 65 Азотнокислое железо (окисное) 1%-ный водный раствор азотнокислого окисного железа. Аце­ тилсалициловая кислота дает синее окрашивание.

Д 66 Бихромат калия — серная кислота 0,5%-ный раствор бихромата калия в 20%-ной серной кислоте.

Д 67 Этилендиамин — красная кровяная соль 1 мл этилендиамина растворяют в 5 мл дистиллированной во­ ды, приливают 0,2 мл 10%-ного раствора красной кровяной соли и доливают до 100 мл абсолютным этанолом. Смесь хорошо пере­ мешивают перед опрыскиванием.

Д 68 Реактив Фирона Смесь 5 мл 20%-ного NaOH, 15 мл 1%-ного раствора лента цианоаминоферриата натрия и 1 капли 33%-ной Н2О2. Реактив ус­ тойчив в течение суток.

Д 69 ж-Фенилендиамин 0,2 М раствор ж-фенилендиамина в 76%-ном этаноле. После оп­ рыскивания хроматограмму нагревают в течение 5 мин при 110°С.

588 Специальная часть Д 70 Фенилфлуорон 100 мг фенилфлуорона растворяют в 1 мл НС1 и разбавляют 100 мл этанола.

Д 71 Желтая кровяная соль 1%-ный водный раствор K4Fe(CN)6.

Д 72 Флуоресцеин 0,2%-ный раствор флуоресцеина в этаноле.

Д 73 Флуоресцеин — перекись водорода Раствор I. 0,1'%-ный раствор флуоресцеина в 50%-ном этаноле.

Раствор II. 30%-ная перекись водорода, смешанная с равным объемом ледяной уксусной кислоты.

Хроматограмму сначала опрыскивают 'раствором I, затем раст­ вором II и в течение 20 мин нагревают при 90°С.

Д 74 Флуоресцеин — сернокислая медь 0,1 г флуоресцеина растворяют в 5 мл этанола, прибавляют 2 мл приблизительно 33%-ного едкого натра, 5 мл воды и смесь нагревают с цинковой пылью на водяной бане до обесцвечивания.

Разбавляют водой до 100 мл и прибавляют еще 100 мл этанола.

После стояния в темноте в течение 12 ч отфильтровывают. К 4 мл фильтрата приливают 3 «алли 0,05%-ного раствора медного купо­ роса. В ультрафиолетовом освещении CN~ образует красно-фио­ летовые пятна с зеленым отливом (ионы S2O5", CIO - мешают).

Д 75 Реактив Фолина-Чокальте 10 г вольфрамовокислого натрия и 2,5 г молибденовокислого натрия растворяют в 70 мл дистиллированной воды и прибавля­ ют 5 мл 85%-ной фосфорной кислоты и 10 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь кипятят 10 ч с обратным холодильником.

Затем прибавляют 15 г сернокислого лития, 5 мл воды и 1 каплю брома и после 15-минутного кипячения доливают дистиллирован­ ной водой до 100 мл. Реактив перед употреблением разбавляют трехкратным объемом дистиллированной воды. Хроматограмму сначала опрыскивают 20%-ным водным раствором углекислого натрия, затем реактивом.

Д 76 Формальдегид — серная кислота 0,5%-ный раствор формальдегида в 40%-ной серной кислоте.

Специальная часть Щ Д 77 Модифицированный реактив Хейнза — Ишервуда | 5 мл 60°/нной хлорной кислоты смешивают с 10 мл 1 М НС1, i 25 мл 4%-ного раствора мол'ибденовокислого аммония и 60 мл дис­ тиллированной воды. После опрыскивания хроматограмму нагре­ вают в течение 5—8 мин при ПО—120 °С.

•А I Д 78 Едкое кали I Г%-ный раствор едкого кали в этаноле.


Д 79 Едкий натр 1 часть 10%-ного водного раствора NaOH и 9 частей метано­ ла.

Д 80 Едкий натр 10%-ный раствор едкого натра в воде.

Д 81 8-Оксихинолин На хроматограмму действуют парами аммиака и опрыскивают раствором 8-оксихинолина в этаноле. Пятна хорошо видимы в ультрафиолетовом овете при 366 нм.

Пользуются 'Следующими растворами оксихинолина:

а) 0,5%-ный раствор в 60%-ном этаноле;

б) 0,5%-ный раствор в 95%-ном этаноле;

в) 1%-ный раствор в 95%-ном этаноле;

г) 2%-ный раствор в 80%-ном этаноле;

д) 1%-ный раствор в смеси равных объемов воды и этанола.

Д 82 8-Окси-1,3,6-пирентрисульфокислота 5 мг 8-ОКСИ-1, 3, 6 -пирентрисульфокислоты растворяют в 100 мл метанола. Хроматограмму наблюдают в ультрафиолетовом свете.

Д 83 Хинидин — сернокислая медь Раствор готовят растворением 200 мг сернокислой меди и *" 20 мг сульфата хинидина в 98 мл дистиллированной воды. После растворения приливают 2 мл пиридина. После высушивания хро матограммы выдерживают в парах дымящей соляной кислоты (уд. масса 1,19). В ультрафиолетовом свете обнаруживаются тем­ ные пятна.

590 Специальная часть Д 84 Хлорамин Т 10%-ный раствор хлорамина Т. После опрыскивания хроматог рамму дополнительно опрыскивают 1 М НС1, нагревают при 96— 98 °С до иочезновения запаха хлора, затем помещают в атмосферу аммиака. После кратковременного нагревания в присутствии ко­ феина появляются бледно-красные пятна.

Д 85 Хлоранил 0,1 г хлоранила растворяют в 10 мл метанола. После опрыски­ вания на хроматограмму осторожно действуют парами аммиака.

Д 86 Хлорид сурьмы(У) а) 20%-ный раствор хлорида сурьмы(V) в четыреххлористом углероде. Хроматограмму нагревают до 120 °С.

б) 20%-ный раствор хлорида сурьмы(V) в хлороформе.

Д 87 Хлорид сурьмы(Ш) а) Насыщенный раствор хлорида сурьмы (III) в хлороформе или четыреххлористом углероде. Хроматограмму нагревают при 110 °С так долго, пока не появятся окрашенные пятна. У стероидов для повышения чувствительности реакции применяют 10—20%-ный раствор тионилхлорида или 5%-ный раствор уксусного ангидрида.

б) После опрыскивания хроматограммы реактивом и 5-минут­ ного 'нагревания при 90 °С кислоты обнаруживают желтую, зеле­ ную или синюю флуоресценцию. На дневном свету пятна окраше­ ны в цвет от розового до красно-фиолетового.

Д 88 Хлорид сурьмы(У) — хлорид сурьмы(Ш) Смесь Д 86 и Д 87 в отношении 1:1.

Д 89 Хлорид олова 10%-ный раствор SnCl2 в 3 М НС1.

Д 90 Хлорид алюминия 1%-ный раствор хлорида алюминия в этаноле. Хроматограмму после опрыскивания наблюдают в ультрафиолетовом свете.

Удобен для обнаружения флавоноидов.

Д 91 Хлорид марганца 50 г МпС12-2Н20 растворяют в 15 мл дистиллированной воды и 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Нагревают 15 мин при 100—110°С.

Специальная часть Д 92 Хлорная ртуть 2%-ный раствор хлорной ртути в этаноле смешивают в отно­ шении 1:1 с 0,2%-ным раствором дифенилкарбазона в этаноле.

Д 93 Хлорид палладия а) 0,5%-ный водный раствор хлорида палладия.

б) 0,5%-ный раствор хлорида палладия в 2%-ной соляной кислоте.

Д 94 Хлорная платина — иодид калия 1 мл 0,2%-ного раствора хлорной платины, 0,1 мл 20%-ного раствора иодида калия, 0,1 мл 3—4%-ной соляной кислоты и 20 мл ацетона смешивают перед употреблением.

Д 95 Хлорид тетразолиния 1%-ный водный раствор хлорида тетразолиния смешивают с 10%-ным раствором едкого кали в 60%-ном водном метаноле в отношении 1:3.

Д 96 Хлорид титана(Ш)—диазотированный а-нафтиламин Хроматограмму опрыскивают смесью равных объемов 10%-но го раствора хлорида титана(III) в концентрированной соляной «кислоте и 15%-ного водного раствора цитрата натрия и спустя 24 ч—0,2%-ным раствором нитрита натрия в 0,1 и. НС1. Слегка подсушенную хроматограмму опрыскивают затем 0,2%-ным рас­ твором а-нафтиламина в этаноле.

Д 97 Хлорид железа(Ш) 0,1 — 10%-ный раствор хлорида железа(Ш) в воде или 69%-ном этаноле. о-Диоксипроизводные дают зеленое окрашивание, вици нальные триоксипроизводные — темно-синее.

Д 98 Хлорид железа(Ш) —хлорная кислота 0,05 М раствор хлорной кислоты смешивают с 5%-ным раство­ ром хлорида железа (III) в отношении 50: 1.

,Д 99 Хлорид железа(Ш) —уксусная и серная кислоты 50 г хлорида железа(III) растворяют в 90 мл дистиллирован­ ной ©оды,.прибавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты и 5 мл кон­ центрированной серной кислоты. Раствор устойчив в течение трех 592 Специальная часть месяцев. После опрыскивания иногда бывает необходимо нагреть хроматограмму в течение 2—3 мин при 100 °С.

Д 100 Хлорид железа(Ш) — красная кровяная соль а) 15%-ный раствор хлорида железа (III) смешивают с 1%-ным раствором красной кровяной соли в отношении 1:1. Реактив устой­ чив не более 5 мин.

б) Свежий раствор приготовляют смешиванием 10%-ного раствора хлорида железа(III) и 5%-ного раствора красной кро­ вяной соли с 20%-ной серной кислотой в отношении 2:1:7.

Пенициллин дает синие пятна на зеленом фоне.

Д 101 Хлорид железа(Ш) — желтая кровяная соль 15%-ный раствор хлорида железа смешивают с равным объе­ мом 1%-ного раствора желтой кровяной соли.

Д 102 Хлор-толидиновый реактив Хлорирование. Хроматограмму помещают в атмосферу хлора.

Хлор получают либо из баллона в течение 5—10 мин, либо из сме­ си 1,5%-ного раствора марганцовокислого калия и 10%-ной соля­ ной кислоты в отношении 1:1 в течение 15—20 мин. Затем вы­ держивают на воздухе в течение 3—5 мин, чтобы исчез избыток хлора.

Раствор. 160 мг о-толидина растворяют в 30 мл ледяной уксус­ ной кислоты. Раствор доливают до 500 мл и прибавляют 1 г ио дида калия.

Ход анализа. Хроматограмму сначала опрыскивают осторожно в одном углу. Если еще образуется синее окрашивание, следует подождать с полным опрыскиванием, пока не улетучится весь хлор.

Д 103 Изатиновый реактив а) 1 г изатина, 1,5 г уксуснокислого цинка, 1 мл пиридина и 100 мл пропанола-2.

б) 1 г изатина, 1,5 г уксуснокислого цинка, 1 мл ледяной уксус­ ной кислоты, 95 мл пропанола-2 и 5 мл дистиллированной воды.

Всегда следует пользоваться свежеприготовленными раствора­ ми. Оба реактива пригодны для обнаружения аминокислот и фе нилэтильных производных. После опрыскивания хроматограмму нагревают в течение 30 мин при 80—85°С, затем ненадолго остав­ ляют при комнатной температуре.

Специальная часть Д 104 Иод а) Хроматограмму помещают в герметичную камеру, на дно которой насыпан тонкий слой кристаллов иода. Другой способ за­ ключается в испарении раствора иода в этаноле или ацетоне на стеклянной пластинке. Пластинку с тонкой пленкой кристаллов иода плотно прикладывают к хроматограмме.

б) 1%-ный раствор иода в этаноле или метаноле или 0,5%-ный раствор в хлороформе.

Хроматограммы нагревают до 110°С и просматривают в ультра­ фиолетовом свете.

Д 105 Иод — иодид калия 0,2 г иода 'и 0,4 г иодида калия растворяют в 100 мл воды.

Д 106 Иодид калия 5%-ный водный раствор иодида калия. Образуется окрашива­ ние от желтого до желто-коричневого.

Д 107 Иодид калия — аммиак Пластинку опрыскивают 2%-.ным водным раствором иодида калия, сушат и выдерживают в парах аммиака. Затем помещают в закрытую камеру, наполненную парами H2S.

Д 108 Кислый раствор иода и иодида калия 1 г иода и 10 г.иодида калия растворяют в 98 мл дистилли­ рованной воды. После растворения прибавляют 2 мл ледяной ук­ сусной кислоты. Большинство органических соединений, содер­ жащих в молекуле третичный атом азота, обнаруживаются в ви­ де коричневых пятен.

Д 109 Иодоплатинат калия Раствор I. 1 г кристаллической хлорной платины PtCl 4 -2H 2 растворяют в 16 мл воды и 20 мл 1 н. НС1.

Раствор II. 9 г иодида калия растворяют в 90 мл воды.

Перед употреблением смешивают 1 мл раствора I с 9 мл рас­ твора II и 20 мл воды.

Д 110 Реактив Кедда 5 мл 10%-ного водного раствора едкого натра смешивают с 95 мл раствора пикриновой кислоты.

39— 594 Специальная часть Д 111 Аскорбиновая кислота — перекись водорода 20 мг L-аокорбиновой кислоты растворяют в 19 мл метанола и 30 мл концентрированной соляной кислоты и прибавляют 2,1 мл 30% «ной (перекиси водорода. Хроматограммы опрыскивают раство­ ром так, чтобы они стали слегка прозрачными, и оставляют на 50 мин в темноте. Пятна наблюдают в ультрафиолетовом свете.

Д 112 Борная кислота — щавелевая кислота Смешивают 15 мл 3%-ного раствора борной кислоты и 5 мл 10%-ного 'раствора щавелевой кислоты. Хроматограммы после оп­ рыскивания нагревают 15—20 мин при 120°С. Пятна веществ рас­ сматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 366 нм.

Д 113 Азотная кислота 65%-ная азотная кислота.. Пригодна для открытия фенотиазиновых производных.

Д 114 Фенолсульфокислота — фосфорная кислота 2 г фенолсульфокислоты растворяют в 100 мл 85%-ной фос­ форной кислоты. 10 мл раствора доливают до 100 мл 95%-ным этанолом.

Д 115 Фосфорномолибденовая кислота а) 5%-ный раствор фосфорномолибденовой кислоты в мета­ ноле. Хроматограммы после опрыокивания нагревают в течение 10 мин при 80°С. Вещества образуют синие пятна на желтом фо­ не. После опрыскивания аммиаком фон обесцвечивается.

б) 20%-ный раствор фосфорномолибденовой кислоты в метано­ ле;

хроматограммы в некоторых случаях выдерживают в атмосфе­ ре аммиака.

в) 10%-ный раствор фосфорномолибденовой кислоты в мета­ ноле или этаноле. Чувствительность можно повысить, добавляя 4 мл концентрированной соляной кислоты к 100 мл раствора. Хро­ матограммы нагревают 1 мин при 110°С. При обнаружении лигаи дов необходимо нагревать до 160—180°С и опрыскивать еще го­ рячую пластинку.

г) 1,6 г фосфорномолибденовой кислоты и 0,092 г 2,7-дихлор флуоресцеина растворяют в 60 мл абсолютного этанола.

Пригодны для токоферолов.

Д 116 Фосфорномолибденовая кислота 20 г фосфорномолибденовой кислоты растворяют в 100 мл этанола. Хроматограммы после опрыскивания нагревают 5—10 мин Специальная часть при 105—110°С. Образуются синие пятна на желтом фоне. В ат­ мосфере аммиака фон обесцвечивается.


Д 117 Фосфорномолибденовая кислота 10%-ный водный раствор фосфорномолибденовой кислоты.

Д 118 Фосфорномолибденовая кислота — анисовый альдегид Перед употреблением смешивают 1 г фосфорномолибденовой кислоты с 10 мл реактива Д 76 или Д 7в. После опрыскивания хроматограмму нагревают в течение 5—10 мин при 100 °С. На свет­ лом фоне наблюдаются синие пятна.

Д 119 Фосфорная кислота 40%-ный раствор фосфорной кислоты.

Д 120 Фосфорная кислота — анилин 1 часть 2 н. раствора анилина в насыщенном водой бутаноле смешивают с 2 частями 2 н. раствора ортофосфорнои кислоты в к-бутаноле. Хроматограмму после опрыскивания нагревают 10 мин при 110°С.

Реактив на редуцирующие сахара.

Д 121 Фосфорновольфрамовая кислота а) 10%-ный раствор фосфорновольфрамовой кислоты в 80%-ном этаноле. Хроматограммы нагревают до 110°С.

б) 20%-ный раствор фосфорновольфрамовой кислоты в этано­ ле. Хроматограмму нагревают 20 мин при 70 °С.

Д 123 Соляная кислота Смесь 0,5 мл анисового альдегида, 5 мл 70%-ной хлорной кис­ лоты, 10 мл ацетона и 40 мл воды. После опрыскивания хро­ матограмму нагревают 4—5 мин при 75—80 °С.

Д 123 Соляная кислота 20%-ная соляная кислота.

Д 124 Соляная кислота — мочевина 5 г мочевины растворяют в 20 мл 2 М соляной кислоты и при­ бавляют 100 мл этанола. Кетозы дают синее окрашивание. Реак­ цию можно ускорить нагреванием.

39* 596 Специальная часть Д 125 Хлорсульфоновая кислота — уксусная кислота 5 мл хлорсульфоновой кислоты осторожно при охлаждении растворяют в 10 мл ледяной уксусной кислоты. Хроматограммы после опрыскивания 5 мин нагревают до 130 °С и наблюдают за­ тем флуоресценцию в ультрафиолетовом свете при длине вол­ ны 366 нм.

Реактив «а стероиды и терпены.

Д 126 Уксусная кислота — анисовый альдегид 0,5 г анисового альдегида растворяют в 10 мл ледяной ук­ сусной кислоты. Хроматограмму опрыскивают и сушат 10 мин при 120—130°С, затем снова опрыскивают осторожно 96%-ной серной кислотой. Наблюдают в ультрафиолетовом свете.

Реактив пригоден для того, чтобы отличать Folium farfarae от Folium petasites. Пятна петазина флуоресцируют в ультрафио­ летовом свете.

Д 127 Йодная кислота — /г-нитроанилин Раствор I. 1 часть насыщенного водного раствора метапериода та натрия разбавляют 2 частями дистиллированной воды.

Раствор II. 4 части 1%-ного раствора л-нитроанилина в этаноле смешивают с 1 частью соляной кислоты (уд. масса 1,19).

Хроматограмму сначала опрыскивают раствором I (выдержи­ вают 10 мин), затем раствором II. Дезоксисахара дают желтое окрашивание и в ультрафиолетовом свете сильную флуоресцен­ цию. После опрыскивания 5%-ным раствором едкого кали в ме­ таноле окрашиваются в зеленый цвет.

Д 128 Рубеановый водород Хроматограмму опрыскивают 0,2%-ным водным раствором ру беанового водорода (диамида дитиощавелевой кислоты) и выдер­ живают в атмосфере аммиака.

Д 129 Серная кислота Серная «ислота концентрированная и 40—80%-ная. Нагрева­ ние хроматограмм до 80—120 С.

Д 130 Серная кислота К 5 мл метанола медленно прибавляют 5 мл серной кислоты.

После опрыскивания хроматограмму нагревают 5—10 мин при 130—140 °С.

Специальная часть Д 131 Серная кислота 10%-ный раствор серной кислоты в этаноле.

Д 132 Серная кислота — анисовый альдегид Смесь уксусной кислоты, анисового альдегида и концентри­ рованной серной кислоты в отношении 97:1:2.

Д 133 Серная кислота — анисовый альдегид Свежеприготовленная смесь 9 мл 95%-ного этанола, 0,5 мл концентрированной серной кислоты и 0,5 мл анисового альдеги­ да. После опрыскивания хроматограмму нагревают в течение 5—10 мин при 90—100°С.

Д 134 Серная кислота — формальдегид (реактив Марки) а) 0,2 мл 37%-ного формалина смешивают с 10 мл концентри­ рованной серной кислоты.

б) Готовят смесь 40%-«ого формалина, воды и концентриро­ ванной серной кислоты в отношении 1:45:55.

Д 135 Серная кислота — ванилин а) 3 г ванилина растворяют в 100 мл этанола и к полученно­ му раствору прибавляют 3 мл концентрированной серной кисло­ ты. Хроматограммы нагревают 7 мин при 110°С.

б) 1%-ный раствор ванилина в концентрированной серной ки­ слоте.

в) 20%-ный раствор ванилина. После опрыскивания хромато­ грамму сушат 10 мин при 80°С, затем опрыскивают 4 и. серной кислотой и снова нагревают 30 мин при 110°С.

Д 136 м-Толуолсульфокислота а) 100 г n-толуолсульфокислоты растворяют в 100 мл воды.

После опрыскивания хроматограмму нагревают до 100 °С.

б) 20 г /г-толуолсульфокислоты растворяют в 100 мл абсолют­ ного этанола. После опрыскивания хроматограмму нагревают в те­ чение нескольких минут при 100°С и наблюдают в ультрафиолето­ вом свете.

Реактив пригоден для обнаружения флавоноидов и стероидов.

Д 137 Дубильная (галловая) кислота 0,1%-ный водный раствор галловой кислоты.

598 Специальная часть Д 138 Трихлоруксусная кислота 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в 10 мл хлороформа.

Хроматограммы после обнаружения сушат при 100 °С и рассма­ тривают в ультрафиолетовом свете.

Д 139 Трихлоруксусная кислота — хлорамин Т 1 мл свежеприготовленного 3%-ного раствора хлорамина Т сме­ шивают с 15 мл 25%-наго раствора трихлоруксуоной кислоты в 96%-ном этаноле. Раствор устойчив в течение нескольких дней.

После опрыскивания хроматограммы нагревают 5 мин в сушиль­ ном шкафу при 110 °С. В ультрафиолетовом свете с фильтром (366 нм) вещества ряда А (дигитоксигенин) обнаруживают жел­ тую флуоресценцию, ряда В (питокоигенин) — ярко-синюю и ря­ да С (дигоксигенин) — стально-голубую.

Д 140 Виолуровая кислота Хроматограммы опрыскивают 1,5%-ным водным раствором ви олуровой (5-изонитрозобарбитуровой) кислоты и нагревают 15—20 мин до 100 °С.

Д 141 Окислы азота ria дно герметичной камеры помещают две чашки Петри, в которые наливают дымящую азотную кислоту, и в камеру вно­ сят хроматограмму. Фенацетин через 1 ч обнаруживается в фор­ ме желтых пятен.

Д 142 Марганцовокислый калий а) Для обнаружения пользуются 0,1 или 0,5%-ным раствором перманганата калия.

б) 1 %-ный раствор перманганата калия подкисляют серной кислотой так, чтобы ее концентрация не превышала 0,3 н.

в) 1%-ный раствор перманганата калия в 1 н. серной кислоте.

г) 1%-ный водный раствор перманганата «алия. Перед откры­ тием ацетилсалициловой кислоты хроматограмму нагревают до 130—140 °С, так же как и для реактива Д 142а.

Д 143 Метаванадат аммония 1%-ный раствор метаванадата аммония в концентрированной серной кислоте.

• I Специальная часть Д 144 Метиленовый синий 25 мг метиленового синего растирают в ступке с несколькими мл 0,2 н. серной кислоты до полного растворения и доливают во­ дой до 100 мл. Перед самым опрыскиванием хроматограммы реактив разбавляют равным объемом ацетона.

Д 145 Метиловый красный 0,1%-ный раствор метилового красного в этаноле.

Д 146 Метиловый красный в фосфатном буферном растворе Раствор I. 0,1%-ный раствор метилового красного в этаноле.

Раствор II. Фосфатный буферный раствор рН 7,0.

Растворы I и II смешивают в отношении 2:1.

Д 147 Молибденовокислый аммоний — хлорид цинка aj 1%-«ый раствор молибдата аммония и 1%-ный раствор хло­ рида цинка в 10%1ной соляной кислоте.

б) 10%-ный раствор молибдата аммония и 10%-ный раствор хлорида цинка в 10%-ной соляной кислоте.

Хроматограммы опрыскивают сначала раствором молибдата аммония, затем раствором хлорида цинка. Анионы образуют си­ ние пятна.

Д 148 Молибденовокислый аммоний — серная кислота 10 г молибдата аммония смешивают с 10 мл концентрирован­ ной серной кислоты и доливают дистиллированной водой до 100 мл. После опрыскивания нагревают до 90—100 °С.

Д 149 Нафталиновый черный 1%-ный раствор нафталинового черного 12 В в смеси метанол— вода — ледяная уксусная кислота (5:4:1). Хроматограммы после обнаружения промывают в указанной смеси.

Д 150 Неокупроин Смешивают равные объемы 20%-ного раствора хлоргидрата гидроксиламина и насыщенного раствора неокупроина в этаноле.

Д 151 Нигрозин 0,1%-ный раствор нигрозина в смеси метанол — вода — ледяная уксусная кислота (5:4:1);

избыток реагента смывают погружени­ ем в указанную выше смесь.

600 Специальная часть Д 152 Нингидрии а) 0,1 г нингидрина растворяют в 40 мл абсолютного этанола и 10 мл ледяной уксусной кислоты.

б) 0,2 г нингидрина растворяют в 95 мл к-бутанола и б мл ле­ дяной уксусной кислоты.

в) 0,2%-ный раствор нингидрина в этаноле.

г) 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне или н-бутаноле.

Д 153 Нингидрин — азотнокислая медь Раствор I. 50 мл 0,2%-ного раствора нингидрина в абсолютном этаноле смешивают с 10 мл уксусной кислоты и 2 мл сылш-колли дина.

Раствор II. 1%-ный раствор Си (ЫОз) 2-ЗН 2 0 в абсолютном эта­ ноле.

Перед употреблением оба раствора смешивают в отношении 50:3. После опрыскивания хроматограмму нагревают до 110°С.

Образуются окрашивания, характерные для индивидуальных аминокислот. Окрашивание неустойчиво и исчезает через несколь­ ко часов.

Д 154 Нингидрин — коллидин 0,2—0,3 г нингидрина растворяют в 95%-ном метаноле и при­ бавляют 5 мл сылш-коллидина.

Д 155 4-(я-Нитробензил)пиридин— тетраэтиленпентамин 2%-ный раствор 4-(n-нитробензил) пиридина в дважды пере­ гнанном ацетоне. После опрыскивания хроматограммы и испаре­ ния ацетона нагревают 5 мин при 110°С, затем опрыскивают 2%-)Ным раствором тетраэтиленпентамина в дважды перегнанном ацетоне. Пестициды дают красные пятна.

Д 156 4-(п-Нитробензил)пиридин — тозилхлорид Раствор I. 5%-ный раствор тозилхлорида готовят растворением тозилхлорида в смеаи равных объемов пиридина и толуола.

Раствор II. 2%-ный раствор 4-(л-нитробензил)пиридина в ацетоне.

Раствор III. Водный 1 М раствор ИаяСОз.

Хроматограмму сначала опрыскивают раствором I, затем после неполного высыхания при комнатной температуре — раствором И.

Спустя 1 мин кратковременно нагревают и опрыскивают раство­ ром III.

Специальная часть iiiti Д 157 Нитропруссид натрия — красная кровяная соль 10%-ный раствор нитропруссида натрия, 10%-ный раствор красной кровяной соли и дистиллированную воду смешивают в от­ ношении 1:1: Д 158 4-Нитрозодиметиланилин 10 мг 4-нитрозодиметиланилина перед употреблением раство­ ряют в 10 мл пиридина.

Д 159 Уксуснокислая медь — рубеановый водород Раствор I. 0,5%-ный раствор уксуснокислой меди в воде.

Раствор II. Насыщенный водный раствор рубеанового водорода.

Хроматограмму погружают на 10 мин в раствор I, затем про­ мывают в течение 2—3 ч в токе воды и после этого погружают на 10 мин в раствор II. Высшие жирные кислоты дают серо-зеленые пятна на бесцветном фоне. Окрашивание зависит от полноты от­ мывания раствора I.

Д 160 Основной уксуснокислый свинец Насыщенный водный раствор уксуснокислого свинца фильт­ руют и применяют для обнаружения. Хроматограммы сушат мин при 110°С.

Д 161 Уксуснокислое железо(П) 5%-ный водный раствор уксуснокислого железа(II).

Д 162 Орсин 10 мл 10%-ной серной кислоты, содержащей 1% хлорида же­ леза (III), смешивают с 1 мл 6%-ного раствора орсина в этаноле.

Д 163 Орсин 40 г орсина растворяют в смеси 30 мл ледяной уксусной кис­ лоты, 10 мл концентрированной соляной кислоты и 0,4 мл 1 М.

FeCh- Готовят перед употреблением. Это реактив на неомицйны.

Д 164 Реактив Паули Раствор I. 0,4%-ный водный раствор сульфаминовокислого натрия.

Раствор II. 0,4 М водный раствор нитрита натрия —0,25 н.

НС1—2 н. Na 2 G0 3 (1:8:10).

Оба раствора (1:1) смешивают перед употреблением.

602 Специальная часть Д 165 Перекись водорода Слой опрыскивают 10%-ным раствором Н2О2. Для обнаруже­ ния Сг сначала следует опрыскивать 1 М. NaOH.

Д 166 Перекись водорода — хлорид железа(III) Раствор I. Свежеприготовленный 0,5%-ный раствор перекиси водорода.

Раствор II. 2%-ный водный раствор хлорида железа(III).

После опрыскивания раствором I хроматограмму сушат при 105 °С, затем опрыскивают раствором II и снова сушат яри 105 °С до повторного появления пятен.

Д 167 Пинакриптоловый желтый 0,1%-ный раствор пинакриптолового желтого в этаноле.

Д 168 Пунцовый S 1,2%-ный раствор пунцового S в смеои воды и ледяной уксус­ ной кислоты (9 : 1). Избыток реактива удаляют промыванием хро матограммы водой.

Д 169 Прочный синий В а) 0,1%-ный метанольный раствор бис-диазотированного о-ди аниэидина. Хроматограмму нагревают до 80—110°С.

б) Свежеприготовленный 0,5%-ный водный раствор прочного синего. После опрыскивания этим реактивом хроматограмму оп­ рыскивают 0,1 М NaOH.

Д 170 Пиридилазонафтол Хроматограмму опрыскивают этанольным раствором 1-пири дил-2-азо-2-нафтола 'и помещают в атмосферу аммиака.

Пользуются следующими концентрациями пиридилазонафтола:

а) 0,1%-«ый раствор в этаноле;

б) 0,25%-ный раствор в этаноле.

Д 171 Пиридилазонафтол — азотнокислый кобальт Раствор I. 0,4%-ный раствор 1-пиридил-2-азо-2-нафтола в этано­ ле разбавляют 4 объемами мешленхлорида.

Раствор II. 0,8%-ный раствор Со(Ж)з)2 Раствор III. 2 М. ацетатный буферный раствор (рН 4,6).

Сухую хроматограмму сначала опрыскивают раствором I и пае (ЮЛ Специальная часть ле высушивания — смесью растворов II и III в отношении 2 : 1.

Глюкурониды дают фиолетовые пятна на желтом фоне. Цвет пятен быстро переходит в зеленый.

Д 172 Кверцетин 0,01 М раствор кверцетина в этаноле. Образуется желтое окра­ шивание.

Д 173 Реактив Паск — Мунка Раствор I. 0,075 г бромкрезолового зеленого и 0,025 г бромфе нолового синего растворяют в 100 мл этанола.

Раствор II. 0,25 г перманганата калия и 0,5 г Na2CO3-10H2O растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

Непосредственно перед опрыскиванием смешивают 9 частей раствора I и 1 часть раствора II. Смесь устойчива 5—10 мин.

Д 174 Реактив Рейнделя — Гоппе Раствор I. 2%-ный раствор гипохлорита натрия.

Раствор П. Насыщенный раствор «оллидина и 2%-ную уксус­ ную кислоту смешивают непосредственно перед употреблением с 0,85%-ным раствором иодида калия.

Хроматограмму слегка опрыскивают раствором I, оставляют на 60—90 мин при комнатной температуре и опрыскивают раство­ ром II.

Аминокислоты образуют темно-синие пятна на бесцветном фоне.

Д 175 Родамин В а) 0,5 г родамина В растворяют в 100 мл 96%-ного этанола.

б) Раствор I. 0,5%-ный раствор родамина В в этаноле.

Раствор II. 10%-ный раствор углекислого натрия.

Хроматограммы, слой которых изготовлен из силикагел.я, про­ питанного флуоресцеином, сначала опрыскивают раствором I, су­ шат и опрыскивают раствором II.

Д 176 Родамин В 0,5%-ный раствор родамина В в 6 М НС1.

Д 177 Роданистый аммоний 0,1%-ный раствор роданистого аммония в этаноле.

604 Специальная часть Д 178 Роданистое железо 1,5 г хлорного железа и 2 г роданистого калия растворяют в 100 мл воды и сильно подкисляют соляной кислотой.

Д 179 Родизоновокислый натрий 1%-ный водный раствор родизоновокислого натрия.

Д 180 Сернокислый церий а) 1%-ный раствор сернокислого церия в 2 н. H2SO4.

б) Модифицированный реактив Зонненшейна. 0,1 г сернокис­ лого церия суспендируют в 4 мл дистиллированной воды. К сус­ пензии прибавляют 1 г трихлоруксусной кислоты. Смесь нагрева­ ют до кипения и по каплям приливают концентрированную сер­ ную кислоту, пока раствор не станет прозрачным.

в) 0,3%-ный раствор сернокислого церия в концентрированной азотной кислоте.

Д 181 Сернокислый церий — мышьяковистокислый натрий Раствор I. Смесь 0,2 н. раствора сернокислого церия-аммония и 1 н. мышьяковистокислого натрия (1 : 1).

Раствор II. 0,5%-ный раствор флуоресцеина или антраниловой кислоты в ацетоне.

Хроматограмму опрыскивают раствором I, сушат около 1, мин, опрыскивают раствором II и высушивают. Пятна веществ, содержащих иод, наблюдаются в ультрафиолетовом свете при 366 нм. Если эти вещества можно обнаружить в видимом свете, вместо флуоресцеина пользуются 1%-ным раствором о-толидина в ацетоне (темно-коричневый фон).

Д 182 Сернокислая медь 10%-ный водный раствор CuS0 4 и 2%-ный раствор аммиака ( 5 : 1 ). Окрашивание возникает при нагревании хроматограммы в течение 10 мин при 110° С.

Д 183 Сернокислая медь — диэтиламин 0,5 г сернокислой меди 'растворяют в 100 г метанола и к рас­ твору приливают 3 мл диэтиламина. Раствор устойчив в течение многих дней. Тиобарбитураты образуют зеленые пятна.

Д 184 Тетрафенилборат натрия (калигност) Раствор I. 1%-ный раствор тетрафенилбората натрия в метил этилкетоне, насыщенном водой.

Специальная часть Раствор II. 0,015 %-ный раствор кверцетина в метаноле.

Хроматограмму опрыскивают раствором I и оставляют высох­ нуть на водухе. Затем опрыскивают раствором II и снова сушат на воздухе.

Д 185 Тетразолиевый синий Обнаружение проводят как с Д 187, так и пользуясь вместо трифенилтетразолия так называемым тетразолиевым синим.

Д 186 Тетразолиевый синий — ж-динитробензол — 3 н. КОН Сухую хроматограмму опрыскивают реактивом, полученным смешиванием 2 частей 0,01%-ного раствора тетразолиевого синего, 2 частей 0,1%-ного раствора ж-динитробензола в метаноле и 1 час­ ти 3 н. едкого кали. После этого хроматограмму в течение несколь­ ких мин нагревают до 60°С.

Д 187 Хлорид трифенилтетразолия 4%-ный метанольный раствор хлорида трифенилтетразолия смешивают с 4%-ным метанольным раствором едкого натра в от­ ношении 1:1.

Д 188 Тимолфталеин 0,1 %-ный раствор тимолфталеина в разбавленном аммиаке.

Д 189 Углекислый натрий 1 %-ный раствор углекислого натрия.

Д 190 Ванилин а. 1 %-ный раствор ванилина в а) соляной кислоте;

б) 50%-ной фосфорной кислоте;

в) серной кислоте.

б. 5%-ный раствор в серной кислоте.

Д 191 Ксантгидроловый реактив Раствор I. 0,1 %-ный эфирный раствор ксантгидрола.

Раствор II. ;

Смесь уксусной и концентрированной серной кислот в отношении 1:3.

Хроматограмму опрыскивают раствором I, нагревают до 120 ° С и немедленно опрыскивают раствором П.

t06 Специальная часть Д 192 Реактив Зиминьского — Боровского 20 г (iNH4)2S04 растворяют в 100 мл дистиллированной воды и прибавляют 4 мл концентрированной серной кислоты. Хромато грамму хорошо опрыскивают и нагревают в течение 30 мин при 160—180 °С.

Д 193 Реактив Цвикера а) 1%-ный раствор азотнокислого кобальта в абсолютном эта­ ноле. Хроматограмму после опрыскивания выдерживают в атмо­ сфере аммиака.

б) 2%-ный этанольный раствор уксуснокислого кобальта. По­ сле высушивания хроматограмму выдерживают в парах пиридина.

в) Раствор I. 0,5%-ный метанольный раствор уксуснокислого кобальта.

Раствор II. 0,5%-ный метанольный раствор гидрата окиси ли­ тия.

Хроматограмму опрыскивают поочередно обоими реактивами.

Как 'и реактивы Д 142 а или Д 142 г, пригоден для открытия барби­ туратов с двойными связями.

Д 194 Желатин с дефибринизированной кровью 4,5 г желатина оставляют набухать в 100 мл 0,9%-ного раство­ ра хлорида натрия (физиологический раствор). Затем нагревают при перемешивании на водяной бане до 80 °С. После охлаждения •приблизительно до 40 °С прибавляют три перемешивании 6 мл де­ фибринизированной крови и сразу тонким слоем наливают на хро­ матограмму. Чтобы жидкость не стекала, на края пластинки на­ клеивают липкую ленту шириной 1 см и пластинку помещают в точно горизонтальном положении, лучше всего на охлаждаемый блок. В тех местах, где находятся пятна гемолизующих веществ, желатин становится прозрачным, остальная поверхность остается мутной, непрозрачной.



Pages:     | 1 |   ...   | 16 | 17 || 19 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.