авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 19 |

«Doc. RNDr. PhMr. Magda SAR50NOVA, DrSc. RNDr. Vladimir SCHWARZ, CSc. RNDr. Cestmir MICHALEC A kolektiv CHROMATOGRAFIA NA TENKYCH VRSTVACH VO FARMACII A V ...»

-- [ Страница 3 ] --

Реагент хранится длительное время. После опрыскивания пластин­ ку нагревают несколько минут (необходимо следить за хромато граммой) при 100—110 °С. Вещества обнаруживаются в виде синих или серо-синих пятен на светлом фоне.

5%-ный метанольный раствор фосфорномолибденовой кислоты. Хроматограм­ му нагревают 10 мин при 80 "С. Вещества обнаруживаются в виде синих пятен на желтом фоне;

после дополнительного опрыскивания аммиаком фон обесцве­ чивается [74].

10%-ный раствор фосфорноволъфрамовой кислоты, в 90%-ном этаноле. Хро­ матограмму греют при 110 °С [74].

Если по каким-либо причинам обнаруживать хроматограмму корродирующей серной кислотой нельзя, можно применить более мягкие условия: хроматограмму опрыскивают сульфатом аммония или, лучше, смесью сульфата аммония с кис­ лым сульфатом аммония. Однако для обнаружения требуется нагрев при более высокой температуре [160, 172]. Хроматограмму можно не опрыскивать, если работать с силикагелем, предварительно импрегнированным сульфатом аммония [160].

20 г сульфата аммония растворяют в 100 мл воды и в раствор добавляют 4 мл концентрированной серной кислоты. Хроматограмму обильно опрыскивают этим раствором, пока она не станет прозрачной на просвет, а затем нагревают при температуре примерно на 25 °С выше, чем при обнаружении серной кисло­ той [172].

Хроматограммы можно нагревать в сушильном шкафу, однако удобнее пользоваться электроплиткой, закрытой дюралевой пла­ стиной. Плитку целесообразно включать через реостат, регулируя температуру. Реостат можно откалибровать, насыпав на обогре­ ваемую дюралевую пластину небольшое количество порошкооб­ разного материала, например, окиси алюминия, и поместив в него термометр. Через некоторое время температура установится на определенном уровне;

эту температуру отмечают на шкале рео­ стата. Преимущество такого способа нагревания состоит в том, что хроматограмму в процессе нагревания можно непрерывно наблюдать. Это позволяет избежать возможного обугливания ве­ щества и дает возможность определить, какие вещества обнару­ живаются раньше: часто это имеет значение при их идентифика Общая часть ции. Нагревание пластинок всегда проводят в вытяжном шкафу с хорошей тягой воздуха.

Универсальным обнаружителем является иод. Детектирование осуществляют опрыскиванием хроматографической пластинки 1%нным раствором иода в спирте или обработкой ее парами иода в замкнутом объеме [177]. Эффективен способ, согласно которому на чистую стеклянную пластинку наливают свежеприготовленный раствор иода в ацетоне;

ацетону дают испариться. На пластинке остается слой мелких кристалликов иода. Эту пластинку выдер­ живают в непосредственной близости от хроматограммы. Уже че­ рез несколько секунд начинают вырисовываться коричневые пятна [74]. Обнаружение иодом имеет то преимущество, что через неко­ торое время иод улетучивается с пластинки, что позволяет приме­ нить затем другие обнаружители. Обнаружение иодом удобно при проведении препаративного разделения или при количественном анализе. Пятна веществ можно сделать более контрастными до­ полнительным опрыскиванием хроматограммы раствором крахма­ ла. Контуры пятен сразу после обнаружения необходимо обвести.

Хотя вещества, изменяющиеся под действием иода, встречаются редко, все же с этой возможностью следует считаться, прежде всего при количественном анализе.

Ценным вариантом обнаружения является импрегнирование пластинок или их опрыскивание флуоресцирующим веществом.

Опрыскивание очень разбавленными растворами флуоресцеина или родамина Б и наблюдение хроматограммы в УФ-свете часто при­ меняется в хроматографической практике. Морин образует очень прочные комплексы с окисью алюминия, поэтому импрегнирова­ ние морином слоев, приготовленных из окиси алюминия, удобно, например, при препаративной хроматографии [20]. Морином мож­ но обнаруживать и пластинки с силикагелем;

в этом случае хро матограмму опрыскивают раствором реагента. Поскольку морин частично вымывается с силикагеля, растворы отдельных элюиро ванных с силикагеля веществ следует фильтровать через неболь­ шое количество окиси алюминия, надежно связывающее морин.

Большинство веществ в УФ-свете дает желто-зеленую флуорес­ ценцию на темном фоне. У веществ кислотного характера окраска флуоресценции приобретает синий оттенок. При детектировании соединений, вяло обнаруживающихся этим способом, хроматограм му полезно дополнительно опрыскать менее летучим растворите­ лем, например бутанолом {103]. Применение в качестве хемилюми несцирующего обнаружителя бис- (2,4,6-трихлорфенил)оксалата и перекиси водорода описано в работе [175]. Хроматографические материалы, импрегнированные тем или иным флуоресцентным ин­ дикатором (люминофором), в настоящее время выпускаются ря­ дом известных фирм. Обычно используется люминофор неоргани­ ческой природы, например Leuchtstoff LS-Super (Riedel de Наёп) 72 Общая часть [35] или смесь силиката цинка с цинкокадмиевым сульфидом [69]. Вещества с хромофорной группировкой в молекуле обна­ руживаются в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне в свете «Хроматолайт» (Chromatolite) при 254 или 366 нм. Разу­ меется, при использовании систем растворителей, содержащих хромофор (например, бензол), пластинку после проявления необ­ ходимо тщательно высушить. Из чехословацких препаратов люми­ нофор содержит силпирл, а также готовые пластинки силуфол.

К неспецифическим универсальным методам обнаружения от­ носится также обработка хроматограмм эффективным окислите­ лем, например опрыскивание 0,1 н. раствором перманганата калия в разбавленной уксусной кислоте. При этом ряд веществ обна­ руживается в виде желтых пятен на розовом фоне [74]. Другой метод включает в себя экспозицию хроматограммы в атмосфере озона в течение 30 мин. После удаления избытка озона обдува­ нием вшдухом продукты окисления детектируют обычными об­ наружителями. При окислении озоном образуются гидроперекиси, альдегиды, кетоны и т. д., которые обнаруживают с помощью 2,4-динитрофенилгидразином, фосфорномолибденовой кислотой и т. д. Метод применим и для обнаружения насыщенных углево­ дородов [32].

Для обнаружения многих лекарственных препаратов в качест­ ве универсального реагента зарекомендовал себя пиррол или пир­ рол в смеси с иодом [29]. В литературе описан и так называемый пиролиз с программированием температуры, в ходе которого иден­ тифицируют летучие вещества и продукты пиролитического раз­ ложения [93]. Сравнительно часто обнаружение проводят карбо­ низацией веществ, нагревая пластинки при высокой температуре (около 150 °С). Редко применяемый способ, пригодный для обна­ ружения летучих веществ, состоит в сублимировании этих соеди­ нений из слоя сорбента. Хроматограмму нагревают и отдельные вещества последовательно сублимируются на стеклянную плас­ тинку, приложенную к хроматографическому слою и охлаждаемую с противоположной стороны [8]. Иногда для обнаружения целе­ сообразно использовать летучие продукты гидролиза. Хромато­ грамму опрыскивают раствором щелочи и покрывают тонкой по­ лиэтиленовой пленкой. Поверх пленки кладут индикаторную бу­ магу, насыщенную соответствующим раствором (для обнаружения освобождающихся при гидролизе карбонильных соединений ис­ пользуют раствор 2,4-динитрофенилгидразина и л-толуолсульфо кислоты в метилцеллозольве, для аминов — бромтимоловый синий, для аммиака — реагент Несслера и т. д.), а поверх бумаги поме­ щают стеклянную пластину. Всю конструкцию нагревают снизу 20 мин при 50 °С [18].

Интересный способ детектирования эстрогенов на основе изме­ рения электропроводности диссоциированных веществ (см.

Общая часть разд. 5.5.2.2), предложенный Hay и сотр. [19, 91], может быть применен и для более широкого круга соединений.

Для обнаружения веществ на темных сорбентах, например на активированном угле, можно использовать некоторые из приве­ денных ниже приемов [108]:

а) на хроматограмму наливают суспензию целлюлозы или силикагеля.

В процессе высушивания вещества диффундируют под действием капиллярных сил в верхние белые слои, после чего их можно обнаружить обычными спосо­ бами;

б) кусок марли размером, равным размеру хроматограммы, смоченный ме­ танолом, накладывают на хроматограмму;

поверх марли помещают чистую фильтровальную бумагу, которая всасывает часть метанола из слоя, а вместе с ним и разделенные вещества;

в) на еще влажную хроматограмму сразу после элюирования накладывают сухую фильтровальную бумагу;

г) хроматограммы с одним стартовым пятном погружают длинной стороной в метанол;

пятна веществ мигрируют к приложенной полоске бумаги или слою силикагеля.

При обнаружении незакрепленных слоев опрыскиванием необ­ ходимо соблюдать осторожность, чтобы не сдуть слой сорбента.

Опрыскивание производят с большего расстояния, чтобы обнару­ живающий реагент оседал на хроматограмму под действием силы тяжести в виде тонкого тумана. Целесообразно опрыскивать не­ закрепленные слои еще влажными, т. е. сразу после проявления.

Если хроматограмма проявлялась в летучем растворителе, можно рекомендовать хроматограмму высушить и проявить повторно в неполярном растворителе с более высокой температурой кипения (например, высококипящим углеводородом). При этом величины RF не изменятся, а слой останется влажным. Описан также метод, согласно которому к системе растворителей добавляют небольшое количество декалина [87].

2.7. Обработка результатов Как известно из теории хроматографии на бумаге, подвижность отдельных веществ характеризуется так называемой величиной RF, представляющей собой отношение расстояния между центром пятна вещества и стартом (а) к расстоянию между фронтом рас­ творителя и стартом (б) (рис. 16). Величина RF, таким образом, изменяется в пределах от 0 до 1. Вещества на старте имеют RF=0,0;

вещества в середине хроматограммы имеют RF = 0,5, а вещества на фронте растворителя — / ? F = 1, 0 0. Нужно помнить, что величина RF не является физической константой, если экспе­ римент не проводится в строго стандартных условиях. В большин­ стве случаев величина RF характеризует только подвижность ве­ щества и является величиной эффективности разделения данной хроматографической системы. Именно с этой точки зрения следует 74 Общая часть смотреть на табличные данные величин RF в большинстве работ.

Поскольку величина RF данного вещества зависит от ряда факто­ ров и от любого изменения условий эксперимента, более точную информацию дают относительные величины Rs (или Rx), т. е. ве­ личины RF, отнесенные к RF стандартного соединения. У смеси веществ одного класса в качестве стандарта используют то соеди •-д е S 1.

г " А Рис. 16. Определение значений RF и R $ • R R F~T' s~ —• нение, которое в данной системе поднимается до середины хро матограммы, т. е. его величина RF близка 0,5. Rs есть отношение величины RF определяемого вещества А к величине RF стандарт­ ного вещества В. Эту величину можно определить также как от­ ношение расстояния в между центром пятна определяемого веще­ ства А и стартом к расстоянию г между центром пятна стандарт­ ного вещества В и стартом (рис. 16). Очевидно, что значение Rs может быть больше 1. В литературе обычно применяют величину tiRp, т. е. RFXIOO.

Величины RF измеряют различными способами. Измерение от­ дельных расстояний а, б, в, г с помощью линейки с последующими вычислениями занимает много времени при наличии большого числа пятен. Гораздо удобнее пользоваться резиновым шаблоном, известным из практики бумажной хроматографии, который поме­ щают в раздвижную рамку. Рамку легко сделать из стеклянных или металлических трубочек. В случае если рамка сделана из ме­ талла, ее размер можно фиксировать с помощью установочного винта (рис. 17). Однако такой винт не необходим: как металли­ ческая, так и стеклянная рамка остается фиксированной в любом Общая часть положении под действием натяжения самой резинки. При измере­ нии величин RF рамку растягивают так, чтобы начало шкалы бы­ ло совмещено со стартовой линией хроматограммы, а конец шкалы приходился на фронт растворителя. По полученной шкале непо­ средственно считываются значения RF. Пригоден также шаблон 1° •' ? ? '4.5 6 7 8 д I II \J Рис. 17. Приспособление для отсчета величин RF М В -VWWWWA-J Рис. 18. Устройство для измерения большого числа значений RF 1 — старт;

2 — фронт растворителя.

из плексигласа, который производит предприятие Logarex (ЧССР) и который входит в комплект для ТСХ, поставляемый предприя­ тием Kavalier (ЧССР) (см. разд. 2.1). В литературе описан целый ряд более сложных приспособлений и устройств для измерения подвижности веществ на хроматографичеоких пластинках. Ниже приводится только один вариант остроумно решенного устройства, предназначенного для быстрого измерения большого числа вели­ чин RF [53].

Приспособление состоит из прозрачного шаблона, сделанного из пластмас­ сы, который накладывается на хроматограмму. На шаблоне между неподвижны­ ми точками А и Б укреплена проволока с определенным сопротивлением, являю­ щаяся частью простой потенциометрической схемы. По этой проволоке между точками А я Б скользит подвижный контакт Г. Шаблон размещают на хромато 76 Общая часть грамме так, чтобы точка А была на старте. При измерении величин RF контакт Г перемещают к фронту растворителя (если измеряют величины Rs, контакт Г помещают над пятном стандартного вещества), а потенциометр В с сопротивле­ нием 1 кОм устанавливают так, чтобы стрелка вольтметра показывала 1,0 (или какое-нибудь другое кратное значение). Затем подвижный контакт Г перемеща­ ют к отдельным пятнам определяемых веществ и записывают показания стрелки вольтметра (рис. 18).

Рис. 19. Денситометрическое определение величин RF.

/ Л'\ ( 'А — тангенциальное \R/г=_Б")'• 1,^=° - ^] 6 — по вершине пика Известно и денситометрическое определение величины RF (см.

рис. 19). Из двух возможных вариантов измерения метод танген­ циальный точнее, чем перпендикулярный [11].

Авторы считают целесообразным привести рекомендации Ни бома [95], касающиеся стандартной методики оценки окраски пя­ тен при перерисовывании хроматограмм. Интенсивные пятна изо­ бражают замкнутой сплошной линией, слабые пятна с размытыми краями обводят пунктирной линией. Основные цвета — синий, жел­ тый и красный — заштриховывают так, как показано на рис. 20, в то время как смешанные цвета изображают штриховкой, харак­ теризующей каждый из основных цветов, составляющих данный цвет. Плотность штриховки одновременно отражает интенсивность окрашивания. Пятна, видимые в УФ-свете, обозначают горизон­ тальной штриховкой, а цветовые оттенки — штриховкой, характери­ зующей данный цвет. Детали ясны из рассмотрения рис. 20.

2.8. Воспроизводимость значений Rf Проблема получения воспроизводимых значений RF веществ, разделяемых методом ТСХ, так же стара, как и сам метод. Введе­ ние величины RF позволило численно выразить положение пятна на хроматограмме. Большинство авторов не приписывают этой ве­ личине характер физической или физико-химической константы и Общая часть о О б II ш *X Рис. 20. Рекомендации для единообразного обозначения окраски пятен на хро матограммах.

а — интенсивное пятно;

б — слабоокрашенное пятно;

в — основные цвета пятен;

/ — синий;

2 —желтый;

3—красный;

г — смешанные цвета пятен;

/ — зеленый;

2 — пурпурный;

3 — оранжевый;

4 — коричневый;

5 — фиолетовый;

6 — желто-зеленый;

7 — красно-желтый;

8 — сине-зеленый;

9 — коричнево-желтый;

10 — бледно-зеленый;

И — интенсивно-зеленый;

б — цвет пятен при УФ-освещении: / — обычный;

2 — темно-красный;

3 — темно-коричневый.

считают ее лишь приблизительным показателем относительного положения определяемого вещества в сравнении с положением остальных веществ, присутствующих в анализируемой смеси. При идентификации вещества посредством сравнения величин RF оп­ ределяемого соединения с Rp стандартного вещества достижение воспроизводимости разделения, а тем самым и воспроизводимости значений Rf приобретает большое значение.

78 Общая часть Как следует из результатов исследований многих авторов, на воспроизводимость этой величины при проведении тонкослойной хроматографии влияет целый ряд факторов. К ним относятся преж­ де всего система растворителей, форма и степень насыщения па­ рами растворителя хроматографической камеры, активность хро матографических слоев, относительная влажность, длина пробега фронта растворителя, значение рН сорбента или системы раство­ рителей. На значении RF сказывается также чистота растворите­ лей, составляющих систему, толщина слоя, зернение сорбента, кон­ систенция пасты при изготовлении пластинок, количество нанесен ного образца и удаленность стартовой линии от нижнего края, глубина погружения нижнего края слоя и направление проявле­ ния. В меньшей мере сказывается температура.

Влияние толщины слоя на воспроизводимость разделения до­ казано в работах {69, 86]. В этих же работах показано, что точное соблюдение одинаковых условий при нанесении, сушке и активи­ ровании слоев в одинаковой степени сказывается на воспроизво­ димости значений RF. Зависимость воспроизводимости хроматогра фического разделения от толщины слоя показана также и в дру­ гих работах [21, 33, 34, 40, 41, 98, 99]. Другие авторы изучали влияние зернения силикагеля на воспроизводимость значений RF и характер разделения веществ [2, 132, 141, 157, 169, 181]. Важ­ ным фактором, определяющим воспроизводимость результатов, яв­ ляется активность слоя и соответственно ее контроль [174]. Кон­ троль активности заключается в проведении простой и быстрой операции — в хроматографировании некоторых азокрасителей;

по их расположению на хроматограмме непосредственно определяется активность [49, 138, 139]. Однако активность слоев' еще не яв­ ляется той величиной, которая однозначно определила бы их ад­ сорбционную способность. Попытка классифицировать отдельные сорбенты по их адсорбционной способности [113] оказалась без­ успешной, поскольку отдельные типы сорбентов отличаются друг от друга величиной поверхностной энергии. Поэтому на основе значений RF стандартных красителей нельзя сравнить, например, активности силикагеля и окиси алюминия. Активность слоев, на которых компоненты смеси делятся по принципу адсорбции, ма­ тематически рассчитал Снайдер [133]. Влияние влажности сор­ бента на воспроизводимость величин RF изучали многие авторы [6, 29, 50]. Влажности воздуха в момент нанесения образца на хроматограмму приписывают большое значение Даллас [21] и другие авторы [6, 42, 173].

Согласно другим источникам [21, 34, 39], на разделение сое­ динений методом ТСХ большое влияние оказывает и температура.

Тепловым фактором, оказывающим влияние на значение RF, яв­ ляется и теплота адсорбции [13], которая выделяется при продви­ жении системы, растворителей по хроматограмме. Эта теплота Общая часть оказывает сравнительно большое влияние на воспроизводимость значений RF прежде всего в камерах, не насыщенных растворите­ лем, где может возникнуть так называемый краевой эффект, опи­ санный Шталем [135, 139]. Необходимость работы с насыщенны­ ми камерами подчеркивали также и другие авторы [10, 12, 14, 15, 25—28, 30, 36, 37, 48, 52, 63, 118, 124]. Помимо упомянутых изме­ нений условий разделения в ненасыщенных камерах происходит повышенное испарение системы растворителей, что влечет за со­ бой увеличение значений RF. Влияние насыщения камер на состав двухкомпонентных систем изучали с помощью ГЖХ [143, 144];

оказалось, что при использовании систем хлороформ — этанол, а также бензол — этанол изменение в соотношениях компонентов систем не имело места даже после насыщения камер в течение 2 ч. Однако, если один из компонентов системы растворителей представляет собой эфир или другой легколетучий растворитель, насыщение камеры проводить не рекомендуется из-за изменений состава системы [144]. Из этой же работы следует, что для полу­ чения воспроизводимых значений RF и для достижения оптималь­ ного разделения веществ анализируемой смеси нужно насыщать камеру определенное время. При разделении на пластинках с си ликагелем экспериментально найденное оптимальное время для насыщения камер составило 30—60 мин, для пластинок с окисью алюминия — 60—120 мин.

Влияние расстояния от старта до уровня растворителя в каме­ ре зависит от сорбента, количества и типа разделяемых веществ и от используемой системы растворителей [12, 99, 141]. Это влия­ ние четко проявляется при работе в двухкомпонентных системах и при разделении веществ с низкими значениями RF. На значении RF сказывается также длина пробега фронта растворителя [126] и в некоторой мере количество нанесенного образца [20]. К дру­ гим факторам, оказывающим влияние на воспроизводимость раз­ деления, относится способ приготовления пластинок. Несмотря на то что разница в хроматографическом поведении веществ была несущественна, тем не менее величина стандартного отклонения значений RF, подсчитанная для разделений на пластинках, при­ готовленных вручную, оказалась выше, чем для пластинок, приго­ товленных с помощью аппликатора по Шталю [97]. В работах [155—157] обсуждалось влияние вязкости суспензии сорбента.

Воспроизводимость значений RF в большой степени зависит и от качества растворителей и их чистоты. При адсорбционной хро­ матографии загрязнения полярного характера в количестве меньшем 0,5% в случае однокомпонентной системы практически не сказываются на разделении. Однако следы этанола (0,5—1,5%) в эфире — как в индивидуальном, так и присутствующем в системе в качестве одного из компонентов — уже влияют на хроматогра фическое поведение вещества. В связи с возможностью селектив 80 Общая часть ного испарения или адсорбции на слое сорбента использовать та­ кого рода системы для проявления серии пластинок не рекоменду­ ется.

Из сказанного выше, а также из работы [98] следует, что для достижения воспроизводимости разделения и, следовательно, для получения воспроизводимых значений RF следует учитывать сле­ дующие факторы: природу сорбента, толщину слоя, способ его приготовления и высушивания, форму камеры, технику хромато графирования, степень насыщения камеры парами растворителя, длину пробега фронта растворителя, удаленность старта от уровня растворителя в камере, качество растворителей, количество на­ несенного образца, растворитель, в котором вещество наносилось, и способ обнаружения.

2.9. Запись результатов разделения в тонком слое и хранение хроматограмм Часто возникает необходимость максимально точно запротоко­ лировать результаты хроматографического разделения. Хранить хроматограммы трудно вследствие неустойчивости окраски пятен и малой механической прочности хроматографического слоя. Точ­ ное фиксирование условий эксперимента требует не только про­ ведения записи в журнале: зарисовка хроматограммы, формы пятен и их размещения является очень важной характеристикой выполненной работы.

Хроматография в тонком слое независимо от типа разделяемых веществ связана с проведением одних и тех же операций. Поэтому при ведении протокольных записей рекомендуется использовать единую форму с тщательно продуманными и подобранными пози­ циями. Это гарантирует исчерпывающий характер записи данных, что необходимо для возможно точного воспроизведения методики.

На рис. 21 приведен вариант протокольной записи по Генширту из монографии Шталя [136].

Самый простой вариант изображения хроматограммы состоит в перерисовывании хроматограммы на бумагу. Хотя этот способ, с точки зрения авторов, не отличается точностью, благодаря своей простоте он применяется очень часто даже при публикации ре­ зультатов работ в специальной литературе.

При перерисовке удобно пользоваться резиновой печаткой раз­ мером 6X14 см с обозначенным контуром хроматограммы. Пло­ щадь печатки разделена на 10 делений для более точного нанесе­ ния пятен согласно значениям RF- Печать имеет позиции для впи­ сывания наиболее важных параметров анализа (рис. 22).

Более длительный, но и более точный способ записи состоит в перерисовывании хроматограммы без изменения масштаба. Плас­ тинки с незакрепленным слоем можно копировать только на гори Общая часть ХРОМАТОГРАММА В ТОНКОМ СЛОЕ № Группа Литература Слой Толщина слоя Размер Приготовление и высушивание Камера Способ разделения Насыщение камеры Пробег фронта растворителя Время элюирования Подвижная фаза Растворители, использованные при нанесении образца, концентрация рас­ творов Количество нанесенного образца • • Примечания Дата Вещество RF Чувствительность метода Идентификация 1.

2.

10.

Рис. 21. Вариант протокольной записи хроматографического разделения в тонком слое сорбента по Генширту.

зонтальной подставке (например, их нельзя разместить на оконном стекле, против света), поэтому их освещают снизу. Для этой цели пригоден современный столик для титрования с нижним освеще­ нием или фотокопировальный прибор подходящего размера (18X24 ом). На малоконтрастных хроматограммах пятна следует сделать более заметными с помощью обкалывания их контуров острой иглой. Перерисовывать следует на кальку, которую кладут на стеклянное полотно, размещенное примерно в 1 мм от пластин­ ки, чтобы не испортить хроматограмму прямым касанием. Пере 6- 82 Общая часть рисовывают контур мягким карандашом, а затем обводят тушью.

Такие копии удобны, так как их помимо удобства хранения можно количественно обсчитывать планиметром.

Получение фотографических копий. В каждом из приведенных выше способов на характере зарисовки сказывается субъективное восприятие и навык. Нечеткие края пятен, образование асимметричных пятен с так называемыми «хвостами», характер стартового пятна, форму пя­ тен и т. д. удается правильно изобра­ зить только при большом опыте ра­ боты. Фоторепродукция исключает пе­ речисленные затруднения. Возможно­ сти современной фотографии позволя­ ют выбрать способ репродукции при­ менительно к конкретной задаче и технической оснащенности лаборато­ рии.

Контактный способ не требует ни­ какого оборудования. Этот способ пригоден только для воспроизведения контрастных хроматограмм с хорошо заметными пятнами. Применяется чув­ ствительная бумага с высокой сте­ пенью контрастности. Для получения отпечатка под хроматограмму под кладывают фотобумагу, закрытую прозрачной фольгой из пластмассы.

Защитная пленка предохраняет фото­ графический материал от воздействия остатков агрессивных химикатов. За­ тем хроматограмму освещают светом нужной интенсивности, которая опре­ Рис. 22. Печать для записи не­ обходимых данных и величин деляется предварительно. При этом 4F при хроматографировании способе получают негативное изобра­ в тонком слое.

жение хроматограммы. Получение по­ зитивного изображения требует боль­ шей затраты времени. Сначала получают отпечаток хроматограм­ мы на плоской пленке высокой контрастности, затем контактным способом отпечаток переносят на фотобумагу.

Самым распространенным способом репродукции хроматограмм является их фотографирование с помощью фотоаппарата. Безус­ ловные преимущества этого метода заключаются в точности изо­ бражения, большой производительности и возможности получения цветной репродукции. Фотографирование хроматограмм относится Общая часть к области получения фоторепродукций. Этой теме посвящены мно­ гочисленные руководства.

Оборудование. Для получения фотоснимков наиболее пригодны зеркальные камеры. Из зеркальных камер с одним объективом пригодны «Экзакта» (Exakta), «Практика» (Praktika), «Пентакон»

(Pentacon);

из камер с двумя объективами — «Флексарет» (Flexa ret) и аналогичные системы. Камеры с одним объективом следует дополнить набором насадочных колец или макрофотографической приставкой;

это позволяет проводить съемку с близкого расстоя­ ния. В случае камер с двумя объективами фотографирование с близкого расстояния осуществляется с помощью насадочных линз с оптическим клином для компенсации параллакса. Другие аппа­ раты типа «Лейка» (Leica) и «Микрома» (Mikroma) имеют спе­ циальную систему для съемки с близкого расстояния.

Фотопленки. Для черно-белой репродукции используют малочувст­ вительный мелкозернистый и контрастно работающий материал с панхроматической сенсибилизацией Агфа ФФ (Agfa FF), Орво НП15 (Orwo NP15), Фома Бриллант (Foma Brillant) и т. д. Для обычных работ можно использовать дешевую ортохроматическую пленку, применяемую для микрофильмирования специальной ли­ тературы.

В социалистических странах наиболее распространены пленки Орво (ORWO), производимые в ГДР:

ДК-3 — негативная ортохроматическая пленка, ДК-5 — более чувствительная негативная пленка с панхрома­ тической сенсибилизацией.

При использовании ортохроматической пленки (ДК-3) для ес­ тественного перевода цветного спектра в черно-белую шкалу объ­ ектив следует снабдить темно-желтым фильтром. Панхроматиче­ ская пленка не требует применения светофильтров. Снимки, по­ лученные на этих пленках, отличаются четкостью и хорошей кон­ трастностью.

Имеющиеся в продаже цветные фотопленки предназначены ли­ бо для негативной, либо для обратимой фотографии (диапозити­ вы). Диапозитив очень удобен: изготовленный снимок после про­ явления представляет собой документ, точно отражающий ориги­ нал. Диапозитив пригоден в качестве иллюстративного материала, с него- можно сделать новые копии. Негативный цветной материал требует длительных процедур для получения цветного отпечатка, причем возможность демонстрации диапозитивов исключается. Оба типа фотоматериалов изготовляются с разной чувствительностью к дневному и искусственному освещению. Это следует иметь в виду в целях получения верной цветопередачи.

Техника съемки. Объект фотографируют закрепленным неподвиж­ но аппаратом с объективом, отвесно обращенным к хроматограм ме, расположенной в горизонтальной плоскости. Под хромато 6* 84 Общая часть грамму подкладывают черную матовую бумагу, чтобы края хро матограммы были четко видны. Искусственные источники света должны быть размещены с двух сторон на расстоянии 1 м под углом 45°. При использовании очень контрастных чувствительных материалов необходимо обеспечить совершенно равномерное осве­ щение хроматограммы. В случае бледных хроматограмм качество снимков улучшается, если хроматограмму подсвечивать снизу;

при этом пространство около хроматограммы следует маскировать све­ тонепроницаемой черной материей.

Очень бледные пятна не прорабатываются даже при использо­ вании контрастного материала. В таких случаях помогает приме­ нение одного из цветных фильтров, применяемых в обычной чер­ но-белой фотографии. Для усиления слаборазличимых желтых пятен пользуются синим фильтром, а для улучшения изображения малозаметных синих пятен применяют темно-желтый фильтр.

Бледные красные и красноватые пятна четче выявляются через синий фильтр. Эти комбинации фильтров относятся к применению панхроматического материала. Малозаметные красноватые пятна хорошо фиксируются и ортохроматическим материалом (ДК-3) без применения рекомендованного желтого фильтра. В литературе имеется обширная информация о правильном подборе фильтров [72].

Фотографирование при \Ф-освещении проводится в тех случа­ ях, когда хроматографируемые вещества абсорбируют УФ-свет или под его действием флуоресцируют. В большинстве случаев флуо­ ресценция возникает при длине волны 365 нм. В этой области спектра еще может быть использована оптика из обычного стекла, равно как и обычные типы фотоаппаратов. Авторы рекомендуют следующие фильтры: при использовании черно-белого материала, например, комбинацию средне-желтого и УФ-фильтров, при работе с цветным материалом УФ-фильтр или комбинацию УФ-фильтра с желтым. Объект освещают с помощью ртутной лампы с филь­ тром, отсекающим видимую часть спектра. Для очень точных ра­ бот в области коротких волн используют объективы из кварцевого стекла и фотоматериалы, сенсибилизированные к ультрафиолетовой части спектра. Техника работы с этими материалами хорошо осве­ щена в литературе [148].

Консервация хроматограмм. Приемы, используемые для консер­ вации тонкослойных хроматограмм как таковых, относятся скорее к области лабораторной техники, чем к ведению записи экспери­ мента. Однако, поскольку фиксирование хроматограмм преследует ту же цель, авторы сочли целесообразным остановиться на спосо­ бах фиксирования в настоящем разделе.

Один из способов сохранения хроматограмм заключается в удалении слоя с проявленной хроматограммы. Хроматограмму опрыскивают специальным составом нитен (Neatan) до полного Общая часть смачивания слоя и высушивают на воздухе или кратковременным нагреванием при 100 °С. Затем к поверхности слоя прижимают специальную липкую ленту и погружают хроматограмму в воду.

Стеклянную пластинку осторожно отделяют ножом. Отделенный слой снова высушивают с помощью фильтровальной бумаги и на­ греванием при 100 °С. Снятые этим способом с пластинок слои сохраняют свой первоначальный внешний вид и могут храниться как таковые или наклеенными на чистые листы бумаги.

Иначе поступают при фиксировании раствором коллодия. На хроматографический слой осторожно наливают 4%-ный раствор коллодия с добавкой 7,5% глицерина. На заливку поверхности 20X20 см расходуется около 50 мл раствора. После затвердевания коллодия слой снимают с пластинки с помощью лезвия. Слипший­ ся слой хроматограммы наклеивают с помощью липкой ленты на бумагу. Преимущество таких фиксированных хроматограмм со­ стоит в том, что пятна могут быть впоследствии вырезаны и элюи рованы для количественного определения. Хроматограммы, фик­ сированные этим способом, представляют очень удобный демон­ страционный материал.

В области консервации хроматограмм существенных новинок в последних работах не появлялось. Обзор существующих методов содержится в монографии Кирхнера [68]. Интересна обзорная работа венгерских авторов на эту тему [162], которые обсуждают возможность замены состава для консервации хроматограмм ни­ тей фирмы Merck искусственной смолой венгерского производства.

Предприятие Kavalier, завод в Вотице (ЧССР), выпускает анало­ гичный состав силуфикс в аэрозольной упаковке (spray Silufix) (см. разд. 2.1).

ЛИТЕРАТУРА 1. J. Chromatogr., 28, 499 (1967).

2. Abbott D. G., Egan H., Hammond E. W., Thomson J., Analyst., 89, (1969).

3. Ackermann G., Frey H. P., J. Chromatogr., 33, 53 (1968).

4. Affonso A., J. Chromatogr., 21, 332 (1966).

5. Arx E., von, Neher R., J. Chromatogr., 25, 109 (1966).

6. Badings H. Т., J. Chromatogr., 9, 32 (1962).

7. Badings H. Т., J. Chromatogr., 14, 265 (1964).

8. Baehler В., Helv. Chim. Acta, 45, 309 (1962).

9. Baitsholts A., Ardell R. E., J. Chromatogr., 30, 493 (1967).

10. Beyer C. F., Kargl Т. Е., J. Chromatogr., 65, 435 (1972).

11. Brain K. R., J. Chromatogr., 75, 124 (1973).

12. Brenner M., J. Chromatogr., 33, 199 (1968).

13. Brenner M., Niederwieser A., Pataki G., Fahmy A. R., Experientia, 18, (1962).

14. Brockmann H., Schodderova H., Ber., 74, 73 (1941).

15. Browning D. R., Sch. Sci. Rev., 48, 161 (1966);

Chem. Abstr., 66, (1967).

86 Общая часть 16. Canic V. D., Perisic-Janjic N. U., Z. Analyt. Chem., 265, 332 (1973).

17. Canic V. D., Perisic-Janjic N. U., Babin M. J., Z. Analyt. Chem., 264, (1973).

18 Conway W. D., Piontek R. W., Shekosky J. M., J. Chromatogr., 27, (1967).

19. Cretner., Kraus Th., Nau #., Z. Analyt. Chem., 245, 37 (1969).

20. Cerny V., Joska J., Labler 1., Collection Czechoslov. Chem. Commun., 26, 1658 (1961).

21. Dallas M. S. J., J. Chromatogr., 17, 267 (1965).

22. Darocha Т., Gray С #., Quincey R. V., J. Chromatogr., 27, 497 (1967).

23. Davidek J., Pokorny J., Ztschr. Lebensmittel-Untersuch. Forsch., 115, (1961).

24. Davidek J., Prochazka 1., Collection Czechoslov. Chem. Commun., 26, (1961).

25. De Zeeuw R. A., Analyt. Chem., 40, 915 (1968).

26. De Zeeuw R. A., J. Chromatogr., 32, 43 (1968).

27. De Zeeuw R. A., J. Chromatogr., 33, 227 (1968).

28. De Zeeuw R. A., Pharm. Weekbl., 104, 1173 (1969);

Chem. Abstr., 71, (1969).

29. Egli R. A., Z. Analyt. Chem., 255, 208 (1971).

30. Engelhardt #., Engel В., Chromatographia, 1, 490 (1968).

31. Fike W. W., Sunshine I., J. Chromatogr., 18, 405 (1965).

32. Fuhrmann R., Jeralomon D., J. Chromatogr., 22, 468 (1966).

33. Furakawa Т., J. Sci. Hiroshima Univ. Ser. A., 21, 285 (1958);

Chem. Abstr., 53, 809 (1959).

34. Furakawa Г., Nippon Kagaku Zasshi, 80, 45 (1959);

Chem. Abstr., 54, (1960).

35. Ganshirt #., Malzacher A., Arch. Pharm., 293, 925 (1960).

36. Geiss F., Die Parameter der Diinnschicht-Chromatographie. Vieweg und Sohn, Braunschweig, 1972.

37. Geiss F., J. Chromatogr., 33, 620 (1970).

38. Geiss F., Sandroni S.: цитировано из Geiss F.: Die Parameter der Diinn­ schicht-Chromatographie. Vieweg und Sohn, Braunschweig, 1972.

39. Geiss F., Schlitt #., J. Chromatogr., 33, 208 (1968).

40. Geiss F., Schlitt H., Klose A., Z. Analyt. Chem., 213, 321 (1965).

41. Geiss F., Schlitt #., Klose A., Z. Analyt. Chem., 213, 331 (1965).

42. Geiss F., Schlitt #., Ritter F. J., Weimar W. M., J. Chromatogr., 12, (1963).

43. Graham R. J. Т., J. Chromatogr., 33, 118 (1968).

44. Gurevich A. I., Chukreeva G. N.. J. Chromatogr., 31, 583 (1967).

45. Halpaap #., J. Chromatogr., 33, 144 (1968).

46. Halpaap #., Bausch #., J. Chromatogr., 48, 144 (1970).

47. Halpaap #., Klatyk K., Rossler #., J. Chromatogr., 48, 163 (1970).

48. Hara S., Mibe K.: Nippon Kagaku Zasshi, 90, 831 (1969);

Chem. Abstr., 71, 119222 (1969).

49. Hermanek S., Schwarz V., Cekan Z., Collection Czechoslov. Chem. Commun., 26, 3170 (1961).

50. Hermanek 5., Schwarz V., Cekan Z., Pharmazie, 16, 566 (1961).

51. Hesse G., Engelhardt #., Kowallik W., Z. Analyt. Chem., 214, 81 (1965).

52. Honegger C, Helv. chim. Acta, 46, 1772 (1963). • 53. Hoodless R. A., Pitman K. G., Stewart T. E., Thomson L, Arnold J. E., J.

Chromatogr., 54, 393 (1971).

54. Hsiu H. C, Shih Т. В., Wang К. Т., J. Chromatogr., 41, 489 (1969).

55. Hutzul M. G., Wright G. F., Can. J. pharm. Sci., 1968, 4;

Chem. Abstr., 69, 54308 (1968).

56. Chiang H. Ch., J. Chromatogr., 40, 189 (1969).

57. Chiang H. Ch., J. Chromatogr., 44, 201 (1969).

Общая часть 58. Chmel K-, Pihera P., Schwarz V., Chem. listy, 67, 649 (1973).

59. Chou J. S. Т., Lawrence B. M., J. Chromatogr., 27, 279 (1967).

60. Chuang H. P., Chiang H. Ch., Wang К- Т., J. Chromatogr., 41, 487 (1969).

61. Janak J,, Chem. Ind. (London), 1967, 1137.

'62. Janak J., Kubecova V., J. Chromatogr., 33, 132 (1968).

63. Janchen D., J. Chromatogr., 33, 195 (1968).

64. Kay H. L., J. Chromatogr., 31, 224 (1967).

65. Kay H. L., Nature, 209, 1237 (1966).

66. Keefer L. K., Johnson D. E., J. Chromatogr., 47, 20 (1970).

67. Keefer L. K-, Johnson D. E., J. Chromatogr., 69, 215 (1972).

68. Kirchner J. G., Thin-layer chromatography. Interscience, New York, 1967, p. 187.

69. Kirchner J. G., Miller J. M., Keller G. J., Analyt. Chem., 23, 420 (1951).

70. Korczak В., Wegrzynek J., Habla H., Sliwiok J., Microchem. J., 17, (1972).

71. Кост А. Н., Коронелли Т. В., Сагитуллин Р. С. — ЖАХ, 19, 125 (1964).

72. Kulhdnek J., Fotografie v praxi. Orbis, Praha, 1960.

73. Kuranz R., J. Chromatogr., 28, 446 (1967).

74. Labler L., Schwarz V. et al., Chromatografie na tenke vrstve. Nakladatelstvi CSAV, Praha, 1965.

75. Larson R. L., J. Chromatogr., 43, 287 (1969).

76. Levin S. S., Touchstone J. C., Murawec 7., J. Chromatogr., 42, 129 (1969).

77. Lin Y. Т., Wang К- Т., Yang T. I., J. Chromatogr., 21, 158 (1966).

78. Macek K-, J. Chromatogr., 33, 332 (1968).

79. Maini P., J. Chromatogr., 42, 266 (1969).

80. Marino V. S., J. Chromatogr., 46, 125 (1970).

81. Marklova E., Hais 1. M., J. Chromatogr., 63, 446 (1971).

82. Mendoza С. Е., Shields J. В., J. Chromatogr., 50, 92 (1970).

83. Meyer A. C., White H. В., J. Chromatogr., 30, 228 (1967).

84. Michalec С, частное сообщение.

85. Mikulaj V., Macasek F., Pek E., Chem. listy, 60, 829 (1966).

86. Miller J. M., Kirchner J. G., Analyt. Chem., 25, 1107 (1953).

87. Mistrjukov E. A., J. Chromatogr., 9, 311 (1962).

88. Mitchell L. C, J. Chromatogr., 30, 269 (1967).

89. Morris E. A., Lab. Pract, 16, 37 (1967);

Chem. Abstr., 66, 91286 (1969).

90. Nagasawa K., Yoshidome H., Takeshita R., J. Chromatogr., 43, 473 (1969).

91. Nau H., J. Chromatogr., 53, 391 (1970).

92. Nicolaides N.. J. Chrom. Sci., 8, 717 (1970).

93. Nogers R. N., Analyt. Chem., 39, 730 (1967).

94. Nordby H. E., Kew T. J., Fisher J. F., J. Chromatogr., 24, 257 (1966).

95. Nybom N., J. Chromatogr., 26, 520 (1967).

96. Okumura Т., Kadono Т., Nakatani M., Yakugaku Zasshi, 93, 79 (1970).

97. Pataki G., Helv. chim. Acta, 47, 784 (1964).

98. Pataki G., Kelemen J., J. Chromatogr., 11, 50 (1963).

99. Pataki G., Keller M., Helv. chim. Acta, 46, 1054 (1963).

100. Petit J., Berger J. A., Gaillard G., Meyniel G., J. Chromatogr., 39, (1969).

101. Pfeifer J. J., Mikrochim. Acta, 1962, 529.

102. Piorr W., Toth L., Z. Analyt. Chem., 223, 33 (1966).

103. Pitra J., Collection Czechoslov. Chem. Commun., 31, 1402 (1966).

104. Pitra J., Reichelt J., Cekan Z., Collection Czechoslov. Chem. Commun., 28, 3072 (1963).

105. Pitra J., Sterba J., Chem. listy, 56, 544 (1962).

106. Pitra J., Sterba J., Chem. listy, 57, 389 (1963).

107. Pitra J., Sterba J., частное сообщение.

108. Prochazka 1., J. Chromatogr., 48, 113 (1970).

88 • Общая часть 109 Przybylowicz Е. P., Staudenmayer W. J., Perry E. 5., Baitsholts A. D., Tisch ler T. N.. J. Chromatogr., 20, 506 (1965).

110. Raaen H. P., J. Chromatogr., 44, 522 (1969).

111. Raaen H. P., J. Chromatogr., 53, 600 (1970).

112. Rabek V., J. Chromatogr., 33, 186 (1968).

113. Randerath K-, Dunnschicht-Chromatographie., 2 ed. Verlag Chemie, Weinheim, 1965.

114. Randerath K-, Randerath E., J. Chromatogr., 22, 110 (1966).

115. Redewell R. J., Bieleski R. L., J. Chromatogr., 30, 231 (1967).

116. Relchelt J., Pitra 1., Collection Czechoslov. Chem. Commun., 27, 1709 (1962).

117. Relchelt J.,'Pitra 1., Cs. farm., 12, 416 (1963).

118. Reimers F., Dansk Tidsskr. Farm., 42, 204 (1968);

Chem. Abstr. 70, (1969).

119. Roberts G. P., J. Chromatogr., 22, 90 (1966).

120. Roder E., Mutschler E., Rochelmeyer #., Dtsch. Apoth.-Ztg., 109, 1219 (1969).

121. Roozemond R. C, J. Chromatogr., 41, 270 (1969).

122. Rosier #., Heinrich W., Mabry T. 1., J. Chromatogr., 78, 432 (1973).

123. Rouhgan P. G., Tunnicliffe C. G., J. Lipid Res., 8, 511 (1967).

124. Sandroni S., Geiss F., Chromatographia, 2, 165 (1969).

125. Sheen В., J. Chromatogr., 60, 363 (1971).

126. Shellard E. 1., Lab Pract, 13, 290 (1964).

127. Schwartz 1. #., J. Chromatogr., 30, 619 (1967).

128. Schwartz V., Pharmazie, 18, 122 (1963).

129. Schwarz V., Syhora K-, Collection Czechoslov. Chem. Commun., 28, (1963).

130. Singh E. 1., Gershbein L. L., J. Chrom. Sci., 8, 162 (1970).

131. Slater G. 5., J. Chromatogr., 22, 478 (1966).

132. Snyder L. R., Separ. Sci., 1, 191 (1966).

133. Snyder L. R., Principles of adsorption chromatography. M. Dekker, New York, 1968.

134. Spitz #., J. Chromatogr., 42, 384 (1969).

135. Stahl E., Arh. Pharm., 292, 411 (1959).

136. Шталь E., Хроматография в тонких слоях.-—М.: Мир, 1965.

137. Stahl Е., Chem.-Ing. Technik, 36, 941 (1964).

138. Stahl E., Chemiker-Ztg., 82, 323 (1958).

139. Stahl E., Chemiker-Ztg., 85, 371 (1961).

140. Stainier R., J. Pharm. Belg., 19, 191 (1964).

141. Stdrka L., Hampl R., J. Chromatogr., 12, 347 (1963).

142. Stupnicki R., Stupnicka E., J. Chromatogr., 21, 150 (1966).

143. SarSunovd M., Kakdc В., Chromatographia (в печати).

144. Sarsunova M., Kakdc В., Macek K-, Z. Analyt. Chem., 245, 154 (1969).

145. Sita F., Chmelovd V., Chmel K-, Cs. farm., 22, 234 (1973).

146. Щербаков M. #., Труды Московского мединститута, 61, 197 (1968);

Chem.

Abstr., 71, 129123 (1969).

147. Taylor I. S., J. Chromatogr., 37, 120 (1968).

148. Teicher G., Handbuch der Phototechnik. VEB Photokinoverlag, Halle, 1963.

149. Tucker B. V., Huston B. J., J. Chromatogr., 42, 119 (1969).

150. Turina S., Soljic Z., Marjanovic V., J. Chromatogr., 39, 81 (1969).

151. Ulrych 5., Holdovd L, Chromatogr., 43, 268 (1969).

152. Vasileva В., Tseslyak I., Antibiotiki, 10, 877 (1965).

153. Wagman G. #., Bailey J. V., J. Chromatogr., 41, 263 (1969).

154. Wagner #., Horhammer L., Macek K-, J. Chromatogr., 31, 455 (1967).

155. Waksmundski A., Rozylo J. K-, Annual. Univ. Marie Curie-Sklodowskej, Lub­ lin, Sect. A., 20, 93 (1965).

156. Waksmundski A., Rozylo J. K-, Chem. Anal. (Warszawa), 11, 101 (1966).

157. Waksmundski A., Rozylo J. K-, Chem. Anal. (Warszawa), 15, 747 (1970).

158. Waksmundski A., Rozylo J. K-, J. Chromatogr., 49, 313 (1970).

89 Общая часть 159. Waldi D., Schnackerz K-, Munter F., J. Chromatogr., 6, 61 (1961).

160. Walker B. L., J. Chromatogr., 56, 320 (1971).

161. Walsh J. M., J. chem. Educ, 44, 294 (1967).

162. Walthier J., leney E., Gyogyszereszet, 11, 417 (1967).

163. Wang К. Т., Wu P. H., J. Chromatogr., 37, 353 (1968).

164. Wang К. Т., Wu P. H., J. Chromatogr., 38, 153 (1968).

165. Wassle W., Sandhoff K-, J. Chromatogr., 34, 357 (1968).

166. Wieland Т., Determann H., J. Chromatogr., 28, 2 (1967).

167. With Т. К, J. Chromatogr., 42, 389 (1969).

168. Wood R., Snyder F., J. Chromatogr., 21, 318 (1966).

169. Yamamoto K-, Furakawa Т., Matsukawa M., J. Fac. Educ. Hiroshima Univ., 5, 77 (1957).

170. Zawta В., Holzel W., Pharmazie, 23, 236 (1968).

171. Zawta В., Holzel W., Pharmazie, 23, 296 (1968).

172. Ziminski Т., Borowski., J. Chromatogr., 23, 480 (1966).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 173. Chmel К., J. Chromatogr., 97, 131 (1974).

174. Churacek J., Pechova H., Chovanec J., J. Chromatogr., 139, 85 (1977).

175. Cirtis T. G., Seitz W. R., J. Chromatogr., 134, 343, 513 (1977).

176. Leppard J. P., Harrison A. D. R., Nicholas J. D., J. Chrom. Sci., 14, (1976).

177. Martin N. H., J. Chem. Educ, 52, 467 (1975).

178. Okumura Т., Kadono Т., Japan Analyst., 25, 366 (1976).

179. Siouffi A. M., Guillemonat A., Guichon G., Chromatographia, 10, 651 (1977).

180. Суриков П. М., Лаб. дело,10, 629 (1975).

181. Turano P., Turner W. J., J. Chromatogr., 90, 388 (1974).

3. СПЕЦИАЛЬНЫЕ РАБОЧИЕ МЕТОДИКИ 3.1. Различные варианты элюирования хроматограмм 3.1.1. Повторное элюирование.

Элюирование на нескольких слоях Вещества с близкими значениями RF, не разделяющиеся или частично разделяющиеся при обычном способе элюирования хро матограммы, во многих случаях можно удовлетворительно разде­ лить с помощью так называемого повторного элюирования. При повторном элюировании используют системы растворителей менее полярные, чем те, которые переместили бы разделяемые вещества при одноразовом элюировании до середины хроматограммы. По­ лярность системы подбирают с учетом предполагаемого числа хро матографирований. В одних случаях бывает достаточно провести двукратное элюирование, в других — гораздо большее число. Этим приемом часто пользуются при препаративной хроматографии.

Первое элюирование проводят в менее полярной системе;

хро матограмму осторожно высушивают и элюируют снова в той же или в другой системе растворителей, причем высота подъема фрон­ та растворителя при повторном элюировании, как правило, такая же, что и при первом (после первого элюирования на хромато грамме отмечают положение фронта). Применение другой системы растворителей при повторном элюировании основано на том на­ блюдении, что растворителю иной химической природы обычно свойственна и иная разделительная способность.

Величина RF данного вещества при двукратном проявлении бумажной хроматограммы в различных растворителях с различной длиной пробега фронта определяется уравнением, предложенным Прусиковой [153] и модифицированным Старка [191]. Это урав­ нение применимо и в случае хроматографирования в тонких слоях где RF — конечное значение RF соединения после второго элюиро­ вания, Ri и R2 — величины RF этого же вещества в обеих системах, а и Ь — пробег фронта растворителя при первом и втором элюи­ ровании соответственно [191, 192].

При двукратном элюировании одним и тем же растворителем и при одинаковом пробеге фронта растворителя приведенная выше зависимость принимает упрощенный вид:

RF=2R-R\ Общая часть При м-кратном элюировании хроматограммы одним и тем же рас­ творителем где RFU— величина RF вещества после n-ного элюирования, R — ве­ личина RF после первого элюирования, a Rn~\ — величина RF пос­ ле (п—1)-ного элюирования [192]. Петрович [146] вывел другой вид зависимости и доказал универсальность ее применения Уместно упомянуть также о методе так называемого последовательного хро матографирования, предложенном Шталем [178, 186]. Последовательное хрома тографирование хорошо зарекомендовало себя при разделении сложных смесей, Рис. 23. Принцип последовательного проявления.


• проявление полярным растворителем;

б — проявление неполярным растворителем;

в последовательное проявление.

содержащих полярные и неполярные компоненты, которые нельзя разделить в одной системе растворителей. При элюировании хроматограммы с такой смесью веществ в полярной системе полярные вещества разделятся, а неполярные миг­ рируют с фронтом растворителя (рис. 23, о). При элюировании той же смеси неполярным растворителем разделятся неполярные компоненты, а полярные сое­ динения останутся на старте (рис. 23,6). При последовательном элюировании исследуемую смесь хроматографируют сначала в полярной системе, давая под­ няться фронту растворителя до середины пластинки. При этом полярные вещест­ ва разделятся, а неполярные окажутся на фронте. Хроматограмму тщательно высушивают и элюируют в неполярной системе с использованием всей длины пластинки. В этой системе разделяются неполярные соединения (на верхней по­ ловине хроматограммы), тогда как полярные компоненты смеси останутся прак­ тически на своих местах на нижней половине хроматограммы ближе к старту (рис. 23, в).

В некоторых случаях бывает целесообразно перенести один или несколько компонентов из смеси, разделенной на одной хромато грамме, на другую хроматограмму, и уже на второй хроматограмме произвести последующее элюирование. Этот прием используют тогда, когда в смеси присутствует большое количество балластных 92 Общая часть веществ, мешающих разделению исследуемых компонентов. При этом нередко вещества переносят непосредственно с одного слоя на другой, минуя стадию вымывания из первого слоя (а значит, без упаривания элюата при перенесении его на вторую хромато грамму, которое всегда связано с некоторым риском частичного разложения вещества).

На стартовой линии второй хроматографической пластинки снимают слой сорбента с площади, зависящей от площади пятна вещества на первой хромато грамме, со второй пластинки всегда рекомендуется выскребать сорбент с мень­ шей площади, обычно диаметром от 0,4 до 1,2 см, чтобы нанести вещество в достаточно концентрированном виде. На освободившуюся поверхность помещают сорбент с хроматографируемым веществом, обнаруженным на первой пластинке без изменения его химической природы. Перенесенный сорбент с веществом ув­ лажняют каплей воды и соответствующую зону уплотняют шпателем или алю­ миниевой фольгой до получения ровного слоя, соединенного с основным слоем второй пластинки [139, 195].

Описание теории повторной одномерной хроматографии содер­ жится в работе [200].

3.1.2. Непрерывное хроматографирование Эффект, подобный повторному хроматографированию, можно получить также и с помощью непрерывного хроматографирования с перетеканием. Очень часто этим методом удается разделить сме­ си, которые при обычном хроматографировании разделяются не­ удовлетворительно. При непрерывном разделении, с помощью ко­ торого, по сути дела, увеличивается путь пробега растворителя, следует работать с менее полярными системами, чем те, в которых вещество имело бы RF = 0,5 при обычном одноразовом элюирова нии. Из литературных данных известно, что в большинстве случаев хорошее разделение не очень сложных смесей веществ достигается при пути пробега 10—15 см. При большем пробеге пятна веществ вследствие диффузии расширяются и размываются. Следует, од­ нако, помнить, что при увеличении длины пробега относительное расстояние между пятнами веществ увеличивается, т. е. качество разделения улучшается, несмотря «а размывание пятен. Более того, существует целый ряд методик, позволяющих одновременно концентрировать разделенные вещества до получения компактных зон (см. ниже). Четко определить область применения метода не­ прерывного хроматографирования затруднительно. Этот метод ре­ комендуется использовать прежде всего при разделении сложных смесей веществ, которые не удается разделить на пластинках с обычной длиной пробега.

Существует несколько способов реализации непрерывного элю ирования на пластинках с закрепленным слоем. Ниже приводятся лишь наиболее простые из них. Удобнее пользоваться фирменны­ ми пластинками на гибкой фольге, которые позволяют осуществ Общая часть лять нисходящую хроматографию по аналогии с хроматографией на бумаге. При этом избыточный растворитель скапывает с ниж­ него конца слоя на дно камеры. При использовании стеклянных пластинок хроматографирование с перетеканием растворителя мож­ но осуществить в нисходящем, восходящем или горизонтальном вариантах с помощью сравнительно простых приспособлений.

Рис. 24. Непрерывное проявление по Бреннеру и Нидервайзеру с термостатом.

1 — сосуд с растворителем;

2— полоска фильтровальной бумаги;

3 — стекло, покрывающее пластинку;

4 — термостат;

5 — подставка;

6 6 — хроматографический слой;

7 — стеклянная • подставка;

пластинка.

Рис. 25. Непрерывное проявление по методу Райзерта и Шумахера.

/ — хроматограмма;

2 — полоска фильтровальной бумаги;

3 — покровное стекло;

4 — сосуд с растворителем;

5 — трубка для выравнивания давления;

6 — трубка для подачи раствори­ теля в сосуд 4;

7 — пробка.

Горизонтальный вариант элюирования в так называемой от­ крытой камере (рис. 24) описан Бреннером и Нидервайзером [27].

Растворитель подается на слой через лист фильтровальной бума­ ги. Хроматографический слой прикрывают стеклянной пластинкой, оставляя между нею и слоем сорбента очень небольшой зазор.

Край слоя сорбента, противоположный старту, остается неприкры­ тым. В этом месте происходит испарение растворителя, и слой все время впитывает новые его порции. Хюттенраух и Шульце [86] предложили модификацию описанной методики: над стеклом, за­ крывающим сверху хроматографический слой, устанавливают тер мостатирующий элемент, предупреждающий конденсацию раство­ рителя на внутренней поверхности покровного стекла;

это предот­ вращает возможные нарушения при элюировании (рис. 24). Ка­ меру для непрерывного проявления по Бреннеру и Нидервайзеру производит фирма Desaga под названием BN-камера. Вариант 94 Общая часть горизонтального элюирования описан также в работе Тилеманна [275].

Непрерывное разделение нисходящим способом можно реали­ зовать по методу, предложенному Райзертом и Шумахером [157] (рис. 25). Аналогичное устройство было использовано ранее Ми стрюковым [133] при непрерывном элюировании хроматограмм с незакрепленным слоем. Для подачи растворителя служит полоска /Ч Рис. 26. Приспособление для нагревания верхней части хроматограммы.

/ — стеклянная трубка с нагревательным элементом;

2 — хроматограмма.

фильтровальной бумаги, которая прижата к краю хроматографи ческого слоя вблизи стартовой линии стеклянной пластинкой. Вто­ рой конец полоски фильтровальной бумаги опущен в резервуар с растворителем. Растворитель протекает через слой под дейст­ вием силы тяжести и скапывает с нижнего края пластинки.

Сравнительно просто осуществить непрерывное разделение вос­ ходящим способом. Непрерывность элюирования обеспечивается выпариванием растворителя из верхней части хроматографическо го слоя, которая всасывает все новые порции растворителя (ана­ логично тому, как это происходит при хроматографировании по методу Бреннера и Нидервайзера). Выпаривание растворителя обеспечивается нагреванием верхней части пластинки. В крышке камеры укреплена стеклянная трубка с нагревательной спиралью мощностью 10 Вт. Спираль включается в сеть через трансформа­ тор, позволяющий регулировать температуру трубки. Хромато грамму размещают в камере таким образом, чтобы верхняя часть ее обратной стороной опиралась о нагреваемую трубку (рис. 26) [205]. При более простом варианте крышку камеры снабжают щелью соответствующего размера. Высоту камеры подбирают с таким расчетом, чтобы верх пластинки находился над крышкой и растворитель свободно испарялся с этого участка хроматограм­ мы. В том участке хроматограммы, с которого испаряется раство­ ритель, разделенные пятна веществ концентрируются в очень ком­ пактные зоны, что способствует улучшению качества разделения [22, 203]. Поэтому этот метод используется не только для непре­ рывного хроматографирования, но и для концентрирования раз Общая часть деленных соединений в виде очень узких зон (см. разд. 3.5.6).

Крышку камеры легко сделать, скрепив куски стекла нужного раз­ мера липкой лентой так, чтобы в середине осталась свободная щель [22]. При использовании пластмассовых крышек прорезать щель тоже не составляет труда [17]. Описанный метод непрерыв­ ного разделения непригоден для работы с системами, содержащи­ ми легколетучие компоненты в меньших по отношению к основ­ ному компоненту количествах (например, смесь гексан — диэти ловый эфир с малым содержанием эфира). Всегда желательно применять системы, составленные из растворите­ лей с одинаковой летучестью, напри­ мер хлористый метилен — серный эфир [17]. Этот принцип был приме­ нен также и в работе [248], в кото­ рой были использованы стандартные пластинки размером 20X20 см в ка­ мере высотой 18,5 см.

Другой простой метод использован в работах Беннетта и Гефтманна [16] и Хауссера [79]. К верхней части Рис хроматографической пластинки при- - - Непрерывное проявле ' г -т г хроматограммы восходя ц ние крепляют проволокой или зажимами щим c o c o 6 o / c „СПОльзовани кювету, изготовленную из станиоля ем кюветы с сорбентом.

или медной пластины и заполненную сорбентом (рис. 27). Сорбент в кювете всасывает большое коли­ чество растворителя, что обеспечивает непрерывное элюирование хроматограммы. Этот метод использован в работе [251] для раз­ деления сложной смеси стероидов. Можно также работать с плас­ тинками, имеющими на краю, противоположном старту, толстый слой сорбента, который насасывает большое количество раствори­ теля [251].

Непрерывное разделение по восходящему варианту можно реа­ лизовать также следующим образом: к концу хроматографическо го слоя присоединяют полоску фильтровальной бумаги, которая выведена наружу через щель между крышкой и верхней гранью камеры [168]. В другой работе к верхней части хроматографиче ского слоя зажимами прикрепляют полоску фильтровальной бу­ маги, которую загибают через верхний край пластинки и прижи­ мают к обратной стороне хроматограммы. Фильтровальная бумага впитывает растворитель в количестве, пропорциональном своей величине [141].


Хара и Мибе [77] описали устройство для проведения непре­ рывного разделения, комбинированного с проявлением в S-камере (см. разд. 3.1.6). В работе этих авторов использовано наблюдение, что сорбция паров системы растворителей ускоряет процесс хро 96 Общая часть матографирования и предупреждает расслоение компонентов си­ стемы, которое часто наблюдается в обычных камерах. Основную часть этого устройства составляет крышка, внутренняя сторона которой покрыта фильтровальной бумагой. При этом фильтро­ вальная бумага размещается над хроматограммой на расстоянии 12—15 мм. В начале работы стеклянную крышку с фильтровальной бумагой размещают несколько ниже самой хроматограммы, по­ этому при погружении в систему растворителей сначала насыща­ ется фильтровальная бумага. Затем в систему растворителей опус Рис. 28. Непрерывное проявление хроматограммы с незакрепленным слоем с при­ менением валика.

Рис. 29. Непрерывное проявление хроматограммы с незакрепленным слоем с по­ мощью ломаной пластинки.

кают хроматографическую пластинку. При этом пространство меж­ ду слоем сорбента и прикрывающей его стеклянной пластинкой сразу насыщается парами растворителя. S-камера сверху снабжена щелью, через которую верхняя часть слоя выведена наружу. Рас­ творитель свободно испаряется с этой части пластинки.

Для проведения непрерывного элюирования хроматограмм с незакрепленным слоем также существует несколько способов. Ми стрюков [133] использовал устройство, аналогичное изображен­ ному на рис. 25. Непрерывное элюирование хроматограмм с не­ закрепленным слоем можно осуществить, насыпав на конец хро матографической пластинки избыточное количество сорбента или другого подходящего сыпучего материала. Этот валик сорбента (рис. 28) всасывает растворитель в течение времени, которое про­ порционально количеству насыпанного материала [117]. Другой, более эффективный способ состоит в применении так называемой ломаной пластинки, принцип работы которой показан на рис. [117].

Общая часть 3.1.3. Многомерное хроматографирование При двумерном разделении в левый угол квадратной пластинки размером, например, 20X20 см наносят смесь веществ;

хромато грамму элюируют, высушивают и повторно элюируют в той же или в другой системе растворителей в направлении, перпендику­ лярном направлению первого проявления. Двумерная хроматогра­ фия широко используется для разделения сложных смесей веществ (аминокислоты, пептиды). Иногда между первым и вторым раз­ делениями смесь веществ подвергают химической или физической х х х х Рис. 30. Двумерное проявление четырех различных образцов на одной хрома тографической пластинке.

/ — хроматографический слой;

2 — полиэтиленовая подставка;

3 — растворитель.

обработке. Описан вариант двумерной хроматографии четырех смесей на одной хроматограмме. В некоторых случаях это помо­ гает сэкономить время и материал. Квадратный слой продольными царапинами делят на четыре равные части. В нижний левый угол каждой из них наносят различные смеси веществ. После элюиро вания в одном направлении хроматограмму элюируют во втором направлении с использованием специальной пористой полиэтиле­ новой подставки, на которую хроматограмму укладывают слоем вниз. Подставка насасывает растворитель и подводит его к слою.

Ход работы изображен на рис. 30 [169].

На одной хроматограмме можно осуществить и трехмерное элюирование, причем хроматограмму каждый раз поворачивают на 90°. Этот метод был использован, например, для количественной оценки содержания одного вещества в сложной смеси. Поскольку все три элюирования проводятся на одной хроматограмме, потерь вещества не происходит. Подробное описание этого метода выхо­ дит, однако, за рамки этой главы [50].

Специальную технику разделения применили другие авторы [241] для отделения неполярных балластных веществ при анализе малых количеств кортикостерона. Описанный ниже метод, безус­ ловно, применим и для анализа других типов веществ.

7— 98. Общая часть Хроматографирование проводили в S-камере на пластинках размером 20X20 см, причем в правой части пластинки хроматографировали стандартный образец кортикостерона. Сначала хроматограмму два раза элюировали в мало полярной системе в одном направлении. При этом балластные вещества группи­ ровались на фронте растворителя. Контроль подвижности кортикостерона осу­ ществляли следующим образом: всю пластинку, за исключением правой части, куда был нанесен стандартный раствор кортикостерона, закрывали пластиной из плексигласа;

кортикостерон обнаруживали парами иода. Затем удаляли си ликагель с той части слоя, в которой не было кортикостерона, т. е. от фронта растворителя до предполагаемого положения кортикостерона (установленного с помощью описанного выше обнаружения стандартного образца). Вместо удален­ ного силикагеля к хроматограмме прикладывали полоску фильтровальной бума­ ги, предварительно смоченную растворителем, поворачивали хроматограмму на 180° и элюировали в направлении, противоположном двум первым (растворитель проникает в слой силикагеля через фильтровальную бумагу). После обнаруже­ ния хроматограммы можно увидеть кортикостерон, очищенный от балластных веществ, и произвести его количественное определение.

3.1.4. Элюирование хроматограмм с клинообразными вырезами Смесь веществ с близкими значениями RF иногда удается раз­ делить, применив следующий прием: часть сорбента между стар­ товыми пятнами удаляют с пластинки, как показано на рис. 31.

При этом вещества, нанесенные на старт в виде круглого пятна, в процессе хромато графирования движутся в виде полос, сна­ чала полукруглых, а затем все более пря­ мых. Сорбент с пластинки можно удалять шаблоном из пластмассы, однако при не­ большом навыке участки требуемой вели­ чины можно соскребать шпателем [181].

3.1.5. Градиентное хроматографирование Рис. 31. Проявление хро­ Разделение сложных смесей веществ матограмм с клинооб­ можно значительно улучшить, добавляя разными вырезами.

полярный растворитель к менее полярной системе в процессе элюирования хромато­ граммы. Этот прием аналогичен градиентному элюированию в ко­ лоночной хроматографии, когда при постепенном увеличении по­ лярности системы из колонки вымываются все более полярные компоненты разделяемой смеси. Наиболее простое аппаратурное оформление градиентного элюирования приведено в работе [163]:

полярный компонент прикапывали к системе по трубке, пропущен­ ной сквозь крышку камеры, при постоянном перемешивании с по­ мощью магнитной мешалки. Другое не менее простое устройство, использованное в работе [217], изображено на рис. 32. Цилиндри Общая часть ческая камера в нижней части снабжена ситом или перфорирован­ ной стеклянной подставкой. В стенку камеры под подставкой вплавлен капилляр, по которому подводится полярный раствори­ тель из бюретки. Сливная трубка обеспечивает постоянство уров­ ня системы растворителей. Система перемешивается магнитной мешалкой. Чтобы при перемешивании не повредить слой сорбен­ та, нижний конец пластинки, погруженный в систему растворите­ лей, обертывают полоской фильтровальной бумаги.

3.1.6. S-камеры Как уже было сказано, при хромато графировании на закрепленных слоях в некоторых системах растворителей вели­ чины RF одних и тех же веществ по кра­ ям слоя выше, чем в середине. Это так называемый краевой эффект возникает из-за недостаточного насыщения объема хроматографической камеры парами рас­ УУМ/ШШЛ творителя. Насыщение камеры обычны­ ми приемами, используемыми в бумаж­ ной хроматографии, приводит к хорошим результатам (разд. 2.5). Кроме того, ча­ Рис. 32. Устройство для гра­ сто применяют устройство, сводящее к 1 — сито или проявления.

диентного перфорированная минимуму объем камеры;

при этом ма­ стеклянная подставка;

— 2сливная;

— маг­ нитная мешалка;

лый объем очень быстро насыщается па­ трубка;

4 — капилляр.

рами растворителя, растворитель не испаряется из слоя и поэтому краевой эффект и другие отклонения в подвижностях хроматогра фируемых веществ не имеют места.

Хроматография «без камеры» осуществляется очень просто..

К хроматографической пластинке прикладывают рамку подходя­ щего размера. Рамку прикрывают стеклянной пластинкой того же формата, что и хроматографическая пластинка. Рамка, кото­ рую легко сделать из склеенных стеклянных полосок [83], из изо­ гнутой стеклянной трубки или палочки [46], проволоки из нержа­ веющей стали [215] или из тефлона [97], обеспечивает очень небольшой зазор между хроматографическим слоем и стеклянной:

крышкой и с трех сторон ограничивает образовавшуюся полость.

Систему из обеих пластинок с рамкой между ними скрепляют за­ жимами и ставят в ванночку с растворителем. Растворитель под­ нимается по слою сорбента, и пространство между слоем и при­ крывающей его стеклянной пластинкой быстро насыщается парами растворителя. Соответствующее оборудование выпускает фирма Desaga и Camag под названием S-камеры, или камеры типа «Сэнд­ вич» (Sandwich-tank). Чертеж этого приспособления приведен нж рис. 33.

7* Общая часть Процессы проявления в S-камере и в камере обычного типа различаются между собой принципиально. В S-камере значения RF веществ обычно выше, что объясняется запаздыванием фронта растворителя по отношению к разделяемым веществам, перемещающимся по слою. Это происходит потому, что в S-камере пространство между хроматографическим слоем и крышкой предварительно не насыщается парами растворителя;

оно насыщается лишь по мере продвижения системы растворителей при элюировании. Кроме того, в S-камере в большей мере, чем в обычных хроматографических камерах, имеет место хроматографи Рис. 33. Схема S-камеры.

/ — стеклянная пластинка;

2 — хроматографический слой;

3 — рамка;

4 — покровное стекло;

5 ~ ванночка с растворителем, снабженная продольной щелью для введения хроматограммы с рамкой и покровным стеклом;

6 — зажимы.

рование компонентов системы растворителей. Авторы работы [152] изучали зависимость разделения веществ от величины зазора между хроматограммои и стеклянной крышкой в пределах от 1 до 16 мм. В случае применения неполяр­ ных растворителей величина зазора не сказывалась на разделении веществ. Для систем с небольшим содержанием полярного компонента оптимальным оказался минимальный зазор. При использовании систем с большим содержанием поляр­ ного компонента оптимальное разделение веществ имело место при несколько большем зазоре, так как при очень малом зазоре на хроматограмме образовы­ валось несколько фронтов растворителя. Эти результаты подтверждены другими авторами [62].

Для проявления фирменных пластинок на гибкой фольге при­ меняют S-камеры с крышкой, имеющей гофрированную поверх­ ность. Это предохраняет слои от коробления [154]. Применяются также S-камеры, позволяющие проявлять несколько хроматограмм одновременно [10, 174]. Желобок для растворителя можно изго­ товить из поливинилхлоридной трубки. Кусок трубки затыкают с обоих концов корковыми пробками и прорезают в нем щель нуж Общая часть ного размера для установки S-камеры [10]. Описано также од­ новременное элюирование одной хроматограммы в пяти различ­ ных системах растворителей;

хроматографическая камера разде­ лена на пять частей, каждая из которых снабжена своей системой растворителей, подаваемой на хроматограмму посредством полос­ ки фильтровальной бумаги. Хроматограмму разграничивают на 5 полос одинаковой ширины с помощью какого-нибудь острого предмета. После нанесения образца смеси на стартовую линию каждой полосы хроматограмму прикрывают специальной крыш­ кой с шестью продольными полипропиленовыми барьерчиками вы­ сотой 1 мм, точно совпадающими с канавками в слое сорбента.

При этом образуется 5 закрытых полостей [165].

Несмотря на то что в большинстве работ хроматографию ре­ комендуется проводить в насыщенных растворителем камерах, имеются сторонники элюирования хроматограмм в обычных не­ насыщенных камерах [52]. Миграция пятен зависит от количества паров полярного компонента системы растворителей, адсорбиро­ ванного сухим сорбентом. Разделение в ненасыщенных камерах начинается сразу после помещения хроматограммы в раствори­ тель. Адсорбция растворителя на частицах сорбента требует оп­ ределенного времени. Поэтому в начале проявления она невелика, а с течением времени увеличивается. По мере продвижения рас­ творителя вверх по слою остающийся несмоченным участок хро матографической пластинки все в большей степени насыщается полярным компонентом системы. При этом формируется положи­ тельный градиент полярности от старта к фронту, способствующий улучшению разделения веществ.

Вместо обычных камер и S-камер для элюирования хромато­ грамм можно использовать мешочки из полиэфирной фольги [69].

Эти мешочки химически инертны, прозрачны и устойчивы к дей­ ствию органических растворителей. Этот способ пригоден и для хроматографирования радиоактивных веществ. Приспособление со­ стоит из мешочков разной величины, держателей пластинок (из нержавеющей стали), полиэфирной липкой ленты, специальных шипцов и штатива. Растворитель наливают непосредственно в мешочек или в желобок, имеющийся в держателе пластинок, и всю конструкцию укрепляют на штативе. Верхний конец мешочка за­ клеивают липкой лентой или заваривают нагретыми щипцами.

3.1.7. Круговая хроматография Метод круговой хроматографии хорошо известен из бумажной хроматографии. С помощью этого метода часто удается неплохо разделить смеси, которые при обычном линейном элюировании де­ лятся с трудом. При этом используют квадратные или круглые хроматографические пластинки. Вокруг их центра по окружности 102 Общая часть диаметром 1—2 см в три или более точки наносят смесь веществ, а в центр слоя подводят растворитель. Вещества, нанесенные на старт в виде круглого пятна, мигрируют в слое сорбента в виде полосок, сначала коротких, а затем все более удлиняющихся. По­ лоски, в начале разделения узкие, по мере продвижения по плас­ тинке расширяются вследствие диффузии. Однако, как правило, это не сказывается отрицательно на качестве разделения. Сузить Е Рис. 34. Устройство для проведения круговой хроматографии.

1 — хроматограмма;

2 — растворитель;

3 — фитиль, укрепленный проволокой.

Рис. 35. Круговая хроматография на гибкой фольге.

/ _ крышка с отверстием;

2 — фольга с хроматографическим слоем;

3 — вторая крышка;

4 — часовое стекло;

5 — фитиль.

полосы веществ можно повторным элюированием или упариванием растворителя с края хроматограммы. Если исследуемый образец нанести в центр хроматограммы, вещества будут перемещаться по пластинке в виде концентрических кругов.

Самый простой вариант круговой хроматографии изображен на рис. 34. На чашку Петри помещают хроматограмму слоем вниз, а растворитель подводят со дна чашки с помощью фитилька, об­ мотанного проволокой [181]. Простое устройство для проведения круговой хроматографии описано также в работе [230]. Круговую хроматографию на закрепленных слоях можно осуществить также, используя методики, применяемые в бумажной хроматографии.

Устройство для проведения круговой хроматографии на гибкой фольге показано на рис. 35 [223].

Особым вариантом круговой хроматографии является «центро­ стремительная» хроматография. При использовании этого метода, пригодного прежде всего для препаративных работ, раствор смеси Общая часть веществ с помощью специального устройства наносят на внешнюю круговую линию старта. При разделении растворитель передвига­ ется от краев хроматограммы к ее центру, где разделенные ве­ щества концентрируются. Длинная линия старта удобна при ра­ боте с большим количеством разделяемой смеси. Разделенные ве­ щества концентрируются в центре слоя в малом объеме раствори­ теля. В центре хроматографической пластинки можно сделать отверстие, через которое вытекающие фракции разделяемой смеси можно отбирать в приготовленные пробирки [227, 235].

3.1.8. Хроматография в гравитационном поле Тонкослойные хроматограммы по аналогии с бумажными хро матограммами можно элюировать в радиальном направлении в гравитационном поле, создаваемом центрифугой. Этот метод ис­ пользуется очень редко, хотя разделение занимает лишь несколько минут. Экономия времени при элюировании тонкослойных хрома тограмм таким способом не очень велика, а затраты на оборудо­ вание значительны.

Для проведения ТСХ в гравитационном поле используют то же самое оборудование, что и в случае бумажной хроматографии.

Для этой цели, например, можно использовать алюминиевую дис­ кообразную пластинку, покрытую слоем силикагеля. Пластинку вращают со скоростью 500 об/мин, а подвижную фазу подают к центру хроматограммы [51]. В другой работе использовали круг­ лые стеклянные пластинки диаметром 20 см, вырезанные из пря­ моугольного куска стекла. Вырезанный диск и обрезки стекла прикладывали друг к другу и заливали суспензией сорбента. Круг­ лую пластинку с помощью зажимов закрепляли в специальном устройстве. При умеренном вращении из центра хроматограммы удаляли небольшое количество сорбента и заменяли его суспензией из молотого стекла, целлюлозы и гипса. Слою давали высохнуть, а затем хроматограмму элюировали, подавая растворитель в центр посредством капиллярной трубки, причем расход подвижной фазы регулировали микронасосом. Слой сорбента предварительно на­ сыщали парами системы растворителей [193].

3.1.9. Некоторые новейшие методики элюирования В последнее время было предложено несколько новых методик, улучшающих разделительную способность тонкослойных хромато грамм, но требующих применения более дорогого оборудования.

Хроматография на барабане* позволяет получить быстрое и эффективное разделение смеси веществ. Как видно из рис. 36, при неизменном расстоянии между поверхностью растворителя и фрон­ том растворителя на хроматограмме (б) достигается более четкое Общая часть • —~ • X X Рис. 36. Схема хроматографического разделения на цилиндрической поверхности (барабане).

а — обычное разделение;

б — разделение при постоянном расстоянии между поверхностью растворителя и фронтом растворителя на хроматограмме;

в — хроматографирование на ци­ линдре.

разделение веществ, чем при обычном способе, когда уровень рас­ творителя остается на одной и той же высоте (а). При таком ва­ рианте готовую пластинку на гибкой основе сгибают в цилиндр и затем с помощью специального устройства вращают с такой ско­ ростью, чтобы расстояние между поверхностью растворителя и его фронтом оставалось постоянным (в) [166].

Другой весьма эффективной методикой, требующей применения специального оборудования, является трехкамерная хроматогра­ фия*. Эта методика позволяет значительно повысить количество теоретических тарелок в единицу времени. Ее схема приведена на рис. 37. Хроматографирование осуществляют на длинной по­ лоске фольги с нанесенным на нее тонким слоем сорбента. Устрой­ ство для проявления состоит из трех стеклянных камер. Разделение смеси происходит в средней, главной, камере;

две боковые камеры предназначены для испарения растворителя из слоя. Через сис­ тему камер с помощью валиков, приводимых в движение электро­ мотором, перемещают фольгу с хроматографическим слоем. Ско­ рость перемещения регулируется. После нанесения образца раз­ деляемой смеси на хроматограмму старт помещают в среднюю камеру, в которую одновременно подают растворитель. Скорость * Методы «хроматографии на барабане» и «трехкамерной хроматографии»



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 19 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.