авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 || 13 | 14 |   ...   | 19 |

«Doc. RNDr. PhMr. Magda SAR50NOVA, DrSc. RNDr. Vladimir SCHWARZ, CSc. RNDr. Cestmir MICHALEC A kolektiv CHROMATOGRAFIA NA TENKYCH VRSTVACH VO ...»

-- [ Страница 12 ] --

О мешающем влиянии никотина при открытии морфина в моче курящих мы уже упоминали в разделе опийных алкалоидов. Ал калоиды табака можно разделять двумерной хроматографией на силикагеле в системах 1) хлороформ — метанол (5:1) и 2) хлороформ — эфир — тетрагидрофуран ( 8 0 : 1 5 : 5 ). Так разде ляли никотин, N-окись никотина, ж-никотин, норникотин, анаба зин, миосцин, никотирин и др. Для обнаружения применяли ре актив Драгендорфа и опрыскивание раствором бензидина и экспо зицию в парах бромциана '[53].

Успешно удалось провести разделение индольных алкалоидов группы гармана на силикагеле;

удобными оказались системы бензол — этилацетат (9:1) и гексан — ацетон (6:4) [62] или бензол — хлороформ — абсолютный этанол ( 4 : 1 : 1 ) [136]. Опры скивание раствором ванилина в серной кислоте дает пятна разной окраски [62]. Описано также флуориметрическое определение гармана непосредственно на пластинке при анализе некоторых настоек [136].

Эфедриновые алкалоиды разделяли на силикагеле или окиси алюминия в системе пропанол-2 — этанол (100:6) [160]. Мессер шмид [137] исследовал количественное определение берберина в растительном сырье.

Измельченное сырье (100 г) четырежды экстрагируют! порциями по 15 мл 80%-ного метанола (15-минутное кипячение с обратным холодильником). После отфильтровывания раствор доливают до общего объема 100 мл и наносят на пластинку. Хроматографируют на силикагеле в системе бутанол — уксусная кис лота — вода ( 7 : 1 : 2 ) в S-образной камере. Собственно определение проводят флуориметрическим методом.

Фельдгейм и сотр. '[344] описали количественное, а Тилеман [345]— полу количественное определение кофеина. Борисов и сотр. [343] исследовали сте роидные алкалоиды семейства Solanaceae.

376 Специальная часть 5.6.1.10. Анализ смесей алкалоидов О систематическом анализе по Вальди и сотр. [255] мы уже упоминали выше. Хашми и сотр. [71] применяли для анализа сложных смесей алкалоидов различного происхождения способ, схема которого приводится ниже.

Алкалоиды в группах делили методом круговой хроматографии на силикагеле в системах хлороформ — этанол ( 9 : 1 и 8,5:1,5).

Для обнаружения пользовались иодоплатинатом калия (Д109), сульфатом церия (Д180), разбавленной серной кислотой (2 мл концентрированной серной кислоты в 24 мл 96%-ного этанола) или смесью желтой кровяной соли и хлорида железа(III) (Д 101).

Смесь алкалоидов -f- вода растворимая часть I \ труппа I нерастворимый остаток + бруцин (частично), пилокарпин, + хлороформ хинин, стрихнин, никотин растворимая часть группа II нерастворимый остаток атропин, бруцин (частично), группа III цинхокаин, наркотин, аймалин, морфин кокаин, папаверин Другой способ систематического анализа смеси алкалоидов описан в работе Нуарфализа и Мееса [297]. Они хроматографи ровали на силикагеле G, пользуясь рядом систем. Для предвари тельного ориентировочного разделения неизвестной смеси веществ они пользовались системой С1—хлороформ — метанол — ледяная уксусная кислота (47,5:47,5:5). Вещества, значения hRF которых превышали 75, они делили затем в системах С2— ацетон — 25%-ный аммиак (99:1) и СЗ — хлороформ — метанол ( 9 : 1 ). Ве щества с hRF в интервале 50—75 сначала хроматографировали в системе С2, а затем в системах С4 — хлороформ — метанол — 25%-ный аммиак (47,5:47,5:5), С5—метанол и С6—хлоро ф о р м — метанол ( 1 : 1 ). Вещества со значениями hRF ниже •сначала делили в системе С1;

вещества, которые имели при этом hRF около 75, сначала делили в системе С2, затем С1;

вещества с hRF 30—75 хроматографировали в системе С7 — метанол — :25%-ный аммиак (99: 1), далее в системе С4 и затем в одной из систем С2, С7 и С1. Значения hRF в разных системах позволяют надежно определять отдельные вещества.

Специальная часть Несколько важных работ касаются рутинного токсикологиче ского анализа, а также анализа контрабандных наркотиков.

Идентификацию наркотиков можно осуществлять на силикагеле в системе хлороформ — эфир — метанол—28%-ный аммиак (75:25:5:1). Для идентификации также служат различные реактивы, например хлороплатинат калия, л-диметиламинобензаль дегид (Д39), смесь хлорной ртути и дифенилкарбазона (Д92), формальдегид в серной кислоте (Д 134) и иод [244]. При рутин ном анализе мочи на алкалоиды (согласно автору, возможно про вести до 500 определений, главным образом алкалоидов опия, в день) поступают следующим образом [145].

25 мл пробы мочи помещают в центрифужную пробирку вместимостью 50 мл и мочу подщелачивают до рН 10—11. К смеси прибавляют 5 мл фосфата калия и 12 мл 25%-ного раствора этанола в хлороформе. Смесь взбалтывают 10 мин, снова добавляют 12 мл 25%-ного раствора этанола в хлороформе и взбалтывают еще 1 мин;

если необходимо, центрифугируют. Водный слой отделяют, к орга ническому слою прибавляют 100 мкл 6 н. НС1 в этаноле и после отфильтровы вания фильтрат делят на две равные части А и Б. Обе части выпаривают досуха на водяной бане при температуре 75 °С в токе воздуха. Остатки после выпари вания растворяют в 25—50 мкл 6 н. НС1 и наносят на пластинку. Для хрома тографирования на силикагеле применяют системы хлороформ—метанол—амми ак ( 9 0 : 1 0 : 1 ) или этилацетат — метанол — вода — аммиак ( 8 5 : 1 0 : 3 : 1 ). Часть А просматривают в ультрафиолетовом свете, затем обнаруживают 0,4%-ным раствором нингидрина и слой облучают длинноволновым ультрафиолетовым све том. Затем поочередно опрыскивают 0,5%-ной серной кислотой, 1%-ным рас твором иода в метаноле, 0,5%-ной серной кислотой и иодоплатинатом калия.

Часть Б исследуют ори ультрафиолетовом освещении, опрыскивают 5%-ной серной кислотой и также облучают ультрафиолетовым светом;

затем обнару живают 5%-ной серной кислотой (слой просматривают в УФ-освещении), иодо платинатом калия и аммиачным раствором азотнокислого серебра.

В той же работе приводится и другой способ 15 мл мочи смешивают с 2,3 н. НС1 и гидролизуют в автоклаве при темпе ратуре 120°С в течение 30 мин. По охлаждении и фильтровании фильтрат про мывают 15 мл этилацетата (взбалтывание 5 мин), верхний слой отделяют, вод ный слой подщелачивают до рН 9, прибавляют 5 мл 2,3 М К2НРО4 (рН 9,3) и 15 мл смеси хлороформ — пропанол-2 ( 3 : 1 ). Смесь взбалтывают в течение 10 мин, центрифугируют, водный слой отделяют, органический слой выпаривают досуха при температуре 85 °С в токе воздуха. Остаток растворяют в метаноле и наносят на пластинку. Для элюирования пользуются смесью этилацетат — ме танол— аммиак ( 8 5 : 1 0 : 1 0 ). Значения hRp для морфина, кодеина, хинина и никотина составляют 40, 75, 88 и 34 соответственно.

Описание рутинной идентификации алкалоидов приведено в следующем работе Мулэ и сотр. [146] 25 мл мочи фильтруют через колонку 1,1 г амберлита XAD-Z, элюируют 15 мл смеси хлороформ — пропанол-2 (3:1) и элюат извлекают 1 мл насыщен ного раствора бикарбоната натрия. Отделенный органический слой выпаривают досуха на водяной бане в токе воздуха, остаток растворяют в метаноле и на носят на пластинку. Хроматографируют в системе этилацетат — метанол — вода— аммиак ( 8 5 : 1 0 : 3 : 1 ) или (при пользовании готовыми пластинками) хлоро форм— метанол — аммиак ( 9 0 : 1 0 : 1 ). С помощью нескольких реактивов таким образом можно очень точно идентифицировать отдельные вещества.

25- 378 Специальная часть Монтальво и сотр. [143] также занимались идентификацией различных веществ в моче. Вещества адсорбировали на ионите (resin-paper), экстрагировали при определенном рН (барбитура ты при рН 2,2, алкалоиды — 9,3, амфетамины—11) органическим растворителем и наносили на пластинку. Хинин после опрыскива ния серной кислотой давал флуоресцирующее пятно, морфин реагировал с иодоплатинатом с образованием сине-зеленого ок рашивания, интенсивность которого возрастала со временем;

по сле опрыскивания азотнокислым серебром пятно исчезало, а после нагревания появлялось черное пятно. Метадон окрашива ется в розовый цвет (окраска усиливается с течением времени), кодеин образует пурпурное пятно. Необходимо, однако, помнить, что в области значений RF кодеина могут мешать, например, ме таболиты хинина и другие вещества, также дающие пурпурное окрашивание.

При анализе мочи и других биологических материалов извле кается целый ряд балластных веществ, так что хроматография хотя и пригодна для грубого разделения веществ, оказывается недостаточной для их идентификации. Некоторые авторы [33], рекомендуют поступать следующим образом.

Подкисленную мочу экстрагируют эфиром, затем подщелачивают и экстра гируют хлороформом. Снова подкисляют, гидролизуют и после повторного под щелачивания экстрагируют смесью хлороформа и пропанола-2. Обе щелочные вытяжки хроматографируют отдельно на силикагеле в системе этилацетат — ме танол— аммиак (85: 10:5) или этанол — ледяная уксусная кислота — вода (24:

: 12:4). После высушивания опрыскивают 10%-ной уксусной кислотой, очерчи вают пятна, наблюдаемые в ультрафиолетовом свете, и обнаруживают иодопла тинатом калия. Спустя 1 ч пятна соскребают и исследуют далее (морфин мож но наблюдать еще через 18 ч при комнатной температуре). Для идентификации веществ применяют специальные цветные реакции или микрокристаллографичес кое исследование.

Дебакер и сотр. [39] искали удобный хроматографический способ контроля допинга у спортсменов и скаковых лошадей, основанный на экстракции алкалоидов из слюны, крови или мочи.

Слюна наименее пригодна для этой цели, так как из 12 исследо ванных алкалоидов не удалось обнаружить 7. При анализе крови можно было обнаружить 6 и при анализе мочи 9 веществ. Ни в одном случае приведенными в работе способами нельзя было идентифицировать героин, морфин и папаверин.

Экстракция мочи. В 4 пробирки наливают пипеткой по 25 мл мочи. Содер жимое двух пробирок подщелачивают до рН 9—10 и трижды экстрагируют по 5 мл хлороформа или эфира (в течение 20 мин). Содержимое двух других про бирок подкисляют до рН 2 и экстрагируют подобным же образом. После цент рифугирования отбирают органические слои, высушивают и выпаривают. Хро матографируют на силикагеле в системе гексан — ацетон — диэтиламин ( 6 : 3 :

: 1). Значения hRr: бруцина 16, кофеина 44, кокаина 86, кодеина 45, героина 42,.

морфина 12, папаверина 50, хинина 37, стрихнина 36, спартеина 96, лобелина 65, никетамида (кордиамина) 56.

Специальная часть Быстрый анализ контрабандных наркотиков описан в статье Вудфорда [319]. Рериг и сотр. [306] предостерегают, что хотя токсикологический анализ наркотиков в моче методом ТСХ очень чувствителен, он может давать ошибочные результаты, так что надежнее определять вещества в моче методом ГХ. Анализом наркотиков в моче занимались также Джейн и сотр. [288]. Для быстрого анализа мочи рекомендуются специальные пластинки токси-грам (Toxi-Gram) [275].

5.6.2. Аминокислоты и белковые гидролизаты Разделением аминокислот методом ТСХ занимались многие ученые. Этим же способом успешно разделяли белковые гидро лизаты.

Сорбенты. Аминокислоты подвергали делению на многих сор бентах. Некоторые исследователи [24, 26, 51, 55, ПО, 141, 155, 165, 198], основываясь на работе Бреннера, Нидервизера и Па таки [25], пользовались в качестве сорбента силикагелем. См.

также работы [350, 351].

Мучлер и сотр. [148] работали на силикагеле, обработанном фосфатным буфером [0,2 М КН 2 РО 4 —0,2 М Na 2 HPO 4 ( 1 : 1 ) ], другие исследователи — на комбинированных слоях силикагеля и окиси алюминия [247] или на окиси алюминия со связующим [181]. Для разделения аминокислот применяли также незакреп ленную окись алюминия [144, 181], кремнезем [42, 81], целлю лозу [24, 38, 73, ЛОЗ, 148, 156, 170], ионообменные смолы [100, 178, 248, 262, 264], а также смешанные слои ионитов и целлюло зы [31, 32, 115], или силикагеля и целлюлозы [240], или, нако нец, микропластинки с силикагелем, целлюлозой, фосфорилиро ванной целлюлозой и ДЭАЭ-целлюлозой [250], а также слоями полиамида [354]. Белковые гидролизаты подвергали разделению двумерной хроматографией на слоях силикагеля ([293].

Системы растворителей. При разделении аминокислот на си ликагеле, обработанном буфером, пользовались двумерным раз делением. В первом направлении элюировали 70%-ным этанолом, во втором — этанолом, насыщенным аммиаком [148]. Из одно фазных систем для хроматографии аминокислот оказались удоб ными системы, содержащие воду;

из органических веществ — сильнополярные растворители, например низшие алифатические спирты, ацетон и т. д. На практике испытаны системы 96%-ный этанол — вода (7:3) и н-пропанол — вода ( 7 : 3 ). Удобна также система фенол — вода (75 : 25 по массе), соответственно н-пропа нол— 34%-ный аммиак ( 7 : 3 ). Применяли также системы метил этилкетон — пиридин — вода — уксусная кислота (75 : 15: 15 : 2) и хлороформ — метанол—17%-ный аммиак ( 4 : 4 : 2 ). Некоторые 25* 380 Специальная часть работали с системами: н-бутанол— уксусная кислота — вода (65:13:22) [10], хлороформ — метанол ( 9 : 1 ), хлороформ — ди этиламин (9:1), изобутанол — пропанол-2—муравьиная кисло т а — вода ( 1 5 : 1 5 : 4 : 1 0 ), бензол — гексан — уксусная кислота ( 2 : 2 : 1 ), циклогексан — хлороформ—диэтиламин ( 5 : 4 : 1 ) и ме танол—25%-ный аммиак (99:1) [51].

При делении аминокислот на слоях целлюлозы применяли дву кратное хроматографирование системой ацетон — н-бутанол — ук сусная кислота— вода (35:35:10:20) [141] или последовательно двумя разными системами: пиридин — диоксан — 25% -ный амми а к — вода (35:35:15:15) и н-бутанол — ацетон — уксусная кис лота— вода ( 3 5 : 3 5 : 7 : 2 3 ) [190]. Хроматографическое расщеп ление рацемических аминокислот на асимметрических сорбентах описано в статье Песлякаса и сотр. [353].

Бреннер и сотр. [24] разделяли смесь аминокислот на сили кагеле с гипсом как связующим двумерным хроматографировани ем;

в первом направлении в системе к-бутанол — уксусная кисло т а — вода ( 4 : 1 : 5 ), во втором — в системе фенол — вода ( 6 : 4 ).

Другие авторы комбинировали для незакрепленных слоев окиси алюминия системы ацетон — метанол — вода ( 8 : 2 : 1 ), метил этилкетон — вода (15:13) и ацетон — гептан (1:14), а также хлороформ, насыщенный аммиаком при 20 °С, хлороформ, насы щенный аммиаком — 96%-ный этанол (30:1) и хлороформ, насыщенный бензолом [140, 144, 181]. При разделении аминокис лот на слоях целлюлозы применяли систему к-бутанол — уксус ная кислота — вода ( 4 : 1 : 5 ), иногда системы метилэтилкетон"— вода (15 : 70), к-пропанол — вода (7 : 3), метанол — вода — пиридин (80:20:4), н-бутанол — муравьиная кислота — вода (75:15:10), к-пропанол — 8,8%-ный аммиак (4:1) и этанол — н-бутанол — во да—пропионовая кислота ( 1 0 : 1 0 : 5 : 2 ). При делении на ионитах элюировали водой или 0,05 н. аммиаком. Для деления аминокислот в щелочной среде на силикагеле, обработанном 0,3%-ным борат ным буфером, применяли одномерный электрофорез [163]. Раз деление дансильных производных аминокислот описано в статьях [349,356,357].

Обнаружение. После разделения на силикагеле и высушивания хроматограммы при температуре 110°С аминокислоты обнаружи вали 0,2—0,5%-ным раствором нингидрина [51, 148], раствором нингидрина в этаноле [100] (табл. 63), ацетоне [207] или в к-бу таноле (2%-ный раствор (Д 152) [251]. Фонад и Боктор [55J предложили новый реактив для обнаружения триптофана, индола и 3-ацетилиндоловой кислоты.

При обнаружении аминокислот на окиси алюминия пользова лись ультрафиолетовым светом (слои с флуоресцентным инди катором) [181], парами иода [140] или раствором нингидрина с уксусной кислотой [144].

Специальная часть Таблица Предел чувствительности (в мкг) реакции 18 аминокислот с нингидрином на слоях силикагеля G [100] Одномерная Двумерная хроматограмма хроматограмма Аминокислота [м-пропанол—вода смеси аминокислот (70:30)] Алании 0, 0, (5-Аланин 0, 0, Аргинин 0,01 0, Аспарагин 0,1 0, Цистеинсульфат 0,01 0, Глутаминовая кислота 0,04 0, Гистидин 0,05 0, Оксипролин 0,05 0, Лейцин 0,01 0, Лизин 0,005 0, Метионин 0,01 0, Фенилаланин 0,05 0, Пролин 0, 0, Серии 0,008 0, Треонин 0,05 0, Тирозин 0,03 0, Валин 0,01 0, Триптофан 0,05 0, На слоях целлюлозы аминокислоты обнаруживали раствором нингидрина в метаноле с добавлением коллидина (Д154) или реактивом Эрлиха (Д38). Опрысканные хроматограммы нагре вали в течение 45 мин при температуре 60 °С [73]. Другие авторы [222] для обнаружения треонина и аллотреонина применяли 4%-ный раствор нингидрина в пропаноле-2 с 5% 2,4,6-колли дина (Д154). При обнаружении этим реактивом окрашивание появляется через несколько часов, иногда даже на другой день.

Обнаружение, однако, можно ускорить, если пластинку сначала нагревать при 80 °С в течение 20 мин, затем опрыскать ее 1%-ным спиртовым КОН и лишь затем реактивом. Лизин, гистидин, креа тинин, N-метильные производные креатина и а-аминокислоты обнаруживали после опрыскивания разбавленной серной кисло той реактивом Драгендорфа, содержащим этилацетат.

382 • Специальная часть Обнаружение аминокислот на слоях ионитов проводили раст вором нингидрина (Д152);

опрысканный слой удерживает влагу даже при нагревании [42]. В цитированной выше статье [100] описывается успешный способ обнаружения аминокислот 0,3% ным раствором нингидрина после высушивания пластинки и на гревания ее при 80°С. При этом способе пользовались ионитами с более мелкими частицами, чем в предыдущей работе. При деле нии аминокислот на ионитах для обнаружения пользовались так же спиртовым раствором флуоресцеина [263, 264]. Спектральные методы обнаружения аминокислот описаны в [348].

Применение. Тонкослойной хроматографией пользовались для определения аминокислот в смесях лекарственных средств [247].

Таким образом идентифицировали аминокислоты в инфузионных растворах [307]. Приведенный способ применялся при токсиколо гическом анализе [24], при синтезах, например при синтезе ок ситоцина [88], а также других пептидов [206, 207] и полимиксина [251], для обнаружения аминокислот в биологических материа лах [26, 116, 261, 262, 346], в белковых гидролизатах [293], в пчелином яде [289] и в лекарственных препаратах [347, 352].

Грушка и сотр. [285] исследовали разделение белковых веществ, меченных 1 3 1 1, методом тонкослойной гель-проникающей хромато графии. Гидролиз пептидов исследовал Тарр i[355].

Количественное определение. Для количественного определе ния аминокислот Эбле и сотр. [50] воспользовались их свойством давать очень растянутые пятна в высоких концентрациях. Они хроматографировали триптамин на кремнеземе в системе аце т о н — вода (99:1). Количества его от 0,025 до 1,6 мкг рассчиты вали по расстоянию, пройденному пятном от линии старта. Фронт всех пятен находился на одинаковой высоте. Так удалось опреде лить до 0,1 мкг триптамина в 1 мл плазмы. Банхер [10] опреде лял аминокислоты на основании величины пятен после двумер ного хроматографирования в тонком слое. Другие исследователи f77] использовали для определения аминокислот фотометрию 30, 1181, а также фотометрическую оценку негативных хромато грамм, а для определения меченных С аминокислот — сцинтил ляционный метод. Удобен также денситометрический метод опре деления аминокислот [73, 234].

5.6.3. Сахара Разделение Сахаров является сложной задачей, так как это сильнополярные вещества. Тем не менее в литературе существует значительное число работ, описывающих разделение их с хоро шими результатами. Хроматографии Сахаров с точки зрения кли нической биохимии посвящена особая глава.

Сорбенты. Сахара можно успешно разделять на различных материалах (табл. 64). Удобнее всего оказываются главным об Таблица Значения fiRP некоторых Сахаров Силика Силика Кремнезе!*1, обрабо- Силикагель, обрабо- гель, бор- Поли Силикагель Тальк Целлюлоза Алусил тайный буфером а гель танный буфером амид ная кислота Вещество сш С1 С2 СЗ С4 С5 С7 С С6 СП С С9 СИ С Ксилоза 39 45 39 54 100 27 126 57 155 Ликсоза 53 Рибоза 49 66 47 107 Арабиноза 28 32 42 45 20 49 135 Глюкоза 17 14 42 46 37 13 100 34 74 45 32 Галактоза 18 32 40 30 12 42 37 Манноза 23 32 60 46 19 47 37 Рамноза 62 78 52 60 140 49 60 Фруктоза 25 25 31 50 30 47 Сорбоза 26 24 Сахароза 8 29 36 40 74 44 Мальтоза 6 32 10 34 61 39 Трегалоза 31 31 Лактоза 4 25 23 8 47 43 34 Рафиноза 19 32 Целлобиоза 33 Готовые пластинки.

С8 метилэтилкетон — уксусная кислота — метанол (6:2:2), Обозначения:

двукратное элюирование [98];

С1 этилацетат — 65%-ный пропанол-2 (65:35) [2161;

С9 пропанол — этилацетат — вода — 25%-ный аммиак С2 этилацетат — 65%-ный 2-пропанол — вода ( 4 : 1 : 0, 5 ) [14];

СЮ пропанол — этилацетат — вода — 25%-ный аммиак СЗ метилэтилкетон — уксусная кислота — метанол ( 1 : 1 : 3 ) [162];

( 5 : 1 : 1 : 3 : 1 ) [254];

С4 бутанол — этилацетат — пропанол-2 — у к с у с н а я кислота — вода ( 6 : 1 : 3 : 1 ) [254];

(35 : 100 : 60 : 35 : 30) [122];

СП бутанол — пиридин — вода ( 1 0 : 3 : 3 ) [45];

С5 ацетонитрил — сероуглерод — вода ( 8 5 : 5 : 10);

hR р отнесено С12 вода — этилацетат — пиридин ( 2 5 : 1 0 0 : 3 5 ) ;

hRp отнесено к ксилозе [265];

к глюкозе [186];

С6 бутанол — ацетон — вода ( 4 : 5 : 1 ) [157];

С13 бутанол — вода — муравьиная кислота ( 5 : 5 : 1 ) [258];

С7 хлороформ — уксусная кислота — вода ( 3 : 3, 5 : 0, 5 ), трехкрат- С14 этилформиат — метанол ( 8 : 1) (при 23 °С) [132].

ное разделение;

hRp отнесено к глюкозе [41];

384 • • Специальная часть разом малоактивные сорбенты. К ним относятся кремнезем [70], тальк [258], гипс [3] и др. Можно работать и на активных сорбен тах, применяя для хроматографирования полярные растворители, но такой способ не обеспечивает хорошее разделение. Лучшие ре зультаты обычно дают материалы, модифицированные тем или иным способом, например силикагель, обработанный буферным раствором [41, 123, 157, 209], силикагель, обработанный борной кислотой [98, 121, 199, 278], силикагель с добавкой основного ук суснокислого свинца [173], обработанный первичным фосфатом -натрия [283], фосфорновольфрамовой или фосфорномолибденовой кислотой [138]. Последним сорбентом пользуются для разделе ния олигосахаридов, так как он образует комплексы с многоатом ными спиртами и сахарами. Эти комплексные соединения могут иметь иные значения hRp, нежели комплексы с борной кислотой.

Сахара можно также хроматографировать на полиамиде [132] и целлюлозе [45, 168].

Системы растворителей и применение. Шталь и Кальтенбах [216, 218], которые опубликовали одну из первых работ в этой области, подвергали разделению некоторые важные моно- и оли госахариды на кремнеземе, обработанном ацетатным буфером (на 30 г кремнезема G —60 мл 0,02 М CH 3 COONa). Хромато графическое разделение вели в системе С1 (табл. 64), обнаружи вали раствором анисового альдегида в серной кислоте (Д132).

Соотношение воды и пропанола-2 в системе С1 авторы изменяли в зависимости от типа разделяемых веществ. В случае пентоз концентрацию пропанола-2 повышали на 10%, тогда как для дисахаридов, напротив, понижали на 5%. Пастуска [162] поль зовался силикагелем G. Из ряда систем он предпочел СЗ (табл. 64), которая удовлетворительно разделяла трудноразде лимую другими способами пару глюкоза — галактоза. Ряд веществ удалось с успехом разделить на слое алусила в системах С9 и СЮ (табл. 64) [254]. В системе С4 хроматографировали сахара, выделенные из биологических жидкостей [122];

для этой же цели удобно пользоваться кремнеземом, образованным буферным раствором, и системой С2 [14] (табл. 64);

для анализа Сахаров, полученных из пыльцы некоторых трав, удобны силикагель, об работанный борной кислотой, и система метилэтилкетон — уксус ная кислота — метанол ( 3 : 1 : 1 ) или целлюлоза и система этил ацетат— пиридин — вода ( 1 2 : 5 : 4 ) [199]. Улучшенного разде ления моно- и олигосахаридов Шпичану [212] удалось добиться на целлюлозе MN 300 в системе уксусная кислота — этилацетат— пиридин — вода ( 1 : 7 : 5 : 3 ) (смесь готовили за 1 ч перед упот реблением). Для приготовления сравнительно неустойчивых слоев полиамида с толщиной 0,6 мм (табл. 64) удобен следую щий способ: 10 г полиамида смешивают с 35 мл бензола, суспен зию наносят на пластинку и оставляют высохнуть при комнатной Специальная часть температуре;

если пользоваться метанолом или хлороформом, слой растрескивается [132].

Некоторые исследователи рекомендуют двумерную хромато графию. На целлюлозе M.N 300 G в первом направлении элюи руют смесью бутанол—ацетон—диэтиламин—вода ( 1 0 : 1 0 : 2 : 5 ), во втором — фенол—вода (3:1) [168], на силикагеле, обрабо танном борной кислотой,— в первом направлении смесью пропа нол-2 — вода (4:1), во втором — системой бутанол — этилаце тат — пропанол-2 — уксусная кислота — вода (35 : 100 : 60 : 35 : 30) [121] или в первом направлении смесью метилэтилкетон — уксус ная кислота — метанол ( 6 : 2 : 2 ) и во втором — ацетон — вода (9:1) [98]. Этот метод удобен для отделения ди-, три- и тетра сахаридов от моносахаридов. Круговой хроматографией на крем неземе пользовались для быстрого разделения восьми различных Сахаров [70]. Сухий и Рада [224] описали хроматографию Саха ров в центрифуге при 200 об/мин. Значения hRF на слое целлю лозы с крахмалом в системе этилацетат — пиридин — вода (36:1:11,5) следующие: глюкоза 61, фруктоза 85, манноза 79, ксилоза 81, арабиноза 93, сахароза 43. Изомерные пентозы и гек созы разделяли непрерывным хроматографированием [359].

Банхер [9] работал на силикагеле, пользуясь проточным спо собом в S-образной камере (разд. 3.1.6), в верхней части которой между двумя стеклами помещалась целлюлоза, обработанная растворителем. Из систем он пользовался смесями этилацетат— ацетон — вода ( 4 : 5 : 1 ) (время разделения 2,5 ч), этилацетат — диметилформамид — вода (30 : 6 : 2) или этилацетат — пропа нол-2— вода (32:12:6) (в двух последних случаях время разде ления составляло 3 ч). В перечисленных смесях хорошо раз делялись глюкоза, фруктоза, манноза, арабиноза, ксилоза и рибоза.

Ганзен [283] подвергал разделению ряд Сахаров на готовых пластинках силикагеля в системе пропанол-2 — ацетон—1 М молочная кислота ( 2 : 2 : 1 ). Смесь готовили за час перед употреб лением. При этом значения hRF некоторых Сахаров составили:

рамноза 85, ксилоза 76, фукоза 75, рибоза 72, сорбоза 69, манно за 69, арабиноза 67, сахароза 66, глюкоза 65, галактоза 58, тре галоза 57, мальтоза 57, целлобиоза 56, лактоза 47, мальтобиоза 46, рафиноза 42. В своей последующей работе [284] этот автор описывает хроматографию Сахаров на силикагеле, обработанном раствором первичного фосфата натрия. Хроматографирование он проводил в той же системе, что и в предыдущей работе. Для бы строго серийного анализа мочи на сахар (например, в биохими ческих лабораториях) рекомендуется двумерная хроматография на силикагеле, обработанном раствором буры и вольфрамата натрия. В первом направлении элюируют смесью этилацетат — пропанол-2 — вода ( 2 : 2 : 1 ), во втором — этилацетат — метанол — 386 Специальная часть уксусная кислота — вода (60:15:15:10) [278]. Авторы другого быстрого и эффективного способа хроматографии Сахаров [277] проводили разделение с помощью программированной упругости паров (разд. 3.1.9). Уолкли и сотр. [360] разделяли моно- и оли госахариды.

Обнаружение. Применяются все известные для хроматографии на бумаге реагенты, и, кроме того, можно пользоваться разбав ленными минеральными кислотами [124], обычно в виде смесей с фенолами или ароматическими альдегидами. Нередко пользу ются смесью фосфорной кислоты, анилина и дифениламина (Д 6) [41, 98, 109] или азотнокислым серебром (Д55) [3, 199, 239].

Для обнаружения пользуются также раствором моногидрата сульфата аминогуанидина и бихромата калия в серной кислоте [133], 5%-ной хлорной кислотой (дающей после нагревания пластинок при 80 °С пятна разной окраски) [149], раствором тимола и этанола в серной кислоте [158], ацетатом уранила (1%-ный водный раствор и последующее просматривание в уль трафиолетовом свете при длине волны 254 нм) [201] и др.;

для количественного определения Сахаров применяли смесь 4-амино бензойной кислоты, З-карбокси-4-оксибензолсульфокислоты и хло рида олова [14] или хлоргидрат n-анизидина и дитионит натрия [14]. При анализе сложных смесей Сахаров рекомендуется по следовательное опрыскивание тремя различными реагентами, из которых первый реагирует лишь с некоторыми сахарами, второй обнаруживает сахара, не реагирующие с первым, и, наконец, третий реагирует со всеми сахарами. Выбирают такие реактивы, которые избирательно дают цветные реакции и не образуют ок рашенный фон. Удобны следующие смеси: 1)дифениламина и фта лата анилина [37];

2) л-аминобензойной кислоты и я-анизидина;

3) димедона и фосфорной кислоты.

Количественное определение. Количественное определение са харов описывается в ряде работ (см. также разд. 6.4). Пастуска [162], например, рекомендует следующий способ.

После разделения и обнаружения слой с веществами смешивают с двукрат ным количеством раствора бихромата калия [2,45 (или 0,49 г) бихромата рас творяют в 1 л 70%-ной серной кислоты, нагревают при 70—80 °С 30 мин, затем охлаждают] и нагревают при 95 °С в течение 1 ч. После добавления воды и иодида калия титруют 0,01 н. раствором Na2S2C3 [1 мл раствора бихромата соответствует 0,338 (или 0,068) мг целлюлозы, 0,375 (или 0,075) мг гексозы или 0,485 (или 0,097) мг уроновой кислоты]. Для определения достаточно около 500 мкг сахара.

Применялась также денситометрия Сахаров. В качестве реак тива служила смесь анилина и дифениламина [41];

прочие реак тивы описаны в статье Лерфельда и Гудвина [124]. Известно также денситометрическое определение Сахаров после фотогра фирования на поляроидную пленку [109]. Однако чаще пользу Специальная часть ются колориметрическими методами [14, 98, 186, 209, 253, 267].

Описано визуальное полуколичественное определение [200] и оп ределение мезоинозита на готовых пластинках [223]. Скотт [197] изучал количественное извлечение Сахаров из слоев силикагеля и нашел, что потери их происходят преимущественно при сушке хроматограмм. Описано флуориметрическое определение дансил гидразиновых производных восстанавливающих Сахаров [358].

5.6.4. Карденолиды В этом разделе дается краткое описание хроматографии кар денолидов, важной группы стероидных соединений особого рода, выделяемых из растений и обладающих сильным кардиотониче ским действием (см. [365, 368]). Сводка некоторых наиболее важных результатов в этой области приведена в табл. 65.

Сорбенты. В подавляющем большинстве случаев при делении карденолидов пользуются силикагелем. Из-за значительной по лярности этих соединений необходимо работать на дезактивиро ванных сорбентах или пользоваться полярными системами раст ворителей. Применение окиси алюминия ограничивается отдель ными случаями [90, 117], а использование окиси магния [245], целлюлозы [188], талька [139, 274] или кремнезема, обработан ного полярной стационарной фазой [179], не приносит никаких существенных преимуществ. Цюллих [369] описал разделение на силикагеле 25 карденолидов.

Системы растворителей. В обширной статье Шёхольма [210] приводится способ разделения 28 веществ на силикагеле путем двумерной хроматографии в системах, приведенных в табл. 65.

После нанесения веществ на пластинку в первом направлении элюируют системой С1, высушивают при 90—100 °С в течение 5 мин и по охлаждении элюируют во втором направлении системой С2. Снова сушат при 90—100 °С и обнаруживают смесью анисового альдегида и хлорной кислоты (Д122). Окра шивания, характерные для большинства исследуемых веществ, различаются при немедленном наблюдении и через 1 ч в ультрафиолетовом и видимом свете.

Одна из самых первых работ по хроматографии карденолидов принадлежит Шталю и Кдльтенбаху [217]. Как и они, Балгер и сотр. [29] работали на силикагеле;

они пользовались системой СЗ: циклогексан — ацетон — уксусная кислота (65:33:2), приве денной в табл. 65. Пригодны для деления карденолидов и готовые пластинки силуфол [187] (табл. 65). Пользуются также незакреп ленными слоями силикагеля. Райхельт и Питра [191] подвергали разделению ряд веществ на крупнопористом силикагеле, дезакти вированном 25% воды или 43% смеси уксусная кислота — вода (1:1). Дезактивированный водой силикагель и система бензол — этанол (3:1) пригодны для разделения агликонов;

значительно более полярные гликозиды удается разделить на силикагеле, Таблица карденолидов на силикагеле Значения hRF некоторых Окраска пятен после обнаружения немедленно чере 2-е 1-е 1Ч направле- направле- С4 С5 С6 С7 С8 С9 С сз сю си Вещество ние С1 а ние С2а видимая видимая УФ УФ 53 сз 41 60 62 С Дигитоксигенин 141 30 55 ж ж 31 50 Кр ПО ЖК Гитоксигенин с сз 24 55 24 42 КрФ 99 Б* Дигоксигенин ж ж 143 ЖК Кр Гиталоксигенин с с 26 53 58 72 54 Дигитоксин с 12 44 25 43 КрК 75 С Гитоксин СрС с 9 50 62 Дигоксин СрС Б СФ сз ж 101 Ж Гиталоксин КрФ с с 80 82 Ацетилдигитоксин а с с Ацетилдигитоксин Р ж 104 ЖК СрС Ацетилгитоксин а СКр ж Ацетилгитоксин $ ЖК СКр СрС с СрФ Ацетилдигоксин а Б СФ с 113 СрФ Ацетилдигоксин Р Б СФ жк жз КрК Дигиталин Ж Дигитонин 0 22 42 52 17 10 СрС Ланатозид А 26 СФ 15 41 6 6 16 КрК Ланатозид В СрС ЖК Ж 30 36 7 Ланатозид С 15 КрК С СФ КрФ 22 51 67 Строфантидин fe-Строфантин 20 7 Дезацетилланатозид А 4 Дезацетилланатозид В 10 27 Дезацетилланатозид С СЗ циклогексан — ацетон — уксусная кислота (65 : 33 : 2) [29];

а Двумерное хроматографирование (Cl, C2;

Rs отнесено к дигитоксину [210].

С хлороформ — метанол — дихлорметан — вода ( 5 : 1 : 4 : 0, 1 ) [129];

Анисовый альдегид — хлорная кислота (Д 122), УФ-освещение с длиной волны 366 нм. С бензол — этанол ( 7 : 3 ) /[101];

С силуфол;

бензол — этанол ( 4 : 1 ) [187];

Сокращения: С бензол — этанол ( 3 : 1);

незакрепленный слой1 силикагеля с 25% воды [191];

С — синяя, 3 — зеленая, Ф — фиолетовая, Б — белая, Ср — серая, Кр — красная, Ж— С бензол — этанол ( 3 : 1 ) ;

незакрепленный слой силикагеля с 43% 50%-ной уксусной желтая, К — коричневая. кислоты ([191];

С9 гевсан — этилацетат — этанол — вода (15 : 75 : 10 : 2,2) [154];

Обозначения: С10 этилацетат — пиридин — вода ( 9 0 : 10:2,7) [154];

С1 этилацетат — метанол — вода (16 : 1 : 1);

• СП метилэтилкетон - вода (100:5,4) [154];

С2 хлороформ — пиридин ( 6 : 1);

С12 толуол — этилацетат — пропанол — вода ( 2 0 : 6 6 : 1 4 : 2, 2 ) [154].

390 Специальная часть дезактивированном уксусной кислотой, в той же системе раство рителей (табл. 65). Этим методом можно воспользоваться и для микропрепаративных целей. Разделение ацетилдигитоксина и ди 1итоксина, которое в этих условиях протекает неудовлетвори тельно, можно осуществить на силикагеле, обработанном бурой (hRF 65 и 42). Однако пропитка борной кислотой не дала резуль тата [192].

1 часть активированного силикагеля смешивают с 4 частями 1,25%-ного вод ного раствора буры. Сорбент высушивают при 120 °С и слой толщиной 2 мм активируют нагреванием в течение 6 ч при той же температуре. После этого дезактивируют сорбент 20% воды и перемешивают в течение 2 ч для установ ления равновесия.

Герхаммер и сотр. [86] для анализа лекарственного сырья и лекарственных форм пользовались системой этилацетат — пири дин— вода ( 5 : 4 : 1 ) (верхняя фаза). Некоторые вещества успеш но разделяли в системе дихлорметан — метанол — формамид (80: 19: 1). Значения hRF были следующие: ацетилдигитоксин 89, дигоксин 81, гитоксин или дигоксин 72, дигиланиды А, В и С — 62, 53 и 50 соответственно, а дезацетилдигиланиды А, В и С — 45, 41 и 37 соответственно [23]. Лукаш [126] разделял й-стро фантин на отдельные составные части в системе м-бутанол — ме танол— формамид ( 1 7 : 2 : 1 ).

Обширную работу, посвященную хроматографии 169 сердеч ных гликозидов, опубликовали Новер и сотр. [154]. Применяв шиеся ими системы растворителей и характерные значения hRF некоторых веществ приведены в табл. 65. В статье выводится ряд соотношений между структурой и хроматографическим поведением карденолидов. Рабич и Юнглинг [189] разделяли ацетаты кар денолидов в эфире (на микропластинках с длиной пути 5 см), липофильные карденолиды — в эфире, в смеси циклогексан — эти лацетат (1:2) или диизопропиловый эфир — метанол (85:15) и более полярные вещества — в системе этилацетат — метанол ( 9 : или соответственно 7 : 3 ). Файез и Салех [52] работали со сме сями гексан—этилацетат—этанол ( 5 : 1 0 : 2 ), циклогексан—этил ацетат (1 : 3), бензол—метанол (10 : 1) и гексан—этилацетат (2 : 1).

Польские авторы [274] при исследовании стабильности лана тозида С и комплексов ланатозидов А, В и С в качестве сорбента пользовались тальком и системой растворителей хлороформ — бензол — этанол — формамид ( 7 9 : 1 0 : 1 0 : 1 ). Крупа, Рохова и Затурецкий [117] при разделении некоторых строфантидиновых веществ на окиси алюминия обследовали большое число систем, основанных преимущественно на смесях этилацетата с алифати ческим спиртом или смесях толуола, этилацетата и н-бутанола.

Для разделения дигитоксина и дигидродигитоксина служила цел люлоза, обработанная пропиленгликолем [подвижная фаза — бензол — этилацетат ( 9 : 1 ] ;

необходимо трехкратное хроматогра Специальная часть фирование (hRF 25 и 45) [188]. Петтер и Бэриш [179] описали распределительную хроматографию на кремнеземе, пропитанном формамидом;

подвижной фазой служила смесь тетрагидрофуран— хлороформ — формамид (50 : 50 : 6,5) или соответственно метил этилкетон — ксилол (1:1) (насыщенная формамидом). Китай ские исследователи [259] также применяли распределительную хроматографию на кремнеземе, пропитанном формамидом, причем из 139 испытанных ими систем они рекомендовали как наилучшие системы хлороформ — ацетон — этилацетат (5:2:3), хлоро форм— ацетон — этилацетат — этанол (8:2:0,5:0,5), хлоро форм—бензол—этилацетат ( 1 : 2 : 3 ) и хлороформ—бутанол ( 9 : 1 ).

Цюллих и сотр. [320] для разделения трудноделимой пары ди гоксин — гитоксин применяли непрерывный способ. Оба вещества оказалось возможным разделить в системе хлороформ — этанол (9:1) или толуол — метанол ( 4 : 1 ). Описано разделение изоме ров ацетилдигитоксина [366].

Обнаружение. Наиболее употребительным реактивом является смесь трихлоруксусной кислоты и хлорамина Т (Д 139) (см. на пример, [187, 189]), граница чувствительности которого колеблет ся около 0,2 мкг. Из других реактивов напомним треххлористую сурьму (Д87а) [52, 189], раствор хлорсульфоновой кислоты в уксусной кислоте (Д125) [189], раствор анисового альдегида в хлорной, серной или уксусной кислоте (Д 122) [29, 52, ПО] (этот реактив дает характерно окрашенные пятна с целым рядом веществ), так называемый реактив Кедде (пикрат натрия, ДНО) [245], щелочной раствор динитробензола (Д45) [117], хлорид железа (III) (Д97) [46], параформальдегид в 80%-ной фосфор ной кислоте [52], 70%-ная хлорная кислота [101], ксантгидро ловый реактив (Д 191) [189], щелочной раствор трифенилтетра золия [189] и смесь аскорбиновой и соляной кислот с перекисью водорода [99], все реактивы для хроматографии стероидов.

Применение. Тонкослойную хроматографию применяли для анализа настоек, содержащих карденолиды [23], таблеток и дра же [34, 46, 86, 129, 139, 179], инъекционных растворов [17, 179] и лекарственного сырья [83, 86, 220, 245]. Описан простой способ доказательства подмены лекарственного сырья Folium hyoscyami сырьем Folium Digitalis [220]. Экстракты из обоих видов отчет ливо различаются своим составом;

хроматографируя в системе хлороформ — этанол (9:1), можно обнаружить 5—10% посторон ней примеси. Линденбаум описал [291] радиоиммукологическое определение дигоксина в сыворотке и моче, а Фабер и сотр.

[363] —дигитоксина в сыворотке крови.

Количественное определение. Карденолиды можно количест венно определить колориметрически после элюирования с пласти нок. Удобным реактивом является ксантгидрол, применяемый для насыпных и наливных слоев [75].

392 ' Специальная часть Пластинку размером 9X24 см делают в месте старта шероховатой с помо щью,, например, наждачной бумаги. На старт наносят 0,25 мл 0,2%-ного рас твора ланатозида в смеси равных объемов хлороформа и этанола, а по краям— стандартный раствор того же вещества. После испарения растворителя на пла стинку обычным способом накатывают слой сорбента;

после нанесения несколь ких капель смеси хлороформа и этанола на места, где нанесены пробы, раствор ланатозида впитывается в слой. Элюируют смесью бензол — этанол ( 3 : 1 ) ;

для обнаружения поступают следующим образом: стеклянную пластинку с нанесен ным на нее хлоридом сурьмы (III), увлажненным до жидкого состояния концент рированной соляной кислотой, прижимают в продольном направлении к части хроматограммы с эталонным веществом. При такой процедуре эта часть слоя отстает, и после нагревания до 120 °С обнаруживается положение пятна веще ства. Затем нетронутую часть слоя с зоной вещества переносят в колбочку и элюируют 2—3 мл метанола. Собственно количественное определение проводят колориметрически реакцией с ксантгидролом [841.

Из прочих реактивов пригодна диксантилмочевина [16, 179].

Югославские авторы [16] количественно определяли дигитоксин и гитоксин на силикагеле. Оба вещества разделяли в системе хло роформ— метанол (88:12], обнаруживали иодом и после элюи рования "смесью равных объемов хлороформа и метанола опре деляли следующим образом.

В цилиндре 100 мл растворяли 10 мг диксантилмочевины в 50 мл уксусной кислоты, добавляли 1 мл концентрированной соляной кислоты и раствор доли вали уксусной кислотой до 100 мл. Раствор элюированных веществ центрифу гировали для удаления тонких взвешенных частиц силикагеля и раствор упари вали досуха. К остатку прибавляли реактив и смесь нагревали 3 мин на кипя щей водяной бане. По охлаждении оставляли стоять 10 мин при комнатной температуре и измеряли поглощение при 535 нм.

Подобным же образом Петтер и Бэриш [179] поступали при анализе лекарственного сырья, инъекционных растворов, драже и таблеток. Процентное содержание гликозидов в сырье рассчи тывали по формуле Е-/-4- о/, количество нанесенного вещества, мг содержание гликозидов в инъекционных растворах — по формуле мл раствора и содержание гликозида в таблетках и драже — по формуле E-f мг= число таблеток ' где А обозначает количество миллилитров растворителя, в кото ром растворяли остаток после выпаривания, В— количество мил лилитров растворителя, взятого для нанесения на пластинку, Е — поглощение при 530 нм {d=\ см) и f — фактор, отнесенный к мг/10 мл.

Специальная часть Колориметрическое определение карденолидов возможно так же и после реакции с серной кислотой [127, 245]. Так определя ют количество дигоксина, дигитоксина и ланатозида С в тканях после вскрытия (спектрофотометрическое определение проводят в области 390—400 нм), а также анализируют спиртовые вытяж ки семян или растений. Для определения зоны сорбента с пятна ми веществ перемешивают со смесью концентрированных серной и соляной кислот. Измерение ведут, сравнивая с холостым опы том, в зависимости от рода вещества в интервале 407—420 нм.

Опрыскивание смесью аскорбиновой и концентрированной соля ной кислоты и перекиси водорода (Д111) можно использовать и для прямого фотофлуориметрического определения [99].

Описано денситометрическое определение карденолидов в ле карственных средствах [364].

Методом тонкослойной хроматографии исследовали кардено лиды Erysimum repandum [361], определяли дигитонин в семенах Digitalis purpurea [362], а также изучали токсикологию дигокси на [367]. Описано также денситометрическое определение карде нолидов [364]. Работающим в области исследования карденолидов • из растительных источников рекомендуется основательно познако миться с обширной серией работ проф. Рейхштейна и сотр., опуб ликованных в Helvetica chimica acta.

5.6.5. Простагландины Простагландины являются производными циклопентана с двумя боковыми цепями, содержащими карбоксильную группу, несколько кислородных функциональных групп и различное число двойных связей. Они содержатся в незначительных количествах в животных тканях и оказывают значительное влияние на сокра щение гладких мышц. И хотя до настоящего времени лишь срав нительно небольшое число авторов занималось тонкослойной хроматографией этих веществ, они, особенно в последнее время, привлекают внимание химиков-органиков, биохимиков и фарма кологов.

Сорбенты. Пригодны силикагель [7, 95, 96], кислый силика гель [7] и силикагель, обработанный азотнокислым серебром [96]. Окись алюминия не слишком удобна [7].

Системы растворителей. Андерсен [7] при работе на силика геле пользовался, помимо других, следующими системами (табл. 66): этилацетат — гексан — вода — метанол — уксусная кислота ( 4 : 2 : 2 : 1 : 1, высушенный (безводный) органический слой;

С1), смесь этилацетата и муравьиной кислоты в отношении 400:5 (двукратное элюирозание, С2) и этилацетат—ацетон — уксусная кислота ( 9 0 : 1 0 : 1 ;

СЗ). Значения hRp некоторых прст стагландинов приведены в табл. 66. Японские авторы [95] ана 26— 394 Специальная часть Таблица Значения hRP некоторых простагландинов [7] Значения hRp в различных системах Вещество (старое обозначение) сзб С С PGF ia PGEi П-эпи-PGE! 37 15-9nn-PGEi ll,15-3im-PGEi 42 PGAi 57 PGB, 56 Системы растворителей приведены в тексте.

Кислый силикагель.

лизировали смеси, полученные экстракцией плазмы и других биологических жидкостей (нелипофильные составные части улав ливали на колонке сефадекса), в системе хлороформ—этилаце тат — этанол — уксусная кислота ( 2 0 : 2 0 : 4 : 1 ). В своей следую щей статье [96] они описали применение силикагеля, обработан ного азотнокислым серебром. Указанная система в отношении 200:200:7,5:10 при первом элюировании позволяет отделить PGEj от PGE 2, соответственно PGFia от P G F 2 a ;

второе элюиро вание в этой же системе разделяет все четыре вещества. Другие исследователи [68] устанавливали содержание PGE 2 в печени морских свинок методом тонкослойной хроматографии.

Обнаружение. PGA и PGB можно наблюдать в ультрафиоле товом свете. Прочие простагландины обнаруживают некоторыми из следующих реактивов [7]: раствором хлорида сурьмы (III) в смеси четыреххлористого углерода и дихлорметана (Д87], смесью ванилина, фосфорной кислоты и этанола, сульфатом церия (Д180), молибденовой и соответственно фосфорномолибденовой кислотами (Д115), парами иода или раствором уксуснокислой меди в разбавленной фосфорной кислоте.

ЛИТЕРАТУРА I., D t s c h. A p o t h. - Z t g., 107, 185 ( 1 9 6 7 ).

1. Adamski R., Lutomskl J., Wisniewski 2. A., J. C h r o m a t o g r., 2 1, 3 3 2 ( 1 9 6 6 ).

Affonso 3. A., J. C h r o m a t o g r., 27, 3 2 4 ( 1 9 6 7 ).

Affonso 4. S. L, A c t a p h a r m. s u e c, 2, 3 5 7 ( 1 9 6 5 ).

Agurell A. J., P l a n t a m e d., 11, 5. (1963).

Agurell S. L., Ramstad E., Ullstrup Специальная часть 6. Anderzen D. L., J. Chromatogr., 41, 491 (1969).

7. Andersen N. H., J. Lipid Res., 10, 316 (1969).

8. Baitsholts A.., Ardell R. E., J. Chromatogr., 30, 493 (1967).

9. Bancher., Scherz H., Kaindl K- Microchim. Acta, 1964, 652.

10. Bancher E., Washuttl J., Olfat M. D., Microchim. Acta, 1963, 773.

11. Baumler J., Rippstein S., Pharm. Acta Helv., 36, 382 (1961).

12. Bayer I., J. Chromatogr., 16, 237 (1964).

13. Bele D., Acta pharm. hung., 34, 221 (1964).

14. Bell D. J., Talukder M. Q. K., J. Chromatogr., 49, 469 (1970).

15. Bican-Fister Т., J. Chromatogr., 55. 417 (1971).

16. Bican-Fister Т., Merkas I., J. Chromatogr., 41, 91 (1969).

17. Binkert J., Angliker E., Wartburg A. von, Helv. chim. Acta, 45, 2122 (1962).

18. Blake E. Т., Cashman P. J., Thornton J. I., Analyt. Chem., 45, 394 (1973).

19. Blesova M., Zahradnicek M., Cs. farm., 22, 73 (1973).

20. Bohme H., Bitsch R., Arch. Pharm., 303, 1970 (1970).

21. Bradley T. J., Parker M. S., Barnes M., J. hosp. Pharm., 24, 17 (1967);

Chem. Abstr., 66, 98518 (1967).

22. Braeckman P., van Severen R., Jaeger-van Moeseke L., Dtsch. Apoth.-Ztg.,.

104, 1211 (1964).

23. Braeckman P., van Severen R., Haerinck F., Pharm. Tijdschrift Belg., 40„ 129 (1963).

24. Brenner M., Niederwieser A., Experientia, 16, 378 (1960).

25. Brenner M., Niederwieser A., Pataki G., in: Stahl E., Dunnschicht-Chromato graphie. 2. Aufl., Springer-Verlag, Berlin, 1967, 698.

26. Bfenner M., Niederwieser A., Pataki G., Fahmy A. R., Experientia, 18, (1962).

27. Broich J. R., Hoffman D. В., Andryauskas S., Galante L., Umberger С J., J. Chromatogr., 60, 95 (1971).

28. Brown J. K., Shapazian L, Griffin G. D., J. Chromatogr., 64, 129 (1972).

29. Bulger W. H., Talcott R. E., Stohs S. J., J. Chromatogr., 70, 187 (1972).

30. Burzinska S., Czerniak Z., Chem. Anal. (Warszawa), 14, 667 (1969).

31. Contractor S. Т., Wragg J., Nature, 208, 71 (1965).

32. Copley M. N.. Truter E., J. Chromatogr., 45, 480 (1969).

33. Coumbis R. J., Fulton Ch. C, Calise J. P., Rodriguez C, J. Chromatogr., 54, 245 (1971).

34. Cullen L. F., Packman D. C, J. pharm. Sci., 59, 697 (1970).

35. Чичиро В. Е. Аптечн. дело, 12, № 6, 36 (1963).

36. Dal Cortivo L. A., Broich J. R., Dihrberg A., Newman В., Analyt. Chem., 38, 1959 (1966).

37. Damonte A., Lombard A., Tourn M. L., Cassone M. C, J. Chromatogr., 60, 203 (1971).

38. Davis J. M., J. Chromatogr., 63, 333 (1972).

39. Debackere M., Laruelle L, J. Chromatogr., 35, 234 (1968).

40. Denoel A., van Cotthem В., J. Pharm. Belg., 18, 346 (1963).

41. De Stefanis V. A., Ponte J. G., J. Chromatogr., 34, 116 (1968).


42. Determann H., Experientia, 18, 346 (1962).

43. Dittmann J., Z. klin. Chem., 4, 8 (1966);

Chem. Abstr., 64, 16262 (1966).

44. Dittmann J., Z. klin. Chem., 4, 10 (1966);

Chem., Abstr., 64, 16263 (1966)..

45. Дятловицкая Е. В., Воронцова В. В., Бергельсон Л. Д. ДАН СССР, 145, 325 (1965).

46. Dow M. L., Kirchhofer R. D., Brower J. F., J. pharm. Sci., 60, 298 (1971).

47. Dusinski G., Machovicova F., Tyllova M., Farm obzor, 36, 397 (1967).

48. Ebel S., Bahr E., Plate E., J. Chromatogr., 59, 212 (1971).

49. Ebel S., Mikulla W. D., Weisel К- Н., Dtsch. Apoth.-Ztg., Ill, 931 (1971J.

50. Eble J. M., Brooker L. M., Experientia, 18, 524 (1962).

51. Fahmy A. R., Niederwieser A., Pataki G,, Brenner N.. Helv. chim. Acta, 44, 2022 (1961).

26* 396 Специальная часть Fayez М. В. Е., Saleh A. A., Z. analyt. Chem., 246, 380 (1969).

52.

63. Fejer-Kossey О., J. Chromatogr., 31, 592 (1967).

54. Fischer W. Т., Baitsholts A. D., Grau G. S., J. Chrom. Sci., 10, 303 (1972).

55. Fonad N., Boctor J., J. Chromatogr., 67, 371 (1972).

56. Fowler R., Gomm P. J., Patterson D. A., J. Chromatogr., 72, 351 (1972).

Frohne D., Dtsch. Apoth.-Ztg., 104, 1404 (1964).

57.

58. Genest K-, Belec G., Can. P. pharm. Sci., 2, 44 (1967), Chem. Abstr., 67, 102822 (1967).

59. Gibson M. S., J. Chromatogr., 44, 631 (1969).

60. Goenechea S., Bernhard W., Z. analyt. Chem., 246, 130 (1969).

61. Grigorescu E., Verbuta A., Rev. Med. (Targu-Mures), 13, 349 (1967);

Chem.

Abstr., 68, 107914 (1968).

62. Groger D., Pharmazie, 23, 210 (1968).

63. Groger D., Erge D., Pharmazie, 18, 346 (1963).

64. Guven K. C, Altinkurt Т., Eczacilik Bui., 7, 119 (1965), Chem. Abstr., 64, 14033 (1966).

65. Guven K. C, Eroglu L., Eczacilik Bui., 10, 53 (1968), Chem. Abstr., 69, 46080 (1968).

66. Gyeresi A., Racz G., Pharmazie, 28, 271 (1973).

67. Habashy G. M., Farid N. G., Talanta, 20, 699 (1973).

68. Hamberg M., Israelsson U., J. biol. Chem., 245, 5107 (1970).

69. Hartel G., Korhonen A., J. Chromatogr., 37, 70 (1968).

70. Hashmi M. H., Chughtai N. A., Shahid M. A., Microchim. Acta, 1968, 6i79.

71.- Hashmi M. H., Parveen S:, Chughtai N. A., Microchim. Acta, 1969, 449.

72. Heacock R. A., Forrest J. E., J. Chromatogr., 78, 241 (1973).

73. Heathcote J. G., Davies D. M., Haworth C, J. Chromatogr., 60, 103 (1971).

74. Hermdnek S., Schwarz V., Cekan Z., Pharmazie, 16, 566 (1961).

75. Heusser D., Dtsch. Apoth.-Ztg., 105, 1101 (1965).

76. Heusser D., Jackwerth E., Dtsch. Apoth.-Ztg., 105, 107 (1965).

77. Heyns K., Hauber R., Z. physiol. Chem., 348, 357 (1967).

78. Ho I. K-, Loh H. H., Way E. L, J. Chromatogr., 65, 577 (1972).

79. Hohmann Т., Rochelmeyer H., Arch. Pharm., 297, 186 (1964).

80. Holcomb I. J., Luers R. В., Fusari S. A., J. pharm. Sci., 62, 1504 (1973).

81. Honegger G. G., Helv. chim. Acta, 44, 173 (1961).

82. Horak P., Cs. farm., 17, 89 (1968).

83. Horak P., Cs. farm., 19, 213 (1970).

84. Horak P., Coll Czechoslov. Chem. Commun., 25, 1974 (1960).

85. Horak P., Kudrnae S., Cs. farm., 15, 483 (1966).

86. Horhammer L., Wagner H., Konig H., Dtsch. Apoth.-Ztg., 103, 502 (1963).

87. Huang J. Т., Hsiu H. Ch., Wang К. Т., J. Chromatogr., 29, 391 (1967).

88. Huguenen R. L., Boissonnas R. A., Helv. chim. Acta, 44, 213 (1961).

89. Chao J. M., Ter Marderosian A. H., J. pharm. Sci., 62, 589 (1973).

90. Хорлин А. Я., Бочков А. Ф. Изв. АН СССР, 1962, 1120.

•91. Choulis N. H., J. pharm. Sci., 62, 112 (1973)..

92. Christopoulos G. N.. Kirch E. R., J. Chromatogr., 65, 507 (1972).

93. Ikratn M., Khuda Bakhsh M., Analyt. Chem., 36, 111 (1964).

94. lkram M., Miana G. M., Islam M., J. Chromatogr., 11, 260 (1963).

•95. Inagawa Т., Ohki S., Sawada M,, Hirata F., Yakugaku Zasshi, 92, (1973).

96. Inagawa Т., Ohki S., Sawada M., Ohtsuka K., Hirata F., Yakugaku Zasshi, 93, 471 (1973).

97. Ivanov N.. Boneva A., Bulgar Tyutyun, 11, 30 (1966);

Chem. Abstr., 65, 8668 (1966).

98. Jeffrey D. C, Arditti J., Ernst R., J. Chromatogr., 41, 475 (1969).

99. Jelliffe R. W., J. Chromatogr., 27, 172 (1967).

100. Johannson В. С, Rymo L, Acta chem. Scand., 16, 2067 (1962).

101. Johnston E. J., Jacobs A. L., J. pharm. Sci., 55, 531 (1966).

Специальная часть 102. Jotliffe G. Н., Shellard E. J., J. Chromatogr., 48, 125 (1970).

103. Jones H., Heathcote J. G., J. Chromatogr., 24, 106 (1966).

104. Kaess A., Mathis C, Ann. pharm. Fran?., 23, 267 (1965).

105. Kaess A., Mathis C, Ann. pharm. franc., 23, 739 (1965).

Kamp W., Onderberg W. J. M., Pharm. Weekbl., 101, 1072 (1966).

106.

107. Karacsony E. M., Szarvady В., Planta med., 11, 169 (1963).

108. Keipert S., Voigt R., J. Chromatogr., 64, 327 (1972).

109. Kelleher P. C, J. Chromatogr., 52, 437 (1970).

110. Keller M., Pataki G., Helv. chim. Acta, 46, 1687 (1963).

Klavehn M., Rochelmeyer H., Dtsch. Apoth.-Ztg., 101, 477 (1961).

111.

Klavehn M., Rochelmeyer H., Seyfried J., Dtsch. Apoth.-Ztg., 101, 75 (1961).

112.

113. Klissiunis K-, Koccota S., Arch. Toxicol., 22, 125 (1966).

Bug E., Z. analyt. Chem., 260, 31 (1972).

114.

115. Kraffczyk F., Helger R., Rev. roum. Chim., 13, 437 (1968);

Chem. Abstr., 69, 102848 (1968).

116. Kraffczyk F., Helger R., Z. analyt. Chem., 243, 536 (1968).

117. Krupa V., Rochovd M., Zathurecky L., Cs. farm., 16, 184 (1967).

118. Krzeczkowska J., Burzinskl S., Czerniak Z., Ann. Univ. Maria Curie-Sklodow ska, Sect. D. 21, 125 (1966, опубл. в 1967);

Chem. Abstr., 69, 56885 (1968).

119. Lang E., Pharmazie, 26, 245 (1971).

120. Lang E., Pharmazie, 27, 122 (1972).

121. Laio M., Brunelli В., Cluffini G., Mezzettl Т., J. Chromatogr., 34, 26 (1968).

122. Lato M., Brunelli В., Ciufflni G., Mezzettl Т., J. Chromatogr., 36, (1968).

123. Lato M., Brunelli В., Ciuffini G., Mezzetti Т., J. Chromatogr., 39, 407 (1969).

124. Lehrfeld J., Goodwin J. C, J. Chromatogr., 45, 150 (1969).

125. Loh H. H., Ho I. К., Cho T. M., Lipscomb W., J. Chromatogr., 76, (1973).

126. Lukas G., Sci. Pharm., 30, 47 (1962).

127. Lukkari I., Alha A., Ann. Med. exp. Fenn. (Helsinki), 43, 188 (1965);

Chem.

Abstr., 64, 8619 (1966).

Machata G., Microchim. Acta, 1960, 79.

128.

129. Machovicovd F., Farm, obzor, 35, 450 (1966).

130. Machoviiova F., Parrdk V'., Cs. farm., 13, 200 (1964).

131. Mandak M., Struhar M., Zekuciovd V., Farm, obzor, 33, 112 (1964).

132. Marais J. P., J. Chromatogr., 27, 321 (1967).

133. Martins P. M., Dick Y. P., J. Chromatogr., 32, 188 (1968).

134. Mary N. Y., Brochmann-Hanssen E., Lloydia, 26, 223 (1963).

135. McLaughlin J. L, Goyan J. E., Paul A. G., J. pharm. Sci., 53, 306 (1964).

136. Messerschmid W., J. Chromatogr., 33, 551 (1968).

137. Messerchmid W., J. Chromatogr., 39, 90 (1969).

138. Mezzetti Т., Lato M., Rufini S., Ciuffini G., J. Chromatogr., 63, 329 (1971).

139. Michalska В., Zurkowska L, Ozarowska A., Acta Polgpharm., 23, 325 (1966).

140. Mistrjukov E. A., J. Chromatogr., 9, 314 (1962).

141. Moffat E. D., Lytle R., Analyt. Chem., 31, 926 (1959).

142. Moll F., Arch. Pharm., 296, 205 (1963).

143. Montalvo J. C, Klein E., Eyer D., Harper В., J. Chromatogr., 47, (1970).

144. Mottier M., Mitt. Cabiete Lebensmitt. Hyg., 49, 454 (1958).

145. Mule S. J., J. Chromatogr., 55, 255 (1971).

146. Mule S. J., Bastos M. L., Jukofsky D., Saffer E., J. Chromatogr., 63, (1971).

147. Mule S. J., Hushin P. L., Analyt. Chem., 43, 708 (1971).

148. Mutschler E., Rochelmeyer H., Arch. Pharm., 292, 449 (1959).

149. Nagasawa K-, Ogamo A., Harada H., Kumagai K-, Analyt. Chem., 42, (1970). ' 150. Neubauer D., Mothes K-, Planta med., 9, 466 (1961).

398 Специальная часть 151 Neumnger H, Ost Apoth-Ztg, 27, 91 (1973) 152 Niwaguchi T, Inoue T, J Chromatogr, 59, 127 (1971).

153 Novakova E., Vacerkova J, Cs farm, 22, 347 (1973).

154 Nover L, Juttner G, Noack S., Baumgarten G, Luckner M., J Chromatogr, 39, 419 (1969) 155 Nurnberg E, Arch Pharm, 292, 611 (1959) 156 Nutzennadel W, Lutz P., Clin chim Acta, 29, 151 (1970) 157 Ovodov J S, Jevtusenko E V, Vaskovskij V E, Ovodova R G, Solovje vaT F,J Chromatogr, 26, 111 (1967) 158 Paget M, Coustenoble P, Ann Biol clin, 25, 1239 (1967), Chem Abstr, 68, 102430 (1968) 159 Pans R R, Sarsunova M, Pharmazie, 22, 483 (1967) 160 Pans R R, SarSdnova M, Semonsky M, Ann pharm franc, 25, 177 (1967) 161 Parrak V., Radejova E, Machovicova F, Chem zvesti, 18, 369 (1964) 162 Pastuska G., Z analyt Chem, 179, 427 (1961) 163 Pastuska G, Trinks H, Chemiker-Ztg, 86, 135 (1962) 164 Paul !., Conine F, Microchem J, 18, 142 (1973) 165 Peker J, Geyer H, Eppert G, J Chromatogr, 67, 329 (1972).

166 Petkovic M, Arch Farm (Beograd), 17, 193 (1967), Chem Abstr, 69, (1968).

167 Petkovic M, Farm Glasmk, 22, 229 (1966), Chem Abstr, 65, 15155 (1966) 168 Petrovic S M, Came V. D, Microchim Acta, 1969, 169 Pfejfer S, J Chromatogr, 24, 364 (1966) 170 Pfeifer S, Microchim Acta, 1962, 171 Pfeifer S, Behnsen G, Kuhn L, Pharmazie, 27, 639 (1972) 172 Philhpson J D, Bisset N. G., J Chromatogr, 48, 493 (1970) 173 Piffen P G., J Chromatogr, 33, 530 (1969) 174 Poethke W, Kmze W, Arch Pharm, 297, 593 (1964) 175 Poethke W., Kinze W., Pharm Zentralh, 103, 577 (1964) 176 Polesuk J, Ma T S., Microchim Acta, 1970, 177 Polesuk J, MaT S, Microchim Acta, 1973, 178 Porath J, Biochim biophys Acta, 39, 193 (I960) 179 Potter H, Barisch H, Pharmazie, 27, 315 (1972).


180 Potter H, Voigt R, Pharmazie, 22, 198 (1967) 181 Potter H, Yamazaki H, J Chromatogr, 68, 286 (1972) 182 Prochdzka V., Kavka F., Prucha M, Pitra I, Cs farm, 13, 493 (1964) 183 Prochazka V, Kavka F, Prucha M, Pitra J., Cs. farm, 14, 154 (1965) 184 Prochazka V, Kavka F, Prucha M, Pitra J, Cs. farm., 15, 363 (1966).

185 Puech A., Jacob M, Gaudy D, J Chromatogr, 68, 161 (1972).

186 Raadsveld С W, Klomp H, J Chromatogr, 57, 99 (1971).

187 Rabek V, Pitra J, Horak P, Prochazka Z, Chundela В., Votruba M, Sbirka pftdpisu pro aphkaci desek Silufol I dil Sklarny Kavaher, n p Sazava, za vod Votice (Инструкция по применению пластинок силуфол, ч. 1, народное предприятие, з-д Вотице, Сазава ) 188 Rabitzsch G, J Chromatogr, 35, 122 (1968) 189 Rabitzsch G, Jungling S., J Chromatogr., 42, 146 (1969).

190 Ratney S R,J Chromatogr, 11, 111 (1963) 191 Reichelt J, Pitra J, Coll Czechoslov Chem Commun, 27, 1709 (1962).

192 Reichelt J, Pitra J, Cs farm, 12, 416 (1963) 193 Roder E, Mitt Dtsch Pharm Ges, 40, 176 (1970).

194 Rutkowska U, Wojsa K, Bulletin Instit rosl lecz, 9, 192 (1963).

195 Sahlt M, Oesch M., Pharm Acta Helv, 40, 25 (1965) 196 Saint Firmin A R, Pans R R,3 Chromatogr, 31, 252 (1967) 197 Chromatogr, 49, 473 (1970) Scott R W,i 198 Shellard E. J, Jolhffe G H, J Chromatogr, 31, 82 (1967) 199 Shellard E J, Jolhffe G H., J Chromatogr, 40, 458 (1969).

200 Scherz H, Microchim Acta, 1967, Специальная часть Scherz H., Weisz H., Micrichim. Acta, 1967, 307.

201.

202. Schlemmer., Link E., Pharm. Ztg., 104, 1349 (1959).

203. Schnekenburger J., Hartikainen I., Dtsch. Apoth.-Ztg., 104, 1402 (1964).

204. Schutz H. W., Beitr. gerichtl. Med., 28, 354 (1971).

205. Schwarz V., Sarsunova M., Pharmazie, 19, 267 (1964).

206. Schwyper R., Dietrich H., Helv. chim. Acta, 44, 2003 (1961).

207. Schwyper R., Kappeler #., Helv. chim. Acta, 44, 199 (1961).

208. Simon J., Hanna M. A., Ghali G. V., Tolba R. A., Mekonian V., Analyt.

Chem., 45, 1498 (1973).

209. Singh S., Stacey В. Е., Analyst, 97, 977 (1972).

210. Sjoholm I., Svensk Farm. Tidskr., 66, 321 (1962).

211. Smith E., Barkan S., Ross В., Maienthal M., Levine J., J. pharm. Sci., 62, 1151 (1973).

212. Spitschan R., J. Chromatogr., 61, 169 (1971).

213. Stahl E., Arch. Pharm., 292, 411 (1959).

214. Stahl E., Dunnschicht-Chromatographie. 1. Aufl. Springer-Verlag, Berlin, 1962, 299.

215. Stahl E., Jork H., Dumont E., Bohrmann H., Vollmann H., Arzneimittel-Forsch., 19, 194 (1969).

216. Stahl E., Kaltenbach U., J. Chromatogr., 5, 351 (1961).

217. Stahl E., Kaltenbach U., J. Chromatogr., 5, 458 (1961).

218. Stahl E., Kaltenbach U., Z. analyt. Chem., 181, 303 (1961).

219. Stahl E., Schorn P. J., Arzneimittel-Forsch., 17, 1288 (1967).

220. Steinegger E., Gebistorf J., Pharm. Acta Helv., 37, 343 (1962).

221. Stoever D. J., Pharm. Weekbl., 104, 738 (1969).

222. Stubchen-Kirchner H., J. Chromatogr., 68, 167 (1972).

223. Stuber P., Haefelfinger P., J. Chromatogr., 33, 391 (1968).

224. Suchy V., Rada K-, Cs. farm., 16, 340 (1967).

225. Suszko-Purzycka A., Trzebny W., Ann. Pharm. (Poznan), 4, 43 (1966);

Chem.

Abstr., 65, 8668 (1966).

226. Suszko-Purzycka A., Trzebny W., J. Chromatogr., 16, 239 (1964).

227. Szabo E., Lorincz K-, Hethelyi E., Herba Hung, 3 ( 1 ) (1964).

228. Szasz G., Khin L, Budvari R., Acta pharm. hung, 33, 245 (1963).

229. Sarsunova M., Kakac В., Krasnec L, J. Chromatogr., 48, 353 (1970).

230. SarStinovd M., Kakac В., Maly V., Z. Analyt. Chem., 245, 154 (1969).

231. SarSunovd M., Semonsky M., Cerny A., J. Chromatogr., 50, 442 (1970).

232. Sarsunova M., Tolgyessy J., Hradii M., Pharmazie, 19, 336 (1964).

233. Sita F., Chmelova V., Chmel K, Chromatograficka analysa drog. 11. dil, Sbir ki pfedpisu pro aplikaci desek Silufol, Sklarny Kavalier, n. p. Sazava, zavod Votice. (Инструкция по применению пластинок силуфол, ч. II, народное предприятие, з-д Вотице, Сазава.) 234. Тали В. Сб. научн. тр. Эстонской с.-х. акад., № 32, 176 (1963).

235. Teichert К., Mutschler E., Rochelmeyer H., Dtsch. Apoth.-Ztg., 100, (1960).

236. Teichert К, Mutschler E., Rochelmeyer H., Dtsch. Apoth.-Ztg., 100, (1960).

237. Teichert К, Mutschler E., Rochelmeyer H,, Z. analyt. Chem., 181, 325 (1961).

238. Thieleman H., Sci. Pharm., 41, 47 (1973)., 239. Trevelyan W. E., Procter D. P., Harrison J. S., Nature, 166, 444 (1950).

240. Turner N. A., Redgwell R. ]., J. Chromatogr., 21, 129 (1966).

241. Tyihak E., Vdgujfalvi D., J. Chromatogr., 49, 343 (1970).

242. Ullmann E., Kassalitzky H., Arch. Pharm., 295, 37 (1962).

243. Van Severen R., J. Pharm. Belg., 17, 40 (1962).

244. Van Welsom R. A., J. Chromatogr., 78, 237 (1973).

245. Kartnig Th., Danhofer R., J. Chromatogr., 52, 313 (1970).

246. Vegh A., Budvari R., Szdsz G., Brantner A., Gracza P., Acta pharm hune 33, 67 (1963).

400 Специальная часть 247 Verwey A., de Jong de Vos R., Teisman B. G. I., J. Chromatogr., 69, (1972).

248. Vercaemst R., Blaton V., Peters H., J. Chromatogr., 43, 132 (1969).

249. Viala A., Estadietr M., J. Chromatogr., 72, 1972 (1972).

250. Vlasak W. H., J. Pharm. Belg., 22, 425 (1967).

251. Vogler K., Studer R. O., Legier W., Lanz P., Helv. chim. Acta, 43, (1960).

252. Voigt R., Zier P., Pharmazie, 27, 773 (1972).

253. Vomhof D. W., Truitt J., Tucker T. C, J. Chromatogr., 21, 335 (1966).

254. Waldi D., в кн. Stahl E.\ Diinnschicht-Chromatogr., 1. Aufl., Springer-Verlag, Berlin, 1962, 475.

255. Waldi D., Schnackerz K., Munter F., J. Chromatogr., 6, 61 (1961).

256. Wallace J.., Biggs J. D., Blum K-, Clin. Chim. Acta, 36, 85 (1972).

257. Wallace J. E., Biggs J. D., Merritt J. H., Hamilton H. E., Blum K-, J. Chro matogr., 71, 135 (1972).

258. Walsh J. M., J. chem. Educ, 44, 294 (1967).

259. Wang M. Ch., Chou Т. Н., Yao Hsueh Hsueh Pao, 12, 720 (1965);

Chem.

Abstr., 64, 10071 (1966).

260. Wan A. S. C, J. Chromatogr., 60, 371 (1971).

261. Weicher H., Huhristock K-, Klin. Wschr., 40, 44 (1962).

262. White H. H., Clin. chim. Acta, 21, 297 (1968).

263. Wieland Т., Dettermann H., Experientia, 18, 431 (1962).

264. Wieland Т., Pfleiderer G., Angew. Chem., 69, 199 (1957).

265. Wiele H., Horak E., J. Chromatogr., 47, 527 (1970).

266. Witk M., Brill U., Arch. Pharm., 301, 282 (1968).

267. Wolfrom M. L., de Lederkremer R. M., Schwab G., J. Chromatogr., 22, (1966).

268. Wollenweber P., J. Chromatogr., 9, 369 (1962).

269. Wu Chu B. L, Mika E. S., Solomon M. J., Crane F. A., J. Pharm. Sci., 58, 1073 (1969).

270. Wullen H., Thielemans H., J. Pharm. Belg., 23, 307 (1968).

271. Zarebska I., Ozarowski A., Farm, pol., 22, 518 (1966).

272. Zarnack J., Pfeifer S., Pharmazie, 19, 216 (1964).

273. Zinser M., Baumgartel Ch., Arch. Pharm., 297, 156 (1964).

274. Zurkowska J., Ozarowski A., Acta Pol. pharm., 23, 55 (1966).

275. Blass K. C, Thibert R. S., Draisey T. F., J. Chromatogr., 95, 75 (1974).

276. Court W. E., Habib M. S., J. Chromatogr., 80, 101 (1973).

277. De Zeeuw R. A., Dull G. G., J. Chromatogr., 110, 279 (1975).

278. Chebregzabher N.. Rufini S., Ciuffini G., Lato M., J. Chromatogr., 95, (1974).

279. Gol-Piertras F., Farm, pol., 31, 311 (1975).

280. Grabowska I., Sell E., Farm, pol., 31, 101 (1975).

281. Habib M. S., Planta med., 27, 294 (1975).

282. Hammerstingel H., Reich G., J. Chromatogr., 101, 408 (1974).

283. Hansen S. A., J. Chromatogr., 105, 388 (1975).

284. Hansen S. A., J. Chromatogr., 107, 224 (1975).

285. Hrulka K- J., Franek M., J. Chromatogr., 93, 475 (1974).

286. Huber 1., Rutschbeil J., Kressing R., Pharm. Zentralh., 102, 783 (1964).

287. Christopoulos G. N., Wu Chen N.. Toman A. J., J. Chromatogr., 106, (1975).

288. Jain N. C, Laung W. J., Budd R. D., Sneath T. C, J. Chromatogr., 115, (1975).

289. Janes K-, Bumba V., Pharmazie, 29, 544 (1974).

290. Lastovkova M., Cs. farm., 24, 212 (1975).

291. Lindenbaum J., Clin. Pharmacol. Then, 17, 290 (1975).

292. Liras P., J. Chromatogr., 106, 238 (1975).

4(П Специальная часть 293. Луцик М. Д. Хим. природн. соед., 1974, 197.

294. Menkynova ]., Farm, obzor, 44, 119 (1975).

295. Metwally A. M., Pharmazie, 30, 92 (1975).

Ncumuller 0. A., Kuhn H. J., Schenck G. 0., Santavy F., Ann., 674, 296.

(1964).

297. NoirfaliseA., Mees 0., J. Chromatogr., 31, 594 (1967).

298. Paris M., Ann. pharm. franc., 32, 97 (1974).

299. Pfeifer S., J. Chromatogr., 41, 127 (1969).

300. Potesilova #., Hrbek J., Santavy F., Coll. Czechoslov. Chem. Commun., 32, 141 (1967).

301. Potesilova H., Wiedermannova J., Santavy F., Coll. Czechoslov. Chem. Com mun., 34, 3642 (1969).

302. Pranitis P. A. F., Stolman A., J. Chromatogr., 106, 485 (1975).

303. Pruska-Wysocka В., Farm, pol., 31, 775 (1975).

Ranieri R. L, McLaughlin J. L., J. Chromatogr., Ill, 234 (1975).

304.

305. Reichelt I., Kudrndc S., J. Chromatogr., 87, 433 (1973).

Roerig D. L., Lewand D., Mueller M., Wang R. I. M., J. Chromatogr., 110, 306.

349 (1975).

307. Seydel H., Voigt R., Parmazie, 24, 531 (1967).

308. Simon J., Lederer M., J. Chromatogr., 63, 448 (1971).

309. Smarzynska D., Cegielska A., Matuszewicz A., Farm, pol., 31, 223 (1975).

310. Sperling A. R., J. Chromatogr. Sci., 12, 265 (1974).

311. Stahl E., Schmitt W., Arch. Pharm., 307, 925 (1974).

Steyn J. M., Hundt H. K. L., J. Chromatogr., Ill, 463 (1975).

312.

Szymkowska K-, Lagowska Z., Piekarewicz M., Farm, pol., 31, 211 (1975).

313.

314. Sarsunova M., Hadrabova V., Cs. farm., 24, 81 (1975).

315. Sarsunova M., Hrivhak J., Pharmazie, 29, 608 (1974).

316. Thielemann H., Grch F., Pharmazie, 30, 255 (1975).

317. Tobolska Й., Kanarkowski R., Songin W., Farm, pol., 31, 205 (1975).

318. Vinson J. A., Hooyman J. E., J. Chromatogr., 105, 415 (1975).

Woodford W. J., J. Chromatogr., 115, 678 (1975).

319.

320. Zullich G., Braun W., Lisboa B. P., J. Chromatogr., 103, 396 (1975).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА M., J. C h r o m a t o g r., 123, 175 ( 1 9 7 6 ).

321. Lepri L., Desideri P. G., Lepori S., J. C h r o m a t o g r., 130, 2 0 9 ( 1 9 7 7 ).

322. Thunell 323. Guven К- С Gungri Т., Z. analyt. Chem., 283, 32 (1977).

324. Hassan S. M., Pharmazie, 33, 237 (1978).

325. Christie I., White M. W., Wiles J. M., J. Chromatogr., 120, 496 (1976).

326. Kowalewska K-, Speichert H., Herba polon., 22, 275 (1976).

327. Prosek M., Kucan E., Katie M., Bano M., Chromatographia, 9, 273 (1976).

328. Prosek M., Kucan E., Katie M., Bano M., Chromatographie, 9, 325 (1976).

329. Sondack D. L, J. Pharm. Sci., 63, 1141 (1974).

330. Baggi T. R., Rama Rao N. V., Murty H. R. K-, Forensic Sci., 8, 265 (1976);

Chem. Abstr., 86, 101533g (1977).

331. Дрожжина В. В., Чичиро В. Е., Буленков В. И. Фармация, 25, № 5, (1976).

332. Гаевский А. В. Научн. работы ВИЛР, № 5, 171 (1975).

333. Lopez J. В., Buttery J. E., De Witt G. F., Mod. Med. Asia, 14, No. 6, (1978);

Chem. Abstr., 89, 140103y (1978).

334. Rama Rao N. V., Murty H. R. K-, Baggi T. R., Current Sci., 45, 332 (1976);

Chem. Abstr., 85, 14802e (1976).

335. Rama Rao N. V., Tandon S. N., J. Chromatogr. Sci., 16, 158 (1958).

336. Thielemann H., Sci. pharm., 45, 240 (1977).

337. Viala A., Estadieu M., Eur. J. Toxicol. Environm. Hyg., 9, No. 2 (1976);

Chem. Abstr., 85, 73030z (1976).

402 Специальная часть 338. Wijesekera R. О. В., Rajapakse L. S., Chetvarajan D. W., J. Chromatogr., 121, 388 (1976).

339. Jung Z., Jungova M., Cs. farm., 22, 195 (1973).

340. Gober В., Timm U., Dohnert H., Zentralblatt, 116, 13 (1977).

341. Gober В., Timm P., Pfeifer S., Pharmazie, 31, 551 (1976).

342. Коржавых Е. А. Фарм. ж. (Киев), 31, № 4, 43 (1976).

343. Борисов В. Н., Пикова Е. А., Защепилова Г. Л., Баньковский А. И. Хим. фарм. ж., 10, № 12, 116 (1976).

344. Feldheim W., Relmerdes E. H., Storm G.-R., Z. Lebensmitt. Untress. Forsch., 165, 204 (1977).

345. Thielemann И., Sci. Pharm., 46, 134 (1978).

346. Ahlberendt I., Z. Med. Labortech., 17, 143 (1976);

Chem. Abstr., 85, 173617q (1976).

347. Armand P., Gayte-Sorbier A., Ann. Pharm. Fran?., 33, 559 (1975).

348. von Arx E., et al., J. Chromatogr., 120, 224 (1976).

349. Bertrand O., Kroviarski Y., Boivin P., J. Chromatogr., 147, 435 (1978).

350. Bucher D., Chromatographia, 10, 723 (1977).

351. Munier R. L, Gervais Ch., Drapier A. M., C. R. Acad. Sci., ser. D, 281, 1757 (1975).

352. Myszkowska K-, Deptula S., Lutoclawska G., Sawicka Т., Acta Polon. Pharm., 32, 623 (1975).

353. Леслякас И. И. и сотр. Изв. АН СССР (сер. хим.), 1974, 1872.

354. Szumilo H., Soczewinski E., J. Chromatogr., 124, 394 (1976).

355. Tarr G. E., Anal. Biochem., 63, 361 (1975).

356. Weise M., Oken D. R., J. Chromatogr., 152, 172 (1978).

357. Wesenberg J. C, Thibert R. J., Microchim. Acta, 1, 469 (1977).

358. Avigad В., J. Chromatogr., 139, 343 (1977).

359. Bailey D. S., J. Chromatogr., 130, 431 (1977).

360. Walkley I. W., Tillman I., J. Chromatogr., 1977, 132, 172.

361. Бочваров Я-, Комиссаренко Н. Ф. Хим. природн. соед., 1977, 581.

362. Ellnain-Wojtaszek M., Kowalewski Z., Lutomski J., Skrzypczakowa L., Herba polon., 21, 377 (1975);

Chem. Abstr., 85, 68337a (1976).

363. Faber D. В., De Kok A., Brinkman U. A. Th., J. Chromatogr., 143, 95 (1977).

364. Георгиевский В. П., Пушкова Е. И. Фарм. ж. (Киев), 30, № 5, 84 (1975).

365. Kartnig Th., Kobosil P., J. Chromatogr., 138, 238 (1977).

366. Szabo A., Tomorkeny E., J. Chromatogr., 151, 90 (1978).

367. Власенко Л. М. Фармация, 25, № 4, 45 (1976).

368. Власенко Л. М. Фармация, 26, № 2, 45 (1977).

369. Zullich G., Braun W., Lisboa В. P., J. Chromatogr., 103, 396 (1975).

5.7. Вспомогательные и диагностические вещества 5.7.1. Красители Сорбенты. Синтетические и природные красители удается ус пешно хроматографировать практически на всех известных хро матографических материалах. Вследствие того что они не тре буют специального обнаружения, ими пользуются как удобным средством для изучения разделяющей способности различных сорбентов и в некоторых работах теоретического значения. Для красителей — главным образом для сложных смесей и смесей из природных источников — очень часто применяют распределитель ную хроматографию, причем в качестве носителя неподвижной Специальная часть фазы служит силикагель или целлюлоза [29], сахароза [35], крахмал [14], кремнезем [11, 29] и т. д. Наилучшие результаты были получены с целлюлозой;

такие сорбенты, как окись алюми ния и кремнезем, обладают одинаковой разделительной способ ностью, но для них характерно быстрое выцветание пятен. Сили кагель дает менее удовлетворительные результаты. Удобно поль зоваться смешанными материалами, которые, как правило, дают лучшие результаты, чем индивидуальные. Пригодны, например, смеси полиамида и кремнезема [33], силикагеля и кремнезема [35] или полиамида и силикагеля [26, 31]. Удобна также адсорб ционная хроматография на слоях полиамида [13, 54, 89, 91] и сефадекса [26, 30, 52];

гель-проникающая хроматография на се фадексе оказалась пригодной и для определения молекулярной массы красителей [30]. Из менее обычных сорбентов необходимо упомянуть сахарозу [45] и гидроокись железа [59].

Системы растворителей и применение. Обзор хроматографиче ского разделения ряда синтетических красителей приведен в табл. 67. Финские авторы Сало и Сальминен [68] для идентифи кации отдельных красителей помимо значений RF пользовались также спектральными данными (после элюирования красителя из слоя) при измерении в щелочном и кислом растворах.

Выделение красителя проводят при помощи высококачественной шерстяной ткани. 5—10 г исследуемого пищевого продукта, содержащего крахмал, смеши вают с раствором аммиака (5%-ный раствор в 70%-ном эталоне), смесь центри фугируют, отделяют жидкость, упаривают досуха и остаток растворяют в 30 мл воды. Добавляют 5 мл 10%-ного раствора бисульфата калия и смесь кипятят с полоской шерстяной ткани, пока краситель не адсорбируется на ней. Для из влечения красителя из ткани применяют 5%-ный раствор аммиака. Аммиачный раствор упаривают до небольшого объема и наносят на пластинку. Таким же образом можно выделить красители из пищевых продуктов, содержащих жела тин, из фруктовых соков, мармелада и засахаренных фруктов.

Монтаг [49] описал определение некоторых жирорастворимых природных и синтетических красителей, выделенных из различных • пищевых продуктов.

Жиры или масла отделяют экстракцией петролейным эфиром и вытяжку пропускают через колонку с окисью алюминия. Жировые вещества вымывают петролейным эфиром, а красители элюируют этанолом. Масляный желтый, ко торый также элюируется петролейным эфиром, можно снова адсорбировать из элюата на окиси алюминия, которую затем отфильтровывают и краситель из нее извлекают этанолом.

Некоторые синтетические красители (индофенол, желтый Мар циуса, судан красный, жировой оранжевый, жировой красный, жировой желтый и масляный желтый) можно разделить на си ликагеле G в смеси равных объемов бензола и четыреххлористо го углерода (1:1). Если окажется необходимым, дальнейшее раз деление можно проводить бензолом.

Таблица Значения hRF некоторых синтетических красителей Поглощение 8 Поглощение (^иликагель Сефадекс G- Целлюлоза MN Целлюлоза Краситель сз С С В В 0,1 н. NaOH 0,1 н. НС1 0,1 н. NaOH 0,1 н. НС1 В С5 С С СЗ С С 4а Новый голубой 595 420 640 Индантреновый синий 610 600 — — 11 Индигокармин — 610 — 440 И Гвинея зеленый 610 620 420 Патентный зеленый — 610 620 430 Кислотный желтый — 395 390 490 42 Тартразин 10 395 — — 430 9 лета-Оранжевый — — 440 480 43 39 пара-Оранжевый — 450 480 41 Азорубин — 500 515 400 49 Нафтоловый пурпуровый 465 505 — — 44 Амарантовый S 495 520 360 8 5 Бриллиантовый пунцовый 4 RC — — 440 510 9 20 Пунцовый 6 R — 430 2 Огненно-красный 460 490 — — 59 Сине-черный 580 570 390 410 1 0 Кислотный фиолетовый 595 620 420 Фенил-фиолетовый 380 600 600 Пунцовый SX 480 500 360 370 Эритрозин — — — 86 55 Хинолиновый желтый Метиловый оранжевый Первый максимум, нм [68].

СЗ та же система [99];

,.,,, Второй максимум, нм [68].

С4 ацетоуксусный эфир — метанол — концентрированный аммиак ( 5 : 2 : 1 |/, hRp отнесено к метилоранжу. С5 ацетоуксусный эфир — пиридин — концентрированный аммиак ( 5 : 2 : 1 ) 1/];

С6 этилацетат — пиридин — вода ( 7 : 3 : 1 ) [7];

Обозначения: С7 4%-ный раствор сульфата натрия [52];

С1 2%-ный раствор цитрата натрия в 5%-ном аммиаке [68]' С8 вода [52].

С2 грет-бутанол — пропионовая кислота — вода (50: 12': 38;

0,4 КС1) [68];

406 Специальная часть Природные красители (каротин и красящие вещества зелени и овощей) можно разделять в системе хлороформ — уксусный ан гидрид (75:2) или метилэтилкетон — уксусная кислота — мета нол ( 4 0 : 5 : 5 ).

Биксин из маргарина экстрагируют бензолом и жировые примеси отделяют с помощью окиси алюминия (жиры затем элюируют из колонки бензолом).



Pages:     | 1 |   ...   | 10 | 11 || 13 | 14 |   ...   | 19 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.