авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 19 |

«Doc. RNDr. PhMr. Magda SAR50NOVA, DrSc. RNDr. Vladimir SCHWARZ, CSc. RNDr. Cestmir MICHALEC A kolektiv CHROMATOGRAFIA NA TENKYCH VRSTVACH VO ...»

-- [ Страница 8 ] --

244 Специальная часть Количественное определение мефенгидрамина в готовой пероральной форме, содержащей 25 мкг препарата, производили после измельчения, экстракции эта нолом и хроматографического разделения в количествах, соответствовавших 100 мкг действующего начала. Одновременно на эту же хроматограмму наносили дважды по 100 мкг эталона. После разделения определяемое вещество обнару живали в ультрафиолетовом освещении или действием паров иода. Проявленные пятна очерчивали механически и удаляли иод испарением. Разделенные таким способом вещества извлекали из окиси алюминия метанолом и удаляли метанол отгонкой в вакууме. С извлеченным остатком проводили цветную реакцию, ис пользуя 1 мл раствора серной кислоты и формалина. Смесь оставляли стоять при комнатной температуре в течение 1 ч и интенсивность образующейся окрас ки измеряли при длине волны 480 нм в кювете объемом 1 мл на фотометре Пульфриха с приставкой Эльфо.

Определение антазолина в растворе санорина-аналергина в присутствии нафтизина проводили аналогично определению мефенгидрамина. Кроме соответ ствующего количества раствора определяемого вещества на хроматограмму на носили 75 мкг эталонного образца. После хроматографирования вещество извле кали этанолом и раствор выпаривали досуха. При реакции остатка антазолина с 1 мл раствора га-диметиламинобензальдегида в серной кислоте после нагревания в течение 1 ч на водяной бане при температуре 90 °С образовывалось характер ное окрашивание, интенсивность которого измеряли при 420 нм в кюветах объемом 1 мл с помощью указанного фотометра. Точность определения колеба лась в пределах ±2,5%. Экспериментально найдено, что эти вещества удобнее определять в видимом, нежели в ультрафиолетовом свете.

5.2.4. Холинергические вещества Разделение веществ из группы холинергических, к которым относятся производные холина, циклические четвертичные основа ния, ароматические соединения с третичным атомом азота и др., исследовано сравнительно мало [5,23,41,54].

Мацек и сотр. [23] проводили разделение некоторых из ве ществ этой группы на слоях силикагеля G и окиси алюминия.

В качестве подвижной фазы они пользовались системой хлоро форм— этилацетат ( 1 : 1 ), насыщенной метиламином. Они приме няли также систему этилацетат — метанол — вода — уксусная кис лота (70 : 15 : 10 : 5). Силикагель G использовали для разделения пралидоксима и сопутствующих загрязнений или продуктов их раз ложения, а окись алюминия — для разделения холина, метахоли на, ацетилхолина, иодида ацетилхолина, р-метилхолина, карбахо лина, дитилина, а также бетамехола. Тейлор [41] работал с систе мой я-бутанол — муравьиная кислота — вода (60 : 15 : 35) и (66 :17:

:17). Бейзер [5] отделял холин от хлорхолина, ацетилхолина и хлорида тетраметиламмония на слоях целлюлозы MN 300 без связующего в системе хлороформ — метанол — вода (75 : 22 : 3) или н-бутанол — уксусная кислота — вода ( 4 : 1 : 5 ). Он пользовался также комбинацией тонкослойной хроматографии и электрофореза главным образом для выделения холинергических агентов с чет вертичным атомом азота в молекуле. Обнаружение производилось реактивом Драгендорфа (Д53а).

Специальная часть 5.2.5. Противогистаминные вещества Противогистаминные вещества обладают разнообразным стро ением. Их можно разделить по характеру концевых групп, свя занных с ароматической частью молекулы, либо по характеру этой последней. Дз антигистаминных веществ, ароматическая часть которых представляет собой многоядерный гетероцикл, наи более широкое применение нашли производные фенотиазина (см.

также разд. 5.1.5.1, посвященный психотропным веществам).

Сорбенты. Разделением ряда антигистаминных веществ на тонких слоях силикагеля G и GF254 занимались Аве и сотр. [2], Файк и Саншайн [10], Шульце [33], Кочин и Дали [9], Сан шайн и сотр. [34], Фува и сотр. [14], Мацек и сотр. [23]. На слоях силикагеля, приготовленных различными способами, работали Файк и Саншайн [10]. Шаршунова и сотр. [36] пользовались для разделения этих веществ незакрепленной окисью алюминия.

Системы растворителей. Файк и Саншайн [10] подвергали разделению различные комбинации антигистаминных веществ в системе циклогексан — бензол — диэтиламин (75:15:10);

при де лении на силикагеле, приготовленном с 0,1 н. раствором бисульфи та калия, они пользовались метанолом. Кочин и Дали [9] прово дили разделение антигистаминных веществ в системах метанол — м-бутанол и бензол — диоксан — аммиак (12 : 7 : 1), Мацек и сотр.

[23] пользовались системой этилацетат — циклогексан (7 : 13), на сыщенной метиламином. Фува и сотр. [14] применяли систему хло роформ— метанол — аммиак ( 9 8 : 1 : 1 ). Другие исследователи [36] проводили разделение смесей противогистаминных веществ в системах хлороформ — этанол и бензол — этанол в различных со отношениях.

Обнаружение. Для обнаружения этих веществ применяли мио гие реактивы. Пригодными оказались пары иода (Д 104), подкис ленный раствор иода и иодида калия (Д 108), раствор хлорида палладия в разбавленной соляной кислоте (ДЭЗ), иодоплагинат калия (Д 109), реактив Драгендорфа, модифицированный по Мюнье (Д 53а), и реактив Маркиза (Д 134).

Применение. Хроматографией в тонком слое пользовались для деления антигистаминных веществ фенотиазинового ряда. Аве и •сотр. [2] в своей работе исследовали оптимальные условия их разделения в трех трехкомпонентных системах. Одновременно они изучали влияние строения веществ, подвергнутых разделению в этих системах, на их величину RF. Обнаружение проводили с по мощью реактива Маркиза;

различия в окрашивании приведены в табл. 27. Различия в поведении антигистаминных веществ фено тиазинового ряда при хроматографировании и обнаружении раз Таблица Цветные реакции противогистаминных веществ с реактивом Маркиза [2] Лекарственный препарат массового Окраска под действием реактива Маркиза (Д 134) производства Гистадил Коричнево-фиолетовая Тенфадил То же Нильгистин Фиолетовая — Ильвин — Тибернин — Симпен — Авил Пирибензамин — — Антистин (антазолин) Желтая Амбодрил Беиадрил (димедрол) Сандостен Фиолетовая Красно-фиолетовая Необридал Кремовая Дипараллен Бирюзовая Систрал — Прагман Кукурузно-желтая Мефанин Теофорин — Аллекур — Омерил (диазолин) — Хромово-желтая Кольтон — Левистин — Совентол — Пиронил Аспазан Серая Бирюзовая Кейтон — Миостинин Кремовая Атаракс Сирен ево-фиолетовая Коватикс Бонамин Кремовая Постафен Фенотиазин Красно-коричневая Доминал Хромово-желтая Андантол То же Специальная часть Продолжение табл. Окраска под действием реактива Лекарственный препарат массового производства Маркиза (Д 134) Фиолетовая Мегафен (аминазин) Красная Верафен Атозил (дипразин) Фуксиново-красная Триксал Бледно-розовая Псиквил Розовая Латибон Фуксиново-кр асная Репельтин (терален) Розовая Падизал Фиолетово-красная Тьемарил Бледно-розовая Ярко-охровая Пакатал Красная Дилутил Фуксиново-красная Пипрадол Фиолетовая Токсилан Розовая Ятронейрал (трифтазин) Нейроцил (левомепромазин) Сиренево-фиолетовая Декантан Розовая Меллерил (тиоридазин) Темно-бирюзовая Циатил Ярко-розовая Лиоген (фторфеназин) Красно-охровая Красно-фиолетовая Рандолектил Красно-охровая личными реактивами исследовали Боймлер и Риппштейн [3], а также Чулис [20] (табл. 28) и другие авторы [36, 55].

Количественное определение. Шаршунова и сотр. [36] опреде ляли динезин спектрофотометр'ическим методом после экстракции из слоя сорбента. Моррисон и сотр. [25] сначала элюировали пят на веществ 5 мл 1%-ной соляной кислоты и после установки рН 8 в среде бензола или бензола с добавкой 1% изоамилового спирта количественно определяли противогистаминные вещества фотометрически по интенсивности окрашивания с бромтимоловым синим при длине волны 410 нм;

количество вещества рассчитыва ли по величине пятна.

248 Специальная часть Таблица Значения hRF и цветные реакции противогистаминных и психотропных препаратов Окраска под действием hRp Препарат в ультрафиолето хлорида палладия реактива Драгендорфа вом свете (D 93) (D 53а) Красно-коричне Ацепромазин 33—35 Оранжевая Красная вая Фиолетовая 37—39 Синяя Оранжевая Пропазин Белая 44—46 Голубая Имизин » Красно-коричне Красная 47— Тиоридазин вая 49—50 То же Аминазин Оранжевая »

5 3 - 5 5 Синяя Фиолетовая Динезин »

Дипразин 55— 55—57 Голубая Желтоватая Хлорпротиксен 57—59 Синяя Фиолетовая Изотиазин »

62—64 »

Левомепромазин 84—86 Коричневая Элениум Желтая Фенотиазин 89—91 Темная Синяя Красно-фиолето вая Сорбент — силикагель G.

Длина пути 10 см.

ЛИТЕРАТУРА 1. Alessandro S., F a r m a c o ( P a v i a ), E d i z i o n e p r a t i c a, 22, A., Mari F., Settecase 437 ( 1 9 6 7 ) ;

C h e m. A b s t r., 67, 9 4 0 5 3 ( 1 9 6 7 ).

W., P h a r m. Z t g., 107, 1333 ( 1 9 6 2 ).

2. Awe W., Tracht H. G., Schulze 3. Bdumler S., A r c h. P h a r m., 296, 301 ( 1 9 6 3 ).

J., Rippstein H., E x p e r i e n t i a, 20, 2 3 3 ( 1 9 6 4 ).

4. Bayzer 5. Bayzer #., J. C h r o m a t o g r., 24, 372 ( 1 9 6 6 ).

6. Beckett N. H., J. P h a r m. P h a r m a c o l., 15, 2 3 6 ( 1 9 6 3 ).

A. H., Choulis J., P h a r m. Z t g., 110, 1965 ( 1 9 6 5 ) ;

C h e m. A b s t r., 6 3, 7. Breinlich (1965).

8. Buchi J., Fresen J. A., P h a r m. A c t a H e l v., 4 1, 551 ( 1 9 6 6 ).

9. Cochin J., Daly I. W., J. p h a r m a c o l. e x p. T h e n, 139, 154 ( 1 9 6 3 ).

30. Fike W. W., Sunshine J., A n a l y t. C h e m., 37, 127 ( 1 9 6 7 ).

1 1. Fiori M., J. C h r o m a t o g r., 3 1, 71 (1967).

A., Marigo 12. Forest J. E., Heacock R. A., J. C h r o m a t o g r., 44, 638 ( 1 9 6 9 ).

P h a r m. W e e k b l., 102, 659 ( 1 9 6 7 ) ;

C h e m. A b s t r., 67, 13. Fresen J. A., (1967).

Т., Tanaka #., Yakiwaigaku, 1963, 24, 123;

Chem. Abstr., 14. Fuwa Т., Шо 61, 15934.

Специальная часть 15. Gasco M. R., Gatti G., Boll. Chim. Farm., 104, 639 (1965).

16. Ganshirt H., Malzacher H., Arch. Pharm., 293, 925 (I960).

17. Halmekoski J., Suomen Kemistilehti, В 36, 58 (1963);

Chem. Abstr., 59, (1963).

18. Hauptmann S,, Winter J., Chraomtogr., 21, 338 (1966).

19. Hermanek S., Schwarz V. Cekan Z., Pharmazie, 16, 566 (1961).

20. Choulis N. H., J. Pharm. Sci., 56, 196 (1967).

21. Choulis N. H., Carey С. Е., J. Pharm. Sci., 57, 1048 (1968).

22. Kartnig Th., Still F., Sci. pharm. (Austr.), 43, 6 (1975).

23. Macek K., Vecerkova L, Stanislavova L, Pharmazie, 20, 605 (1969).

24. Matsui F., Watson J. R., French W. N., J. Chromatogr., 44, 109 (1969).

25. Morrison J. C, Chatten L. G., J. pharm. Sci., 33, 1205 (1964).

26. Porges E., Horvdthova V., Vnitfni lek., 10, 1019 (1964.).

27. Potter W. P., de, Vochten R. F., Schaepdryver J. P. de, Heymons C, Expe rientia, 21, 482 (1965).

28. Roberts D. J., Broadley K. J., Analyt. chim. Acta, 27, 407 (1967).

29. Sandrl-Cavicchi G., Quaglio M. P., Braghlrolll A., Boll. Chim. Farm., 105, 670 (1966).

30. Segura-Gardona R., Sohrlng K-, Med. Exptl., 10, 251 (1964).

31. Scheibe E., Z. Humboldt-Univ. (Berlin), Math.-Naturwiss. Reihe 1952/1953, 2, 15;

Anal. Abstr., 2, 2211 (1955).

32. Schwarz V., Sarsunova M., Pharmazie, 19, 267 (1964).

33. Schulze W., in Stahl E., Dunnschicht-Chromatographie, 2. Aufl. Springer-Ver lag, Berlin, 1967, 492.

34. Sunshine J., Fike W. W., Landesman B. A., J. forens. Sci., 11, 428 (1966).

35. Sarsunova M., Nguyen thi Kim Chi, Cs. farm., 15, 474 (1966).

36. SarMnova M., Pharmazie, 18, 748 (1963).

37. Sarsunova M., Cs. farm., 17, 20 (1968).

38. Sarsunova M., Cs. farm., 22, 259 (1968).

39. SarSunovd M., Pharmazie, 18, 748 (1963).

40. Takahashi M., Gjessing R., Clin. chim. Acta, 36, 369 (1972).

41. Taylor E. H., Lloydia, 27, 96 (1964);

Chem. Abstr., 61, 13129 (1964).

42. Tatsuzawa M., Hashiba S., Okawara A., Jap. Analyst, 17, 1116 (1968).

43. Waldl D., Naturwiss., 50, 614 (1963).

44. Waldi D., Mitt. Dtsch. pharm. Ges., 33, 1 (1963).

45. Wollman, Ch., Nagel S., Scheibe E., Pharmazie, 21, 665 (1966).

46. Subert J., Blesovd M., Bene§ L., Ambrovic P., Borovansky A., Cs. farm., 24, 5 (1975).

47. Tmlelemann H., Z. Chemie, 14, 4 (1974).

48. Zivanov-Stakic D., Panic D., Haque S. H., Arch. Farm., 249, No. 2, 55 (1974);

Chem. Abstr., 82, 160315 (1975).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА A., C s. farm., 26, 198 (1977).

49. Bachrata M., Blesovd M., Bezdkovd Z., LukdS 50. Z., F a r m. P o l., 34, 401 ( 1 9 7 8 ).

Pawelczyk E., Plotkowlak 51. W., B i u l. I n s t. L e k o w, 2 2, 3 8 2 ( 1 9 7 5 ).

Reszko-turska 52. Shah J. J., Shah R. J., J. A s s o c. offic. A n a l. C h e m., 59, 1416 ( 1 9 7 6 ).

53. H., Z. C h e m i e ( L e i p z i g ), 14, 4 ( 1 9 7 4 ).

Thielemann 54. V. V., Zyka J., C s. f a r m., 2 5, 102 ( 1 9 7 6 ).

Machdcek 55. H., S c i. P h a r m., 46, 139 ( 1 9 7 8 ).

Thielemann 250 Специальная часть 5.3. Лекарственные средства, действующие на кровеносную, пищеварительную и выделительную системы 5.3.1. Диуретики* О разделении ксантопуриновых диуретиков кофеина, теобро мина, теофиллина и их двойных солей уже было упомянуто в раз деле об аналептиках (разд. 5.1.1). Многие авторы исследовали тонкослойную хроматографию ртутных и не содержащих ртути диуретиков с сульфонамидным или фурановым строением.

Сорбенты. Для разделения не содержащих ртути диуретиков Адам и Лапьер [1] и другие [2, 7—9, 15, 16, 24, 25, 27] пользова лись силикагелем;

эти вещества разделяли и на закрепленной оки си алюминия [1, 2, 13], И на слоях полиамида [2]. Гувен подвер ' гал разделению ртутные диуретики на силикагеле [39].

Системы растворителей. При разделении бензотиазиновых диуретиков на силикагеле G Адам и Лапьер [1] пользовались си стемой этилацетат — бензол ( 8 : 2 ), а на окиси алюминия — этил ацетатом;

бензотиазид и циклобензотиазид подвергали разделению на силикагеле G в этилацетате и на окиси алюминия — в системе хлороформ — н-пентанол ( 8 : 2 ).

Для разделения эзидрекса (дихлотиазида), гигротона (хлор талидона), диамокса (диакарба) и других диуретиков применяли систему толуол — ксилол — диоксан — пропанол-2—25%-ный ам миак ( 1 : 1 : 3 : 3 : 2 ) [22]. Маас и сотр. [23] выделили 8 нертутных диуретиков из мочи пациента, используя 7 различных систем ра створителей. Для разделения наиболее удобной оказалась двумер ная хроматография [1]. В одном направлении элюирование вели в системе н-гексан — ацетон — диэтиламин ( 4 : 4 : 2 ), в другом — в системе хлороформ — метанол — диэтиламин (80:15:5). Брайн лих и сотр. [8] делили нитрофураны и метронидазол в системах н бутанол — ледяная уксусная кислота — вода (90 : 7 : 3) и хлоро форм— диэтиламин (9:1), а Антковяк и сотр. [2] для их разделе ния пользовались смесью пиридин — бензол ( 1 : 1 ). Герлах [16] подвергал разделению 5-нитрофурфурол, нитрофураль ( фураци лин), нитрофурантоин (фурадонин) и фуразолидон в системе ме тиленхлорид — метанол—10%-ный аммиак (80:20:3). При раз делении производных нитрофурана на силикагеле G удобными оказались также системы н-бутанол — ацетон — эфир ( 1 0 : 5 : 8 5 ) и бензол — диоксан (1:1) [36]. На слоях окиси алюминия с крахмалом в качестве связующего эту группу разделяли в систе ме ацетон — уксусная кислота (100:2) [2]. Для разделения ртут * Для удобства изложения в этот раздел включены данные ТСХ некоторых пероральных химиотерапевтических средств. — Прим. ред.

Специальная часть ных диуретиков (натриевой соли мерсалила, конида, мерохинола и меркурофиллина) на силикагеле G Гувен и сотр. [17] пользова лись системой н-бутанол — уксусная кислота — вода (3:1:1).

Обнаружение. Для обнаружения не содержащих ртути диуре тиков наиболее удобным оказалось пользоваться ультрафиолето вым светом при длине волны 254 нм;

при применении флуорес центных индикаторов разделенные вещества обнаруживали по тушению флуоресценции [17]. Гувен и сотр. [17] открывали ве щества, содержащие аминогруппу, смесью 10%-ной сернокислой меди и 2%-ного аммиака в отношении ( 5 : 1) (Д 182). Менее удоб ны n-диметиламинобензальдегид (Д 36) и ванилин с серной кис лотой (Д135). Для обнаружения тиазидных диуретиков пользо вались также реактивами Браттона — Маршала (Д 21) [18], Фи рона (Д 68) [26] и Фолина — Чокальте (Д 75). Производные нитрофурана открывали по их собственной окраске, а также в ультрафиолетовом свете. Для более отчетливого наблюдения этих веществ Антковяк и сотр. [2] применяли раствор бариевой соли дифениламин-4-сульфоновой кислоты. После опрыскивания хрома тограммы они обнаруживали разделенные вещества в дальней УФ-области. Удобно обнаруживать эти вещества 0,5 н. раствором едкого кали в этаноле (Д 78), который давал с нитрофураном оранжевое, а с фуразолидоном и фурадонином — желтое окраши вание [6, 11]. Брайнлих [8] для обнаружения производных нитро фурана пользовался раствором 2,4-динитрофенилгидразина в 2 н.

НС1 (Д 46а) и раствором хлорида титана III. После восстановле ния этих веществ он подвергал их действию паров аммиака и опрыскивал хроматограмму раствором нафтохинон-4-сульфоната.

Применение. Кроме упомянутой возможности разделения сме сей различных диуретиков [1, 2, 17, 22, 23, 26, 35, 40] тонкослой ную хроматографию применяли при исследовании случайного гидролиза этих веществ [27] и для изучения их стабильности [15]. Осборн [27] применил тонкослойную хроматографию для исследования строения тиазидных диуретиков. Брайнлих [8] об наруживал производные нитрофурана в присутствии других ве ществ, например виоформа (энтеросептола) и акрифлавина. Вун дерлих [37] исследовал продукты разложения фурацилина, дру гие исследователи [3] подвергали разделению и обнаруживали нитрофуран, ауреомицин (хлортетрациклин), хлорамфеникол (ле вомицетин), сульфатиазол и криогенин в различных готовых ле карственных препаратах;

анализу диуретиков и гипотензивных средств посвящены статьи Стоса [41] и Уоллеса [42].

Количественное определение. Определение нертутных диуре тиков разра^батывали Смит и Герман [31]. Для этой цели после элюирования веществ из сорбента они пользовались инфракрасной 17' 252 Специальная часть спектроскопией. Определением нитрофурановых производных пос ле их разделения занимались Бортолетти и Перлотто [7]. Кози и сотр. [10] определяли фурадонин в смеси с левомицетином и сульфапиридазином.

5.3.2. Пероральные противодиабетические средства и инсулин Сорбенты. Многие авторы [3—8] подвергали разделению пероральные противодиабетические препараты на слоях силикаге ля. Некоторые из них [5,6] пользовались готовыми пленками силикагеля, в том числе и чехословацкими [7,8]. На смешанных слоях целлюлозы и силикагеля (1:1) работали Боймлер и сотр.

[4]. Для выделения инсулина применяли также силикагель [18].

Системы растворителей. Выделение пероральных противодиа бетических веществ на слоях силикагеля G проводили з системах н-бутанол — хлороформ — метанол — 25%-ный аммиак (40:15:15:

: 15) и н-бутанол — хлороформ — диэтиламин (45:45:5) [25]. При разделении их на силикагеле G и на готовых пластинках с сили кагелем пользовались системой н-пропанол — циклогексан (185:91,5) или н-пропанол — бензол — циклогексан (18:28:54) и циклогексан — н-пропанол (83,3:82,4) [33]. Другие авторы при меняли систему н-бутанол — хлороформ — метанол — 25%-ный аммиак ( 8 : 3 : 3 : 3 ) [25]. Для разделения глибутиазола, глибу тамида (букарбана) и глизобузола удобна система хлороформ — метанол (10:1) [21]. Стрикленд [32] при работе на силикагеле пользовался водой, насыщенной к-бутанолом, системой диоксан — аммиак — вода ( 1 0 0 : 3 : 1 0 ) или ацетон — бензол — вода ( 6 5 : 3 0 :

:5).

Обнаружение. Пероральные вещества обнаруживали в ультра фиолетовом свете и с помощью реактива Драгендорфа (Д53а).

Если перед высушиванием слой опрыскивали раствором хлорида олова и метанольным раствором нингидрина, подкисленным уксус ной кислотой, вещества проявлялись в виде фиолетовых пятен Трименение. Из этой группы веществ подвергали разделению на слоях силикагеля хлорпропамид, бутамин, бутамид, глибутиа зол, метасульфанилбутилкарбамид, букарбан и гликодиазин [29].

Зурборг и сотр. [33] на этом же сорбенте обнаруживали на пла стинках силуфола карбутамид (букарбан), хлорпропамид, бута мид, глибенкламид, гликодиазин и ацетогексамид. Многие проти водиабетические вещества обнаруживали в моче и крови, исполь зуя смешанные слои [4]. В ультрафиолетовом свете можно про водить и их количественное определение. Гувен и сотр. [18] раз работали выделение инсулина методом ТСХ.

Специальная часть Синтетические слабительные средства 5.3.3.

Разделение синтетических слабительных средств методом ТСХ изучали Бхандари и сотр. [5], которые подвергали разделению на силикагеле F254 фенолфталеин, диацетоксифенолфталеин, 4,4' диоксидифенилпиридилметан, 4,4'-диацетоксидифенилпиридилме тан (бисакодил), дифезатин (изафенин), тризатин и 4,4'-диоксиди „фенилизатин. Они пользовались системами хлороформ — бензол — ацетон ( 1 : 1 : 1 ) и хлороформ — циклогексан — метилэтилкетон ( 1 : 1 : 1 ). Другие исследователи [12] отделяли синтетические сла бительные от некоторых природных слабительных из алоэ, сенны и каскары. Описано обнаружение фенолфталеина в смеси с природ ными слабительными из каскары [12]. Синтетические слабитель ные вещества подвергали разделению в системе хлороформ — цик логексан— метилэтилкетон ( 1 : 1 : 1 ) [14]. В этой же системе на слоях силикагеля HF254 отделяли фенизатин (N-ацетилизафенин) от бисакодила. Обнаружение синтетических веществ осуществляли в ультрафиолетовом свете. Для отдельных представителей этой группы пользовались 10%-ным метанольным раствором едкого кали, дантрон можно обнаружить диоктилсульфосукцинатом на трия с 1М,М-диметил-/г-фенилендиамином [19].

Для количественного определения изафенина в присутствии фенолфталеина применяли слои толщиной 0,6 мм. После обнару жения разделенных веществ в ультрафиолетовом свете изафенин элюировали смесью хлороформ — метанол (9: 1);

в элюате опреде ляли изафенин фотометрически по интенсивности окрашивания раствора после реакции с красной кровяной солью [36].

5.3.4. Антикоагулянты Среди синтетических веществ, тормозящих свертывание крови, значительную группу образуют производные кумарина. Разделе нием этой группы, в том числе и растительных кумаринов, при помощи тонкослойной хроматографии занимались немногие [43, 44]. Рейш [28], Даненс и сотр. [11] и другие [30] проводили разделение производных кумарина на слоях силикагеля G. При этом пользовались полярными органическими системами, под кисленными уксусной или муравьиной кислотой. Авторы статьи [11] работали на слоях с системой растворителей хлороформ — бензол — муравьиная кислота — ацетилацетон (49:48:2:1) с фосфатным буферным раствором при рН 11. На том же сорбенте они проводили разделение фенпрокумона, куметазола, этилбиску мацетата (неодикумарина), аценокумарола (синкумара), варфа рина, анатромбата, пиндрона, клориндиона, бромдиона и дифе надиона в простой системе хлороформ — этанол (97:3). Рейш 254 Специальная часть Таблица а Разделение некоторых антикоагулянтов на силикагеле G [28] шР II Лекарственное I Химическое название Ш IV средство 67—69 + + Неодикумарин бис- (4'-окси-3'-кума- — б + ринил) этиловый эфир уксусной кис лоты 50—53 + Фенпрокумон + 1 - (4'-окси-3'-кумари- б б + + нил)-1-фенилпро пан 1—0 + 92 — Синкумар 1 - (4'-окси-3'-кумари- — б + нил)-1,4'-динитро фенилбутанон- 10 — — б Дикумарин бис- (4'-окси-3'-кума- б + + ринил)метан 25—35 б + Варфарин 1 - (4'-окси-3'-кумари- — + б + + нил)-1-фенилбута нон- Система растворителей: бензол, насыщенный при 20 °С 99%-ной муравьиной кисло той+4 мл метилэтилкетона.

Нагревание в течение 20 мин при 100 °С.

I Настойка иода (фармакопея ФРГ, 6-е изд.) — э т а н о л (1 : 5) (Д1046).

II 2,5%-ный водный раствор хлорида железа (III) (Д97).

III Реактив Эрлиха (ДЭ8).

IV Смесь свежеприготовленных растворов I и II ( 1 : 1 ).

V 5%-ный раствор уксуснокислого ж е л е з а ( П ) (Д161).

[28] пользовался бензолом, насыщенным муравьиной кислотой, к которому было прибавлено 4 мл ацетилацетона. Этим способом он разделил неодикумарин, фенпрокумон, синкумар, дикумарин и варфарин. Для их обнаружения он применял несколько реакти вов (табл. 29). О выделении варфарина докладывали и другие ученые [25].

Авторы статьи [2] разработали количественное определение дикумарина после обнаружения разделенных веществ диазотиро ванной сульфаниловой кислотой (Д 25). Пятна открытых таким образом веществ элюировали 0,1 н. НС1 и количественно опреде ляли, измеряя поглощение при длине волны 415 нм.

ЛИТЕРАТУРА 1. Adam Е., Lapiere С. L, J. Pharm. Belg., 19, 79 (1964).

2. Antkowiak J. J., Spartorico A. L., J. Chromatogr., 29, 277 (1967).

3. Bauer M., Cretu E., Gafencu M., Silvestru S., Pavel E., Grigorescu E., Farma cia (Bucure$ti), 16, 293 (1968);

Chem. Abstr., 69, 30144 (1968).

4. Baumler J., Rippstein S., Dtsch. Apoth.-Ztg., 107, 1647 (1967).

5. Bhandari P. R., Walker H., J. Chromatogr., 45, 325 (1969).

Специальная часть 6. Boice R., Seidman M., Southworth В. С, J. pharm. Sci., 58, 1527 (1969).

7. Bortoletti В., Perlotto Т., Farmaco (Pavia), Edizione Pratica, 23, 371 (1968).

8. Breinlich J., Dtsch. Apoth.-Ztg., 104, 535 (1964).

9. Breinlich J., Pharm. Ztg., 110, 579 (1965).

10. Cost G., Pacciani M., Farmaco (Pavia), Edizione Pratica, 21, 380 (1966);

Chem. Abstr., 65, 15160 (1966).

11. Darnens P., Van Boven M., J. Chromatogr., 57, 319 (1971).

12. Datta D. D., Ghosh D., Indian J. Pharm., 29, 179 (1967);

Chem. Abstr., 67, 111514 (1967).

13. Duchene M., Lapiere С L., J. Pharm. Belg., 20, 275 (1965);

Chem. Abstr., 64, 7970 (1966).

14. Ganshirt H., in: Stahl E., Dunnschicht-Chromatographie, 2. Aufl., Springer Verlag, Berlin, 1967.

15. Gawrich 2., Pomazanska Т., Acta Pol. pharm., 25, 39 (1968);

Chem. Abstr., 68, 107929 (1968).

16. Gerlach H., Pharm. Zentralh., 105, 771 (1966).

17. Guven K. C, Cobanbar S., Eczacilik Bui., 8, 206 (1966);

Chem. Abstr., 67, 102839 (1967).

18. Guven K. C., Ozsari G., Eczacilik Bui., 8, 206 (1966);

Int. pharm. Abstr., 4, No. 6, ref. 312 (1967).

19. Gyanchandani N. D., Yamamoto M., Nigatn J. C, J. Pharm. Sci., 58, (1969).

20. Christensen F., Acta Pharm. Toxicol., 21, 23 (1964).

21. Kiger J. L., Kiger J. G., Ann pharm. franc., 24, 593 (1966).

22. Krull H., Meyt M., Dtsch. Apoth. Ztg., 105, 481 (1960).

23. Maes R., Gijbels M., Laruelle K-, J. Chromatogr., 53, 408 (1970).

24. Meythaler Ch., Dworak G., Schmidt E., Arzneimittel-Forsch., 16, 800 (1965)-.

25. Neidlein H., Klugel G., Lebert U., Pharm. Ztg., 110, 651 (1965).

26. Neidlein H., Krull H., Dtsch. Apoth.-Ztg., 105, 481 (1965).

27. Osborne B. G., J. Chromatogr., 70, 190 (1972).

28. Reisch J., Pharm. Ztg., 108, 1182 (1963).

29. Reisch J., Tittel G. L, Pharm. Ztg., 109, 74 (1964).

30. Russel H. A., Z. analyt. Chem., 250, 125 (1970).

31. Smith P. L, Hermann T. S., Analyt. Biochem., 22, 134 (1968).

32. Strickland R. D., J. Chromatogr., 24, 455 (1966).

33. Surborg K. H., Roder G., Pharmazie, 28, 484 (1973).

34. Thielemans H., Sci. Pharm., 41, 70 (1970).

35. Thielemans H., Papke M., Z. analyt. Chem., 266, 128 (1973).

36. Wullen H., Thielemans H., J. Pharm. Belg., 22, 431 (1967);

Chem. Abstr., 69, 5254 (1968).

37. Wunderlich H., Pharmazie, 1958, 13, 202.

38. Zoni G., Lauria E., Boll. Chim. Farm., 106, 706 (1967);

Chem. Abstr., 1968, 68, 43214.

39. Guven К. С, Eczacilik Bui., 10, 13 (1968);

Chem. Abstr., 69, 46101 (1968).

40. Kowar K. A., Arch. Pharm., 307, 657 (1974).

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 41. Stohs S. J., Scratchley G. A., J. Chromatogr., 114, 329 (1975).

42. Wallace J. E., Hamilton H. E., Skrdlan H., Burkett L. L., Schwertner L. L., H., J. Chromatogr., 138, 111 (1977).

Schwertner 43. Leu-Cam С A., J. Chromatogr., 151, 391 (1978).

44. Van Haelen M., van Haelen-Fastri R., Pharm. Acta Helv. 53, 221 (1S78).

256 Специальная часть 5.4. Химиотерапевтические и противопаразитарные средства 5.4.1. Антисептики и дезинфектанты Разделению антисептиков и дезинфицирующих веществ, а так же других активных веществ фенольной природы методом ТСХ посвящено значительное количество работ;

разделение же прочих веществ этой группы до настоящего времени не разработано.

Сорбенты. Антисептики и дезинфектанты фенольной природы подвергали разделению на силикагеле с крахмалом в качестве связующего [44], на силикагеле G [33, 50, 56, 88, 91, 153, 157, 181—183, 186—188, 196, 212, 215, 216, 253], на силикагеле D [15], на силикагеле, пропитанном формамидом [210], и на различных слоях сорбентов в зависимости от состава смеси, на полиамиде или на окиси алюминия [213]. Тилеман пользовался слоями крем незема [228] и слоями смеси кремнезема с углекислым калием ( 1 : 2 ) [229—231];

некоторые авторы пользовались окисью алюми ния со связующим [23, 53, 212] или без него [12, 121, 222]. Грас сман и сотр. [103] разделяли фенолы и оксихиноны на слоях ацетилированного полиамида, Сочевинский и сотр. [288], а также другие авторы [290] использовали полиамид. Для разделения фенолов променяли также целлюлозу.[52] и целлюлозу, пропи танную формамидом [22, 301]. Некоторые применяли слой катио нита дауэкс 50 [205], другие для деления алкилфенолов и фено лов использовали способ обращения фаз. Применялась также целлюлоза, пропитанная метилолеатом [24, 25, 28], полиамидом [26, 27] или формамидом [301]. Канич [267] подвергал фенолы разделению на крахмале.

Системы растворителей. Для разделения некоторых важных фенольных антисептиков применяли системы диоксан — бензол — ледяная уксусная кислота ( 2 5 : 8 0 : 4 ), метанол — бензол — ледя ная уксусная кислота (8 : 45 : 40) и бензол — метанол (95 : 5) [44, 108, 181, 182]. При делении фенолов на кремнеземе удобны ми оказались смеси бензол — метанол (19:1), бензол — ацетон (9:1) и толуол — ацетон (19: 1). Для смешанных слоев кремнезе ма с углекислым калием (1:2) пригодны смеси дихлорметан — этилацетат — дизтиламин ( 9 2 : 5 : 3 ), дихлорметан — этилацетат — хлороформ — бензол ( 8 8 : 2 : 5 : 5 ) и дихлорметан — бензол (1:1) [229—231]. В работе [103] деление смеси фенолов и оксихинонов на слоях ацетилированного полиамида проводили в системе во да— метанол (1:1) или вода — ацетон ( 1 : 3 ). При их разделении на целлюлозе пользовались системами муравьиная кислота — во д а — (2:98), м-амиловый спирт — уксусная кислота — вода (10:

: 6 : 5) и бензол — пропионовая кислота — вода (20:45:15) [52].

Деление фенолов на катионите дауэкс 50 проводили либо в раз Специальная часть бавленной уксусной кислоте, либо в водном метаноле [205]. Эти же вещества на незакрепленной окиси алюминия разделяли в систе ме гексан — эфир — ацетон (10:9:1,5) или ( 8 : 7 : 5 ), в смесях бензола с этанолом или хлороформа с этанолом в различных со отношениях [222].

Обнаружение. Антисептики фенольной природы обнаруживали смесью хлорида железа (III) и красной кровяной соли (Д 100 6) [44] или после разделения на флуоресцирующих слоях — в ультра фиолетовом свете на основании появления флуоресценции при длине волны 254 нм [91]. Некоторые авторы пользовались для обнаружения антисептиков 0,1%-ным раствором перманганата калия (Д 143а) [222], раствором хлорида сурьмы(Ш) (Д 86) [216], реактивом Драгендорфа в модификации Мюнье (Д 53а) [33] или диазотированным раствором бензидина (Д23) [44, 181, 183], а также реактивом Драгендорфа, модифицирован ным по Тису (Д52), парами иода (Д 104) [15], раствором 50% ной серной кислоты в 100 мл 0,1 н. КМпО 4 и т. д. Кроме этих ре активов удобным оказался хлор-толидин (Д 102), который, как указывает автор работы [257], реагирует с фенолами с образова нием полихлорциклогексадионов. Хлор, связанный в этом соеди нении, легко реагирует с о-толидином, окисляя его в краситель типа дифенхинондиимида.

Применение. Для определения антисептиков фенольной приро ды использовали метод ТСХ [104, 137]. Возможно определять и малые количества фенольных веществ в спиртовых и водных ра створах после их превращения в динитробензоаты [56]. Этот ме тод, однако, непригоден для деления гомологического ряда фе нолов.

Детерс [54] исследовал разделение хлорфенолов методом ТСХ. Камп подвергал разделению вещества с фенольной гидрок сильной группой, применяемые в качестве антисептиков и дезин фектантов [125]. Фурукава [86] разделил группу фенолов на кис лом силикагеле. Кнаппе и сотр. [137] разделяли на силикагеле G фенолы и продукты их азосочетания с прочным красным. На этом же сорбенте другие авторы [196] разделяли фенолы, крезо лы и ксиленолы. Тилеман проводил разделение 6 изомерных ди метилфенолов (ксиленолов) после конденсации их с 1-фенил-2,3 диметил-4-аминопиразолоном-5 или после азосочетания с прочным синим В или 4-бензоиламино-2,5-диэтоксианилином. Он пользовал ся слоями силикагеля G и кремнезема и варьировал различные системы растворителей. Шерма [205] для деления фенолов при менял катиониты.

Методом ТСХ некоторые исследователи [182, 183] изучали связь строения и величин RF исследуемых веществ;

результаты приводятся в табл. 30. Барк с сотр. [22—28] занимался опреде 258 Специальная часть Таблица Значения hRf некоторых фенолов в двух системах растворителей [182, 183] Значения hR г. в системах растворителей Фенол С С 32 Пирогаллол 56 Резорцин 76 Фенол 83 Гваякол Обозначения:

С1 диоксан — бензол — ледяная уксусная кислота (25 : 90 : 4), С2 метанол — бензол — ледяная уксусная кислота (8 : 45 : 4).

лением связи между строением и хроматографическим поведени ем веществ фенольного характера на различных сорбентах. Те же вопросы изучали авторы другой работы [222] при использовании незакрепленной окиси алюминия, а для нитрофенолов эту зави симость изучали Гержманек и сотр. [114]. Фенолы, крезолы и гваяколы определяли после азосочетания с диазотированным п нитроанилином, последующего извлечения эфиром и хроматогра •фического разделения на слое кремнезема, пропитанном форма мидом [213]. Грассман и сотр. [103] провели разделение и обна ружение гидрохинона, пирокатехина, резорцина, пирогаллола и т. д. Было разработано разделение 17 фенольных соединений в 8 различных системах растворителей на различных сорбентах с целью возможного определения их в моче [50]. Разделением фе нола, гваякола, о-, м- и n-крезолов, а также окрашенных соеди нений, полученных в результате реакции с антипирином, занимал ся Камп [125] как модельной системой для разделения смесей лекарственных веществ этого типа. Ким Даос и сотр. [245] ис пользовали для веществ фенольного характера слои целлюлозы, другие авторы [91] отделяли друг от друга и от гексахлорофена резорцин, моноацетат и диацетат резорцина после извлечения дерматологических соскобов на слоях силикагеля, содержащих в качестве комплексообразующего агента 0,01 М водный раствор вольфрамата натрия. Несколько работ посвящено разделению веществ дегтя [187, 215, 216]. Некоторые результаты обобщены в табл. 31.

Янак [121] анализировал фенолы на слоях окиси алюминия.

Анализ препаратов, содержащих фенольную гидроксильную груп пу, главным образом выпускаемых в промышленном масштабе, Специальная часть Таблица Обнаружение составных частей дегтя и значения hRF для них [186] Значения f Обнаружение в различных системах Вещество растворителей реактив окрашивание сз С1 С 22 Драгендорфа Оранжевое Изохинолин 38 Красно-фиолето а-Нафтол Диазобензидин 16 вое 46 Диазобензол Сине-фиолетовое З-Нафтол 23 30 Оранжевое Хинолин Драгендорфа 30 45 »

Акридин 36 — »

а-Метилхинолин — Обозначения:

С1 хлороформ;

С2 бензол;

СЗ бензол — метанол (95 : 5).

а также изготовляемых в аптеках, разработали Шаршунова и Ласлова [293]. Некоторые дезинфектанты и другие вещества фе нольного характера (а- и р-нафтолы, фенол, пирокатехин, резор цин, тимол и /г-крезол) анализировали также на незакрепленных слоях окиси алюминия [222].

Для этого пользовались окисью алюминия марки ЧДА фирмы Lachema с величиной зерен 0,075 мм, активированной отжигом в течение 6 ч при 450 °С и дезактивированной взбалтыванием с 6% вес. ледяной уксусной кислоты. Полу ченная таким способом окись алюминия имела рН 4,5 (установлено в водной вытяжке рН-метром). Активность ее соответствовала активности V по Брокману и Шоддеру, как было экспериментально подтверждено на основании значений RF стандартных азокрасителей, подвергнутых хроматографированию на этой окиси алюминия способом, описанным в разд. 2.2.5. Для открытия разделенных веществ применяли 0,5%-ный раствор перманганата калия (Д142) и 1%-ный раствор азотнокислого железа(Ш) (Д65). Образцы веществ наносили в коли честве, соответствующем 20 мкг определяемого вещества, на расстоянии 12—• 15 мм одно от другого с помощью микропипеток Винтерроба или в твердом виде металлическими шпателями, на которые помещали каплю растворителя.

При элюировании в системе, содержащей один полярный и один неполярный растворители, камеру насыщали парами системы растворителей, вкладывая внутрь полоску фильтровальной бумаги, увлажненную употребляемой смесью.

Обнаружение длилось 20—40 мин в зависимости от выбранной системы Обна ружение вышеприведенными реактивами проводили обычным способом. Резуль таты такого разделения приводятся в табл. 32.

Для всех веществ, перечисленных в таблице, характерно наличие фенольной гидроксильной группы, имеющей кислую реакцию. Благодаря этой группе веще ства связываются щелочными сорбентами и остаются на стартовой линии. Поэто му их необходимо подвергать разделению на кислых сорбентах. Возрастание чис 260 Специальная часть Таблица Разделение веществ фенольного характера [222] Значения hRp в различных системах растворителей Анализируемое вещество сз сю С С6 С7 С С2 С С1 С «-Аминосалицилат 0 0 0 0 натрия н л-Аминофенол 6 27 66 10 — Ацетилсалициловая 0 0 0 0 0 0 кислота 0 Салициловая кислота 0 0 0 0 «-Нафтол 61 18 41 0 31 — ^-Нафтол 61 18 34 75 29 — н 63 н н •о-Крезол н — 50 66 н 63 н н л-Крезол н 20 24 — 66 13 н н 73 Фенол 58 — 39 0 0 0 Пирокатехин 0 47 н 0 Резорцин 18 0 — 58 25 70 н Тимол 69 н 50 67 63 — Обозначения н — система непригодна;

С5 спирт с бензином;

0 — вещество остается на старте;

С6 хлороформ;

— вещество двигается с фронтом С7 хлороформ — 1 М раствор я-този растворителя;

лата натрия ( 9 : 1);

С1 бензол;

С8 хлороформ — этанол — ледяная ук С2 бензол — этанол (95 : 5);

сусная кислота (95 : 1 : 4);

СЗ бензол — этанол ( 9 0 : 1 0 ) ;

С9 эфир;

С4 бензол — этанол (80 : 20);

СЮ диоксан — ледяная уксусная кис лота (9 : 1).

ла фенольных гидроксилов понижает значение RF анализируемых веществ. Раз деление о-производных от п- и соответственно ^-производных служит доказа тельством того, что у первых полярные заместители сильно пространственно за труднены, в результате чего о-производные при хроматографировании на неза крепленных слоях окиси алюминия обнаруживают большую подвижность. Этот пространственный эффект обнаруживается и у нафтолов;

фенольная гидроксиль ная группа р-изомера пространственно более доступна и поэтому прочнее связы вается с сорбентом, нежели гидроксил а-нафтола. Однако различия значений R?

этих веществ менее резко выражены.

Количественное определение. После хроматографирования в тонком слое фенолы определяли либо планиметрированием, либо в метанольном элюате спектрофотометрически в ультрафиолето вой области [91];

Ананд [15] работал при длине волны 254 нм.

Юдицкая [124] и другие [291] разработали фотометрическое определение фенолов после превращения их в азокрасители.

Специальная часть 5.4.2. Сульфаниламиды Сульфаниламиды обладают одинаковым химическим строе нием и образуют обособленную группу лекарственных средств.

В исследованиях, посвященных сульфаниламидам, к этой группе относят также и некоторые соединения, которые не являются про изводными сульфаниловой кислоты (например, бензамсульфон амид).

Сорбенты. Разделение сульфаниламидов на слоях силикагеля со связующим изучали Генсхирт [89], Воллиш [261], Карпичка 127], Клейн с сотр. [134, 135], Бичан-Фиштер [36, 37] и другие J 102, 133, 180, 195, 199, 242, 302, 303, 305, 306]. Чьери [49] для деления сульфаниламидов пользовался силикагелем Н с добав кой белого фосфора, суспендированного в 0,1 н. NaOH, а Де Зе ев [55] работал на силикагеле GF254. Ханель [269] разделил различных сульфаниламидов на смешанных слоях силикагеля G и окиси алюминия (1:1). Гайдош [87] работал с незакрепленными слоями силикагеля. Разделение сульфаниламидов на окиси алю миния со связующим изучали Петке и Кинце [189], применявшие окись алюминия С и CD фармацевтического предприятия Chema werk, Грейц-Долау (ГДР), а также Ван-дер-Венне и сотр. [242], которые пользовались также слоями полиамида и силикагеля G.

Вагнер и Вандель [252] работали на окиси алюминия D указан ной выше фирмы. Другие исследователи [223] разделяли обще употребительные сульфаниламиды на слоях незакрепленной окиси алюминия нейтральной реакции. Лин и сотр. [147] пользовались полиамидом СМ 1011.

Системы растворителей. Для деления сульфаниламидов на силикагеле G Генсхирт [89] пользовался сильно полярными си стемами, например хлороформ—метанол (80:15), кислыми систе мами полярного характера, например циклогексан—ацетон—ледя ная уксусная кислота (4:5:1) или метилзтилкетон—ледяная уксус ная кислота (75:5), а также основными системами метилэтилке тон—пиридин (75:15), ацетон—метанол—диэтиламин (9:1:1) и др.

(табл. 33) (см. также [304]). Хо и сотр. [132, 134] пользовались системой хлороформ—этанол—гептан ( 1 : 1 : 1 ) с различным содер жанием воды, необходимое количество которой при делении суль фаниламидов определяли экспериментально. Этой же системой пользовались Воллиш с сотр. [261]. Ранее эти же авторы подвер гали разделению Ы4-замещенные сульфаниламиды в системе ме танол— этанол (1:1) или н-пропанол — 0,05 н. НС1 (4:1) |[135, 220]. Для деления сульфаниламидов на силикагеле G для элюиро вания пользовались системой хлороформ — метанол (100:1) или эфиром [36], или разделяли на силикагеле G и после смены под вижной фазы на слое полиамида [266].

Для обнаружения сульфаниламидов на закрепленной окиси алюминия применяли двумерную хроматографию [189], пользу 262 Специальная часть Таблица Значения hRF сульфаниламидов в различных системах растворителей [89] Значения hRF в различных систем ах Вещество СЗ С4 С С1 С Сульфадимезин (сульфанилиламино-4,6-диме- 41 66 56 тилпиримидин) Сульфуразол (сульфанилиламино-3,4-диме- 55 тилизоксазол) Сульфапиридин (сульфанилиламинопиридин) 39 55 54 Сульфагуанидин (сульгин) 53 33 13 Сульфизомидин (4-сульфанилиламино-2,6- 33 45 32 диметилпиримидин) Сульфацетамид (сульфацил) 37 49 72 Сульфатиазол (норсульфазол) 46 64 32 Сульфаниламид (стрептоцид) 33 Сульфанилтиомочевина 56 72 20 Обозначения:

С1 хлороформ — метанол ( 8 0 : 15), С2 циклогексан — ацетон — ледяная уксусная кислота ( 4 : 5 ' 1);

СЗ метилэтилкетон — ледяная уксусная кислота ( 7 5 : 5 ) ;

С4 ацетон — метанол — диэтиламин ( 9 : 1 : 1);

С5 метилэтилкетон — пиридин ( 7 5 : 5 ).

ясь системами бензол—ледяная уксусная кислота—метанол (85:1:0,5) и хлороформ—метанол (1:1). На смешанном слое оки си алюминия и силикагеля (1:1) подвергали разделению 20 суль фаниламидов в системах бензол—этанол—уксусная кислота (60:15:15), хлороформ—этанол (85:15) и н-бутанол—вода (10:1) [269];

последней системой пользовались и при делении сульфа ниламидов на окиси алюминия D [252]. На незакрепленных сло ях окиси алюминия [223] удалось разделить смеси сульфанилами дов в сильно полярных системах, а именно в системе бензол— этанол (4:1) и в смесях хлороформа с низкомолекулярными спир тами в отношении (80:15) (подвижность сульфаниламидов при хроматографировании на незакрепленной окиси алюминия изме нялась в зависимости от длины алкила в низкомолекулярном спирте). Для разделения этой группы веществ оказалась удобной система хлороформ—уксусная кислота (95:5) или (90:10). При делении на слоях полиамида пользовались системой метилэтил кетон или изобутилкетон—ацетон—25%-ный аммиак (25:100:5), Специальная часть этилацетат—метанол—25%-ный аммиак (85:15:5) [242], этилаце тат—95%-ный этанол (4:1) [147].

Обнаружение. Для обнаружения сульфаниламидов после де ления на слоях силикагеля G применяли раствор /г-диметиламино бензальдегида в концентрированной соляной кислоте (Д 366) [36, 102, 132, 168, 195] или реактив Браттона-Маршала (Д21) [132]. Помимо этого, сульфаниламиды идентифицировали азосо четанием с а- или {3-нафтолом, а также тимолом после разделения на окиси алюминия со связующим [132]. Для обнаружения их пригоден и пропитанный флуоресцеином силикагель (Д72), од новременно служащий в качестве сорбента;

искомые вещества видны на нем в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне [127]. Брэдшоу [43] обнаруживал сульфаниламиды с незамещенной сульфамид ной группой после их разделения на окиси алюминия, а также на силикагеле и на бумаге смесью концентрированной гидроокиси аммония и 2%-ного раствора л-диметиламинобензальдегида в эта ноле (1:3). На окиси алюминия без связующего сульфаниламиды обнаруживали раствором и-диметиламинобензальдегида (Д 366) и парами иода (Д104)., Применение. Деление сульфаниламидов изучали Генсхирт [89] (табл. 33), Воллиш [261], Клейн и сотр. [134, 135], Келлер [272] и Бичан-Фиштер [36].

Последняя работала с силикагелем G, который наносила на стеклянную пластинку обычным способом. Для обеспечения воспроизводимости значений RF необходимо соблюдение следующих условий: между прибавлением воды к сор бенту и его нанесением на пластинку должно пройти не более 5 мин. Пластинки с сорбентом активировали нагреванием при 105 °С в течение 30 мин. По 1 мкл растворов определяемых веществ в этаноле с содержанием 0,4 мкг вещества с помощью микропипеток наносили на расстоянии 15 мм от края пластинки и хро матографировали до тех пор, пока фронт растворителя не проходил 10 см до заранее намеченной черты Каждый раз брали 100 мл растворителя и предвари тельно насыщали его парами камеру. Для этого вкладывали по стенкам камеры фильтровальную бумагу. Элюирование в системе хлороформ — метанол (10:1) длится около 40 мин, а при применении эфира время сокращается до 35 мин.

Обнаружение веществ после разделения производили 1%-ным раствором нитрита натрия в 0,1 н НС1. После высушивания хроматограмму опрыскивали 0,2%-ным раствором [3-нафтола в 0,1 н. NaOH или раствором п-диметиламинобензальдегида (Д 366) [223] Результаты приведены в табл 34;

из нее можно видеть, что, если необходимые условия выдержаны, величины RF воспроизводятся в пределах ±0,05.

Деление сульфаниламидов на силикагеле проводили и другие исследователи, например Грефе [102], Клейн и сотр. [132, 134, 135], Бюттнер и сотр. [47], которые изучали их устойчивость на этом сорбенте. Этой же проблемой занимались и другие авторы [127]. Шаршунова описала разделение сульфаниламидов мазей, содержащих салициловую кислоту, лактат акринолиния и поли этиленгликоли [220]. Петке и сотр. [189], а также Ван-дер-Венне 264 Специальная часть Таблица Воспроизводимость значений hRF различных сульфаниламидов [35] Значения hRp в различных системах Вещество С1 С 34—38 34— Сульфацил растворимый 51— Сульфазин 48— 3— Сульгин 13— 58— Сульфамеразин 56— Сульфадимезин 70—74 61— 36— Сульфапиридазин 66— Стрептоцид 59—60 34— Норсульфазол 12—16 36— 9— Норсульфазол растворимый 45— Сульфизоксазол 79—83 49— Ацетилсульфизоксазол 74—77 79— Плисульфан 78—81 63— Обозначения:

С1 эфир;

С2 хлороформ — метанол (10: 1).

и Т'Сьебелль [242] подвергали разделению сульфаниламиды на окиси алюминия со связующим. При разделении сульфанилами дов на незакрепленных слоях окиси алюминия поступали следую щим образом 1[223].

Окись алюминия по Брокману (нейтральную) фирмы Reanal (ВНР) активи ровали обычным способом, описанным выше при аналептиках, разд. 5.1.1. Полу ченная таким способом окись алюминия имела активность около III. Водная вы тяжка имела рН 6,7. Пользуются системами полярного характера, которые ока зались наиболее пригодными для разделения 13 сульфаниламидов (табл. 35).

Достаточного различия в значениях R? изученных сульфаниламидов достигали, варьируя спирты в системе хлороформ — низкомолекулярный спирт (80: 15). По лученные результаты приведены в табл. 36.

Сульфаниламиды в капсулах, мазях и таблетках после экстракции ацетоном определяли указанным способом.

Зигель и сотр. [307] разделяли триметоприм и сульфаметоксазол. Залипский и сотр. [308] исследовали методом ТСХ и спектральным методом загрязняющие примеси в сульфасалазине.

Количественное определение. Бичан-Фиштер [36] разработала колориметрическое определение сульфаниламидов после экстрак Специальная часть Таблица Значения hRF сульфаниламидов в различных системах растворителей [223] Значения hRp в различных системах растворителей Вещество сз С С4 С5 С С1 С2 С8 С9 СЮ Сульфацил 5 20 20 5 17 24 Сульфацил раствори- 5 20 20 17 5 40 24 мый Сульфадимезин 34 58 52 55 67 60 35 Норсульфазол 22 8 50 25 6 6 Бензамсульфонамид 0 0 0 0 0 (мафенид) Сукцинилсульфати- 8 3 34 6 6 34 азол Фталазол 8 7 60 5 38 8 Урамид (уросульфан) 33 19 37 16 71 54 Сульфаметоксипири- 45 40 21 22 55 доксин Стрептоцид 16 71 34 19 40 Сульгин 3 5 12 5 12.


Сульфазин 9 3 50 31 Сульфаметоксидин 20 33 56 50 31 Обозначения:

С6 хлороформ — этанол (80: 15);

G1 бензол — этанол (90:10);

С7 хлороформ — бутанол (98:2);

С2 бензол — этанол (80 : 20);

С8 хлороформ — ацетон ( : 1);

СЗ эфир —метанол (90: 10);

С9 хлороформ — ледяная уксусная С4 эфир —этанол (90: 10);

С5 хлороформ — метанол (80: 15);

кислота (95 : 5);

СЮ хлороформ — ледяная уксусная кислота (90 : 10).

ции из слоя силикагеля G. Другие авторы [220] определяли эти вещества в таблетках и мазях опектрофотометрически после раз деления на незакрепленных слоях окиси алюминия и извлечения.

Спектрофотометрическим определением сульфаниламидов занима лись и другие авторы [49]. Вагнер и Вандель [252] не только разработали способы спектрофотометрического и фотометричес кого определения сульфаниламидов, но и провели сравнение ре зультатов, полученных обоими способами.

18— 266 Специальная часть Таблица Разделение сульфаниламидов в смесях хлороформа с низшими спиртами [223] Значения hRF в различных системах раство рителей Вещество С С2 СЗ С С1 С Сульфацил 24 17 9 Сульфадимезин 77 60 73 Норсульфазол 34 12 25 10 Сукцинилсульфатиазол 34 12 25 10 Фталазол 34 12 25 10 Уросульфан 41 32 29 34 Сульфапиридазин 76 53 48 69 Стрептоцид 41 30 27 34 Сульгин 7 18 12 5 Сульфазин 55 38 50 Сульфаметоксидин 48 57 56 40 Обозначения:

С1 хлороформ — метанол (80: 15);

С2 хлороформ — этанол ( 8 0 : 1 5 ) ;

СЗ хлороформ — пропанол ( 8 0 : 15);

С4 хлороформ — пропанол-2 (80: 15);

С5 хлороформ — бутанол (80: 15);

С6 хлороформ — амиловый алкоголь (80 15).

Противотуберкулезные средства 5.4.3.

Разделение антибиотиков, обладающих туберкулостатическим действием, будет рассмотрено вместе с остальными антибиотика ми в отдельной главе. Здесь мы упоминаем об остальных получа* емых синтетическим путем туберкулостатических препаратах.

Значительные различия в их строении упрощают отделение их друг от друга.

Для обнаружения ж-аминофенола как возможного продукта распада натрие вой соли n-аминосалициловой кислоты (ПАС) в таблетках и растворах применя ли систему бензол — этанол (95:5), (90:10) и (50:50). Удобным оказался так же эфир. Деление проводили на незакрепленных слоях окиси алюминия рН 4,5, который готовили из щелочной окиси алюминия марки ЧДА фирмы Lachema, добавлением 4—6% масс, ледяной уксусной кислоты. Активность приготовленной таким способом окиси алюминия понижалась приблизительно до степени V. При анализе таблеток ПАС их измельчали и растворяли в горячем 60%-ном спирте.

Для обнаружения возможного присутствия продукта разложения ПАС — ж-ами нофенола на пластинки наносили количества раствора, соответствующие 25— 50 мкг ПАС [222].

Специальная часть Шпинкова [224] и другие [235] подвергали разделению на си ликагеле G гидразид изоникотиновои кислоты. Тома и сотр. [235] для выделения гидразида изоникотиновой кислоты пользовались системой ацетон—метанол—аммиак (50:50:1). Шпинкова [224] отделяла гидразид изоникотиновои кислоты от возможных про дуктов его разложения, именно изоникотиновой кислоты и гидра зина, в системе w-пропанол—10%-ный аммиак (95:5). Гувен [106] разработал разделение многих туберкулостатических ве ществ;

для разделения изониазида, этионамида, морфазинамида, пиразинамида и тиокарлида на силикагеле G он пользовался хло роформом, а для обнаружения — смесью сернокислой меди и аммиака (Д 182). Рагацци [193] подвергал разделению некоторые вещества этой группы на слоях кремнезема;

он исследовал не сколько систем растворителей. Другие авторы,[268] разделяли изониазид и ипрониазид на смешанных слоях целлюлозы MN и силикагеля ( 1 : 1). Алессандро и сотр. [13] разработали опреде ление гидразидов спектрофотометрическим путем после извлечения из слоя сорбента. Новаковска и Венявский [309] разделили 8 но вых производных изоникотиновои кислоты.

5.4.4. Противоопухолевые средства К этой группе веществ относится большое количество веществ разнообразного химического строения, как, например, соединения с алкилирующим действием, антиметаболиты пуринов и пирими динов, алкалоиды, гормоны, антибиотики и т. д. Разделение про тивораковых алкалоидов, антибиотиков и гормонов описывается в соответствующих главах. Помимо этих групп, лишь немногие из противоопухолевых средств подвергали разделению методом ТСХ.

Из веществ с алкилирующими свойствами таким способом разде ляли азауридины, а также некоторые другие соединения этого типа, содержащие в молекуле серу и азот [75]. Лалка и Бардош [298] разделяли и количественно определяли колориметрически вещества с алкилирующим действием после экстракции их из мо чи и крови. Разделение различных противоопухолевых препара тов описано в нескольких работах [80, 204, 221]. Например, Чер ный и сотр. [51] подвергали делению производные алкилтиопу ринов на слоях силикагеля в системах хлороформ—этанол (9:1) и 2-бромфенол—аммиак—вода (10:1:1). Обнаружение производили смесью бромфенолового синего и азотнокислого серебра (Д60).

Семонский и сотр. [204] делили цитембен Спофа, цитостатик, на слоях силикагеля, предварительно промытых взятой для элюиро вания системой хлороформ—ледяная уксусная кислота (99:1).

Авторы другой работы [292] разделяли оригинальные чехословац кие противораковые препараты на слоях силикагеля G, другие [239] изучали продукты окисления 6-меркаптопурина, бутиопури 18* 268 Специальная часть на и бутоцина методом ТСХ на незакрепленных слоях окиси алю миния. Была сделана попытка найти связь между значениями RF некоторых препаратов и их активностью [300]. Был разрабо тан способ качественного и количественного радиохроматографи ческого анализа меченных радиоактивным углеродом 1 4 С противо опухолевых средств с целью исследования их метаболизма in vivo [129]. Алкилирующие вещества определяли спектрофотомет рическим путем [299].

Де Анжелис и сотр. [310] определяли пириметамины и диами нопиримидины в биологических материалах. Рамбоусек и сотр.

[311] исследовали метаболиты производных триазена. Шаршуно ва и сотр. [313] определяли дамвар в присутствии других препа ратов.

5.4.5. Антибиотики Хроматографии антибиотиков было посвящено много специ альных работ;

однако для некоторых групп, например пеницилли нов и тетрациклинов, в ряде случаев результаты нельзя признать удовлетворительными. Обзоры см. в работах [314—316].

Сорбенты. Для разделения антибиотиков всех типов (за иск лючением, может быть, пептидных соединений) применяют пре имущественно силикагель. Прочими сорбентами пользуются ред ко: так, например, берут целлюлозу для разделения пеницилли нов [156, 190] или тетрациклинов [144, 208], целлюлозу, пропи танную октанолом, для пенициллинов [39], пропитанный буфер ным раствором тальк для пенициллинов [246], окись алюминия для пептидных антибиотиков [206], дауэкс для них же [184], кремнезем, пропитанный комплексоном ЭДТА, для тетрацикли нов [17, 72, 107, 243, 244], а также смесь силикагеля и кремнезе ма для эритромицина [21] и полиамид для бревицида [236] и левомицетина [148]. Из готовых слоев при делении синтетических пенициллинов [152] и тетрациклинов [69] хорошо зарекомендо вал себя силуфол.

Обнаружение. Из химических реактивов обычно пользуются кислотными, например серной кислотой, 1 н. соляной кислотой или смесью серной кислоты и анисового альдегида (Д 132). Сравни тельно редко пользуются иодазидным реактивом, который широко применяют в хроматографии на бумаге Характерно окрашенные пятна дает смесь н-диметиламинобензальдегида и хлорида сурь мы(Ш) в смеси соляной кислоты и спирта (Д 41) [154, 155, 207].

Удобна также платинохлористоводородная кислота (Д 94) [190].

Наиболее употребительным способом обнаружения оказывается биоавтография, которая наиболее чувствительна;

неудобством яв ляется сравнительно длительное время, необходимое для опенки хроматограмм. Более подробно эта техника описана в нескольких Специальная часть статьях [32, 166, 174];

см. также сокращенную статью [31]. Об наружение можно, например, провести следующим способом.

Концентрат антибиотиков подвергают разделению на слое окиси алюминия в системе хлороформ — метанол. Затем на слой накладывают полоску хроматогра фической бумаги и прижимают ее стеклянной пластинкой. Спустя 15 мин бумаж ную полоску высушивают, накладывают на пластинку агара, засеянную культу рой Bacillus subtilis, и после 4 ч инкубации при температуре 37 °С опрыскивают агаровый слой 0,5%-ным раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола и снова инкуби руют при этой же температуре 10—15 мин.

Для облегчения биоавтографии рекомендуются листы Chrom AR sheets 500 (Malinckrodt), слой которых состоит из 70% сили кагеля и 30% стеклянного волокна. Они удобны для хроматогра фирования антибиотиков. По окончании элюирования их можно непосредственно накладывать на слой агара, засеянный микроор ганизмами;

нет риска, что слой пристанет к поверхности агара, как это нередко случается с обычными слоями [251]. Для обна ружения с помощью биоавтографии удобно бывает также снимать слой со стеклянной подложки с помощью раствора коллодия [197]. Другой способ заключается в накладывании высушенной по окончании элюирования хроматограммы к липкой ленте Scotch.

Лента снимает слой с подложки;

ее слегка постукивают, чтобы стряхнуть осыпающиеся частицы, и накладывают на агар, засеянный тест-культурой. Остаток слоя на стеклянной пластинке можно использовать для химического обнаружения, так как лента снимает лишь тонкий слой сорбента [173]. Описано также непо средственное опрыскивание хроматограммы суспензией спор мик роорганизма [115]. Помимо Bacillus subtilis пользуются также Cladosporium cucumerinum [115], Streptococcus lactis [165], Sta philococcus aureus [165], Xanthomonas pruni [110], а для поли миксинов — Bordetella bronchiseptica [119, 120]. Так как в неко торых случаях микроорганизм не дает достаточный контраст, его можно усилить опрыскиванием солями тетразолия [30].


(Классификация смеси антибиотиков в питательной среде [19] Этот способ не может служить для идентификации индивидуальных веществ, но лишь для их разделения на соответствующие группы, благодаря чему сужает ся дальнейший выбор отдельных возможностей. Сначала проводят анализ в трех основных системах растворителей: 1) метанол, 2) хлороформ — метанол ( 9 : 1 ), 3) хлороформ. Таким образом удается разделить вещества на четыре основные группы, которые затем делят на 15 подгрупп, для чего пользуются другими 11 системами растворителей.

Группа I: вещества не обнаруживают подвижности ни в одной из трех ос новных систем (неомицин, гентамицин, стрептомицин).

Группа II: вещества подвижны только в первой системе (некоторые тетра циклины).

Группа III: вещества подвижны только в первой и во второй системах (эритромицин, актиномицин, левомицетин).

Группа IV: вещества подвижны во всех трех системах (гризеофульвин, оли гомицин).

270 Специальная часть Для дальнейшего разделения веществ служат: в группе I — 1) пиридин — вода ( 1. 1 ), 2) пиридин — вода — абсолютный этанол ( 1 1 : 1 ) ;

3) пиридин — вода — абсолютный этанол (1 : 1 : 3);

в группе II — 4) бутанол — метанол (1 : 1);

5) хлороформ — метанол ( 1 : 1 ) ;

6) абсолютный этанол;

в группе III — 7) мета н о л — бензол (12:88);

8) метанол — бензол (6:94), 9) метанол — бензол (4:96), в группе IV—10) метанол — бензол (1:99);

11) метанол — бензол — хлороформ (1. 49 : 50).

Подготовка проб для анализа. По 6 мл питательной среды смешивают в пер вой пробирке с 0,4 мл 6 н. НС1, во второй — с 0,5 мл 2 н. NH4OH, в третью про бирку помещают 6 мл питательной среды Затем в каждую пробирку вносят по 3 мл бутанола, взбалтывают в течение 15 мин, центрифугируют и из верхнего слоя наносят пробы на пластинки 5.4.5.1. Пенициллины Хроматографию пенициллинов исследовали Фишер и Лаутнер [78];

результаты этих авторов приведены в табл. 37. Можно ви деть, что некоторые вещества образуют два пятна — желтое и белое. Значения RF обоих пятен могут оказать ценную помощь при идентификации веществ. Нуссбаумер [175] пользовался сили кагелем, который был пропитан буферным раствором с рН 5,8.

Он подвергал вещества перед процессом деления кислотному гид ролизу в результате получасового кипячения с 1 н. НС1. При гид ролизе образовывались вещества с различными значениями RF (табл. 37), которые и послужили для идентификации пеницилли нов. Тот же автор описал определение пенициллинов в лекарствен ных препаратах [176] и количественное определение пеницилли на V, которое он проводил спектрофотометрическим путем после разделения веществ на смеси силикагеля с рисовым крахмалом в сложной системе растворителей бутилацетат—бутанол—уксус ная кислота—фосфатный буфер рН 5,8—вода (80:15:40:24:5). Слой также был пропитан буферным раствором рН 5,8 [177]. Николаус и сотр. [174] пользовались системой бутанол—вода—уксусная кислота (40:40:1), однако результаты не были удовлетворитель ными.

Хроматографическому разделению пенициллинов посвящен ряд дальнейших работ. Покорный и сотр. [190] пользовались силика гелем и целлюлозой и системами бутанол—этанол—вода (12:8:2), бутанол—этанол—уксусная кислота—вода (50:15:15:20) и бута нол—уксусная кислота—вода (60:15:25). Изучением продуктов распада новокаинпенициллина G (n-аминобензойной кислоты, ее этилового эфира, бензилпенициллановой кислоты и т. д.) занима лись Фукс и Матток [79], которые также работали на силикаге ле в системе ацетон—уксусная кислота (95:5) или изоамилаце тат—метанол—муравьиная—кислота—вода (65:20:10:5). В систе мах растворителей, которыми пользовались в двух предшествую щих работах, достаточно удобно разделять и другие продукты распада пенициллинов и цефалоспоринов [241]. Распределитель Специальная часть Таблица Значения IIRF некоторых пенициллинов С Вещество Cla белое желтое белое желтое пятно пятно пятно пятно Пенициллин G 16 67, 4 0, 3 0, гс-Метоксифеноксиметилпенициллин 62 Фенилмеркаптометилпенициллин 4 Новокаинпенициллин 62 52 60 42 66, 40, 30, М,1Ч'-Дибензилэтилендиаминдипеницил- 52 50 24 68, 3 8, лин G N^N'-Дибензилэтилендиаминдипеницил- 52 64 64 71, 56, лин V 3 2, Пенициллин V 71, 56, 3 2, После гидролиза соляной кислотой [175].

С1 ацетон — метанол (1 1) [78, 175];

С2 пропанол-2 — метанол ( 3. 7 ) [78].

ной хроматографией на слоях целлюлозы, пропитанной октано лом, занимались Берд и Маршалл [39], а на силикагеле, пропи танном силиконом DC 200 (подвижная фаза ацетон с 2% буфер ного раствора рН 7,4),—Бьяджи и сотр. [34]. В обеих работах для пропитки носителя рекомендуется капиллярно удерживаемая фа за. Некоторые пенициллины и 6-аминопенициллановая кислота были подвергнуты хроматографичеекому разделению на тальке, пропитанном буфером с рН 4,5 [системы бутанол—эфир—ацетон— вода (14:4,5:4,5:5) и бутанол—бутилацетат—эфир—вода (14:4,5:

: 4,5: 0,5)]. Для разделения некоторых пенициллинов пользовались также сефадексом G-15 [264]. Для хроматографии пенициллинов служили и готовые пластинки силуфол [286]. Циглер и Курцман [48] занимались флуороденситометрией пенициллановой кислоты, являющейся токсическим вторичным метаболитом некоторых пе нициллинов. О'Нил [278] анализировал пенициллины в препара тах.

В табл. 38 обобщены результаты двух работ, посвященных хроматографии полусинтетических пенициллинов. Для обнаруже ния этих веществ авторы пользовались как ультрафиолетовым светом с длиной волны 254 нм (этот способ, однако, требует около 150 мкг образца), так и иодазидным реактивом [152] или хлори дом железа(III) и красной кровяной солью в серной кислоте (Д1006) [156].

272 Специальная часть Таблица Значения hRF некоторых полусинтетических пенициллинов сз Препарат С1 С2 С4 С Ампициллин 97 98 15 Клоксациллин 65 38 Диклоксациллин 47 22 Нафциллин 47 22 Оксациллин 74 49 63 Фенетициллин 84 73 77 Метициллин 93 93 Гетациллин 96 98 Клометоциллин Карбенициллин Пропициллин Обозначения:

С1 силикагель;

изоамилацетат — метанол — муравьиная кислота — вода (65:20:5:10), органическая фаза [156];

С2 силикагель;

ацетон — уксусная кислота ( 9 5 : 5 ) [156];

СЗ целлюлоза;

0,1 М раствор NaCI [156];

С4 целлюлоза;

0,3 М лимонная кислота, насыщенная бутанолом [156];

С5 силуфол;

бензол — диоксан — уксусная кислота ( 2 0 : 1 5 : 3, 5 ) [152].

5.4.5.2. Гликозидные антибиотики Гликозидные антибиотики—водорастворимые пептидные соеди ьения, которые поддаются разделению на различных сорбентах.

Во многих случаях, однако, удается добиться лишь частичного разделения данной смеси веществ.

Хюттенраух и Шульце [118] подвергали разделению-некоторые вещества этой группы (например, стрептомицин, неомицин, кана мицин и паромомицин) на слоях так называемого алусила (смесь силикагеля и окиси алюминия в равных количествах) в системе пропанол-2—этилацетат—вода—25%-ный аммиак (5:1:3:1). Ока залось удобным хроматографировать проточным способом. Об ширную работу по хроматографическому разделению тетрацикли нов и пептидных антибиотиков опубликовали Шмитт и Матис [207]. Значения hRF некоторых лекарственных препартов на сили кателе в системе вода—цитрат натрия—лимонная кислота (100:2:

:5) таковы: стрептомицин 90, дигидрострептомицин 91, неомицин 95, канамицин 83, паромицин 91, гента-мицин 46, БИОМИЦИН 83;

от сюда ясно, что система неудовлетворительна. В остальных трех Специальная часть системах из приведенной работы пептидные антибиотики остава лись на старте. Стрептомицин, капреомицин, канамицин, виоми цин, циклосерин и рифамицин можно, однако, разделить на сили кагеле в системах ацетон—2%-ный раствор ацетата натрия (9:1) и бутанол—пиридин—метанол—уксусная кислота—вода (30:20:

:20:1:30) [250]. При анализе на слой в качестве эталона наносят стрептомицин, в две ближайшие точки — исследуемую смесь и в соседние — прочие эталоны. Проводят постепенное элюирование обеими указанными системами. Образцы в точках 1 я 2 накрыва ют стеклом, остальной слой опрыскивают нингидрином, затем за крывают эту часть и полосу хроматограммы с образцами / и детектируют нитропруссидом и после высушивания — перманга «атом калия.

Некоторые вещества этой группы подвергали разделению на ионите дауэкс 50-Х8 (Na+'форма);

в качестве системы раствори телей авторы [184] применяли 10%-ный трет-бутанол. Уилсон v сотр. [258] при хроматографическом делении гентамицина и дру гих водорастворимых веществ пользовались силикагелем и систе мой метанол—хлороформ—концентрированный аммиак (1:1:1).

Эти же авторы изучали и денситометрию гентамицина. Производ ные полимиксинов, также относящихся к этой группе, разделяли на силикагеле в системе ацетон—вода—уксусная кислота—2 н.

аммиак (15:5:1:2) венгерские исследователи [119, 120], а также и Хоулетт и Зельцер [116]. Некоторые хиномициновые производ ные, не разделимые обычными способами, подвергали разделению круговой хроматографией на окиси алюминия (система этилаце тат—силш-тетрахлорэтан—«ода (3:1:3), нижний слой) [206].

5.4.5.3. Тетрациклины Обширное описание хроматографического поведения тетраци клинов можно найти в работе Николауса и сотр. [174]. Разделе ние проводили на силикагеле или на кремнеземе;

рН слоя в неко торых случаях доводили буферным раствором до 4,5 или 2,2. В ка честве систем растворителей пользовались, например, 10%-ной ли монной или винной кислотой или смесью бутанол — метанол — 10%-ная лимонная кислота (4 : 1 : 2). В этих системах, однако, ока залось возможным разделить лишь два различных вещества, например тетрациклин и ангидротетрациклин, хлортетрациклин и ангидрохлортетрациклин, хлортетрациклин и окситетрациклин и т.

д., лишь при элюировании 10%-ной винной кислотой в одном случае была разделена смесь дезокситетрациклин — диметилтет рациклин (или соответственно хлортетрациклин)—окситетраци клин. (Кападиа и Субба Рао [126] для деления тетрациклинов ис пользовали круговую хроматографию на силикагеле в системах бутанол — щавелевая кислота — вода (100 мл : 5 г: 100 мл) или бу 274 Специальная часть Таблица Значения hRF некоторых гетрациклинов сз Вещество С2 С4 С С Тетрациклин 23 16 36 Окситетрациклин 40 Деметилхлортетрациклин 44 Хлортетрациклин Эпихлортетрациклин 4 12 Эпиангидротетрациклин 22 Анги др отетр ациклин 83 4-Эпихлортетрациклин 21 Ангидрохлортетрациклин 4-Эпидеметилхлортетрациклин Обозначения' С1 силикагель;

вода — цитрат натрия — лимонная кислота ( 1 0 0 : 2 0 : 5 ) [207];

С2 обработанный кремнезем;

метилизобутилкетон — эфир — вода — метанол — этилен гликоль (50 : 60 : 3 : 7,5 : 2,5) [24Э, 244];

СЗ обработанный кремнезем;

метилэтилкетон, насыщенный буфером Мак Илвейна рН 4, [107];

С4 обработанный кремнезем;

дихлорметан — этилформиат — этанол ( 9 : 9 : 2 ) [107];

С5 пропитанный силикагель;

система та ж е, что и в случае СЗ [131].

танол—винная кислота—вода (100 мл:6 г: 100 мл), а для обнару жения— метанольный раствор хлорида железа (III) (Д 97).

Значения hRF некоторых препаратов этой группы на различ ных сорбентах приведены в табл. 39. Как можно видеть из этой таблицы, наиболее удобна распределительная хроматография на кремнеземе, пропитанном ЭДТА;

подобным же способом пользо вались Ашионе и сотр. [17] и Фернандес с сотр. [72]. Лангнер и Тейфель применяли целлюлозу, пропитанную ЭДТА [144].

Количественным определением промежуточных продуктов про изводства тетрациклинов (например, хлортетрациклина и тетра^ циклина) занимались Файт, Салка и Кухр [69]. Разделение про водили на силуфоле (система бутанол—щавелевая кислота—вода (100 мл: 5 г: 100 мл), а также на обработанном силикагеле или кремнеземе. Денситометрическое определение тетрациклина в лекарственных препаратах описали Радецка и Уилсон [191], оп ределение содержания тетрациклина и соответственно ангидроте трациклина в испорченных таблетках—Симмонс и сотр. [208, 209]. Виллекен [297] подвергал разделению несколько важных тетрациклинов на слоях кремнезема, пропитанных стационарной Специальная часть фазой. В его статье есть ряд ссылок на предшествующие работы, посвященные той же теме. Количественное определение тетраци клина основано либо на спектрофотометрическои оценке после элюирования веществ из слоя, либо на прямом флуориметриро вании in situ. Определению тетрациклинов посвящены и работы Рагацци [284, 318, 319] и Сабо и сотр. [320].

5.4.5.4. Прочие антибиотики Бикель и сотр. [35] впервые подвергли хроматографированию макролидные антибиотики;

они разделили 11 веществ этой группы на силикагеле в метаноле или в смеси хлороформ—метанол (95:5) и (1:1). Эритромицин и его эфиры удается идентифицировать на силикагеле в системе 'метанол—0,02 н. CH 3 COONa (4:1) [198], некоторые другие вещества (эритромицин, олеандомицин, епира мицин, карбомицин, нарбомицин)—в системе бутанол—уксусная кислота — вода — диоксан ( 6 : 2 : 2 : 1 ) '[178, 323]. Ружичкова [285] идентифицировала амфотерицин В в кремах, мазях, растворах, растворах для инъекций и суспензиях.

Либосвар и сотр. [146] описали хроматографическое разделе ние левомицетина и отдельных промежуточных продуктов его классического синтеза на незакрепленных слоях окиси алюминия.

Более полярные вещества разделяли в системе бензол—этанол (9:1) и (8:2), для менее полярных пользовались бензолом с 2,5% ацетона. Изучением хроматографического поведения левомицети на занимались также Кассем и сотр. [128] и другие авторы [148, 322]. Левомицетин и его производные подвергали разделению на полиамиде в системе бутанол—хлороформ—уксусная кислота (10:90:0.5) или бутанол—вода—уксусная кислота (82:18:0,5);

об наруживали хлорным оловом и п-диметиламинобензальдегидом.

Хлорамфеникол и тиамфеникол разделяли [270] на силикагеле в этилацетате или в системе этилацетат—метанол (99:1).

Отдельные компоненты бревицида были разделены на полиа миде [236], а также на силикагеле в системе растворителей этил ацетат — хлороформ — метанол ( 2 - 6 : 2 ) ;

значения hRF составляли бревицид-Х 75, бревицид-У2 58, бревицид-Yi 64. После обнаруже ния азотнокислым серебром вещества различались и по окраши ванию [263].

Некола [277] описал определение пептидного антибиотика грамицидина. Описано также обнаружение рифамицинов [317] и некоторых противоопухолевых антибиотиков [321].

5.4.6. Пестициды Хроматография в тонком слое становится все более употреби тельной как в анализе продовольственных товаров, загрязненных инсектицидами и прочими пестицидами, так и при исследовании 276 Специальная часть биологических материалов в токсикологических целях. В этом разделе мы упоминаем лишь немногие из очень большого числа работ, посвященных тонкослойной хроматографии самых разно образных пестицидов. Отдельные вещества мы обозначаем обыч ными коммерческими названиями и сокращениями;

обзор хими ческих названий целого ряда веществ приведен в статьях [111, 217]. Подробнейший обзор хроматографических методов можно найти в работе Фишбейна и сотр. [76], в другой статье описана хроматография карбаматов [77] и триазинов [73].

Сорбенты. Хроматография пестицидов успешно осуществляет ся на большинстве обычных сорбентов. И хотя наиболее употре бимым сорбентом остается силикагель, здесь в большей мере, не жели для других групп веществ, пользуются окисью алюминия.

Для хлорированных веществ удобными оказались слои окиси алюминия, пропитанной азотнокислым серебром [4,70,202]. Из обычных сорбентов пригоден также полиамид. О некоторых спе циальных материалах будет упомянуто в соответствующем разде ле. Часто пользуются и готовыми пластинками, в частности чехо словацким силуфолом [219, 232, 233]. Для разделения фосфор органических инсектицидов, карбаматов и производных фенилмо чевины пригодным оказался углекислый цинк [281, 282, 326].

Обнаружение. Ввиду того что к пестицидам относятся соеди нения самой разнообразной природы, описано значительное коли чество различных реактивов, используемых для их обнаружения, а также общих и специфических методов [324, 325, 327 и др.].

Для хлорсодержащих инсектицидов очень часто пользуются азотнокислым серебром — или в смеси с азотной кислотой (Д 63) [186], или с аммиаком (Д 57) [40, 169, 232] и феноксиэтанолом [140, 255]. Нередко, например, после элюирования используют облучение ртутной лампой, за которым следует опрыскивание рас твором азотнокислого серебра, иногда сочетаемое с повторным облучением [111]. Работают также и со слоями, пропитанными азотнокислым серебром, которые облучают после хроматографиро вания, избегая случайного попадания паров воды [4]. Облучение, кроме того, комбинируют с воздействием паров 'брома на слой;

затем обычно следует опрыскивание флуоресцентными реактивами [256] или раствором ароматического амина, лучше всего дифенил амина, диметиланилина, «-дифенилендиамина [10, 11]. Нередко пользуются флуоресцентными реактивами, например родамином В [60] или опрыскивают раствором флуоресцирующего вещества одновременно с облучением (4,4'-б«с-диэтиламинодифенил, 3-диме тиламинофлуорантен и т. д.) [20, 70]. Описаны также слои из окиси алюминия с примесью гидрохинона, 2,7'-дихлорфлуорес цеина и азотнокислого серебра [70]. Хлорированные вещества об наруживают также серной кислотой [186], щелочным перманга натом калия [186], Н,Ы-диметил-га-фенилендиамином (Д42) [29, Специальная часть 60] или смесью дифениламина и хлорида цинка (II) (Д 28) [129].

Обнаружением хлорсодержащих (и тиофосфатных) инсекти цидов занимались Нараянасвами и сотр. [276]. Пригодной оказа лась смесь о-дианизидина, n-нитробензилпиридина и тетраэтилен пентамина. Другие [275] исследовали флуоресценцию пестицидов, вызываемую действием температуры или кислыми и щелочными реагентами;

метод важен для определения ряда веществ in situ.

Для идентификации фосфорорганических инсектицидов также существуют многие способы. Обзор ранее предложенных реакти вов приведен в работе Стенли [217]. Пользуются хлористым пал ладием (ДЭЗ) [29, 38, 201], иодом [217], азотнокислым серебром в смеси с бромфеноловым синим (Д 60) [45] и т. д. Большое чис ло веществ можно обнаруживать с помощью 4-п-нитробензилпи ридина и тетраэтиленпентамина (Д 155) [111, 210]. Обычными реактивами для идентификации фосфорорганических соединений служат 4-пиколин и о-динитробензол [192]. Удобно также опрыс кивание (или пропитка) слоя флуоресцентными реактивами, на пример родамином В [226], флуоресцеином после действия паров брома [171], тетрабромфенолфталеином [141, 164] и др. Флуо ресцентными являются также некоторые флавоны;

на слой дейст вуют парами брома, затем опрыскивают разбавленным этаноль ным раствором, например морина, кемферола, физелина, кверце тина или рутина [83]. Некоторые авторы [61] рекомендуют также облучение. Фосфорные эфиры, содержащие ароматическую нитро группу, частично гидролизуются, образуя нитрофенолы, весьма чувствительные к гидроксамовой кислоте Селективным реакти вом на инсектициды, содержащие азот, является бензилцианид в щелочной среде (Д 12) [58]. При этом способе помехой могут явиться некоторые дигалогенфосфаты.

Триазиновые гербициды обнаруживают азотнокислым серебром или р-метилумбеллифероном [7];

перед опрыскиванием или после него слой облучают ультрафиолетовым светом [7, 53] или подвер гают действию паров брома и затем еще опрыскивают смесью иоди да калия и крахмала [53]. Оч^нь удобны слои силикагеля, содер жащие флуоресцентный индикатор;

на них можно обнаруживать в двадцать раз меньшее количество гербицида, нежели обычными химическими способами [85]. Весьма чувствительным является следующий способ [139]:



Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 19 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.