авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 19 |

«Doc. RNDr. PhMr. Magda SAR50NOVA, DrSc. RNDr. Vladimir SCHWARZ, CSc. RNDr. Cestmir MICHALEC A kolektiv CHROMATOGRAFIA NA TENKYCH VRSTVACH VO ...»

-- [ Страница 9 ] --

А Осторожным, но быстрым смешиванием четыреххлористого углерода, 3%-ного раствора перманганата калия и 12%-ной соляной кислоты (1 1 • 1) при готавливают раствор хлора Отделенный органический слой фильтруют через су хой бумажный фильтр Раствор можно хранить в холодильнике в течение не скольких дней Б 1 г о-толидина растворяют в 10 мл уксусной кислоты, 4 г иодида калия растворяют в дистиллированной воде, оба раствора смешивают и доливают во дой до объема 1000 мл Смесь неограниченно устойчива 278 Специальная часть По окончании процесса разделения хроматограмму высушивают и помеща ют в сосуд с хлорирующим раствором Сосуд изредка слегка покачивают. Через 3 мин (для следующих хрома гограмм время реакции удваивают) слой вынимают из сосуда и сушат при комнатной температуре в течение 10 мин (необходимо следить, чтобы хлор был полностью удален из слоя) и затем опрыскивают рас твором о-толидина и иодида калия Вещества образуют синие пятна на белом фоне, быстро бледнеющие, поэтому их необходимо зафиксировать в течение 10 мин Некоторые пестицидные карбаматы обнаруживают «-диметил аминобензельдегидом с последующим опрыскиванием минераль ной кислотой и нагреванием до 120—150 °С [1,214]. Этим спосо бом не удается идентифицировать О-арилкарбаматы;

в этом слу чае слой опрыскивают раствором бриллиантового зеленого в аце тоне и далее действуют парами брома. Обнаружение ведут либо дихлорфлуоресцеином (в ультрафиолетовом свете), либо ге-нитро фенилдиазонийфторборатом в метаноле, после чего слой подщела чивают [1, 113, 172]. Удовлетворительные результаты дают и соль прочного синего В (0,5%-ный водный раствор), а также ро дамин В и ультрафиолетовое освещение [113, 172, 214]. Можно также пользоваться иодистоводородной кислотой в уксусной кис лоте, раствором иода или нингидрином [214].

Пиретрины обнаруживали с помощью ванилина в серной кис лоте [238]. Замещенные 3,4-метилендиоксибензольные производ ные идентифицировали с помощью смеси хромотроповой и серной кислот [105]. Этим же реактивом пользовались и для идентифи кации феноксиацетатных гербицидов [67]. Большое число спосо бов обнаружения приведено статье Фишбейна [74].

в Часто пользуются ферментативным способом обнаружения пестицидов. При этом используют то обстоятельство, что целый ряд веществ с пестицидной активностью ингибирует активность соответствующих ферментов. Способ уже давно известен и в хро матографии на бумаге, и в тонкослойной хроматографии, но лишь в последнее время начал приобретать широкое распространение.

Удобством метода является его высокая чувствительность, позво ляющая обнаруживать определяемые вещества в следовых коли чествах.

Фермент реагирует с соответствующим субстратом, образуя промежуточный продукт, распадающийся снова на фермент и про дукт гидролиза субстрата (так называемый хромогенный про дукт).

Под действием ингибитора, каким служат, например, пе стициды, активные центры молекулы фермента блокируются, так что на них не могут протекать реакция с субстратом и его гидро лиз и хромогенный продукт не образуется. Так, например, при реакции ацетилхолина с ферментом в водной среде в качестве хромогенных продуктов образуются холин и уксусная кислота и при опрыскивании слоя метиленовым синим на хроматограмме появляется светло-желтый фон (индикатор обесцвечивается ук Специальная часть сусной кислотой). Пятна пестицида, которые препятствуют обра зованию холина, остаются голубыми. Само собой разумеется, что окраска фона и пятен зависит от выбора субстрата и индикато ра;

например, при применении нафтилацетата и красителя проч ного синего В образуются белые пятна на красно-фиолетовом фо не [68, 162].

Поскольку некоторые вещества (главным образом из хлориро ванных инсектицидов ДДТ, ДДЭ, пертан и метоксихлор), напро тив, активируют ферменты, по окончании разделения слой под вергают ультрафиолетовому облучению, после чего все вещества обнаруживают сильную ингибирующую активность по отноше нию к ферментам. После облучения [92] или после экспозиции в парах брома [162] слой основательно опрыскивают раствором фермента и затем хромогенным раствором субстрата. Из фермен тов рекомендуются эстераза из бычьей печени [92, 94, 95, 160, 162], р-амилаза [97], фосфатаза [96, 98, 99], холинэстераза [59, 260], «пчелиный фермент» [68], трипсин [93, 99] и др.;

суб страты, например, перечислены в следующих работах [68, 162]:

1 г нафтилацетата в 50 мл ацетона и 50 мл воды (раствор А) незадолго перед употреблением смешивают с 20 мг прочного синего РР в 15 мл фосфатно го буфера и 15 мл воды (раствор Б). К раствору Б прибавляют 2 мл раство ра А.

15 мг индоксилацетата незадолго перед употреблением растворяют в 5 мл абсолютного спирта.

Пользуются также нитрофенилфосфатом или метилфосфатом [96, 98], ацетилхолином [158], гидроксамовой кислотой [59], нафтилфосфатом '[98] и др. Ферментативным методом обнаружи вают тиофосфаты [162, 163, 260], карбаматы [94, 95, 98, 160], фе ноксиалканкарбоновые кислоты [99] (-в этом случае ультрафио летовое облучение не рекомендуется) и хлорсодержащие пести циды [42, 92, 97], для которых, однако, чувствительность метода, за исключением линдана [42], обычно меньше.

5.4.6.1. Хлорсодержащие инсектициды Обзор некоторых наиболее важных веществ, относящихся к хлорсодержащим инсектицидам, и характерных для них значений hRF приведен в табл. 40. Из таблицы можно видеть, что для этих веществ применяют различные сорбенты и малополярные системы растворителей.

Шесть изомерных гексахлорциклогексанов (из которых эффек изоме тивен только у - Р ) подвергали разделению на силуфоле в малополярных смесях петролейный эфир — четыреххлористый углерод ( 1 : 1 ), гексане, системах циклогексан—хлороформ (8: 2), гептан — пропанол-2 (10:0,5) [233]. Этот же автор [232] разра Таблица Значения hR F некоторых хлорсодержащизс инсектицидов Силикагель Оксись алюминия Полиамид Инсектицид сз С1 С2 С5 С6 С7 С8 С9 СП С12 С13 С16 С сю CI а си 167 Альдрин 80 67 200 80 69 240 64 69 Дильдрин 21 53 21 48 41 18 Пертан а-ГХЦГ 28 86 р-гхцг 50 •у-ГХЦГ (линдан) 17 19 13 40 48 б-ГХЦГ 7 10 53 Метоксихлор 5 11 36 п,я'-ДДТ 44 64 141 56 145 153 126 61 68 о,я-ДДТ 56 46 66 58 159 Гептахлор 63 61 52 187 52 174 "4 л,я'-ДДЭ 83 162 66 61 60 240 192 68 62 47 л'.п'-ДДД 100 Эндрин 26 54 14 22 Изодрин ял'-ТДЭ 45 76 Гептахлорэпоксид 33 15 64 Обозначения СЮ гексан — э ф и р ( 9 8 : 2 ) [170];

С1 гексан — ацетон (4 : 1) [6];

С2 гептан;

hR отнесено к Д Д Д [129];

СИ силуфол, гептан+0,3% этанола, hRp отнесено к Д Д Д [219];

СЗ циклогексан [179];

С12 силуфол;

двукратное элюирование С П ;

hRp отнесено к Д Д Д С4 петролейный эфир [179];

С5 бензол [201];

[219];

С6 гексан — эфир ( 9 : 1 ) [201];

С13 гексан [169];

С7 циклогексан — жидкий парафин (20%) — диоксан (10%) [2], С14 гептан;

hRp отнесено к Д Д Д [140];

С8 циклогексан — жидкий парафин (20%) — диоксан (5%) [2], С15 окись алюминия, пропитанная AgNCb;

гексан [169];

С9 гексан [169];

С16 гексан — четыреххлористый углерод ( 8 : 2 ) [130];

С17 этанол — аммиак — вода ( 5 : 2 : 4 ) [256].

Специальная часть ботал способ полуколичественного определения у-гексахлорцикло гексана (ГХЦГ) (линдана) и токсафена на том же сорбенте. Це лый ряд веществ удалось разделить простой или двумерной хроматографией в гептане, содержащем 0,3% этанола (табл. 40) [219]. Силуфол удобен также для разделения изомеров гекса хлорциклогексана и гексахлорбензола. Для элюирования служил н-гептан, для обнаружения — смесь азотнокислого серебра и 2 феноксиэтанола. При применении силикагеля, пропитанного 5% жидкого парафина, элюировали 96%-ным этанолом. Хорошо раз делялись та-, р-, у- и б-изомеры гексахлорциклогексана и гекса хлорбензола [289].

В литературе имеется значительное число статей, посвященных обнаружению хлорсодержащих инсектицидов в различных пище вых продуктах, почве, воде, и возрастает число статей токсиколо гического направления. Многочисленные работы по этой тематике регулярно публикуются в журналах Journal of Chromatography, Analyst, Journal of the Association of Official Analytical Chemists и др. Одна из первых работ в этой области принадлежит японским исследователям [262].

Райхель [194] изучал влияние влажности сорбента на успеш ность разделения хлорсодержащих инсектицидов. Хотя в сухом слое пятна меньше, однако некоторые вещества нельзя различить;

улучшение могло быть достигнуто во влажной атмосфере. Были, разумеется, обнаружены и такие смеси, в которых это влияние оказалось прямо противоположным. Затруднения, связанные с разделением аналогов ДДТ в присутствии полигалогенированных дифенилов, были устранены путем двумерного элюирования в S образной камере. В первом направлении элюировали гептаном, во втором — смесью гептан — ацетон (98:2) [71]. Эбинг [60] пользовался кондиционированной камерой и стандартными усло виями;

помимо силикагеля он применял также полиамид и сили кат магния. Бишара и сотр. [40] испытали большое число систем при хроматографическом разделении ДДТ и подобных ему ве ществ на готовых слоях окиси алюминия. Пригодными оказались системы гексан — бензол, гексан — хлороформ (иногда с эфиром или уксусной кислотой) и др. Описана очень простая методика с микропластинками размером 7,5 X 7,5 см [249]. При анализе лин дана в исчезающе малых количествах оказалось удобным пользо ваться комбинацией тонкослойной и газовой хроматографии [122].

В некоторых работах рекомендуется распределительная хромато графия;

значительное число веществ было успешно подвергнуто разделению на окиси алюминия, пропитанной диметилформамидом (подвижная фаза изооктан) [234].

Выделение хлорсодержащих инсектицидов Сливочное масло экстрагируют трижды, используя по 20 мл диметилсульф оксида Объединенные вытяжки промывают 10 мл гексана, гексановый слой — 282 Специальная часть 10 мл сульфоксида. Объединенные диметилсульфоксидные вытяжки смешивают с 200 мл 2%-ного водного раствора сульфата натрия и дважды экстрагируют, ис пользуя по 10 мл гексана. Соединенные вытяжки высушивают безводным суль фатом натрия и упаривают до объема 0,5 мл [4].

25 мл молока смешивают с 10 мл ацетона и 20 мл гексана;

после отделения верхнего слоя центрифугированием остаток дважды извлекают по 20 мл гекса на. Вытяжки объединяют, сушат и концентрируют до объема 1 мл [4] По дру гому методу белки удаляют эктракцией гексанового слоя водой, серной кисло той и снова водой [65].

25 г овощей тонко измельчают, добавляют 10 мл ацетона и 20 мл гексана;

после центрифугирования верхний слой декантируют. Экстракцию повторяют дважды с 20 мл гексана. Соединенные гексановые вытяжки сушат и концентри руют до объема 1 мл. Вытяжку переносят на колонку с 2 г окиси алюминия.

Искомые вещества затем элюируют гексаном, элюат концентрируют до неболь шого объема и наносят на хроматограмму [4] 100—200 г образца почвы извлекают петролейным эфиром при комнатной температуре После концентрирования взбалтывают с 0,2 г активного угля в те чение 1 мин. После фильтрования растворитель отгоняют досуха, остаток рас творяют в 4—5 мл эфира, упаривают и наносят на пластинку.

100—200 г картофеля измельчают, перемешивают с сульфатом натрия и экст рагируют петролейным эфиром при комнатной температуре в течение 18—20 ч [240].

Кровь взбалтывают 30 мин с 6 мл метанола, добавляют 12 мл хлороформа и снова взбалтывают 30 мин После фильтрования смесь доливают смесью хло роформ— метанол (2:1) до 20 мл и 5 мин взбалтывают с водой (7s всего объема), затем центрифугируют, отделяют органический слой, сушат и раствори тель отгоняют. Остаток растворяют в гексане, удаляют примеси центрифугирова нием, чистый раствор упаривают и наносят на хроматограмму.

Анализом хлорированных инсектицидов занимались многие ав торы [329, 330, 335, 336]. Экстращию инсектицидов из молока и их анализ описали также Ковач i[140] и Онли '[179], выделение ве ществ из почвы — Петрова и Голубев i[185], из овощей и фрук тов— эти же авторы [il85], Энгст и сотр. 1[66], Людвиг и Фреймут [151], Стеллер и Карри [218] и др., из зернового хлеба — Морли и Чиба '[169], из различных других материалов — Бенчев и сотр.

[328], Карпова « др. ([331 ]', Павленко и др. [333], Соколаи и сотр.

[334];

Буш и Лао ([46] рекомендуют при экстракции инсектицидов из разных материалов очищать образец окислением хромовым ан гидридом, что сокращает длительность экстракции. Реферат об оп ределении пестицидов тонкослойной хроматографией опубликовали Мак-Нил и Фрай {274]. Тилеман [295] опубликовал метод опреде ления ДДТ в яйцах.

5.4.6.2. Тиофосфаты Значительную группу инсектицидов представляют собой тиофос фаты. Указывается, что при обнаружении исчезающе малых коли честв этих веществ тонкослойная хроматография оказывается приблизительно в 20 раз чувствительнее, нежели хроматография на бумаге [141]. Значения hRF некоторых из этих веществ приведены в табл. 41.

Специальная часть Таблица Значения IIRF тиофосфатных инсектицидов а, б сю а сз U Вещество В В С6 С8 С9 С С2 С4 С5 СП Диазинон 70 8 14 0 48 73 82 Паратион 67 64 78 81 60 84 Метасистокс (метилде- 63 0 66 метон) 63 Малатион 53 40 72 48 73 0 0 Хлортион 44 0 0 Параоксон 19 0 Трихлорфон (диптерекс) 0 0 33 Деметон (систокс) 25 54 0 80 Этион 66 87 80 89 33 Гутион 33 63 63 Метилпаратион 77 55 Тритион 82 Дихлорофос (ДДВП) Химическое название см. в работе [217].

Системы С1—СЮ — силикагель, СП—12 —флорисил.

Микропластинки Обозначения:

С1 гексан — ацетон ( 4 : 1 ) [29];

С2 хлороформ,[255];

СЗ хлорооорм — эфир ( 9 ' 1) [255];

С4 хлороформ — этилацетат ( 9 : 1 ) [201];

С5 хлороформ — ацетон ( 9 : 1 ) [255];

. С6 дихлорметан [202];

С7 бензол — ацетон (19: 1) [9];

С8 бензол [217];

С9 этилацетат [217];

СЮ ацетон — гексан (15:85) [248];

СП эфир — гексан ( 6 : 9 4 ) [111];

С12 ацетон — толуол ( 1 : 9 ) [111].

Для хроматографического разделения тиофосфатов пользуются системами средней полярности. В качестве сорбента служат преиму щественно силикагель, хотя некоторые вещества с успехом разде ляли и на полиамиде [16, 117, 171, 256]. Можно также пользовать ся гипсом [167] или окисью алюминия;

в этом случае окись алюми ния служит носителем неподвижной фазы (диметилформамида), а подвижной является метилциклогексан [141]. Была описана также методика распределительной хроматографии на оиликагеле [210], однако это только единичный случай. Сандрони и Шлитт [202] для разделения фосфорорганических соединений рекомендовали прояв ление в специальной камере Vario KS-Chamber, в которой обес 19* 284 Специальная часть печивается антипараллельный градиент влажности;

разделение ве дется непрерывно. В статье Гамильтона и Симпсона i [ l l l ], которые пользовались флорисилом, описана адсорбция смеои 'пестицидов на колонке флорисила и их последовательное вымывание из колонки.

Этот способ удобен для предварительной очистки вытяжек перед собственно тонкослойной хроматографией. Представляет интерес хроматография на слое основного углекислого цинка [281]. Хоро шего разделения удалось добиться в системах петролейный эфир — ацетон (98:2) или (86:14). Пятна веществ были резко очерчены.

На одной и той же пластинке можно открывать хлорсодержащие и тиофосфатные инсектициды;

пользуются силикагелем либо смесью оиликагель — окись алюминия (7:3), для разделения при меняют систему растворителей гексан — ацетон (4 1). Для иден тификации служат различные реактивы '[276].

В работе [123] описано количественное определение бромофоса, малатиона и метилпаратиона колориметрически при длине волны 320 нм после реакции с хлоридом палладия (IV). В большом чис ле работ приводится методика экстракции и собственно анализа пестицидов, с одной стороны, в пищевых продуктах (а также в поч ве), а с другой — в различных биологических материалах при токсикологическом анализе. Влияние растительных веществ на хро матографическую подвижность тиофосфатов изучал Мендоса [161].

Согласно его данным, предварительная тщательная очистка образ цов после экстракции исследуемых веществ из яблок, репы, морко ви, салата и гороха не является необходимой, так как присутствую щие в них растительные вещества не оказывают резко выраженных помех. Однако у других видов, например у шпината или картофе ля, такие помехи существуют [101, 254]. Для выделения веществ из шпината, в первую очередь для препаративного выделения диа зинона, применяют слои, состоящие из нескольких сорбентов;

в стартовой области помещают смесь активного угля и целлюлозы, остальную часть слоя составляет силикагель. На смеои угля и цел люлозы улавливается ряд мешающих веществ i[101]. Выделение тиофосфатов из фруктовых соков и вин описали Местр и сотр.

[164], из фруктов in бобов — Эдер и сотр. 1[63].

Что касается извлечения и анализа тиофосфатов из биологичес ких материалов, следует указать на работу Мендосы и сотр [159], которые описали выделение некоторых веществ из печени и др.

[338, 339]. Тевари и Рам [227] приводят случаи смертельного от равления паратионом и анализ паратиона и его метаболита «-нит рофенола на окиси магния. Авторы работы [226] занимались выде лением некоторых веществ из отдельных органов, главным образом из печени. Анализ тиофосфатов в токсикологических исследованиях производили и другими способами [150, 247, 337].

Любопытную работу, посвященную движению веществ в почвах, опубликовали Венцель и Дедек [296]. На стеклянную пластинку Специальная часть авторы наносили слой почвы с водой. После высушивания на воз духе слой элюировали с водой, вынимали из камеры и плотно при жимали к нему слой силикагеля. После сушки силикагелевого слоя на воздухе на нем обнаруживали вещества, перенесенные со слоя почвы. Различные способы обнаружения и определения тиофосфа тов можно найти в статьях |[340—343].

5.4.6.3. Пиретрины, Пиретрины подвергали разделению на оиликагеле или на смеси силикагеля и окиси алюминия (так называемый сиальгель) в сис теме бензол — этилацетат (95 : 5) [238]. Некоторые авторы изучали хроматографическое разделение 3,4-метилендиоксибензольных производных, относящихся к синергистам пиретринов и карбама тов. Обзор целого ряда методов обнаружения приведен в статьях Фишбейна i[74, 344]. Количественное определение этих веществ описал Гуннер [105].

5.4.6.4. Карбаматы Довольно большое внимание было уделено важной группе пес тицидов, именно карбамата-м (см..например, [345—347]). Многие из этих веществ обладают хорошо выраженной инсектицидной или гербицидной активностью.

Хенкель [113] разделял карбаматы на силикагеле в хлорофор ме (С1) или 'в системе С2 [бензол — диизопропиловый эфир — ме тилэтилкетон (10:10:4)], а на полиамиде — в системе СЗ [петро лейный эфир — этилацетат — уксусная кислота (40:1:3) ]. Значе ния hRF некоторых веществ таковы (в скобках указана соответст вующая система растворителей): ИТК 39 (С1), 71 (СЗ), севин (С1), 29 (СЗ), зектран 33 (С1), 61 (СЗ), мезурол 20 (С1), 51 (СЗ), диметилан 28 (С2), пиролан 56 (С2), изолан 45 (С2), пирамат (С2). Аббот с сотр. [1] исследовал восемь систем 'растворителей;

удобными оказались главным образом системы гексан — ацетон (9:1) или (7:3), хлороформ — нитрометан (1:1) и т.д., т.е. все смеси растворителей, употребляемые и для триазинов (см. ниже).

Эскью и сотр. i[18] разделили большое число карбаматов. В их статье приводится также обзор способов обнаружения. Из систем пригодными оказались опять-таки смеси гексана с ацетоном и хло роформа с ацетоном. Разделяли также и некоторые дансильные производные карбаматов. Методика разделения оказалась пригод ной, например, для того, чтобы отличить мезурол от ландрина, причем в качестве сорбента применялся силикагель, пропитанный азотнокислым серебром [145]. Дансильные производные пригодны и для флуориметрического определения на том же сорбенте [82].

286 Специальная часть Такер И Хьюстон [237] работали на силикагеле или целлюлозе или ' на смеси обоих. Для проявления служил водный ацетонитрил.

Большое число систем для полиамидных слоев исследовали япон ские авторы [172]. Они рекомендовали системы растворителей пейтролейный эфир — ксилол — уксусная кислота ( 8 : 1 : 1 ), цик логексан — ацетон (8:2), водный ацетон, метанол и т. д. В их статье приведен и обзор способов обнаружения. Другие исследо ватели описали способ количественного определения, основанный на сравнении величины пятен [1], и, кроме того, извлечение кар баматов из свиной или бычьей печени и хроматографическое разде ление на микропластинках с различными сорбентами (силикагель, окись алюминия, полиамид) [160]. Кисленко и Векштейн [136] анализировали дитиокарбаматы, выделенные из воды, пыли и т. п.

Извлечением веществ из почвы и растений занимались и другие исследователи [100];

для разделения методом хроматографии они пользовались слоями целлюлозы и системой растворителей диме тилформамид—0,5 н. НС1 — этанол (6:2:2).

Препаративное разделение диастереомерных карбаматов опи сали Пиркль и сотр. [349].

Карбаматы можно хроматофафировать на слоях обработанной целлюлозы [271] или на основном углекислом цинке [282]. При применении бензола или смеси бензол — петролейный эфир — хло роформ ( 6 : 1 : 1 ) значения hRF составляли: для карбарила 26 (30), хлор'буфама 63 (74), ундена 18 (20), бутурона 52 (40), метоброму рона 33 (64). Подобная же проблема изучена и в работе Рейхлинга и Фишера [283]. Для хроматографического разделения карбаматов и производных фенилмочевины они пользовались полиамидом и системами растворителей вода — метанол — метилэтилкетон • (2:2:1), бензол, петролейный эфир — метилэтилкетон — метанол (85:10:5). Значения hRF: хлорбуфам 22, 66, 41;

унден 67, 81, 41;

бутурон 30, 43, 27;

метобромурон 41, 78, 40;

карбарил 48, 65, (см. также [348]).

5.4.6.5. Некоторые прочие пестициды Между пестицидами важное место занимают триазиновые гер бициды [353]. Их разделяют исключительно на оиликагеле в целом ряде систем растворителей. Лучше всего зарекомендовала себя система толуол — ацетон (85:15) [53, 139]. Значения hRF некото рых гербицидов в этой системе составили: для атратона 36, проме тона 45, симазина 58, атразина 68, аметрина 71, пропазина75, про метрина 81, триэтазина 88 {53]. Эбинг [62] подвергал разделению триазиновые гербициды на слоях силикагеля (в диизопропиловом эфире) или полиамида (в 60%-ном этаноле). Другие исследова тели пользовались такими смесями растворителей, как гексан— Специальная часть ацетон (5:1) или (7 : 3), хлороформ — нитрометан (1:1) и дихлор метаном [7], или двумерным хроматографированием — в первом направлении смесью гексан — ацетон (30:9), во втором — хлоро форм— нитрометан (1:1) '[211]. Количественное определение триазинов осуществляли спектрофотометрическим способом [81,84].

Палушова и сотр. [280] хроматографировали выделенные из воды триазиновые и диаэиновые гербициды на силуфоле. В качест ве системы растворителей они использовали толуол — ацетон (85:15) также и для повторного элюирования. Обнаружение произ водили смесью азотнокислого серебра и 2-феноксиэтанола (с не большим количеством перекиси водорода) и облучали в течение 10—15 мин грамицидной лампой. Хлорооодержащие инсектициды не оказывают влияния, так как в указанной системе они передви гаются с фронтом растворителя. Были разделены пиразон, десмет рин, симазин, аметрин, атразин, прометрин и пропазин.

Извлечение веществ из воды. 500—1000 мл воды насыщают этилацетатом, прибавляют 20 г хлорида натрия и трижды экстрагируют 50 мл смеси хлоро форм— этилацетат (1 • 1). Органический слой сушат безводным сульфатом нат рия и упаривают в вакууме до небольшого объема. Если необходимо, концентри рованную вытяжку очищают фильтрованием через колонку, содержащую 20 г окиси алюминия с активностью II, и элюируют вещества смесью хлороформ — метанол (9 : 1).

Хроматографией мочевинных гербицидов занимались Хенс [112] и Лук и Уайт|[149], которые пользовались силикагелем в бензоле или в смеси гексана и ацетона, а также Лоуренс и сотр. [348] и некоторые другие исследователи '[350, 351, 354, 356]. Эбинг [62] для разделения этих веществ применял силикагель и систему раст ворителей циклогексан — этилацетат (1:1), а также слои полиами да.

Ртутьорганические фунгициды подвергали делению на силика геле (в системе петролейный эфир — ацетон в различных соотно шениях или в гексане) или на окиси алюминия в тех же системах [225].

Балинова [265] хроматографировала беномил и его метаболиты.

Для обнаружения фунгицидных алкил-2-бензимидазолкарбаматов пользовались 2,6-дихлор-п-бензохинон-4-хлоримином или гипохло ритом натрия и экспонировали слой в атмосфере хлора или паров брома [273]. Обширную статью об анализе фунгицидов опублико вал Шерма {287].

Феноксиалкановые гербициды из биологических материалов вы делял Эрне [67]1 с помощью кислотной экстракции. Для выделения этих веществ из воды или грязи пользовались клиновидными хро матографическими слоями [3, 6]. Описаны экстракция и анализ диносеба из растительного материала [5] и количественное опреде ление тимета [41]. М,1М-Диалкилдитиокарбаматные гербициды можно определять денситометрическим путем [279].

288 Специальная часть ЛИТЕРАТУРА 1. Abbott D. С, Blake К. W., Tarrant К. R-, Thomson J-, J. Chromatogr., 30, 136 (1967).

2. Abbott D. С, Egan H., Thomson J., J. Chromatogr., 16, 481 (1964).

3 Abbott D. C, Egan H., Hammond E. №., Thomson J., Analyst, 89, (1964).

4. Abbott D. C, O'Tatton J., Wood N. F., J. Chromatogr., 42, 83 (1969).

5. Abbott D. C, Thomson J., Analyst, 89, 613 (1964).

6. Abbott D. C, Thomson J., Chem. Ind. (London), 1964, 481.

7. Abbott D. C, Wagstaffe P. J., J. Chromatogr., 43, 361 (1969).

8 Абдурасулева А. Р., Юсупов А., Магрупова Л., Узб. хим. ж., 12, № 5, (1968).

9. Ackermann H., J. Chromatogr., 36, 309 (1968).

10. Adamovic V. M., J. Chromatogr., 23, 274 (1966).

11. Adamovic V. M., Kem. Ind. (Zagreb), 15, 595 (1966);

Chem. Abstr., 67, 53005 (1967).

12. Ахрем А. А., Ухова Л. Я-, Усова Н. Ф., Изв. АН СССР (сер. хим.), 4, (1970).

13. Alessandro A., Man F., Settecase S., Farmaco (Pavia), Edizione Pratica, 22, 437 (1967);

Chem. Abstr., 67, 940 (1967).

14. Aly О. М., Water Res., 2, 587 (1968);

Chem. Abstr., 69, 99175 (1968).

15. Anand D. R., Pharm. Zentralh., 104, 369 (1965).

16. Antoine O., Mees G., J. Chromatogr., 58, 247 (1971).

17. Ascione P. P., Zagar J. В., Chrekian G. P., J. pharm. Sci., 56, 1393 (1967).

18. Askew J., Ruzicka J. H., Wheats В. В., J. Chromatogr., 37, 369 (1968).

19. A-szalos A., Davis S., Frost D., J. Chromatogr., 37, 487 (1968).

20. Ballschmiter K-, Tolg G., Z. Analyt. Chem., 215, 305 (1966).

21. Banaszek A., Krowicki K-, Zamojski A., J. Chromatogr., 32, 581 (1968).

22. Bark L. S., Daly J., Graham R. J. Т., Symp. IV, Chromatographie, Electro phorese, Bruxelles 1966, cmp. 128 (1968).

23. Bark L. S., Graham R. J. Т., J. Chromatogr., 23, 120 (1966).

24. Bark L. S., Graham R. J. Т., J. Chromatogr., 23, 417 (1966).

25. Bark L. S., Graham R. J. Т., J. Chromatogr., 25, 347 (1966).

26. Bark L. S., Graham R. J. Т., J. Chromatogr., 27, 116 (1967).

27. Bark L. S., Graham R. J. Т., J. Chromatogr., 33, 107 (1968).

28. Bark L. S., Graham R. J. Т., Talanta, 13, 1288 (1966).

29. Baumler J., Rippstein S., Helv. chim. Acta, 44, 1162 (1961).

30. Begue W. I., Kline R. M., J. Chromatogr., 64, 182 (1972).

31. Betina V., J. Chromatogr., 78, 41 (1973).

32. Betina V., Barath L., J. Antibiot., Ser. A, 17, 127 (1964).

33. Bettens В., Gonze J. M., J. Lebelled Compounds, 1971, 23.

34. Biagi G. L., Barbara A. M., Gamba M. F., Guerra M. C., J. Chromatogr, 41, 371 (1969).

35. Bickel H., Gaumann E., Hutter R., Sackmann W., Vischer E., Voser W., Wett stein A., Zahner H., Helv. chim. Acta, 45, 1396 (1962).

36. Bican-Fister Т., Kajganovic V., J. Chromatogr., 11, 492 (1963).

37. Bican-Filter Т., Kajganovic V., J. Chromatogr., 16, 503 (1964).

38. Bidleman T. P., Nowlan В., Frei R. W., Analyt. chim. Acta 60, 13 (1972).

39. Bird A. E., Marshall A. C, J. Chromatogr., 63, 313 (1971).

40. Bishara R. H., Born G. S., Christian J. E., J. Chromatogr., 69, 135 (1972) 41. Blinn R. C, J. Assoc. Of fie. Agr. Chem., 46, 952 (1963).

42. Bogusz M., Borkowski Т., Analyst, 98, 190 (1973).

43. Bradshaw L. B. A., J. Chromatogr., 44, 422 (1969).

44. Bravo Raoul O., Hernandez F. A., J. Chromatogr., 7, 60 (1962).

45. Bunyan P. J., Analyst, 89, 615 (1964).

46. Bush В., Lao F. C., J. Chromatogr., 77, 377 (1973) Специальная часть Buttner H., Portwich F., Arzneimittel-Forsch., 17, 809 (1967).

47.

48. Ciegler A., Kurtzman C. P., J. Chromatogr., 51, 511 (1970).

49. Cieri U. R., J. Chromatogr., 49, 493 (1970).

Crabtree A. N.. McGill A. J., Mikrochim. Acta, 1967, 85.

50.

51. Cerny A., Samonsky M., Jelinek V., Coll. Czechoslov. Chem. Commun., 48, 2347 (1971).

52. Dass H. C, Weaver G. M., J. Chromatogr., 67, 105 (1972).

53. Delley R., Friedrich K., Karlhuber В., Szekely G., Stammbach K-, Analyt.

Chem., 228, 23 (1967).

54. Deters R., Chemiker-Ztg., 86, 388 (1962).

55. De Zeeuw R. A., J. Chromatogr., 48, 27 (1970).

56. Dhont J. H., Roy C, Analyst, 86, 527 (1961).

57. Diamond P. F., J. Chromatogr., 32, 419 (1968).

58. Ebing W., Chimia, 21, 132 (1967).

59. Ebing W., J. Chromatogr., 42, 140 (1969).

60. Ebing W., J. Chromatogr., 44, 81 (1969).

61. Ebing W., J. Chromatogr., 46, 180 (1970).

62. Ebing W., J. Chromatogr., 65, 5333 (1972).

63. Eder F., Schoch H., Muller R., Mitt. Geb. Lebensmitt. Hyg., 55, 98 (1964).

Eliakis E. C, Coutselinis A. S., Eliakis E. C, Analyst, 93, 368 (1968).

64.

65. Engst R., Knoll R., Nickel В., Nahrung, 11, 161 (1967).

Engst R., Knoll R., Nickel В., Z. Lebensmitt. Untersuch., Forsch., 130, 66.

(1966).

67. Erne K., Acta vet. Scand., 7, 77 (1966);

Chem. Abstr., 65, 7893 (1966).

68. Ernst G. F., Schunring F., J. Chromatogr., 49, 325 (1970).

69. Faith L, Salka I., Kuhr I., Farm, obzor, 42, 71 (1973).

70. Fehringer N. V., Ogger J. D., J. Chromatogr., 25, 95 (1966).

71. Fehringer N. V., Westfall J. E., J. Chromatogr., 57, 397 (1971).

72. Fernandez A. A., Noceda V, Т., Carrera E. S., J. pharm. Sci., 58, (1969).

73. Fishbein L., Chromatogr. Rev., 12, 167 (1970).

74. Fishbein L, J. Chromatogr., 22, 480 (1966).

75. Fishbein L., J. Chromatogr., 26, 522 (1967).

76. Fishbein L., Falk H. L., Kotin P., Chropatogr. Rev., 10, 175 (1968).

77. Fishbein L., Zielinski W. L., Chromatogr. Rev., 9, 37 (1967).

78. Fischer H., Lautner H., Arch. Pharm., 294, 1 (1961).

79. Fooks J. R., Mattok G. L., J. pharm. Sci., 58, 1357 (1969).

80. Francovd V., Raz K.. Franc L., Cerny A., Jelinek V., Semonsky M., Coll. Cze choslov. Chem. Commun., 30, 2631 (1965).

81. Frei R. W., Freeman С D., Mikrochim. Acta, 1968, 1214.

Frei R. W., Lawrence J. F., J. Chromatogr., 67, 87 (1972).

82.

83. Frei R. W., Mallet V., Pothier C, J. Chromatogr., 59, 135 (1971).

Frei R. W., Nomura N. S., Mikrochim. Acta, 1968, 565.

84.

Frei R. W., Nomura N. S., Frodyma M. M., Mikrochim. Acta, 1967, 1099.

85.

86. Furukawa Т., Nippon Kagaku Zasshi, 80, 387 (1959).

87. GajdoS M., Cs. farm., 14, 70 (1965).

88. Ganshirt H., цит. по Stahl E., Dunnschicht-Chromatographie, 1. Aufl., Sprin ger-Verlag, Berlin, 1962, 231.

89. Ganshirt H., цит. no Stahl E., Dunnschicht-Chromatographie, 2. Aufl., Sprin ger-Verlag, Berlin, 1967, 520.

90. Ganshirt H., цит. по Stahl E., Dflnnschicht-Chromatographie, 2. Aufl., Sprin ger-Verlag, Berlin, 1967, 527.

Ganshirt H., Koss F. N.. Morianz K-, Arzneimittel-Forsh., 10, 94 (1960).

91.

92. Geike F., J. Chromatogr., 44, 95 (1969).

93. Geike F., J. Chromatogr., 52, 447 (1970).

94. Geike F., J. Chromatogr., 53, 269 (1970).

95. Geike F., J. Chromatogr., 58, 257 (1971).

290 Специальная часть 96. Geike F., J. Chromatogr., 61, 279 (1971).

97. Geike F., J. Chromatogr., 63, 343 (1971).

98. Geike F., J. Chromatogr., 64, 383 (1972).

99. Geike F., J. Chromatogr., 72, 333 (1972).

100. Geissbuhler H., Gross D., J. Chromatogr., 27, 296 (1967).

101. Gilmore D. R., Cortes A., J. Chromatogr., 21, 148 (1966).

Grafe G., Dtsch. Apoth.-Ztg., 104, 1763 (1964).

102.

103. Grassmann W., Hermann H., Portatius H., Z. physiol. Chem., 32, (1960).

104. Grau W., Enders H., J. Chromatogr., 17, 585 (1965).

105. Gunner S. W., J. Chromatogr., 40, 85 (1969).

106. Guv en К C, Eczacilik Bui., 9, 186 (1967);

Chem. Abstr., 69, 5256 (1968).

107. Gyanchandani N. D., McGilveray I. J., Hughes D. W., J. pharm. Sci., 59, 225 (1970).

108. Halmekoski J., Hannikainen H., Suomen Kemistilehti, В 36, 24 (1963).

109. Helmekoski J., Hannikainen H., Suomen Kemistilehti, В 36, 58 (1963).

110. Hamilton P. В., Cook С E., J. Chromatogr., 35, 295 (1968).

111. Hamilton D. J., Simpson B. W., J. Chromatogr., 39, 186 (1969).

112. Hance R. J., J. Chromatogr., 44, 419 (1969).

113. Henkel H. G., J. Chromatogr., 21, 346 (1966).

114. Hertnanek S., Schwarz V., Cekan Z., Pharmazie, 16, 566 (1961).

115. Homans A. L, Fuchs A., J. Chromatogr., 51, 327 (1970).

116. Howlett M. R., Selzer G. В., J. Chromatogr., 30, 630 (1967).

117. Huang J. Т., Hsiu H. C, Shih Т. В., Chou U. Т., Wang К- Т., Cheng С. Т., J. pharm. Sci., 57, 1620 (1968).

118. Huttenrauch R., Schulze I., Pharmazie, 19, 334 (1964).

119. Igloy M., Mizsei A., J. Chromatogr., 28, 456 (1967).

120. Igloy M., Mizsei A., J. Chromatogr., 34, 546 (1968).

121. Janak J., I. Chromatogr., 15, 15 (1964).

122. Janak J., Martini V., Ruzickoa I., J. Chromatogr., 78, 127 (1973).

123. Jovanovic D. A., Prosic Z., Acta pharm. jugosl., 22, 91 (1972).

124. Юдицкая А. Я-, Ж. прикл. хим., 41, 656 (1968).

125. Kamp N., Pharm. Weekbl., 101, 857 (1966);

Chem. Abstr., 69, 18074 (1968).

126. Kapadia G. J. Subba Rao G., J. pharm. Sci., 53, 223 (1964).

127. Karpitschka M., Mikrochim. Ichnoanal. Acta, 1963, 157.

128. Kassem M. A., Kassem A. A., El-Nimz A. E. M., Pharm. Ztg., Ill, (1966).

129. Katz D., J. Chromatogr., 15, 269 (1964).

130. Kawahara F. K-, Moore R. L., Gorman R. W., J. Gas Chromatogr., 6, (1968).

131. Reiner J., Huttenrauch R., Poethke W., Pharm. Zentralh., 105, 705 (1966).

132. Kho В. Т., Klein S., J. pharm. Sci., 52, 404 (1962).

133. Kiger J. L., Kiger J. G., Ann. pharm. franc., 24, 593 (1966).

134. Klein S., Kho В. Т., J. pharm. Sci., 51, 965 (1962).

135. Klein H. R., Mader W. J., J. pharm. Sci., 60, 448 (1971).

136. Кисленко М. А., Векштейн М. Ш., ЖАХ, 28, 159 (1973).

137. Knappe E., Rohwald J., ZM. analyt. Chem., 200, 9 (1964).

138. Korzun B. P., Brody S., J. pharm. Sci., 52, 206 (1963).

139. Koudela S., J. Chromatogr., 53, 589 (1970).

140. Kovacs M. F., J. Assoc. Of fie. Agr. Chem., 46, 884 (1963).

141. Kovacs M. F., J. Assoc. Offic. Agr. Chem., 47, 1097 (1964).

142. Kucharczyk N., Zikan V., Samonsky M., Coll. Czechoslov. Chem. Commun., 36, 3637 (1969).

143. Kushnir J., Ban P. A., Chortyk О. Т., Analyt. Chem., 42, 619 (1970).

144. Langner H. J., Teufel U., J. Chromatogr., 78, 445 (1973).

145. Lawrence J. F., Legay D. S., Frei R. W., J. Chromatogr., 66, 295 (1972).

Специальная часть 146 Libosvar J Nedbal J, Hack V, Cs farm, 11, 73 (1962) 147 Lin Y T, Wang К T, Yang T. I J Chromatogr, 20, 610 (1965) 148 LmY T, Wang К T, Yang T I, J Chromatogr, 21, 158 (1966) 149 Look M, White L R,S Chromatogr, 50, 145 (1970) Luckens M. M, J forens Sci, 11, 64 (1966), Chem Abstr, 64, (1966) 151 Ludwig E, Freimuth U, Nahrung, 8, 559 (1964) 152 Luknarova N, Hamerhkova О, Faith L, Cs farm, 22, 353 (1973) 153 Lyman R L, Livingston A L, Bwhoff E. M, Both A N, J org Chem, 23, 756 (1958) Mathis С, Bull Soc chim France, 1973, 155 Mathis С, Schmitt J P, Ann pharm franc, 26, 727 (1968) 156 McGilveray I J, Strickland R D,i pharm Sci, 56, 77 (1967) 157 Melhnger T J., Keeler С E, J pharm Sci, 51, 1169 (1962) 158 Mendoza С E, J Chromatogr, 78, 29 (1973) 159 Mendoza С E, Grant D L, Braceland B, McGully К A, Analyst, 94, (1969) 160 Mendoza С Е, Shields J В, i Chromatogr, 50, 92 (1970) 161 Mendoza С E, Wales P J, Bray D F, Analyst, 93, 688 (1968) 162 Mendoza С E., Wales P J, McLeod H A, McKmley W P, Analyst, 93, 34 (1968) 163 Mendoza С E, Wales P J, McLeod H A, McKmley W B, Analyst, 93, 173 (1968) 164 Mestres R, Chave Chr, Barthes F, Ann Fals Expert Chim, 60, 47 (1967), Chem Abstr, 68, 20958 (1968) 165 Chromatogr, 26, 531 (1967) Meyers E, Enckson R C,i 166 Meyers E, Smith D., J Chromatogr, 14, 129 (1964) 167 Mitchell L С, J Chromatogr, 30, 269 (1967) Moreira E A, Tnbuna farmaceutica, 31, 49 (1964) 169 Morley H V, Chiba M, J Assoc Offic Agr Chem, 47, 306 (1964) 170 Chromatogr, 34, 556 (1968) Mulhern В M,i 171 Nagasawa K, Yoshidome H J Chromatogr, 39, 282 (1969) 172 Nagasawa К Yoshidome H Kamata F J Chromatogr, 52, 453 (1970) 173 Narasimhachan N Ramachandran S, J Chromatogr, 27, 494 (1967) 174 Nicolaus J R, Coronelli C, Btnaghi A, Expenentia, 17, 473 (1961) 175 Nussbaumer P A, Pharm Acta Helv, 37, 65 (1962) 176 Nussbaumer P A Pharm Acta Helv, 37, 161 (1962) 177 Nussbaumer P A, Pharm Acta Helv, 38, 758 (1963) 178 Ochab S, Borowiecka B, Diss Pharm Pharmacol, 20, 449 (1968), Chem.

Abstr, 69, 109847 (1968) 179 Onley J H,J Assoc Offic Agr Chem, 47, 317 (1964) 180 Pastor J Raimonde R, Bull Soc pharm, 13, 193 (1964), Chem Abstr, 63, 16133 (1965) Pastuska G, Z analyt Chem, 179, 427 (1961) 182 Pastuska G, Petrowitz H J Chemiker Ztg, 86, 311 (1962) 183 Pastuska G, Tnnks H, Chemiker Ztg, 85, 535 (1961) 184 Pauncz J K, J Antibiotics (Budapest), 25, 677 (1972), Anal Abstr, 25, 1861 (1973) 185 Петрова Т М Голубев Т И Хим сельск хоз, 5, 54 (1967), Chem Abstr, 67, 52888 (1967) 186 Petrowitz H J, Chemiker-Ztg, 85, 867 (1961) 187 Petrowitz H J, Materialprufung, 2, 309 (1960) 188 Petrowitz H J., Z analyt Chem, 183, 432 (1961) Poethke W, Kinze W, Pharm Zentralh, 103, 95 (1964) 190 Pokorny M, Vitezic N, lapelj M J Chromatogr 77,458(1973) 191 Radecda С, Wilson W. L J Chromatogr, 57, 297 (1971) 192 Ragab M T H, Anal Letters, 1, 973 (1968) 292 Специальная часть 193. Ragazzi E., Boll. Chim. Farm., 100, 402 (1961);

Chem. Abstr., 56, (1962).

194. Reichel W. L., J. Chromatogr., 26, 304 (1967).

195. Reisch J., Bornfleth H., Rheinbay J'., Pharm. Ztg., 107, 920 (1962).

196. Renault J., Cartron M. F., Ann. pharm. franc., 25, 295 (1967).

197. Reusser P., Z. analyt. Chem., 231, 345 (1967).

198. Richard G., Radecka G., Hughes D. W., Wilson W. L, J. Chromatogr., 67, 69 (1972).

199. Roder E., Mutschler E., Rocheltneyer H., Arch. Pharm., 301, 624 (1968).

200. Roseira A. N.. Guedes L. C, J. Chromatogr., 23, 483 (1966).

201. Salame M., J. Chromatogr., 16, 476 (1964).

202. Sandroni S., Schlitt H., J. Chromatogr., 55, 385 (1971).

203. Seeboth H., Forsch. Wasserchem. Ihre Grenzgeb., 2, 128 (1965);

Chem. Abstr., 68, 46005 (1968).

204. Semonsky M., Zikan Y., Vesela H., Cs. farm., 22, 314 (1973).

205. Sherma J., Hood L. V. S., J. Chromatogr., 17, 307 (1965).

206. Shoji J., J. Chromatogr., 26, 306 (1967).

207. Schmitt J. P., Mathis C, Ann. pharm. franc., 28, 205 (1970).

208. Simmons D. L., Ranz R. J., Woo H. S. L., Picotte P., J. Chromatogr., 43, 141 (1969).

209. Simmons D. L., Woo H. S., Koorengevel С. М., Seers P., J. Pharm. Sci., 55, 1313 (1966).

210. Smart N. A., Hill A. R. C, J. Chromatogr., 30, 626 (1967).

211. Smith A. E., Fitzpatrick A., J. Chromatogr., 57, 303 (1971).

212. Smith В., Acta chem. scand., 1962, 16, 843.

213. Smith G. A. L, Sullivan P. J., Analyst, 89, 312 (1964).

214. Spengler D., Jumar A., J. Chromatogr., 49, 329 (1970).

215. Stahl E., Chemiker-Ztg., 82, 323 (1958).

216. Stahl E., Pharm. Rundschau, 1, (2) (1959).

217. Stanley C. W., J. Chromatogr., 16, 467 (1964).

21-8. Steller W. A., Curry A. N.. J. Assoc. Offic. Agr. Chem., 47, 645 (1964).

219. Szokolay A., Mad'aric A., J. Chromatogr., 42, 509 (1969).

220. Sarsunova M., Cs. farm., 22, 259 (1973).

221. Sarsunova M., Kakac В., Semonsky M., Cs. farm., 21, 397 (1972).

222. Sarsunova M., Schwarz V., Pharmazie, 17, 527 (1962).

223. Sarsunova. M., Schwarz V., Feketeova E., Protiva I., Pharmazie, 21, (1966).

224. Spinkova V., Cs. farm., 16, 138 (1967).

225. O'Tatton J., Wagstaffe P. I., J. Chromatogr., 44, 284 (1969).

226. Tewari S. N.. Marplani S. P., Mikrochim. Acta, 1973, 321.

227. Tewari S. N.. Ram L., Z. analyt. Chem., 248, 41 (1969).

228. Thielemann H., Mikrochim. Acta, 1971, 522.

229. Thielemann H., Z. analyt. Chem., 253, 38 (1971).

230. Thielemann H., analyt. Chem., 253, 39 (1971).

231. Thielemann H., Z. analyt. Chem., 253, 124 (1971).

232. Thielemann H., Z. analyt. Chem., 264, 32 (1973).

233. Thielemann H., Z. analyt. Chem., 266, 208 (1973).

234. Thomas E. I., Burke J. A., Lawrence I. H., J. Chromatogr., 35, 119 (1968).

235. Thomas J. J., Dryon L, J. Pharm. Belg., 22, 163 (1967).

236. Tonjes H., Potter H., Pharmazie, 21, 217 (1966).

237. Tucker B. V., Huston B. J., J. Chromatogr., 42, 119 (1969).

238. Tyihak E., Herba hung., 1966, 5, 306;

Chem. Abstr., 68, 38483 (1968).

239. Udvardy-Nagy E., Elekes J., Gyogyszereszet, 12, 367 (1968).

240. Вайнтрауб Ф. П., Вопр. питания, 27, 55, 1968.

241. Vandamme E. J., Voets J. P., J. Chromatogr., 71, 141 (1972).

242. Van der Venne M. Th., T'Siobbel J. В., J. Pharm. Belg., 19, 577 (1964).

243. Van Hoeck G., J. Pharm. Belg., 27, 609 (1972).

Специальная часть 244. Van Hoeck G., Kapetanidis I., Mirimanoff A., Pharm. Acta Helv., 47, (1972).

245. Van Sumere С F., Wolf G., Teuchy H., КШ I., J. Chromatogr., 20, (1968).

246. Васильева Б., Цесляк Т., Антибиотики, 10, 877 (1965).

247. Vercruysse A., Deslypere P., J. forens. Med., 11, 107 (1964).

248. Villeneuve D. C, Butterfield A. G., Grant D. L., McCully K- A., J. Chroma togr., 48, 567 (1970).

249. Visweswariah K., Jayaram M., J. Chromatogr., 62, 479 (1971).

250. Voigt R., Maa Bared A. G., J. Chromatogr., 36, 120 (1968).

251. Wagman G. H., Bailey J. V., J. Chromatogr., 41, 263 (1969).

252. Wagner G., Wandel W., Pharmazie, 21, 102 (1966).

253. Waldi D., цит. по Stahl E., Dflnnschicht-Chromatographie, 1. Aufl., Springer Verlag, Berlin, 1962, 321.

254. Wales P. J., Mendoza С E., McLeod H. A., McKinley W. P., Analyst, 93, 691 (1968).

255. Walker K- C, Beroza M., J. Assoc. Offic. Agr. Chem., 46, 250 (1963).

256. Wang R. Т., Chou S. S., J. Chromatogr., 42, 416 (1969).

257. Weber S. H., Langemann A., Helv. chim. Acta, 40, 1 (1965).

258. Wilson W. L., Richard G., Hughes D. W., J. Chromatogr., 78, 442 (1973).

259. Wilson W. L., Richard G., Hughes D. W., J. pharm. Sci., 62, 282 (1973).

260. Winterlin W., Walker G., Frank H, J. Agr. Food Chem., 16, 808 (1968).

261. Wollish E. C, Schmall M., Hawylyshyn M., Analyt. Chem., 33, 1138 (1963).

262. Yamamura J., Niwaguchi Т., Kagaku Keisatsu Kenkyusho Hokoku, 13, (1960);

Chem. Abstr., 56, 6416 (1962).

263. Zarnack J., Pharmazie, 26, 503 (1971).

264. Zuidweg M. H., Oostendorp J. C, Bos С J., J. Chromatogi\, 42, (1969).

265. Balinova A., J. Chromatogr., Ill, 197 (1975).

266. Biagi G. L, Barbaro A. M., Guerra M. C, Cantelli-Forti G., Gandolfi O., J. Chromatogr., 106, 349 (1975).

267. Canic V. P., Z. analyt. Chem., 265, 332 (1973).

268. De Sagher R. M., De Zeenheer A., Claerp A. E., J. Chromatogr., 106, (1975).

269. Hanel G., Sci. Pharm., 42, 33 (1974).

270. lunger E., Bajer-Rapic В., Schmid E. R., Lebensmitt. Unters. Forsch., 157, 281 (1975).

271. Janssen G., Vanderhaeghe H., J. Chromatogr., 114, 266 (1975).

272. Keller E., Dtsch. Apoth.-Ztg., 115, 1451 (1975).

273. Kvalvag J., J. Chromatogr., 93, 491 (1974).

274. McNeil J. D., Frei R. W., J. chrom. Sci., 13, 279 (1975).

275. Mallet V., Surette D. P., J. Chromatogr., 95, 243 (1974).

276. Narayanaswami K., Moitra В., Kotangle R. S., Bami H. L., J. Chromatogr., 95, 181 (1974).

277. Nekola M., Z. Analyt. Chem., 268, 272 (1974).

278. O'Neil P. J., Proc. Soc. Anal. Chem., 11(2), 30 (1974);

Chem. Abstr., 82, 145028 (1975).

279. Onuska F. I., Anal. Letters, 7, 327 (1974).

280. Palusovd C, Sacktnauerova M., Mad'aric A., J. Chromatogr., 106, 40 (1975).

281. Reichling J., Egger K., Z. Analyt. Chem., 268, 124 (1974).

282. Reichling L, Fischer H., Z. Analyt. Chem., 275, 201 (1975).

283. Reichling J., Fischer H., Z. analyt. Chem., 276, 301 (1975).

284. Ragazzi., Veronese C, Farmaco (Pavia), Edizione Pratica, 29, 372 (1974).

285. Rucickova J., Farm, obzor., 44, 61 (1975).

286. Серова Л. И., Котова Н. И., Томащик А. Д., Корчагин В. Б., Антибиотики, 20 (2), 106 (1975).

287. Sherma J., J. Chromatogr., 113, 97 (1975).

294 • Специальная часть 288. Soczewinski E., J. Chromatogr., 94, 229 (1974).

289. Szokolay А-, Uhndk J., Sackmauerovd M., Mad'aric A., J. Chromatogr., 106, 401 (1975).

290. Szumiko H., J. Chromatogr., 94, 219 (1974).

291. Sarsunovd M., Gerikovd M., Cs. farm, в печати.

292. SarSunovd M., Kakdc В., Semonsky M., Cs. farm., 26, 19 (1977).

293. Sarsunovd M., Ldszloovd H., Cs. farm., 22, 310 (1977).

294. Thielemann H., Sci. Pharm., 43, 37 (1975).

295. Thielemann H., Z. analyt. Chem., 272, 368 (1974).

296. Wenzel K-, Dedek W., J. Chromatogr., 109, 443 (1975).

297. Willekens G. J., J. pharm. Sci., 64, 1681 (1975).

298. Lalka D., Bardos Т., J. pharm. Sci., 62, 1294 (1973).

299. Norpoth K-, et al., Arzneimittel-Forsch., 23, 1529 (1973).

300. Sarstinova M., Semonsky M., Perina Z., Kakdc В., Доложено на X Между народном химиотерапевтическом симпозиуме в Цюрихе в сентябре 1977 г.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ЛИТЕРАТУРА 301. Szumiko H., Szoczewinski Е. S., J. Chromatogr., 94, 219 (1974).

302. Bekarek V., Kalova H., Chem. Listy, 70, 17 (1976).

303. Biaggi G. L, Barbaro A. M., Guerra M. C, Cantelli-Forti G., Gandolfi O., J. Chromatogr., 106, 349 (1975).

304. de Clerco H., et al., J. pharm. Sci., 66, 1269 (1977).

305. Hanel G., et al., Sci. pharm. (Wien), 42, 33 (1974).

306. Lepri L, et al., J. Chromatorg., 93, 201 (1974).

307. Sigel С W., et al, J. pharmac. Sci., 63, 1202 (1974).

308. Zalipsky J., et al., J. pharm. Sci., 67, 387 (1978).

309. Nowakowska Z., Wieniawski W., Acta polon. pharm., 35, 189 (1978).

310. De Angelis R. L., et al., J. Chromatogr., 106, 41 (1975).

311. Rambousek V., Zberina V., Matrka M., Cs. farm., 27, 438 (1978).

312. Sarstinova M., Kakac В., Semonsky M., Cs. farm., 26, 19 (1977).

313. Sarsunovd. M., Semonsky M., Kakdc В., Schmidt K-, Farm, obzon, 46, (1977).

314. Kreusig F., J. Chromatogr., 142, 441 (1977).

315. Серова Л. И., Корчагин В. В., Антибиотики, 21, 464 (1976).

316. Серова Л. И., Корчагин В. Б., Антибиотики, 21, 84 (1976).

317. Дзегиленко Н. Б., Владимирская Р. А., Корчагин В. Б., Антибиотики, 22, 206 (1977).

318. Ragazzi E., Veronese G., Farmaco (Pavia), Edizione pratica, 29, 372 (1974).

319. Ragazzi E., Veronese G., J. Chromatogr., 132, 105 (1977).

320. Szabo A., Nagy M. K-, Tomorkeny E., J. Chromatogr., 151, 256 (1978).

321. lssaq H. I., Ban E. W., Wei Т., Meyers G., Aszalos A., J. Chromatogr., 133, 291 (1977).

322. Karkocha G., Roczn. Panstw. Zakl. Hig., 29, 193 (1978);

Chem. Abstr., 89, 127809p (1978).

323. Kobrehel C, Tambutasev Z., Djokic S., J. Chromatogr., 133, 415 (1977).

324. Chakrabarti I., Roy B. R., J. Indian Acad. Forensic Sci., 15, No. 2, 20 (1976);

Chem. Abstr., 86, 166250g (1977).

325. Кравченко М. С., Собина Н. А., Рудь А. Н., Пробл. охр. использ. вод., 3, 92 (1975).

326. Reichling J., Z. Analyt. Chem., 281, 139 (1976).

327. Sinva R. P., Gig. Sanit., 1974, No. 7, 52.

328. Bencev I., Georgijev G. K-, Risov N., Chim. Zdravoopas, 19, 485 (1976).

329. Cvetkova C, Sergejeva D., Christoforova V., Todorova M., Vet.-Med. Nauki, 11, No. 5, 82 (1974).

330. Дятловицкая Ф. Г., Гладенко Е. Ф., Методы определения пестицидов в во де, 1, 111 (1973).

Специальная часть 331. Карпова И., Рузанкова Л., Дардик М., Шумкова И., Мясн. пром. СССР, № 6, 32, (1976).

332. Ludwick A. Е., Lau А. N. К-, Ludwick L. M., J. Assoc. Offic. Anal. Chem., 60, 1077 (1977).

333. Павленко Л. Ф., Гончарова И. А., Методы определения пестицид., 1, (1973).


334. Szokolay A., Uhnak J., Sackmauerova M., Mad'aric A., J. Chromatogr., 106, 401 (1975).

335. Tewari S. N.. Sharma I. C, J. Chromatogr., 131, 275 (1977).

336. Thielemann H., Z. Chem., 14, 292 (1974).

337. Burchfield H. P., Storrs E. E., J. Chromatogr. Sci., 13, 202 (1975).

338. Hladka A., Kovac J., Krampl V., Z. analut. Chem., 274, 371 (1975).

339. Казарновский Е. С, Ветеринария, № 3, 105 (1975).

340. Лещев В. В., Таланов Г. А., Хим. сельск. хоз., 15, № 7, 46 (1977).

341. Макарова С. В., Хмельницкая В. Н., Елисеева М. А., Заводск. лаб., 40, 792 (1974).

342. Stefanac Z., Stengl В., Vasilic Z., J. Chromatogr., 124, 127 (1976).

343. Tevari S. N.. Harpalani S. P., J. Chromatogr., 130, 229 (1977).

344. Flschbein L., J. Chromatogr. Sci., 13, 238 (1975).

345. Dorough H. W., Thorstensen J. H., J. Chromatogr. Sci., 13, 212 (1975).

346. Ernst G. F., Roder S. I., Tjan G. #., Jansen J. T. A., J. Assoc. Offic Anal.

Chem., 58, 1015 (1975).

347. Joshi N. P., Joglekar V. D., J. Indian Acad. Forensic Sci., 15, No. 2, (1976);

Chem. Abstr., 86, 184390g (1977).

348. Lawrence J. F., Laver G. W., J. Assoc. Offic. Anal. Chem., 57, 1022 (1974).

349. Pirkle W. H., Hauske J. R., J. Org. Chem., 42, 1839 (1977).

350. Deleu R., Barthelemy I.-P., Copin A., J. Chromatogr., 134, 483 (1977).

(1974).

351. Gonnet C, Rocca J. L., J. Chromatogr., 109, 297 (1975).

352. Mailoth F., Medve F., Jozsef M., Acta Pharm. Hung., 44, No. 102, 7J 353. Palusovd O., Sackmauerova M., Med'aric A., J. Chromatogr., 106, 405 (1975).

354. Pribyl J., Herzel F., Z. analyt. Chem., 286, 95 (1977).

355. Sherma L, J. Chromatogr, 113, 97 (1975).

356. Yip G., J. Chromatogr. Sci., 13, 225 (1975).

М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В ФАРМАЦИИ И КЛИНИЧЕСКОЙ БИОХИМИИ В двух частях Научный редактор Т. Т. Орловская Мл. научный редактор И. С. Ермилова. Художник Е. И. Волков Художественный редактор М. Н. Кузьмина Технический редактор Н. И. Манохина Корректор ИБ № Сдано в набор 31.03.80. Подписано к печати 01.07.80.

Формат 60X90'/ie. Бумага типографская № 1.

Гарнитура латинская. Печать высокая. Объем 9,25 бум. л.

Усл. печ. л. 18,50. Уч.-изд. л. 21,38. И з д. № 3/0548.

Тираж 3000 экз. З а к. 263. Цена 3 р. 50 к.

ИЗДАТЕЛЬСТВО «МИР»

Москва, 1-й Рижский пер., 2.

Московская типография № 11 Союзполиграфпрома при Государственном комитете СССР по делам издательств, полиграфии и книжной торговли.

113105. Москва, Нагатинская ул., 1.

Doc. RNDr. PhMr. Magda SARSUNOVA, DrSc.

RNDr. Vladimir SCHWARZ, CSc.

RNDr. Cestmir MICHALEC A kolektiv CHROMATOGRAFIA NA TENKYCH VRSTVACH VO FARMACII A V KLINICKEJ ВЮСНЁМН Druhe, prepracovane a doplnene vydanie Zostavovatelia doc. RNDr. PhMr. Magda Sarsunova, DrSc, RNDr. Vladimir Schwarz, CSc.

Autori RNDr. Vlasta Hadrabova, Ing. Stanislav Hermanek, CSc, Ing. Jan Hrivnak, CSc, RNDr. PhMr. Josef Hubik, CSc, prof. RNDr. PhMr.

Jaroslav Majer, DrSc RNDr. Cestmir Michalec, RNDr. PhMr. Fri drich Perenyi, RNDr. Vladimir Schwarz, CSc, doc. RNDr. PhMr.

Magda Sarsunova, DrSc, prof. Ing. Juraj Tolgyessy, DrSc.

Rukopis posudili prof. RNDr. PhMr. Ahtonin Jindra, DrSc, pro M D. Frantisek Santavy, DrSc.

Ur V d v t lt o Ov t y a ae' v s ea s U/ Z G М. ШАРШУНОВА, В. ШВАРЦ, Ч. МИХАЛЕЦ ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В ФАРМАЦИИ И КЛИНИЧЕСКОЙ БИОХИМИИ В двух частях Перевод со словацкого канд. хим. наук А. П. СЕРГЕЕВА и канд. хим. наук А. Н. УШАКОВА под редакцией доктора хим. наук, профессора В. Г. БЕРЕЗКИНА и доктора хим. наук С. Д. СОКОЛОВА ИЗДАТЕЛЬСТВО «МИР», МОСКВА,.,*в0Д „ 1ES ИНГ.

УДК 543.544+577. Составители: М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец Авторы: В. Гадрабова, С. Гержманек, Я- Гривняк, И. Губик, Я- Маер, Ч. Михалец, Ф. Перении, В. Шварц, М. Шаршунова, Ю. Толдьеши Редакция литературы по химии 1806000000 © Magda Sarsunova,.Vladimir Schwarz, Cestmir Micha l e c. ! 20505- Ш 97- 041 (01)-80 Перевод на русский язык, «Мир», © 5.5. Природные биокатализаторы 5.5.1. Витамины Не будучи химически родственными друг другу, витамины с биологической точки зрения образуют единую группу. Так как классифицировать их по химическому строению было бы довольно сложно, в настоящее время принято делить их на жирораствори мые (липофильные) и водорастворимые (гидрофильные);

витами ны обычно обозначают буквами латинского алфавита.

5.5.1.1. Жирорастворимые витамины Для разделения той группы витаминов, к которой относятся витамины A, D, E, F и К, хроматография в тонком слое как раз является особенно удобным методом [275, 276, 280, 283].

Витамин А и каротины Разделение витаминов группы А, как и их провитаминов — ка ротинов, определяется их химическим строением. Вещества эти липофильны, отличаются значительным числом двойных связей и вследствие этого нестойкостью;

при хроматографическом разделе нии их необходимо предохранять от окислительных воздействий.

Сорбенты. При делении этой группы веществ пользовались как активированным силикагелем [68, 135], так и обычным силикаге лем G [67, 159, 167, 218] без предварительной активации. На этом сорбенте подвергали разделению сложные смеси витаминов А [109, 134] и каротинов [88, 195]. Некоторые авторы пользовались для разделения каротинов силикагелем с крахмалом в качестве связующего [101];

тот же сорбент применяли и в работе [1]. На шел применение силикагель в смеси с гидроокисью кальция в от ношении 1:6 [90]. Шталь и сотр. [203] подвергали разделению 30 каротинов на слоях силикагеля G с добавками гидроокиси кальция или фосфата магния. Винтерштейн и сотр. [248] и дру гие авторы [184] при выделении каротинов из животного и рас тительного сырья работали на слоях силикагеля G и гидроокиси кальция в отношении 8:2. Кифер и Джонсон [122] при делении витаминов А и каротинов пользовались в качестве сорбента гид роокисью магния. Некоторые авторы разделяли гликозиды каро тинов на окиси магния [124] или исследовали изменения витами 302 Специальная часть нов Ai и А2 и каротинов у двух видов пресноводных рыб, причем для витаминов сорбентом служил силикагель с добавкой окиси магния, а для каротинов — силикагель с примесью гидроокиси кальция [74]. Копиус-Пееребоом и Беекес [31—33] подвергали разделению каротины на силикагеле G, на пропитанном азотно кислым серебром силикагеле G, на слоях окиси алюминия и на слоях кремнезема с полиамидом, тогда как Эггер и Фойгт [56] применяли только полиамид, а Риттих и сотр. [280] — на силика геле, пропитанном полиэтиленгликолем. Для разделения кароти нов и витамина А удобным оказался кремнезем, пропитанный ва зелиновым или растительным маслом [35]. Моттье [154] разделял каротины на незакрепленной окиси алюминия. Давидек и Блатт на [42] применяли ее для разделения смеси липофильных витами нов. Вахек и сотр. [227] обнаруживали на этом же сорбенте ви тамин А в солюбилизированном растворе.

Системы, растворителей. Для разделения каротинов на различ ных сорбентах [203] применяли целый ряд неполярных систем растворителей. Для разделения каротинов на силикагеле с крах малом как связующим была выбрана система петролейный эфир — бензол (98 : 2), для кетопроизводных каротинов удобным оказался бензол. Гидроксилированные каротины подвергали раз делению в системе бензол — метанол (98:2) [101]. На активиро ванных слоях разделение проводили в петролейном эфире [44, 45, 101], на смешанных слоях гидроокиси кальция и силикагеля ( 2 : 8 ) — в системе петролейный эфир — бензол (1:1) [246—248].

Эти же исследователи [246—248], работая на слоях активирован ного силикагеля G, пропитанного 5%-ным раствором вазелинового масла в петролейном эфире, в качестве системы растворителей применяли вазелиновое масло, насыщенное метанолом. Изомеры витамина А подвергали разделению на силикагеле G в системе петролейный эфир — метилэтилкетон (11 :2). Витамины этой груп пы отделяли от липоидов на силикагеле в петролейном эфире, подкисленном уксусной кислотой [202]. На этом же сорбенте в системе гексан — эфир — уксусная кислота ( 9 4 : 6 : 1 ) и ( 5 0 : 3 0 : 1 ) выделяли витамин А из природного сырья [134]. Юркевич и сотр.

[109] исследовали продукты синтеза витамина А и чистоту проме жуточных продуктов синтеза на силикагеле в системе бензол — ме танол ( 9 : 1 ). Для разделения каротинов Сю и сотр. [88] пользо вались бензолом, а также системой бензол — метанол (97:3) или бензол — этилацетат — метанол (75 :20 : 5).

Синг и сотр. [195] подвергали разделению витамины Ai и А в форме пальмитатов, ацетатов, спиртов и альдегидов витамина А и его ангидровитамина в системах ацетон — изооктан (3:97), эфир — петролейный эфир (4 : 6) или ацетон — петролейный эфир (т. кип. 40—60 °С) (3:47). Несколькими системами для разделе ния витаминов А в форме спиртов, ацетатов, пальмитатов и в фор Специальная часть ме ангидровитамина А пользовался Каган [ПО]. Пригодными ока зались, например, системы петролейный эфир — эфир — уксусная кислота (90:10:1), циклогексан — этанол (97:3) и хлороформ — этанол (99: 1). Давидек и Блаттна [42] разделяли смеси витами нов А и других липофильных витаминов в петролейном эфире.

Обнаружение. Витамин А обнаруживали в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм, при этом пятна витамина А и его производных, особенно при добавлении флуоресцентных добавок, были темными на светлом флуоресцирующем фоне. При длине волны 366 нм каротины не флуоресцировали, а некоторые витами ны группы А и их производные обнаруживали желто-зеленую флуоресценцию. Для обнаружения этой группы веществ пригодны ми оказались также раствор хлорида сурьмы(III) (Д 87а), 20%-ный раствор хлорида сурьмы (V) (Д 86) или концентрирован ная серная кислота [1]. Удобно пользоваться также фосфорномо либденовой кислотой (Д 115) [195]. Идентификацию каротиноид ных альдегидов производили спиртовым раствором родамина В (Д 175), после которого опрыскивали хроматограмму концентри рованным аммиаком или концентрированной щелочью [51]. Для' идентификации всех липофильных витаминов удобно также обна ружение 70%-ной хлорной кислотой или 96%-ной серной кислотой [42]. При действии обоих реактивов идентифицируют эти веще ства по различному окрашиванию (табл. 42).


Применение. При разделении группы витаминов и каротинов применяли различные методики ТСХ. Мы здесь укажем только те, которые наиболее важны в фармацевтической практике и в кли нической биохимии.

Так, ТСХ использовали для выделения каротинов из природных материалов, как растительных, так и животных [122, 246—248].

Способ нашел себе применение также при отделении каротинов Таблица Цветные реакции жирорастворимых витаминов [23] Окраска "_. Витамин 70%-ная хлорная кислота 96%-ная серная кислота А Темно-фиолетовая Фиолетовая Оранжево-коричневая Оранжево-коричневая D Коричневая Коричневая Е Желто-коричневая Желто-коричневая Кь Кг, Кз (каро- Синяя Провитамины А Синяя тины) 304 Специальная часть от токоферолов [159]. Моттье [154] выделял методом ТСХ каро тины из моркови. Многие авторы [см., например, 43, 44, 236] та ким образом выделяли каротины из пищевых продуктов, а другие исследователи — из галеновых препаратов [282]. Синг и сотр.

[195] подвергали разделению смеси каротинов. Другие авторы ;

[88] разделяли продукты метаболизма каротинов, а также а- и р-каротины. Боллигер и сотр. [25] идентифицировали эти веще ства в. присутствии витаминов А и других липофильных витами нов на слоях силикагеля. Методом ТСХ Планта и сотр. [167] ана лизировали синтетический витамин А. Шталь и сотр. [202] иден тифицировали природные витамины Ai и Аг в концентратах и жи вых организмах. Мангольд [145] отделял витамин А в форме пальмитата от прочих липоидов. Варма и другие [230], а также Чима и сотр. [30] доказывали наличие витамина А в рыбьем жи ре и в поливитаминных препаратах. Кацуи [114] выделял витамин А в форме сложных эфиров на силикагеле G и на окиси алюми ния. Адамский и Добруцкий [1] обнаруживали витамин А в фор ме пальмитата в мази, содержавшей безводный ланолин из овечь ей шерсти. Советские авторы [109] отделяли витамин А от проме жуточных продуктов синтеза. Другие авторы [253] исследовали продукты разложения пальмитата витамина А в концентратах.

Каган [ПО] изучал метаболиты витамина А в печени и в крови.

Эймс [2] разделял изомеры витамина А. Давидек и Блаттна [42] смогли разделить витамины А в форме спиртов, ацетатов и паль митатов следующим образом.

В качестве сорбента авторы пользовались окисью алюминия для хромато графии фирмы Lachema с величиной частиц 0,3 мм и активностью III—IV. Слои готовили обычным образом на стеклянных пластинках размером 55X350 мм.

Исследуемые вещества наносили на расстоянии 2—3 см от края пластинки. Хро матографирование вели восходящим методом до расстояния 30 см в течение 45— 60 мин. Применяли несколько систем растворителей: метанол, абсолютный эта нол, я-бутанол, этанол с бензином, гексан, циклогексан, петролейный эфир, керо син, бензол, толуол, ксилол, хлороформ, четыреххлористый углерод и ацетон.

Для обнаружения пользовались хлоридом сурьмы(III) (Д 87а) или хлоридом сурьмы(У) (Д 86), спиртовой щелочью (Д 78), 1%-ным раствором 2,6-дихлор фенолиндофенола (Д 31), 40 и 96%-ной серной кислотой, причем окрашивания веществ с этими реактивами были различны. Этим способом обнаруживали а- и Р-каротины, витамины A, D, Е, Кь Кг, Кз (табл. 42).

Ру ([281] исследовал влияние влажности на стойкость витаминов А и Е, а Адамский и сотр. [272] изучали продукты разложения пальмитата витамина А.

Количественное определение. Определение каротинов и витами на А после их разделения методом ТСХ долго не удавалось осу ществить из-за малой стойкости этих веществ. При полуколичест венном определении сравнивали интенсивность окрашивания эта лонных образцов в различных концентрациях с интенсивностью окрашивания исследуемых образцов после цветной реакции. Раз деление проводили на одной и той же пластинке, чтобы снизить неточность определения [25]. Позже были разработаны флуори Специальная часть метрическое количественное определение витамина А и определе ние его газохроматографическим методом после разделения на слоях силикагеля. Стереоизомеры витамина А сначала разделяли абсорбционным методом, а затем определяли количественно [127].

Витамин А определяли также радиометрически [89] или фотомет рически и спектрофотометрически после отделения прочих липо фильных витаминов [111].

Витамины D и провитамины D Сорбенты. Большинство авторов подвергали разделению веще ства этой группы на слоях силикагеля обычной толщины [напри мер, 68, 208]. Другие авторы [18] пользовались для разделения кальциферола и холекальциферола силикагелем G, пропитанным 5%-ным раствором парафина в петролейном эфире. Многие иссле дователи применяли в качестве сорбента силикагель [25, 39, 58, 230 и др.]. Некоторые из них [180, 208] работали с более толсты ми слоями, например 0,4—3,0 мм. Биери и сотр. [16] для разделе ния смеси витаминов D и их провитаминов пользовались силикаге лем Н, пропитанным раствором родамина В. Эти же вещества Копиус-Пееребоом и другие [32, 33] разделяли на силикагелей, импрегнированном азотнокислым серебром (46,5:3,5). Работали также на этом же сорбенте, пропитанном вазелиновым маслом [25], или на слоях кремнезема, пропитанного раствором ундека на в петролейном эфире (т. кип. 40—60°С) (1 :9) [162]. При этой модификации слоев использовался принцип распределения для разделения сложных эфиров витаминов D и для отделения витами на D 2 от витамина D 3. В литературе описано применение смеси силикагеля с фосфорнокислым кальцием [158], фосфорнокислого кальция [25] или смеси окиси алюминия и силикагеля [58]. В не скольких работах [24, 32, 162] было показано, что окись алюми ния пригодна для анализа смесей витаминов D и гидрированных производных. Фонтенель и сотр. [60] работали с окисью алюми ния со связующим веществом, другие авторы [64] обнаруживали витамины группы D в смесях на незакрепленных слоях окиси алю миния.

Системы растворителей. Для разделения витаминов D и их провитаминов применяли на непропитанных слоях силикагеля G хлороформ и систему гексан — этилацетат [158]. Пользовались также системой циклогексан — эфир ( 1 : 1 ) и циклогексан — этил ацетат [25, 42]. При работе на силикагеле удобными оказались системы бензол — ацетон (9:1) [180] или хлороформ [158]. На слоях силикагеля, пропитанных азотнокислым серебром, витамины и провитамины D подвергали разделению в системе гексан — бен зол (1 : 1) или (1 :2) 1[32, 33], на слоях, пропитанных вазелиновым маслом, — в системе ацетон — вода (4:1) [25, 61] и на слоях кремнезема с ундеканом [ 3 2 ] — в системе ацетон — ацетонитрил 306 ' Специальная часть (1:3). При разделении этих веществ на окиси алюминия со свя зующим пользовались системой циклогексан — хлороформ (3:1) [60], на незакрепленных слоях окиси алюминия — петролейным эфиром.

Обнаружение. Витамин D и его провитамины обнаруживали, например, фосфорновольфрамовой кислотой (Д 121). После опры скивания этим реактивом хроматограмму нагревали в течение 20 мин при температуре 70 °С. Витамины ЕЬ и D 3 отличались раз личной окраской. Для обнаружения пользовались также фосфор номолибденовой кислотой (Д 115) или трихлоруксусной кислотой (Д 138);

в этом случае хроматограмму после опрыскивания на гревали 5 мин при температуре 120 °С. Аналогично необходимо было нагревать хроматограммы после идентификации раствором хлорида сурьмы(III) (Д 87а) или хлорида сурьмы(V) (Д 86).

Обнаружение витамина проводили также опрыскиванием хромато граммы серной кислотой [104]. Таким образом удалось отличать друг от друга витамины D2 и D 3 по различной окраске. Чен [94] исследовал в качестве реактивов для обнаружения вышеприведен ных веществ 12 флуоресцентных веществ, другие исследователи пользовались иодом (Д 104) [158], дихлорфлуоресцеином (Д 33), а также раствором перманганата калия (Д 142) [158]. При опре делении этих веществ на окиси алюминия со связующим вещест вом витамины D и продукты их гидрирования обнаруживали кон центрированной серной кислотой [60]. При определении витами на D на незакрепленных слоях окиси алюминия пользовались теми же реактивами, что и для витамина А [23]. Обнаружение можно было производить и в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм.

При разделении и обнаружении витаминов D необходимо при нимать во внимание, что они нестойки и могут разлагаться уже при нанесении на пластинку. Эти вещества необходимо хромато графировать немедленно после нанесения, причем изменения мо гут происходить и в процессе разделения.

Применение. Витамин D идентифицировали на силикагеле G [23]. Янеке и Маас-Гебельс [104] изучали одновременно различ ные влияния на разделение витаминов D. Препаративное выделе ние и обнаружение провитаминов D на закрепленных слоях про вел Боллигер [25]. Авторы другой работы [58] отделяли холесте рин от витамина D в экстрактах сыворотки. Другие авторы [79] исследовали изомеризацию витамина D или его этерификацию в тканях крыс [61]. Продукты деградации кальциферола изучал Чима [30].

Многие авторы разделяли витамины D в смесях лекарственных веществ или в препаратах [55, 79, 273]. На слоях силикагеля, пропитанных вазелиновым маслом, удалось различить витамины D 2 и D 3 [104];

их сложные эфиры можно разделить, не пользуясь Специальная часть распределительной хроматографией. Людвиг и сотр. [143] и дру гие авторы [208, 209] обнаруживали эти витамины в лекарствен ных препаратах и пищевых продуктах. Фюрст [64] подвергал раз делению препараты хроматографией на слоях окиси алюминия со связующим веществом, Блаттна и сотр. [23] — на незакрепленных слоях окиси алюминия.

Количественное определение. В различных препаратах витами ны D определяли количественно после разделения их на слоях силикагеля G, обнаружения некоторыми из упомянутых выше ре активов и элюирования пятен исследуемых веществ с последую щим определением либо колориметрически, либо спектрофотомет рически [104]. Боллигер [25] также определял витамин D коло риметрическим методом. Он предложил способ, при котором при сутствие витаминов А, Е и К не является помехой.

Фюрст [64] определял витамины D и их дигидропроизводные после разделения на окиси алюминия и элюирования пятен опре деляемых веществ хлороформом;

положение пятен устанавлива ли, опрыскивая соседние полосы хроматограммы концентрирован ной серной кислотой. Интенсивность окрашивания измеряли при длине волны 254 нм сравнением с холостым опытом. Удобство этого способа, позволяющего определить дигидротахистерин, за ключается в том, что одновременно определяется и биологическая эффективность всей смеси, так как прочие присутствующие в ней вещества либо неэффективны, либо активны в незначительной степени—10—20% от эффективности всей смеси.

Спектрофотометрическое определение витамина D предложил Черный [39]. Разработано фотометрическое и спектрофотометри ческое определение витаминов D2 и D 3 [111]. Добошиньска и др.

[274] обнаруживали витамин D в рыбьем жире. Колева и сотр.

[125] определяли витамины D2 и D3 прямым денситометрическим методом в маслах и в инъекционных водных растворах в присут ствии продуктов разложения, другие авторы [58] для количест венного определения составных частей разделенных смесей вита минов и стеринов пользовались газовой хроматографией. Вахек и сотр. [227] определяли холекальциферол (витамин D 3 ) в водных растворах спектрофотометрическим путем. Способ этот удобен и для фармацевтической практики.

На тонкий слой нейтральной окиси алюминия (толщиной 0,6—0,7 мм) на полоску длиной около 6 см и шириной 1—1,5 см наносят исследуемый раствор.

Пятну, дают высохнуть точно 7 мин на нагретой плитке от электромагнитной мешалки, накрытой асбестовой сеткой, затем хроматограмму элюируют в каме ре с хлороформом. По окончании разделения хлороформ удаляют высушивани ем на воздухе. Положение пятна витамина D 3 определяют, сравнивая с положе нием пятна эталонного витамина на другой хроматограмме, который после хро матографирования в хлороформе и удаления последнего обнаруживают парами иода. Однако парам иода дают действовать лишь несколько секунд, чтобы не произошло разложения и в результате его — изменения величины RF ИЛИ по явления нескольких пятен. Соответствующую часть первой хроматограммы, со 308 Специальная часть держащую витамин D;

количественно переносят на пористый микрофильтр G3, на дно которого кладут кружок фильтровальной бумаги. Отделенный таким об разом витамин элюируют 5 мл 99,5%-ного этанола, которому дают свободнс стечь через фильтр. Поглощение полученного элюата измеряют в ультрафиоле товой области при длине волны 240—280 нм, сравнивая с чистым этанолом в кварцевой кювете объемом 1 мл. Для обычных определений достаточно изме рять поглощение при длине волны 265 нм. Поглощение элюата из чистого сор бента измеряют таким же способом. Для элюирования берут одинаковое весо вое количество окиси алюминия с не подвергнутой действию реактива хромато граммы из зоны, где нет никаких пятен. Полученное таким образом поглощение вычитают из величины, полученной при измерении элюата, содержащего вита мин. Способ удобен и для определения витамина D3 в образцах ветеринарного препарата «гидрозоль витамина D3», содержащего 10 000 ME витамина D 3 в 1 мл. Дальнейшие подробности описаны в оригинальной работе 1[227].

Витамин Е Сорбенты. Разделением этой группы веществ (витамин Е — смесь родственных соединений а-, р- и Y-токоферола) методом ТСХ на силикагеле G занимался Зеер [183—185], а также ряд других исследователей [15, 25, 73, 141, 178, 190, 207, 244]. Неко торые пользовались пропитанными парафином слоями силикагеля и кремнезема [164] и слоями силикагеля, обработанными сквала ном или соответственно ундеканом [132]. Некоторые авторы [116, 117] пользовались окисью алюминия со связующим веществом, другие — фосфорнокислым магнием [25]. Давидек и Покорный [43] и другие [55] разделяли токоферолы на слоях полиамида.

Системы растворителей. При разделении смеси антиоксидантов относящийся к ним токоферол выделяли одно- или двумерной хроматографией на силикагеле G. В качестве системы растворите лей пользовались хлороформом [184], толуолом или бензолом [183], тогда как при разделении различных токоферолов [153] ра ботали в хлороформе (табл. 43). В работе [183] а-токоферол отде ляли от р-токоферола и р-токоферол от •у-токоферола двумерной хроматографией в системе петролейный эфир — диизопропиловый эфир — ацетон — эфир — ледяная уксусная кислота (85 : 12 :4 : 1 :

токо е олов в : 1) [183]. Для выделения р- и у " ФР присутствии а-токоферола и ацетата ретинола применяли систему циклогек сан — гексан — диизопропиловый эфир — NH 4 OH ( 4 0 : 4 0 : 2 0 : 2 ), для отделения некоторых соединений фенольного характера, род ственных токоферолу, и отделения продуктов их окисления поль зовались хлороформом, бензолом, циклогексаном и тетрагидро фураном;

а-токоферол и его сложные эфиры разделяли в системе циклогексан — эфир (4:1) или циклогексан — хлороформ [240].

Рафем [177] применял в качестве системы хлороформ, бензол, бензол — метанол (98:2) и др. (табл. 43). При разделении на слоях окиси алюминия со связующим веществом работали в бен золе [178], при делении на полиамиде — в системе метанол — аце тон— вода ( 3 : 1 : 1 ) или ( 6 : 1 : 3 ) [43, 55]. В системах ацетона с Специальная часть Таблица Хроматографическое разделение токоферолов в различных систе»«ах растворителей Значения hRF Вещество С4 В С5а СЗ* С1а С2 б — Токол а-Токоферол 58 56 65 Р-Токоферол 35 34 51 •у-Токоферол 37 31 ^-Токоферол 49 48 6-Токоферол 23 21 32 т]-Токоферол 32 28 41 — е-Токоферол 32 — 30 р-Метилтокол 27 — 24 а-Токоферолацетат — — — 71 а-Токоферолсукцинат — — 30— — — а Силикагель G.

' Окись алюминия G.

вгор-Фосфат магния.

Обозначения:

С1 хлороформ [159];

С4 петролейный эфир — эфир (85 : 15) [207];

С2 бензол [25];

С5 цвклогексан — эфир (4: 1) [207].

СЗ бензол — метанол (98 : 2) [207];

водой, насыщенных парафином, разделяли токоферолы и продук ты их окисления [185].

Обнаружение. Токоферолы обнаруживали раствором 2,6-ди хлорхинонхлоримида (Д 35), раствором сернокислого церия (Д 180) и фосфорномолибденовой кислотой (Д 115) [183—185].

Применяли также раствор хлорида железа (III) (Д 97) i[240], фос форномолибденовую кислоту (Д 115) или 2,7-дихлорфлуоресцеин в абсолютном спирте [52]. Удобны также слои сорбента, содержа щие 0,02% натриевой соли флуоресцеина [25]. Разделенные ве щества наблюдались в виде темных пятен на флуоресцирующем фоне.

Некоторые реактивы позволяют отличить токоферолы на осно вании цветных реакций. После реакции токоферола с раствором 2,2'-дипиридила и хлорида железа(III) (Д 49) образуется ржаво красное окрашивание;

этот известный реактив не дает, однако, 310 Специальная часть цветных реакций со сложными эфирами. Цветное окрашивание да ют также пары иода и раствор желтой кровяной соли и хлорида железа (III) (Д 100), а также концентрированная серная кислота, азотная и хлорная кислоты [196, 197]. С токоферолами реагиру ют 60%-ная серная кислота (после нагревания при температуре 150°С) или нейтральный раствор азотнокислого серебра в ацетоне (Д 55) |[196]. Диазотированной сульфаниловой кислотой (Д 25), которая оказалась удобным реактивом для обнаружения токофе ролов при разделении на полиамиде [42], Зеер [183] пользовался при делении этих веществ на слоях силикагеля G.

Применение. Методом ТСХ на силикагеле G разделяли смеси токоферолов из растительных материалов [17, 23, 178] или об наруживали их в различных концентратах и лекарственных фор мах. Токоферолы в маслах обнаруживали Мюллер-Мюло и сотр.

[277, 278]. Скиннер и сотр. [196, 197] разделяли методом ТСХ токоферол и продукты его окисления. Другая работа [15] была посвящена хроматографическому разделению а-токоферола, а-то коферолхинона и холестерина. В обзорной работе [132] рассмат риваются все способы разделения этих веществ методом ТСХ.

Рафем [177] подвергал разделению а- и fJ-токоферолы. Вюил люмье [235] обнаруживал а-токоферол на слоях окиси алюминия.

Токоферолы в смесях обнаруживают следующим способом [184].

Разделение проводили на слоях силикагеля в хлороформе или на окиси алюминия G в бензоле. Отдельные токоферолы разделяли в зависимости от чис ла метильных групп на триметил-, диметил- и метилтокоферолы. На обоих сор бентах разделенные таким образом вещества открывали 20%-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты (Д 115), которая уже при комнатной темпера туре реагировала с ними в течение 2—3 мин. Затем на эти хроматограммы дей ствовали парами аммиака, причем пятна обнаруженных веществ окрашивались в темно-синий цвет. Раствор сернокислого церия (Д 180) позволил отличить р-то токо е ола коферол от У " ФР (первый дает коричневое, а второй — синее окраши вание). Таким образом удалось различить отдельные токоферолы и устранить некоторые сопутствующие балластные вещества, например жидкие масла, жи ры и т. д.

Количественное определение. Токоферолы определяли количе ственно, фотометрируя элюаты пятен после обнаружения их реа гентами или при локализации их с помощью ультрафиолетового освещения [178]. Удобным оказалось также спектрофотометриче ское определение небольших количеств витаминов Е [49] и плани метрическое определение токоферолов после их отделения от по сторонних примесей и цветной реакции с фосфорномолибденовой кислотой [184]. Возможно и прямое определение спектрофотомет рическим методом в отраженном свете без опрыскивания пятен разделенных веществ. Некоторые работы были посвящены спект рофотометрическому (минимально 0,01 мкг/мл) или радиометри ческому определению радиоактивных токоферолов с применением сцинтилляционного детектора [184].

3J Специальная часть Витамины К и убихиноны Разделением этих веществ (витамины К — производные 2-ме тил-1,4-нафтохинона, а убихиноны — бензохинона) занимались многие исследователи.



Pages:     | 1 |   ...   | 7 | 8 || 10 | 11 |   ...   | 19 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.