авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 12 |

«IV Всероссийский симпозиум с международным участием ‡ ‚ ‡‚ ‡‡„ Сборник тезисов симпозиума 21-22 апреля 2010 Санкт-Петербург ...»

-- [ Страница 2 ] --

Исходя из описанного выше, в общественный регистр доноров ООО «Покровский банк стволовых клеток» отобрано 380 образцов концентрата стволовых клеток пуповин ной крови человека, не содержащих Анти-HIV-1 и -2, HIV-1Ag, Анти-HTLV-I и -II, Анти HbcorAg, HBs-Ag, Анти-HCV и удовлетворяющих требованиям приказа № 325.

орГанизаЦиЯ и ДеЯтеЛЬноСтЬ первоГо неГоСуДарСтвенноГо банка СтвоЛовЫХ кЛеток тепляшин а.С., кульнева е.и., коржикова С.в.

ООО «Бьюти Плаза», Центр клеточных технологий, Москва Center of cells technologies – the first in Russia and CIS private institute, which suc cessfully provides fundamental research in cells technologies and tissue engineering. There are researches of creation and standardization of stem cells collection, which are the base of the Bank of stem cells. The aim of the Bank, were several thousands of samples are in custody, is to provide a quick access to totally characterized cells.

With that, main investigations of the Center are obtainment and characterization of different stem cells (mesenchymal, hemopoietic, epidermal stem cells and endothelial cells);

study of human stem cells genome potency to its genetic realization and start of the devel opment program of an organism in vitro, a technology of personal embryonic stem cell ob tainment;

three dimensional transplants engineering for regeneration of different organs and tissues in humans (cartilage, bone and muscle tissue, etc), a large-scale preclinical trials con ducted on laboratory and large animals;

invention of new cells application in vitro and in vivo for treatment of autoimmune (disseminated sclerosis, chronic infectious arthritis), degenera tive atrophic deprivation of nervous system (retina and optic nerve atrophy, retina and cornea burns) or genetic diseases (including muscles dystrophy), alopecia of different origin, and for recovering of immune system in patient after chemotherapy.

 Организация и деятельнОсть тканевых и клетОчных банкОв, правОвые и этические аспекты Laboratories of the Center are organized based on all norms of sanitary-antiepi demic regulation and are equipped according to GMP standard, this fact eliminates instability of cells quality during obtainment and storage. Work of the Bank is organized in such way, to exclude a mistake as a consequence of «human factor».

Cooperative development of the bank, where stem cells are in storage, and scientific approach, which allows studying stem cells features, possibility to use them for treatment, in our opinion, is the most promising for new stem cell banks establishment and organization.

This approach permits to arrange a qualitative obtainment and materials processing, and will provide with successful cells storage. Besides, it will supply with the timely and effective ma nipulations for cell therapy and tissue engineering.

Центр клеточных технологий – первое в России и СНГ негосударственное научное учреждение, успешно занимающееся фундаментальными исследованиями в области клеточных технологий и тканевой инженерии. В лабораториях Центра прово дятся разработки по созданию и стандартизации коллекции стволовых клеток человека, составляющей основу Банка стволовых клеток. Целью Банка, в котором храниться не сколько тысяч образцов, является обеспечение быстрого доступа к полностью охаракте ризованным клеткам.

Вместе с тем, основными научными направлениями Центра являются разра ботка методов по получению и характеристике стволовых клеток различных типов (ме зенхимные, гемопоэтические, эпидермальные стволовые клетки, а также эндотелиальные клетки);

изучение потенций генома стволовых клеток человека к реализации генетичес кой информации ядра и запуску полной программы развития организма человека в систе ме in vitro, т.е. разработка технологии получения собственных эмбриональных стволовых клеток (ЭСК);

разработка и оптимизация методов по созданию трехмерных трансплан татов с целью регенерации/репарации различных органов и тканей человека (хрящевой, костной, мышечной тканей и др.), проведение широкомасштабных доклинических испы таний трансплантатов в организме лабораторных и крупных животных;

создание новых клеточных подходов в системах in vitro и in vivo для лечения аутоиммунных заболеваний человека (рассеянный склероз, ревматоидный полиартрит и др.), атрофически-дегенера тивных поражений нервной системы (атрофия сетчатки и зрительного нерва, ожоги сет чатки, роговицы и др.), генетически детерминированных заболеваний (в т.ч. мышечные дистрофии), алопеции различной этиологии, для восстановления иммунитета пациентов с онкологическими заболеваниями после жесткой химиотерапии и др.

Лаборатории Центра организованы с учетом всех требуемых норм санитарно противоэпидемического режима и оборудованы согласно GMP стандарта, что исключа ет нестабильность качества во время выделения и хранения материала. В работе Банка заложен принцип исключения ошибки вследствие «человеческого фактора».

Совместное развитие базы хранения стволовых клеток и научной базы, позволяю щей изучить свойства, возможности использования и дальнейшего применения стволовых клеток, на наш взгляд, является перспективным направлением в создании и организации де ятельности новых банков хранения клеточного материала. Такой подход позволит организо вать качественный забор, обработку (выделение) материала, обеспечить успешное хранение образцов. Кроме того, в дальнейшем, позволит своевременно и высокоэффективно обеспе чить проведение необходимых манипуляций для проведения клеточной терапии и лечения с помощью методов клеточных технологий и тканевой инженерии.

 Организация и деятельнОсть тканевых и клетОчных банкОв, правОвые и этические аспекты IMPLEMENTATION OF THE ISBT 128 STANDARD – BASED TISSUE DONATION IDENTIFICATION SYSTEM IN POLAND Uhrynowska-Tyszkiewicz I., 1,2Kamiski A., 1,2Olender E., 1,2Gut G.

1, The National Centre for Tissue and Cell Banking, 2Department of Transplantology and Central Tissue Bank, The Medical University in Warsaw, Warsaw, Poland Согласно статье. 8.2 из Директивы 2004/23/EC Польша одно из государств членов Европейского союза должна гарантировать выполнение системы идентифика ции доноров. Чтобы обеспечить доступ к спецификациям и базам данных (поддержка ICCBBA, Inc – некоммерческая международная организация), взимается плата за началь ную одноразовую регистрацию и за ежегодные лицензии, которые были централизовано куплены для всех тканевых банков. Это успешное предприятие было возможно, только благодарят финансовой поддержке из национальной программы здравоохранения.

Aim. According to art. 8.2 of Directive 2004/23/EC Poland as a one of European Union Member States shall ensure the implementation of a donor identification system which assigns a unique code to each donation and to each of the products associated with it. Polish Ministry of Health decided to implemented ISBT 128 standard as a national standard for identi fication and labelling of human blood as well as tissues and cells. The ISTB 128 implementation was one of the objectives of the National Programme for Development of Transplant Medicine POLGRAFT 2006-2009.

Method. The ISBT 128 implementation task group was established and tissue bank managers were invited to join it in. To provide access to the ISBT 128 specification and databas es (maintained by ICCBBA, Inc – a non-profit international organisation) fees for initial one time registration and for annual licenses were centrally purchased for all public tissue banks.

Results. 1. After registration with ICCBBA, Inc all newly registered organisations were assigned the unique Facility Identification Numbers (FIN), one of the crucial component of the globally unique Donation Identification Number (DIN).

2. All ISBT 128 tissue relating technical documentation and tissue product code da tabase were translated from English into Polish.

3. A list and definitions of tissues routinely recovered, processed and distributed by Polish tissue banks were compared with the database of tissue products and definitions pro vided by ICCBBA, Inc. The ISBT 128 Polish tissue database including both international as well as national codes was developed.

4. Label designs were established.

5. Hardware including personal computers, bar code printers and readers were purchased.

6. One of the two currently existing in Poland ISBT 128 – compliant software system covering all aspects of tissues and cells donation, processing and distribution was developed.

7. Several trainings on ISBT 128 standard and computer system use were performed.

8. Validation studies of the new coding system has been begun.

Conclusion. Implementation of ISBT 128 standard, the most comprehensive and widely used standard for coding and labelling of products of biologic origin was a complex task. This successful venture was possible only thank to financial support from the national public health programme.

 вопроСЫ изГотовЛениЯ импЛантатов, ЭкСпериментаЛЬнЫе иССЛеДованиЯ, оЦенка  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка оЦенка ЖизнеСпоСобноСти ЯДроСоДерЖаЩиХ кЛеток пуповинноЙ крови в банке пуповинноЙ крови ХарЬкова бабийчук Л.а., зубов п.м., кудокоцева о.в., зубова о.Л., рязанцев в.в.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина The importance of choice adequate method of cell viability evaluation was demonstrated.

Пуповинная кровь (ПК) признана полноценным источником гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Это привело к необходимости создания банков КК, в которых образцы хранятся в жидком азоте без потери их биологических свойств.

В связи с необходимостью создания банков, разработка эффективных методов замораживания является актуальной задачей. Эффективность метода определяется ис пользованием адекватных методов оценки качества размороженного материала.

В нашем банке определение ядросодержащих клеток ПК, в том числе и ГСК проводится самым современным на данный момент методом проточной ци тофлуориметрии с использованием реагентов Becton Dickinson по ISHAGE протоко лу. Жизнеспособность (ЖС) клеток оценивается с использованием ДНК красителя 7AAD.

Следует отметить, что используемый многими учеными метод световой мик роскопии в оценке ЖС клеток (по включению в клетки трипанового синего) не является адекватным, поскольку оценка ЖС ГСК методом световой микроскопии невозможна в силу их морфологического сходства с популяцией CD45+ клеток и их малочисленнос ти, а так же отсутствие окрашивания клеток трипановым синим не свидетельствует об истинной ЖС клеток, а лишь отражает проницаемость мембран для этого красителя, которая снижается при использовании высокомолекулярных соединений, создающих защитный «каркас» вокруг клетки.

морФоЛоГиЧеСкаЯ ДиаГноСтика аутоЛитиЧеСкиХ изменениЙ в тканЯХ СерДЦа трупа при еГо отборе в каЧеСтве Донора биоЛоГиЧеСкиХ транСпЛантатов борт Г.С., Савельев в.и., резник а.Г., иванов и.н., рыков Ю.а., румакин в.п.

ФГУ «РНИИТО им. Р.Р. Вредена Росмедтехнологий», Санкт-Петербург An attempt was made to assess the diagnostic possibilities of histological study of morphological changes in the cardiac muscle of 63 corpses in their selection as potential tissue donors for the preparation of these biological grafts. The results confirmed this possibility.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка На основании собственного опыта мы убедились, что потери потенциальных доноров тканей, связанные с посмертным аутолизом (гемолизом) крови находятся в пре делах 28 на 178 случаев, что в общей структуре брака составляет 15,7%. Убыль по этой причине столь значительного объёма пластического материала не может не волновать специалистов и требует каких-то новых подходов к решению данной задачи. Отсюда, цель настоящего исследования оценить диагностические возможности гистологическо го изучения морфологических изменений в сердечной мышце трупа при его отборе в качестве потенциального донора тканей. Аутолитические изменения сердечной мышцы изучали на материале, полученном от 63 трупов, причиной смерти которых послужили сердечнососудистые заболевания. Для гистологического исследования изымали кусоч ки миокарда с эпикардом из средней трети переднебоковой стенки левого желудочка сердца. Выбор данного материала был продиктован тем, что эпикард омывается пери кардиальной жидкостью и что венулы и вены эпикарда наиболее удобны для изучения посмертного гемолиза эритроцитов. В ходе микроскопии оценивали морфологические изменения ядер и поперечной исчерченности кардиомиоцитов, состояние эндотелия вен, разрушение эритроцитов в венах и венулах, появление микробных тел в просвете сосудов.

Поскольку объективная оценка пригодности донора и его тканей с помощью одного только времени или одной температуры недостаточна, нами была использована специальная константа – термочас (ТЧ), представляющая сумму произведений темпера туры и времени для любого из этапов нахождения, транспортировки и хранения трупа до изъятия у него биологического материала и направления последнего на исследование.

В зависимости от величины термочаса, проведенный математический расчет позволил разделить материал на три группы. В первую группу с термочасом до единиц вошли 22 наблюдения. Ко второй группе с термочасом от 201 до 400 единиц были 29 случаев. Третья группа с термочасом от 401 единицы и более была представле на 12 наблюдениями. Для выяснения взаимосвязи между аутолитическими изменени ями в миокарде, выявленными при гистологическом исследовании и термочасом, был произведен математический анализ, который показал, что ТЧ меньше 200 ед., процент гемолизированных эритроцитов в просвете вены и венулы не превышал 5;

десквамация вены составляла 50%, процент ядер-теней кардиомиоцитов также был до 5, исчерчен ность кардиомиоцитов отсутствовала. При ТЧ от 201 до 400 процент гемолизирован ных эритроцитов в просвете венулы колебался от 6 до 15;

процент гемолизированных эритроцитов в вене достигал 5;

десквамация вены превышала 50%, процент ядер-теней кардиомиоцитов был в пределах 16-29, исчерченность кардиомиоцитов отсутствовала более чем в 50%. Наконец, при ТЧ более 401, процент гемолизированных эритроцитов в просвете вены и венулы составлял 91-100;

десквамация вены превышала 50%, процент ядер-теней кардиомиоцитов также достигал 91-100, исчерченность кардиомиоцитов не наблюдалась более чем в 50%. Следовательно, расчеты показали, что с увеличением ТЧ более 50% частота таких признаков как десквамация вены и отсутствие исчерченности кардиомиоцитов (более 50%) не увеличивается после 200 ед.

Было установлено также, что после смерти от ишемической болезни сердца (ИБС) по мере увеличения термочаса в кардиомиоцитах нарастало количество ядер-те ней. При ТЧ до 108 единиц количество измененных ядер до 5% в поле зрения имело наибольшую долю положительных значений (р=0,75) относительно второй (р0,05) и третьей (р0,001) групп. С увеличением ТЧ до 308 единиц от 16% до 29% ядер-теней  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка имели существенную долю положительных значений (р=0,45) по сравнению с первой группой наблюдений (р0,05). По достижении ТЧ 309 единиц и более до 91%-100% ядер теней имело статистически значимую величину (р=0,14) по отношению с первой груп пой (р0,05).

Появлению в кардиомиоцитах ядер-теней сопутствовало исчезновение попе речной исчерченности. При минимальных значениях ТЧ (до 108 единиц) подавляющее большинство сердечных клеток сохраняло свою структуру (р1.=0,70;

р1-20,01;

р1-30,01).

При больших значениях ТЧ более половины кардиомиоцитов утрачивали свою попереч ную исчерченность (Р2=0,28;

р1-20,05;

р3=0,29;

р1-30,05).

Изучение вен показало, что при минимальных значениях ТЧ (до 108 единиц) посмертная десквамация эндотелия не превышала 50% (р1=058;

р1-2,1-30,05). С нараста нием термочаса более половины внутренней поверхности вены теряло свой эндотелий (Р2=0,74;

р1-20,05;

р3=0,79;

р1-30,05). Одновременно с этим внутри вен происходило раз рушение эритроцитов. В первой группе статистически значимое количество гемолизиро ванных эритроцитов не превышало 5% (Р1=0,58;

р1-2;

1-30,001). При этом во второй группе доля этого показателя была относительно небольшой (Р2=0,15;

р2-30,05). Разрушение эритроцитов до 91-100% было зарегистрировано при ТЧ от 309 единиц и более (р3=0,36;

р1-30,05). Сходная картина посмертного гемолиза была установлена и в венулах.

При исследовании просветов кровеносных сосудов микробные тела не были обнаружены ни в одном случае.

Результаты исследований свободного гемоглобина в крови и перикардиальной жидкости после смерти от ИБС показали, что в каждой группе по ТЧ обнаружены досто верные различия по степени гемолиза эритроцитов в венуле и венах. В тоже время эти статистически значимые различия не влияли на концентрацию свободного гемоглобина в перикардиальной жидкости.

Таким образом, полученные в работе результаты подтвердили возможность применения морфологического подхода к установлению пригодности трупов в качест ве доноров биологических трансплантатов при гемолизе. Работа в данном направлении должна быть продолжена.

Сравнение ХонДроинДуктивнЫХ СвоЙСтв биоЛоГиЧеСкиХ материаЛов в ЭкСперименте ваза а.Ю., клюквин и.Ю., титов р.С., Шехтер а.б., истранов Л.п., бочарова в.С.

НИИ СП им. Н.В. Склифосовского.

Москва Studies on white mongrel rats showed that grafts of allogenic collagen type one with bone chips and allogeneic demineralized bone matrix with mesenchymal cells have the same osteo- and hondroinduction effects.

Цель. Сравнить хондроиндуктивные свойства различных биологических мат риксов, используемых для восстановления гиалинового хряща при внутрисуставных переломах.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка материалы и методы. Сформировано 5 групп крыс (по 4 животных) – одна контрольная и четыре экспериментальных. На надколенниковой поверхности мыщел ков бедра фрезой создавали полнослойный костно-хрящевой дефект диаметром 2,3 мм, глубиной 3 мм. В группе № 1 (контрольной) дефект не заполняли. В группе № 2 дефект заполняли деминерализованным костным матриксом. В группе № 3 губкой из колла гена 1 типа (к нему мезенхимальные клетки имеют рецепторы для перемещения в очаг повреждения). В группе № 4 – губкой из коллагена 1 типа с костной крошкой (источник остео- и хондроиндуктивных белков, ВМР). В группе № 5 – деминерализованным кос тным матриксом с искусственно размноженными аллогенными мультипотентными ме зенхимальными стромальными клетками. Морфологические исследования выполняли через 1;

2 недели, 1 и 3 месяца после операции.

результаты. В группе № 1 (контрольной) через 3 месяца после операции де фект заполнился ближе к поверхности плотной фиброзной соединительной тканью без признаков регенерации хрящевой ткани, а внутри дефекта – костным регенератом, кото рый занимает около 4/5 объема бывшего дефекта.

При сравнении результатов 2;

3;

4;

5 групп наиболее успешные результаты от мечены в группах № 4 и № 5.

В группе № 4 уже через месяц после операции у трех из 4-х животных отмеча ется образование крупных полей гиалинового хряща, которые от поверхности сустава отделены только тонкой прослойкой соединительной ткани. Через 3 месяца у всех жи вотных заметная хрящевая регенерация, которая на этот срок является самой активной из всех групп.

В группе № 5 через неделю после операции у всех животных выявляются участки фиброзного и гиалинового хряща. Через 3 месяца у всех животных в соедини тельной ткани видны участки регенерации хряща, как гиалинового, так и фиброзного.

При макроскопическом исследовании мыщелков бедра, следов дефекта через месяца в группах № 4 и № 5 не видно.

обсуждение. Особенностью внутрисуставных переломов является поврежде ние не только кости, но и хряща. Дефекты большой площади никогда не восстанавлива ются с образованием гиалинового хряща.

Стимулируют хондрогенез различными приемами, в том числе трансплан тацией искусственно размноженных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток или заполнением костно-хрящевого дефекта различными трансплантатами, обеспечивающими условия для транспорта в зону повреждения и дифференцировки собственных незрелых клеток костного мозга.

В результате экспериментального сравнения обоих методов стимуляции хондрогенеза выявлено, что трансплантаты из коллагена 1 типа с костной крошкой и деминерализованного костного матрикса с мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками обладают равновыраженным остео- и хондроиндуктивным действием.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка вЛиЯние СуЛЬФатированнЫХ ГЛикозаминоГЛиканов на заЖивЛение ДеФектов коСтноЙ ткани васильев м.Г.

ФГУ Центральный институт травматологии и ортопедии (ЦИТО) им. Н.Н. Приорова, Москва We conducted a series of experiments comparing the recovery processes during the replacement of the bone defect with «Osteomatrix» and most frequently used material to fill bone defects – spongy-cortical allografts. The results obtained after three months showed that the restructuring «Osteomatrix» is more active compared with the spongy-cortical implants without sGAG. Restoration of bone tissue under the influence of «Osteomatrix» going through the stage enchondral ossification at elevated functional activity of bone cells.

Время и полноценность замещения дефекта костной ткани при проведении пластических операций с использованием материалов биологической природы склады вается из двух составляющих: состояния реципиентного ложа и свойств имплантата.

Общепринятыми являются два механизма воздействия имплантируемого материала на процессы регенерации костной ткани: 1) имплантаты играют роль остова для прорас тания сосудов и клеток из костного ложа (остеокондукция);

2) воздействуя на клетки предшественники, стимулируют их пролиферацию и дифференцировку в остеогенные клетки (остеоиндукция). В настоящее время нами проводятся исследования влияния сульфатированных гликозаминогликанов (сГАГ) на процессы регенерации костной ткани. Мнения об эффективности использования сГАГ для стимуляции регенерации костной ткани различны, однако то, что сГАГ играют важную роль в процессе форми рования соединительной ткани известны и не вызывают сомнений. Усилиями фирмы «Конектбиофарм» с тканевым банком ЦИТО был разработан биокомпозиционный ма териал, состоящий из очищенной от миелоидного компонента и неколлагенновых белко костной ткани и импрегнированных сГАГ, в виде гранул и блоков. В рамках исследования этого материала была проведена серия опытов, в которых сравнивали процессы восста новления кости при имплантации «Остеоматрикса» и, наиболее часто используемого для замещения костных дефектов, материала – губчато-кортикальных аллоимплантатов.

материалы и методы. Экспериментальное исследование проведено на 20 кро ликах, которых разделили на 2 группы. Первой опытной группе (10 животных) сегментар ный дефект лучевой кости размером 1 см был заполнен «Остеоматриксом». В контрольной группе животных дефект восполняли аллоимплантатами, на основе тазовых костей кро ликов. Обезжиренные кости лиофилизировали и стерилизовали потоком быстрых элек тронов дозой поглощения 20-25 кГр. Подобным образом были стерилизованы гранулы «Остеоматрикса». Срок эксперимента составил 3 месяца. Полученные препараты исследо вали морфологически с использованием световой микроскопии и морфометрии.

результаты. Через 3 месяца после операции в опытах с имплантацией «Остеоматрикса» дефект был заполнен новообразованной губчатой костной тканью, в которой частично сохраняется хрящевая сердцевина. Отмечены участки остеоида на поверхности костных балок, что указывает на их активный аппозиционный рост. На периферии костного дефекта обнаружены остатки имплантированного материала. В контрольной серии с имплантацией аллогенной кости к этому сроку перестройка имп  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка лантата выражена намного слабее, происходит, преимущественно, по поверхности и по сосудистым каналам аллоимплантата. Участки хрящевой ткани отсутствуют.

выводы. Сравнивая результаты, полученные через три месяца после имплан тации «Остеоматрикса», содержащего сГАГ, и аллоимплантатов из тазовых костей мож но сказать, что перестройка «Остеоматрикса» проходит более активно по сравнению с губчато-кортикальными имплантатами без сГАГ. Восстановление костной ткани под воздействием «Остеоматрикса» происходит через стадию энхондрального окостенения на фоне повышенной функциональной, активности костных клеток.

теСтирование раневоГо покрЫтиЯ и еГо компонентов метоДом оЦенки ЦитотокСиЧноСти С иСпоЛЬзованием куЛЬтивируемЫХ кЛеток коЖи ЧеЛовека вершевская е.а., Юдинцева н.м., блинова м.и., антонов С.Ф.

Институт Цитологии РАН, НИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург The work purpose is the estimation wounds covering and its components. Quality of a material estimated on its influence on morphology (visual supervision) and proliferation (colorimetry) of human dermal fibroblasts. It is established that some wounds coverings sup pressed a normal state of cells. Preliminary testing in vitro of separate components for medical products will allow to choose optimum variants on quality.

При разработке перевязочных материалов, предназначенных для местного лечения хронических ран и имеющих контакт с поверхностью раны, возникает необхо димость предварительной проверки безопасности данных изделий и их компонентов в условиях in vitro.

Целью данной работы была оценка цитотоксичности повязки на основе хи тозана и поливинилпирролидона (ПВП). Качество этой повязки оценивали по ее вли янию на морфологию и пролиферацию культивируемых нормальных дермальных фибробластов человека. Для исследования влияния покрытия и его компонентов были использованы ростовые питательные среды, кондиционированные предварительным инкубированием в них 3-х вариантов раневого покрытия и отдельных его компонентов – 7 образцов поливинилпирролидона (ПВП) и 3 вариантов хитозана. Инкубирование проводили в течение недели в CO2-инкубаторе при температуре 37оС с 5% CO2 в атмос фере. Контролем служила ростовая питательная среда с добавлением 10% эмбриональ ной сыворотки крупного рогатого скота.

Для тестирования образцов материала клетки высевали в 96-луночные платы по 2000 клеток на лунку в обычную ростовую среду и инкубировали в течение часа в CO2-инкубаторе при температуре 37 оС с 5% CO2 в атмосфере. После прикрепления кле ток к субстрату среду удаляли. В каждую лунку к прикрепившимся клеткам добавляли питательную среду, кондиционированную соответствующим тестируемым образцом.

Каждый вариант эксперимента повторялся 3 раза. Сроки наблюдения составляли 1, 2, 3, 4 суток, соответственно.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Состояние клеток в каждой лунке оценивали по их морфологии путем визуаль ного наблюдения под микроскопом и фиксировали это на фотографии (качественная оцен ка). Количественную оценку (степень пролиферации) состояния клеток в каждом варианте опыта определяли с использованием иммуноферментного анализатора колориметричес ким методом при длине волны 570 нм (Е570) по оптической плотности поглощения клет ками красителя (генциан-виолета). Установлено, что 5 вариантов ПВП из 7 тестируемых и 2 варианта готового раневого покрытия из 3-х тестируемых подавляли нормальное рас пластывание клеток. Можно сделать вывод, что эти компоненты ингибировали клеточные процессы адгезии, распластывания и, как следствие, пролиферации. Результаты количест венной оценки (фотометрия) совпадали с качественной оценкой (визуальное наблюдение).

Таким образом, предварительное тестирование отдельных компонентов повязки in vitro в процессе ее разработки позволяет оптимизировать ее свойства.

оЦенка безопаСноСти ЭктопиЧеСкоГо ввеДениЯ аЛЛоГенноГо Гап в ДокЛиниЧеСкиХ иСпЫтаниЯХ на ЖивотнЫХ волова Л.т., нефедова и.Ф., писарева е.в., власов м.Ю.

ГОУ ВПО «Самарский Государственный Медицинский Университет Росздрава», г. Самара In experiments on 100 white laboratory rats does the complex estimation of safety have been carried out the relation of calcium deposits in the vital organs with using of morpho logical and histochemical methods. The results of our research illustrated ectopic application of allogenic GAP, doesn’t provoke pathologic modifications and calcium deposits (Van-Koss method) in lung, heart, kidneys and lien tissues.

Одним из распространенных заболеваний опорно-двигательной систе мы является остеопороз. В борьбе с потерей костной массы в медицинской прак тике используют широкий спектр терапевтических препаратов для регуляции обмена фосфора и кальция в организме. Однако вследствие большой распространен ности заболеваний ЖКТ применение данных препаратов «per os» нередко оказывается малоэффективным.

В ИЭМБ СамГМУ разработан новый способ получения и введения в организм аллогенного ГАП путем создания эктопического депо в мышечной ткани (Патенты РФ № 2168998, 2219933). Аллогенный ГАП получают из костной ткани и, кроме кальция и фосфора, он содержит органический компанент, а также микроэлементы в том же соста ве и количестве, в котором они содержатся в кости.

Целью исследования являлось проведение комплексной оценки безопасности в отношении отложения кальциевых депозитов в жизненно важных органах при введе нии аллогенного ГАП в мышцу у крыс.

материалы и методы. Эксперимент выполнен на 100 самках белых лабора торных крыс массой 180-250 грамм. Все животные содержались в аналогичных условиях вивария на сбалансированном по белкам, жирам, углеводам и микроэлементам рационе питания. Они были разделены на 4 экспериментальные группы: 1-контроль (интактные вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка животные), 2 – резорбция (овариоэктомия), 3 – опыт (введение ГАП на фоне резорбции), 4 – группа сравнения (введение ГАП здоровым животным). У крыс 2 и 3 групп создава лась гипоэстрогенная модель остеорезорбции путем двусторонней овариоэктомии. Для оценки эффективности модели остеопороза после овариоэктомии у животных проводи ли анализ влагалищных мазков ежедневно в течение 7 суток. В эксперименте участвова ли только крысы, у которых не было обнаружено циклических изменений во время этого периода. Оценку метаболизма костной ткани определяли по содержанию свободного и белковосвязанного оксипролина, кальция и неорганического фосфата, активности ще лочной фосфотазы в сыворотке крови крыс.

Для морфологических исследований после вывода животных из эксперимен та методом декапитации проводился забор внутренних органов. По стандартной схеме изготавливались гистологические препараты, которые в дальнейшем окрашивали ге матоксилином-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону. Для обнаружения кальциевых депозитов применялся модифицированный в ИЭМБ метод Ван-Косса, основанный на реакции замещения. Использовали реактивы фирмы «Bio Optica» (Италия). Для отра ботки методики исследовали ткани почки и легкого человека с заболеваниями мочека менной болезнью и туберкулезом легкого, где были обнаружены массивные отложения кальциевых депозитов. Гистологический материал исследовался с помощью светового микроскопа фирмы Olympus CX 21.

результаты. В гистологических препаратах внутренних органов при морфоло гическом исследовании не было выявлено патологических процессов как в контрольной, так и в опытных группах, так же не было выявлено отложений депозитов кальция, что позволяет сделать вывод о том, что применение аллогенного ГАП не имеет негативного влияния в отношении структуры внутренних органов.

Таким образом, гистологическое исследование внутренних органов показало, что эктопическое введение аллогенного ГАП безопасно в плане образования кальцифи катов в жизненно важных органах.

кЛетоЧно-тканевоЙ транСпЛантат на оСнове ДеминераЛизованнованноГо ГубЧатоГо веЩеСтва коСти, СоДерЖЩиЙ муЛЬтипотентнЫе мезенХимаЛЬнЫе СтромаЛЬнЫе кЛетки из коСтноГо мозГа (ЭкСпериментаЛЬное иССЛеДование) волова Л.т., россинская в.в., болтовская в.в., максименко н.а.

ГОУ ВПО «Самарский Государственный Медицинский Университет Росздрава», г. Самара Cellular-tissue transplantat (CTT) have been created for experimental using with new methods cultivation of bone and cartilage tissues injuries reparation. CTT consists of 2 components: multipotential mesenchyme stromal cells (MMSC) culture from rabbit’s bone marrow and biogenic three-dimensional porous carrier – allogenic demineralized lyophilized sponge made by «Lioplast®» technology.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка В настоящее время клеточная и тканевая трансплантология рассмат ривается как одно из перспективных направлений в лечении широкого спектра патологии.

Цель работы. Создать клеточно-тканевой трансплантат на основе алло генного деминерализованного губчатого вещества кости и мультипотентных ме зенхимальных стромальных клеток из костного мозга кроликов для доклинических испытаний на животныхновых методов лечения заболеваний костной и хрящевой тканей.

материал и методы. Для получения клеточно-тканевого трансплантата ис пользуют два компонента: биогенный носитель и культура мультипотентныхмезенхи мальных стромальных клеток (ММСК) костного мозга кроликов.

В качестве трехмерного пористого биодеградирущего носителя применена аллогенное деминерализованное лиофилизированное губчатое вещество костной тка ни, изготовленная по оригинальной методике «Лиопласт»®. Отличительной особен ностью изготовления таких биоимплантатов является применение в его производстве преимущественно физических, а не химических факторов: специальной низкочастотной ультразвуковой обработки для удаления элементов костного мозга и жира из костной ткани, ее дезинфекции и первичной стерилизации, а так же лиофилизации и быстрых электронов.

Культуру ММСК выращивали из аспирата костного мозга (КМ) взятого у кроликов при пунктировании гребней подвздошных костей. Клетки костного мозга вы ращивали в стандартных условиях в термостате Incubator MIR-262 (Sanyo) при темпе ратуре 37°С. На трехмерный аллогенный носитель высевали культуру 2-5 пассажа из расчета 5±0,1 тысяч клеток на 1 ммі. Нативную культуру ежедневно изучали, морфомет рировали и фотографировали с помощью инвертированного микроскопа «Биолам П-2 1». Использовали обзорные морфологические, морфометрические методы и растровую микроскопию.

результаты исследования. Культуры стромальных клеток 2-5 пассажей из КМ кроликов проявляли выраженную адгезивность к культуральному пластику, актив но пролиферировали на нем и формировали равномерный монослой, хорошо пассирова лись. Они были представлены фибробластоподобными клетками, отростки которых (от 2 до 6 у одной клетки), анастомозируя между собой, образуют непрерывную сеть на по верхности культурального пластика. Все изученные нами культуры проявляли высокую адгезию к использованному нами бионосителю. Распластывание клеток на поверхности балок можно было наблюдать уже в первые часы после их посадки, в последующие суток количество клеток на носителе прогрессивно нарастало. Растровая микроскопия показала, что к этому сроку наблюдения клетки прорастали в поры носителя и анаста мозировали своими многочисленными отростками, при этом они в основном приобре тали полигональную форму.

В результате проведенного исследования получен комбинированный клеточ но-тканевой трансплантат, который предназначен к использованию в эксперименте на животных при разработке новых способов восстановления поврежденной костной и хрящевой тканей.

4 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка амниотиЧеСкаЯ мембрана в проФиЛактике брЮШиннЫХ Спаек володин в.в., никитина в.п.

ГОУ ВПО Кемеровская Государственная Медицинская Академия министерства РФ, г. Кемерово The possibilities of amniotic membrane have been studied in the experiment, which wаs run on 50 rats and 18 patients for prophylaxis of abdominal adhesions. The good results were received in the end of investigation.

Экспериментальные работы и клинические наблюдения показали, что чаще всего после операции брюшинные спайки формируются в местах повреждения парие тальной и висцеральной брюшины. В профилактике образования спаек перспективным считается применение во время операции временных барьерных средств, которые могут быть в виде геля или мембран (мембрана Гора, интерсид). С этих позиций представляет интерес человеческая амниотическая мембрана (АМ), которая отвечает предъявляемым к барьеру требованиям.

Цель исследования. В эксперименте и клинике изучить адгезиопротекторные возможности АМ.

материал и методы исследования. АМ заготавливалась и обрабатывалась в тканевой лаборатории областной клинической больницы. В эксперименте на 50 крысах создавалась модель висцеро-париетальных сращений путем стандартного повреждения париетальной брюшины и брюшины слепой кишки. Поврежденная париетальная брю шина затем укрывалась АМ, которая насыщалась верапамилом, лангидазой, хлоргекси дином для усиления противоспаечного эффекта. Сравнивали 5 групп по 10 животных в каждой: группа без АМ (контроль);

группа с АМ без насыщения;

группы с насыщением верапамилом, лангидазой, хлоргексидином. Крысы выводились из эксперимента по 2 из каждой группы через 7, 14, 21, 28 и 35 дней. Количественная оценка спаечного процесса в баллах проводилась по методике А.В.Воробьева, А.Г.Бебурашвили (2001). В клинике у 18 больных с острой спаечной кишечной непроходимостью дефекты брюшины закры вались АМ, в том числе и со стороны лапаротомных ран. Через неделю после операции проводилось видеолапароскопия с оценкой развития брюшинных спаек и УЗИ брюшной полости перед выпиской.

полученные результаты. В контрольной группе экспериментального иссле дования у всех животных (100%) выявлены различные висцеро-париетальные сращения в зоне травмы брюшины. У животных, которым применялась АМ, насыщенная хлор гексидином, спаечные сращения отсутствовали лишь у 20% крыс. В группах с АМ, на сыщенной лангидазой и верапамилом барьерная эффективность АМ составила по 60%.

Лучшая эффективность выявлена в группе с применением АМ в чистом виде – спайки отсутствовали у 70% крыс. Количественная оценка спаечного процесса в контрольной группе составила10,8±4,7 баллов и в основной 3,7±1,4 балла (Р0,05). АМ полностью рас сасывалась к концу месяца после ее имплантации.

В клинике у всех больных, которым дефекты брюшины закрывались АМ, пос леоперационный период протекал без осложнений. Во время контрольной лапароско пии выявлено, что из 18 больных у 15 АМ полностью закрывала дефекты париетальной вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка брюшины и лапаротомный рубец. К АМ лишь у 4 больных был рыхло припаян сальник и у 2 больных припаяны петли тонкой кишки на границе АМ с брюшной стенкой. К от крытым дефектам брюшины (3 больных) плотно припаялись петли кишки. Плоскостные сращения у этих больных за это время уже проросли сосудами. Всем больным с выяв ленными висцеро-париетальными спайками был выполнен адгезиолизис. УЗИ брюшной полости показало хорошую смещаемость петель тонкой кишки по отношению к опера ционному рубцу и брюшной стенки.

выводы. АМ, обладая достаточно хорошим адгезиопротекторным эффектом, позволяет уменьшить развитие послеоперационных висцеро-париетальных сращений.

ALLOGRAFTS FOR TREATING INFECTED BONE DEFECTS Winkler H.

Osteitis Centre Dцbling, Vienna Инфекция костной ткани является одной из главных и серьезных проблем хирургов в ортопедии. Хронические инфекционные процессы, как правило, приводят к некрозу костных структур различного объема. Общепринято, что секвестрированная кость включает бактериальные колонии, которые провоцируют развитие негативных реакций организма, как к внешним механизмам защиты, так и к антибактериальной терапии. Хирургическое лечение с использованием аллоимплантатов требует полного удаления всей некротической ткани как необходимое условие для достижения положи тельного результата лечения.

Infection of bone represents a major challenge in orthopaedic surgery. Chronic cases are distinguished by necrosis of parts of the osseos structures. It is generally accepted, that sequestered bone comprises bacterial colonies that show inherent resistance to both host de fence mechanisms and antimicrobial chemotherapy, leaving thorough removal of all necrotic tissue a prerequisite for cure. The resulting dead space needs to be filled – defects require reconstruction. Bone grafting is a well established procedure with well documented success, however, autologous bone is available only in limited amounts and recurrence rates are still high. Availability of allograft bone is unlimited but rarely used in florid osteomyelitis since sur geons fear grafts being at risk to become a focus of ongoing infection. Fresh frozen allogeneic bone contains bone marrow consisting of fat and necrotic cells. Fat is eliciting an inflammatory response that together with immunological reactions against cell membranes may create an environment promoting bacterial growth with the necroses as a growth medium. Removing bone marrow lowers the risk of infection. When using allograft bone in sites with high risks of infection it therefore should be free of all components of bone marrow.

Highly purified allograft bone, consisting of collagen and minerals as autologous bone, is unlikely to initiate or nourish a florid infection;

however, the matrix surface may represent a substratum for adherence of bacteria with formation of biofilms. To avoid bacterial adhesion the matrix may be loaded with antibiotics. It has been shown that purified bone is capable of storing huge amounts of antibiotics for prolonged periods of time. This capacity offers the possibility to use allograft bone not only as a filler but the same as a carrier for antibiotic delivery.

4 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка In chronic osteomyelitis our most obstinate opponents are not the familiar planktonic pathogens but their phenotypically different sessile forms embedded in biofilms. Those require up to 1000 fold higher concentrations of antibiotics for elimination than their planktonic forms.

Debridement removes the predominant amount of bioburden but some colonies disrupted from the biofilm during manipulation may find new habitats in niches of the site and cause recurrence after an indefinite period of time. Levels reached by systemic antibiosis or local therapy with commercially available antibiotic carriers mostly are not effective in eliminating biofilm rem nants. Bone impregnated with high loads of vancomycin or tobramycin may provide for high local antibiotic concentations for several weeks (1000x MIC) that are likely to eliminate not only planktonic bacteria but also detached biofilm clusters. Allograft bone may be impregnated both in cancellous and cortical form, morsellized or structural. Indications for their use are all forms of chronic bone infection, including osteomyelitis, infected pseudarthroses, deeply infected diabetic feet and infected total joint replacement.

Osteomyelitic lesions and pseudarthroses of long bones may successfully be treated using antibiotic loaded allograft bone, providing dead space management, antibiotic delivery and reconstruction of deficient areas at the same time. As long as local antibiotic levels are higher than the dosage required for eliminating biofilm fragments no contamination of simul taneously implanted alloplastic material needs to be feared.

применение ЛазернЫХ теХноЛоГиЙ в проЦеССе изГотовЛениЯ транСпЛантатов Гайнутдинова р.Д.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа There was carried out the study of the connective transplants of different structure and histochemical composition which were subjected to laser radiation. It was shown that de struction level in the area of laser cut depends on the transplant fibroarchitectonics.

Цель исследования. Изучение воздействия лазерного излучения на структу ру соединительнотканных трансплантатов.

материалы и методы. Всего для исследования был взят материал от 20 тру пов людей обоего пола от 20 до 55 лет. Трансплантаты были изготовлены из следую щих анатомических структур: твердая оболочка головного мозга, фиброзная капсула почки, глиссоновая оболочка печени, подкожная жировая клетчатка и дерма опорных участков стопы. Этап моделирования биоматериалов проводился с использованием комплекса лазерного моделирования», включающего в себя лазерную установку, ко торая в свою очередь состоит из СО2 – лазера и координатно-управляемой системы перемещения лазерного луча. Данный комплекс разработан по проекту специалистов тканевого банка Всероссийского центра глазной и пластической хирургии и изготов лен в Российском Федеральном Ядерном центре, предназначен для использования в медицине с целью автоматизации процесса изготовления различных трансплантатов (Свидетельство на полезную модель РФ № 23402). Так как в процессе моделирования 4 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка трансплантатов особо важным является сохранение фиброархитектоники донорских тканей, нами проведены исследования структурных изменений тканей в зоне лазерно го реза с использованием набора методик от макроскопического до электронно-мик роскопического уровня.

результаты исследования и их обсуждение. Гистологические исследования зоны лазерной резки показали, что моделирование донорских тканей с помощью СО – лазера сопровождалось слабо выраженной локальной коагуляцией по линии реза.

Так, для трансплантатов, изготовленных из глиссоновой капсулы печени и фиброзной капсулы почки характерна относительно узкая зона деструкции (около 1 мкм) с вари абельной глубиной термического воздействия. Коллагеновые волокна в исследуемой зоне сохраняют свою первоначальную структуру, наблюдается лишь незначительное уплотнение коллагеновых пучков. У трансплантатов твердой мозговой оболочки зона деструкции достигает 4 мкм, кроме того, наблюдается частичная гомогенизация пуч ков коллагеновых волокон. В трансплантатах, изготовленных из подкожной жировой клетчатки и дермы опорных участков стопы наблюдается более широкая (до 5 мкм) линия деструкции при относительно ровной ее глубине. В этом случае в зоне лазерно го воздействия пучки коллагеновых волокон теряют структурную организацию и при обретают вид аморфной массы. Анализ полученных данных показал, что структурные изменения соединительнотканных трансплантатов в зоне лазерного реза в значитель ной степени определяются фиброархитектоникой и плотностью упаковки коллагено вых волокон самих тканей. Таким образом, использование лазера при изготовлении соединительнотканных трансплантатов сопровождается слабо выраженной локальной коагуляцией по линии реза. Ширина коагуляционной зоны варьирует от 1 до 5 мкм в зависимости от структуры ткани. Использование непрерывного и суперимпульсно го режима работ лазера в комплексе с увлажнением и обдувом места лазерного реза, позволяет максимально сохранить структуру моделируемого трансплантата. Кроме того, использование лазерного комплекса обеспечивает суперточную, высокопроизво дительную резку биологических тканей на заданные геометрические формы, исклю чает загрязнение ткани, что позволяет обеспечить конечный эффективный результат хирургической коррекции.

к вопроСу применениЯ СтромаЛЬнЫХ кЛеток коСтноГо мозГа ДЛЯ воССтановЛениЯ ФункЦии повреЖДенноГо роСтковоГо ХрЯЩа в ЭкСперименте Гаркавенко Ю.е., 1красногорский и.н., 1Фомина н.б., 2николаенко н.С., Галибин о.в., 4Сахенберг е.и., 2пинаев Г.п.

ФГУ Научно-исследовательский детский ортопедический институт им. Г.И. Турнера Росмедтехнологий, 2Институт цитологии РАН, 3ГОУ ВПО Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова, Санкт-Петербургский Государственный политехнический университет, Санкт-Петербург The effect of allogeneic bone marrow stromal cells introduced in the gel of the col lagen type I into a defect of the tibial growth plate in rabbits on the recovery of function of 4 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка damaged growth cartilage was studied. In most cases the development of radiographically con firmed deformity of tibia was observed, and histological study showed a formation of spongy bone tissue in the projection of the defect.

Актуальной проблемой ортопедии является нарушение роста трубчатых кос тей. Попытки предупреждения их деформаций при нарушении функции росткового хряща предпринимаются достаточно давно, но не дают убедительных результатов.

Последние годы ознаменованы изучением стволовых клеток, как перспектив ного материала для трансплантации, в том числе в поврежденную ростковую пластинку.

Однако результаты, представленные авторами, противоречивы.

Цель. Изучить в эксперименте эффективность применения стромальных кле ток костного мозга (СККМ) для восстановления функции поврежденного росткового хряща.

Оперированы 24 кролика породы Шиншилла в возрасте 2-3 месяцев весом от 850 до 1830 г, содержавшихся в одинаковых условиях вивария.

Ядросодержащие клетки получали из костного мозга подвздошных костей кроликов центрифугированием в градиенте гистопака плотности 1,077 г/мл и культиви ровали в ростовой среде, состоящей из MEM с добавлением 10% сыворотки эмбрионов коров и смеси пенициллина/стрептомицина в стандартной концентрации. Клетки пасси ровали с помощью смеси 0,25% раствора трипсина и 0,02% раствора ЭДТА в физиологи ческом буфере. На втором пассаже культивирования получали популяцию монослойных СККМ и использовали их для создания тканеинженерных эквивалентов хрящевой ткани и трансплантации в дефект зоны роста большеберцовой кости кролика.


Дефект проксимального росткового хряща большеберцовой кости кроликов создавали методом сверления в сагиттальной плоскости. Использовали местное обезбо ливание 1% раствором новокаина в соответствии с Международными требованиями и Европейской Конвенцией по гуманному отношению к экспериментальным животным.

Тканеинженерный эквивалент, состоящий из геля коллагена I типа (3,0 мг/мл) и недифференцированных или предифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных СККМ (5Ч106 кл/мл), вводили в дефект зоны роста правой большеберцовой кости. В дефект зоны роста левой большеберцовой кости вводили только гель коллагена (контроль).

Рентгенограммы через 2, 4, 6 и 8 недель свидетельствовали о развитии более ранних и выраженных деформаций правой большеберцовой кости животных, а гисто логическое исследование выявило формирование губчатой костной ткани с клеточно волокнистой соединительной тканью в межбалочных пространствах.

Полученные результаты требует детальной оценки и дальнейшего изучения.

4 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка СпоСобноСтЬ маГнитноГо ноСитеЛЯ поДДерЖиватЬ развитие муЛЬтипотентнЫХ мезенХимаЛЬнЫХ СтромаЛЬнЫХ кЛеток при иХ оСтеоГенноЙ ДиФФеренЦировке Горанов в.а., 2руссо а., 2панджери С., 3Дедиу в., 4тампиери а., Ланди е., 2маркаччи м.

Белорусский Государственный Медицинский Университет (БГМУ), г. Минск, Беларусь, Институт ортопедии Ризолли, Болонья, 3Институт Наноструктурных материалов (ISMN-CNR), Болонья, 4Институт Технологий Керамических Материалов (ISTEC-CNR), г. Фаэнза, Италия.

Preliminary testing of magnetic sсaffold, impregnated with magnetic nanopar ticles for its ability to support proliferation and osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells was carried out. Human mesenchymal stem cells from bone marrow were cul tured within two types of magnetic scaffolds composed from hydroxyapatite and collagen/ hydroxyapatite (30:70 vt/vt) in osteogenic medium conditions during 15 days. Proliferation, viability, osteogenic markers expression was assessed on 5, 10, 15 days using MTT-test, acridine orahge/ethidium bromide staining, RT-PCR. No differences in the ability of mag netic scaffolds to support proliferation and osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells were observed comparing with skaffolds not impregnated with magnetic nanoparticles.

At the same time at initial period (up to 5 day) some inhibition of mesenchymal stem cells growth was observed in the collagen/hydroxyapatite scaffold that may be caused by cell ad aptation to new conditions.

Цель. Провести предварительное тестирование скаффолда, импрегнированного магнитными наночастицами, на предмет его способности поддерживать пролиферацию и остеогенную дифференцировку мультипотентных ме зенхимальных стромальных клеток.

материалы и методы. Скаффолды (СК) были получены в ISTEC CNR (Фаенза, Италия). Для исследования были использованы 2 вида скаффолдов импрегнированные магнитными наночастицами (МНП) – на основе гидроксиаппатита и коллаген/гидроксиаппатита (30:70 в/в). Использовали культуру мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток человека (ММСК), полученных из костного мозга, подвергнутую остеогенной дифференцировке по методике Kern S. et al. (2006).

Цилиндрические СК объемом 0,5 мл были инфильтрированы клетками в конечной концентрации 5*105/СК и помещены для инкубации в условия остеогенной среды.

В качестве контролей использовали СК из тех же материалов не импрегнированные МНП. Для оценки морфофункциональных особенностей клеток в СК использовали стандартные методики окраски с использованием акридинового оранжевого (АО) и бромистого этидия (БЭ), тестирование активности алкалиновой фосфатазы, а также МТТ-тест (для количественной оценки жизнеспособных клеток и их пролиферативной активности). Было также проведено исследование экспрессии специфических генов остеогенной дифференцировки (OPN, Col I, Bsp II, Runx2) методом ОТ-ПЦР.

результаты. Эффективность создания тканеинженерных конструкций с использованием стволовых и прогениторных клеток во многом определяются 4 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка микроархитектурой и природой «поддерживающего» материала (скаффолда).

Недавно созданные т.н. «магнитные скаффолды», в частности, будут использованы для манипулирования клетками с использованием магнитного поля, поэтому одной из основных задач на предварительных этапах тестирования является оценка их способности поддерживать пролиферацию и направленное развитие клеточных элементов. В результате настоящего исследования было установлено, что обе тестируемые разновидности магнитных СК поддерживают активную пролиферацию ММСК и их остеогенную дифференцировку (по результатам теста с алкалиновой фосфатазой и экспрессии генов). Последнее было подтверждено после 10 дневной инкубации в условиях остеогенной среды. Тесты, характеризующие жизнеспособность и пролиферативную активность исследуемых клеток в образцах (окраска АО/БЭ и МТТ – тест) показали активную пролиферацию ММСК к 10-15 суткам культивирования, при этом различие с немагнетизированными контрольными СК было недостоверно. Однако было зарегистрировано, что в случае коллаген/гидроксиаппатитных СК до 5 суток культивирования прослеживалось ингибирование пролиферации клеток (по сравнению с контролем в МТТ-тесте) и отмечалось нарастание уровня нежизнеспособных (позитивных по бромистому этидию) клеток.

вывод. Не было выявлено существенных отличий в способности магнитных скаффолдов поддерживать пролиферацию и остеогенную дифференцировку ММСК (к 10-15-му дню инкубации) по сравнению со скаффолдами, не импрегнированными магнитными частицами при инкубации в условиях остеогенной среды. В то же время в инициальном периоде (до 5 суток) отмечалось ингибирование развития ММСК в коллаген/гидроксиаппатитовых СК, что возможно было связано с адаптацией клеток к новым условиям.

вЛиЯние компонентов пЛазмЫ крови на заЖивЛение СтанДартноГо ДеФекта коЖи (ЭкСпериментаЛЬное иССЛеДование) Горбач е.н., петровская н.в., Гребнева о.Л.

ФГУ «Российский научный центр «Восстановительной травматологии и ортопедии»

им. акад. Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган The paper demonstrates the results of the study on defining the influence of blood plasma components taken from donor dogs on skin wound healing during distraction stage of Ilizarov limb lengthening. The experiment was conducted on 17 adult dogs with full layer skin wound in the scapular area. The histological study revealed that the obtained blood frac tion contributes to healing period reduction and activation of the scar reorganization into the skin.

Известно, что в период дистракции в сыворотке крови животных и человека отмечается повышение концентраций биологически активных веществ различных клас сов (S. Weiss et al. 2002). Мы предположили, что низкомолекулярная фракция плазмы мо жет оказать стимулирующий эффект на заживление кожных ран.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Целью исследования явилось определение возможности воздействия на про цесс заживления кожных ран компонентами плазмы крови, взятой от собак-доноров, на ходящихся на этапе дистракции при удлинении конечности по Илизарову.

Исследования выполнены на взрослых беспородных собаках с соблюдением требований «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей». Из плазмы крови собак, забранной спустя 2-3 недели после начала дистракции по Илизарову, получали фракцию, преци питировавшую в диапазоне насыщения сульфата аммония от 33 до 50%. Ее подвергали гель-проникающей хроматографии на колонке с носителем Toyopearl HW-55 (Toyosoda, Япония) и анионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе (Pharmacia, Швеция).

Полипептидные компоненты плазмы крови с молекулярной массой около 10 кД, адсор бирующиеся на анионообменнике, диализовали против дистиллированной воды и лио фильно высушивали.

В условиях операционной под наркозом в лопаточной области создавали де фект кожи размером 5 мм x 30 мм. В I серии (n=5), заживление происходило естест венным образом, во II серии (n=5) – в течение двух недель на поверхность раны делали аппликации физиологическим раствором, в III серии (n=7) – 0,2% раствором компонен тов плазмы крови на основе физиологического раствора. Материал для морфологичес кого исследования получали путем оперативного иссечения образовавшегося рубца в пределах здоровых тканей по окончании процесса эпителизации и через 1 месяц после его завершения. Поперечные относительно поверхности кожи гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону и орсеином по методике Унны Тенцера. Измерение площади рубцово-измененной ткани в области кожного дефек та осуществляли при помощи компьютерной программы анализатора изображений «ВидеоТест-Мастер». Статистическую обработку количественных данных проводили с использованием компьютерного приложения «Microsoft Exсel».

Заживление раны во всех сериях происходило под струпом по типу вторично го натяжения, в I серии – через 28,2±3,05 суток, во II серии – через 22,6±1,89 суток, в III серии – через 18,7±0,71 суток.

Гистологически период заживления во всех сериях эксперимента характери зовался эпителизацией поверхности кожной раны и заполнением области дефекта не зрелой волокнистой соединительной тканью. Отличительные особенности состояли в сроках заживления раны, наличии в области дефекта кистозных полостей, присутствии (III серия) или отсутствии (I и II серии) зачатков дериватов в области дефекта, степени зрелости волокнистых структур соединительной ткани в области дефекта, выраженнос тью рельефа эпидермиса.


Наиболее зрелая волокнистая соединительная ткань формировалась в области дефекта через месяц после заживления раны в III серии эксперимента. По данным мор фометрических исследований применение предложенного биостимулирующего препа рата способствовало уменьшению содержания измененной рубцовой ткани в области замещающегося дефекта уже к периоду заживления. Через месяц после эпителизации раны этот эффект еще более усиливался.

Таким образом, данное исследование подтвердило стимулирующий эффект компонентов плазмы крови доноров с пролонгированными очагами костеобразованием на процесс регенерации кожных ран, который заключался в сокращении сроков зажив ления и восстановлении органотипического строения дермы.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка возраСтное СниЖение ЭФФективноСти кЛонированиЯ и ЧиСЛенноСти СтромаЛЬнЫХ кЛеток преДШеСтвенников в коСтном мозГе и СеЛезенки мЫШеЙ ЯвЛЯетСЯ СЛеДСтвием, как иСтинноГо СниЖениЯ ЧиСЛенноСти кок-Ф, так и реГуЛируЮЩеГо вЛиЯниЯ орГанизма Горская Ю.Ф., Данилова т.а., нестеренко в.Г.

НИИ Эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва The work was performed on CBA mice using heterotopic transplantation method when parts of femur bone marrow (1/2) and spleen (1/5) were placed under renal capsule.

Following variants of cross transplantation of donors and recipients were used: YoungYoung (YY), YoungOld (YO), OldOld (OO), OldYoung (OY). Cell suspensions were prepared from two months old grafts, placed in monolayer cultures and CFE was determined.

It was shown that in bone marrow grafts CFE and the number of CFU-F in group OO de creased 8-fold in comparison with group YY. In group OY CFE increased 3-fold in com parison with variant OO. In group YO CFE decreased 2-fold in comparison with group YY. In spleen grafts CFE and the number of CFU-F in group OO decreased correspond ingly 4- and 6-fold as compared with group YY. In group OY CFE increased 7-fold in comparison with group OO and was higher than in group YY. The data suggest that age decrease of CFE and GFU-F in bone marrow is the result of changes in stromal tissue the same as the regulation effect of host organism. On the contrary age decrease of these parameters in spleen is predominantly related with regulatory influence of host organism.

Известно, что в организме старение сопровождается снижением численности стромальных клеток-предшественников (КОК-Ф). Данная работа посвящена решению вопроса о том, в какой мере это снижение обусловлено истинным уменьшением коли чества КОК-Ф, а в какой – регулирующим влиянием организма, который определяет их численность, исходя из возрастных физиологических потребностей. Работа выполнена с помощью метода гетеротопной трансплантации костного мозга и селезенки мышей с последующим определением эффективности клонирования (ЭКО-Ф) и численности стромальных клеток-предшественников в трансплантатах. Известно, что трансплантат представляет собой своего рода химерный орган, в котором стромальные клетки при надлежат донору, а кроветворные и лимфоидные клетки, а также макрофаги – реципи енту. Таким образом, при перекрестной посадке костного мозга или селезенки старых и молодых животных можно судить о том, каков вклад внутренних и внешних причин в возрастное снижение численности КОК-Ф. Опыты проводили на мышах линии СВА возрастом 2 и 24 месяца. Для посадки гетеротопных трансплантатов половину содержи мого костномозговой полости бедра мышей или 1/5 селезенки помещали под почечную капсулу этих животных, как это было описано ранее, в следующих комбинациях до норов и реципиентов: молодые - молодые (М М), молодые - старые (М С), старые - старые (С С), старые - молодые (С М). Суспензии клеток, содержащихся в 2-х ме сячных трансплантатах костного мозга и селезенки, готовили, как описано, и помещали в монослойные культуры. О численности КОК-Ф судили по числу колоний стромальных фибробластов, которые они образуют в монослойных культурах клеток трансплантатов.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка По числу колоний определяли ЭКО-Ф, то есть количество колоний стромальных фиброб ластов, образуемых 105 (для костного мозга) или 106 (для селезенки) эксплантированны ми клетками. Показано, что ЭКО-Ф и содержание КОК-Ф в трансплантатах костного мозга в группе С С снижались почти в 8 раз по сравнению с трансплантатами группы М М. Однако, в группе С М ЭКО-Ф в трансплантатах поднималось более, чем в раза, по сравнению с ЭКО-Ф в группе С С. В группе М С ЭКО-Ф трансплантатов снижалась примерно вдвое по сравнению с ЭКО-Ф в группе М М. Из полученных данных, по-видимому, следует, что возрастное снижение ЭКО-Ф и численности КОК Ф в костном мозге являются следствием как изменений собственно стромальной ткани (выражающихся в истинном снижении численности КОК-Ф), так и регулирующих вли яний, оказываемых на стромальную ткань со стороны организма, вклад которого в этот процесс представляется весьма существенным. Иная ситуация наблюдалась при транс плантации селезенки. Величина ЭКО-Ф в культурах клеток трансплантатов селезенки и содержание КОК-Ф в трансплантатах группы С С снижались, соответственно, в 4 и раз по сравнению с группой М М. Однако в группе С М ЭКО-Ф в трансплантатах поднималась почти в 7 раз по сравнению с ЭКО-Ф в трансплантатах селезенки группы С С и превышала уровень группы М М. Таким образом, возрастное снижение ЭКО-Ф и численности КОК-Ф в селезенке обусловлены, в противоположность костному мозгу, не снижением числа стромальных клеток-предшественников, а, главным образом, регу лирующими влияниями со стороны организма. Полученные данные свидетельствуют в пользу гипотезы о возможности истощения пула остеогенных костномозговых стро мальных клеток с возрастом. Эти данные, по-видимому, следует учесть при выборе воз раста доноров для трансплантации костномозговой стромальной ткани человека.

неинвазивнЫЙ СпоСоб оптимизаЦии теЧениЯ репаративноГо оСтеоГенеза С помоЩЬЮ компонентов пЛазмЫ крови Гребнева о.Л., Силантьева т.а., Горбач е.н., Гасанова а.Г., кузнецова е.и., розова Л.в.

ФГУ «Российский научный центр «Восстановительной травматологии и ортопедии»

им. академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган Effect of two plasma components’concentrations (KP1 and KP2) from donors with active osteogenesis in the composition of ointment on bone regeneration, biochemical and im munological indices of blood was studied in 154 recipient SBA mice. KP1 was shown to have greater stimulating effect on reparative osteogenesis whereas KP2 on dermogenesis.

Целью исследования явилось изучение влияния компонентов плазмы крови (КП) от доноров с активным остеогенезом на костную регенерацию, а также на биохи мические и иммунологические показатели животных-реципиентов. Ранее проведенные исследования показали, что компоненты плазмы в составе инъекции при местном вве дении ускоряют минерализацию дистракционного регенерата в экспериментальных и клинических условиях (Патент РФ № 2193868).

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка материалы и методы. Эксперименты проводили на 154 белых лаборатор ных мышах-самцах линии СВА массой 25-30 г. Донорам КП (n=10) за трое суток до забора крови осуществляли закрытый перелом голени, реципиентам моделировали пе релом реберной кости. Выделение фракции из сыворотки крови включало процедуры преципитации компонентов сыворотки крови насыщенным раствором сульфата ам мония, гель-проникающей и ионообменной хроматографии. В результате выделения получали компоненты сыворотки крови, преципитирующие в диапазоне 30-50% насы щения соли, с молекулярной массой 20-30 кД, адсорбирующиеся на анионообменнике.

Лиофилизированные компоненты плазмы в двух концентрациях – 0,6% (КП1, n=36), и 1,2% (КП 2, n=36) – наносили накожно в составе мази. В качестве мазевой основы ис пользовали фармакопейный препарат «Тизоль». Мазь начинали наносить через сутки после операции и продолжали в течение 9 суток. Контрольные серии составили: ин тактные животные (n=36) и животные, подвергавшиеся аналогичным манипуляциям с нанесением плацебо (n=36). Через 10 суток после операции выделяли материал для морфологических исследований области перелома и сыворотку крови, в которой опре деляли активность щелочной и кислой фосфатаз, содержание молочной и пировиног радной кислот, ионов кальция, фосфора, магния и хлора. Показатели неспецифической резистентности (активность нейтрофильных фагоцитов крови и бактерицидная актив ность сыворотки крови) изучали после инъекций компонентов плазмы крови в область перелома в дозе 60 мг/кг массы тела.

результаты исследований показали следующее:

1. Мазевая основа «Тизоль» не оказывает влияния на изучаемые показатели у животных.

2. КП1 в составе мази стимулирует периостальный остеогенез в области пе релома, не влияя на репаративную регенерацию компонентов кожи. КП1 значительно увеличивает активность щелочной фосфатазы и уменьшает содержание ионов фосфора и хлора сыворотки крови.

3. КП2 ускоряет восстановление гистоструктуры кожного покрова, снижает показатель гликолиза и содержание ионов кальция и фосфора крови сыворотки крови.

4. Компоненты плазмы крови в выбранной концентрации не влияют на пока затели фагоцитарной активности нейтрофилов и бактерицидной активности сыворотки крови.

выводы. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности ис пользования компонентов плазмы крови от доноров с активным остеогенезом в составе средства для наружного применения. Приведенные данные доказывают необходимость дальнейших исследований по выяснению механизмов модуляции морфогенеза регене рирующих тканей компонентами плазмы крови.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка ЭкСпериментаЛЬно-морФоЛоГиЧеСкое обоСнование применениЯ троФиЧеСкоГо транСпЛантата ДЛЯ замеЩениЯ ДеФектов ГоЛовноГо мозГа крЫС Григорян Д.С., 1Древаль о.н., 2Сатанова Ф.С., 2Деревягин в.и., кукушкин м.Л., 3Смирнова в.С., 4тенедиева в.Д.

ГОУ ДПО Российская Медицинская Академия последипломного образования Росздрава, ГУ Институт Мозга РАМН, 3Институт общей патологии и патофизиологии, НИИ нейрохирургии им. Бурденко, Москва This abstract presents the results of experimental application of denaturated yolk concentrate as a trophic transplant that was placed in the zone of cerebral defect in rats.

Besides, its impact on reparative processes, the dynamics of the restoration of pain threshold and on neuroendocrine status is demonstrated.

Целью настоящего исследования явилось изучение морфологических, физио логических, нейроэндокринологических изменений при повреждении вещества головного мозга экспериментальных крыс с последующим применением трофического транспланта та, в качестве которого использовался денатурированный желтковый концентрат.

материалы и методы. Эксперимент был проведен на 53 беспородных самцах белых крыс, которым под базисным внутрибрюшинным наркозом тиопентала натрия бо ром проводилась трепанация черепа диаметром 3-4мм слева в зоне проекции коркового представительства задней лапы, далее острым путем проводилась деструкция соматосен сорной коры на глубину 1-2 мм и удаление поврежденной ткани мозга. В эксперименте были выделены 2 группы животных: 1) опытная группа – дефект заполнялся трофическим трансплантатом, в качестве которого использовался денатурированный желтковый кон центрат (ДЖК) (n = 26);

2) контрольная группа – (n=27). Далее проводились физиологи ческие методы исследования – оценка поведения основывалась на выяснении общей и, в частности, двигательной активности животных, выявлении чувствительных расстройств методом алгезиметрии (тестирование до и после операции в сроки 4часа, 3 суток, 1-2-3-5 7-9-11-13 недель до 101 суток), оценке аппетита и прибавки в весе.

Выведение из эксперимента проводилось в сроки 4 часа, 3 суток, 3-4 недели, 2 месяца, и 101 день. Осуществлялся забор крови у животных во время декапитации, и определялся уровень гормонов Т3,Т4, FT3, FT4, ТТГ и кортизола радиоиммунологическим методом на 37 крысах (18 – опытных, 19 – контрольных) в сроки 4 часа, 21 сутки, 101 сутки.

Далее во всех случаях проводились морфологические исследования (окраска гематокси лин и эозином – для оценки общей морфологической картины;

по Нисслю – для оценки функционального состояния нервных клеток;

по Клювер-Барерру – окраска на миели новые волокна). Иммуногистохимическое исследование для изучения апоптоза методом ТUNEL проводили на серийных парафиновых срезах толщиной 5 мкм на 10 препаратах.

результаты. Трофический трансплантат отграничивает зону повреждения нервной ткани и препятствует ее распространению, замедляет процесс рубцевания в паренхиме мозга. Использование трофического трансплантата создает впечатление по давления процесса апоптоза в мозговой ткани и способствует сохранности нейронов.

При замещении дефекта мозга биологическим трансплантатом отмечено выраженное  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка позитивное влияние на восстановление нарушенной при повреждении мозга болевой чувствительности у крыс. При использовании трансплантата отмечалась тенденция к стабилизации нейроэндокринного статуса. Трофический трансплантат предотвращает развитие «низкого мозгового «Т3-синдрома»» и тормозит развитие стрессовой реакции.

Биологический трансплантат обладает выраженным гемостатическим эффектом (ока зывает мгновенный и стойкий интраоперационный гемостатический эффект, при его использовании не отмечалось обширных очагов кровоизлияния в мозге, а также он пре дотвращает появление вторичных кровоизлияний в мозге).

выводы. Замещение дефектов головного мозга крыс трофическим трансплан татом способствует стимуляции репаративных процессов в нервной ткани при ее пов реждении и функциональному восстановлению в эксперименте. Полученные результаты указывают на перспективность использования данного вида трансплантата в нейрохи рургической практике.

СинерГизм неЙропротекторноГо ДеЙСтвиЯ аутотранСпЛантатов кЛеток коСтноГо мозГа (ккм) и активаторов ЛипиДноЙ киназЫ при Черепно мозГовоЙ травме (Чмт) у крЫС Гридина н.Я., 1коцюруба а.в., 2золотоверх а.м., 1Серкиз о.в., веселова о.и., 1величко о.н.

ГУ «Институт нейрохирургии им. академика А.П. Ромоданова АМН Украины», Институт биохимии им. А.В. Палладина НАНУ, г. Киев, Украина Retinol – acetate (3,44% sol.) (RA) and ecdysterone (structural analog of calciferol-1,25 dihydroxyvitamin D3) (E) action on neuroprotective functions of rat brain BMCs autotransplantates after TBI was investigated. Both retinol and ecdysterone has showed neuroprotective (antioxydation and antiinflammatory) actions of autotransplantated BMCs, and, for the first time, was established the strengthening of this action by RA and E. RA has prompted inhibition of lipide-kinase activators action on cNOS-activity, but E had reciprocal and stimulation action accordingly.

ЧМТ – это системное повреждение структур головного мозга, следствием ко торого является развитие окислительного (как оксидативного, так и нитрозативного) стресса, воспалительного процесса и инициированного ими митохондрий-зависимого апоптоза/некроза клеток в повреждённой и прилегающей зонах коры головного мозга.

Ранее биохимическими методами нами было показано, что трансплантированные в зону повреждения коры головного мозга аутотрансплантаты ККМ значительно снижают раз витие окислительного стресса и воспалительного процесса, а также апоптоза/некроза нейронов коры головного мозга.

Известно, что в регуляции митохондрий-зависимого апоптоза/некроза нейронов головного мозга важную роль выполняет липидная киназа (фосфатидилинозитол-3-киназа, ФИ3К,PI3K),инициирующаязапусксигнальногокаскада(PI3K--PKB/Akt--cNOS--NO--cGMP -PKG), в котором активированная липидная киназа активирует белковую протеинкиназу PKB/Akt. Последняя, в свою очередь, активирует путём фосфорилирования Са++-зависи  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка мые конститутивные изоформы NOS – сNOS и nNOS. Следовательно, активация PI3K при водит к активации конститутивного нейропротекторного синтеза оксида азота, тогда как активация окислительного стресса и воспалительного процесса, наоборот, приводят к сти мулированию синтеза оксида азота индуцибельной изоформой NOS (iNOS)-индуцирован ной цитокинами воспаления и многократно усиленной супероксид-анионом.

Известно, что активный метаболит витамина D3 – С27-стероидный гормон 1,25-дигидроксихолекальциферол (кальцитриол) – является активатором PI3K и конс титутивного нейропротекторного синтеза оксида азота. Активная форма витамина А – ретиноевая кислота, также активирует липидную киназу, непосредственно связываясь с её мембранными доменами. Активатором PI3K является структурный аналог каль цитриола – С27-стероидный гормон экдистерон, широко распространённый в растениях, насекомых и морских организмах.

Цель исследования состояла в изучении действия экдистерона (стандартизи рованный экстракт из растения Serratula coronata, серпуха венценосная) и фармакологи ческого ретинол-ацетата на нейропротекторное (антиоксидантное и антивоспалительное) действие трансплантированных в зону ЧМТ коры головного мозга ККМ.

материалы и методы. Эксперименты проводили на взрослых крысах-самцах (24 животных), которым проводили ЧМТ (1-я группа) и ЧМТ с одновременной ауто трансплантацией ККМ (2-я группа). Экдистерон (Э) вводили с питьевой водой в дозе 10 мкг/100 г массы тела. 10 мкл 3,44%-ного масляного раствора ретинол ацетата (РА) давали per os ежедневно в течение 30 суток после операции. Через 30 суток в гомоге натах кусочков коры головного мозга из повреждённой зоны определяли биохимичес кие показатели, характеризирующие окислительный метаболизм – скорость генерации *ОН-радикала, ксантиноксидазу, липоксигеназу, пулы диеновых конъюгатов, а также показатели системы синтеза оксида азота.

результаты. Подтверждено антиоксидантное и противовоспалительное дейс твие трансплантированных ККМ и впервые установлено усиление этого действия при использовании как РА, так и структурного аналога гормональной формы витамина D – Э. Наблюдали реципрокное и стимулирующее при введении Э и, наоборот, ингибиру ющее при введении РА, действие активаторов липидной киназы на активность сNOS.

кЛетоЧнаЯ терапиЯ при ДеГенеративнЫХ повреЖДениЯХ СуХоЖиЛиЙ (ЭкСпериментаЛЬное иССЛеДование) Грищенко в.и., 2коструб а.а., 2блонский р.и., 1Гончарук е.и., 3Довбешко Г.и., магомедов а.м., 2бруско а.т., 1волкова н.а.

«Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины» Отдел криобиологии репродуктивных систем, г. Харьков, Украина, 2ГУ «Институт травматологии и ортопедии АМН Украины», 3«Институт физики НАН Украины», г. Киев, Украина Цель проекта. Изучение влияния аутогенных ММСК, аутогенных фиброб ластов, а также факторов роста, на репаративные процессы в сухожилии при его дегене ративном повреждении.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка материалы и методы. Исследования выполнено на 120 половозрелых крысах самцах со смоделированным дегенеративным повреждением Ахиллового сухожилия (4 опытных группы – по 30 животных и контрольная группа – 30 животных), массой 300±10 г.

При исследовании руководствовались «Европейской конвенцией относитель но защиты позвоночных животных, которые используются с экспериментальными и другими научными целями» (Страсбург, в 18.03.1986).



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 12 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.