авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 12 |

«IV Всероссийский симпозиум с международным участием ‡ ‚ ‡‚ ‡‡„ Сборник тезисов симпозиума 21-22 апреля 2010 Санкт-Петербург ...»

-- [ Страница 3 ] --

Опытные животные были разделены на 4-и группы. В первую группу вошли животные, которым с целью лечения дегенеративного повреждения сухожилий вво дились однократно аутогенные ММСК. Во вторую группу вошли животные, которым с целью лечения дегенеративного повреждения сухожилий вводились одноразово ау тогенные фибробласты. В третью группу вошли животные, которым с целью лечения дегенеративного повреждения сухожилий вводились однократно аутоплазма, обога щенная факторами роста. В четвертую группу вошли животные, которым с целью лечения дегенеративного повреждения сухожилий вводились однократно 0,2 мл физ.

раствора.

Опытных животных выводили из эксперимента на 7-ые, 21-ые и 45-е сутки, путем декапитации – забирая кровь для биохимического исследования.

Мы проводили патоморфологическое исследование сухожилий опытных жи вотных на разных сроках лечения, определяли и сравнивали их прочностные характе ристики, а также проводили инфракрасное спектроскопическое исследование опытных сухожилий.

Исследуя сыворотку крови, опытных животных на разных сроках лечения мы определяли содержание коллагеназы, гиалуронидазы, гликозаминогликанов (ГАГ), сво бодной и белково-связанной фракции гидроксипролина, что характеризирует репара тивный тендогенез в процессе лечения экспериментальных животных.

результаты исследования. Анализируя результаты полученных данных, а также проводя их сравнительную характеристику – наилучшие результаты мы получили в опытной группы животных, которым с целью лечения дегенеративного повреждения сухожилий вводились аутогенные ММСК, следующей группой за эффективностью ле чение была группа животных, которым с целью лечения дегенеративного повреждения сухожилий вводились аутогенные фибробласты, наихудшие результаты по сравнению с 1-й и 2-й опытными группами были у животных 3-й опытной группы, которым с целью лечения дегенеративного повреждения сухожилий вводились аутоплазма, обогащенная факторами роста.

Благодаря использованию аутогенных ММСК, а также аутогенных фиброб ластов, ожидаем достичь оптимизации тендорепарации сухожилий при их дегенератив ном повреждении.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка ГепатоЦитЫ и периСинуСоиДаЛЬнЫе кЛетки пеЧени обЛаДаЮт СвоЙСтвами СтвоЛовЫХ/проГениторнЫХ кЛеток в ХоДе пренатаЛЬноГо развитиЯ и репаративноЙ реГенераЦии пеЧени Гумерова а.а., киясов а.п., калигин м.С., Газизов м.С., андреева Д.и., абдулхаков С.р., титова м.а., Шафигуллина а.к.

ГОУ ВПО Казанский Государственный Медицинский Университет, г. Казань Background and aims: One of the escalated problems of regenerative medicine in hepatology now is searching and identification of regional liver stem cell. It is reported about many cell populations, which were selected from fetal and adult livers by cell sorting using the number of different stem cells’ markers. However, it is unknown yet, which of described liver cells have sights of stem cells and can pretend for this role. Whereas cells have immature phe notypes during prenatal development, and at this time liver stem cell can take its position in the liver, we investigated the stem cell property of embryo and fetal human liver cells in vivo. We studied the possibility of stem cells’ markers expression in regenerating rat liver also.

Methods: We studied immunohistochemically the expression of stem cells markers by both epithelial and sinusoidal human liver cells during: 1) human prenatal development (the embryos and fetal organs from 3,5 week of gestation (GW) until newborn were obtained as a result of legal medical abortions);

2) rat liver regeneration after lead nitrate toxic damage or after partial hepatectomy.

Results: Many cellular types express stem cells markers during the various periods of human development: mesenchymal cells of transverse septum – Bcl-2 (5-7 GW) and C-kit (5 6 GW);

sinusoidal cells, including hepatic stellate cells (HSC) – Bcl-2 (4-12 GW and probably later);

mesothelial liver cells – Bcl-2 (5 GW);

hepatoblasts/hepatocytes – C-kit (from 4 GW) and C-met (4-8 GW);

ductal plate cells – C-kit (7-14 GW);

endothelial cells – Bcl-2 (7 GW) and CD34 (since 4 GW);

mesenchymal cells of liver vessels – Bcl-2 (6-8 GW). However, only two cell populations express these markers most stable and long – hepatocytes and HSC. In the course of the rat liver regeneration after its damage by lead nitrate or partial hepatectomy the same cell populations (hepatoblasts/hepatocytes and HSC) express С-kit.

Conclusion: Thus, there are 2 types of cells showing properties of stem cells – hepa toblasts/hepatocytes and HSC – may exist in the liver. These cells can be regional liver stem/ progenitor cells and they can be used for cell therapy of the liver diseases in the future.

введение и цель. Регенеративная медицина – одна из наиболее бурно раз вивающихся и многообещающих областей медицины, в основу которой заложен при нципиально новый подход к восстановлению поврежденного органа – трансплантация стволовых клеток или их стимуляция. Чтобы реализовать этот подход, необходимо знать, что представляют собой стволовые клетки, и, в частности, региональные стволо вые клетки, каков их фенотип и потенции к дифференцировке. В условиях in vitro изуча ется множество клеточных популяций, выделенных из печени по различным маркерам стволовых/прогениторных клеток. Однако до сих пор неизвестно, какой из описанных in vivo клеточных типов печени обладает признаками стволовых. Решение этой задачи позволило бы перейти на качественно новый уровень в терапии заболеваний печени,  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка в первую очередь хронических и наследственных. Поскольку в период пренатального развития устанавливается фенотип клеток, и они только занимают своё место в органе, целью нашего исследования было установить, какие из них могут в это время проявлять свойства стволовых клеток in vivo. Также была изучена возможность экспрессии клетка ми печени маркеров стволовых клеток при регенерации.

материалы и методы. Экспрессия наиболее актуальных маркеров стволовых/ прогениторных клеток различными эпителиальными и синусоидными клетками печени была изучена иммуногистохимическими методами в ходе: 1) пренатального и раннего постнатального развития печени человека (эмбрионы и органы плодов человека 3,5- недель гестации (НГ) получены в результате легальных медицинских абортов и само произвольных выкидышей, образцы постнатальной печени – в результате аутопсий);

2) репаративной регенерации печени после повреждения нитратом свинца или частичной гепатэктомии.

результаты. Многие клеточные типы печени экспрессируют маркеры ство ловых клеток в различные периоды пренатального развития: мезенхимальные клетки поперечной перегородки – Bcl-2 (5-7 НГ) и C-kit (5-6 НГ);

синусоидные клетки печени, в том числе перисинусоидальные клетки печени (ПКП) – Bcl-2 (4-12 НГ, вероятно и далее);

мезотелиальные клетки - Bcl-2 (5 НГ);

гепатобласты/гепатоциты – C-kit (с 4 НГ) и C-met (4-8 НГ);

клетки протоковой пластинки – C-kit (7-14 НГ);

эндотелиальные клетки – Bcl- (7 НГ) и CD34 (с 4 НГ);

мезенхимальные клетки сосудов печени – Bcl-2 (6-8 НГ). Однако клетки только двух клеточных популяций экспрессируют такие маркеры наиболее ста бильно и длительно – гепатобласты/гепатоциты и ПКП. Более того, эти же клеточные типы экспрессируют С-kit в регенерирующей печени крысы как после химического пов реждения нитратом свинца, так и после частичной гепатэктомии.

выводы. В печени могут существовать как минимум две клеточные популя ции, проявляющие свойства стволовых/прогениторных клеток – гепатобласты/гепато циты и перисинусоидальные клетки печени. В связи с этим они могут рассматриваться как основные претенденты на роль региональных стволовых клеток печени с перспекти вой использования в клеточной терапии заболеваний печени.

кЛетоЧнЫе теХноЛоГии в оФтаЛЬмоЛоГии:

ЭкСпериментаЛЬнЫе иССЛеДованиЯ и перСпективЫ кЛиниЧеСкоГо применениЯ Гундорова р.а., 1Ченцова е.в., 1пак н.в., 1Ходжабекян Г.в., 1беляев Д.С., балашова м.в., 1зуева м.в., 1Цапенко и.в., 2васильев а.в., 2терских в.в., Дашинимаев Э.Д., 2киселева е.в., 1катаев м.Г., 1макаров п.в.

Московский НИИ глазных болезней им Гельмгольца, Институт биологии развития им Н.К. Кольцова РАН, Москва During the past 10 years, the Helmholtz Moscow Research Institute of Eye Diseases has con-ducted experiments to study the effect of cultured cell transplants on then regeneration processes. The encouraging results of experimental and limited clinical research relating to the treatment of cornea and eyelid skin burns by transplanting allogenic fibroblast culture in  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка collagen gel (the live equivalent of the corneal stroma, the live equivalent of the skin) testify to high therapeutic potential of gene engineering in ophthalmology.

We were the first to develop and offer for clinical use a new method of stimulating cornea regeneration by transplanting ectodermal cultured stem cells (subconjuctival). On the model of toxic reti-nopathy reproduced by intravitreal injection of kainic acid the neural stem cells transplantation reduced the extent of proliferative changes in the retina and caused a favorable neuroprotective effect on the functional activity of the retina, confirmed by clinical and electrophysiological tests.

Проблема реконструкции тканей остается актуальной в фундаментальной био логии, во многих областях медицины, в том числе и офтальмотравматологии. Несмотря на значительные успехи в лечении поражений наружных оболочек глаза и сетчатки, в подавляющем большинстве случаев заживление ожоговых ран роговицы и кожи век за вершается формированием грубых рубцов, требующих в отдаленном периоде повтор ных реконструктивных операций, а на сетчатке формируются дистрофические очаги, резко ухудшающие остроту зрения.

Развитие биомедицины определило новый этап в поиске путей восстановле ния утраченных тканей, основанный: 1 – на использовании выращенных in vitro клеток человека (кератиноцитов, фибробластов и др.), 2 – на использовании постнатальных ауто или аллогенных стволовых клеток человека.

В МНИИ ГБ им Гельмгольца в течение последних 10 лет проводятся эксперимен тальные исследования по изучению влияния трансплантации культивированных клеток на регенерационные процессы. Положительные результаты ограниченных клинических исследований по лечению глубоких дефектов стромы роговицы, ожоговых поражений кожи век методом трансплантации культуры аллогенных фибробластов в коллагеновом геле («живой эквивалент стромы роговицы», «живой эквивалент кожи») свидетельству ют о высоком лечебном потенциале клеточной инженерии в офтальмотравматологии.

На модели тяжелого щелочного ожога роговицы нами был впервые разработан и предложен новый способ стимуляции регенерации роговицы методом трансплантации культивированных стволовых клеток эктодермального происхождения.

Для экспериментального изучения трансплантации стволовых клеток при по ражении сетчатки нами была создана модель токсического поражения сетчатки кролика – каинатная ретинопатия, характеризующаяся гибелью биполярных и мюллеровских клеток. В качестве трансплантационного материала использовали нейральные ство ловые/прогениторные клетки, выделенных из ткани переднего мозга 7-12-недельных эмбрионов человека. Установлено, что трансплантация клеток снижает степень проли феративных изменений на глазном дне, интравитреальная трансплантация оказывает положительное нейропротективное влияние на функциональную активность сетчатки, ретробульбарное введение способствует лучшей сохранности биполярных клеток и глиальных клеток Мюллера, что было доказано электрофизиологическими исследова ниями. Субхориоидальная трансплантация оказывает стимулирующее влияние на про цессы репаративной регенерации в сетчатке при лазерной травме: эффект клинически проявляется в ускорении пигментации ожогового дефекта, морфологически – в форми ровании более нежного хориоретинального сращения.

Таким образом, проведенные экспериментальные исследования по изучению трансплантации различных видов стволовых клеток и «живых эквивалентов» тканей  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка при патологии переднего и заднего отрезков глаза показали эффективность данных методов лечения. Для широкого внедрения в клиническую практику необходимо де тальное и всестороннее изучение пролиферации и дифференциации СК, необходимы инструменты контролируемого управления этими процессами.

пЛаСтика боЛЬШеберЦовоЙ коСти С иСпоЛЬзованием тканеинЖенерноГо ЭквиваЛента коСти в ЭкСперименте Деев р.в., 2Цупкина н.в., 3бозо и.Я., 3Гребнев а.р., 2пинаев Г.п.

ФГУ «РоссНИИТО им. Р.Р. Вредена Росмедтехнологий», Институт цитологии РАН, 3Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург The results of the experiment in which rabbits formed a defect of the tibia, and fill its original design. The design included a composite of demineralized bone matrix and living cells.

The results were evaluated using X-ray methods, and histological and electron microscopy.

Предпринято экспериментальное исследование для обоснования выполни мости и эффективности костной пластики за счет введения в область дефекта длинной трубчатой кости экспансированных in vitro культур остеогенных клеток на трехмерном носителе. В ходе лабораторного этапа работы получали тканеинженерные эквивален ты костной ткани (ТИЭКТ) посредством совмещения мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (ММСК), полученных из красного костного мозга кроликов, и но сителя из деминерализованной губчатой костной ткани (ДКТ). В ходе культивирования клеток до совмещения с матриксом подтверждали остеогенную направленность их диф ференцировки реакциями на щелочную фосфатазу и соли кальция. Качетво иммоби лизации клеток на носителе подтверждали трансмиссионной и растровой электронной микроскопией.

В ходе экспериментального этапа животным наносили дефект большеберцо вой кости протяженностью 2 см. Кролики были разделены на три группы: животным первой группы в область дефекта трансплантировали ТИЭКТ, второй – только носитель;

у животных третьей группы заживление протекало без костной пластики. Выполняли интрамедуллярную фиксацию костных отломков с монтажом дистрактора. Результаты оценивали через 15, 30, 60, 90, 120 и 150 суток с помощью рентгенологического исследо вания, компьютерной томографии, гистологического анализа.

При трансплантации ТИЭКТ через 30 суток зона дефекта была полностью вы полнена ретикулофиброзной костной тканью, межтрабекулярные пространства заполнены реактивно измененной соединительной тканью (РИСТ). Часть костных трабекул регене рата формировалась непосредственно от участков частично резорбированного носителя.

К 60 сут. в той же группе определялись процессы ремоделирования регенерата – умень шение объема периостальной части, разрастание костных трабекул в интрамедиарной и эндостальной зонах, в области костномозгового канала – очаги кроветворения. В конт рольных группах лишь к 60 суткам дефект был заполнен ретикулофиброзной костной тка нью, трабекулы ДКТ окружены плотной волокнистой соединительной тканью, со стороны  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка костных опилов происходило образование хрящевой ткани. К 90 сут. в первой группе кон солидация костных отломков достигнута за счет спонгизированной компактной костной ткани, выполнен просвет костномозгового канала, заполненный желтым костным мозгом.

В контрольных группах зона повреждения заполнена смешанной ретикулофиброзной и пластинчатой костной тканью, в центре – большие поля РИСТ. Данная тенденция сохраня лась вплоть до крайних сроков наблюдения. Данные рентгенологического исследования были сопоставимы с результатами гистологического анализа.

Для определения механизма оптимизирующего влияния клеток ТИЭКТ на процессы репаративной регенерации часть культур были помечены флюорохромом РКН-26 до совмещения с носителем. Через 18 суток после трансплантации ТИЭКТ бра ли биоптат из области дефекта и окрашивали DAPI. При флюоресцентной микроскопии было показано, что остеоциты регенерата не несли метки РКН-26, то есть дифференци ровались из камбиальных клеток реципиентного ложа.

Таким образом, использование ТИЭКТ существенно ускоряет репаративный остеогенез, улучшает его качество, что создает перспективы использования метода как вспомогательного в современных технологиях остеосинтеза.

критерии оЦенки СоСтоЯниЯ поверХноСтеЙ коСтнЫХ импЛантатов Денисов-никольский Ю.и., 1матвейчук и.в., 2розанов в.в., 3Лекишвили м.в.

Научно-исследовательский и учебно-методический центр биомедицинских технологий ГНУ ВИЛАР, Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, ФГУ Центральный институт травматологии и ортопедии (ЦИТО) им. Н.Н. Приорова, Москва Research objective– to develop methodology and to formulate criteria of an esti mation morphofunctional condition of bone grafts surfaces. In a basis of offered meth odology are put classic (light, scanning electronic microscopy) and modern (microscopy) methods of studying of the laws bone fragments structure.

Состояние поверхностного слоя костных имплантатов играет важную роль в процессе регенерации, что обусловливает необходимость уделять особое внимание данному вопросу. Использование в практике тканевых банков различных инструмен тов для ручной и механической обработки и разделения костей с целью получения имплантатов нуждается в стандартизации, а также разработке объективных методов морфомеханического анализа поверхностей костных фрагментов.

Цель исследования. Разработать методологию и сформулировать критерии оценки морфофункционального состояния поверхностей костных имплантатов. В основу предлагаемой методологии положены классические (световая, сканирующая электронная микроскопия) и современные (акустическая микроскопия) методы изучения закономер ностей структуры костных фрагментов. Для оценки физико-механического состояния поверхностного слоя рекомендуется применять метод измерения микротвердости образ цов при различных нагрузках в зависимости от реального физико-химического состояния образцов. В качестве критериев оценки структурно-функционального состояния поверх  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка ности костных имплантатов могут служить морфометрические характеристики, дающие представления о рельефе поверхности, форме и размерах дефектов, возникающих при различных видах физико-механической подготовки образцов (ручная и механическая обработка, гидроструйные способы разделения кости), а также о форме и размерах пор костного вещества. Использование современного метода – акустической микроскопии позволяет одновременно оценивать рельеф и физико-механическое состояние образуемой поверхности, что дает возможность повысить эффективность подобных исследований и информативность получаемых при этом результатов. Сведения о структурно-функцио нальном состоянии поверхностного слоя представляют интерес при проведении контро ля костных образцов после различных видов физико-химической обработки, имеющих место при получении имплантатов (деминерализация, деорганификация, лиофилизация и др.). В этой связи основные принципы разработанной методологии применимы и при таких видах исследований. В практике тканевых банков в качестве доступного, инфор мативного и оперативного средства контроля качества поверхностного слоя костных фрагментов бесконтактным способом может успешно применяться микроскоп «Эксперт»

(фирма «ЛОМО»), обладающий при стократном увеличении достаточным для промежу точного контроля разрешением (до 8 мкм). Включение его в комплекс приборов техно логического контроля позволяет получать необходимую количественную информацию и анализировать ее с применением компьютерных программ. Предложенная методология не исчерпывает существующие возможности объективного контроля качества поверхнос ти имплантатов, что обусловливает ее дальнейшее совершенствование с привлечением дополнительных критериев, дающих представление о композиционном и элементном со ставе поверхностных слоев.

иСкуССтвеннЫЙ ФибриновЫЙ СГуСток – потенЦиаЛЬнЫЙ материаЛ ДЛЯ репараЦии повреЖДениЙ ХрЯЩевоЙ ткани муЛЬтипотентнЫми мезенХимаЛЬнЫми СтромаЛЬнЫми кЛетками коСтноГо мозГа ЧеЛовека Жур к.в., 2костюнина в.C., 1Гончарова н.в., 1космачева С.м., потапнев м.п., 2Глушен С.в., 1петёвка н.в.

РНПЦ гематологии и трансфузиологии, Минск, 2Белорусский Государственный Университет, г. Минск, Беларусь The purpose of this study was to develop the potential of artificial fibrin clot as a three dimensional scaffold for the chondrogenesis of human bone marrow multipotential mesenchymal stromal cells (BM-MMSCs). Artificial fibrin clot was produced from compo nents of «Fibrinostat» (BRPC H&T). MMSCs at passage 1-3 were suspended in fibrinogen and thrombin and the effect of clot consistence and cell density on this system was examined.

Chondrogenesis of BM-MMSCs was promoted by TGF-3, BMP6, and dexamethasone in se rum-free media DМЕМ-F12 and verified by histological and colorimetric methods. The cell morphology and viability were optimal in artificial construction with clot consistence similar natural clot. Artificial fibrin clot in combination with aprotinin is a suitable environment for stimulating BM-MMSCs to differentiate into chondrocytes.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Повреждение суставного хряща, не затрагивающее субхондральную часть костной ткани, имеет ограниченную способность к регенерации из-за недоступности клеток-предшественниц и низкой клеточности прилежащих тканей. Однако когда де фект затрагивает подхрящевую область, это стимулирует образование фибринового сгустка, содержащего мультипотентные мезенхимные стромальные клетки, мигриро вавшие из костного мозга (ММСК КМ). Под влиянием различных внутрисуставных факторов ММСК КМ дифференцируются в хондроцитоподобные клетки, а фибриновый сгусток ремоделируется в хрящ соединительно-тканного (фиброзного) типа (Cheung et al. 1978;

Johnson, 1986;

Shapiro et al. 1993). Таким образом, фибриновый сгусток является естественным природным биоматериалом для регенерации хрящевой ткани стволовыми клетками.

Целью нашей работы было создание трёхмерной конструкции-носителя для ММСК КМ человека на основе фибриногена и тромбина и подтверждение жизнеспо собности и хондрогенного потенциала клеток в составе искусственного фибринового сгустка.

Конструкция создавалась из компонентов гемостатического препарата «Фибриностат» (пр-во РНПЦ гематологии и трансфузиологии) и ММСК КМ, выде ленных по стандартному протоколу адгезией на пластике мононуклеарной фракции клеток костного мозга человека. ММСК 1-3 пассажей помещали в искусственный фибриновый сгусток различной плотности (2-16 мг фибриногена/мл) и исследова ли их морфологию, жизнеспособность и хондрогенный потенциал. Хондрогенез индуцировали культивированием полученных конструкций с плотностью клеток 106/см 3 и 107/см 3 в среде DМЕМ-F12 с добавлением дифференцировочных факторов:

TGF-3, BMP6 и дексаметазона в течение 6-10 дней. Дифференцировку подтверж дали выявлением протеогликанов и гликозаминогликанов по окраске опытных и контрольных образцов толуидиновым синим, сафранином О и альциановым синим.

Окраске подвергали как срезы полученных конструкций, так и цельные конструкции с последующей экстракцией связанного красителя и его количественной оценкой колориметрическим методом. Положительным контролем служили образцы послео перационной хрящевой ткани человека. В качестве отрицательного контроля – ана логичные конструкции, культивировавшиеся в отсутствие факторов хондрогенной дифференцировки.

Конструкция, полученная нами, отличается от большинства использованных ранее низкой плотностью фибрина (2-4 мг фибрина/мл), близкой к природной, стабилизи рованной ведённым в нее ингибитором протеолиза – аппротинином. Морфология клеток, заключенных в гелеобразный прозрачный сгусток, хорошо видна под инвертированным микроскопом, тогда как в конструкциях с плотностью фибрина выше 4 мг/мл микро скопическое наблюдение невозможно. Жизнеспособность клеток в такой конструкции выше в 2-3 раза. Наблюдался самопроизвольный высев ММСК КМ из искусственного сгустка на пластик. Аналогичная картина наблюдалась нами при культивировании экс плантов хрящевой ткани человека после предварительного протеолитического расщеп ления. ММСК КМ синтезировали протеогликаны и гликозамингликаны под действием дифференцировочных факторов, что подтверждает их способность к хондрогенной диф ференцировке в составе искусственной конструкции-носителя на основе фибринового сгустка.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка обработка и криоконСервирование пуповинноЙ крови иволгин Д.а., коровина к.в., адылов Ш.Ф., Смолянинов а.б., Цымбалюк и.н.

Покровский Банк Стволовых Клеток, Санкт-Петербург The umbilical cord blood (UCB) is well known to be a rich source of stem cells with practical and ethical advantages, but it can be received only at childbirth. For better cell recov ery, as the first stem cells preservation stage, all cord blood units were processed by using the Sepax automated method (Biosafe, Switzerland). To solve the problem of stem cells preserva tion, cryopreservation in liquid nitrogen is used. In Stem Cell Bank Pokrovski we used Planer controller freezer (Planer, UK) for optimal freezing conditions. The freezing program has been optimized for stem cells and the speed of freezing is from 1 to 3 K per minute, which avoids http://www.multitran.ru/c/m.exe?a=110&t=2317586_2_1&sc=28 cell damage. After freezing cord blood units were stored in the liquid nitrogen for further application. Data of cells re covery and viability of cord blood units after thawing suggested that the methods reported for processing and cryopreservation of hematopoetic stem/progenitor cells in the human UCB, used in Stem Cell Bank Pokrovski, is effective.

Цель исследования. Использование пуповинной крови как альтернативного источника гемопоэтических стволовых клеток для лечения онкогематологических и ряда других заболеваний получает сегодня всё большее распространение. Для макси мально успешного применения стволовых клеток пуповинной крови (СКПК) при транс плантации необходимо, чтобы образец СКПК отвечал определенным требованиям к качеству. Одним из ключевых этапов заготовки СКПК является криоконсервирование.

Разработка стандартных процедур по сбору, выделению, оценке, криоконсервированию и хранению стволовых клеток пуповинной крови в банке пуповинной крови позволит эти требования соблюсти.

материалы и методы. Оценивались 708 образцов пуповинной крови, соб ранных во время родов до рождения плаценты. Мононуклеарная фракция выделялась автоматическим способом на клеточном сепараторе Sepax S-100 (Biosafe, Швейцария).

Эффективность выделения ядерной фракции и фракции мононуклеаров оценивались при помощи гемоанализатора «Bechman&Coulter», количество и жизнеспособность CD34+ клеток оценивалась на проточном цитометре «Bechman&Coulter» FC500. После отбора проб для проведения необходимых анализов и добавления криопротектора – 10% ди метилсульфоксида («Pall») образцы помещались в программный замораживатель Planer KRYO 560-16 (Planer, Великобритания) где проводилась криоконсервация по разрабо танному нами протоколу от +4єС до –100єС после которой образцы пуповинной крови перемещались в криохранилища для хранения в жидкой фракции азота при температуре –196єС. Для оценки эффективности выделения и криоконсервации ядерной фракции, через 1 год были разморожены 7 образцов и оценено количество ядерных клеток, коли чество и жизнеспособность CD34+ клеток.

результаты. Процент выделения ядерных клеток и мононуклерных клеток составил 84,63±19,3% и 77,9±21,7% соответственно, среднее значение абсолютного ко личества CD34+ клеток в образце – 22,2Ч105 клеток, доля жизнеспособных клеток мо  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка нонуклеарной фракции составила 99,31%. После размораживания доля от выделенных ядерных клеток и CD34+ клеток составила 95,5±3% и 85,2±23% соответственно, а доля жизнеспособных мононуклеарных клеток снизилась до 85,9%.

выводы. Использование для выделения лейкоцитарной фракции автоматичес кой системы Sepax S-100 позволяет получать образцы с высоким содержанием клеток.

Применяемый нами протокол программного замораживания обеспечивает сохранность большого количества клеток в жизнеспособном состоянии. В целом, используемая ме тодика сбора и обработки пуповинной крови позволяет помещать на хранения в банк пуповинной крови образцы высокого качества, соответствующие предъявляемым требованиям.

ДиФФеренЦировка муЛЬтипотентнЫХ мезенХимаЛЬнЫХ СтромаЛЬнЫХ кЛеток коСтноГо мозГа ЧеЛовека в инСуЛин-проДуЦируЮЩие кЛетки игнатенко С.и., згурская н.а., космачева С.м., потапнев м.п.

Республиканский научно-практический центр гематологии и трансфузиологии, г. Минск, Беларусь The potential of multipotential mesenchymal stromal cells (MMSCs) of human bone marrow to differentiation into insulin-producing cells was under study. MMSCs were seeded in flaks with or without extracellular matrix gel and 15-day 3-step protocol was used.

Differentiation was detected by morphology characteristics, C-peptide production, intracel lular insulin presence and mRNA expression of pancreatic endocrine genes. As a result of cell differentiation was estimated only few MMSCs differentiated into insulin-producing cells in vitro. Additional investigations are required for MMSC therapy of type 1 diabetes.

Мультпотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК) под действи ем ростовых факторов могут дифференцироваться в различные типы клеток. В послед нее время появился ряд сообщений, демонстрирующих трансдифференцировку ММСК в инсулин-продуцирующие клетки (ИПК).

Цель работы. Изучение возможности дифференцировки ММСК костного мозга человека в инсулин-продуцирующие клетки.

материалы и методы. ММСК получали методом адгезии на пластике из мо нонуклеаров костного мозга, выделенных на градиенте плотности 1,077 Ficoll - Paque.

ММСК культивировали в среде альфа-МЕМ, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), глутамин и антибиотики. Смену среды проводили каждые 4 дня.

Дифференцировку ММСК 3-его пассажа в ИПК проводили при достижении клетками 90% конфлюэнтности роста по трехступенчатому протоколу предложенному Gao F. с соавт. (2008). Контролем служили ММСК, культивированные в среде L-DMEM с 10% FBS. Часть ММСК после дифференцировки переводили на среду L-DMEM: DMEM F12 (1:1), содержащую FBS и эксцендин-4, с целью выявления внутриклеточного цинка (Tayaramma T. 2006). Оценку дифференцировки ММСК в ИПК проводили по образова нию трехмерных клеточных кластеров, содержанию внутриклеточного цинка (окраска дитизоном), количеству С-пептида в питательной среде (ИФА), экспрессии генетических  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка маркеров PDX-1 и ISL-1 иммунофлуоресцентным методом и проточной цитофлуоримет рией, по наличию транскриптов препроинсулина (PPI), транскрипционного фактора PDX, прогормонконвертаз PC1/3 и PC2 методом ПЦР в реальном времени.

результаты. Культивирование ММСК костного мозга в на протяжении 15-ти дней в условиях 3-х ступенчатого протокола не привело к появлению выраженных мор фологических и функциональных признаков, характерных для ИПК поджелудочной же лезы. Так, клетки, подвергнутые дифференцировке, не экспресссировали mRNA PDX-1, PPI, PC1/3 и PC2, а, наблюдавшееся изменение морфологии клеток в округлую форму на 2-ой ступени протокола не завершилось образованием трехмерных кластеров, сходных с островками Лангерганса поджелудочной железы. Однако по ряду свойств ММСК, под вергнутые дифференцировке, отличались от контрольных клеток. Через 48 часов куль тивирования в среде определялось незначительное количество С-пептида, а с помощью окраски дитизоном были выявлены области с положительной реакцией на внутрикле точный цинк (не более 10 ед. на флакон Т25). Кроме того, 2,76% клеток, переведенных после дифференцировки на 10 дней в среду L-DMEM: DMEM F12, содержащую 10% FBS и 10 нмоль/л эксцендина-4, экспрессировали PDX-1.

На основании результатов собственных исследований и анализа публикаций, преждевременно говорить о возможности полноценной и эффективной -клеточной дифференцировки ММСК. Требуются дополнительные исследования по разработке ме тодик получения ИПК, а также по генетической модификации ММСК in vitro c возмож ностью достижения регулируемой секреции инсулина этими клетками.

иСпоЛЬзование в теХноЛоГии изГотовЛениЯ биокомпозиЦионнЫХ материаЛов ЯвЛениЯ ГенерированиЯ и СинХронизаЦии унипоЛЯрнЫХ ЭЛектриЧеСкиХ импуЛЬСов веЩеСтвами при ФазовЫХ переХоДаХ первоГо роДа илюхин в.в., 2Лекишвили м.в., 1бурлев м.Я., 1зянкин м.б.

Московский Государственный Университет Прикладной Биотехнологии (МГУПБ), ФГУ Центральный институт травматологии и ортопедии (ЦИТО) им. Н.Н. Приорова, Москва In the laboratory «the Technology equipment and branch processes» Moscow State University of Applied Biotechnology, V.V. Ilyukhin by means of the device equipped of the os cillograph with memory and high parametres, was revealed the phenomenon of generating unknown earlier and synchronisation of unipolar electric impulses by substances at phase transitions of the first kind and absence of generating of electric impulses at phase transitions of the second kind.

The given effect consists that discrete particles of substances (a molecule or groups of molecules) which can carry out each other rather freely phase transition, co-operate by means of as much as small forces depending on their relative positioning, tend to generating of unipolar electric impulses in the form of harmonic vibrations with identical amplitudes, frequencies and porosity. In during a lot of experiments spent by co-authors, received acknowl edgement of the phenomenon of generating of electric impulses at phase transitions.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка It is known that value of temperature, pressure or any other physical magnitude at which there is a phase transition, name a transition point. There are phase transitions of two kinds. At phase transition of the first kind by jump change such the substance characteristic as density, concentration of components, in a mass unit is allocated or absorbed quite certain quantity of heat named heat of phase transition. At phase transition of the second kind some physical parameter equal to nil on the one side from the point of transition, gradually grows at removal from a transition point in other side, thus density changes continuously, the heat is not allocated and not absorbed. Phase transition of the first kind is the widespread phenomenon in the nature. It concern: evaporation and condensation, fusion and crystallization, sublimation and de-sublimation in the hard phase, some structural transitions in iron bodies. The invention concerns to thermometry and can be used for measurement of temperature of substances at phase transitions.

The found out phenomenon is necessary for considering in processes heat and masstransfer substances, metrology, the electrokinetic phenomenons (micro-elektroosmos, mi croelektrofores) and microelektrolysis.

We received the patent «Metod of measurement of temperature of substances at phase transitions» № 2300097 on the basis of the found out phenomenon.

Use of the found out phenomenon for medicine in general and in the field of trans plantology in particular, has essential scientific and applied value. We investigate only some questions for the present a little developed, but representing certain interest at studying of possibilities of optimisation in crushing processes under the influence of freezing, cutting and dehydration of bioobjects.

Процесс получения современных биокомпозиционных материалов, предназначенных для использования в реконструктивных операциях, является наукоемким и технологически сложным. Усилия абсолютного большинства ученых направлены на создание новых материалов, способных по своей потенции превосходить природные аналоги, в том числе и аутоткани, и реально влиять на процессы регенерации различных тканей. Включение в технологии изготовления пластических материалов достижения и результаты фундаментальных исследований является едва ли не единственно правильным направлением развития биотехнологии, как научно прикладной науки.

В лаборатории кафедры «Технологическое оборудование и процессы отрасли»

МГУ Прикладной Биотехнологии с помощью устройства, оснащенного осциллографом с памятью и высокой разрешающей способностью, было обнаружено неизвестное ра нее явление генерирования и синхронизация униполярных электрических импульсов веществами при фазовых переходах первого рода и отсутствие генерирования электри ческих импульсов при фазовых переходах второго рода (В.В.Илюхин 2008).

Данный эффект состоит в том, что дискретные частицы веществ (молекулы или группы молекул), которые могут свободно относительно друг друга осуществлять фазовый переход, взаимодействуют посредством сколь угодно малых сил, зависящих от их взаимного расположения, имеют тенденцию к генерированию униполярных элек трических импульсов в виде гармонических колебаний с одинаковыми амплитудами, частотами и скважностью. Многочисленными экспериментами, проведенными соавто рами, получено подтверждение явления генерирования электрических импульсов при фазовых переходах.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Известно, что значение температуры, давления или какой-нибудь другой фи зической величины, при котором происходит фазовый переход, называют точкой пе рехода. Различают фазовые переходы двух родов. При фазовом переходе первого рода скачком меняются такие характеристика вещества, как плотность, концентрация компо нентов, в единице массы выделяется или поглощается вполне определенное количество теплоты, называемое теплотой фазового перехода. При фазовом переходе второго рода некоторая физическая величина, равная нулю с одной стороны от точки перехода, пос тепенно растет при удалении от точки перехода в другую сторону, при этом плотность изменяется непрерывно, теплота не выделяется и не поглощается. Фазовый переход пер вого рода – широко распространенное в природе явление. К нему относятся: испарение и конденсация, плавление и кристаллизация, сублимация и десублимация.

Обнаруженное явление необходимо учитывать в процессах тепло и мас сопереноса веществ, метрологии, электрокинетических явлений (микроэлектро осмос, микроэлектрофорез) и микроэлектролиз. Нами получен патент на способ измерения температуры веществ при фазовых переходах (Патент РФ № 2300097) на основе обнаруженного явления. Учитывая и управляя указанными процессами стано виться возможным получение неограниченного по своим физико-химическим, меха ническим и многим другим свойствам биокомпозиционных материалов с известными параметрами.

Использование обнаруженного явления для медицины вообще и в области трансплантологии в частности, имеет существенное научное и прикладное значение.

Нами исследованы лишь некоторые вопросы, пока еще мало разработанные, но пред ставляющие определенный интерес при изучении возможностей оптимизации процес сов криоизмельчения, резания и обезвоживания биологических объектов.

вЛиЯние инФракраСноГо ЛазерноГо изЛуЧениЯ на репаративное коСтеобразование при заЖивЛении переЛома в уСЛовиЯХ ЧреСкоСтноГо оСтеоСинтеза ирьянов Ю.м., ирьянова т.Ю., Дюрягина о.в.

ФГУ «Российский научный центр «Восстановительной травматологии и ортопедии»

им. академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган Tibial fracture was modeled and transosseous osteosynthesis surgery was made in the control and experimental groups of Wistar line rats. The animals of experimental group were subjected to low-energy infrared laser radiation locally – both in occipitoparietal zone and in fracture one for 5 minutes each. At 7 and 14 days after surgery the bones operated were studied by the methods of roentgenography, light microscopy, scanning electron microscopy and roentgen electron probe microanalysis. Laser radiation has been established to have a stimulating effect on reparative osteogenesis, as well as to accelerate bone fracture healing under the conditions of transosseous osteosynthesis. The data obtained can be used to develop the clinical recommendations on application of the progenitor cells of bone marrow granula tion tissue for reparative angiogenesis and osteogenesis stimulation.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Цель работы. Изучение действия низкоэнергетического инфракрасного ла зерного излучения на репаративное костеобразование в процессе заживления перелома большеберцовой кости в условиях чрескостного остеосинтеза.

материалы и методы. Эксперименты выполнены на 16 половозрелых крысах линии Вистар в контрольной и опытной группах, по 8 животных в каждой группе. Под общей анестезией закрытым способом у животных моделировали перелом в средней трети диафиза большеберцовых костей и проводили операцию чрескостного остеосин теза, используя разработанный нами минификсатор и спицы для остеосинтеза (Патенты 87899, 87900). Оперированных животных опытной группы подвергали воздействию ла зерного излучения на терапевтическом аппарате «Узор-А-2К» (длина волны 0,89 мкм, частота импульсов 150 Гц, мощность импульса не менее 2 Вт). Сеансы облучения про водили через день, локально на затылочно-теменную область и зону перелома по 5 мин на каждый участок. Через 7 и 14 суток после операции животных эвтаназировали со гласно общепринятым этическим нормам, проводили рентгенологическое исследование оперированных костей, заливали их в парафин и аралдит. Парафиновые срезы костей окрашивали гематоксилин и эозином, по Ван-Гизону и альциановым синим на сульфа тированные гликозаминогликаны. Часть образцов в зоне перелома исследовали при по мощи сканирующего электронного микроскопа и рентгеновского электронно-зондового микроанализатора.

результаты. Проведенными исследованиями установлено, что у контрольных животных через 7 суток после операции в костной ране отмечается выраженная вос палительная реакция, проявляющаяся в расширении и тромбозе сосудов, отеке и ин фильтрации грануляционной ткани лимфоцитами и макрофагами. В интермедиарном и медуллярном пространствах регенерата локализуется обширная гематома. Через 14 суток в зоне перелома выявляется эндостальное костеобразование, которое в виде мелкопет листой сети трабекул распространяется в диастаз. На периостальной поверхности опе рированных костей образуется небольшая по объему костная мозоль. Интермедиарное сращение отсутствует. В опытной группе через 7 суток (3 сеанса облучения) после операции в результате интенсивной пролиферации и дифференцировки камбиальных остеогенных клеток периоста и эндоста образуется костно-хрящевой периостальный и соединительнотканный интермедиарный регенераты, а в костномозговой полости фор мируется обширная капиллярная сеть и эндостальное костное сращение. Под действием лазерного излучения активизируется пролиферация эндотелиоцитов и перицитов, кото рые образуют сосудистые почки роста, эндотелиальные выросты и эндовазальные раз растания в медуллярном пространстве регенерата. Через 14 суток (6 сеансов облучения) в опытной группе животных участки гематомы и периостального хряща интенсивно кальцифицируются, эндостальные трабекулы заполняют костномозговую полость от ломков на значительном протяжении, при этом заживление перелома осуществляется по типу первичного заживления костных ран.

заключение. Таким образом, установлено, что низкоэнергетическое инфра красное лазерное излучение оказывает стимулирующий эффект на репаративное костеоб разование и ускоряет заживление перелома кости в условиях чрескостного остеосинтеза.

Полученные данные являются основанием для проведения дальнейших исследований с целью разработки клинических рекомендаций по использованию прогениторных клеток грануляционной ткани костного мозга для стимуляции репаративного ангиогенеза и кос теобразования методами клеточной трансплантологии и тканевой инженерии.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка C-KIT-позитивнЫе кЛетки ЯвЛЯЮтСЯ обЩими преДШеСтвенниками ДЛЯ а- и в-кЛеток поДЖеЛуДоЧноЙ ЖеЛезЫ ЧеЛовека калигин м.С., андреева Д.и., Сабиров а.Г., Шарипова Э.и., титова а.а., Гумерова а.а.

Казанский государственный медицинский университет, г. Казань C-kit (CD 117) – a receptor for stem cell factor, can be a marker for insulocyte pre cursor. He aim of our work was to study expression of insulin and glucagon by c-kit positive cells of pancreas during human ontogenesis.

Methods. Histological sections were stained immunogistochemically with monoclo nal antibodies to C-kit, insulin and glucagon.

Results. We found first C-kit+ cells at 8,5 weeks of gestation in the duct epithe lium. From week 11,5 of gestation and at other periods C-kit+ cells made round nodules, like Langerhans islet. Double staining with insulin and glucagon revealed that at the beginning C kit+ cells start to produce glucagons (8,5 weeks of gestation) and only after that insulin (from 11,5 week of gestation). The amount of cells expressing C-kit + insulin, C-kit + glucagon and insulin + glucagon at the same time in the human pancreas decreases after birth. In adults this cells are very rare.

Conclusion. C-kit positive cells can be progenitors of both A- and B-cell of human pancreas. Also C-kit can become a convenient marker of cells because it is situated on the membrane. New therapeutical methods for the pancreatic diseases, such as type I diabetes, when children as well as adults can be a donor of cells, may be developed.

Обшепринятая теория органогенеза поджелудочной железы предполагает, что островки Лангерганса развиваются из клеток эпителия протоков. В островке различают несколько типов клеток. Однако, не известно, является ли одна и та же клетка-предшест венница для всех типов клеток островка или каждый тип имеет свою предшественницу.

Одним из маркеров клеток-предшественниц инсулоцитов является C-kit (СD117) – ре цептор фактору стволовых клеток (SCF).

Целью нашего исследования стало изучение экспрессии инсулина (маркер дифференцированных В-клеток) и глюкагона (маркер дифференцированных А-клеток) C-kit-позитивными клетками поджелудочной железы в ходе онтогенеза человека.

методы исследования. Исследование проведено на эмбрионах и плодах че ловека (4,5-27 нед.), полученных в ходе легальных медицинских абортов и спонтанных выкидышей, а также аутопсиях поджелудочной железы детей и взрослых. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин по стандартной мето дике. Срезы окрашивали иммуногистохимически с моноклональными коммерческими антителами к C-kit, инсулину и глюкагону.

результаты. Первые C-kit + клетки появляются с 8,5-й недели гестации в виде единичных клеток эпителия протоков. С 11,5 недель гестации и на других сроках C-kit+ клетки формировали округлые скопления, напоминающие островки Лангерганса. Двойное окрашивание на инсулин и глюкагон показало, что сначала C-kit + клетки начинают синтезировать глюкагон (8,5-й недель гестации), а затем  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка инсулин (с 11,5 недель гестации). После рождения в поджелудочной железе человека число клеток, экспрессирующих одновременно С-kit и инсулин, С-kit и глюкагон, а также инсулин и глюкагон уменьшается. У взрослых людей такие клетки являются единичными.

заключение. На основании полученных результатов можно сделать следую щие выводы. C-kit-позитивные клетки являются общими предшественницами для А- и В-клеток поджелудочной железы человека. Поскольку C-kit располагается на мембране, он может стать удобным маркером для выделения и культивирования клеток, что поз волит разработать новые методы лечения патологий поджелудочной железы, например, сахарного диабета I типа. При этом донором C-kit-позитивных клеток может стать ребё нок или взрослый человек.

изменение коЛиЧеСтва туЧнЫХ кЛеток в Структуре СеЛезенки при оДнократноЙ поДкоЖноЙ транСпЛантаЦии криоконСервированноЙ пЛаЦентЫ кацай в.в., Шепитько в.и., Стецук е.в.

Высшее государственное учебное заведение Украины «Украинская медицинская стоматологическая академия», г. Полтава, Украина Transplantation of cryopreserved placenta caused the change of cellular composi tion in the tissues of spleen. It was multiplied the amount of labrocytes, part of which were degranulated. Complete normalization of indexes was observed on 30th days of experiment.

Криоконсервированная плацента представляет собой бесценный источник биологически активных веществ, а также является чужеродным субстратом для орга низма реципиента и вызывает соответствующие изменения в системе органов иммунной защиты.

Определение динамики изменений клеточного состава структурно-функ циональных элементов селезенки дает возможность оценить механизм ответа органов лимфоидной системы на введение криоконсервированной плаценты, скорость ответа на поступление антигенов, скорость функционального возобновления и возвращения нор мальной готовности органа к адекватному функционированию.

Целью экспериментального исследования было изучение изменений туч ных клеток в структуре селезенки при однократной подкожной трансплантации крио консервированной плаценты.


Работа была проведена на 35 половозрелых крысах–самцах линии «Вистар». крыс составила контрольная группа, 25 оставшимся (по 5 крыс на серию) была произведе на одноразовая подкожная трансплантация криоконсервированной плаценты. Эвтаназия экспериментальной группы животных была проведена на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки эксперимента. После эвтаназии животных, материал тканей селезенки заключали в пара фин, полутонкие срезы окрашивали гематоксилин и эозином. Микрофотографирования осуществляли на цифровом микроскопе фирмы «Olympus» C 3040-ADU с адаптирован ными к соответствующим исследованиям программами.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Нами было установлено, что введение криоконсервированной плаценты вызы вало значительную реакцию со стороны тучных клеток (ТК) на вторые сутки экспери мента. Количество которых в поле зрения резко увеличилось и достигло максимальных значений (в 7 раз больше, чем в контрольной группе). Насыщенность гранулами ТК была разной. Рядом с клетками, которые содержали много оптически плотных базофильных гранул в цитоплазме, определялись полупустые ТК и одиночные лаброциты с морфо логическими признаками полной дегрануляции. ТК размещались группами или по одиночке.

На седьмые сутки определялась тенденция к уменьшению количества ТК в поле зрения, хотя их число приблизительно в 2,1 разы превышало контрольные показатели. Подавляющее большинство клеток было в состоянии дегрануляции.

Уменьшение количества ТК наблюдало также на 14-е сутки эксперимента, что при близительно на 20% меньше по сравнению с контрольными показателями. 30-е сут ки эксперимента характеризовались полным восстановлением как качественных, так и количественных показателей ТК, которые не отличалась от показателей интактной группы животных.

Введение криоконсервированной плаценты вызывало изменение клеточного состава структурно-функциональных элементов селезенки, что проявлялось значи тельным увеличением количества тучных клеток, часть которых были дегранулиро ваны. Полная нормализация показателей наблюдалась на 30-е сутки эксперимента.

бактериоЛоГиЧеСкие иССЛеДованиЯ коСтнЫХ ФраГментов биотканеЙ До СтериЛизаЦии кирилова и.а., подорожная в.т., новоселов в.п., бакиров т.С.

ФГУ «Новосибирский НИИТО Росмедтехнологий», г. Новосибирск Microbial contamination of donor bone fragments was studied after non-sterile pro curement and before sterilization. The study results showed that microbial landscape was pre sented by gram-positive microflora and yeast cultures. Pathogenic gram-negative microflora was not identified. Medical products prepared from such bone fragments are pyrogen-free.

Представляет интерес изучение микробной флоры посмертных костных тка ней до стерилизации. По данным литературы контаминация грамотрицательными микроорганизмами до периода стерилизации, уже после стерилизации и при наличии отрицательных бактериологических посевов может спровоцировать пирогенную ре акцию пациента. Основным источником пирогенных примесей в материале является комплекс эндотоксина с белком грамотрицательных бактерий, который входит в состав наружной мембраны клеток.

Цель исследования. Изучение микробной контаминации донорских костных фрагментов при нестерильной заготовке.

материалы и методы. Материалом для исследования являлись 120 образцов аллогенных костных фрагментов от 12 доноров.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Бактериологические методы исследования:

– Микроскопические (окраска препаратов);

– Культуральные (высев на элективные питательные среды, определение куль туральных свойств);

– Биохимические (определение биохимических ферментативных свойств).

Было выявлено три варианта морфологической картины: грамположительная споровая палочка, грамположительные кокки и дрожжеподобные грибы.

На втором этапе исследования, в зависимости от морфологии микроорганиз мов, производились высевы на элективные питательные среды для выделения чистых культур. По результатам морфологического исследования в качестве элективных пита тельных сред использовали: желточно-солевой агар, агар Сабуро, агар для выделения энтерококков. На третьем этапе исследования проводилась идентификация микроорга низмов до вида.

Биохимическую идентификацию проводили на основании способности штам мов ферментировать глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу.

результаты. В результате проведенного исследования была выявлена выра женная контаминация дрожжевыми культурами – 79,16%, грамположительной споро вой палочкой – 91,7%, диплококками Enterococcus spp. – 33,3%, St.epidermidis – 8,3%, St.Saprophiticus – 8,3%.

Материал только от 1 донора был обсеменен St. Saprophyticus, St. Epidermidis, в то время как диплококки Enterococcus spp. (E. faecalis, E. faecium) выявлены в пробах у 4 доноров. Грамположительная споровая палочка и дрожжевые грибки наблюдались у 11 доноров практически в большей части проб.

Все биоткани имели исходный уровень контаминации, характерный для ок ружающей среды. Несмотря на практику нестерильной заготовки тканей, патогенных возбудителей выявлено не было.

выводы. Таким образом, на первый план в микробном пейзаже донорских костных фрагментов выходит сапрофитная микрофлора, которая в нормальных усло виях не является патогенной для человека. Изделия медицинского назначения (ИМН), приготовленные из таких костных фрагментов при условии адекватной стерилизации являются не только стерильными, но и апирогенными.

транСпЛантаЦиЯ овариаЛЬноЙ ткани как аЛЬтернативнЫЙ метоД замеСтитеЛЬноЙ ГормонаЛЬноЙ терапии кирошка в.в., тищенко Ю.о., Дворцевой в.к., бондаренко т.п.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина Autological and allogeneic transplantations of mature ovarian tissue have been es tablished to result in the recovery of hormonal status of castrated recipient animals within the long observation terms (100 days), while during transplantation of neonatal ovaries the substi tutive effect is observed only at early post-transplantation stages (30 days).

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка В современной медицине трансплантация овариальной ткани является одним из методов коррекции эндокринопатий яичников различного генеза. В связи с этим це лью данной работы было исследовать в динамике гормональный статус животных–ре ципиентов при ауто-, аллотрансплантациях половозрелой и неонатальной овариальной ткани в условиях экспериментальной двухсторонней овариоэктомии.

Трансплантацию овариальной ткани осуществляли под капсулу левой почки одновременно с двухсторонней овариоэктомией. Исследование морфологии трансплан татов и их гормонального уровня проводили на 30-е, 60-е и 100-е сутки после транс плантации. Показано, что при аутотрансплантации происходит развитие овариальной ткани и восстановление эндокринной функции в течение всего срока наблюдения (до 100 суток). При аллотрансплантации половозрелой овариальной ткани к 100-м суткам наблюдения отмечено снижение гормонального статуса животного-реципиента относи тельно интактных животных, на гистологических срезах трансплантатов – формирова ние фиброзной ткани (около 30% площади). Имплантация неонатальной овариальной ткани приводила к формированию структуры, характерной для ткани яичников и вос становлению гормонального статуса животного на протяжении первых 30-40 суток. На 100-е сутки наблюдения уровень половых гормонов у этих животных находился в преде лах, соответствующих кастрированным, морфология трансплантата была представлена соединительной тканью.

Таким образом, ауто- и аллотрансплантация половозрелой овариальной ткани приводит к восстановлению гормонального статуса кастрированных животных-реци пиентов при длительных сроках наблюдения (100 дней), тогда как при трансплантации неонатальных яичников заместительный гормональный эффект наблюдается только на ранних этапах после трансплантации (30 суток).

вЛиЯние ЭкСтрактов ФетаЛЬнЫХ тканеЙ на биоХимиЧеСкие показатеЛи СЫворотки крови при коСтноЙ травме ковинька м.а., Лунева С.н., ткачук е.а., кононович н.а., петровская н.в.

ФГУ «Российский научный центр «Восстановительной травматологии и ортопедии»

им. академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган Changes in biochemical indices of blood serum was studied experimentally on adult mongrels with healing comminuted fractures of long bones with stimulation of protein complex extracted from fetal osseous tissue.

The reduced length of bone fracture healing with stimulation of fetal proteins was shown to be associated with activation of antioxidant system that resulted in slower osteoresorption.

В предварительных экспериментальных исследованиях выявлено стимулиру ющее влияние модифицированных экстрактов фетальной костной ткани на созревание дистракционного регенерата, а, следовательно, и сокращение сроков периода фиксации.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Цель исследования. Изучение особенностей изменения биохимических по казателей сыворотки крови при заживлении оскольчатых переломов длинных костей в условиях стимуляции комплексом протеинов, выделенных из фетальной костной ткани.

материалы и методы. У взрослых беспородных собак, разделенных на группы, моделировали оскольчатые переломы голени, которые фиксировали при по мощи чрескостной аппаратной конструкции до получения полного сращения. При этом в опытной серии в области излома параоссально вводили раствор модифициро ванного экстракта фетальной костной ткани эмбрионов собак, который лиофилизиро вали и стерилизовали бета-излучением. Смесь включала в себя различные комплексы протеинов, обладающих молекулярной массой от 5 до 50 килодальтон. Эксперименты проводили в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспе риментальных животных. Использовали рентгенологический и биохимический мето ды исследования.


результаты исследования. Рентгенологические признаки полного костного сращения определяли: – в контрольной серии – к 49±1,7 суткам фиксации, в опытной серии – к 30±2,4 суткам фиксации. В сыворотке крови собак обеих групп изменение активности щелочной фосфатазы (ЩФ) имело схожую динамику. Усиление активнос ти костного изофермента кислой фосфатазы (ТрКФ) происходило к концу наблюдения.

Изменение соотношения ЩФ/ТрКФ имело схожую динамику у всех животных, толь ко в опытной этот индекс принимал значения ниже дооперационных за счет снижения активности ЩФ. В конрольной серии наблюдалось стойкое понижение концентрации общего кальция и неорганического фосфата, в то время как в опытной – происходило незначительное повышение уровня этих электролитов. У животных опытной группы в процессе эксперимента происходило значительное снижение уровня продуктов пере кисного окисления липидов относительно дооперационных показателей при повышении концентрации этих веществ у собак контрольной группы. Процессы тканевого катабо лизма имели схожую динамику изменения в зависимости от сроков эксперимента у жи вотных обеих групп. У собак опытной группы на начальных сроках наблюдения в крови повышалось содержание продуктов энергетического обмена, при этом в контроле на сутки наблюдалось снижение содержания сывороточных продуктов гликолиза практи чески на 50%. К концу фиксации во всех случаях повышалась концентрация лактата и пирувата. Изменения белкового спектра сыворотки крови в опытной группе происхо дили за счет значительного снижения концентрации альбуминов и гамма-глобулинов, в контрольной – эти изменения происходили за счет повышения бета- и гамма-глобулинов при сниженных альбуминах.

Таким образом, использование экстрактов фетальных тканей при лечении ос кольчатых переломов трубчатых костей сокращает сроки заживления костной травмы.

На наш взгляд, это связано с изменением метаболического профиля, на фоне которо го протекает остеорепарация, в частности, с активизацией антиоксидантной системы, что приводит к замедлению процессов остеорезорбции. В то же время, схожая дина мика изменения активности ферментов и концентраций тканевых метаболитов в сыво ротке крови опытной и контрольной групп, может говорить об отсутствии серьезных метаболических сдвигов у собак после введения препаратов экстрактов фетальных тканей.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Формирование коСтноГо бЛока при вентраЛЬном СпонДиЛоДезе С иСпоЛЬзованием комбинированноГо ДепротеинизированноГо аЛЛоимпЛантата-ФикСатора корочкин С.б.

ФГУ «Новосибирский НИИТО Росмедтехнологий», г. Новосибирск Composite deproteinized bone allograft used for bone fixation consists of allogenic deproteinized tubular compact bone and osteoplastic material Deprotex. Strength character istics, osteoinductive and osteoconductive properties of the used material provide bone block formation in ordinary terms without loss of correction within the operated segment.

Вентральный спондилодез в хирургии позвоночника является одним из наибо лее распространенных видов оперативного лечения. Применяются имплантаты как из искусственных материалов, так и ауто, и аллокостных материалов.

Цель исследования. Изучить сроки, особенность формирования костного блока и возможность клинического применения депротеинизированного аллоимпланта та-фиксатора при вентральном спондилодезе.

материал и методы. В качестве исследуемого материала нами был использо ван комбинированный депротеинизированный аллоимплантат-фиксатор. Изучены его прочностные характеристики на сжатие и изгиб. В эксперименте на 25 беспородных со баках изучен процесс формирования костного блока в сроки 1, 3, 6, 9, 12 месяцев, по животных на каждый срок. Изучена эффективность применения материала в клинике на 20 пациентах, оперированных на разных отделах позвоночника.

результаты исследования. Интраоперационных и послеоперационных ос ложнений не возникло. Прочностные характеристики аллоимплантата превосходят таковые успешно применяющегося в вертебрологии имплантата из пористого TiNi.

Анализ рентгенологических и морфологических данных проведенного эксперимен тального исследования показал, что формирование костного блока происходит в те чение 1 года и протекает в несколько стадий: сначала формируется десмогенный и хондрогенный регенерат, затем на его основе к 9-12 месяцам формируется полноцен ный костный блок. Использование комбинированного депротеинизированного алло имплантата-фиксатора в клинике возможно на разных отделах позвоночника, как в качестве самостоятельного имплантата, так и в сочетании с другими материалами и конструкциями.

Осложнений, связанных с использованием изучаемого остеопластического материала, не отмечено.

выводы. Использование депротеинизированного комбинированного ал лоимплантата-фиксатора при вентральном спондилодезе приводит к формированию вентрального костного блока в сроки, сопоставимые с другими имплантатами и ма териалами. Данный костно-пластический материал может быть предложен хирургам в качестве материала для выполнения вентрального спондилодеза на разных отделах позвоночника, как в качестве самостоятельного имплантата так и при использовании с другими конструкциями.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка вЛиЯние ФетаЛЬнЫХ орГанопрепаратов на оСтеоГеннЫе потенЦии коСтноЙ ткани (ЭкСпериментаЛЬное иССЛеДование) кононович н.а., петровская н.в., Горбач е.н., ковинька м.а.

ФГУ «Российский научный центр «Восстановительной травматологии и ортопедии»

им. академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган Delayed osteogenesis (pat. RF 2301457) and distraction osteogenesis was simulated in comminuted tibial fracture of adult mongrels. Injected fetal extract at the site of interest was shown to facilitate more active osteogenesis with physiological conditions provided, that resulted in considerably reduced period of formation of mechanically substantial bone.

Появление на рынке медицинских технологий новых методов клеточной и тканевой терапии говорит о перспективности проведения исследований в плане поиска эффективных способов стимуляции остеогенеза.

Цель исследования. Изучение особенностей остеогенеза в условиях стимуля ции экстрактом фетальной костной ткани.

материалы и методы. Провели 3 серии экспериментов, состоящие из опыт ной и контрольной группы, на взрослых беспородных собаках. На костях голени мо делировали оскольчатые переломы, замедленный остеогенез (Патент РФ № 2301457) и дистракционный остеогенез после поперечной остеотомии в условиях чрескостно го остеосинтеза. В опытных группах на раннем этапе фиксации, с целью стимуляции регенерации, в области излома параоссально (при удлинении – в конце дистракции в соединительнотканную прослойку) вводили экстракт фетальной костной ткани, полу ченный по оригинальной методике (С.Н. Лунева, М.А. Ковинька 2005). Использовали рентгенологический, гистологический и статистический методы исследования.

результаты. В контрольной группе при оскольчатом повреждении и замедлен ном остеогенезе на рентгенограммах признаки репаративной регенерации появлялись к 14-ым суткам фиксации. Через 30 суток – межфрагментарная щель заметно увеличива лась. Гистологически у собак с оскольчатыми переломами в интермедиарной и эндос тальной областях регенерата преобладал гиалиновый хрящ с участками волокнистой соединительной ткани, в периостальной – среднепетлистая губчатая кость с признаками резорбции, прерывающейся островками волокнистой соединительной ткани. При замед ленном остеогенезе со стороны периоста наблюдали врастание слабо васкуляризованной волокнистой соединительной ткани в интермедиарное пространство. По линии опила костных фрагментов отмечались участки остеокластической резорбции. Корковая плас тинка отломков в обеих контрольных сериях была порозной. Сращение перелома в этих случаях формировалось к 49±1,7 суткам и 75±8,2 суткам фиксации соответственно за счет костно-волокнисто-соединительнотканно-хрящевой мозоли. В опытных группах этих серий через 7 суток после стимуляции была хорошо выражена периостальная реакция.

Рентгенологические и гистологические признаки остеокластической резорбции на этапе фиксации отсутствовали. Костное сращение с небольшими участками гиалинового хряща формировалось к 30 – 35-ым суткам фиксации при оскольчатых переломах и к 35-45-ым суткам – при замедленном остеогенезе. При удлинении голени во всех случаях к концу  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка дистракции регенерат приобретал зональное строение. Костные отделы имели продольно исчерченную структуру, а их вершины – мелкозубчатый контур. Величина зоны роста, об разованной незрелой соединительной тканью, колебалась от 3,5 мм до 10,0 мм. В опытной группе этой серии через 7 суток фиксации, следовательно, и – стимуляции, активность остеогенеза возрастала, что характеризовалось значимым приростом костных отделов регенерата. «Зона роста» рентгенологически была представлена отдельными участками просветления. Гистологически ее пересекали многочисленные новообразованные костно остеоидные трабекулы. Формирование механически состоятельного костного регенерата происходило в среднем к 25 суткам фиксации. В контрольной группе этой серии созрева ние регенерата продолжалось в течение 45-60-ти суток фиксации.

Таким образом, проведенное исследование показало, что экстракт белков, вы деленных из фетальной костной ткани, обладает четко выраженной остеоиндуктивной активностью и способствует активизации остеогенеза на фоне созданных физиологичес ких условий.

HLA-типирование образЦов пуповинноЙ крови при СозДании реГиСтра Доноров в Санкт-петербурГе котелевская е.а., Смирнова С.а., новицкий а.в., Смолянинов а.б., иволгин Д.а.

ООО «Покровский банк стволовых клеток», Санкт-Петербург Umbilical Cord Blood (UCB) is a rich source of hematopoietic stem cells (HSC) used for transplantation. Matching of stem cells donor to a recipient is determined by comparing their tissue types, also known as their Human Leucocytes Antigen (HLA) types. HLA Lab at Stem Cell Bank Pokrovski, St. Petersburg, has matched more than 63 units of CB, using SSP (sequence-specific priming) method. The results of low resolution HLA-typing could be applied to primary selection of donors when it needs transplant of HSC. Also it significantly simplifies the high resolution typing operation. Advantages of the own HLA-identified cord blood register in Russia are accessibility and decreasing of cost of samples. But the major excellence is raise of chance of HLA-matching in the same population.

Пуповинная кровь является одним из важнейших источников гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и в определённых случаях её применяют в качестве альтерна тивы трансплантации костного мозга. Трансплантации клеток ПК производятся у боль ных с самыми различными заболеваниями опухолевой и неопухолевой природы: при лейкозах и миелодиспластическом синдроме, при апластической анемии, а также при некоторых врожденных заболеваниях (синдроме Барра, талассемиях и др.). Технология трансплантации хорошо отработана, однако на сегодняшний день главной задачей яв ляется поиск донора, чьи клетки будут совместимы с организмом пациента. Известно, что при трансплантации ГСК необходимо совпадение донора и реципиента по системе HLA (Human Leucocyte Antigen). При аллогенных трансплантациях пуповинной крови наилучший результат достигается при несоответствии образца реципиенту не более чем по 2 аллелям антигенов HLA, либо при полной HLA-совместимости.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Для осуществления неродственных трансплантаций необходимо наличие большого количества типированных образцов пуповинной крови, чтобы была возмож ность подбора идентичного донора. Для этого требуется создание больших хранилищ, в которых будут находиться различные по HLA-антигенам образцы ПК.

В настоящее время ООО «Покровский банк стволовых клеток» создаёт пер вый в России регистр доноров пуповинной крови, который поможет решить проблему дефицита образцов для трансплантации.

В ходе работы было проведено HLA-типирование 63 образцов пуповинной кро ви методом SSP (sequence-specific priming). ДНК выделяли из 0,7 мл цельной крови. Для выделения использовали набор Protrans DNA Box 500 (Protrans, Германия). Детекцию локусов HLA-A, HLA-B и HLA-DRB1 проводили с использованием циклерплатной сис темы Protrans HLA-A*,-B*,-DRB1* (Protrans, Германия).

В процессе исследования были выявлены следующие наиболее часто встреча ющиеся генотипы: HLA-A*02 – 33%, *24 – 15%, *01 – 12%;

HLA-B*07 – 13%, *35 – 10%, *13 – 9%, HLA-DRB1*07 – 20%, *15 – 19, *13 – 14%.

Результаты HLA-типирования образцов регистра доноров пуповинной кро ви низкого разрешения могут быть использованы при первичном подборе донора, когда возникает необходимость в трансплантации ГСК. При совпадении донора и реципиента по 4 из 6 и более HLA-антигенам, определенным по низкому разреше нию, проводится секвенирование образцов по локусу DRB1. Главным преимущес твом наличия собственного регистра доноров ПК в России помимо доступности и уменьшения стоимости материала для трансплантации является то, что вероятность совпадения HLA-генотипа среди одной популяции гораздо выше, чем при поиске в мировом регистре.

применение новоГо комбинированноГо кЛетоЧно-тканевоГо транСпЛантата при пЛаСтике ДеФектов СуСтавноГо ГиаЛиновоГо ХрЯЩа у кроЛиков котельников Г.п., волова Л.т., Долгушкин Д.а., тертерян м.а.

Самарский Государственный Медицинский Университет, г. Самара In experiment on animals (26 rabbits of breed the «Сhinchilla») new combined allo gen cellular-tissue transplant witch consists of 2 types of cellular culture from stroma of costal or articulate hyaline cartilage have been used for replacement injured knee joint.

The results of macro and microscopic research revealed this transplant provides full restitution of interoperation osteoarticular defects with new hyaline cartilage tissue formation.

Цель исследования. Создание комбинированного клеточно-тканевого транс плантата на основе аллогенной деминерализованного губчатого вещества кости и культуры клеток суставного и реберного хряща для выполнения хондропластики в экс перименте у кроликов.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка материалы и методы. Для получения клеточно-тканевого трансплантата использовали трехмерный резорбируемый наноструктурированный бионоситель – ал логенную деминерализованное губчатое вещество кости, полученную по технологии «Лиопласт» и культуры клеток реберного и суставного хряща. Из гиалиновой хрящевой ткани обоих источников были получены два вида клеток: хондробласты и фиброблас топодобные клетки. После совместного культивирования клеток и бионосителя, полу ченный комбинированный трансплантат оценивали с помощью общеморфологических методов исследования и растровой электронной микроскопии.

Эксперименты выполнены на 26 кроликах породы «Шиншилла». Всем жи вотным интраоперационно создавали модель костно-хрящевых дефектов в области мыщелков бедренной кости на обеих задних конечностях. У 10 животных дефекты не замещали. 16 кроликам проводили хондропластику, которые были разделены на четыре группы в зависимости от вида клеточного компонента трансплантата. Пересаживали аутогенные клетки суставного или реберного хряща и аллогенные клетки из тех же источников.

Образцы тканей коленного сустава животных, исследовали с помощью ком плекса морфологических методов в течение 6 месяцев с момента операции. Контролем служили коленные суставы трех интактных животных.

результаты. Макроскопическое исследование коленных суставов животных без хондропластики в течение всего динамического наблюдения показало деформа цию суставной поверхности мыщелков бедра. Сформированный регенерат области дефекта был серым и тусклым. После пластики дефектов клеточно-тканевыми транс плантатами во всех четырех опытных группах зона операции не отличалась от окру жающей суставной поверхности и гиалинового суставного хряща здоровых животных.

Ткань регенерата была блестящей, бело-голубого цвета, без визуальных признаков дегенерации.

При микроскопических исследованиях в группе животных без хондропласти ки в зоне дефекта выявлялась волокнистая хрящевая ткань. При замещении дефектов комбинированными трансплантатами через 2 недели эксперимента определялась тра бекулярная структура бионосителя, заполненная пролиферирующими фибробластопо добными клетками. Через 3 месяца дефекты заполнялись новообразованной гиалиновой хрящевой тканью, структура которой сохранялась до конца эксперимента во всех четы рех опытных группах.

ЭФФектЫ кЛетоЧноЙ терапии и криовозДеЙСтвиЙ в уСЛовиЯХ моДеЛированиЯ проГреССируЮЩеГо СтарениЯ мозГа кудокоцева о.в., Ломакин и.и.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина A combined application of general extreme aerocryoexposure (–120оС) and cord blood stem cells promotes to decrease of manifestation of the pathological processes of pro gressive brain aging.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Адекватными моделями прогрессирующего старения мозга (ПСМ) является алюминиевая нейротоксическая модель ПСМ и модель хронической этаноловой инток сикации. Исследования проведены на 6-7 месячных беспородных белых крысах самцах.

Хлорид алюминия (2,0 мкМ в 0,1 мл физ. раствора) вводили стереотаксически в пере дний рог бокового желудочка мозга. Стремление к приему алкоголя вырабатывали пу тем насильственного подкрепления естественной мотивации питья.

В обеих группах отмечались морфологические изменения в синапсах с частич ным разрушением межнейрональных связей, что проявлялось в изменениях ЭЭГ актив ности, усилении процессов централизации управления периферических процессов на фоне истощающихся функциональных резервов вследствие развития патологического старения мозга, возрастании значения способности периферических систем к адекват ной саморегуляции. Сочетанное применение общего экстремального аэрокриовоздейс твия (–120оС) и стволовых клеток кордовой крови способствует снижению проявлений патологических процессов при ПСМ.

аЛЛотранСпЛантаЦиЯ СуХоЖиЛЬноЙ ткани, СтериЛизованноЙ ГазообразноЙ окиСЬЮ ЭтиЛен кузнецов и.а., Савельев в.и., калинин а.в., Солодов и.а., рыков Ю.а.

ФГУ РоссНИИТО им. Р.Р. Вредена Росздравсоцразвития, Санкт-Петербург Experience in the institute on the harvesting and experimental-clinical use of tendon allografts. Sterilized with ethylene oxide gas. Experimental work was done on 51 purebred white rats. The clinical part of the work includes an analysis of treatment of 385 patients with pathology of the ligaments of the knee joint. Results of treatment provided good postoperative outcomes, and allowed to recommend this plastic material used widely in clinical practice.

Представлен опыт института по заготовке и экспериментально-клиничес-кому применению сухожильных аллотрансплантатов, стерилизованных газообразной окисью этилена по методике В.И.Савельева. Экспериментальная часть работы выполнена на беспородной белой крысе в четырех сериях опытов. Всем животным имплантировались аллогенные сухожилия, стерилизованные окисью этилена (опыт) и заготовленные в ус ловиях асептики (контроль). Клиническая часть работы включает анализ лечения больных с патологией связок коленного сустава, у которых осуществлялась аллотендо пластика стерилизованными трансплантатами. Выполнена оценка ближайших (от 4 лет) и отдаленных (до 11 лет) результатов лечения этих пациентов с использованием артрос копического, рентгенологического и статистического методов.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 12 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.