авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 12 |

«IV Всероссийский симпозиум с международным участием ‡ ‚ ‡‚ ‡‡„ Сборник тезисов симпозиума 21-22 апреля 2010 Санкт-Петербург ...»

-- [ Страница 4 ] --

В результате проведенных исследований были сделаны следующие выводы:

– Реакция тканей реципиента на сухожильные аллотрансплантаты одина кова как при их стерилизации газообразной окисью этилена, так и при асептической заготовке и характеризуется замещением их в течение 2-8 недель соединительной тканью;

– Использование аллосухожилий, стерилизованных газообразной окисью эти лена, для пластики связок коленного сустава хорошо переносится больными: лишь у  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка из 385 пациентов была отмечена клиническая картина непереносимости примененного аллосухожильного материала, сопровождавшаяся асептическим синовитом;

– Пластика связок коленного сустава аллосухожильными трансплантатами, сте рилизованными газообразной окисью этилена, обеспечила хорошие функциональные ре зультаты в 69,8% случаев (группы А и В по шкале IKDC), средний балл по Lysholm-Gillquist (1982) составил 88,3, что соответствует современным клиническим требованиям;

– При артроскопическом исследовании на сроках от 4 до 8 лет после пластики передней крестообразной связки аллосухожильными трансплантатами, стерилизован ными газообразной окисью этилена, установлено, что они внешне и функционально по хожи на замещенную связку;

– Использование сухожильных аллотрансплантатов, стерилизованных газо образной окисью этилена, для аллотендопластики, обеспечивает хорошие послеопе рационные результаты и безопасно для больных, что позволяет рекомендовать данный пластический материал для широкого использования в клинической практике.

вЛиЯние ФетаЛЬнЫХ ФибробЛаСтов на ФаГоЦитоз при уДЛинении ГоЛени в уСЛовиЯХ ЧреСкоСтноГо оСтеоСинтеза кузнецова е.и., еманов а.а.

ФГУ «Российский научный центр «Восстановительной травматологии и ортопедии»

им. академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган It has been established that infusion of the fibroblast cell culture from human em bryonal lung has a stimulating effect on osteogenesis of the limb being lengthened. At the early stages of distraction (day 7 and day 14) fibroblast infusion stimulates blood neutrophil func tional activity, being manifested in phagocyte number increase.

В настоящее время ведется активное изучение перспектив применения стволо вых клеток во многих отраслях медицины, в том числе и в ортопедии и травматологии, что обусловлено их способностью положительного влияния на процесс заживления и регенерации костной ткани.

Целью работы является изучение влияния фетальных фибробластов на фаго цитарное звено иммунной системы в процессе остеосинтеза в эксперименте.

Обследовано 15 взрослых беспородных собак, которым накладывали аппарат Илизарова и выполняли щадящую остеотомию голени. На различных этапах дистракции (7, 14 и 28-е сутки) животным в «зону роста» регенерата вводили культивированные фе тальные фибробласты легкого эмбриона человека (НКЦ «Биотерапия» г. Новосибирск) в растворе питательной среды, содержащей 3 млн. клеток, в контроле в те же сроки вводи ли плацебо – раствор Хенкса. Исследование фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови включало подсчет числа нейтрофилов, вступив ших в реакцию фагоцитоза – фагоцитарный показатель (ФП), среднего количества мик робных клеток (убитая микробная тест – культура Staphylococcus epidermidis штамм 9198 НИИЭМ), поглощенных одним фагоцитом – фагоцитарное число (ФЧ).

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Средние дооперационные значения у первых трех групп, которым применяли культуру клеток, составили от 14 до 14,8 у.е., в контроле – от 16 до 16,5 у.е. На 7-е сутки после оперативного вмешательства во всех группах наблюдалось уменьшение фагоци тарной активности. В контроле снижение показателей продолжалось до 14 суток с пос тепенным их повышением до исходных значений. У животных первой и второй групп, которым вводили культуру клеток в область регенерата на 7-е и 14-е сутки дистракции, соответственно, через одну неделю отмечалось умеренное увеличение ФЧ. В среднем показатель повысился у I-й группы с 11,7 до 15,5, у II-й группы от 12,5 до15,6 микробных единиц в одной клетке. В контрольной группе – от 10 до 12 и от 12 до 13 у.е, соответс твенно. В группе собак, которым фибробласты вводили на 28-е сутки дистракции, зна чение данного показателя не менялось.

ФП на 7-14-е сутки дистракции незначительно снижался и в последующем возвращался к исходным значениям. Различий в опытной и контрольной группах не наблюдалось.

В результате проведенных исследований установлено, что введение культуры фетальных фибробластов легкого эмбриона человека на ранних этапах дистракции (7 14-е сутки) стимулировало функциональную активность нейтрофилов крови, что выра жалось в увеличении поглотительной способности иммунных клеток.

ЭкСпериментаЛЬное обоСнование иСпоЛЬзованиЯ аЛЛоГенноГо ДеминераЛизованноГо коСтноГо импЛантата (Дки) в компЛекСном ЛеЧении ХрониЧеСкоГо оСтеомиеЛита Ладонин С.в., волова Л.т., белозерцева е.а.

Институт экспериментальной медицины и биотехнологий (ИЭМБ) Самарского государственного Медицинского Университета (СамГМУ), г. Самара In experiments on rabbits we’ve esteemed the influence of allogenic demineralized bone implant (DBI) on compact bone tissue regeneration by new model of chronic osteomy elitis. We revealed the stimulation of restorative processes by allogenic DBI in the reparative region different tissular components – osteal, chondral and connecting with active participa tion of microcirculation race and quick rearrangement of reticulofibrous bone in laminar bone tissue with compact formation.

Цель. Экспериментальная оценка влияния аллогенного деминерализованного костного имплантата (ДКИ) на регенераторные процессы компактной костной ткани, на новой модели хронического остеомиелита.

материалы и методы. У кроликов породы «Шиншилла» массой от 2 до 3 кг проведены эксперименты по моделированию хронического остеомиелита боль шеберцовой кости. Трапециевидной фрезой диаметром 0,2 см делали 3-4 отверстия с шагом 0,2 см между ними, соединяли продольными распилами. В дефект вводили взвесь микробных тел Staphylococcus aureus 109 в 1 мл физ. раствора. Через 14 суток животным проводили лечение, включавшее некрсеквестректомию с формированием  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка корытообразной костной полости. Всех опытных кроликов разделили на 2 группы – с аутопластикой костного дефекта мышцей на ножке и с аллопластикой ДКИ из диа физарных фрагментов трубчатых костей взрослых кроликов, изготовленных по тех нологии «Лиопласт». В последней группе помимо этого проводили ультразвуковую кавитацию полости в 30% растворе линкомицина и заполняли ДКИ, насыщенным этим же антибиотиком в ультразвуковой камере. Каждую группу разделили по срокам выведения из опыта на 14, 30, 90 и 180 сутки после некрсеквестрэктомии. Контролем служили 5 здоровых кроликов. Для гистологического исследования брали материал из зоны повреждённого диафиза, фиксировали в 12% растворе формалина и фиксаторе Шабадаш, декальцинировали в трилоне Б, изготавливали парафиновые срезы толщи ной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизон.

результаты. У животных после моделирования остеомиелита на 9- сутки обнаруживался гнойный свищ. На 14 сутки на рентгенограммах отмечает ся деструкция костной ткани (разрежение плотности, периостальная реакция). На микропрепаратах костная ткань некротизируется с формированием секвестров, инфильтрирована сегментоядерными лейкоцитами. Внутренняя стенка формиру ющейся секвестральной полости образована рыхлой соединительной тканью, на ружная – балками ретикулофиброзной костной ткани и сохраненными участками компактной кости. Надкостница отечна, отслоена, пропитана лейкоцитами, сосуды сужены. На 14 сутки после секвестрэктомии в группе с пластикой ДКИ на рент генограммах в зоне вмешательства отмечаются первые признаки регенерации, гис тологически начинается рассасывание ДКИ. Наряду с остатками воспалительных признаков уже развивается обширная регенераторная реакция со стороны эндоста и периоста с формированием сплошной сети костных балок. Отмечается активная остеобластическая реакция развивающейся костной ткани. Очень рано (14-30 сутки) начинается перестройка провизорной кости в пластинчатую с активным участием остеобластов и остеокластов. Хорошо развита сеть сосудов микроциркуляторного русла. Особенностью регенераторных процессов с пластикой ДКИ является нали чие хрящевых клеток как промежуточного этапа регенерации – формируется поли морфный регенерат. К 90-м суткам формируются остеоны, что на рентгенограммах проявляется полным замещением дефекта новообразованной костной тканью. На сутки на всем протяжении кости прослеживается пластинчатая костная структура остеонного типа, в диафизе полностью сформирован костномозговой канал. В то же время в группе с пластикой мышцей на ножке отмечается не полное восстановление объема кости с ее деформацией.

выводы. Аллогенный ДКИ стимулирует восстановительные процессы в раз личных тканевых компонентах регенерата – костном, хрящевом и соединительном с активным участием микроциркуляторного русла и быстрой перестройкой ретикулофиб розной кости в пластинчатую костную ткань компактного строения.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка транСпЛантаЦиЯ аЛЛоГеннЫХ кЛеток ФетаЛЬноЙ пеЧени крЫСам С пеЧеноЧноЙ неДоСтатоЧноСтЬЮ в уСЛовиЯХ инГибированиЯ проЛиФераЦии ГепатоЦитов Лебединский а.С., Грицай Д.в., оченашко о.в., кришталь а.в., Сукач а.н., петренко а.Ю.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина The aim of research was to investigate allogenic fetal liver cell (FLC) transplanta tion in animals with liver failure model that was induced by administration of 2-acetylamino fluorene (hepatocyte proliferation inhibitor) and subsequent partial hepatectomy. This model provides perfect conditions for manifestation of FLC potential under state when normal liver recovery is blocked.

It was shown the positive effect of FLC transplantation that has two phases: within the 1st week after transplantation and long term effects - after the 3d week.

Целью исследования явилось изучение эффектов трансплантации алло генных клеток фетальной печени (КФП) животным с моделью поражения печени, индуцированного введением ингибитора пролиферации гепатоцитов 2-ацетила минофлуорена (ААФ) и последующей частичной гепатэктомией (ЧГЭ). Эта модель должна создать идеальные условия для раскрытия потенциала КФП в условиях, ког да восстановление печени реципиента за счет пролиферации собственных гепатоци тов заблокировано.

материалы и методы. Модель формировалась на крысах-самцах путем инт рагастрального введения ААФ (30 мг ААФ/кг массы тела) на протяжении 5 суток, после чего проводилась ЧГЭ. Было сформировано 4 группы животных: 1) одновозрастной ин такт;

2) контроль: животные с моделью ААФ/ЧГЭ, которым в селезенку вводили среду замораживания;

3) экспериментальная группа: животные с моделью ААФ/ЧГЭ, которым трансплантировали в селезенку по 10 млн КФП. Введение клеточной суспензии или сре ды консервирования проводилось одновременно с проведением ЧГЭ, объем вводимой суспензии составлял 0,3 мл. Срок наблюдения за животными составил 21 сутки. В этот период в сыворотке крови измеряли: содержание альбумина и общего билирубина, а также активность маркерных ферментов повреждения печени: аланин- (АЛТ) и аспарта таминотрансфераз (АСТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ).

Смертность животных в экспериментальной группе на 21 день после транс плантации составила 40% против 52% в контрольной группе. Уровень альбумина резко снижался после проведения ЧГЭ в обеих группах с минимумом на 7 сутки, когда он составлял 14,59±0,9 г/л в контрольной группе (против 43,98±1,1 г/л в интакте) и 16,57±0, г/л в экспериментальной. Далее показатель медленно повышался;

достоверные отличия между контрольной и экспериментальной группами наблюдались на 21 сутки, когда уровень данного показателя составлял 21,73±2,9 и 32,16±0,8 г/л, соответственно. Схожая динамика наблюдалась в содержании общего билирубина. Достоверные отличия между контрольной и экспериментальной группами наблюдались на пике повышения парамет ра на 7 сутки (58,04±6,1 и 35,16±5,0 мкмоль/л, соответственно, против 2,51±0,3 мкмоль/л  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка в интакте), а также на 21 сутки (3,49±0,1 и 1,55±0,4 мкмоль/л). Активность ЛДГ повыша лась в обеих группах с моделью ААФ/ЧГЭ только на 3 сутки, отмечая наиболее острую фазу поражения печени. Пик повышения активности АСТ также приходился на 3 сут ки после ЧГЭ и трансплантации, однако показатель оставался повышенным до конца периода наблюдения. Достоверные отличия между контрольной и экспериментальной группами наблюдались на 7 сутки (253,10±16,1 и 211,90±9,6 Ед/л, соответственно, против 120,10±2,9 Ед/л в интакте), а также на 21 сутки (224,90±7,3 и 179,60±10,2 Ед/л). Схожая динамика наблюдалась и в активности АЛТ, однако достоверных отличий между эк спериментальной и контрольной группами обнаружено не было на протяжении всего периода наблюдения.

Проведенные исследования позволили выявить позитивное действие транс плантации КФП, которое носило двухфазный характер: в пределах первой недели после трансплантации и в более отдаленные сроки.

Работа выполнена при поддержке гранта Украинского Научно-Технического Центра (проект № 4419).

применение пуповинноЙ крови при ЭнДоГенноЙ ДепреССии у крЫС Ломако в.в., Шило а.в., Ломако С.в., бабийчук Г.а.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина The «open field» test data showed that cryopreserved cord blood contribute to re ducing of the pathological manifestation and arterial hypertension in rats with experimental endogenous depression.

У белых крыс самцов (180-200 г) вызывали развитие патологического сим птомокомплекса («выученная беспомощность»), являющегося моделью эндогенной депрессии. Криоконсервированные препараты пуповинной крови (ПК) от 17-19-днев ных эмбрионов крысы получали по стандартной методике, вводили в/б по 0,3 мл (кл.

3,5Ч107/мл). Тестирование крыс в открытом поле проводили ежедневно (7 дней) по 2 мин, учитывая горизонтальную, вертикальную двигательную активность (ГДА, ВДА), груминг, состояние покоя;

движения на месте, количество дефекаций и ури наций и др.

У депрессивных крыс наблюдали напряженную неподвижность (замирание), отказ от пищи и воды, артериальную гипертензию (221,6±9,8, контроль 100,8±6,6 мм рт.

ст.). После введения ПК крысы начинали принимать пищу и воду, появлялся груминг, поза становилась менее напряженной, снижалось АД – 154,0±4,1 мм рт. ст., проявля лись ГДА, ВДА, период покоя – на уровне контроля. ПК способствует снижению АД и восстановлению структуры поведения крыс с эндогенной депрессией, вероятно, пу тем активации неспецифических защитных реакций организма содержащимися в ней адаптогенами.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка вЛиЯние каЛЬЦиЙФоСФатнЫХ СоеДинениЙ и некоЛЛаГеновЫХ коСтнЫХ беЛков на реГенераЦиЮ в коСтнЫХ ДеФектаХ (ЭкСпериментаЛЬно-морФоЛоГиЧеСкое иССЛеДование) Лунева С.н., талашова и.а., осипова е.в., накоскин а.н., еманов а.а.

ФГУ «Российский научный центр «Восстановительной травматологии и ортопедии»

им. академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган The study shown immunostimulatory influence of calcium-phosphate compounding driven out of bone tissue of agricultural animals in composition with the low-molecular non collagen bone proteins, antitropic to exchanger, to reparative regeneration of bone tissue in foraminous metaphyseal defects.

Цель исследования. Изучить влияние композиционного имплантацион ного материала (КИМ) на репаративную регенерацию кости в дырчатых дефектах метафиза.

материал и методы исследования. Эксперимент проведен на 10 взрослых беспородных собаках. В стерильных условиях под общим наркозом в метафизах боль шеберцовых костей, путем просверливания, создавали несквозные конусообразные дефекты (d=5 мм), которые заполняли кальцийфосфатным соединением, выделенным из костной ткани сельскохозяйственных животных в композиции с низкомолекулярны ми неколлагеновыми костными белками, не имеющими сродства к ионообменникам.

Животных выводили из эксперимента через 21 (n=5) и 42 (n=4+1 – контроль) суток после операции. Экспериментальные исследования проводили, руководствуясь требованиями, изложенными в «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, использу емых для экспериментов» (1986). После фиксации, декальцинации и стандартной проводки материала изготавливали целлоидиновые срезы, окрашивали их гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону, трихромным методом по Масону. Морфометрический анализ выполняли с помощью программного обеспечения «ВидеоТесТ 4,0». Для ста тистической обработки результатов использовали программы «Microsoft Excel – 97» и «AtteStat» (И.П. Гайдышев 2004).

результаты. Через 21 сутки после операции в корковой пластинке и губча том веществе метафиза определялся дефект округлой формы с четкой границей. Со стороны кости от края дефекта к его центру формировались костные структуры в виде мелкопетлистой трабекулярной сети. Центральная часть дефекта была заполнена во локнистой соединительной тканью с многочисленными полнокровными капилляра ми синусоидного типа. Фрагменты КИМ в виде гранул различного размера и формы располагались, в основном, в центре дефекта. Доля КИМ в площади дефекта корко вой пластинки составляла 5,6±1,6%, в губчатом веществе – 9,7±5,5%. Диаметр гранул КИМ колебался от 0,45 до 2,13 мм. Через 42 суток после операции в губчатом вещес тве метафиза отсутствовала четкая граница дефекта. В корковой пластинке метафиза продолжалась перестройка губчатой костной ткани регенерата в компактную, четко определялась граница между новообразованной костной тканью в дефекте и окружа  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка ющей костью. У двух животных в области дефекта сохранялись единичные гранулы КИМ, их доля в площади дефекта значимо снижалась, как в корковой пластинке, так и в губчатом веществе метафиза. У животного, которому дефект не заполняли КИМ, через 42 суток после операции по краю дефекта определялся узкий прерывистый слой компактной костной ткани. Полость дефекта была заполнена слабо васкуляризирован ной соединительной тканью.

выводы. 1. Минеральная составляющая КИМ, приближенная по содержанию кальция и фосфора и их соотношению к главному неорганическому компоненту кости – гидроксиапатиту, проявляла свойства остеокондукции. 2. Стимулирующие свойства биокомпозиционного материала определяли низкомолекулярные неколлагеновые кост ные белки. 3. Разработанный композиционный материал может быть использован для усиления активности остеогенеза и сокращения сроков возмещения дырчатых костных дефектов.

ЭкСпериментаЛЬно-теоретиЧеСкое обоСнование применениЯ пориСтоГо титана С аЛмазнЫм покрЫтием ДЛЯ замеЩениЯ ДеФектов коСтноЙ ткани макарова Э.б., 2рубштейн а.п., 1близнец Д.Г., 1кудрявцева и.п.

ФГУ Уральский НИИ травматологии и ортопедии им В.Д.Чаклина Росздрава», Институт физики металлов УрО РАН, г. Екатеринбург The main goal of this investigation is the creation and reasons for application of porous titanium implants coated by diamond-like carbon (DLC) films and saturated by auto genic stromal cells. The in vitro study involved the examinations of bone marrow cells adhe sion, proliferation, differentiation and the special feature of the karyocytes metabolism under their cultivation on titanium samples. The difference between the number of adhered cells to polished Ti and Ti+DLC was insignificantly. Roughen of Ti surface leaded to significantly in crease of adhered cells amount. In case of Ti+DLC test it was found the activation of NADPH oxidase of karyocytes and increase of the area, occupied with the culture of fibroblast-like cells. Experiments in vivo were performed using rabbits. Studies of the tensile strength of bone blocks showed that this value in the implant from porous titanium modified by DLC exceeds analogous value in the implant from porous titanium to 17% and 24% through 1 and 4 months after operation respectively.

Проблема замещения утраченной в результате травмы или патологического процесса костной ткани остается актуальной. Пористые материалы не только замещают утраченные структуры, но и интегрируются с окружающей костью.

Цель данного исследования. Создание и обоснование применения композит ных имплантатов на основе пористого титана с алмазоподобным нанопокрытием, насы щенных аутогенными стромальными клетками.

материал и методы. Титановые образцы (ПТ) получены по оригиналь ной методике из пористых гранул методом компактирования. Система пор включа  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка ла микронные поры и макро каналы 200-400 мкм. Алмазоподобное нанопокрытие наносили методом импульсного дугового распыления графита в вакууме. На эта пе исследований in vitro изучали адгезию пролиферацию, дифференцировку клеток костного мозга человека, мыши, кролика и особенности метаболизма кариоцитов при культивировании их на титановых образцах. Были протестированы полирован ные образцы монокристаллического титана (Т), образцы, обработанные алмазной пастой с различной степенью шероховатости, образцы, покрытые алмазоподобной пленкой (DLC). Среднюю шероховатость поверхности образцов R a и размах высот R z определяли методом сканирующей туннельной микроскопии на приборе СММ 2000Т. Морфологию поверхности изучали на растровом микроскопе Philips 500.

Клонирование прилипающей фракции миелокариоцитов осуществляли в полной культуральной среде. Остеоиндукцию – добавлением -глицерофосфата Na, L-ас корбината-2 фосфата. Количество адгезировавших клеток подсчитывали в камере Горяева, их морфологию исследовали с помощью светового и растрового микро скопов. Метаболическую активность определяли по суммарной активности дыха тельных дегидрогеназ. На биохимическом анализаторе Express Plus в супернатанте культур определяли активность термолабильной щелочной фосфатазы (ЩФк) и ак тивность тартратрезистентной кислой фосфатазы (КФк). Концентрацию пропептида коллагена I типа (CICP) изучали методом ИФА (MetraTM ). Площадь, занятую культу рой фибробластоподобных клеток, оценивали с помощью аппаратно-программного комплекса видеоТест-морфология 6,0. Количество адгезировавших клеток на Т и ти тана с DLC отличалось незначительно, при увеличении шероховатости поверхности и на ПТ количество адгезировавших клеток значимо возрастало. На образцах с DLC происходила активация NADPH-оксидаз кариоцитов. Морфологически не выявлено дегенеративно-дистрофических изменений в прилипших клетках. К 18 суткам куль тиворования основная масса клеток имела фибробластоподобную морфологию, часть располагалась упорядоченно, образуя многослойные тяжистые структуры. Площадь, занятая культурой фибробластоподобных клеток на образцах с DLC превышала зна чение этого показателя на ПТ без покрытия (р0,1). На 27-32 сутки культивирования при использовании остеоиндукторов в культуральной среде в лунках со всеми типа ми образцов обнаружены маркеры остеобластов (ЩФк, CICP) и остеокластов (КФк).

Эксперименты in vivo выполнены на кроликах (n=26). Импланты из ПТ и из ПТ, пок рытые DLC, насыщенные прилипающей фракцией аутогенных кариоцитов, внедряли в мыщелки большеберцовой и бедренной костей. Сроки наблюдения: 1 и 4 месяцев.

Изучали структуру новообразованной костной ткани. Прочность костного блока ис следовали на испытательной машине FP100/1. Установлено – через месяц после внед рения имплантов происходит сквозное заполнение пор соединительной и костной тканью различной степени зрелости. Через 4 месяца происходит сквозное заполне ние пор всех имплантатов новообразованной костной тканью. Костное вещество в ПТ с DLC морфологически отлично от ПТ без покрытий. Протяженность сращения хорошо сформированными костными трабекулами с материнским ложем – больше.

В прилегающем ложе нет элементов соединительной ткани. Использование DLC (при исследовании на разрыв) через месяц после операции увеличивало прочность обра зующегося костного блока на 5-10%, через 4 месяца на 46%. В гистологических пре паратах регионарных лимфоузлов признаков реактивного лимфаденита нет.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка некоторЫе кЛетоЧнЫе реакЦии на ввеДение биоматериаЛов в паренХиму СеЛезенки мулдашев Э.р., Щербаков Д.а.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа There were described cell reactions to injection of the dispersed type «Alloplant»

biomaterial in parenchyma spleen.

Биоматериалы серии «Аллоплант» широко применяются в регенеративной хирургии, что обусловлено их низкими антигенными свойствами и способностью оп тимизировать регенерацию тканей, влиять на процессы клеточной миграции и адгезии.

Однако остаются малоизученными реакции иммунной системы на пересадку указанных биоматериалов. В то же время известно влияние иммунной системы на репаративные процессы (Бабаева А.Г. 1972-2002;

Черешнев В.А. с соавт. 2002-2009).

В настоящем исследовании оценивались изменения клеточного соста ва паренхимы селезенки в ответ на введение диспергированного биоматериала «Аллоплант». Исследования выполнялись на 68 крысах WAG/Rij. В первой группе использовался аллогенный материал, для второй – ксеногенный, для третей – мате риал полисорб. Последний рассматривается нами как инертный аналог биоматериала с соответствующим размером частиц (90-120 мкм). Четвертую группу составили ис следования клеточного состава нативной селезенки. Под эфирным наркозом произво дили разрез в левом подреберье длиной 1,5 см. Выделяли селезенку и инсулиновым шприцом вводили раствор биоматериала в паренхиму органа на глубину 1-2 мм по 0, мл 3-4 инъекции (расстояние между вколами иглы 0,5 см). Раствор дисперегирован ного биоматериала «Аллоплант» (ТУ 42-2-537-2006) или полисорба готовили из рас чета 10 гр сухого вещества на 1 мл изотонического раствора NaCl. Для максимальной стандартизации проводимых исследований животные 4 групп для проведения одного исследования содержались в одной клетке, что на наш взгляд позволяло исключить действие случайных факторов на состояние иммунной системы. Через 24 часа произ водили забор материала.

Иммунофенотипирование выполняли с применением FITC- и PE-меченных моноклональных антител фирмы Catlag против CD45и CD90 антигена крыс. Анализ экспрессии поверхностных антигенов проводили в проточном цитофлюориметре FACS Calibur (BD), учитывая, что зрелые лейкоциты имеют фенотип CD45+/CD90 -, гемато поэтические стволовые клетки экспрессируют оба антигена CD45 и CD90, а фенотип CD45-/CD90+ принадлежит негематопоэтическим стволовым клеткам (мезенхимальным предшественникам).

Проведенные исследования показали достоверное увеличение содержания CD45+/CD90+ в паренхиме селезенки через 24 часа после введения аллогенного био материала – 35±6,13 и ксеногенного биоматериала – 20±5,08. Полученные результаты подтверждают, что биоматериалы «Аллоплант» являются аттрактантами стволовых клеток.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка применение мембранноГо биоматериаЛа ДЛЯ заЩитЫ аЛЛотранСпЛантата от иммунноЙ реакЦии реЦипиента мулдашев Э.р., муслимов С.а., мусина Л.а., мусин у.к., волгарева е.а.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа With histological and immunohistochemical methods there was proved a possibil ity for the use of allogenic biomaterials to prevention of recipient immune reaction against allotransplant.

Цель исследования. Изучить возможность защиты клеток аллотранспланта та от иммунной реакции реципиента с помощью барьера из аллогенного мембранного биоматериала.

материалы и методы. Под кетаминовым наркозом 24 кроликам была произ ведена ортотопическая трансплантация аллогенного хорио-ретино-витреального комп лекса глаза в оболочке из мембранного биоматериала, полученного путем специальной обработки висцеральной фасции. В контрольной группе (12 кроликов) аналогичный комплекс пересаживали без биоматериала.

Для исследования глаза энуклеировали на 14, 30, 60, 90, 120, 180 и 270 сутки после операции. Гистологические срезы глазного яблока окрашивали гематоксилином эозином, а также по методам Ван Гизона, Маллори и Ниссля. Иммуногистохимическое исследование проводили с помощью непрямого иммунопероксидазного метода с ис пользованием моноклональных антител (Santa Cruz Biotechnology Inc.) к ядерному анти гену пролиферирующих клеток (PCNA) и трансформирующему фактору роста (TGF-1).

Также проводили электронномикроскопическое исследование.

результаты. В контрольной группе уже на 14 сутки после трансплантации у животных развивалась иммунная реакция, выражающаяся в макрофагальной, а затем лимфоцитарной инфильтрации пересаженного комплекса с последующим некрозом нейронов сетчатки. На 30 сутки обнаруживался тотальный фиброз пересаженного ком плекса с высокой экспрессией TGF-1. Отдельные клетки сохранившегося пигментного эпителия пересаженной сетчатки были замурованы между новообразованными колла геновыми волокнами. У животных опытной группы иммунная реакция не развивалась, ограничиваясь макрофагальной инфильтрацией мембранного биоматериала, окружаю щего пересаженный хорио-ретино-витреальный комплекс. Архитектоника нейронов сетчатки в пересаженном комплексе была неизмененной в течение 120 суток, а ультра структура нейронов и клеток пигментного эпителия сохранялась до 180 дней с момен та пересадки. Во все наблюдаемые сроки обнаруживалась низкая экспрессия TGF-1. В дальнейшем большинство нейронов сетчатки погибали, но через 270 дней выявлялись группы атипично расположенных нейронов, которые окрашивались по Нисслю и экс прессировали PCNA-антиген, т.е. обладали пролиферативной активностью. Оболочка из аллогенного биоматериала подвергалась постепенной деградации и замещалась вас куляризованной рыхлой соединительной тканью. В промежутках между биоматериалом и склерой реципиента развивалась сосудистая сеть.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка заключение. Применение мембранного биоматериала как барьера позволяет достичь длительного выживания клеток сетчатки при трансплантации хорио-ретино витреального комплекса глаза. По-видимому, иммунная реакция реципиента ограничи вается макрофагальной инфильтрацией, приводящей к деградации биоматериала и его резорбции, поэтому биоматериал можно рассматривать как протектор. Обнаруженные в конечные сроки эксперимента нейроны с атипичным расположением, возможно, появля ются в результате выживания и пролиферации нейральных стволовых клеток.

возмоЖноСти коррекЦии патоЛоГиЧеСкиХ изменениЙ Структур мЯГкоГо оСтова ЛокаЛЬноЙ транСпЛантаЦиеЙ ДиСперГированноЙ ФормЫ биоматериаЛов мулдашев Э.р., кульбаев н.Д., мухаметов а.р., нураева а.б., аслямов н.н., Шевченко н.а.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа There was proved an experimental and clinical possibility to correct skeleton mollis defects by the local transplantation of the dispersed type biomaterial.

Патология сухожилий, связок, фасций и фасциальных узлов, подкожного со единительнотканного комплекса составляет значительный удельный вес в общей струк туре травматических поражений. И не всегда они требуют открытого хирургического вмешательства.

Цель настоящей работы – оптимизировать процессы репаративной регене рации в структурах мягкого остова путем инъекционной трансплантации дисперги рованных форм биоматериалов (ДБМ) «Аллоплант» (ТУ42-2-537-2006.) В различных экспериментальных моделях на крысах породы Вистар проводилась инъекция ДБМ в подкожную жировую клетчатку области орбиты и параорбитальную зону, дефекты су хожилий и связок, передней брюшной стенки. Изучена динамика ангио- и коллагеноге неза, а также клеточные реакции в зоне трансплантации.

В опытных сериях с введением ДБМ уже в ранние сроки активировалась макрофагальная реакция с последующей мобилизацией фибробластического диф ферона. Поляризационно-оптический анализ выявил формирование органоспецифи ческих для изучаемых анатомических структур коллагеновых волокон и их пучков.

Трансплантация ДБМ также стимулировала локальный ангиогенез, что проявлялось достоверно более высокой плотностью капилляров в зоне регенерации во все сроки эксперимента.

Также показано, что диспергированные формы биоматериалов в зависимости от строения тканевого ложа при инъекции создают ограниченный домен или диффузно инфильтрируют рыхлую клетчатку. При этом фиксируется локальное повышение ткане вого напряжения. С учетом полученных данных разработаны инъекционные техноло гии трансплантации ДБМ для коррекции дефектов мягкого остова.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка морФоЛоГиЧеСкие оСновЫ применениЯ биоматериаЛов «аЛЛопЛант» ДЛЯ СтимуЛЯЦии реГенераЦии мЫШеЧноЙ ткани мусина Л.а., муслимов С.а., муслимова С.Ю., андриевских С.и., Сахаутдинова и.в.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа There was proved a possibility for the use of allogenic biomaterials in the clinic to stimulatе regeneration of smooth muscular tissue as well as to develop new correction methods of postischemic fibrosis of myocardium.

Цель исследования. Изучение влияния биоматериалов «Аллоплант» на про цессы регенерации мышечной ткани.

материалы и методы. Для изучения возможности стимуляции регенерации гладкой мышечной ткани объемно-волокнистый биоматериал имплантировали в дефект стенки маточного рога (39 кроликов). Для стимуляции регенерации сердечной мышцы кроликам моделировали острый инфаркт миокарда путем перевязки левой коронарной артерии, и через 5 суток интрамиокардиально вводили суспензию аллогенного диспер гированного биоматериала в физиологическом растворе. Животных выводили из опыта на 7, 14, 30, 60, 120 и 180 сутки после операции. Были проведены электронно-микроско пические, гистологические и иммуногистохимические исследования.

результаты. После имплантации в дефект стенки маточного рога объемно-во локнистый биоматериал лизировался и резорбировался макрофагами. Отмечался рост и дифференциация капилляров, врастающих в толщу биоматериала. Через 30 суток боль шая часть коллагеновых волокон биоматериала замещалась регенератом, состоящим из васкуляризованной рыхлой соединительной ткани и широких тяжей стромальных клеток и гладких миоцитов. Иммуногистохимически определялась высокая пролифе ративная активность названных клеток и низкий уровень содержания в тканях цитоки на TGF-1, известного как индуктор фиброза. На 180 сутки на уровне восстановленного мышечного слоя в зоне имплантации биоматериала выявлялась лишь некоторая атипия общей структуры стенки рога матки. Не было четкого разделения на циркулярный и продольный мышечные слои: новообразованные тяжи миоцитов располагались в косом направлении и разделялись прослойками соединительной ткани. У животных контроль ной группы в тканях стенки матки отмечалась высокая экспрессия TGF-1, а дефект за полнялся грубой рубцовой тканью.

После введения диспергированного аллогенного биоматериала в ишемизи рованную сердечную мышцу кроликов через 180 суток на этом месте определялся регенерат, представляющий собой васкуляризированную рыхлую соединительную ткань с прослойками мышечных волокон. Несомненно, что такой регенерат в миокарде в функциональном отношении предпочтительнее, чем бессосудистая плотная фиброз ная ткань, которая уже через месяц выявлялась на месте погибших кардиомиоцитов у кроликов контрольной группы. При изучении динамики формирования регенерата после имплантации в миокард аллогенного биоматериала в начальные сроки опре  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка делялась выраженная макрофагально-мезенхимальная клеточная реакция, приводя щая к появлению большого количества новообразованных сосудов и специфических тканевых элементов в зоне повреждения миокарда. С третьей недели после операции на границе регенерата и окружающих мышечных волокон определялись цепочки ма лодифференцированных клеток, окрашивающихся пикрофуксином в желтый цвет.

Ультраструктура клеток была схожа с таковой миобластов миокардиальных плас тинок в эмбриогенезе. Окруженные новообразованными коллагеновыми волокнами регенерата миобластоподобные клетки были инкорпорированы между собой и объ единены в группы по типу симпласта, что свидетельствовало об их функциональной детерминации.

заключение. Аллогенный биоматериал стимулирует регенерацию гладкой мышечной ткани, что приводит к развитию его структурных элементов. Введение аллогенного биоматериала в ишемически поврежденную ткань миокарда оказывает положительное влияние на структуру регенерата, замещающего погибшие кардиоми оциты. Выявленные миобластоподобные клетки в процессе замещения биоматериала могут указывать на дифференциацию мультипотентных мезенхимальных стромаль ных клеток в кардиомиоциты и свидетельствовать о признаках регенерации сердеч ной мышцы. Повышение пролиферативной активности эндотелиоцитов сосудов и значительное количество мышечных волокон среди новообразованных коллагено вых волокон служат косвенным доказательством формирования функционального регенерата на месте введенных в ишемизированный миокард частиц биоматериала.

Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о возможности приме нения в клинике аллогенных биоматериалов для стимуляции регенерации гладкой мышечной ткани и разработки новых методов коррекции постинфарктного фиброза ткани миокарда.

биоЛоГиЧеСкие СвоЙСтва пориСтЫХ биоматериаЛов СоеДинитеЛЬнотканноГо проиСХоЖДениЯ и возмоЖноСти иХ применениЯ в ХирурГии муслимов С.а., Хасанов р.а., Шангина о.р., мусина Л.а., корнилаева Г.Г., Хасанова Ю.С.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа Biological properties of the spongy biomaterials derived from connective tissue.

Современная восстановительная хирургия нуждается в различных видах трансплантационных материалов, однако с каждым годом все острее ощущается дефи цит донорских тканей. Одним из возможных путей расширения спектра аллогенных биоматериалов является структурная модификация донорских тканей. Нами разрабо тана технология физико-химической обработки, позволяющая за счет модификации структуры исходных тканей получать пористые биоматериалы, а также увеличивать сроки их биодеградации после имплантации.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Цель исследования. Изучить биологические свойства аллогенных порис тых биоматериалов и наметить перспективы их применения в восстановительной хирургии.

материалы и методы. Для реализации указанной цели были проведены две серии экспериментов. В первой серии 48 крысам породы Вистар производилась имп лантация 2-х видов биоматериалов, отличающихся биодеградируемостью, в дефект под кожной клетчатки. Во второй серии на 36 серых кроликах с моделированной глаукомой производилась реконструкция дренажной зоны угла передней камеры глаза с помощью пористого биоматериала. Для изучения динамики морфологических изменений в опери рованной зоне животных выводили из опыта через 14, 30, 60, 90, 180 и 360 суток после операции передозировкой барбитуратов. Гистологические срезы окрашивали гематок силином-эозином, по Маллори и Ван Гизону. Также использовали методы трансмисси онной и сканирующей электронной микроскопии. Во второй мери использовали также тонографические методы исследования.

результаты. При подкожной имплантации биоматериалы в ранние сроки после операции пропитывались тканевой жидкостью, в периферических участках инфильтрировались макрофагами и в меньшей степени – полиморфноядерными лей коцитами. В последующем коллагеновые волокна биоматериала подвергались пос тепенному ферментативному лизису и синхронно замещались новообразованными.

Установлена зависимость структуры формирующегося регенерата от сроков биодегра дации биоматериалов. В первой группе животных полное замещение биоматериала наблюдалось через 90 суток с момента имплантации, что приводило к формированию регенерата с относительно рыхлым коллагеноволокнистым каркасом. Во второй груп пе регенерат формировался в более поздние сроки, через 120 суток, и имел плотную фиброархитектонику.

Во второй серии экспериментов в реконструированной дренажной зоне угла передней камеры глаза пористый биоматериал в ранние сроки пропитывался камерной влагой, что приводило к нормализации внутриглазного давления. В дальнейшем мор фологические изменения в разных участках биоматериала существенно отличались.

Коллагеновые волокна той части биоматериала, которая была обращена к передней ка мере глазного яблока, не претерпевали существенных изменений, т.е. не подвергались биодеградации. Ячейки биоматериала постепенно покрывались регенерирующим эндо телием, и, таким образом, формировалась полноценная дренажная зона. В задней части биоматериала, происходила деградация коллагеновых волокон и замещение новообра зованной тканью с хорошо развитым венозным руслом. Указанные морфологические изменения приводили к нормализации офтальмотонуса и восстановлению структуры зрительного нерва.

заключение. Применение пористых биоматериалов создает перспективу раз работки новых высокоэффективных восстановительных операций в различных облас тях хирургии.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка СубкЛетоЧное раСпреДеЛение ЛипоСом в миокарДе, как показатеЛЬ перСпективЫ иХ применениЯ ДЛЯ кЛетоЧноЙ и ГенноЙ терапии иШемиЧеСкиХ повреЖДениЙ СерДЦа мухамадияров р.а., веремеев а.в., Журавлева и.Ю.

НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний СО РАМН, г. Кемерово The main aim is study of the inclusion and subcellular distribution of liposomes in a myocardium. The optimal results of liposomes distribution with a ratio phosphatidylcholin/cho lesterol – 2/1 were observed. The maximal inclusion of a label in a myocardium was observed using the liposomes in concentration of 10 mg/ml. This concentration of liposomes allows to avoid any negative influence on myocardial functioning after ischemia and reperfusion.

Цель. Изучить динамику включения и субклеточного распределения липосом в миокарде.

материалы и методы. Липосомы получали методом экструзии (экструдер Lipex Biomembranes, Inc.). Диаметр пор фильтра 50 нм. По соотношению фосфатидилхо лина (ФХ) и холестерина (Х) используемые липосомы разделили на два типа: «жесткие»

липосомы с молярным соотношением 7:5 соответственно и «мягкие» липосомы с моляр ным соотношением 2:1. Исследовали включение липосом двух концентраций – 10 мг/мл и 25 мг/мл. В качестве радиоактивной метки использовали фосфатидилхолин, меченый тритием (Н3+) с удельной активностью 1 мСu/мл («Биосан», Россия). Эксперимент был выполнен на 109 крысах-самцах линии Wistar с массой тела 270±20 г. Сердца перфу зировали по методу Langendorf. На 15-й мин моделировали ишемию путем пережатия всех перфузат-несущих магистралей. Липосомы вводили в корень аорты в течение мин со скоростью 0,2 мл/мин. Сердца гомогенизировали и разделяли последовательным центрифугированием на субклеточные фракции – фракцию грубых клеточных мемб ран, митохондриальную и микросомальную фракции. Активность аликвот измеряли на жидкостно-сцинтилляционном счетчике RackBeta-II (LKB, Швеция).

результаты. При нормотермической ишемии включение и распределение липосом зависело от состава и концентрации липидов. В группе, где использовали ли посомы с соотношением липидов ФХ:Х=2:1 в концентрации 25 мг/мл, включение их в миокард было достоверно ниже в 2,5-3 раза, чем в остальных (р0,01). Максимальное же включение было отмечено при использовании липосом в концентрации 10 мг/мл с соот ношением ФХ:Х=2:1. Распределение 3Н-ФХ по субклеточным фракциям в данной группе также представляется оптимальным. Так, в митохондриальной фракции было обнару жено 61±6% включенной метки, микросомальной – 4±1%, и лишь 27±3% – во фракциях грубых мембран.

При введении липосом в концентрации 25 мг/мл, а также 10мг/мл при соотно шении липидов ФХ:Х=2:1 около 60% метки включается в митохондрии, а суммарная ра диоактивность митохондриальной и микросомальной фракций во всех четырех сериях составляет 55-65%.

Следует отметить, что высокая концентрация липидов (25 мг/мл) вызыва ет угнетение сократительной функции миокарда в реперфузионном периоде. Если  вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка при использовании липосом в концентрации 10 мг/мл в 90% случаев регистрировали восстановление сокращений сердец на 1-4 минуте реперфузии, то в случае использо вания концентрации 25 мг/мл лишь у 30% сердец восстанавливалась сократительная активность.

заключение. Таким образом, оптимальные показатели субклеточного распре деления выявлены у липосом с молярным соотношением фосфатидилхолин: холестерин – 2:1. Максимальное включение метки в миокард наблюдается при использовании липо сом в концентрации 10 мг/мл перфузата. Кроме того, липосомы в данной концентрации не оказывают негативного влияния на функциональные показатели сердца после ише мии и реперфузии.

применение тензометриЧеСкиХ метоДов при ЭнДоСкопиЧеСкоЙ транСпЛантаЦии биоматериаЛов мухаметова з.р., зюзина Д.а., арефьев к.а.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа This article reviews the issues of tela tension while in normal condition and after injecting biomaterial.

Целью работы явилось анатомическое и биомеханическое обоснование инъ екционной эндоскопической трансплантации диспергированного биоматериала (ДБМ) «Стимулятор регенерации» с размерами фрагментов до 120 мкм, и изготовленного по требованиям ТУ42-2-537-2006. Изучена фиброструктура и тканевое напряжение различ ных отделов желудка человека в норме. Для регистрации тканевого напряжения исполь зовался метод игольной тензометрии (Макаров А.К. 1987). При этом регистрирующая часть прибора включала датчик давления, электронный блок и персональный компью тер. Тканевое напряжение изучено также в острых опытах на кроликах в норме и при введении ДБМ в подслизистый слой желудка. Одновременно с использованием гистото пографических методов изучены пути распространения фрагментов ДБМ.

полученные результаты и их обсуждение. Тканевое напряжение в подсли зистом слое желудка отражает плотность и характер фиброструктуры. Так, в участках с относительно компактным расположением пучков коллагеновых волокон определя ются более высокие значения тканевого напряжения: кардиальный отдел – 6,3±0,6 мм рт. ст., пилорический отдел 6,4±0,1 мм рт. ст. В области тела желудка при рыхлом под слизистом слое определяются более низкие значения тканевого напряжения – 4,2±0, мм рт. ст. Клинические исследования показали, что в участках компактного располо жения коллагеновых волокон и высокого тканевого напряжения введение ДБМ приво дит к формированию ограниченного домена. Для участков с рыхлым расположением пучков коллагеновых волокон и относительно низких значений тканевого напряжения характерен диффузно-инфильтративный тип распространения ДБМ по межпучковым пространствам и паравазальной клетчатке.

 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Эксперименты показали, что введение ДБМ в подслизистый слой приводит к достоверному локальному повышению тканевого напряжения, что, по-видимому, обес печивает компрессионный гемостаз при кровотечениях из терминальных сосудов.

Полученные данные использованы при разработке методов инъекционной эн доскопической трансплантации диспергированных форм биоматериалов «Аллоплант».

Технология используется при лечении различных форм ургентной и хронической пато логии желудка.

вЛиЯние Фактора времени на биоЛоГиЧеСкие СвоЙСтва отмЫтЫХ криоконСервированнЫХ кЛеток пуповинноЙ крови мхеидзе Д.м., 2потапов и.в., 2Люндуп а.в.

РОНЦ им. Н.Н. Блохина, 2ОАО «Институт стволовых клеток человека», Москва We have studied the biological activity of cryopreserved umbilical cord blood cells after thawing and storage for 16 hours at +4єC. We have found that the storage of the material is possible, but during this time functional activity of cryopreserved umbilical cord blood cells (viability, number of viable CD34+cells and CFU-GM) decreased by about 30%.

Во всем мире пуповинная кровь (ПК) признана источником гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), эффективность трансплантации которых показана во многих исследованиях. Поэтому растет число людей, которые хранят ПК своих детей в качес тве их биологической страховки. Банк клеток пуповинной крови «Гемабанк» (Москва) в своей работе по персональному хранению ПК адаптировал методику, первоначально разработанную в РОНЦ им. Н.Н.Блохина для криоконсервирования ГСК костного мозга.

Методика трансплантации ГСК, как правило, не предполагает отмывку биоматериала от криопротектора. Если дополнительные манипуляции с концентратом ГСК после раз морозки (отмывка от криопротектора и хранение в течение нескольких часов) не ведут к потерям функциональной активности ГСК, то, возможно, уместно перед транспланта цией освобождать концентрат ГСК от криопротектора, особенно если предстоит транс портировка в размороженном состоянии.

Цель проведенного исследования заключалась в подтверждении эффектив ности применяемой в Гемабанке методики криоконсервации ГСК ПК в отношении фор мальных признаков: жизнеспособности мононуклеарных клеток, колониеобразующей активности и содержания CD34+ клеток после разморозки, а также в проверке возмож ности сохранения этих свойств после отмывки от криопротектора и хранении в течение 16 часов.


Образцы донорской пуповинной крови (20 образцов) были получены из кри охранилища «Гемабанка», забор, транспортировка, процессинг и хранение которых про изводилось согласно принятому протоколу. Образцы размораживали на водяной бане при +37єС до исчезновения кристаллов льда, затем центрифугировали на 2000 об/мин в течение 7 мин при +18єС, отсасывали бесклеточный надосадок, осадок с клетками ре суспендировали в декстране («Полиглюкин»). Хранение ресуспендированных клеток вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка осуществляли при температуре +4єС в течение 16 часов. Подсчет жизнеспособных моно нуклеарных клеток ПК проводился в камере Горяева (краситель анексин). Определение функциональной активности ГСК осуществляли по способности формирования коло ний в полужидкой культуральной среде. Подсчет жизнеспособных CD34+ клеток прово дился методом проточной цитофлуориметрии.

Количество ядросодержащих клеток ПК после размораживания и отмывки уменьшался на 7±0.6%, а после хранения в течение 16 часов при +4єС – на 8.5±0.7% от носительно исходного количества клеток перед криоконсервацией. Процент жизнеспо собных клеток непосредственно после разморозки составил 88±8%, спустя 16 часов при +4єС – 75±9%. Количество CD34+ клеток после разморозки составило соответственно 0,53Ч106±0,23 с жизнеспоосбностью 88±7% и 0,31Ч106±0,2 и 96±6%. Образцы сразу после отмывания содержали 64,5±11,2 КОЕ-ГМ, а после хранения в течение 16 часов при +4єС – 34,5 КОЕ-ГМ.

вывод. На основании формальных признаков (жизнеспособность, количество CD34+ клеток и КОЕ-ГМ) методика Гемабанка сохранения и разморозки ГСК ПК эффек тивна. Транспортировка или хранение размороженного материала возможна в течение 16 часов при +4єС, однако за этот промежуток времени происходит снижение формаль ных показателей функционального состояния криоконсервированных клеток ПК при мерно на треть.

ГубЧатЫЙ биоматериаЛ как СубСтрат ДЛЯ реГенераЦии СтруктурнЫХ ЭЛементов неФрона нигматуллин р.т., Шангина о.р., Хасанов р.а., кутушев р.з., волгарева е.а.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа There was shown an experimental possibility to use the biomaterial for the extensive tissue defect replacement as well as to use sponge type biomaterial for the kidney wound defect closure.

Целью работы явилось создание биоматериалов для закрытия раневых дефек тов почки. Проведены две серии опытов на крысах породы Вистар. Дефект почки после ее клиновидной резекции закрывался биоматериалом для замещения объемных дефек тов тканей (контрольная серия) и аллогенным губчатым биоматериалом (опытная се рия). Свободная поверхность трансплантата закрывалась мембранным биоматериалом.

Все трансплантаты готовились в лаборатории биоматериалов Центра по требованиям ТУ42-2-537-2006.

В контрольной серии трансплантат в ранние сроки выполнял гемостатическую роль. В последующем он поэтапно замещался рыхлой волокнистой соединительной тка нью. Динамика этого процесса в целом соответствует закономерностям заместительной регенерации при пересадке аллотрансплантатов, ранее описанной нами (Нигматуллин Р.Т. 2002).

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка В опытной серии губчатый биоматериал также проявлял оптимальные адге зивные и гемостатические свойства. В репаративную фазу в его ячейках наблюдалось формирование канальцевого аппарата почек. Эксперименты указывают на возможность репаративной регенерации структурных элементов нефрона при моделирующей роли губчатого биоматериала. Представленная модель применяется в лабораториях Центра для изучения теоретических аспектов эпителиально-соединительнотканных взаимоот ношений. По результатам экспериментов указанные виды биоматериалов успешно ис пользуются в урологической практике для закрытия раневых дефектов почек.

ДЛина теЛомер, как критериЙ оЦенки каЧеСтва образЦа пуповинноЙ крови ДЛЯ транСпЛантаЦии новикова п.Ю., 1,2Смирнова н.в., 1Смолянинов а.б., 3новицкий а.в.

ООО «Покровский банк стволовых клеток», 2Институт цитологии РАН, Военно-Медицинская Академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург Стандартные методы характеристики качества образца пуповинной крови (ПК) для трансплантации, включают количество и жизнеспособность гематопоэтичес ких стволовых клеток, их активность КОЕ, соответствие требуемой дозе, рассчитанной на килограмм веса пациента, отсутствие контаминации. Дополнительная характерис тика пролиферативной активности стволовых клеток, оцениваемая по длине теломер, может стать информативным показателем качества трансплантата.

Теломеры – это концевые участки хромосом, состоящие из повторяющейся последовательности ДНК и комплекса белков, которые формируют и стабилизируют за щитную петлевую структуру, позволяющую системе репарации отличать концы хромо сом от двойных разрывов ДНК. В связи с проблемой недорепликации концов хромосом, теломерные области ДНК укорачиваются при каждом делении клетки. Данный молеку лярный механизм является ограничителем пролиферативного клеточного потенциала. В клетках, способных делиться практически неограниченно – эмбриональные стволовые клетки, клетки герментативной линии, а так же большинство раковых клеток – активно экспрессируется теломераза, которая способна достраивать теломеры или/и активиру ется альтернативный путь удлинения теломер. В процессе дифференцировки стволовых клеток активность теломеразы утрачивается, поэтому зрелые производные стволовых клеток делятся ограниченное число раз.

Показано, что эффективность приживления напрямую коррелирует с длиной теломер в клетках трансплантата. Это является дополнительным доказательством того, что трансплантация пуповинной крови оказывается эффективнее, чем трансплантация мобилизованных стволовых клеток периферической крови, так как теломеры в клетках ПК длиннее. Клетки пуповинной крови проходят меньше циклов деления и имеют реп ликативное преимущество перед клетками периферической крови. Оценку динамики укорочения теломер также продуктивно проводить при культивировании мультипотен тных мезенхимальных стромальных клеток, полученных из костного мозга, жировой ткани и др. источников, для проведения последующей трансплантации. Кроме данных о пролиферативном потенциале, это позволит контролировать условия культивирования и риски онкогенности трансплантата.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Измерение теломер на проточном цитометре (flow-FISH) является наиболее удобной и воспроизводимой методикой в условиях большого потока исследуемых об разцов. В данной методике используются специальные зонды – пептидо-нуклеиновые кислоты, комплементарные повторяющейся теломерной последовательности, связанные с флуоресцентным красителем. Уровень флуоресценции клетки соответствует количес тву зондов связавшихся с теломерными областями ДНК и, следовательно, средней дли не теломер в клетке. При этом в каждом измерении используется внешний клеточный контроль – специальные клеточные линии с известной длиной теломер, относительно флуоресценции которых производится расчет абсолютной длины теломер в образце.

ДоЛГоСроЧнЫЙ ЭФФект транСпЛантаЦии криоконСервированнЫХ кЛеток ФетаЛЬноЙ пеЧени крЫСам С ЭкСпериментаЛЬнЫм Циррозом оченашко о.в., 2никитченко Ю.в., 1Лебединский а.С., розанов Л.Ф., 1петренко а.Ю.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, НИИ биологии ХНУ им. В.Н. Каразина, г. Харьков, Украина It was studied the therapeutic efficacy and safety of cryopreserved fetal liver cell (FLC) application during long term period after them transplantation to rats with CCl4-in duced cirrhosis.

FLC were isolated from 8-10 week old human fetuses and cryopreserved. Cirrhosis was induced by small dose injection of CCl4 during 4 months. FLC (10 mln) were intraspleni cally transplanted to cirrhotic rats. Control group received an equivalent volume of medium alone. The observation time after transplantation was 6 months.

It was established, that FLC transplantation stimulated recovery processes and had no any negative effect on rats with experimental cirrhosis at least 6 month after transplantation.

Ранее в нашей лаборатории было установлено, что клетки фетальной печени человека (КФП) положительно воздействуют на организм животных с CCl4-индуциро ванным циррозом. Трансплантация КФП снижала смертность крыс, приводила к появле нию первых признаков регенерации в патологически измененном органе и частичному восстановлению функциональной активности печени. Время наблюдения ограничива лось двумя неделями, что не позволило оценить обратимость выявленных эффектов, а также безопасность терапии фетальными клетками.

В представленной работе исследовали терапевтическую эффективность и бе зопасность применения суспензии клеток фетальной печени в течение длительного пе риода после их трансплантации животным с экспериментальным циррозом.

Клетки для трансплантации выделяли из плодов человека 8-10 недели геста ции в соответствии с требованиями биоэтики и криоконсервировали под защитой 10% го ДМСО. Цирроз печени формировали у крыс путем длительного введения малых доз ССl4. КФП (10 млн клеток) вводили в селезенку животных со сформированной моде лью. Контрольная группа получала эквивалентный объем среды криоконсервирования 10 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка (ложная трансплантация). Животных выводили из эксперимента декапитацией через и 6 месяцев после трансплантации. Состояние детоксикационной функции печени оце нивали по содержанию цитохрома Р-450, аминопирин-N-деметилазной и анилин-гид роксилазной активностям. Гистологическое исследование печени проводили на срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. В сыворотке крови определяли ряд биохими ческих показателей (содержание билирубина, альбумина и активность ЛДГ) через 1, 2, и 6 месяцев после трансплантации.


Результаты работы показали, что через 1 месяц после ложной трансплантации у животных контрольной группы сохранялись все признаки печеночной недостаточнос ти, характерные для цирроза. Выживаемость крыс составила 75%. Введение КФП при водило к увеличению выживаемости животных до 92%, значительному восстановлению уровня цитохрома Р-450 и анилингидроксилазной активности, а также к нормализации аминопирин-N-деметилазной активности. При гистологическом исследовании печени выявлено частичное восстановление структуры органа, а при изучении биохимического профиля сыворотки крови – значительное улучшение показателей. Однако полной нор мализации показателей в этот период не происходило. Полученные данные свидетельс твовали, что положительное действие КФП сохраняется как минимум до 1 месяца после трансплантации.

Дальнейшее наблюдение за животными показало, что через 6 месяцев после ложной трансплантации полной нормализации структуры печени не происходило, хотя биохимические показатели крови восстанавливались уже через 3 месяца. Трансплантация КФП усиливала восстановительные процессы в организме крыс, что проявлялось в уско ренном приросте массы тела и восстановлении уровня билирубина уже через 2 месяца.

Гистологический анализ печени, проведенный через 6 месяцев, не выявил негативного влияния введения КФП.

Результаты работы демонстрируют, что введение КФП приводит к ускоре нию восстановительных процессов и не оказывает негативного воздействия на орга низм крыс с экспериментальным циррозом, по крайне мере, в течение 6 месяцев после трансплантации.

Работа выполнена при поддержке гранта Украинского Научно-Технического Центра (проект № 4419).

иСпоЛЬзование SRY-Гена, как маркера миГраЦии транСпЛантированнЫХ кЛеток коСтноГо мозГа в ЭкСперименте повещенко а.Ф., Соловьева а.о., Шевченко а.в., коненков в.и.

НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, г. Новосибирск The scope of cellular technologies in treatment of many pathologies steadily ex tends. Actual and not up to the end investigated there are such questions as: 1. selection an optimum kind a cellular material for transplantation - a phenotype and the specialization of cells, cultivated or fresh isolated;

2. quantity (dose) of cells on one transplantation and on all course of treatment;

3. way and a method of cell transplantation;

4. The mechanism of action вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка of the transplanted cells;

5. ways migrations of the transplanted cells;

6.safety the procedure of transplantation, absence of complications after it.

The Research objective: to study migratory activity of a bone marrow cells in experiment.

Materials and methods. Investigated migratory activity in vivo, of a bone marrow cells of males of СВА mice at the age of 2-3 months at transplantations to females. As a migra tion marker the SRY-gene of bone marrow cells of males has been used. In different time points after intravenous transplantation (in 1 hour, 24 hours, 1 month, 3 months) the skin, lymph nodes, muscles, a liver, a spleen, heart, a brain recipients (females of СВА mice) have been investigated. DNA was isolated from bodies of recipient mice. Results of migration of bone marrow cells of mice-donors, were estimated on presence in recipient bodies of a marker: SRY - gene, with the polymerase chain reaction (PCR).

Results. By means of the PCR it is established that in an hour after transplantation the marker was defined in lymph nodes, a liver, a spleen, the heart, similar results have been received in samples of DNA of the bodies which fence was made in 24 hours. In samples of DNA of bodies in 1 and 3 months the marker besides the named bodies was defined in a brain.

Results have both theoretical, and applied value as expand representations about migration and plasticity of the transplanted stem cells.

Область применения клеточных технологий в лечении многих патологий не уклонно расширяется. Актуальными и не до конца исследованными остаются такие воп росы как:

1. определение оптимального вида трансплантируемого клеточного материала – фенотип и специализация клеток, культивированные или свежевыделенные, видовая принадлежность;

2. количество (доза) клеток на одно введение и на весь курс лечения;

3. путь и метод введения клеток;

4. механизм действия пересаженных клеток в эксперименте;

5. пути миграции трансплантированных клеток;

6. безопасность самой процедуры трансплантации, отсутствие побочных эф фектов после нее.

Цель исследования. Изучить миграционную активность клеток костного мозга в эксперименте.

материалы и методы. Исследовали миграционную активность in vivo клеток костного мозга самцов линии СВА в возрасте 2-3 месяцев при сингенной транспланта ции самкам. В качестве маркера миграции был использован SRY-ген клеток костного мозга самцов. В разные сроки после внутривенной трансплантации (через 1 час, 24 часа, 1 месяц, 3 месяца) были исследованы кожа, лимфатические узлы, мышцы, печень, се лезенка, сердце, головной мозг сингенных реципиентов (самок линии СВА). Из органов животных реципиентов выделялась ДНК. Результаты миграции стволовых клеток кос тного мозга мышей-доноров, оценивались по наличию в тканях и органах в организме реципиента маркера: SRY – гена Y-хромосомы, с помощью полимеразной цепной реак ции (ПЦР).

результаты. С помощью ПЦР-анализа установлено, что через час после транс плантации маркер определялся в лимфатических узлах, печени, селезенке, сердце, сход ные результаты были получены в образцах ДНК органов, забор которых производился 10 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка через 24 часа. В образцах ДНК органов через 1 и 3 месяца маркер помимо названных органов определялся в головном мозге.

Результаты имеют как теоретическое, так и прикладное значение, поскольку расширяют представления о миграции и пластичности трансплантированных клеток предшественников.

изуЧение оСтеоГенеза при иСпоЛЬзовании материаЛа «орГамакС» в СоЧетании С обоГаЩенноЙ тромбоЦитами аутопЛазмоЙ подорожная в.т., кирилова и.а., Фомичев н.Г.

ФГУ «Новосибирский НИИТО Росмедтехнологий», г. Новосибирск Orthotopic implantation of «Orgamax», a patented composite osteoplastic material, and platelet-rich plasma was performed to study induced osteogenic processes in experiment.

«Orgamax» is produced on a basis of demineralized bone flour, collagen admixture and wide range antibiotics. Combined use of «Orgamax» and platelet-rich plasma is ineffectual as it results in hyper regenerative reaction during bone tissue formation.

Цель исследования. Изучить процессы остеогенеза при имплантации запа тентованного композиционного костно-пластического материала (КПМ) «Оргамакс» и КПМ с обогащенной тромбоцитами плазмой.

материал и методы исследования. Экспериментальные пересадки компо зиционного костно-пластического материала (КПМ) ортотопически в костный дефект.

Экспериментальные животные (собаки) – 8 в 2-х сериях опытов. На каждом животном выполнено 2 операции. Всего выполнено 16 операции, с пластикой на 48 уровнях. В качестве модели для ортотопической имплантации выбрана модель В.И.Савельева.

Животных выводили из опыта через 1, 3 и 6 месяцев. 1 серия – изучался остеогенез при имплантации КПМ «Оргамакс»;

2 серия – изучался остеогенез при имплантации «Оргамакс» в сочетании с БоТП. КПМ «Оргамакс» запатентован, изготовлен на основе деминерализованной костной муки, коллагеновой добавки и антибиотиков широкого спектра действия.

результаты. При сравнении между собой по размерам регенератов ребер пос ле операций в двух сериях экспериментов в динамике выявили следующие закономер ности. При пластике «Оргамакс» регенерат в 1 месяц достоверно шире, чем в 3 месяца в 1,5 раза и 6 месяцев в 2 раза. При пластике «Оргамакс» с БоТП регенерат в 1 месяц достоверно шире, чем в 3 месяца в 2 раза и 6 месяцев в 2,5 раза.

Морфологически в срок наблюдения 1 месяц при пластике дефектов ребер КПМ «Оргамакс» в сочетании с БоТП наблюдали формирование остеоида, примитив ных костных балочек и разные фазы энхондрального остеогенеза, а без БоТП форми рование остеоида и примитивных костных балочек. Через 3 месяца во всех сериях наблюдали различные этапы энхондрального остеогенеза от формирования изоген ных форм клеток в виде монетных столбиков до формирования остеоида, а затем эн хондральной кости.

10 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка В срок наблюдения 6 месяцев во всех сериях наблюдали следующее: с КПМ «Оргамакс» – формирование органотипического регенерата, а при использовании «Оргамакс»+БоТП с нарушением архитектоники. Структура близка к кости пластин чатой структуры с линиями склеивания и без межбалочных промежутков. Механизм остеогенеза во всех сериях эксперимента аналогичен: периостальный со стороны над костницы и энхондральный в центре дефекта.

Для определения степени активности остеогенеза сопоставляли морфологические и рентгенологические данные, а так же данные статистической обработки. КПМ по степе ни активности распределились следующим образом – от максимальной при использовании «Оргамакс» к минимальной активности в случае использования «Оргамакс» с БоТП.

«Оргамакс» является остеоиндуктором, как источник костных морфогенети ческих белков. «Оргамакс» в сочетании с БоТП дает реакцию гиперрегенерации в ран ние сроки наблюдения с формированием обширных полей волокнистого и гиалинового хряща за счет БоТП и очагов остеогенеза (фокусов регенерации) за счет «Оргамакс». В отдаленные сроки это приводит к формированию костной ткани, по своему строению отличающейся от костной ткани ложа.

вывод. Сочетанное использование костно-пластических материалов на осно ве деминерализованной кости и БоТП не целесообразно, т.к. это приводит к гиперреге нераторной реакции при формировании костной ткани.

первЫЙ опЫт применениЯ ФемтоСекунДнЫХ ЛазернЫХ СиСтем при СквозноЙ и поСЛоЙноЙ транСпЛантаЦии роГовоЙ обоЛоЧки пожарицкий м.Д.

Центр офтальмологии Федерального медико-биологического агентства, КБ № 86 ФМБА Москва Purpose. To evaluate the efficacy of new femtolaser technology in corneal trans plant surgery.

Methods. Intralase FS AMO was used in 5 cases for lamellar keratoplasty, pen etrating keratoplasty and for the preparation of the donor tissue used in corneal transplants.

«Intralase Enabled Keratoplasty» software, artificial anterior chamber for donor tissue and software guided preparation of full thickness and lamellar patient cornea cuts.

Results. In all 5 cases the accuracy and reproducibility of Femtosecond laser in per forming lamellar and full thickness corneal sections were observed, with attention to thickness and diameter of the button.

Conclusion. Femtolaser system is capable of creating optimal incisional patterns for corneal transplants. Instead of the straight vertical cut performed in traditional full-thick ness keratoplasty, the FS laser is programmed to create a stepped-edged incision that may enhance the sealing and stability of the transplanted tissue and allow for faster healing.

актуальность. Основной проблемой для проведения сквозной и послойной ке ратопластики является подготовка поверхности и профиля ложа реципиента и наличие качественного донорского трансплантата роговицы. Традиционно препарирование рого 10 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка вицы реципиента и донорского трансплантата осуществлялось с помощью механического микрокератома или вручную. Однако применение механического воздействия сопровож далось известными осложнениями, связанными с неправильным сопоставлением транс плантата и ложа во время операции, что вызывало сложность адаптации и выраженный астигматизм в послеоперационном периоде. За последние годы в офтальмологическую практику были внедрены фемтосекундные лазерные системы, которые преимущественно применяются для создания лоскута роговицы при операции ЛАСИК, имплантации инт растромальных колец, а также послойной и сквозной пересадки роговицы.

Цель исследования. Оценить эффективность новой технологии создания до норского трансплантата и ложа реципиента на основе применения фемтосекундных ла зерных систем.

материалы и методы. В исследовании принимали участие 5 пациентов ( глаз). Создание донорского трансплантата и ложа реципиента производилось фемтосе кундным лазером «Intralase FS» (AMO, США, длина волны 1054 нм, частота воздействия – 60 кГц, размер рабочего пятна – 5 мкм) с использованием специального программного обеспечения «Intralase Enabled Keratoplasty». Техника операции состояла в использова нии искусственной передней камеры при создании донорского трансплантата. После помещения донорской ткани на искусственную переднюю камеру специальным размет чиком маркировался центр роговицы и производился срез фемтосекундным лазером.

При создании донорского трансплантата использовались параметры среза, соответству ющие роговичному ложу.

результаты. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что при со здании донорского трансплантата не было выявлено каких-либо осложнений. Особенно важно подчеркнуть, что сформированный лоскут легко отделялся от донорской рогови цы, при этом донорский трансплантат точно прилегал на роговичное ложе пациента с полным совмещением краев.

выводы. Техника создания донорского трансплантатаи и ложа рецепиента с использованием фемтосекундных лазерных систем является более точной, надежной, бе зопасной и технически упрощенной по сравнению с традиционной техникой на основе ме ханического микрокератома. В конечном счете, указанные преимущества обеспечивают меньшую травматичность роговицы, что в целом указывает на несомненную перспектив ность применения фемтосекундных лазеров для создания трансплантатов роговицы.

поЛуЧение оСтеопроГениторноГо транСпЛантата IN VITRO попандопуло а.Г., 2оксимец в.м., 1оберемко а.в., 2магомедов Ю.а.

Государственное учреждение «Институт неотложной и восстановительной хирургии им. В.К.Гусака АМН Украины», 2Научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Донецкого Национального Медицинского Университета им. М. Горького, г. Донецк, Украина Research purpose: to project three-dimensional osteoprogenitor transplant in vitro.

Materials and methods. As the scaffolds of different cellular lines used the samples of hydroxyapatite, glass ceramic, spongy and cortical demineralized bone matrix, biotmate 10 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка rial «Osteomatryks» («Konektbyofarm», Russia). The method of cell cultivation was used for an isolation and expansion of multipotential mesenchymal stromal cellss (MMSC) cultures and periosteum-derived cells (PDC). Before cell’s seeding on carriers MMSC were induced to differentiate on the developed and patented by us technology. The method of plasmatic mem branes labeling by intravital dyes Fluoreccent Green РКН67 and Red РКН26 («Sigma», the USA) was used for the improvement of the visual looking after the cells location on the scaf fold’s surfaces. Cytochemical method was used for detection of alkaline fosfatase activity with the use of of BCIP/NBT Liquid Substrate System («Sigma», the USA).

Results. Under specific culture conditions MMSC were inducted on an osteogenic lineage that was confirmed by the positive alkaline phosphatase staining. Histological prepara tion reminds bone tissue.

Conclusions. This technology allows getting a 3D-osteoprogenitive transplant ex vivo.

Цель исследования. Спроектировать in vitro трёхмерный остеопрогенитор ный трансплантат.

материалы и методы. В качестве носителей различных клеточных линий ис пользовали образцы гидроксиапатита, стеклокерамики, губчатого и кортикального деми нерализованного костного матрикса, биоматериала «Остеоматрикс» («Конектбиофарм», Россия). Метод клеточного культивирования применялся для изоляции и масштабирова ния культур мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) и проге ниторных клеток надкостницы (ПКН). Перед посевом клеток на носители осуществляли биоостеоиндукцию ММСК по разработанной и запатентованной нами технологии. Для улучшения визуального наблюдения за расположением клеток на поверхности скафол дов использовали метод мечения плазматических мембран витальными красителями РКН67 Green и РКН26 Red Fluoreccent («Sigma», США). Для детекции щелочной фос фатазы использовали цитохимический метод с использованием субстрата BCIP/NBT Liquid Substrate System («Sigma», США).

результаты. При специфических условиях культивирования ММСК индуци ровались по остеогенному пути, что было подтверждено положительной окраской на щелочную фосфатазу. Гистологически препарат напоминает костную ткань.

выводы. Данная технология позволяет получить 3D-остеопрогениторный трансплантат ex vivo.

вЛиЯние криоконСервированнЫХ кЛеток пуповинноЙ крови и метоДов криотерапии на морФоЛоГиЮ коЖи крЫС при ХрониЧеСком Гипотиреозе пурышева в.Ю., кудокоцева о.в., Ломакин и.и.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков, Украина The character of recovery of rat’s skin after thyroidectomy has a manifested ten dency to a complete regeneration at a combined application of cryotherapy methods and trans plantation of cord blood cells.

10 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка При хроническом гипотиреозе наблюдаются выраженные изменения в струк туре дермы, а эффективной терапии практически не существует.

Цель работы. Исследование коррекции изменений структуры дермы, разви вающихся в процессе гипотиреоза.

В работе использованы молодые крысы (4 мес.), подвергшиеся субтотальной тиреоидэктомии (ТЭ), последующей экстремальной аэрокриотерапии (ЭК) (–120оС) и трансплантации криоклеток пуповинной крови (ПК). Структура кожи при гистологи ческом методе исследования коррелировала с уровнем гормонов в крови.

При сочетанном применении ЭК и ПК после ТЭ, на фоне нормализации уровня гормонов Т3 и Т4, в коже крыс наблюдались новообразованный эпидермис, разрастание кровеносных сосудов и капилляров, фибробластоподобных клеток.

Моновоздействия ЭК и ПК не способствовали достижению стойкой нормализации уровня исследуемых гормонов, что в свою очередь отражалось на гистологической структуре кожи.

Таким образом, характер восстановления процессов в коже крыс после ТЭ имеет выраженную тенденцию к полной регенерации при условии сочетанного приме нения методов ЭК и трансплантации клеток ПК.

ЭкСпериментаЛЬное обоСнование кСенопЛаСтики коСти раззоков а.а., Хисомов к.Х., Самиев б.Ш.

Кафедра травматологии, ортопедии и ВПХ ТГМУ им. Абуали ибн Сино, г. Душанбе, Таджикистан On implantation of xenotransplantations which were prepared by original technol ogy from the bones of calf to metaphase of experimental rabbit month later after operation was marked primary consolidation and at the end of the year their integration with recipient bone.

Целью работы. Оценка эффективности ксенопластики в эксперименте.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 12 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.