авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 12 |

«IV Всероссийский симпозиум с международным участием ‡ ‚ ‡‚ ‡‡„ Сборник тезисов симпозиума 21-22 апреля 2010 Санкт-Петербург ...»

-- [ Страница 5 ] --

материал и методы. Работа основана на экспериментальном изучении имп лантации ксенотрансплантатов из ребра и длинные кости теленка, приготовленного на 0,5% растворе формальдегида с добавлением флавоноидов в метафиз бедренной кости у 10 кроликов. Животные выводились из эксперимента в сроки через месяц, 1,5 месяца, 3 месяца, 6 месяцев и к концу года. Оценка эффективности ксенопластики проводилась клиническими, рентгенологическими и морфологическими методами.

результаты и их обсуждение. В послеоперационном периоде общих и мес тных изменений не наблюдалось. При рентгенологическом исследовании первичная консолидация трансплантата с реципиентной ложей наступила к концу первого меся ца, перестройка ксенотрансплантатов наступила к концу первого месяца от начала имплантации. При морфологическом исследовании к концу года отмечается интег рация имплантированных ксенотрансплантантов с реципиентной костью, что дает основание рассматривать их в качестве эффективного пластического материала при замещении дефектов после резекции костей при ортопедических и онкологических патологиях.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка нормотермиЧеСкаЯ и ГипотермиЧеСкаЯ конСерваЦиЯ ДонорСкоЙ роГовиЦЫ С иСпоЛЬзованием ГомоЛоГиЧнЫХ кЛетоЧнЫХ пепДиДов ролик о.и., 1борзенок С.а., 2боровая т.Г., 2Диденко Л.в., 1комах Ю.а., мороз з.и., 1ковшун е.в., 1тонаева Х.Д., 1Шипунова а.в.

ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. академика С.Н. Федорова Росмедтехнологии», НИИ Эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, Москва Morphologic functional maintenance (preservation) of endothelial cells of penetrat ing transplants (grafts) of donor cornea was compared during storage in 2 modes: a norm-ther mal at +37oС and a hypothermal at +6oС cultivation using NeyDIL No.37 medicine containing regulatory peptides from corneal cells of fetal and juvenal animals.

Within 21 days of organocultivation (storage) the endothelial cell loss (ECL) was 6.1% in the tentative group, 9.7% in the control group. During 9 days of the hypothermal cultivation the ECL was 5.1% in the tentative group, 7.2% in the control group. It was concluded that the preference should be given to hypothermal cultivation in the Borzenok Moroz media using NeyDIL No.37 medicine, as a more cheaper and less labor-intensive method.

Защитное действие органопрепаратов, представляющих собой экстракты кле точных пептидов, в последнее время активно изучается многими исследовательскими школами, как на экспериментальных моделях, так и в клинических исследованиях. Это положение актуально и для офтальмотрансплантологии.

Цель. Анализ результатов морфо-функциональной сохранности эндотелиаль ных клеток сквозных трансплантатов донорских роговиц при среднесрочной консер вации в двух режимах – нормотермического при +37oС и гипотермического при +6oС культивирования с использованием препарата NeyDIL №37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108), содержащего регуляторные пептиды из клеток роговиц фетальных и ювенильных про мышленных животных.

материалы и методы. Две опытные группы состоящие из трупных донорских роговиц по 10 в каждой, две контрольные – из 20 от тех же доноров. В среды опытных групп перед консервацией или заменой вводился препарат NeyDIL Nr.37 до концентра ции 1 мкг/мл. Сроки органного культивирования составляли 8, 16, 21 сут;

гипотермичес кого – 3, 6, 9 сут. Плотность ЭК подсчитывалась рутинным способом и автоматически с помощью кератоанализатора. Проводились электронно-микроскопические исследова ния ультраструктурной сохранности ЭК.

результаты. За 21 сут органного культивирования потеря ЭК в опытной груп пе составила 6,1%, в контрольной – 9,7%. За 9 сут гипотермического культивирования потеря ЭК в опытной группе составила 5,1%, в контрольной – 7,2%. В те же сроки в образцах роговиц опытных групп отмечались схожие и незначительные изменения в ультраструктурной архитектонике ЭК;

в контрольных образцах при тех же сроках отме чались повышенная внутриклеточная гидратация и деструктуризация митохондриаль ных мембран, явления паренхиматозной дегенерации ЭК.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка обсуждение и выводы. Таким образом, препарат NeyDIL Nr.37 оказывал вы раженное защитное действие на плотность и архитектонику ЭК донорских роговиц в процессе их консервации в обоих режимах. В этой связи при выборе способа консерва ции донорских роговиц для среднесрочного хранения предпочтение следует отдавать гипотермическому культивированию в среде Борзенка-Мороз с использованием препа рата NeyDIL Nr.37, как более дешевому и менее трудоемкому.

аЛЛотранСпЛантаЦиЯ ДеминераЛизованноЙ коСтноЙ ткани в ЭкСперименте по ДаннЫм тканевоГо банка рниито им. р.р. вреДена Савельев в.и., булатов а.а., рыков Ю.а.

ФГУ РоссНИИТО им. Р. Р. Вредена Росмедтехнологий, Санкт-Петербург Submitted by thirty years of experience of the tissue bank RNIITO named after R.R.

Vredena on harvesting and testing of demineralized bone transplantates (DBT). We consider some theoretical aspects of the problem, increase the effectiveness of VCT in the experiment.

Представлен общий обзор деятельности тканевого банка РНИИТО им. Р.Р.

Вредена по заготовке и экспериментальному применению деминерализованных кост ных трансплантатов (ДКТ) за период с 1975 по 2006 гг..

В экспериментальной части исследований на уровне мировой новизны было доказано, что:

– Применение более высоких (1,2-3,6 НН), чем общепринято (0,6 Н) растворов хлорводородной кислоты не снижает остеоиндуктивных свойств костной ткани и поз воляет осуществлять не только поверхностную, но также глубокую и даже тотальную деминерализацию массивных костных трансплантатов;

Использование для изготовления ДКТ вместо хлорводородной бромводород ной кислоты является ее целесообразной альтернативой, обеспечивающей в эксперимен те более высокий процент индукции при эктопической и ортотопической пересадке;

– Предварительное (до деминерализации) консервирование костной ткани в организме донора или вне его с помощью низких температур не снижает ее остеоин дуктивных свойств. Это позволяет, во-первых, осуществлять деминерализацию кости планомерно и в большем количестве, что при массовой заготовке тканей имеет при нципиальное значение;

во-вторых, экономит время и трудовые затраты сотрудников тканевых банков в тех, довольно частых теперь, случаях, когда уже заготовленные для клиники ДКТ приходится списывать в связи с их непригодностью по результатам ана лизов крови и другим причинам;

– Однократное облучение костных и мягкотканных структур в открытой ране светом гелий-неонового лазера мощностью 1-2 мВт в течение 15 минут ока зывает статистически достоверное стимулирующее воздействие на репаративный остеогенез при трансплантации деминерализованной костной ткани. Последующее чрескожное 10 и 20-кратное световое воздействие на область вмешательства, по добным эффектом не обладает и по этой причине практического значения не имеет.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Другими словами лишь открытое лазерное облучение повреждаемых тканей (кост ной, мышечной и др.) создает наиболее благоприятные условия для их регенерации и заживления;

– Костные трансплантаты, деминерализованные в 1,2 Н растворе соляной кис лоты при комнатной температуре с использованием сульфосалициловой и сорбиновой кислот, также, как и ДКТ, деминерализация которых осуществлялась общепринятыми способами (в 0,6 Н соляной кислоты) при температуре +4оС обладают высокими остео индуктивными свойствами. Применение в процессе заготовки ДКТ двух дополнитель ных кислот позволят вести процесс деминерализации при комнатной температуре без использования холодильной техники и с сохранением в них высокой антимикробной активности;

– Деминерализованные трансплантаты, консервированные в слабых (0,25%) растворах формалина способны вызывать остеогенез при наличии очага инфекции, возникшем после её ортотопической пересадки. Новообразованная при этом на месте дефекта костная ткань не всегда приобретала органотипические черты, но все же полно стью или частично восполняла дефект. В опытах на кроликах с открытыми и инфици рованными переломами костей предплечья после первичной хирургической обработки раны и замещения дефекта ДКТ, происходит первичное заживление ран и восстановле ние цельности поврежденных костей. У контрольных животных (без ДКТ) костеобразо вание в области костного дефекта отсутствует;

– Весьма перспективной оказалась попытка выращивания на основе ДКТ ау тобластической костно-хрящевой ткани с её последующей пересадкой в дефект луче вой кости тому же животному. В результате у 11 из 15 кроликов основной серии после эктопической имплантации деминерализованной кости на широкую фасцию бедра возникли разные по величине, но вполне пригодные для пересадки костно-хрящевые ауторегенераты, определяемые на рентгенограммах. При их свободном перемещении в дефект лучевой кости того же кролика произошло восстановление её целостности спустя 3 месяца после операции. В контрольной серии лишь у 4 из 10 животных пос ле аутопластики монолитными трансплантатами их перестройка длилась более суток;

– Эктопическая пересадка деминерализованной костной ткани может служить наиболее объективной экспериментальной моделью при изучении клинической пригод ности тех или иных агентов, предлагаемых в качестве стерилизующих или консервиру ющих средств, а также вообще для оценки влияния различных эндогенных и экзогенных факторов на репаративный остеогенез;

– Костный мозг в ДКТ аллогенного, ксеногенного и даже аутогенного проис хождения не утрачивает своих видовых различий и при пересадке тормозит, а иногда и блокирует индукционный остеогенез.

В процессе перечисленных выше исследований были использованы следую щие животные: 48 собак;

433 кролика;

437 крыс. Сотрудниками тканевого банка инсти тута получено: 6 патентов РФ и 9 авторских свидетельств СССР на способ заготовки и экспериментального применения ДКТ.

11 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка СозДание и ЭкСпериментаЛЬно-кЛиниЧеСкое иССЛеДование биопоЛимернЫХ импЛантатов СФЕРО®ГеЛЬ и ЭЛАСТОпоб® ДЛЯ замеСтитеЛЬноЙ и реГенеративноЙ ХирурГии мЯГкиХ тканеЙ Севастьянов в.и., перова н.в., немец е.а.

ФГУ «Федеральный научный центр трансплантологии и искусственных органов им. академика В.И. Шумакова» Минздравсоцразвития, Институт медико-биологических исследований и технологий, Москва In the class of implants designated for the replacement of soft tissue damage, in cluding the use of cellular technology, are the heterogeneous collagen-containing hydrogel Sphero®GEL and ElastoPOB®, developed on the basis of bacterial copolymer of polyoxybu tyratoxyvalerate. We will discuss the set of the necessary biosafety and functional testing of biopolymeric implants Sphero®GEL and ElastoPOB® in vitro and in vivo, as well as give ex amples of animal models, developed in order to research the implants’ biostimulating proper ties and the possibility of their application in replacement surgery and cell therapy. The several examples of clinical applications for Sphero®GEL and ElastoPOB® will be presented.

Имплантаты из биологических полимерных материалов занимают особую нишу на рынке биодеградируемых имплантатов с двумя основными сегментами:

– биорезорбируемые имплантируемые изделия для ортопедии, стоматологии, сердечно-сосудистой хирургии, нейрохирургии и др.

– для заместительной и восстановительной (регенеративной) хирургии кос тных, хрящевых и мягких тканей. К данному классу имплантируемых материалов, предназначенных для заместительной и регенеративной медицины мягких относятся гетерогенный коллагенсодержащий гидрогель Сферо®ГЕЛЬ и изготовленный на ос нове бактериального сополимера поли (оксибутирата-со-оксивалерата) ЭластоПОБ® [1,2]. На их примере будет показан путь, который проходят имплантаты от стадии их разработки до клинического применения. Обсуждается необходимый комплекс экс периментальных исследований в условиях in vitro и in vivo для доказательства био логической безопасности и функциональных свойств биополимерных имплантатов Сферо®ГЕЛЬ и ЭластоПОБ®. Приводятся примеры экспериментальных моделей на животных, разрабатываемых для выявления биостимулирующих свойств импланта тов и возможности использования их в заместительной хирургии и клеточной терапии.

Анализируются результаты клинического применения биополимерных имплантатов Сферо®ГЕЛЬ и ЭластоПОБ®.

1. Севастьянов В.И. Биоматериалы, системы доставки лекарственных веществ и биоинженерия. Вестник трансплантологии и искусственных органов, 2009, Т. XI, № 3, С. 69-80.

2. Sevastianov V.I., Vasilets V.N., Agapov I.I. Biopolymer implants for high-technol ogy assistance in the field of replacement and regenerative medicine. Rare metals, 2009, V. 28, pp. 84-86.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка СтруктурнаЯ орГанизаЦиЯ СЛизиСтоЙ обоЛоЧки ЯзЫка поСЛе транСпЛантаЦии криоконСервированноЙ пЛаЦентЫ Селькина а.б., Шепитько в.и., ерошенко Г.а.

Высшее государственное учебное заведение Украины «Украинская Медицинская Стоматологическая Академия», г. Полтава, Украина The transplantation of cryopreserved placenta causes the changes in all structural components of mucous membrane of the back of tongue. The renewal of the morfofunctional state of mucous membrane of the back of tongue takes place to 7 days of supervision.

Особенный интерес фундаментальной и прикладной стоматологии в послед ние годы вызывают потенциальные возможности клеточной и тканевой трансплантации в лечении воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта, которые тра диционная фармакология побороть не в состоянии.

Целью работы было исследование гистологических изменений слизистой оболочки языка после трансплантации криоконсервированной плаценты.

Эксперимент выполнен на 35 половозрелых крысах-самцах линии «Вистар», массой 128-134 грамм. 10 животных составили контрольную группу, 25 крысам однора зово вводили криоконсервированную плаценту путем подкожной подсадки ее кусочков в область шеи. Животных выводили из эксперимента на 2, 7, 14, 21 и 30 сутки эксперимента путем передозировки кетаминового наркоза. После взятия материала кусочки тканей уп лотняли в ЕПОН-812 по общепринятой методике. Полутонкие срезы изготовляли на уль трамикротоме и окрашивали 0,1% толуидиновым синим, изучали с помощью светового микроскопа. Полученные данные оценивали по общепринятым статистическим методам.

После трансплантации криоконсервированной плаценты на вторые сутки эк сперимента нами выявлено резкое уменьшение высоты сосочков до 26,7±0,31 мкм (в контрольной группе 60,9±0,61 мкм, р0,05), морфологические признаки отека соедини тельной ткани. Возобновление высоты отмечалось до 14 суток наблюдения.

На вторые сутки средний диаметр артериол достоверно уменьшился до 14,5±0,25 мкм (в контрольной группе 15,2±0,32 мкм, р0,05). Возобновление значений диаметра выявлено на 7 сутки наблюдения. Значения среднего диаметра капилляров уменьшились на 2 сутки эксперимента относительно контрольных показателей с 5,0±0, мкм до 4,4±0,20 мкм (р0,05), на 7 сутки – увеличились до 7,1±0,35 мкм (р0,05), и досто верно от контроля не отличались до 14 суток после трансплантации криоконсервирован ной плаценты. Средний диаметр венул на 2 сутки наблюдения был больше показателей в контрольной группе животных (15,5±0,21 мкм и 17,1±0,24 мкм соответственно, (р0,05).

В просвете наблюдалось явление полнокровия, иногда – запустение. Возобновление среднего диаметра венул происходило до 14 суток эксперимента.

После трансплантации криоконсервированной плаценты на 2-ые сутки на блюдения количество макрофагов и плазмоцитов достоверно увеличилось. Количество лимфоцитов и тканевых базофилов на этот срок наблюдения увеличилось втрое. На 7-е сутки эксперимента количество лимфоцитов в поле зрения отвечало значениям в контрольной группе животных. Нормализация количества тканевых базофилов – на 11 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка 14 сутки наблюдения. До 21 суток нами выявлено возобновление количества всех изу чаемых клеток.

Введение крысам криоконсервированной плаценты вызывает изменения во всех структурных компонентах слизистой оболочки спинки языка. Реакция эпители альной пластинки проявляется усилением пролиферативных процессов, собственной пластинки – отеком межклеточного вещества и расширением емкостного звена гемо микроциркуляторного русла. Наличие в криоконсервированной плаценте биологически активных веществ способствует быстрой реализации иммунного ответа и возобновле нию морфофункционального состояния слизистой оболочки спинки языка до 7 суток наблюдения.

вЛиЯние аЛЛоГенноЙ пЛазмЫ на аДГезивнЫе СвоЙСтва куЛЬтивируемЫХ муЛЬтипотентнЫХ мезенХимаЛЬнЫХ СтромаЛЬнЫХ кЛеток коСтноГо мозГа крЫСЫ Сковроньска м., 2александрова С.а., 2Старикова Э.а., 2пинаев Г.п.

Санкт-Петербургский Государственный Политехнический Университет, Иститут цитологии РАН, Санкт-Петербург Nowadays multipotential mesenchymal stromal cells (MMSCs) are widely used in cell transplantology. Usually they are directly infused in the blood stream, but if they preserved their adhesive properties, they would form clots there. Hence, the study of their adhesive abil ity during transplantation remains to be an important scientifical issue. The main goal of this study was to estimate influence of plasma on the certain properties of rat bone marrow MMSCs - ability to adhere and expression of CD29 and CD90. We have compared adhesive properties of MMSCs during cultivation in medium containing 10, 50 and 100% of fetal bovine serum (control) and rat allogenic plasma. Our experiments revealed that in plasma adhesive proper ties are twice lower than in control, this was also proved my decreasing of adhesive marker’s expression.

Одним из основных свойств мультипотентных мезенхимальных стромаль ных клеток (ММСК) в культуре является высокая степень их адгезивности. Однако в терапии с использованием ММСК практикуется введение большого количества клеток в кровеносное русло. Очевидно, что сохранение способности к адгезии ММСК в крово токе может привести к закупорке кровеносных сосудов, поэтому актуальным является исследование адгезивных свойств ММСК при введении их в кровеносное русло. Целью настоящей работы являлось изучение влияния плазмы крови на свойства мультипотент ных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга крысы – способности к адге зии и экспрессии молекул CD90 и CD29.

Работа проводилась с использованием ММСК, полученных из костного моз га лабораторных крыс и культивировавшихся в течение нескольких пассажей в стан дартных условиях – среде -МЕМ с 10% эмбриональной сыворотки коров (ЭСК). Было проведено сравнение адгезивных свойств ММСК при культивировании в среде с 10, 11 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка и 100% ЭСК (контроль) и в среде с 10, 50 и 100% аллогенной плазмы крови крысы в течение 30 мин, 1 и 2 ч. Прикрепившиеся клетки окрашивали раствором кристалличес кого фиолетового и лизировали. О количестве клеток судили по оптической плотности раствора. Для определения достоверности отличий данных опыта от контроля исполь зовали t-критерий Стьюдента для независимых выборок. Показано, что в среде с 10% плазмы количество прикрепившихся ММСК было в 1,3-1,9 раза меньше, чем в контро ле. При культивировании ММСК в условиях высоких концентраций ЭСК и плазмы ( и 100 %) было отмечено снижение адгезивных свойств клеток. Достоверных отличий между опытными условиями и контролем по количеству прикрепившихся к пластику клеток при этом обнаружено не было.

Для выявления механизмов, лежащих в основе снижения адгезивности ММСК при культивировании в присутствии плазмы крови, нами была проведена оцен ка экспрессии на этих клетках адгезионных молекул CD90 и CD29 методом проточной цитофлуорометрии. Изучали характер экспрессии поверхностных молекул после куль тивирования клеток 2-го и 3-го пассажей в среде -МЕМ, содержащей 10 и 50% ЭСК (контроль) или плазмы крови крысы в течение 1 суток. Исследования показали, что на клетках, культивировавшихся в присутствии 10% плазмы крови, уровень экспрессии CD90 и CD29 был достоверно ниже по сравнению с уровнем экспрессии этих молекул на клетках, культивируемых в присутствии 10% ЭСК. Однако при увеличении количес тва митогенных добавок (ЭСК и плазмы) в среде до 50% отличия уровней экспрессии адгезионных молекул в контроле и в опыте нивелировались.

Сохранение некоторой способности к адгезии можно объяснить необходимос тью преодоления клетками трансэндотелиального барьера при миграции в ткани.

роЛЬ ГенноЙ ДиаГноСтики пуповинноЙ крови новороЖДеннЫХ Смолянинов а.б., котелевская е.а., Смирнова С.а., быкова Ю.Ю.

ООО «Покровский банк стволовых клеток», Санкт-Петербург The personal gene passport is a data set about the presence in an individual ge nome a determined dot changes (polymorphisms, mutations) or single nucleotide polymor phisms (SNP). SNP and also larger genetic changes (deletions, chromosomal aberrations) are cause of both monogene and multifactorial diseases. The Stem Cell Bank Pokrovski ap plies a diagnostic method based on the hibridization with DNA-probe in complex with se quence analysis of DNA-probe in defect region. It offers the possibility to carry into effect early diagnostics of disease of patients without of expressed clinical disease and to order treatment in time.

Генетические заболевания – патологии, возникшие в результате хромосом ных нарушений или точечных мутаций в гене, то есть заменах в нуклеотидной пос ледовательности ДНК, что приводит к изменению свойств гена. Некоторые мутации проявляются уже с рождения, вызывая такие серьёзные болезни, как муковисцидоз или мышечная дистрофия. Другие – не приводят к возникновению заболеваний, но явля 11 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка ются фактором предрасположенности к определенным состояниям – злокачественные опухоли, сердечно-сосудистые, аллергические, неврологические, нарушению свёрты ваемости крови и др. Существует целый ряд наследственных заболеваний обмена ве ществ. Они развиваются вследствие дефицита того или иного фермента, участвующего в обмене аминокислот, углеводов, жирных кислот или более сложных промежуточных продуктов. Клинические симптомы обусловлены накоплением токсических метаболи тов и отсутствием необходимых промежуточных продуктов. Примером таких заболева ний могут служить фенилкетонурия, гипотериоз, непереносимость фруктозы, лактозы.

Диагностировать данные патологии на ранних стадиях крайне сложно, так как клини ческие проявления не позволяют сразу выявить причину. Генетическое обследование новорождённых позволяет рано, на бессимптомной стадии, начать лечение, предупре дить необратимое поражение нервной системы и другие тяжелые последствия. Как пра вило, лечение состоит в исключении из рациона определенных продуктов. Ранее начало терапии важно не только при фенилкетонурии и врожденном гипотиреозе. Например, при галактоземии и болезни кленового сиропа на 1-2-й неделе жизни может наступить смерть: в первом случае – от сепсиса, вызванного грамотрицательными бактериями, во втором случае – от острого метаболического ацидоза. Своевременный диагноз позволит детям с наследственным заболеванием прожить полноценную жизнь, всего лишь при держиваясь диеты.

Применение молекулярно-генетических методов диагностики врожденных и наследственных заболеваний, является одним из важнейших направлений деятельности ООО «Покровский банк стволовых клеток».

Для детектирования полиморфизма проводится выделение ДНК из 0,7 мл пу повинной или венозной замороженной крови при помощи набора для выделения Protrans DNA Box 500 (Protrans, Германия). Идентификация точечных мутаций осуществляется методом ПЦР с последующей визуализацией в микропланшете с использованием ком мерческих наборов Pronto Diagnostics (Израиль). Скрининг делеций, инсерций и дефек тов в полной последовательности гена для выявления редких мутаций выполняется с помощью наборов компании MRC-Holland (Голландия) методом гибридизации с ДНК зондом. Для уточнения и подтверждения обнаруженного дефекта применяется метод секвенирования.

Диагностика генетических заболеваний используется, прежде всего, для оцен ки риска этих заболеваний, особенно при отягощенной наследственности родителей.

Ранняя диагностика позволяет приступить к профилактике, своевременному лечению и улучшает качество жизни пациента.

11 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка вЛиЯние оДноразовоЙ поДкоЖноЙ транСпЛантаЦии криоконСервированноЙ пЛаЦентЫ на морФоФункЦионаЛЬное СоСтоЯние СетЧатки крЫС Стецук о.а., Шепитько в.и., Лисаченко о.Д.

Высшее государственное учебное заведение Украины «Украинская Медицинская Стоматологическая Академия», г. Полтава, Украина Transplantation of cryopreserved placenta caused the increases of influx of blood to the vessels of retina, the changes in the cells of ganglionic layer of retina. To 30 days the retina of rats of experimental group did not differ from the control.

Transplantation of cryopreserved placenta caused the increases of influx of blood to the vessels of retina, the changes in the cells of ganglionic layer of retina. To 30 days the retina of rats of experimental group did not differ from the control.

Плацента является сильным источником системных белковых и стероидных гормонов, цитомединов, иммунных факторов и АТФ, которые имеют могучее физиоло гическое действие. Сами же клетки плаценты в процессе биологического распада, после трансплантации, могут давать внутриклеточные белки, которые стимулируют актив ность иммунной системы организма реципиента.

Целью экспериментального исследования было изучение морфологических изменений в структуре сетчатки при действии одноразовой подкожной трансплантации криоконсервированной плаценты на разных сроках эксперимента.

материалы и методы. Исследование проведено на 40 половозрелых крысах самцах линии «Вистар». Контрольная группа составила 10 животных, 30 животным была проведена одноразовая подкожная трансплантация криоконсервированной пла центы. Эвтаназия экспериментальной группы животных была проведена на 2-е, 5-е, 7-е, 10-е, 14-е и 30-е сутки эксперимента по 5 животных на серию. Статистическую обработ ку морфометрических данных проводили с помощью программы Excel.

результаты. При изучении полутонких срезов сетчатки в микроциркулятор ном русле со 2-х по 14-е сутки наблюдалось явление увеличения притока крови к сосу дам сетчатки в виде расширения просвета кровеносных капилляров, максимум которого был на 7 сутки и составил – 8,02±0,21 мкм (при р0,001), что на 34% больше по сравне нию с контрольной группой животных, показатели которых составили – 5,23±0,15 мкм.

Начиная с 7-х суток эксперимента, определялось постепенное уменьшение показателей диаметров капилляров, которые полностью восстановились и сравнялись с контрольны ми показателями к 10-м суткам эксперимента. Со 2-х по 5-е сутки эксперимента венулы были заполнены форменными элементами крови, наблюдался незначительный эритро цитарный сладж. Диаметра венул при сравнении с контролем достоверно равномерно увеличивался, начиная со 2-х суток эксперимента, и к 5-м суткам составил – 28,56±1, мкм (при р0,01) по сравнению с контрольной группой животных. Нами было установле но, что показатель диаметра артериол статистически достоверно не изменялся в течение всех сроков, но определялся незначительный артериоспаз на вторые сутки эксперимента (12,87±1,34 мкм, но достоверность разницы статистически не достоверна при р0,05).

11 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка выводы. При анализе диаметров ядер ганглионарного, внешнего и внутренне го ядерного слоев сетчатки на разных сроках нами было установлено, что первоочеред ные изменения оказываются в клетках ганглионарного слоя сетчатки в виде увеличения диаметра ядер, увеличения гранулярной эндоплазматической сети, количества мито хондрий. Диаметр ядер клеток ганглионарного слоя сетчатки равномерно увеличивался, начиная со 2 до 21 суток (при р0,05), по сравнению с контролем. Начиная с 14 суток, диаметр ядер клеток равномерно статистически значительно уменьшался до 30-х су ток. Диаметры ядер в группе контроля и на 30-е сутки статистически не отличались.

Диаметры ядер внешнего и внутреннего ядерных слоев статистически достоверно не изменялись в течение всех сроков за исключением 14-х и 21-х суток по сравнению с кон тролем при р0,05.

Трансплантация криоконсервированной плаценты влияет на все структурно функциональные компоненты сетчатки крыс, при этом не вызывая никаких патологи ческих изменений.

проГнозирование иСХоДа транСпЛантаЦии поЧки при поДборе парЫ «Донор-реЦипиент»

моЛекуЛЯрно-ГенетиЧеСким метоДом Столяр а.Г., бердюгина о.в.

ГУЗ «Свердловская областная клиническая больница № 1», г. Екатеринбург Important there is an estimation of compatibility of pair «donor-recipient» which until recently established with use serological method tiping the main complex gistoidentific ity, and now use much more specific and high-sensitivity method of definition – polymerase chain reaction with use specific praimers.

For an estimation of result molekular-genetic tip ing in an estimation of compatibility of pair «donor-recipient» comparative studying of diag nostic value of definition of locuses HLA A, B and DR serologigal (with use of specific whey of firm «Gisans», Moscow) and a molekular-genetic method has been spent. The last was car ried out with use of reagents firms «Protrans» (Germany). A statistical estimation of results spent with use of the computer program of program NCSS. Following the results of tiping patients with the subsequent the kidney transplantation which selection was carried out as serological, and a molekular-genetic method are established that in an estimation of survival rate of a transplant selection on the basis of a molekular-genetic method has appeared more prognosing valuable. Treatment outcomes in the latter case authentically differed from the selections which have been carried out serological by a method (the big duration of function ing of body, smaller quantity of complications both early, and the supervision kept away the periods, the big life expectancy of the recipient). Influence of some antigenes on character of an outcome of treatment (favorable or adverse) is established. The received results allow to draw a conclusion on possibility of forecasting of an outcome of survival rate of a transplant at selection of pair «donor-recipient» on the basis of pair selection by a molekular-genetic method.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Известно, что на результат трансплантации органов и тканей оказывает важ ное влияние иммунная система реципиента, защищающая его от «чужеродного» влия ния. Важным становится оценка совместимости пары «донор-реципиент», которую до последнего времени устанавливали с использованием серологического метода типиро вания главного комплекса гистосовместимости, а в настоящее время используют гораз до более специфичный и высокочувствительный метод определения – полимеразную цепную реакцию с использованием специфических праймеров.

Целью данного исследования стало изучение результатов исхода трансплан тации аллогенной почки при подборе пары «донор-реципиент» молекулярно-генетичес ким методом.

материалы и методы. Для оценки результата молекулярно-генетического типирования в оценке совместимости пары «донор-реципиент» было проведено срав нительное изучение диагностического значения определения локусов HLA A, B и DR серологическим (с использованием специфических сывороток фирмы «Гисанс» Москва) и молекулярно-генетическим методом. Последнее осуществлялось с использованием реагентов фирмы «Protrans» (Германия), в состав которого входил набор для выделе ния ДНК из периферической крови на колонках, наборы для амплификации (реакция увеличения ПЦР-продукта проводилась на амплификаторах Palm Cycler фирмы Cobatt Recerch и My Cycler фирмы Bio Rad). Результат оценивали электрофоретически с ис пользованием устройства гель-детекции в УФ свете – «темная комната» (фирма Bio Rad).

Статистическую оценку результатов проводили с использованием компьютерной про граммы программы NCSS.

результаты. По итогам типирования главного комплекса гистосовместимос ти 300 пациентов с последующей аллогенной трансплантацией почки, подбор которой осуществлялся как серологическим, так и молекулярно-генетическим методом установ лено, что в оценке выживаемости трансплантата подбор на основе молекулярно-генети ческого метода оказался более прогностически ценным. Исходы лечения в последнем случае достоверно отличались от подборов, осуществленных серологическим методом (большая продолжительность функционирования органа, меньшее количество осложне ний как раннего, так и отдаленного периодов наблюдения, большая продолжительность жизни реципиента). Установлено влияние ряда антигенов на характер исхода лечения (благоприятный или неблагоприятный).

выводы. Полученные результаты позволяют сделать вывод о возможности прогнозирования исхода выживаемости трансплантата при подборе пары «донор-реци пиент» на основе подбора пары молекулярно-генетическим методом.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка кЛетоЧно-тканеваЯ терапиЯ при ЛеЧении оСтеоартроза коЛенноГо СуСтава (ЭкСпериментаЛЬно-морФоЛоГиЧеСкое иССЛеДование) Ступина т.а., Степанов м.а.

ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган Results of the histomorphometric study showed that tunneling of subcartilaginous zone with introduction into channels of autologous bone marrow stimulates reparative regen eration of cartilage and bone tissue, thus slowing joint destruction.

С целью оценки эффективности применения костномозговой стимуляции при субхондральном туннелировании, в эксперименте на собаках (n=12) выполнены иссле дования по моделированию остеоартроза путем иммобилизации и компрессии обоих коленных суставов с пересечением бедренной артерии. Для подтверждения адекватнос ти полученной модели, через 28 суток после окончания иммобилизации 5 животных для морфологического исследования выводили из опыта. Остальным животным через суток после моделирования остеоартроза на правом суставе проводили туннелирование субхондральной зоны с введением аутогенного костного мозга. Забор костного мозга про изводили из проксимального метафиза плечевой кости при помощи иглы Кассирского. В каждом мыщелке бедра и голени делали по 4 туннеля. Левый сустав не туннелировали.

Через 14, 28 и 90 суток после туннелирования животных выводили из опыта.

Для светооптического исследования применяли парафиновые срезы, окрашен ные гематоксилином и эозином. Гистоморфометрические исследования проведены по перпендикулярным суставной поверхности эпоксидным полутонким срезам большой площади (6-8 мм2), окрашенным метиленовым синим-основным фуксином. Цифровой материал анализировали в программе «Microsoft Excel».

Через 14 суток в субхондральном отделе правых суставов в очагах активного ремоделирования наблюдалось образование густой мелкопетлистой сети молодых тра бекул, отличающихся от зрелых трабекул содержанием большого количества клеток.

Межбалочные промежутки в участках костеобразования были заполнены красным кост ным мозгом, в котором преобладали лимфоидные и бластные клетки. В субхондральных отделах туннелированного сустава красный костный мозг занимал большую площадь, чем в левом, в субхондральных отделах которого преобладал желтый костный мозг, от мечено обеднение клеточного состава красного костного мозга. Численная плотность клеток костного мозга в субхондральных отделах правого эпифиза составила 16,1±1, мкм2, что достоверно (р0,05) выше данного показателя в левом суставе – 8,9±0,7 мкм2.

К концу эксперимента результаты гистоморфометрического исследования сус тавного хряща правого сустава при туннелировании субхондральной зоны и трансплан тации в туннели аутогенного костного мозга свидетельствовали о том, что массовая гибель хондроцитов и деструкция матрикса компенсировались быстрой репопуляцией клеточного состава и активизацией синтеза компонентов межклеточного матрикса, в ре зультате чего восстанавливалась толщина хряща. Собственные регенераторные возмож ности хряща выражались повышением пролиферативной и биосинтетической активности вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка хондроцитов. Обнаруженные в очагах ремоделирования хряща клеточные скопления, окруженные межклеточным веществом, являлись признаком активно идущего репара тивного процесса. В субхондральной зоне в непосредственной близости к хрящу выявле ны функционирующие капилляры, что обуславливало позитивное трофическое влияние на гиалиновый хрящ. В левых нетуннелированных суставах также отмечались признаки регенерации суставного хряща, однако выраженность их была незначительной, с увели чением срока эксперимента деструктивные изменения прогрессировали.

Таким образом, гистоморфометрическое исследование показывает, что тун нелирование субхондральной зоны с введением в каналы аутогенного костного мозга оказывает стимулирующее действие на репаративную регенерацию хрящевой и костной ткани, тем самым замедляет разрушение суставов.

образование СФериЧеСкиХ аГреГатов ФетаЛЬнЫми и поСтнатаЛЬнЫми нервнЫми кЛетками и иХ потенЦиаЛЬное иСпоЛЬзование Сукач а.н., 2Ляшенко т.Д.

Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, Харьковский национальный педагогический Университет им. Г.С. Сковороды, г. Харьков, Украина In this study aggregates formation of nervous cells during their short-term cultiva tion at the presence of serum is described. Current research is beneficial for testing, standard ization and unification of primary suspensions of nervous cells.

Целью настоящей работы является разработка подходов, позволяющих тес тировать, стандартизировать и унифицировать первичные суспензии нервных клеток для последующего их использования в клеточной биологии и терапии.

Нервные клетки (НК) выделяли из тканей мозга плодов крыс и человека, а также новорожденных крыс.

Культивирование свежевыделенных клеток, полученных из нервной ткани как плодов крыс и человека, так и новорожденных крыс в среде DMEM/F12, не содержащей ми тогенов и обогащенной сывороткой уже через несколько часов приводило к образованию агрегатов, размеры, структура и количество которых зависели от концентрации посеян ных клеток и их жизнеспособности. Дальнейшее культивирование приводило к увеличе нию размеров плотно упакованных агрегатов. При этом структура некоторых «рыхлых»

агрегатов изменялась на плотную. Морфологически плотно упакованные агрегаты не от личались от нейросфер. Пересев агрегатов приводил к активному прикреплению как плот но упакованных, так и «рыхлых» агрегатов. Уже в первые сутки культивирования клетки прикрепленных агрегатов начинали дифференцироваться и мигрировать. Прикрепления мелких, рыхлых агрегатов, образованных НК с низкой жизнеспособностью, как правило, не происходило, и они в процессе культивирования деградировали.

Проведенные исследования указывают на то, что образование агрегатов НК в процессе их краткосрочного культивирования в присутствии сыворотки, способствуя удалению окончательно дифференцированных клеток (которые прикрепляются и не 12 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка входят в состав агрегатов), восстановлению не летальных повреждений клеток и уст ранению летально поврежденных клеток позволяет решить некоторые вопросы унифи кации и стандартизации свежевыделенных суспензий НК. С другой стороны, простота формирования агрегатов и их морфофункциональная схожесть с нейросферами позво ляет надеяться на перспективность их использования в клеточной биологии и терапии.

анаЛиз завиСимоСти ЧиСтоГо веСа образЦа пуповинноЙ крови и ЭФективноСти ЛеЙкоконЦентраЦии от разЛиЧнЫХ Факторов по ДаннЫм банка СтвоЛовЫХ кЛеток казанСкоГо ГоСуДарСтвенноГо меДиЦинСкоГо универСитета табанакова а.в., Газизов и.м., елагина Э.а., титова м.а., киясов а.п.

ГОУ ВПО «Казанский Государственный Медицинский Университет», Банк стволовых клеток Казанского ГМУ, г. Казань Background. Nowadays umbilical cord blood (UCB) is increasingly employed as an alternative source of hematopoietic stem cells (HSC) for related and unrelated allogeneic transplantation. It is simple enough to obtain, besides the procedure is safe both for a mother and a child and also these cells have a high capacity for proliferation. UCB banking is well-es tablished activity supporting the increasing number of UCB transplantations in hematological diseases. One of the crucial criteria for cryoconservation is the volume of UCB sample. The HSC number in single USB unit for transplantation is important in elder children and adoles cents, so efficient leucoconcentration is required. Our aim was to analyze the impact of differ ent factors on the volume of UCB sample and quality of leucoconcentration according to data of Stem Cell Bank (SCB) of Kazan State Medical University (KSMU).

Materials and methods. Te analysis involved 169 USB samples of KSMU SCB.

Correlation was detected by Statistica 8.0 for Windows.

Results. The volume of collected UCB was higher in second and following deliveries.

(91,68±23,52g versus (vs) 68,92±23,5 g in case of the first delivery, p0,01);

in case of caesar ean section (85,83±30,64 g vs 71,44±26,g p0,005). There was a negative relation between maternal age and the volume of collected UCB (73,28±31,33 g in women younger than 30 years old vs 65,48±38,44g in women after 30, p0,01). The volume of the UCB in women with infant birth weight (IBW) higher than 3500g was significantly greater than in case of IBW 3000-3500g (84,59±32,25 g vs 67,45±22,24 g, р0,0005). Mononuclear cell number is higher failing 12-24h separation (22265,1±8980,67/mcl vs 31785,77±14684,57/mcl, when obtained in 3-6 h, р0,05).

Conclusions. Number and way of delivery, IBW, maternal age have an impact on the volume of UCB sample. Obtaining of mononuclear fraction in addition depends on time of sepa ration. Careful accepting of cord blood in primiparas, women younger than 30 years old, in case of vaginal delivery and expected IBW 3000-3500g is required. In these cases cord blood collec tion should be performed before placental detatchment with early clamping of umbilical cord.

Пуповинная кровь новорожденного (ПК) – перспективный источник стволо вых клеток (СК). Забор ПК – легковыполнимая, безопасная процедура, не требующая вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка общей анестезии и назначения лекарственных препаратов. Выделяемая из ПК клеточная фракция обладает возможностью длительного хранения, что позволяет создавать бан ки крови. Одним из ключевых критериев отбора ПК для криоконсервирования являет ся чистый вес образца, от которого теоретически зависит количество СК. Потери СК, используемых в дальнейшем для трансплантации, являются критическими для детей старшего возраста и взрослых. Эффективная лейкоконцентрация позволяет выделять адекватное количество СК из крови.

Цель исследования. Изучить влияние различных факторов, описанных в литературе, на чистый вес образца ПК и эффективность лейкоконцентрации на осно ве данных Банка стволовых клеток (БСК) Казанского государственного медицинского университета (КазГМУ).

материалы и методы. Проводили анализ данных от 169 заготовок БСК КазГМУ с помощью программы Statistica 8.0.

результаты. Чистый вес образца ПК выше при вторых и более родах (91,68±23,52 г по сравнению с 68,92±23,5 г при первых родах, p0,01);

у рожениц моложе 30 лет (73,28±31,33 по сравнению с 65,48±38,44 г, p0,01);

при оперативном родоразреше нии (85,83±30,64г по сравнению с 71,44±26,23 г, p0,005). При массе плода более 3500г чистый вес образца крови достоверно выше, чем при массе 3000-3500г. (84,59±32,25 г по сравнению с 67,45±22,24 г, р0,0005). Однако, разница в чистом весе образца при весе менее 3 кг и более 3,5 кг статистически не значима (84,59±32,25 г по сравнению с 77,74±28,05 г., р=0,349). При выделении стволовых клеток в промежутке с 12 до часов после получения пуповинной крови концентрация мононуклеаров достоверно выше, чем при выделении в интервал 3-6 часов (22265,1±8980,67/мкл по сравнению с 31785,77±14684,57/мкл, р=0,01).

выводы. К факторам, влияющим на чистый вес образца ПК, можно отнести число родов в анамнезе, вес плода, возраст матери, способ родоразрешения. На эффектив ность лейкоконцентрации влияет величина временного интервала между получением об разца ПК и выделением мононуклеарной фракции. Таким образом, необходимо особенно внимательно относиться к забору пуповинной крови у первородящих, рожениц моложе лет, при естественном родоразрешении, а также при предполагаемой массе плода 3000 3500 г. У таких рожениц следует раньше пережимать пуповину с последующим приклады ванием ребёнка к груди матери, а также производить забор крови до отделения плаценты.

ЭкСпериментаЛЬнаЯ оЦенка биоЛоГиЧеСкиХ материаЛов, иСпоЛЬзуемЫХ в реконСтруктивноЙ ХирурГии тер-асатуров Г.п., 1бигвава а.т., 2рябов а.Ю., 3Юрасова Ю.б., 4Лекишвили м.в.

Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова, МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, 3Российская детская клиническая больница, ФГУ Центральный институт травматологии и ортопедии (ЦИТО) им. Н.Н. Приорова, Москва The outcome of any reconstructive operation where allografts are used, in many respects depends on quality of an implanted material. Thus, the allografts should be acces 12 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка sible, safe, convenient in storage, be characterized by absence of pyrogenic and immunogen ic properties and provide organotypical regeneration of tissues, whenever possible, in short terms and at the full biodegradation. Into number of investigated plastic materials included «Osteomatrix», «KollapAn», «Osteoplast-T» and «Perfoost». Histological studying of bone de fects of the rabbit’s bottom jaw in dynamics from 10 days till 3 months has shown that bone wound, feature and speed of formation and maturing bone reclaim are connected with osteoin ductive and osteoconductive potentialities of the biomaterials used in experiment.

Практика активного использования в реконструктивной хирургии различных пластических материалов насчитывает несколько десятилетий. В России их количество увеличивается с каждым годом, как и предложений материалов на рынке медицинских услуг. В этих условиях у практикующих хирургов обоснованно возникают вопросы к ка честву пластических материалов, их свойствам, возможностям применения. Получение ответа сопровождается определенными трудностями, ведь не секрет, что производители материалов презентуют свои изделия как исключительно эффективные и уникальные, что не всегда соответствует действительности. К сожалению, объективных исследова ний имплантатов крайне мало, но и то количество очень часто осуществляется не кор ректно, а любые негативные результаты или замечания вызывают болезненные реакции со стороны производителей.

материалы и методы. В число исследуемых пластических материалов вош ли «Остеоматрикс» (Конектбиофарм), «КоллапАн» (Интермедапатит), «Остеопласт-Т»

(Витаформ) и «Перфоост» (ЦИТО им. Н.Н.Приорова). В качестве экспериментальных животных использовали половозрелых кроликов породы Шиншилла. Под наркозом животным в области ветви нижней челюсти создавали 5 сквозных костных дефек тов. Идентичность формы и размера дефектов достигалась путем использования цилиндрических фрез (Mesinger, Германия) диаметром 3 мм. Дефекты заполняли био логическими материалами «Перфоост», «Остеоматрикс», «КоллапАн» и «Остеопласт Т». Контрольный дефект оставался свободным и заполнялся кровяным сгустком.

Животных выводили из эксперимента в сроки: 10, 20, 30, 60 и 90 суток. На каждый срок использовали по 5 лабораторных животных. Участки челюсти, где проводили имплантацию материалов, резецировали и готовили из них гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону. Всего морфологически было изучено 125 дефектов кости от 25 кроликов, анализ результатов был проведен заведующим лабораторией экспериментальной морфологии ММА им.

И.М. Сеченова проф. А.Б. Шехтером.

результаты и их обсуждение. Гистологическое изучение дефектов кости нижней челюсти кролика в динамике от 10 суток до 3 месяцев показало, что заживление костной раны, особенности и скорость образования и созревания костного регенерата связаны с остеоиндуктивными и остеокондуктивными потенциями использованных в эксперименте пластических биоматериалов.


В контроле, где костный дефект оставался свободным, уже к 10 суткам начи налось развитие незрелой регенерирующей костной ткани, которая заполняла с краев дефекта около 1/3 объема дефекта. К 20 суткам костный регенерат заполнял 2/3 объема дефекта. Через месяц эксперимента дефекты были почти полностью заполнены костным регенератом, но только часть остеоидных и хондроидных балок оссифицировалась. В срок 2 месяца регенерирующая костная ткань созревала и частично компактизирова 12 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка лась, в пространствах между балками появлялся костный мозг. Произошло пазушное рассасывание и перестройка костной ткани. К 3 месяцу костная ткань регенерата полно стью созревала и компактизировалась.

При имплантации в костный дефект «Перфооста» процессы остеогенеза про ходили быстрее. К 10 суткам материал имплантатов в основном резорбировался мак рофагами и замещался костными регенератами, заполняющими в отличие от контроля уже 2/3 объема дефектов. Остеоидные балки регенерата были более зрелыми, чем в кон троле. Через 20 суток ткань регенератов созрела, и регенераты заполняли всю площадь дефектов. К месячному сроку процесс созревания костной ткани усиливался: нарастала компактизация, имелись четкие линии склеивания балок, формировались остеоны. В пространствах между балками образовывался костный мозг. Оставались очаги хондро идной ткани. Через 2 месяца костная ткань регенерата созрела и практически не отлича лась от интактной кости.

Заполнение костного дефекта биоматериалом «Остеоматрикс» также ускоряло остеогенез и созревание новообразованной костной ткани. К 10 суткам часть дефекта за полняли остеоидные балки, по степени зрелости сравнимые с теми, которые образовы вались при имплантации «Перфооста». Другая часть дефекта была выполнена рыхлой соединительной тканью, содержащей фрагменты ГАП, которые резорбировались макро фагами и гигантскими клетками. Коллаген имплантатов подвергся полной резорбции.

Через 20 суток ГАП уже не определялся, но более крупные конгломераты ГАП еще оста вались в фиброзированных мягких тканях вблизи дефектов. Через месяц костная ткань, заполняющая дефекты, имела более зрелую структуру, чем в контроле. К двум месяцам ткань еще более созрела, компактизировалась и уже не менялась до конца эксперимента (3 месяца).

При заполнении дефекта кости «КоллапАном» остеогенетичекие потенции материала выражались слабо. К 10 суткам половина объема дефектов заполнялась незре лыми остеоидными балками и хондроидной тканью (последней больше, чем в дефектах с другими имплантатами). Остальная часть дефектов заполнялась незрелой грануляцион ной соединительной тканью с большим количеством фрагментов ГАП и гигантских кле ток (их больше, чем при имплантации «Остеоматрикса»). К 20 суткам около 2/3 объема дефектов замещалось костными регенератами (меньше, чем в других опытных группах).

При этом ткань имела менее зрелый характер, мало отличаясь от контроля. Часть дефек тов была заполнена конгломератами ГАП, окруженными макрофагами и гигантскими клетками. Степень резорбции синтезированного ГАП была значительно меньше, чем костного ГАП в «Остеоматриксе», с чем, видимо, связано сравнительно медленное фор мирование и созревание костного регенерата. Через месяц эксперимента резорбция ГАП усиливалась, но часть дефектов еще оставалась заполненной соединительной тканью с большим количеством гигантских клеток. Костная ткань регенератов имела по-пре жнему менее зрелый характер, чем в других опытных группах. К 2 месяцам костные регенераты занимали большую часть дефектов, их созревание усиливалось, однако со хранялась фиброзная ткань, в которой оставались гигантские клетки и небольшая часть конгломератов ГАП. Через 3 месяца уже все дефекты заполнял зрелый костный регене рат, но в нем сохранялись включения ГАП с явлениями лизиса.

При заполнении костных дефектов «Остеопластом-Т» отмечалась достаточно высокая активизация остеогенеза. Через 10 суток дефекты на 2/3 были заполнены кост ными регенератами с остеоидными и хондроидными балками. Зрелость ткани была срав 12 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка нима с той, что возникала при использовании «КоллапАна». К 20 суткам наблюдалось относительно быстрое созревание костной ткани: появились признаки компактизации и начала формирования остеонов. Через месяц дефекты заполнились относительно зрелой компактизированной тканью с костным мозгом. К двум месяцам эта ткань еще больше созрела, но в одном случае небольшая часть дефекта была заполнена хондроидной тканью.

Через 3 месяца костная ткань регенерата уже не отличалась от интактной кости.

Морфологические исследования показали, что наибольшими остеоиндук тивными и остеокондуктивными свойствами из использованных материалов обладают «Перфоост» и «Остеоматрикс». Близкие к ним свойства имеет «Остеопласт-Т». В тоже время «КоллапАн» не способствовал более быстрому репаративному остеогенезу в кос тном дефекте нижней челюсти, заживление костной раны было снижено по сравнению с контролем, что, по-видимому, связано с замедленной резорбцией синтетического ГАП.

Полученные в эксперименте результаты позволяют дать оценку исследуемых биологических материалов. Пластические материалы на основе коллагена и природного гидроксиапатита содержат в себе наиболее выраженные свойства, ускоряющие костную регенерацию. Деминерализованная кость человека, как и материалы на основе костной ткани животного происхождения, импрегнированные сульфатированными гликозами ногликанами являются оптимальным пластическим материалом для использования в че люстно-лицевой хирургии. Можно признать, что технологический процесс изготовления материалов «Перфоост» и «Остеоматрикс» позволяет создавать биологические импланта ты, ускоряющие процессы костной регенерации у биологических объектов другого вида.

разработка безопаСноСти теХноЛоГиЙ вЫДеЛениЯ, куЛЬтивированиЯ и криоконСераЦии мононукЛеаров пуповинноЙ крови ДЛЯ оЦенки терапевтиЧеСкоГо ЭФФекта на теСт-моДеЛЯХ толмачев в.С., боровицкая е.и., кудрина н.о., Смагулова Г.к.

РГП Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии МЗ РК, г. Алматы, Казахстан The cord blood and bone marrow mononuclears cultures were analyzed. Mononuclears chromatine DNA and cells chromatine DNP structure were studied, histons and nonhistones pro teins were evaluated by step deproteinesation. Cell circle and CD34+, CD45+ receptors expres sion, aneuplodia and aberrations level, apoptosis rate were analyzed. Were received prepatents for methods of cord blood mononuclears allocation and their viability estimation. Also elaborated the method of experimental fetal hypoxia treatment by mononuclears injection, and the method of experimental hepatic insufficiency treatment. The decreasing of AO binding and tritii labeled actinomicinum D in mononuclears, and also the correlation between AO binding and rivanol SO indexes from DNA cells chromatin were detected. Were revealed the definite patterns in mono nuclears interphase chromatine structural organization. During cultivation increased the MNK in later stages of cell circle and proliferation index magnified. In bone marrow mononuclears cells culture expression of CD34+, CD45+ receptors changes, chromatin destabilization occurs.

The influence of cryoprotection agents combination on the aberrations level during MNK cultiva tion noticed. The different methods of cryoconcervation influence on structural and functional 12 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка propeties of mononuclears DNA chromatin, level of their viability and changes of apoptosis rate were distinguished. The optimal conditions for cryoconservation and caryotyping safety param eters, aneuploidia and aberrations levels evaluation were elaborated. The scientific practical recommendations of cells materials certification are developed, as the necessary element of cells therapy standardization and safety providing.

Анализировали культуры мононуклеаров пуповинной крови и костного мозга. Изучали ДНК хроматина мононуклеаров и структуру ДНП хроматина клеток, оценивали гистоны и негистоновые белки, используя ступенчатую депротеинизацию.

Анализировали клеточный цикл и экспрессию рецепторов СД 34+, СД 45+, уровень анеуплоидии и аберраций, показатели апоптоза. На способ выделения мононуклеаров из пуповинной крови и способ оценки их жизнеспособности, получены предпатенты (2007-/0576.-/0577.1). Разработан способ лечения гипоксии плода в эксперименте, путем введения мононуклеаров (2006/0979.1), а также способ лечения печеночной недостаточ ности в эксперименте (2006/0998). В мононуклеарах выявлено уменьшение связывания АО и меченого тритием актиномицина Д, а также корреляция показателей связывания АО и риванола SO2 с ДНК хроматина клеток. Выявлены определенные закономерности структурной организации интерфазного хроматина мононуклеаров. При культивирова нии происходит увеличение МНК находящихся на более поздних стадиях клеточного цикла и возрастание пролиферативного индекса. В культуре мононуклеарных клеток из костного мозга экспрессия рецепторов СД 34+, СД 45+ изменяется, происходит де стабилизация хроматина. Отмечено влияние сочетания криопротекторных средств на уровень аберраций при культивировании МНК. Выявлено влияние разных способов криоконсервации на структурно-функциональные свойства хроматина ДНК мононук леаров, уровень их жизнеспособности и изменения показателей апоптоза. Разработаны оптимальные условия криоконсервации и параметры безопасности по кариотипирова нию, оценки уровня анеуплоидии и аберраций. Разрабатываются научно практические рекомендации паспортизации клеточных материалов, как необходимого элемента обес печения их стандартности и безопасности для целей клеточной терапии.


СпоСоб вЫДеЛениЯ и орГанноГо куЛЬтивированиЯ аЛЛоГеннЫХ ЛимбаЛЬнЫХ муЛЬтипотентнЫХ мезенХимаЛЬнЫХ СтромаЛЬнЫХ кЛеток ГЛаза С иммуноСупреССивнЫми СвоЙСтвами тонаева Х.Д., 1борзенок С.а., 2онищенко н.а., 2крашенинников м.е., комах Ю.а., 1мороз з.и., 1ковшун е.в., 1волкова о.С., ролик о.и., 1Шипунова а.в.

ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. академика С.Н.Федорова» Росмедтехнологии, ФГУ «ФНЦ трансплантологии и ИО им. академика В.И. Шумакова», Москва There was stadied a possibility of co-transplantation of allogenic limbal mesenchy mal progenitor/stem cells which passed the stage of organic cultivation, with a donor cornea during keratoplasty of a high risk for induction of immune tolerance.

12 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка В настоящее время в мировой трансплантологии в связи с ростом числа пов торных пересадок и малой эффективностью медикаментозных средств посттрансплан тационной иммуносупрессии пристальное внимание уделяется изучению супрессивных эффектов мультипотентных мезенхимальных стомальных клеток (ММСК), способных формировать иммунную толерантность при их сотрансплантации с донорским органом.

Из литературных источников известно, что в лимбальной зоне глаза локализуются клет ки, обладающие фенотипом ММСК.

Цель. Разработать технологию выделения и культивирования аллогенных лимбальных ММСК глаза человека для сотрансплантации с донорской роговицей при кератопластике высокого риска.

материалы и методы. Из глаз трупов-доноров роговиц с помощью микрохи рургической техники перилимбально выделялись зоны палисад Фогта. Выделенные лос куты подвергались обработке трипсином и коллагеназой в течение 16 ч при +4°С, затем в течение 15 мин – диспазой при +37°С. Для культивирования использовался cтандартный состав питательных сред DMEM/F-12, содержащий ряд ростовых факторов.

результаты и обсуждение. В процессе органного культивирования лимбаль ных лоскутов в течение 6 недель получен значительный прирост ММСК в межфибрилляр ных пространствах с сохранением их «стволовости», определенный гистологическими и иммуногистохимическими методами. Определены показания к сотрансплантации с до норской роговицей человека при кератопластике высокого риска. Доказана возможность проведения экспериментально-клинических исследований предложенной технологии.

ЭкСпериментаЛЬное иССЛеДование оСтеоинДуктивнЫХ СвоЙСтв импЛантатов «перФооСт» при реконСтруктивнЫХ операЦиЯХ на переГороДке ноСа Хамидов а.Г., 1ахмедов Ш.м., 2Лекишвили м.в.

ФГУ «НКЦ оториноларингологии» ФМБА России, ФГУ Центральный институт травматологии и ортопедии (ЦИТО) им. Н.Н. Приорова, Москва In experiments on rabbits were carried out a series of experiments, which consisted of implantation in the region resected nasal septum DBA «Perfoost» made from the bones of the rabbit. The animals were taken from experiments in time: 14 days, 1, 3, 6 and 9 months. The results of morphological studies of histological sections removed nasal septum showed that from 14 days to six months, there was an intensive process of resorption of the transplanted plastic material with instantaneous replacement of its newly formed bone tissue coarse-fibered structure. By 9 months of the study processes of restructuring coarse-fibered bone tissue to mature lamellar fully completed. Results of experimental studies have shown the possibility of using DBA «Perfoost» during reconstructive operations on the nasal septum.

Программы поисков новых пластических материалов включают в себя экспе риментальные доклинические испытания. Они направлены не только для подтверждения безопасности материалов, но и для выявления параметров и особенностей их пластичес ких свойств, с перспективой применения в практической клинической практике.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Реконструктивные операции на скелете носа, является одним из наиболее сложных разделов ринопластической хирургии, они имеют свои специфические особен ности. При имплантации пластического материала в область дефекта перегородки носа, он нередко оказывается между покрывающими тонкими, иногда и перфорированными листками её слизистой. Поэтому он должен в ближайшее время покрыться слизистой оболочкой или хотя бы эпителием и отграничить себя от внешней среды. Если этого не произойдёт, то он может в любое время оказаться инфицированным, как во время операции, так и в различные сроки после неё, что приведет к нагноению имплантата.

И, наконец, чтобы обеспечить оптимальные условия для приживления и перестройки костного имплантата, необходимо помещать его в тесное соприкосновение со свежими краями костного дефекта и тщательно фиксировать, что не всегда возможно при пласти ческих операциях в полости носа.

В ринохирургии применяют различные виды донорских пластических мате риалов, однако, большинство из них изготовлены по технологии, которую разработали в России ещё с 70-80-х годов прошлого столетия.

В последнее время применение новых технических возможностей, способствовало повышению качества заготовки и консервации имплантатов. В результате современные им плантаты стали более безопасными, а их индуктивных свойства значительно повысились.

Одним из таких пластических материалов в нашей стране является деминера лизованный костный имплантат (ДКИ) «Перфоост» изготавливаемый в тканевом банке ЦИТО им. Н.Н.Приорова. Данный костно-пластический материал, впервые нами был применен при реконструктивной пластике перегородки носа.

Целью исследования явилось экспериментальное обоснование применения ДКИ «Перфоост» в клинике при реконструктивно-пластических операциях на перего родке носа.

материалы и методы. Для оценки возможности применения ДКИ «Перфоост»

в клинике, нами были поставлены серии опытов на кроликах, которым в область резеци рованной части перегородки носа имплантировалась пластины ДКИ «Перфоост» изго товленные из донорских костей кролика (алловариант).

Животных выводили из опытов в сроки 14 суток, 1, 3, 6 и 9 месяцев после опе рации. Из удаленного фрагмента скелета перегородки носа готовили серии микропрепа ратов для морфологического исследования.

результаты и обсуждение. Результаты морфологических исследований в дина мике показали, что, начиная с первого и до шестого месяцев исследования, наблюдались довольно интенсивные процессы рассасывания пересаженного костно-пластического материала с одномоментным замещением его новообразованной костной тканью гру боволокнистого строения. В последующем, начиная с шестого месяца после операции, происходила перестройка грубоволокнистого костного регенерата в зрелую пластинча тую кость. Спустя девять месяцев от начала эксперимента процессы перестройки но вообразованной грубоволокнистой костной ткани в пластинчатую кость практически заканчивались. Дефект скелета перегородки был заполнен новой костной тканью, имев шую структуру зрелой пластинчатой кости с характерными гаверсовыми системами.

Морфологически это проявляется признаками полного исчезновение фрагментов гру боволокнистой костной ткани и образованием костных пластинок вокруг новообразо ванных сосудов, с одновременным резким уменьшением содержания многоядерных макрофагов-остеокластов при сохранении слоя остеобластов.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка На основании проведенных серийных исследований по изучению динамики лизиса имплантатов и степени полноценности их замещения новообразованной костной тканью окончательным завершением перестройки регенерата следует считать появле ние в области имплантации пластинчатой костной ткани.

Ни у одного из оперированных животных реакции отторжения или какой-либо иной местной патологической реакции воспаления обнаружено не было.

Как показали экспериментально-морфологические исследования, имплантаты «Перфоост» полностью замещаются органотипическими тканями реципиента и спо собствуют улучшению трофики окружающих их тканей.

Полученные в экспериментальном исследовании результаты данных и их ана лиз свидетельствуют о реальной возможности использования ДКИ «Перфоост» в кли нике при реконструктивно-пластических операциях для восстановления перегородки носа.

арСенаЛ биотранСпЛантатов нЦто и иХ применение Ханамирян т.в.

Научный Центр Травматологии и Ортопедии МЗ РА (НЦТО), г. Ереван, Армения Different types of osteogenic bone-matrix transplants made by SCTO were re searched and developed into clinic. Their usage is proved in the limited bone defects and for stimulation of bone fragments’ consolidation and for the growth of regenerate by Ilizarov, in particular, during treatment of delayed consolidation, false joints and during of the reconstruc tion of postresection bone defect, the infected wounds and bone defects, during reconstruction of parietal defect and creation of adequate bone basis for endoprothesis. Alloplast is effective and convenient in terms of replacement of cavitary bone defects, including tumorous genesis.

С целью стимуляции репаративной регенерации костной ткани и формирова ния на месте костного дефекта (КД) полноценной органотипичной кости в НЦТО изуча ется эффективность различных костно-пластических материалов.

Остеогенные свойства деминеральзованного костного матрикса (ДКМ), заготовленного по нашей методике, и различных его комбинаций изучены в экто пическом и топическом очагах на различных экспериментальных моделях. Даны характеристики проявления индукционного остеогенеза в зависимости от метода за готовки. Разработаны щадящие и доступные методы стерилизации, консервирования, установлены максимальные сроки хранения. Показано, что данные костноматрич ные трансплантаты (КМт) обладают высокими остеоиндуктивными остеогенными свойствами и, подвергаясь биодеградации, восполняют КД полноценной костной тканью в сроки, приближенные к физиологическим. Экспериментально изучены и обоснованы применение ксено-ауто материала в качестве альтернативного костноп ластического, более экономичного материала, сочетающего остеоиндукционные свойства КМ животного происхождения и аутогенные факторы роста насыщенной тромбоцитами плазмы.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Разработаны рациональные методы применения заготавливаемых нами био трансплантантов. Разновидности КМт в виде полуцилиндров, стержней, стружек, раз мельченных частиц, губки и т.п. применены в клинике в 890 случаях;

в комбинации с аутотрансплантантами, металлическими конструкциями и искусственными имплан тами – при 1120 реконструктивно-восстановительных операциях;

«Аллопласт», состо ящий из размельченного кортикального КМ, коллагенового геля и порошка костной муки, поэтапное включение которых обуславливает процесс костеобразования, исполь зован в 79 случаях.

По результатам оперативного лечения применение КМт оправдано при огра ниченных КД и для стимуляции консолидации костных отломков, при наращивании регенерата по Илизарову, а также показано при лечении замедленной консолидации, ложных суставов, при пластике пострезекционного КД, при инфицированных ранах и КД, при реконструкции пристеночного дефекта и с целью создания адекватного костно го ложа для эндопроеза. «Аллопласт» эффективен и удобен при замещении полостных костных дефектов, в том числе опухолевого генеза.

теХноЛоГиЧеСкие аСпектЫ поЛуЧениЯ инЪекЦионнЫХ биоматериаЛов «аЛЛопЛант®»

Хасанов р.а., Шангина о.р.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа There were considered basic production principles of Alloplant injectibe biomaterials.

Применение аллотрансплантатов в измельченном виде позволяет значитель но увеличить площадь контакта с раневой поверхностью и заполнять раневые дефек ты любой формы посредством щадящей хирургической техники. Однако, несмотря на эффективность инъекционных биоматериалов, их широкое использование ограничи вается сложностью изготовления, связанной с высокой чувствительностью исходных тканей к химическим, механическим и температурным воздействиям. Поэтому, раз работка и внедрение оптимальных методов обработки и измельчения биологических тканей является одним из приоритетных направлений в производстве биоматериалов «Аллоплант®».

Приготовление инъекционных биоматериалов «Аллоплант ®» возможно из любых органов и тканей, в зависимости от клинических требований, но, как прави ло, используются такие соединительнотканные образования как серозные оболочки, сухожилия, фасции, дерма, кости. Для снижения антигенности донорские ткани под вергаются комплексной механической и химической обработке, способствующей разру шению и удалению клеточных элементов и других иммунореактивных компонентов.

Обязательным этапом является лиофильное высушивание тканей под ваку умом. При этом, их предварительное замораживание до –40°С осуществляется с мак симально возможной скоростью, предотвращающей чрезмерное кристаллообразование 1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка льда, негативно сказывающегося на фиброархитектонике тканей. Все последующие производственные этапы проводятся в условиях, исключающих загрязнение материала посторонними примесями, в боксах с кондиционированием и фильтрацией воздушных потоков.

Измельчение тканей производится в несколько последовательных стадий на ножевой и ударно-роторной мельницах с постепенным уменьшением номинала измель чительной гарнитуры от 5 до 0,05 мм. Для предотвращения термического воздействия на ткани в процессе размола и придания им дополнительной хрупкости применяется ох лаждение жидким азотом или сжиженным углекислым газом. Измельченный материал просеивается при помощи установки для виброрассева, что позволяет выделять фракции требуемой степени дисперсности, как беспрепятственно проходящие через инъекцион ные иглы определенного диаметра, так и обладающие заданными сроками резорбции в организме после введения. Кроме того, в процессе рассева производится магнитная очис тка материала от возможных примесей, возникающих вследствие истирания материала измельчительной гарнитуры мельницы. Фасовку готового биоматериала осуществляют в стеклянные флаконы при помощи фасовочного аппарата, обеспечивающего достаточ ную производительность и высокую точность дозирования. Стерилизация осуществля ется радиационным методом.

Полученный таким образом инъекционный биоматериал «Аллоплант®» пред ставляет собой волокнистый порошок, при экстемпоральном разведении образующий стабильную, не расслаивающуюся суспензию, беспрепятственно проходящую через инъекционную иглу.

Экспериментально и клинически установлено, что данные виды обладают им мунотропной активностью, оказывают выраженное влияние на клетки макрофагального и фибробластического ряда и стимулируют процессы регенерации при травматических и дегенеративных повреждениях различных органов и тканей.

В настоящее время серийно выпускается 7 видов инъекционного биомате риала: «Аллоплант для ретросклеропломбирования», «Склероукрепляющие пломбы», «Стимулятор васкулогенеза», «Стимулятор фагоцитоза» применяются в офтальмо логии, «Аллоплант для акупунктурного введения» используется в рефлексотерапии, «Аллоплант для кожной аугментации» – в косметологии и дерматологии. «Стимулятор регенерации» нашел широкое применение в хирургии, гастроэнтерологии, гепатологии, стоматологии, дерматологии, травматологии и др.

поЛуЧение СтвоЛовЫХ кЛеток крови из коСтноГо мозГа Доноров орГанов и Доноров тканеЙ Хватов в.б., боровкова н.в., пономарев и.н., перцев а.С., путинцев м.Д.

НИИ Скорой Помощи им. Н.В. Склифосовского, Москва Introduction: Due to increasing the demand in therapies using cells technologies in patients with hematology diseases, trauma, surgical pathology and in transplantology the collection of stream cells from bone marrow become actual.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Methods: From a total of 50 cells and tissues donors, we aspirated bone marrow by using two trocars during 30 min and then another 30 min by rinse from one trocar channel to the drain thru second trocar channel.

Results: After 30 min Aspiration we’ve got 389±119 ml of bone marrow with alive steam cells 65,5±22,5Ч106. After rinsing we we’ve got another 34,3±6,9Ч106 alive steam cells.

Conclusion: We recommend collection the bone marrow from cells and tissues dur ing 6 hours after death. That keeps steam cells alive and active.

В связи с увеличением востребованности клеточных технологий в терапии па циентов с гематологическими заболеваниями, а также при травме, хирургической пато логии и в трансплантологии актуальным является получение стволовых кроветворных клеток (СКК) из костного мозга (КМ). Обсуждается возможность клинического приме нения аллогенных СКК полученных из кадаверного КМ.

Цель исследования. Оптимизация способа получения КМ от доноров тканей.

материалы и методы. Исследование проведено на 50 донорах-тканей.

Причиной внезапной смерти у обследованных доноров в 34 случаях была острая сердеч нососудистая недостаточность, в 16 – тромбоэмболия легочной артерии. Возраст умер ших составил от 45 до 60 лет. На основании приказа Министра Здравоохранения СССР № 482 от 1972 года забор КМ осуществляли не позднее 6 часов от момента смерти. В гребень подвздошной кости с каждой стороны устанавливали по два троакара, и прово дили аспирацию течение 30 минут. Далее применялся метод аспирации с вымыванием в течение 30 минут, путем подведения через один из каналов на каждой стороне перфу зионного раствора.

результаты. За 30 минут аспирации получали взвесь объемом 389±119 мл с общим содержанием жизнеспособных СКК 65,5±22,5Ч106 клеток. Последующая ас пирация с вымыванием позволила дополнительно получить ещё 34,3±6,9 х 10 6 СКК.

Общий выход жизнеспособных клеток при использовании комбинации аспирацион ного метода с аспирационно-вымывным методом составил в среднем 99,8±25,0Ч10 клеток, что соответствует терапевтической дозе СКК у гематологических больных (1-2Ч106/кг). Среднее содержание жизнеспособных клеток в КМ-взвесях получен ных аспирационным методом составило 88,2±4,0%, а аспирационно-вымывным 72,4±7,3%.

Таким образом, заготовка КМ от доноров-тканей в первые 6 часов от момента смерти позволяет получить клеточную взвесь с жизнеспособными, функционально ак тивными СКК.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка поСттравматиЧеСкаЯ реГенераЦиЯ СпинноГо мозГа крЫСЫ в уСЛовиЯХ ЭктопиЧеСкоЙ ЭкСпреССии Генов VEGF и FGF2 в обЛаСти повреЖДениЯ Шаймарданова Г.Ф., рубашкина Я.о., Салафутдинов и.и., ризванов а.а., Челышев Ю.а.



Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 12 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.