авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 12 |

«IV Всероссийский симпозиум с международным участием ‡ ‚ ‡‚ ‡‡„ Сборник тезисов симпозиума 21-22 апреля 2010 Санкт-Петербург ...»

-- [ Страница 6 ] --

Казанский институт биохимии и биофизики Казанского научного центра РАН, Казанский Государственный Медицинский Университет, Казанский Государственный Университет, г. Казань Pathophysiological and pathomorphological aspects of spinal cord injury are well defined. However, adequate methods of spinal cord injury treatment are still absent. One of perspective approaches in this direction is cellular therapy. Mononuclear cells of human umbilical cord blood are intensively studied as a source of stem and progenitor cells for transplantations to posttraumatic and postishemic defects of a neural tissue and also for treatment of neurodegenerative diseases. They are characterized by the content of hemato genic stem cells, mesenchymal stem cells, progenitor endothelial cells and other cellular pre decessors as well as by low immunogenicity, availability and simplicity of production. On a number of experimental models it was established that umbilical cord blood cells, producing the colony-stimulating factor 1, thrombopoetin and interlejkin-11, possess immunomodula tory ability. Effective delivery of neurotrophic factors into damaged area is also achieved by means of non-viral vectors – genetic make-ups expressing the therapeutic genes. For these purpose we used in our experiments the double-cassette plasmid, expressing genes of vas cular endothelial growth factor (VEGF) and fibroblast growth factor 2 (FGF2). On the model of dosed contusion severity trauma of a rat spinal cord at level T8 we have studied effects of an immediate single injection into the damaged area of mononuclear blood cells from hu man umbilical cord and of plasmids, transfected by genes VEGF and FGF2 (test group). The similar cells transfected by genes of green fluorescent protein (EGFP) in the same conditions and in the same quantity were injected to animals of control group. In a spinal cord of control group animals under injection of mononuclear blood cells from human umbilical cord, trans fected by genes EGFP, the specific luminescence in transplanted cells is revealed on distance not less than 10 mm from an injection point. This luminescence is most intensive at early times after a trauma and injection of cells (2-6 days), is definitely detected at later dates (14 21 days) and gradually attenuates by 30 days. In animals of test group in external zones of white substance of spinal cord at distance of 1,5 cm from epicenter of a trauma the quantity of perivascular cells, expressing the beta-receptor of platelet growth factor (PDGFRbeta), increases on the average by 30% (Р 0,05). The expression of genes VEGF and FGF2 into the area of contusion trauma of a spinal cord leads to decrease of the area of destroyed gray and white substances, reduction of the total area of pathological cavities, increase of the number of myeline fibers in spinal paths as revealed by light microscopy morphometry, and to increase of the number of myeline fibers with diameter up to 2 microns according to electron microscopy data. The obtained results evidence that delivery of therapeutic genes VEGF and FGF2 by means of cellular carriers stimulates vascularization of brain tissue and its posttraumatic regeneration.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Патофизиологические и патоморфологические аспекты травмы спинного мозга хорошо изучены. Однако адекватные методы лечения последствий поврежде ний спинного мозга отсутствуют. Одним из перспективных подходов в этом направле нии является клеточная терапия. Мононуклеарные клетки крови пуповины человека интенсивно исследуют как источник стволовых и прогениторных клеток для транс плантаций при посттравматических и постишемических дефектах нервной ткани, а также для лечения нейродегенеративных заболеваний (Zhao et al. 2004;

Kuh et al.

2005). Они характеризуются содержанием стволовых кроветворных, стволовых мезен химных, прогениторных эндотелиальных клеток и других клеточных предшествен ников, а также низкой иммуногенностью, доступностью и простотой получения. На ряде экспериментальных моделей установлено, что клетки крови пуповины, выраба тывая колониестимулирующий фактор 1, тромбопоэтин и интерлейкин-11, обладают иммуномодулирующим действием, (Suen et al. 1994;

Taguchi et al. 2004;

Vendrame et al. 2004). Эффективную доставку нейротрофических факторов в область повреждения осуществляют также с помощью невирусных векторов – генетических конструкций, экспрессирующих терапевтические гены (Paper et al. 2006;

Kang et al. 2008). С этой целью в наших экспериментах мы использовали двухкассетную плазмиду, экспресси рующую гены сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и фактора роста фибробластов 2 (FGF2). Нами на модели дозированной контузионной травмы спинного мозга крысы, на уровне T8 изучены эффекты немедленной однократной инъекции в область повреждения мононуклеарных клеток крови пуповины человека и плазмид, трансфицированных генами VEGF и FGF2 (опытная группа). Животным контроль ной группы в тех же условиях и в том же количестве вводили аналогичные клетки, трансфицированные геном зеленого флюоресцентного белка (EGFP). В спинном мозге животных контрольной группы с введением мононуклеарных клеток крови пупови ны человека, трансфицированных геном EGFP, специфическое свечение в трансплан тируемых клетках выявлено на расстоянии не менее 10 мм от точки инъекции. Это свечение наиболее интенсивно на ранних сроках после травмы спинного мозга и вве дения клеток (2-6 суток), четко прослеживается на более поздних сроках (14-21 сутки) и постепенно затухает к 30 суткам. У животных опытной группы в наружных зонах белого вещества спинного мозга на расстоянии 1,5 см от эпицентра травмы количество периваскулярных клеток, экспрессирующих бета рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGFRbeta), возрастает в среднем на 30% (Р0,05). Экспрессия генов VEGF и FGF2 в области контузионной травмы спинного мозга крысы приводит к уменьшению площади разрушенного серого и белого вещества, уменьшению суммарной площа ди патологических полостей, увеличению числа миелиновых волокон в спинальных трактах по данным светооптической морфометрии и увеличению числа миелиновых волокон диаметром до 2 мкм по данным электронной микроскопии. Полученные ре зультаты свидетельствуют о том, что доставка терапевтических генов VEGF и FGF при помощи клеточных носителей стимулирует васкуляризацию ткани мозга и его посттравматическую регенерацию.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка биоматериаЛЫ «ALLOPLANT®»:

теХноЛоГии и СтанДартЫ Шангина о.р., Хасанов р.а.

ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Министерства здравоохранения и социального развития РФ», г. Уфа Stage-by-stage process analysis of «Alloplant» connective tissue manufacture.

В настоящее время клиническая важность и ответственность процесса заготов ки и консервации донорских тканей не вызывает сомнения. Для того чтобы обеспечить высокую потребность лечебных учреждений высококачественными трансплантатами тканевым банкам необходимо внедрять в процесс изготовления трансплантатов совре менные технологии, а так же соответствовать требованиям стандартов, предъявляемых к тканевым трансплантатам.

Тканевой банк Всероссийского центра глазной и пластической хирургии производит 96 видов различных соединительнотканных трансплантатов, защищен ных торговой маркой «Alloplant®». Выпускаемые трансплантаты сертифицированы (Рег. удостоверение № ФС 01033584/3159-06;

№ ФС 01033584/ 3160-06;

Сертификат со ответствия № РОСС RU.ИМ 02.В16287;

№ РОСС RU.ИМ 02.В16288;

ТУ 42-2-537-2002) и прошли токсикологическую экспертизу, процедуру экспериментальных и клиничес ких испытаний при Комитете по новой медицинской технике МЗ РФ (протокол испыта ний №№ 6170;

6171от 22.04.2009. ИЛ ФГУ «ВНИИМТ»). С использованием указанных трансплантатов только в офтальмохирургии и пластической хирургии разработано более 150 новых видов операций (Рег. удостоверение № ФС-2006/142;

№ ФС-2006/143;

№ ФС-2006/144). Процесс изготовления трансплантатов «Alloplant ®»: состоит из не скольких этапов. Первым этапом любой трансплантационной технологии является экспертиза трупа-донора. Разработанная нами онтогенетическая шкала донорства поз воляет расширить диапазон возрастных границ доноров, с учетом индивидуальной изменчивости соединительной ткани. Забор донорских тканей осуществляется соглас но переработанной и адаптированной к современным условиям ныне действующей Инструкции по заготовке трупной крови и тканей (МЗ СССР от 2.01.1962) согласно Лицензии «по забору, хранению органов и тканей» № 99-01-004437. Забранные ткани доставляются из Бюро СМЭ в Тканевой банк в контейнерах-холодильниках на спе циальном транспорте (Лицензия «по транспортировке органов и тканей человека» № ФС-02-01-001312). Далее все поступившие кадаверные ткани направляются в клини ческую лабораторию на обязательное тестирование сыворотки крови на наличие анти тел к ВИЧ, гепатиту Б и С, на сифилис. Затем, при помощи специально разработанной компьютерной программы, фиксируются подробные данные о донорах. На следующем этапе прошедшие серологические исследования ткани подвергаются физико-химичес кой обработке. Каждая ткань в зависимости от своей структуры и биохимии подверга ется определенному методу обработки. Главное, при физико-химическом воздействии освободить ткани от клеток и сохранить их структурные и пластические свойства. На этом основании используется методика мембранолиза и экстракции иммуногенных компонентов тканей, с сохранением коллагенового каркаса и биологически активных 1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка компонентов аморфного матрикса. Указанный способ снижения антигенных свойств трансплантатов, разработанный в нашем центре, составил основу их физико-хими ческой обработки (Патент РФ № 2189257). Далее, происходит распределение тканей на следующие группы: консервированные в этаноле, лиофилизированные и диспер гированные. Консервированным трансплантатам придается определенная геометри ческая форма, удобная для выполнения хирургических манипуляций, при помощи лазерного излучения. Для «выкраивания» трансплантатов используется комплекс ла зерного моделирования, разработанный по проекту специалистов банка в Российском Федеральном Ядерном центре (г. Саров) (Свид. на полезную модель РФ № 23402).

Использование лазера позволяет существенно увеличить выпуск трансплантатов и обеспечивает сохранение их структуры и свойств;

2) лиофилизация – для изготовле ния трансплантатов используются специализированные лиофильные установки, поз воляющие выпускать трансплантаты, лиофилизированные традиционными методами, а также создавать новые, структурно-модифицированные трансплантаты, с заданны ми биологическими и физическими характеристиками (Патент РФ № 2310476);

3) дис пергирование – для изготовления диспергированных трансплантатов используются ультрацентробежные мельницы, на которых при помощи щадящей технологии измель чения и фракционирования удается получать гомогенаты из мягких тканей с размером частиц от 30 до 250 мкм. Диспергированные биоматериалы хорошо смачиваются, об разуя суспензию, и беспрепятственно проходят через инъекционную иглу (Хасанов Р.А. 1999). Заключительный этап приготовления трансплантатов – стерилизация.

Стерилизация осуществляется при помощи радиационно-технологического комплек са (РТК) на основе линейного ускорителя электронов ЛУ-7-2 (Лицензия «по эксплу атации источников ионизирующего излучения для радиационной стерилизации» № 02. БЦ.01.002. Л.000052.07.07) Разработанная нами технология селективной радиаци онной стерилизации позволяет гарантировать стерильность и сохранение структуры, а также пластических свойств трансплантатов (Шангина О.Р. 2007). Все виды выпус каемых биоматериалов подвергаются постоянному контролю, включающему тестиро вание доноров на особо опасные инфекции, входящий контроль донорского материала, контроль трансплантатов на соответствие стандартам, бактериологический контроль готовой продукции. Кроме того, при разработке новых видов трансплантатов, при про ведении периодических испытаний серийной продукции и выборочно на любом этапе производства для контроля соблюдения технологического регламента осуществляется периодический контроль, включающий биомеханический, электронно-микроскопи ческий, поляризационный, гистохимический, токсикологический и хирургический.

Таким образом, научное обоснование, передовые технологии, методы конт роля и соответствие стандартам каждого этапа изготовления соединительнотканных трансплантатов позволяют выпускать надежный и безопасный трансплантационный материал для всех областей восстановительной хирургии, гарантируя стерильность, со хранение их структуры и пластических свойств в течение 5 лет.

1 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка изуЧение СоСтава и СвоЙСтв коСтнопЛаСтиЧеСкиХ аЛЛобиоматериаЛов Шаркеев Ю.п., 2кирилова и.а., 2подорожная в.т., Легостаева е.в., 1уваркин п.в.

Институт физики прочности и материаловедения СО РАН, г. Томск, ФГУ «Новосибирский НИИТО Росмедтехнологий», г. Новосибирск Specimens of native (initial) and deproteinized bone tissue were analyzed. All bone tissue specimens had small amount of deformation typical for fragile materials – 1%.

Proportionality limit for native bone tissue was 27 MPa, and that for deproteinized tissue – MPa. Strength limit bone tissue had the value of 80-90 MPa. Collagen presence influenced the Young’s module which was 110 MPa in deproteinized bone tissue, two-fold decreased from that in initial bone tissue – 230 MPa. Topography of specimens and fracture surfaces were more pronounced after deproteinization.

The study of physical and mechanical properties and composition of compact bone specimens gives an understanding of processing type influence on bone tissue structure and properties.

Цель исследования. Сравнительное изучение прочностных свойств и состава костно-пластических материалов после различных видов обработки.

материал и методы. Исследовали образцы нативной и депротеинизирован ной костной ткани. Прочностные свойства изучали путем одноосного статического растяжения образцов костной ткани с автоматической записью кривых нагружения. Из кривых растяжения были рассчитаны следующие механические характеристики: пре дел пропорциональности, предел прочности, относительная деформация до разрушения и модуль Юнга. Изучены изменения морфологии поверхности костных материалов, эле ментного состава, габаритных размеров, сухого веса образцов в зависимости от вида обработки.

результаты. Все образцы костной ткани имели малую величину деформации, не более 1%, что характерно для хрупких материалов. Предел пропорциональности для нативной костной ткани равен – 27 МПа, для депротеинизированной – 29 МПа. Предел прочности костной ткани составляет 80–90 МПа. Наличие коллагена оказывает влияние на модуль Юнга, который для депротеинизированной костной ткани снижается в два раза и равен 110 МПа, а для костной ткани в исходном состоянии – 230 МПа. Вне зависи мости от наличия или отсутствия предварительной обработки образцов костной ткани при испытании на прочность происходит хрупкое разрушение материала, о чем свиде тельствуют сколы ступеньками. В целом характер изломов подобен, но в то же время наличие на сколах пластинок с острыми краями указывает на более хрупкий характер разрушения депротеинизированной костной «соломки». Рельеф поверхности образцов кости, и поверхности излома более развит после депротеинизации. Проведена оценка соотношения кальция к фосфору (Ca/P) в образцах костной ткани. Оказалось, что оно варьирует от 2,0 для образцов нативной костной ткани до 2,8, для депротеинизирован ной костной «соломки».

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка Масса нативной и депротеинизированной костной «соломки» одинаковых раз меров статистически достоверно отличается. ДПК соломка в процессе депротеинизации теряет 19,4% своего веса. Депротеинизированная и нативная костная «соломка» одного веса отличаются по длине на 24,12%. Достаточная точность среднего во всех случаях оказалась меньше 5%. Коэффициент вариации во всех случаях меньше 10%, следова тельно, вариация мала. При определении альбумина максимальное значение в нативной костной «соломке» составило 24 мкг/мл, а в депротеинизированной 2 мкг/мл, получен ные данные свидетельствуют о том, что коагуляция и экстракция органического компо нента осуществлена в достаточном объеме.

обсуждение. Полученные нами данные по механичеким свойствам костной ткани после различных видов обработки: обезжиривание и высушивание для нативной костной «соломки» или обезжиривание, депротеинизация и высушивание для депро теинизированной «соломки», несколько отличаются от приведенных в литературе. Это связано с тем, что различные авторы, во-первых, испытывают разные участки кости, и, во-вторых, механические испытания образцов осуществляют различных условиях.

Кроме того, мы испытывали не цельный фрагмент диафиза трубчатой кости, а радиаль ный распил в виде кортикальной «соломки», что заведомо снижает прочностные свойс тва костной ткани, и в первую очередь предел упругости. Мы исследовали прочностные свойства фрагментов костной ткани именно в том варианте, в каком костно-пластичес кие материалы используются для органосохраняющих операций на различных сегмен тах скелета человека.

заключение. Изучение свойств и состава образцов компактной кости позво ляет получить представление о влиянии процесса обработки на структуру и свойства костной ткани.

морФоЛоГиЧеСкое обоСнование ЦеЛеСообразноСти применениЯ транСпЛантаЦии криоконСервированноЙ пЛаЦентЫ в неЙрооФтаЛЬмоЛоГии Шепитько в.и., Якушко е.С.

Высшее Государственное учебное заведение Украины «Украинская Медицинская Стоматологическая Академия», г. Полтава, Украина The transplantation of cryopreserved placenta results in the plethora of vessels of optic nerve. Maximum diameter of vessels is on 7 day of experiment. The transplantation of cryopreserved placenta does not cause the pathological changes in optic nerve.

Актуальным вопросом экспериментальной и клинической медицины является разработка и внедрение в практику использование продуктов фетоплацентарного комплек са для лечения различных патологических состояний. Мало изученным остается вопрос применения криоконсервированных фетоплацентарных тканей в нейроофальмологии.

Целью исследования явилось изучение влияния трансплантации криоконсер вированной плаценты на состояние зрительного нерва.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка материал и методы. Экспериментальное исследование было проведено на половозрелых крысах линии «Вистар». Первая группа животных – контрольная (5 крыс), во второй группе животных была произведена одноразовая подкожная трансплантация криоконсервированной плаценты (20 крыс). Эвтаназия животных проводилась на 2, 7, 14 и 30-е сутки эксперимента путем передозировки наркоза. Материалом служила рет робульбарная часть зрительного нерва крыс. По общепринятой методике была произ ведена заливка в ЭПОН – 812. Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим и полихромным красителем и изучали в световом микроскопе.

результаты. На 2-е сутки эксперимента мы наблюдали изменения диаметра сосудов микроциркуляторного русла твердой и мягкой оболочек зрительного нерва.

Увеличилось их кровенаполнение. Сами оболочки были не изменены. Нами была отме чена реакция клеток глии на трансплантант. Уменьшился объем ядер и ядерно-цитоплаз матическое отношение астроцитов и олигодендроцитов. При этом на светооптическом уровне клетки и их ядра не были изменены. Нервные волокна округлой формы, покрыты миелином.

7-е сутки характеризовались дальнейшим увеличением кровенаполнения со судов микроциркуляторного русла зрительного нерва. Диаметр их увеличился в 1, раза по сравнению с контрольной группой. Мы наблюдали незначительный отек ок ружающей их соединительной ткани, соединительнотканных перегородок внутри не рва, толщина которых возросла в 1,4 раза по сравнению с контролем. Размеры клеток глии существенно не отличались от таковых на 2-е сутки. Нервные волокна были не изменены.

На 14-е сутки эксперимента диаметр сосудов микроциркуляторного русла еще достоверно отличался от контроля, но наблюдалась тенденция уменьшения их кровена полнения, нормализации кровообращения. Нами было отмечено постепенное восстанов ление объема ядер клеток глии и увеличение ядерно-цитоплазматического отношения.

Нервные волокна неизмененной формы и размеров.

На 30-е сутки структурные компоненты зрительного нерва не отличались от варианта нормы. Сосуды микроциркуляторного русла были обычного диаметра.

Астроциты имели крупные светлые ядра овальной формы, с четко очерченной карио леммой. Ядра олигодендроцитов меньше ядер астроцитов, округлой формы, темные.

Нервные волокна покрыты миелиновой оболочкой.

выводы. Таким образом, трансплантация криоконсервированной плаценты не приводит к патологическим изменениям, способствует улучшению кровообращения в зрительном нерве. Учитывая также ее противовоспалительные свойства, это открыва ет перспективы дальнейших исследований применения трансплантации плаценты при патологиях зрительного нерва воспалительного генеза.

вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка теХноЛоГиЯ конСтруированиЯ биокератопротезноГо компЛекСа С иСпоЛЬзованием куЛЬтивированнЫХ ФибробЛаСтов коЖи реЦипиента Шипунова а.в., 1борзенок С.а., 2онищенко н.а., 2крашенинников м.е., комах Ю.а., 1мороз з.и., 1ковшун е.в., 1волкова о.С., тонаева Х.Д., 1ролик о.и.

ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. академика С.Н. Федорова Росмедтехнологии», ФГУ «ФНЦ трансплантологии и искусственных органов им. академика В.И. Шумакова», Москва Technology of production of a biokeratoprosthesis complex construction is develop ing on the basis of allogenic corneal matrix and cultivated fibroblasts of recipient for treatment of thinned leukomas.

При истонченных бельмах единственным эффективным способом восстанов ления зрения является кератопротезирование. В настоящее время в связи с развитием клеточной и тканевой инженерии, все чаще используются культивированные клетки че ловека для замещения и восстановления поврежденных тканей.

Цель. Разработка технологии изготовления конструкции биокератопротезного комплекса на основе аллогенного роговичного матрикса и культивированных фиброб ластов реципиента для лечения истонченных сосудистых бельм.

материалы и методы. На доклиническом этапе используются корнео-скле ральные диски трупных донорских глаз человека с фотохимической модификацией коллагеновых волокон, аллогенные фибробласты кожи доноров-трупов на этапе отра ботки методики выделения клеток, фибробласты кожи реципиентов на этапе изготов ления биокератопротезного комплекса. Исследования проводились с использованием культуральных, морфологических и иммуногистохимических методов исследований.

Статистическая обработка данных проводилась методами параметрической и корреля ционной статистики.

результаты и обсуждения. Предложенная биоинженерная конструкция ке ратопротезного комплекса состоит из опорной части кератопротеза Федорова-Зуева, модифицированной стромальной матрицы аллогенной донорской роговицы, имбибиро ванной функционально активными миофибробластами реципиента.

Изначально использовались фибробласты кожи реципиента, которые на стадии культивирования трансформировались в миофибробласты, способные синтезировать коллаген III типа. Биологической матрицей для прокультивированых аутомиофиброб ластов служила донорская роговица, предварительно прошедшая фотохимическую модификацию коллагеновых волокон. Ее стромальный каркас имел строго ориентиро ванные, параллельно расположенные по отношению друг к другу коллагеновые плас тины со щелевыми пространствами, достаточными для имбибиции миофибробластов и стабилизированными межфибриллярными связями.

На доклиническом этапе методами морфологических и гистохимических ис следований показана биоинженерная состоятельность предложенной конструкции био кератопротезного комплекса и возможность ее апробации в клинике.

14 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка компЛекСнаЯ оЦенка ЖизнеСпоСобноСти тиреоиДноГо аутотранСпЛантата поСЛе переСаДки в мЫШЦЫ беДра Штойко м.а., виноградов С.Ю., параскун а.а.

ГОУ ВПО Ивановская Государственная Медицинская Академия Росздрава, г. Иваново With the help of morphological, fluorescent histochemical аnd computer statistic methods we analysed the survival rate and functional ability of thyroid autotranspiant on the experimental model of hypothyroidism in 64 rats. Under conditions of partial resection of re moved fragments (2-3 mm) to the femoral muscles the functional activiti of the autotransplant was marked in all cases. We found out a considerable synchronisity of morphofunctional indi cators changes in autotransplant and the T4 level, and also a predominant role of autotrans plant in hormonal background restoration.

Целью настоящего исследования явилось изучение морфофункционального состояния аутотрансплантата щитовидной железы (ЩЖ) при моделировании гипоти реоза путем ее частичной резекции (70%) в условиях свободной пересадки удаленных фрагментов (2-3 мм) в мышцы бедра. Работа выполнена на 64 крысах-самцах линии Август. Сроки эксперимента составили 1, 3, 7, 14, 21, 30, 60 и 90 суток. Животных опе рировали и выводили из опыта в соответствии с «Правилами проведения работ с ис пользованием экспериментальных животных» (Приказ Минвуза от 13.11.1984 № 724).

Морфометрические исследования гистологических препаратов проводили с помощью автоматического анализатора изображений «Иста Видео-Тест». Используя программу ВИДЕО ТЕСТ МАСТЕР, измеряли диаметр и площадь просвета перифолликулярных гемокапилляров, количество перифолликулярных капилляров, прилегающих к одному фолликулу. На основе полученных данных вычисляли: удельную длину гемокапилля ров, коэффициент капиллярного обеспечения фолликулярного аппарата, объем крови в капиллярном русле. С целью оценки функциональной активности аутотрансплантата измеряли высоту тироцитов, внутренний диаметр фолликулов и рассчитывали индекс накопления коллоида (ИНК). В парафиновых срезах, обработанных флуоресцентно-гис тохимическим методом Rigler в модификации В.Н.Карнаухова, исследовали флуорес ценцию и количественное содержание односпиральных (ОНК) и двуспиральных (ДНК) нуклеиновых кислот в тироцитах. Параметр, как отношение содержания одно- и двус пиральных кислот (ОНК/ДНК), использовали для оценки синтетической активности изучаемых клеток. Радиоиммунологически в сыворотке крови животных определяли количество тироксина (Т4).

В ходе исследований было выявлено, что при пересадке в мышечную ткань ау тотрансплантат ЩЖ подвергается морфофункциональным перестройкам, отражающим адаптацию тиреоидной паренхимы к новым условиям существования. Преобразования носят фазовый характер. В первые 3 суток после пересадки, на фоне воспалительно го процесса, отмечена активная деструкция и дезинтеграция органных структур.

Тироциты вакуолизированы, крупные и средние фолликулы разрушаются, коллоид разжижается и десквамируется, капилляры едва визуализируются и их количественная оценка затруднена. В течение следующих 2 недель в паренхиме трансплантата образу вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка ются микрофолликулы и появляются средние, имеют место значительные скопления тироцитов без четкой фолликулярной организации, повышается содержание ДНК в клетках фолликулярного эпителия, достоверно возрастает удельная длина капилляров и площадь их обменной поверхности. Все это может свидетельствовать об улучшении васкуляризаци и преобладании регенераторных процессов в трансплантате. Данные ис следования трансплантата на 3 неделе после операции говорят о наиболее оптимальном обеспечении микроциркуляции крови. Цитоплазма тироцитов зерниста, они актив но резорбируют коллоид, ИНК имеет минимальные значения. Высота, синтетическая активность клеток фолликулярного эпителия и уровень тироксина в крови животных достоверно максимальны. В последующие сроки эксперимента тиреоидная паренхима аутотрансплантата имеет типичное фолликулярное строение, сохраняется значительное количество клеток интерфолликулярных островков. Количество Т4 в сыворотке крови крыс близко к контрольному. Ранговый корреляционный анализ указывает на значи тельное хроносопряжение изменений морфометрических показателей, ИНК, параметра в трансплантате и уровня тироксина крови. Таким образом, наши исследования пока зали функциональную состоятельность аутотрансплантата ЩЖ в течение всего срока эксперимента. Регрессионный анализ выявил преобладающую роль аутотрансплантата в восстановлении грмонального фона после резекции.

теСтирование материаЛов ДЛЯ замеСтитеЛЬноЙ кЛетоЧноЙ терапии С применением коЖи ЧеЛовека Юдинцева н.м., 1блинова м.и., 3питкин м.р., 2нудьга Л.а., 2бочек а.м., Самусенко и.а., 1пинаев Г.п.

Институт цитологии РАН, 2Институт высокомолекулярных соединений РАН, Tufts University School of Medicine, Boston, MA, USA;

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова МЧС России, Санкт-Петербург The cultivation cells of human skin (keratinocytes and fibroblasts) on samples of the titan and resorbable materials on a basis hitosan and collagen have been executed in this work. Use of cultivated cells of skin allows to test the given materials used in replaceable cel lular therapy.

Используя культивируемые клетки кожи человека (кератиноциты и фиброб ласты), можно успешно тестировать материалы, используемые в заместительной кле точной терапии. Такой скрининг в условиях in vitro дает возможность заранее отобрать наиболее оптимальные варианты материалов с целью дальнейшего этапа проверки на лабораторных животных.

Таким образом, были выполнены экспериментальные исследования образцов титана, предназначенных для протезов нижних конечностей человека, чтобы опреде лить оптимальные условия взаимодействия материала с тканями организма, окружаю щими имплантированный протез. С этой целью в условиях in vitro оценивалась реакция клеток кожи (фибробластов и кератиноцитов) и мультипотентных мезенхимальных 14 вОпрОсы изгОтОвления иМплантатОв, экспериМентальные исследОвания, Оценка стромальных клеток костного мозга на структуру имплантата, определяющего механи ческую прочность его, и свойства самого материала. Было показано, что структура по ристости имплантата определяет морфологическую реакцию фибробластов, что в свою очередь может способствовать прочности взаимодействия клеток с имплантатом. По степени формирования монослоя клеток на поверхности имплантата судили о свойствах материала, влияющих на их функциональную активность. В результате тестирования был выбран оптимальный вариант из всех предложенных, и затем проведены исследова ния в условиях in vivo на лабораторных животных.

Развитие клеточных технологий в области регенеративной медицины приво дит к созданию новых композиционных материалов, совместимых с клетками и спо собных быть использованными в качестве матриц для культивирования клеток или для формирования трехмерных тканеподобных структур, предназначенных для трансплан тации. В качестве источника создания таких композиционных материалов перспек тивными предполагаются природные полимеры, которые в условиях организма могут резорбировать без негативных последствий для здоровья. Были выполнены исследова ния по созданию пленок и губок для культивирования кератиноцитов и фибробластов кожи человека на основе хитозана в композиции с коллагеном. Гистологический анализ биоптатов регенерирующей соединительной ткани на модели экспериментальной раны у крыс показал положительный эффект.

14 кЛетоЧнЫе теХноЛоГии, тканеваЯ инЖенериЯ 14 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия кЛетоЧнЫе теХноЛоГии в ЛеЧении проЛеЖневЫХ ран алейник Д.Я., поято т.в., морозов и.н., атясова м.Л.

ФГУ «Нижегородский НИИ травматологии и ортопедии Росмедтехнологий», ГОУ ВПО «Ниж. ГМА Росздрава», г. Нижний Новгород Results of cultivated fibroblasts usage at bedsores treatment are presented in this article. The wounds were stable to ordinary methods of cure and existed during more than year. When preliminary wound preparation was fulfilled carried transplantation of the 4th-5th passage cell culture that formed mono-layer. The positive dynamics of wound conditions was observed in all patients, the bedsores healing come in 10-23 days. There were not any relapses of bedsore.

Работа посвящена лечению пролежневых ран у 6 пациентов с последствиями спинномозговой травмы.

Пациенты безуспешно лечились традиционными методами в течение года и бо лее в различных стационарах. Локализация ран была типичной. Площадь составляла 4- см2, дно было покрыто бледными, мелкозернистыми, часто склерозированными грану ляциями, при механическом раздражении слабо кровоточащими. Края ран были рубцо во изменены, краевая эпителизация не выражена, отделяемое скудное серозно-гнойное.

Для успешного лечения требовалась тщательная подготовка, заключавшаяся в проведении ежедневного (иногда дважды в день) туалета ран в течение 7-10 дней с антисептиками, углеволокнистыми сорбентами, антибиотиками. Непосредственно пе ред трансплантацией клеток раны осторожно механически очищали от поверхностного склерозированного слоя до появления «кровавой росы».

Использовали культуры фибробластов 5-10 пассажа, сформировавшие конф люэнтный или субконфлюэнтный монослой. В качестве носителя использовали пленку «Фолидерм» (Санкт-Петербург).

Непосредственно перед трансплантацией клеточные трансплантаты дважды отмывали от среды теплым стерильным физиологическим раствором. Пленки с куль турами осторожно накладывали клеточным слоем на раневую поверхность так, чтобы они плотно прилегали к ране и перекрывали её края. Сверху пленки укрывали влажно высыхающими повязками.

У всех пациентов отмечали положительную динамику состояния ран, о чем свидетельствовало изменение характера грануляций, которые становились более сочны ми. На третьей-четвертой перевязке фиксировалось появление зоны краевой или мелких очагов эпителизации в центре раневого дефекта. Цитологическая картина менялась с дегенеративно-воспалительной или воспалительной на воспалительную и воспалитель но-регенераторную. Пролежневые раны полностью эпителизировались в сроки от 10 до 23 дней. Рецидивов пролежней не наблюдалось.

Полученные результаты демонстрируют целесообразность применения кле точных культур при лечении пролежневых ран.

14 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия некоторЫе ХарактериСтики куЛЬтур ФибробЛаСтов, поЛуЧеннЫХ из разЛиЧнЫХ иСтоЧников алейник Д.Я., Чарыкова и.н., Сидорова т.и.

ФГУ «Нижегородский НИИ травматологии и ортопедии Росмедтехнологий», г. Нижний Новгород The functional peculiarity of the diffeent genesis fibroblasts in cultures was repre sented in this article, as the results of the research in vitro. Investigation was come out with cultures of the fibroblasts those obtained from different following sources: 6 samples – from unaltered skin that obtained by «Circumcizio» operation, 6 ones – from forearm skin of healthy volunteers, 6 ones – from unaltered skin of the patients with acute thermal trauma, 5 others – from cicatricial altered skin and 5 – from skin of psoriastic areas.

The results of the research showed that these cells differ each other functionally.

In particular, some differences in fibronectine and IL-6 synthesis by cultured fibroblasts from unaltered skin, cicatricial altered one and skin from psoriastic affected parts were revealed.

Целью настоящего исследования было изучение особенностей функциони рования фибробластов различного генеза в культуре in vitro.

материалом для исследования стали 12 культур фибробластов, полученных из биоптатов здоровой кожи (6 – на операции «Circumcizio», 6 – из неизмененной кожи предплечья здоровых добровольцев), 6 культур – из неизмененной кожи больных с ос трой ожоговой травмой, 5 – из рубцовоизмененной кожи, 5 – из кожи псориатических очагов. Состояние культуры контролировали с помощью инвертированного микроско па и компьютерной программы слежения за ростом культуры. Фиксировали изменения культуры в процессе роста каждые 24 часа в течение 5 суток и в те же сроки определяли изменения уровня фибронектина и цитокинов (ИЛ-6 и ФНО-) в культуральной среде с помощью ИФА.

Культуры получали по стандартной технологии в условиях абсолютной влаж ности, 37оС, 5% СО2. Для исследования использовали культуры 4-6 пассажа с исходной концент-рацией 20 тысяч клеток на 1 см2.

Визуальное наблюдение не позволило выявить отчетливых различий культур различного генеза. Все культуры формировали монослой в равные сроки. Картина моно слоя была характерной для фибробластов с типичным рисунком. Клетки были преиму щественно веретеновидной формы, с четкими контурами, выраженными отростками, плотными ядрами. Характер синтеза одного из основных белков межуточного вещества – фибронектина у клеток неизмененной кожи различного происхождения оказался раз личен. Учитывая клинические данные, различную локализацию места забора биопта тов, возможные возрастные различия доноров, в качестве контрольных данных были отобраны результаты, полученные на штаммах культур, выделенных из кожи здоровых добровольцев. Именно с этими результатами проводилось сравнение данных, получен ных на штаммах культур патологически измененной кожи. У штаммов фибробластов, полученных из рубцово-измененной кожи, уровень фибронектина через 24 часа после пересева был достоверно ниже, чем у фибробластов здоровой кожи, в последующие дни он интенсивно нарастал и к четвертым суткам отчетливо превышал таковой в клетках культур контрольных штаммов. В культурах клеток кожи псориатических очагов синтез 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия фибронектина был значительно ниже, чем в культурах клеток, полученных из биоптатов неизмененной кожи здоровых добровольцев, и несколько ниже, чем в культурах кле ток рубцово-измененной кожи. Процесс накопления этого белка в культурах штаммов псориатических очагов в течение первых четырех суток после пересева хотя и шел ин тенсивнее, но не достигал уровня, зафиксированного в культурах клеток неизмененной кожи. Определяли уровень спонтанного и стимулированного ИЛ-6 и ФНО- в культу рах дермальных фибробластов различного происхож-дения и накопление этих полипеп тидов в культуральной среде в процессе роста культуры. Характер накопления ИЛ- фибробластами, выделенными из здоровой кожи, значительно отличался от такового у клеток, выделенных из рубцово-измененной кожи. Отчетливые различия выявлены и в уровнях спонтанного и стимулированного образования этого полипептида клетками различного происхождения. Достоверных отличий изменения уровня ФНО- в процес се роста культур не выявлено.

Таким образом, при отсутствии отчетливых объективных отличий при микро скопии культур фибробластов, полученных из разных источников, функционально эти клетки отличаются друг от друга. Изучение синтеза различных полипептидов, цитоки нов, факторов роста на этапах роста культуры представляет интерес для последующих исследований и понимания процессов.

кЛетоЧнЫе теХноЛоГии воССтановЛениЯ повреЖДенноЙ коЖи ЧеЛовека блинова м.и., Юдинцева н.м., плескач н.м., Швед Ю.а., пинаев Г.п.

Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург The technology of restoration of the broken skin surface with use cultivated kerati nocytes and fibroblasts human skin is developed. It includes a number of stages: from a capture of a material for allocation of cells, allocation and cultivation of cells, preparation of cellular products, their transplantation on wounds, healing of wounds. This technology is used for treatment of burns, acute ulcers, and the other different wounds.

Для восстановления кожи по технологии, разработанной в Институте ци тологии РАН, используются аллогенные кератиноциты и дермальные фиброблас ты, выделенные из здоровой донорской кожи, взятой в косметологической клинике.

Кератиноциты выделяют по методу Рейнвальда и Грина с нашими модификациями. В результате их культивирования готовится многослойный пласт кератиноцитов (МПК) – аналог эпидермиса. МПК выращивается без фидерных клеток на субстрате из колла гена I типа или на резорбируемой подложке из полилактида, что очень сильно облегчает трансплантацию его на рану. Дермальные фибробласты выделяют методом миграции их из фрагментов кожной ткани. Фибробласты культивируются в течение нескольких пассажей (не более 1-2) и используются для приготовления клеточного продукта – де рмального эквивалента (ДЭ), являющегося аналогом дермы. Избыток фибробластов хранится в атмосфере жидкого азота, что позволяет в экстренных ситуациях быстро 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия приготовить необходимое количество ДЭ. ДЭ готовится на основе коллагена или ком мерческого препарата фибриногена из плазмы крови человека. Для контроля качества указанных продуктов методом ПЦР определяется наличие/отсутствие в культивиру емых клетках гепатита, цитомегаловируса, микоплазмы. Контроль за исходным ма териалом, из которого выделяются клетки, ограничивается данными клинических показаний, необходимых для проведения хирургических операций. Совмещение ДЭ и кератиноцитов позволило приготовить еще один клеточный продукт – эквивалент полной кожи. На клеточные продукты составлены Технические условия и проведены технические и токсикологические испытания. На ДЭ и МПК выполнены в 3-х клини ках клинические испытания, что позволило получить на эти продукты разрешения МЗ РФ на серийное производство и клиническое применение. Разработанные клеточные продукты применяются в клиниках Санкт-Петербурга для лечения ожогов, трофичес ких язв, свищей и ран другого происхождения, а также в стоматологии для лечения парадонтоза.

аДГезивноСтЬ ЭпитеЛиопоДобнЫХ кЛеток к ХитозановЫм пЛенкам бузинова Д.а., Хмельницкая е.а., Шиповская а.б., островский н.в., пучиньян Д.м.

Саратовский Государственный Университет им. Н.Г. Чернышевского, г. Саратов Epithelial cells reveal different adhesive behaviour to chitosan membranes accord ing to their origin.

В образовательно-научном институте наноструктур и биосистем Саратовского государственного университета разрабатываются биодеградируемые пленки из хитоза на для выращивания клеток кожи в условиях in vitro с последующей трансплантацией на ожоговую рану.

Цель исследования. Изучить адгезивные свойства эпителиальных по морфо логии клеток млекопитающих эмбрионального и постнатального происхождения, а так же клеток карциномы легкого человека к хитозановым плёнкам.

материал и методы. Для получения хитозановых плёнок использовали хи тозан (M3=87 кДа и СД=83.6 мольн. %) производства ЗАО «Биопрогресс» (Россия) и уксусную кислоту в концентрации С=2 мас. % квалификации х.ч. Пленки получали по ливом растворов хитозана на специальные полиэтилентерефталатные подложки с пос ледующим испарением растворителя. Формование пленки проводили при температуре Т=22±2°С и нормальном атмосферном давлении. Для перевода хитозана из солевой фор мы в форму основания плёнки выдерживали в 1 М NaOH, затем промывали дистил лированной водой, высушивали на воздухе и стерилизовали УФ-светом в ламинарном боксе.

В качестве биологических объектов использовали культуры клеток карцино мы легкого человека (А549), эпителия почки собаки (MDCK) и эпителия почки эмбриона макаки резус (МА–104) из коллекции НИИ вирусологии РАМН. Культивирование кле 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия точных культур проводили в ростовой среде DMEM:F12 с 10%-ной эмбриональной сы вороткой коров (ООО «Биолот», Россия) без добавления антибиотиков. Ферментативную дезагрегацию клеток проводили 0,25%-ным раствором трипсина с версеном в соотноше нии 3:1 при 37°С. На образцы пленок высевали клеточную суспензию из расчёта 250 тыс.

клеток на см2. Образцы инкубировали в условиях насыщающей влажности при 37°С в газовой среде с 5%-ным содержанием СО2. Среду меняли на 2–3 сутки. Наблюдение за ростом клеток проводили в течение 9 суток. Контроль за процессом клонирования изу чаемых культур эпителиальных клеток проводили с помощью инвертированного мик роскопа «Биолам П», регистрацию изображений производили цифровой CCD-камерой DMC 300 (разрешение 3 Mpx).

результаты. Сравнительный анализ полученных результатов показал, что эффективность адгезии эпителиальных опухолевых клеток человека на предложенных образцах хитозановых пленок ниже, чем эпителиоцитов почек макаки и собаки. Так, клетки эмбрионального эпителия обезьяны макаки резус и почечного эпителия собаки образуют монослой на 4 и 7-е сутки культивирования соответственно, а эпителиоциты карциномы легкого человека не формируют полноценный монослой в течение 9 суток наблюдения.

Таким образом, эпителиальные клетки проявляют различную адгезивность к хитозановым плёнкам в зависимости от своего происхождения. В дальнейшем пред полагается изучение возможности использования полученных образцов хитозановой пленки в качестве матрикса для выращивания эпителиоцитов кожи человека.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект № 09-03- офи_м).

ЭкСпреССиЯ антиапоптотиЧеСкоГо беЛка BCL- у боЛЬнЫХ аЛкоЛЬнЫм Циррозом пеЧени поСЛе транСпЛантаЦии аутоГеннЫХ ГемопоЭтиЧеСкиХ СтвоЛовЫХ кЛеток бурганова Г.р., Гумерова а.а., одинцова а.Х., титова м.а., киясов а.п., абдулхаков С.р.

Казанский Государственный Медицинский Университет, г. Казань Transplantation of stem cells (SC) is often seen from the standpoint of risk of tumor development. In this regard, the purpose of our study was to investigate the effect of autologous hematopoietic SC transplantation to patients with alcoholic liver cirrhosis on the expression of Bcl-2. Expression of Bcl-2 is considered as one of the hallmarks of malignant transforma tion of cells. The study was performed on liver biopsies of 6 patients with alcoholic liver cir rhosis. Immunohistochemistry was performed for death receptor – antiapoptotic Bcl-2 protein.

A significant number of Bcl-2-positive cells were seen in liver biopsy before transplantation, which were localized in liver parenchyma, and in the infiltrates around the portal tracts. Three months after transplantation, the number of Bcl-2-positive cells decreased. These results might indicate a reduction in the risk of carcinogenesis in the liver as a result of therapy with autolo gous SС.

1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия Bcl-2 – антиапоптотический белок, один из маркеров стволовых клеток.

Экспрессия Bcl-2 рассматривается также как один из признаков опухолевой трансфор мации клеток. Во многих случаях хронического поражения печени значимым механиз мом гибели клеток является апоптоз, кроме того, зачастую исходом такого заболевания становится первичный рак печени. Кроме того, применение клеточных технологий, свя занных со стволовыми клетками (СК), тоже нередко рассматривают с позиции риска раз вития опухоли в результате трансплантации. В связи с этим целью нашего исследования было изучить влияние аутотрансплантации гемопоэтических СК больным алкогольным циррозом печени на экспрессию Bcl-2.

материалы и методы. Исследования проведены в рамках Республиканской Целевой Программы «Развитие клеточной медицины в Республике Татарстан» на базе Республиканской Клинической Больницы МЗ РТ. Биоптаты печени 6 больных алкоголь ным циррозом печени, полученные до начала клеточной терапии и через 3 месяца после введения СК окрашивали с антителами к Bcl-2.

результаты. В биоптатах печени до трансплантации обнаружено значитель ное число Bcl-2-позитивных клеток, которые были локализованы как в паренхиме пече ни, так и в инфильтратах вокруг портальных трактов. В крупных инфильтратах число Bcl-2+ клеток было максимальным, среди них можно было выделить 3 типа клеток:

клетки воспаления с округлым или овальным ядром, клетки с отростками (синусоидные клетки) и единичные гепатоциты. В паренхиме и в мелких инфильтратах преобладали клетки с отростками. Также мы наблюдали слабую экспрессию Bcl-2 в холангиоцитах.

Через 3 месяца после трансплантации на фоне улучшения морфологической картины печени наблюдается снижение экспрессии Bcl-2: в крупных инфильтратах число Bcl-2 позитивных клеток уменьшалось, а в мелких они исчезали.

выводы. Полученные результаты могут свидетельствовать о снижении риска канцерогенеза в печени в результате проведения терапии аутогенными СК.

инноваЦионнЫе принЦипЫ в применении кЛетоЧнЫХ теХноЛоГиЙ ДЛЯ оЦенки безопаСноСти и ЭФФективноСти биоимпЛантатов и ДруГиХ меДиЦинСкиХ СреДСтв волова Л.т.

Самарский Государственный Медицинский Университет, г. Самара New principles of bioimplants, medical products, physiotherapeutic factors and other medical facilities testing were proposed on cell cultures. They consist of researches who realized not on single cells type but on several cultures of different cells consecutively replace each other in the traumatic process stages, neutrophilic granulocytes or programmed differentiations of con nective tissue and hemopoietic cells, and also obligatory estimation morphologic and functional conditions of cells monolayer along with components of cultural medium.

Биоимплантаты, изготовленные из тканей человека и животных, занимают про межуточное положение между средствами медицинского назначения и лекарственными 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия препаратами и не могут быть отнесены в полной мере к той или другой категории. Поэтому принятые в разных странах критерии оценки их безопасности и эффективности не явля ются совершенными и требуют дальнейшей разработки и новых подходов. Исследования на культурах клеток в мировом сообществе в настоящее время признаны наиболее этич ными и являются весьма перспективными для решения этих медицинских проблем.


Цель работы. Предложить инновационные принципы тестирования биоимп лантатов, других средств медицинского назначения, а так же лекарственных препаратов и физиотерапевтических факторов на культурах клеток.

Учитывая биогенную природу пластических материалов необходимо разрабо тать специфические стандарты для характеристики их свойств.

В Самарском банке тканей ИЭМБ СамГМУ ведется работа по формированию новой методологии лабораторного контроля безопасности и эффективности биоимп лантатов, а также других медицинских средств, основанной на применении клеточных технологий.

Принципы, сформулированные в работе, заключаются:

– во первых, в проведении исследований не на одном виде клеток, а на не скольких культурах различных клеток, последовательно сменяющих друг друга в фазах раневого процесса (например, микрофаги, макрофаги, фибробласты, хондробласты, ос теобласты) и определенных дифферонов;

– и во вторых: в обязательной оценке морфофункционального состояния кле ток монослоя наряду с компонентами культуральной среды.

В работе использованы морфологических, морфометрические, гистохимичес кие, иммунологические, биохимические и физические методы, в том числе, оригиналь ные инновационные лабораторные способы контроля качества исследуемых объектов.

Проведено тестирование 7 разновидностей костно-пластических материалов биогенной и небиогенной природы, 8 видов дентальных имплантатов и спиц, 4 вида полипропи леновых сеток для герниопластики, а так же изучено влияние электромагнитных ко лебаний (НЭМИ) и гомеопатических препаратов на жизнедеятельность различных кле точных пулов.

Проведенные исследования изучаемых факторов позволили выявить их не одинаковое влияние на адгезивные свойства и жизнеспособность клеток в культуре;

установить наличие или отсутствие биологического эффекта материала, физических факторов и лекарств;

оценить пролиферативную и синтетическую активность клеток в эксперименте (в том числе на коллагеногенез). Разработанный комплекс позволяет in vitro выявлять малотоксическое действие изучаемых объектов, позволяет говорить о присутствии и типе индукторов в биоимплантатах.

моделью в работе служила имплантация изучаемого объекта на прикреп ленные клетки культуры. С этой целью в лаборатории выращивали различные виды культур клеток (макрофаги, фибробласты, фибробластоподобные клетки стромы гиа линового хряща, эмбриональной костной ткани). Опыты проводили с биоматериалами серии «Лиопласт»®, а также с синтетическими препаратами аналогичного действия.

Параллельно каждой опытной серии ставили 3 контроля.

результаты комплексного исследования показали, что при помещении лио филизированного губчатого вещества кости на монослой фибробластов отсутствует повреждение клеток и наблюдается их адгезия. Установлено повышение коллагенсин тетической функции фибробластов в этих условиях в 5 раз по сравнению с контролем.

1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия Выяснилось, что консервированное губчатое вещество кости торговой марки «Лиопласт»

является прекрасным бионосителем для фибробластов Были выполнены также исследования брефоостеоматрикса (БОМ), который получают из незрелой костной ткани плодов человека (18-22 недель гестации) путем ее деминерализации в слабых растворах HCl кислоты. Этот материал исходно отличается от других видов костной ткани белковым спектром.

Уже через 2 часа после его имплантации на монослой культуры фиброблас тов четко видны 3 зоны. В непосредственной близости от образца происходит гибель клеток, затем следует зона низкой плотности, в отдаленной зоне плотность монослоя не изменяется.

К четвертым суткам эксперимента монослой полностью восстанавливается. В это же время отмечается значительное усиление пролиферации клеток. Показатели бел ковосвязанного оксипролина при экспозиции БОМ возрастают в 50 раз по сравнению с контролем и в 10 раз по сравнению с губчатым веществом кости.

И наоборот, после имплантации БОМ на монослой культуры хондробластов и фибробластоподобных клеток стромы хряща отмечается их тропность к этому материа лу, который можно с успехом использовать при создании комбинированного трансплан тата для хондропластики.

Исследования БОМ на культуре макрофагов, клеток предшествующих появле нию фибробластов в ране, участвующих в экссудативной фазе воспаления, при имплан тации на них БОМ обнаружили выраженный хемотаксис клеток к «кислому» образцу БОМ, имеющему PH меньше 4. После нейтрализации материала такой картины не на блюдали. Эти факты дают объяснение быстрому процессу рассасывания БОМ у живот ных и человека. В эксперименте in vivo (на кроликах, крысах, собаках и свиньях) ранее нами было установлено огромное скопление остеокластов вокруг БОМ, фагоцитирую щих данный материал, чего не наблюдалось при имплантации других недеминерализо ванных костных препаратов (с нейтральным рН).

Наши исследования демонстрируют важность показателя рН изучаемого объ екта в формировании клеточной реакции. «Кислые» средства повышают местный имму нитет и являются эффективными при лечении воспаления в фазу экссудации. Раскрыть механизм действия биогенных материалов на коллагенсинтезирующие клетки помогли наши исследования физиотерапевтических факторов (электромагнитные колебания низ кой интенсивности – НЕМИ). Было установлено, что при определенных режимах НЕМИ часть клеток погибает, а сохранившиеся начинают активно пролиферировать. Мы запа тентовали способ стимуляции роста фибробластов. А теперь успешно используем био логической эффект данного физического фактора при получении культур стромальных клеток лимфатических узлов.

Механизм действия НЕМИ и ДКТ объясняется тем, что после гибели части клеток биологически активные вещества выходят в среду и стимулируют сохранивши еся клетки в культуре. Этот факт подтверждает аксиому: без альтерации нет регенера ции. Но при воздействии НЕМИ, в отличие от биогенных материалов, синтез коллагена дермальными фибробластами не увеличивается, а наоборот, снижается в 1,5 раза по сравнению с контролем. Такой характер коллагеногенеза фибробластами является опти мальным для пациентов с ожоговой травмой. При воздействии НЭМИ не формируются грубые деформирующие рубцы, что и продемонстрировано нашими экспериментальны ми и клиническими исследованиями больных с ожогами.

1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия Испытания с использованием клеточных технологий «аллогенного гидроксиа пата» серии «Лиопласт», имеющего щелочную реакцию, и синтетического гидроксиапа тита с нейтральной реакцией, показали неодинаковый характер ответа клеток культуры на их имплантацию. Так при помещении на монослой фибробластов нанокристалличес кого материала, представляющего собой комплекс из минерального компонента и не большого количества органического вещества костной ткани, наблюдается аналогичная картина эксперименту с брефоматриксом. Имела место гибель прилежащих к нему кле ток. Но уже к четвертым суткам восстанавливалась плотность монослоя и резко возрас тала пролиферативная активность фибробластов.

Вместе с тем, при исследовании синтетического гидроксиапатита не отмечено ни повреждающего, ни стимулирующего его действия как на клетки, так и на синтез ими коллагена. В то время как при «аллогеннном гидроксиапатите» содержание белко восвязанного оксипролина в культуральной среде увеличивается в 5 раз, по сравнению с контролем и синтетическим ГАП.

Таким образом, разработанный нами алгоритм контроля качества биоимплан татов и других медицинских средств с помощью культур клеток, позволяет параллель но вести анализ их безопасности, биосовместимости и биологической эффективности.

Примененный комплексный подход, заключающийся в исследовании состояния клеток монослоя и содержания продуктов жизнедеятельности клеток в культуральной среде, дает возможность оценки пролиферативной активности клеток и их синтетической функции в измененных условиях.

аЛЬтернативнЫЙ иСтоЧник СтвоЛовЫХ кЛеток ДЛЯ тканеинЖенернЫХ теХноЛоГиЙ в СтоматоЛоГии воложин Г.а., 2Докторов а.а., 3Десятниченко к.С., 1мкртчан Г.в.

Московский Государственный Медико-Стоматологический Университет, ГЦ Медико-биологических технологий, 3НПО «ПОЛИСТОМ», Москва Capacity to proliferation and osteogenic differentiation of pluripotent mesenchymal cells of alveolar process periosteum, periodontal ligament and specimens of cancellous bone tissue was estimated during in vitro experiment. It has been concluded that all this types of cells are promising sources for application in maxillofacial and oral surgery.

В стоматологии и челюстно-лицевой хирургии для возмещения костных дефектов все большее распространение находят технологии с использованием муль типотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК). Наиболее частыми источ никами их выделения являются костный мозг и подкожная жировая ткань, что связано с дополнительной хирургической инвазией для пациента. Между тем, имеются данные, указывающие на наличие такого рода клеток и в различных тканях полости рта, доступ к которым можно осуществить при плановой хирургической санации ротовой полости.

В частности, при удалении зубов верхней и нижней челюсти открывается доступ для получения материала, содержащего ММСК – биоптатов губчатой кости (БГК), перио 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия донтальной связки (ПС) и надкостницы альвеолярного отростка (НК), которые после пролиферации in vitro могут быть использованы для приготовления аутографтов. В на стоящем сообщении приводятся предварительные результаты, обосновывающие такую возможность.


Материал для цитологических исследований был получен от 25 пациентов в возрасте от 19 лет до 61 года в виде фрагментов БГК (n=12), НК (n=10) либо ПС (n=3) с максимальным размером 10 мм. Образцы с соблюдением асептики переносили в про бирки («Corning», США) с кондиционной средой (5 мл), состоящей: среды DMEM с высоким содержанием глюкозы (4,5 г/л) («ПанЭко», РФ), 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) («HyClon», США) и 200 ед/мл гентамицина. Пробирки с клетками центрифугировали при 200 g в течение 10 мин при 4оС, супернатант отбрасывали, а образцы переносили в новые стерильные пробирки и заливали новой порцией среды с высоким содержанием антибиотика. Пробирки энергично покачивали, достигая про мывания образцов стерильной средой, затем снова центрифугировали. Эту операцию по промыву и смене пробирок повторяли не менее 5 раз. После последнего центрифуги рования образцы стерильно переносили в чашки Петри («Corning», США) диаметром 3 см и заливали 1 мл среды. Далее с помощью стерильных ножниц или стерильных щипцов в ламинарном шкафу (Babcock TVG 1.14.1S, ФРГ) образцы измельчали до раз мера не более 1-2 мм. Среду удаляли и заливали образцы средой того же состава, но добавлением коллагеназы 1 типа (Sigma, США) 1 мг/мл. Инкубировали при 37оС в те чение 30 мин. После этого фрагменты переносили в коническую пробирку, куда доли вали 10 мл среды DMEM ЭТС, центрифугировали в течение 10 мин при 800 g при 4оС.

Супернатант отбрасывали, осадок снова ресуспендировали в 10 мл среды с сыворот кой, проводили повторное центрифугирование, после чего осадок ресуспендировали в 5 мл ростовой среды описанного состава с добавлением 10 нг/мл человеческого ре комбинантного основного фактора роста фибробластов (ФРФо) (CellGenix, Германия) и помещали в культуральный флакон площадью 25 см 2 («Corning», США), который инкубировали при 37оС в атмосфере с 5% углекислого газа в термостате (Sanyo MCO 15AC, Япония). Среду во флаконе меняли каждые 3-4 дня. По достижении клетками монослоя их пересевали используя трипсин («ПанЭко», РФ) или смесь трипсин/Версен («ПанЭко», РФ) по обычной схеме.

Клетки из тканей всех 3 типов исследовали на: способность к колониеобра зованию – % колоний, содержащих более 16 клеток, при культивировании 100 клеток 4-ого пассажа;

способность к индукции остеогенной дифференцировки – после инку бирования в кондиционной среде без ФРФо, содержащей 50 мкМ аскорбат-2-фосфата, мМ -глицерофосфата и 0,1 мкМ дексаметазона с измерением размеров костных узел ков;

активность щелочной фосфатазы (КФ 3.1.3.1) по McGadey (1970) и способность экс прессированного матрикса к минерализации – выявлением Са ализариновым красным.

Оказалось, что все три источника имеют сходные свойства при некоторой тенденции к более высокой способности к костеобразованию у клеток из ПС и более низкой – из БГК.

Отмечено также уменьшение способности ММСК к костеобразованию с увеличением возраста донора.

1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия тканепоДобнЫе образованиЯ С заДаннЫми биоЛоГиЧеСкими СвоЙСтвами на оСнове кЛетоЧноЙ и тканевоЙ инЖенерии IN VITRO ЭнДотеЛиаЛЬнЫХ капиЛЛЯрнЫХ СетеЙ Глотов в.а.

Смоленская Государственная Медицинская Академия, г. Смоленск Incorporation of the hydrodynamic factor in culture of an endothelium in vitro will give in spontaneous formation functioning capillary networks. It is offered by overlapping in one system in vitro cultures of an endothelium and microstreams of a medium to reproduce a phenomenon of appearance functioning cappilary networks.

Эндотелиальные клетки в культуре ткани in vitro могут организовываться в 3-мерные сетевидные струкутры. Этот феномен идентичен феномену образования эндотелиальных капиллярных сетей in vivo в начальной фазе ангиогенеза до начала микроциркуляции крови. Для образования полноценных функционирующих капил лярных сетей необходим гидродинамический фактор. Включение гидродинамического фактора в культуру эндотелия in vitro приведет к самопроизвольному формированию функционирующих саморазвивающихся капиллярных сетей. Воспроизведение это го феномена in vitro создаст реальные технологические предпосылки для получения in vitro искусственных саморазвивающихся многоклеточных тканеподобных обра зований с заданными биологическими свойствами, на основе которых можно будет конструировать и собирать структурно-функциональные единицы искусственных органов, которые в перспективе могут быть пригодны для трансплантации больным людям с целью компенсации утраченных функций поврежденных или отсутствующих органов.

Разработана технология получения капиллярных сетей в культуре эндотелия in vitro [Folkman J., Haudenschild C. 1980]. Установлена формообразовательная роль ге модинамического фактора для формирования микрососудистых сетей in vivo [Глотов В. А. 1992, 1995] (Проект РФФИ №94-04-13544 «Структурный анализ микрососудистых бифуркаций»). Предлагается путем совмещения в одной системе in vitro культуры эндо телия и микропотоков питательной среды воспроизвести феномен появления функцио нирующих саморазвивающихся капиллярных эндотелиальных сетей.

Разработан эскизный проект реактора для воспроизведения феномена появ ления функционирующих саморазвивающихся капиллярных эндотелиальных сетей in vitro. Изготовлен действующий макет генератора микропотоков питательной сре ды и матрицы для культивирования функционирующих капиллярных сетей (Проект РФФИ № 96-04-50991 «Клеточная и тканевая инженерия эндотелия (формирование в культуре эндотелия in vitro функционирующих саморазвивающихся капиллярных сетей)»).

1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия оЦенка иСпоЛЬзованиЯ аЛЬГинатноГо ГеЛЯ С поЛипептиДами ДЛЯ поДДерЖаниЯ ФункЦионаЛЬноЙ активноСти муЛЬтипотентнЫХ мезенХимаЛЬнЫХ СтромаЛЬнЫХ кЛеток, ДиФФеренЦируемЫХ по ХонДроГенному пути Горанова Ю.а., Эйсмонт о.Л., Горанов в.а., ермоленко е.м.

Белорусский Государственный Медицинский Университет, г. Минск, Беларусь Influence of alginate gel impregnated with polypeptide TGF-в1 and BMP-6 on the chondrogenic extracellular matrix production by multipotent mesechymal stromal stem cells from adipose tissue was evaluated. After 7 day incubation in the chondrogenic medium the production of extracellular matrix components was estimated by histological staining with alcian blue and immunohistological staining with antibodies to collagen type 2. The most ex tensive staining of extracellular matrix was registered in alginate gel cultures containing both peptides TGF-в1 and BMP-6 comparing with alginate gel cultures with only single polypeptide and monolayer culture.

Цель исследования. Оценка влияния альгинатного геля, насыщенного пептидами, на продукцию специфического хондрогенного межклеточного матрикса мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками, выделенными из жировой ткани (ММКЖК) при инкубации в условиях хондрогенной среды.

материалы и методы. Использовали культуру ММКЖК, подвергнутую хон дрогенной дифференцировке по методике Kern, S. et al. (2006), в условиях трехмерного альгинатного геля (4%), содержащего TGF-в1 и BMP-6 (в качестве контролей использова ли монослойную культуру ММКЖК и альгинатный гель, содержащие 1(0) из указанных пептидов). Приготовление альгинатного геля и заключение клеток в его состав осущест вляли в соответствии с методикой (Chia S. et al. 2005). В каждой экспериментальной группе в исследование брали 24 образца. Для оценки образования специфического хонд рогенного матрикса использовали гистологическое окрашивание с альциановым синим, а также иммуно-гистохимическое окрашивание с антителами к коллагену 2 типа (Zuk P.A. et al. 2006).

результаты. Создание адекватного матриксного носителя – одно из основных условий, необходимых для адекватной хондрогенной дифференцировки мультипотент ных мезенхимальных стромальных клеток. Наряду с этим, использование трехмерных матриксов со специфическими пептидами, может способствовать правильной дифференцировке, снижению апоптических процессов и пластичности хондрогенных клеток. Настоящее исследование выявило достоверно более выраженное образование хондрогенного матрикса в образцах с альгинатным гелем, содержащим специфические пептиды (TGF-в1 и BMP-6), к 7 суткам культивирования. Окрашивание альциановым синим было выражено в 18 образцах (75%) и имело более яркую и однородную насыщенность. Для коллагена 2 типа выраженная окраска определялась в 14 (58%) образцах. В то время как в альгинатном геле без добавления пептидов или с добавлением только одного из пептидов к указанному сроку окрашивание было выражено, в среднем, только в половине образцов. Еще в меньшем количестве образцов монослойной 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия культуры (1-3 в каждой экспериментальной группе) была зарегистрирована окраска, подтверждающая образование хондрогенного матрикса.

Положительным свойством используемого геля также являлась возможность сохранения гомогенного распределения клеток и их кластеров.

вывод. Альгинатный гидрогель, насыщенный TGF-в1 и BMP-6, продемонс трировал в эксперименте максимальную эффективность в плане поддержания адекват ной функциональной активности хондрогенных клеток.

1. Kern, S. et al. (2006) Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord, or adipose tissue. Stem Cells 24: 1294-1301.

2. Chia S. H. et al. (2005) Characterization of human nasal septal chondrocytes cultured in alginate. Journal of the American College of Surgeons, 2005, vol.200, №5, pp.

691-704.

3. Zuk P.A. et al. (2006) Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering. April 2001, 7(2): 211-228.

применение муЛЬтипотентнЫХ мезенХимаЛЬнЫХ СтромаЛЬнЫХ кЛеток (ммСк) на ДеминераЛизованнЫХ коСтно-ХрЯЩевЫХ матрикСаХ ДЛЯ воССтановЛениЯ повреЖДеннЫХ СуСтавнЫХ поверХноСтеЙ в ЭкСперименте Григорян а.С., 2Деев р.в., 1кругляков п.в., 1билибина а.а., 1Соколова и.б., павличенко н.н., 1полынцев Д.Г.

ООО «Транс-Технологии», 2ФГУ «РоссНИИТО им. Р.Р. Вредена» Росмедтехнологий, Санкт-Петербург The effects of the allogeneous demineralized bone-cartilagenous transplants, seeded with bone marrow-derived multipotent mesenchymal stromal cells (MMSCs), on the healing of the damaged articular cartilage and the subchondral bone were studied. It was shown that the use of such transplants promote the remodeling of the regenerating tissue and the recovery of the histotypic cartilaginous and osseous structures in comparison with the articular surface regeneration without any therapy or after the procedure of the mosaic chondroplasty.

Цель исследования. Гистологическая оценка эффектов трансплантации ау тогенных и аллогенных ММСК на деминерализованных аллогенных костно-хрящевых матриксах при остеохондральных дефектах суставной поверхности в эксперименте.

материалы и методы. Эксперименты были проведены на 10 беспородных кроликах-самцах в возрасте от 10 до 12 мес. Животные были разделены на 5 эксперимен тальных групп. Группа отрицательного контроля. После нанесения остеохондрального повреждения (диаметром 5 мм) суставной поверхности большеберцовой кости живот ным не проводилось лечения за исключением стандартного послеоперационного ухо да. Группа положительного контроля. Немедленно после нанесения остеохондрального повреждения животным проводилась процедура, аналогичная операции мозаичной хон дропластики (аутотрансплантация нативного костно-хрящевого фрагмента, изъятого из суставной поверхности, обратно в зону дефекта). Экспериментальная группа-I. В зону 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия дефекта помещали аллогенный деминерализованный костно-хрящевой трансплантат (аллоКХТ). Экспериментальная группа-II. В зону дефекта помещали деминерализо ванный аллоКХТ, заселенный аллогенными ММСК из расчета 7-10 млн. клеток на см3 трансплантата. Экспериментальная группа-III. После нанесения остеохондрального повреждения в зону дефекта помещали деминерализованный аллоКХТ, заселенный ау тогенными ММСК. Срок наблюдения составил 60 сут. Гистологические препараты были окрашены по стандартной методике гематоксилином и эозином.

результаты. Качественные отличия между экспериментальными группами выражены не всегда, однако в целом в группах клеточной трансплантации процессы ремоделирования регенерата протекают интенсивнее. Клинически значимых качествен ных различий при трансплантации ауто- и аллоММСК выявить при этом не удается, однако, в случае трансплантации аллоКХТ, заселенного аллогенными ММСК, мы на блюдали незначительную имфоцитарную инфильтрацию у всех животных в группе, не обнаруживавшуюся при трансплантации аутогенных клеток.

выводы. Трансплантация ММСК на деминерализованных костно- хрящевых матриксах при остеохондральных дефектах, оказывает положительные эффекты на ре паративные процессы. Тем не менее, у данного вида животных эти эффекты выражены не всегда в сравнении с естественным восстановлением суставной поверхности, а также регенерацией после процедуры мозаичной хондропластики. Основываясь на результа тах гистологического исследования, следует отметить перспективность использованно го нами подхода и необходимость поиска более адекватных экспериментальных моделей для его объективной оценки, несмотря на то, что примененная нами модель является общепринятой.

биотеХноЛоГиЧеСкие аСпектЫ тканевоЙ инЖенерии ХрЯЩевоЙ ткани зубов Д.а., 2костогрыз о.а., 2Страфун С.С.

Институт генетической и регенеративной медицины АМН Украины, Институт травматологии и ортопедии АМН Украины, г. Киев, Украина The technology of expansion and implantation of cultured autologous multipotent mesenchymal stromal cells (subcultured chondrocytes) in agarose hydrogel scaffold was opti mized for closure of large full-thickness osteochondral injuries of articular cartilage. The aspects of successful cultured stromal cell implantation are discussed. The implantation was performed of 5 patients. The clinical results will be published as soon as possible in original paper.

Аутотрансплантация хондроцитов прочно закрепилась в ортопедической ме дицине и направлена на лечение дефектов суставного хряща (Brittberg M. et al. 1994). На сегодняшний день этим сервисом воспользовалось более 50 000 человек во всем мире, в основном с хорошими и удовлетворительными клиническими результатами (Borg J., Haddad F. 2008).

Ключевыми вопросами, возникающими при разработке успешных технологий культивирования, экспансии и трансплантации стромальных хондроцитоподобных кле 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия ток в целях тканевой инженерии хряща и клеточной терапии хрящевых дефектов, по нашему мнению, являются следующие:

– источники аутогенных клеток: какие именно мультипотентные мезенхи мальные стромальные клетки (ММСК) могут быть наиболее эффективными в аспек те in vitro хондрогенеза и замещения хрящевых дефектов тканью, близкой к нативному хрящу? Потенциально ими могут быть ММСК костного мозга, прогениторные клетки хряща, перициты из дермы и стромально-сосудистая фракция клеток из жировой тка ни. При выборе варианта клеток, несомненно, нужно руководствоваться доступностью клеточного материала в каждом конкретном случае. Например, если речь идет об опе ративном вмешательстве на коленном суставе, то, несомненно, следует забрать парал лельно с операцией биоптат хрящевой ткани из неповрежденной ненагружаемой зоны суставной поверхности. Также, очевидно, что наиболее подходящими клетками для за мещения хрящевых дефектов являются прогениторные клеточные линии, полученные из самой хрящевой ткани и в норме реализующие in vivo свои гистобластические потен ции к хондрогенезу;

– какие клетки целесообразно пересаживать в хрящевой дефект?

Некоммитированные ММСК (с предположением о том, что тканевое микроокружение в участке трансплантации индуцирует пересаженные клетки к хондрогенезу), либо по лучившие сигнал коммитированные ММСК к дифференцировке в хондроциты в куль туре или в процессе приготовления подложки, содержащей, кроме клеток, факторы хондрогенеза;

– проблема интеграции трансплантата с поверхностью дефекта: каким образом трехмерная подложка с клетками может быть интегрирована и адгезирована к раневому ложу по всей поверхности дефекта? Параллельно необходимо определиться с тем, что целесообразнее пересаживать: подложку с клетками с заранее смоделированной формой дефекта (изготовление подложки по шаблону или форме дефекта непосредственно перед операцией) или же наиболее эффективна самоорганизация трансплантата непосредс твенно в дефекте при соединении компонентов подложки и клеток.

В связи с вышеизложенными аспектами, нами была разработана технология экспансии и биоимплантации культивированных аутогенных хондроцитов в агарозном гидрогеле для закрытия обширных субхондральных дефектов суставного хряща. На се годняшний день биоимплантация тканеинженерных конструкций была произведена 5 ти пациентам. Клинические результаты будут опубликованы в оригинальной статье.

изуЧение оСтеоГенеза при иСпоЛЬзовании материаЛа «ДепротекС» в СоЧетании С обоГаЩенноЙ тромбоЦитами аутопЛазмоЙ кирилова и.а.

ФГУ «Новосибирский НИИТО Росмедтехнологий», г. Новосибирск Orthotopic implantation of «Deprotex», a patented composite osteoplastic material, and platelet-rich plasma was performed to study induced osteogenic processes in experiment.

«Deprotex» is produced on a basis of deproteinized bone flour, collagen admixture and wide 1 клетОчные технОлОгии, тканевая инЖенерия range antibiotics. Combined use of «Deprotex» and platelet-rich plasma promotes early osteo genesis acceleration with following organotypic regeneration, since platelet-rich plasma initi ates bone formation at the initial stages, while «Deprotex» triggers mineralization phase.

Одним из направлений тканевой инженерии и клеточной терапии, которое в настоящее время привлекает все большее внимание, является сочетанное использование костно-пластических материалов и богатой тромбоцитами плазмы (БоТП) для ускоре ния роста кости.

Цель исследования. Изучить процессы остеогенеза при имплантации запа тентованного композиционного костно-пластического материала «Депротекс» и обога щенной тромбоцитами плазмы.

материал и методы исследования. Экспериментальные пересадки костно пластического материала (КПМ) ортотопически в костный дефект. Экспериментальные животные (собаки) – 8 в 2-х сериях опытов. На каждом животном выполнено 2 операции.

Всего выполнено 16 операции, с пластикой на 48 уровнях. В качестве модели для орто топической имплантации выбрана модель В.И.Савельева. Животных выводили из опыта через 30, 90 и 180 суток. 1 серия – изучался остеогенез при имплантации «Депротекс»;

2 серия – изучался остеогенез при имплантации «Депротекс» в сочетании с БоТП. КПМ «Депротекс» изготовлен на основе депротеинизированной костной муки, коллагеновой добавки и антибиотиков широкого спектра действия.

результаты. При сравнении между собой регенератов ребер по размерам пос ле операций в двух сериях эксперимента в динамике выявили следующие закономер ности. При пластике «Депротекс» регенерат через 30 суток достоверно шире, чем в срок 180 суток. При пластике «Депротекс»+БоТП регенерат в 30 суток достоверно шире, чем в 90 и 180 суток почти в 2 раза. При изучении морфологических препаратов через суток после костной аллопластики КПМ «Депротекс» в сочетании с БоТП наблюдали дифференцировку клеточных элементов и образование волокнистых структур, а также формирование остеоида и примитивных костных балочек на его основе, а без БоТП диф ференцировка клеточных элементов, образование волокнистых структур и образование хрящевой ткани. В срок наблюдения 180 суток наблюдали перестройку костной мозоли и замещение незрелых структур более зрелыми с компактизацией наружного слоя ребра и в сериях с «Депротекс» и «Депротекс»+БоТП.



Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 12 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.