авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 25 |

«гематология Под общей редакцией доктора медицинских наук, профессора К. М. Абдулкадырова.- Г о с у д а р с т ...»

-- [ Страница 2 ] --

В процессе созревания базофилов и тучных клеток в зоне их плас тинчатого комплекса происходит синтез гепарина и содержимое гранул формируется путем образования комплекса белок-гиста мин-гепарин. Базофилы находятся в крови в течение 6 часов, пос ле чего поступают в ткани, где по истечении 1-2 суток, после де грануляции, выброса гистамина и других веществ погибают (Про ценко В. А. и др., 1987).

В росте и созревании базофилов принимают участие ИЛ-3, ГМ-КСФ, ИЛ-5. В регуляции базофилов особая роль отводится ИЛ-4, для которого на его клеточной мембране имеется много ре цепторов. ИЛ-4 — мультипотентный лимфокин, он играет важную роль в регуляции иммунного ответа и во взаимодействии различ ных гемопоэтических клеток. Существуют доказательства, что ИЛ-4 является важным медиатором роста и активации базофилов и тучных клеток, регулируя продукцию IgE и В-клеток (Valent P.

et al., 1990).

Количество базофилов возрастает при миелопролиферативных заболеваниях (хроническом миелолейкозе, истинной полицитемии, базофильных лейкозах) и уменьшается в начале воспалительного Часть 1. Теоретическая гематология процесса и особенно аллергических реакций типа крапивницы, бронхиальной астмы, характеризующихся гиперчувствительнос тью немедленного типа, за счет быстрого перехода базофилов в ткани. Тканевые тучные клетки очень варьируют в размерах (от до 30 мкм). Они имеют неопределенное, скорее округлое ядро и большое количество довольно крупных красно-фиолетовых гра нул. В них выявляют полисахариды, амины, металлы, ферменты, белки, ферменты триптазу и химазу. Триптаза снижает свертывае мость крови и является маркером анафилактической реакции. Ма стоциты содержат много органелл — рибосомы, митохондрии, эн доплазматический ретикулум и аппарат Гольджи. Рецептор к IgE является главным рецептором на поверхности тучных клеток, ко торые, как и базофилы, отвечают секрецией гистамина на опосре дованную IgE активацию. Кроме того, они экспрессируют рецепто ры к IgG, CD28 и молекулам адгезии. Тучные клетки наряду с базофилами ведут свое начало от общей клетки-предшественника гранулоцитопоэза (Чертков И. Л. и соавт., 2002). Доказательства того, что базофилы и тучные клетки принадлежат к одной и той же популяции клеток, приводят Т. Nakahata и соавторы (1982).

Клетка-предшественник тканевых базофилов зкспрессирует анти ген CD34, маркер ранних миелоидных предшественников (Тото лян А. А., Фрейндлин И. С, 2001). Специфическим маркером мас тоцитов является CD 123. В развитии тучных клеток принимают участие ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-9, ИЛ-10, ИЛ-11, ИНФ-у (гамма интерферон), TGF-p (трансформирующий рост фактор), ГМ-КСФ, IgE. В слизистых тканях описаны слизистые (атипичные) тучные клетки, которые называют глобулярными лейкоцитами. Тучная клетка представлена в тканях ЖКТ, легких, урогенитальном трак те, в соединительных тканях вблизи сосудов, в коже, дыхатель ных путях.

Функции базофилов и тучных клеток Базофилы и тканевые мастоциты способны к фагоцитозу, но их главная функция связана с высоким содержанием в их гранулах гистамина — главного медиатора реакции, гиперчувствительности немедленного типа (Струков А. И., Кауфман О. Я., 1989). Гиста мин — двуосновной вазоактивный амин, вызывающий сокращение гладких мышц бронхов, трахеи, кишечника. Он повышает проница емость СОСУДОВ крови и принимает участие в возникновении кожной гиперемии, аллергического ринита, астмы, оказывает хемотак сическое действие на нейтрофилы и эозинофилы. Гепарин, про дуцируемый тучными клетками и базофилами, является антикоа Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови гулянтом. Среди многих его функций нужно отметить участие в регуляции клеточной пролиферации, подавление действия комп лемента, стимуляцию фагоцитоза и пиноцитоза и др. Базофилы и тучные клетки могут быть источником образования и секреции ряда хемокинов и цитокинов, включая ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-13, ГМ-КСФ, ФНО (тучные клетки), макрофагальный воспа лительный протеин — MIP-loc (базофилы), фактор стволовой клет ки (ФСК) и др. Секреции мастоцитами ИЛ-4 придают особое зна чение, так как он является одним из важных регуляторов В-лим фоцитов, базофилов, моноцитов, дендритных клеток и участвует в аллергических, противоопухолевых и противовоспалительных про цессах (Виноградова Ю. Э., 2002). Базофилы секретируют также простагландины, тромбоксаны, лейкотриены, фактор хемотаксиса эозинофилов и нейтрофилов серотонин, протеазы, фактор актива ции тромбоцитов. Доказана способность тканевых базофилов к фагоцитозу—эндоцитозу.

Моноциты и макрофаги Моноциты имеют общую с гранулоцитами клетку-предшествен ника и затем унипотентного предшественника моноцитарной ли нии (КОЕ-М - в культуре). Все клетки этой линии, особенно зре лые моноциты и макрофаги, относятся к системе мононуклеарных фагоцитов (СМФ) и занимают особое место в гемоиоэзе. R. Van Furth и соавторы обосновали выделение моноцитов и тканевых макрофагов, ранее объединяемых в ретикуло-эндотелиальную си стему, в систему мононуклеарных фагоцитов — клеток с особыми функциями, что было официально утверждено в бюллетене ВОЗ в 1972 г. (Van Furth R. et al, 1968, 1972, 1979). Первой распознавае мой клеткой этого ряда является монобласт. Морфологически его трудно отличить от миелобласта. Это клетка диаметром 15-20 мкм, имеет овальное или круглое ядро с пежносетчатой структурой, 2 4 нуклеолы, более широкую, чем у миелобласта, цитоплазму свет ло-серого или светло-голубого цвета без зернистости или со скуд ной пылевидной зернистостью. Следующая клетка — промоноцит, диаметром 11-15 мкм, характеризуется более грубым волокнис тым хроматином ядра, имеющего овальную или бобовидную фор му и слабоконтурируемые ядрышки. Цитоплазма промоноцита серо-голубая, довольно широкая и часто содержит нежную пыле видную азурофильную зернистость. Моноцит — зрелая клетка данной клеточной линии, диаметром 12-20 мкм, имеет ядро час то неправильной формы (бобовидное, рассеченное, лопастное), Часть 1. Теоретическая гематология светлую серо-голубую цитоплазму с пылевидной зернистостью.

В периферической крови моноциты образуют циркулирующий и пристеночный пулы. В тканях они создают субпопуляции диффе ренцированных органо- и тканеспецифических макрофагов. Мо ноциты циркулируют в крови от 12 до 48 часов перед тем, как ми грировать в ткани, где они превращаются в макрофаги (Яворков ский Л. И., 1987: Fibbe М. Е., Ploemacher R. Е„ 1999). В крови моно циты составляют 1-5% лейкоцитов, в костном мозге 1-3% миело кариоцитов.

Регуляция роста и дифференцировки моноцитов и макрофа гов осуществляется группой ростовых факторов — стимуляторов (ИЛ-3, ГМ-КСФ, М-КСФ) и ингибиторов (интерферон-а и -р, простагландин, ИЛ-10). Часть моноцитов остается в костном моз ге, где превращается в резидентные или оседлые макрофаги (Van Furth R. et al., 1979).

Функции моноцитов и макрофагов Одной из основных функций мононуклеарных фагоцитов явля ется неспецифическая антибактериальная защита организма, ко торая обеспечивается способностью к фагоцитозу и секрецией ци токинов про- и противовоспалительного действия. Эти цитокины активируют и мобилизуют как моноциты и макрофаги, так и другие клетки иммунной системы — лимфоциты, NK-клетки, гранулоциты.

Миграция моноцитов в ткани опосредована действием молекул адгезии — интегринов — и активаторов моноцитов (хемоаттрак тантов) — ИЛ-8, компонента комплемента С5а, тромбоцитак тивирующего фактора (PAF), воспалительного макрофагального протеина (М1Р-1(3), макрофагального хемоаттрактантного протеи на (МСР-1), фактора, ингибирующего миграцию (MIF) и др.

(Фрейндлин И. С, Тотолян А. А., 1999). Следующей после адгезии фазой является трансмиграция моноцита через эндотелий сосуда и движение к очагу воспаления под влиянием хемотаксических фак торов, которыми могут быть эндотоксины бактерий, продукты де струкции ткани и др. Киллинг и переваривание микроорганизмов происходит при участии протеолитических ферментов, включая лизоцим и другие факторы. Характерным для моноцитарных мак рофагов является метаболический, или респираторный, «взрыв» в процессе фагоцитоза, который проявляется повышенным потреб лением кислорода и продукцией микробицидных кислородных радикалов, перекиси водорода и супероксиданиона, обладающих мощными цитотоксическими и бактерицидными свойствами (Маян ский А. Н., Маянский Д. Н., 1983). В тканях, где моноциты/макро Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови фаги выполняют свои функции, они специализируются в иммуно компетентные клетки 2 классов:

1-й — антигенперерабатывающие макрофаги;

2-й — антигенпредставляющие макрофаги.

Относящиеся к первому классу антигенперерабатывающие, или резидентные макрофаги называют также профессиональными фа гоцитами. И. И. Мечников, открывший явление фагоцитоза как защитной функции организма против микробов, называл их «клет ками-мусорщиками». Открытие И. И. Мечниковым фагоцитоза и его работы по иммунитету были удостоены Нобелевской премии.

Резидентные макрофаги — это большое сообщество клеток, кото рое включает фиксированные макрофаги печени, плевральные и перитонеальные макрофаги, альвеолярные макрофаги легких, мак рофаги соединительной ткани, клетки микроглин, астроциты, мак рофаги селезеночных синусов, костномозговые макрофаги, макро фаги лимфоузлов;

в почках — интрагломерулярные и мезангиаль ные макрофаги, гигантские клетки очагов воспаления и другие.

Эти клетки имеют различные морфологические характеристики и функциональные особенности, но их принадлежность к единой клеточной линии, моноцитарное происхождение подтверждается наличием ряда общих свойств — они содержат большое количе ство фермента лизоцима (мурамидазы), неспецифическую моно цитарную эстеразу, кислую фосфатазу и сходный иммунофенотип, в частности они экспрессируют моноцитарный антиген CD 14. Дан ные клетки характеризуются также очень развитым лизосомаль ным аппаратом (Лукина Е. А., 2002). Это оседлые макрофаги, не способные к рециркуляции. Продолжительность их жизни исчис ляется месяцами и годами. Диаметр тканевых макрофагов колеб лется от 18 до 80 мкм (Козинец Г. И., Макаров А. А., 1997). Они имеют рыхлое, относительно небольшое ядро без четких ядрышек, широкую, слабо очерченную голубую или светло-серую цитоплаз му, содержащую гранулы и вакуоли. В световом микроскопе мож но видеть клетки с пенистой цитоплазмой, фагировавшие липи ды, — липофаги или пигментофаги, фагировавшие гемоглобин. При некоторых заболеваниях (гистиоцитозах, лейкозах) можно видеть макрофаги, фагировавшие другие клетки, например эритрофаги.

Пул макрофагов пополняется за счет моноцитов периферической крови, так как их способность к делению очень ограничена. Их основной функцией является фагоцитоз микроорганизмов, фраг ментов клеток, циркулирующих иммунных комплексов и других частиц. Они осуществляют также пиноцитоз — поглощение рас творимого антигена. В процессе фагоцитоза макрофаги включают 50 Часть 1. Теоретическая гематология в свою цитоплазму объект фагоцитоза и формируют фагосому, в которой под влиянием лизоцима и других ферментов происходит киллинг и переваривание фагоцитированного материала.

Второй класс — антигенпредставляющие (антигенпрезентиру югдие) макрофаги (Van Furth R. et al, 1979;

Knight S., Stagg A., 1993). К ним в настоящее время относят в основном дендритные клетки (ДК). Морфология большинства дендритных клеток имеет звездчатую форму со множеством тонких отростков — дендритов.

Эта форма и их подвижность позволяют Д К задерживать антигены и фиксировать их, а также взаимодействовать с Т-лимфоцитами.

В тканях они часто находятся в незрелом состоянии. Активацию ДК инициирует встреча с антигеном — микробами или продук тами воспаления. Активаторами ДК являются ИЛ-1, ГМ-КСФ, ФНОос, бактерии, липополисахариды микробов. ИЛ-10 блокирует процесс активации ДК. В процессе созревания ДК их способность активировать лимфоциты увеличивается (Птушкин В. В., 2001).

Дендритные клетки продуцируют ИЛ-8, ИЛ-12, MIP-а и р\ Этапы презентации антигена включают захват антигена и его фермента тивную обработку, транспортировку пептидных фрагментов анти гена — эпитопов — в соединении с главным комплексом гистосов местимости I и II на поверхность дендритной клетки для презента ции и распознавания Т-лимфоцитами. Активированные денд ритными клетками Т-лимфоциты осуществляют запуск иммунных реакций, стимулируя В-лимфоциты к продукции антител. Таким образом, клетки СМФ обеспечивают специфический иммунный ответ организма.

Антигенпредставляющие ДК — иммунные акцессоры, включают клетки Лангерганса (эпидермоциты), интердигитачьные Д К и денд ритные ретикулярные ДК (интерстициальные ДК) (Птушкин В. В., 2001). Клетки Лангерганса (КЛ) расположены в эпидермисе, их диа метр 14-20 мкм, они имеют широкую светлую цитоплазму, бобо видное или округлое ядро. В КЛ ультраструктурным методом выяв ляют гранулы Бирбека (их маркеры). Эти клетки экспрессируют антиген С D 1а и S-100 протеин и содержат аденозинтрифосфатазу (Chu Т., Jaffe R., 1994). После связывания антигена КЛ поступают в региональные лимфоузлы, где дифференцируются в интердиги тальные ДК, способные представлять антиген Т-лимфоцитам (Strunk D. et al.. 1997). Клетки Лангерганса не экспрессируют мо ноцитарный антиген CD 14, обладают слабой фагоцитарной актив ностью, не содержат лизоцим и не могут превращаться в макрофаги.

В настоящее время предполагают 3 пути развития ДК: из моно цитов крови, лимфоцитов и клеток-предшественников гемопоэза.

Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови Интерстициальные ДК, как считают, имеют миелоидное (моноци тарное) происхождение и, в отличие от КЛ, стимулируют В-лим фоциты к продукции антител (Птушкин В. В., 2001;

Peters J. Н.

et al., 1991). Они могут превращаться в макрофаги под влиянием М-КСФ или ГМ-КСФ и экспрессируют CD14. В то же время уста новлен другой путь развития ДК — из лимфоцитов. Дендритные клетки могут принимать участие в индукции иммунной толерант ности. Они способны подавлять незрелые Т-лимфоциты тимуса или зрелые Т-лимфоциты лимфоузлов, направленные против соб ственных антигенов. Установлено, что ДК толерантности происхо дят из общего с Т-лимфоцитами предшественника. Аргументы в пользу лимфоидного происхождения некоторых ДК у человека привели V. Soumelis с соавторами (1997), показавшие противопо ложный эффект ИЛ-4 на ДК миелоидного и лимфопдного проис хождения. По их данным, лимфоидные ДК имеют морфологию плазматических клеток, низкую экспрессию миелондных марке ров CD13 и CD33, позитивный эффект на их клеточный рост от ИЛ-3 и отсутствие эффекта от миелоидного ГМ-КСФ.

ДК используют в терапии злокачественных заболеваний в каче стве фактора, стимулирующего противоопухолевый иммунитет и инициирующего иммунный ответ на антиген.

Таким образом, клетки СМФ обеспечивают специфический иммунный ответ, а также участвуют в процессах репарации и за живления ран и очистке кровяного русла в основном за счет мак рофагов печени и селезенки (Маянский Д. Н., 1981). Они участву ют в обмене железа, углеводов и липидов, регуляции гемостаза и гемопоэза, продуцируя как стимуляторы гемопоэза (М-КСФ, ГМ-КСФ, ИЛ-1), так и ингибиторы (TNF-a, TGF-a). Как секре торные клетки они продуцируют медиаторы воспаления, протеа зы, интерлейкины, факторы роста, адгезивные молекулы (Кози нец Г. И., Макаров А. А., 1997). Клетки макрофагалыгой системы обладают цитотоксической активностью против опухолевых, ин фицированных и других измененных клеток.

Эритроидные клетки Первой морфологически распознаваемой клеткой эритроидного ряда является эритробласт, который происходит из унипотентной эритроидиой клетки-предшественника. Последняя проходит не сколько этапов дифференциации, постепенно ограничивающих ее пролиферативный потенциал. Это происходит в результате осуще ствления эритроидной программы генной экспрессии (Romeo P.-H., 52 Часть 1: Теоретическая гематология 1999). Большую роль в регуляции экспрессии эритроидно-специ фических генов, таких как гены глобина, порфобилиногена, гли кофорина А и В, гена эритропоэтина играют ядерные белки се мейства GATA. Поздние этапы эритропоэза полностью зависят от присутствия эритропоэтина (ЭРП), для которого эритроидные клетки-предшественники экспрессируют рецептор (ЭРГТ-R). Эрит ропоэтин необходим для эритроидной дифференцировки вплоть до позднего базофильного (раннего полихроматофильного) нор моцита, после чего эритроидная клетка больше не нуждается в ЭРП для своего созревания (Долгов В. В. и др., 2001;

Romeo P.-H., 1999).

Эритробласт — крупная клетка диаметром 15-25 мкм. Круглое ядро с мелкозернистой структурой ядерного хроматина содержит 2-3 крупные нуклеолы. Умеренная цитоплазма резко базофильна, часто содержит 1-2 выступа в виде «ушек». Вокруг ядра находится перинуклеарная зона просветления. Синтез гемоглобина (Hb) начинается на стадии эритробласта. После митоза количество гемо глобина сокращается наполовину и в течение интерфазы полнос тью восстанавливается. Клетка совершает от 3 до 7 делений, и один эритробласт продуцирует в среднем 32 эритроцита. Эритробласты составляют 0,2—1,0% миелокариоцитов. По мере созревания эрит робласт превращается в пронормоцит и затем в нормоцит, который в процессе развития уменьшается в размере, ядерный хроматин становится все более грубым, приобретая колесовидную структу ру. Количество гемоглобина в нормоцитах прогрессивно нарастает, в результате чего цитоплазма утрачивает базофилию, и в зависи мости от ее гемоглобинизации различают 3 вида нормоцитов — базофильные, полихроматофильные и оксифильные. Последней клеткой, способной к пролиферации, является полихроматофиль ный нормоцит. После деления раннего полихроматофильного нор моцита концентрация гемоглобина в дочерних клетках достигает критической величины — 13,5 пг (пикограммов), синтез ДНК в ней прекращается и она выводится из митотического цикла. Окси фильный нормоцит — клетка, которая не делится и не синтезирует НЬ. Часть эритрокариоцитов уже на стадии базофильного нормо цита достигает критической массы НЬ и выключается из митоти ческого цикла. Эти незрелые клетки гибнут в костном мозге, под чиняясь законам апоптоза и демонстрируя таким образом неэф фективный эритропоэз. Последний является одним из факторов регуляции эритрона, поддержания необходимого уровня эритро цитов в крови. Ядро оксифильного нормоцита конденсировано, пикнотично («вишневая косточка»). Клетка лишается его в период Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови нахождения в костном мозге. Цитоплазма оксифильного нормоци та розовая, насыщенная гемоглобином. Стадия созревания после энуклеации оксифильного нормоцита перед зрелым, полностью гемоглобинизированным эритроцитом называется ретикулоцитом.

Ретикулоцит характеризуется активным метаболизмом. Время его пребывания в костном мозге 1-2 дня, после чего он покидает его и еще от 1 до 3 дней дозревает в периферической крови, лишаясь остатков сетчатой ретикулофиламентозной субстанции, представ ляющей собою фрагменты рибосом, митохондрий и других орга нелл. Зрелый эритроцит (клетка, основным содержимым которой является гемоглобин) — это двояковогнутый диск диаметром 7,5— 8 мкм. Его эластичность и деформируемость при сохранении струк туры клетки обусловлены особенностями цитоскелета и позволя ют ему проходить даже через стенки синусов селезенки. В костном мозге содержание клеток эритроидного ряда колеблется от 14 до 26%, в среднем около 20%. Длительность жизни эритроцита — 100— 120 дней.

Функции эритроцитов Основная функция эритроцитов заключается в снабжении тка ней кислородом и транспорте углекислоты. Она осуществляется за счет присутствия в клетке гемоглобина. Гемоглобин — дыхатель ный пигмент, хромопротеид. У взрослого человека гемоглобин пред ставлен двумя типами: НЬА — взрослым гемоглобином (98%) и HbF — фетальным гемоглобином (2%). Его небелковая часть, вклю чающая железо, называется гемом, белковый компонент — глоби ном. Гемоглобин переносит кислород от легочных альвеол к тка ням, транспортирует углекислый газ от тканей к легким и участву ет в поддержании буферного кислотно-основного равновесия крови.

В самих эритроцитах совершается много ферментативных реак ций. Они участвуют в иммунных процессах, взаимодействуя с цир кулирующими иммунными комплексами, так как на мембране эрит роцитов имеется Fc-рецептор к иммуноглобулинам. На своей мем бране они адсорбируют аминокислоты, липиды, токсины. Среди них выделяют эритроциты-супрессоры, участвующие в подавле нии иммунного ответа (Козинец Г. И., Макаров В. А., 1997).

Мегакариоциты. Тромбоциты Мегакариобласт является первой морфологически распознава емой клеткой этого ряда в костном мозге. Предшественником ме гакариобласта является унипотентная клетка-предшественник 54 Часть 1. Теоретическая гематология мегакариоцитов. Тромбоциты, или кровяные пластинки, самые ма ленькие клетки крови, происходят из мегакариоцитов — самых крупных, гигантских клеток костного мозга. Мегакариобласт, по данным ряда авторов (Paulus J.-H., Aster R. H., 1983) и нашим наблюдениям, — крупная клетка, имеющая большое округлое или складчатое ядро и слабо различимые нуклеолы. Структура хрома тина сетчатая, узкая базофильная цитоплазма иногда имеет вырос ты. В результате процессов эндомитоза (многократного удвоения числа хромосом без разрушения ядерной оболочки и без деления клетки) и по.пшлоидизации (возникновения более чем диплоид ного набора ДНК) ядро мегакариобласта увеличивается, оставаясь в пределах той же цитоплазмы, и возникает мегакариоцит. Боль шой размер этих клеток обусловлен очень высоким содержанием в них ДНК. Среди мегакариоцитов различают более молодые 6а зофильные и более зрелые гранулярные формы. Среди грануляр ных выделяют полихроматофильные и оксифильные мегакарио циты. Мегакариоциты достигают в диаметре 120 мкм и более (в среднем — 40-50 мкм). Ядро базофильного мегакариоцита не лобулярное, ядрышки плохо различимы. Неширокая темно-голу бая или базофильная цитоплазма не содержит зернистости и в норме не отделяет пластинки.

Диаметр полихроматофильного мегакариоцита (клетка окра шивается основными и кислыми красителями) колеблется от 40 до 120 мкм. Ядро грубое, без нуклеол, форма ядра вариабельная, при чудливая, может быть сегментированной;

в цитоплазме содержит ся азурофильная зернистость. Клетка является главным проду центом пластинок, в ее цитоплазме видны тромбоциты и можно наблюдать процесс их отделения. В процессе эндомитоза клетка становится полиплоидной (4N, 8N, 16N, 32N, 64N).

Оксифильный мегакариоцит характеризуется очень слабой функ циональной активностью и, как правило, не отделяет пластинки.

Это крупная клетка с грубым полиморфным ядром, широкой розо вой цитоплазмой с остатками скудной зернистости. Различают так же инволютивные формы — старые, разрушающиеся клетки и сво бодные ядра мегакариоцитов. Жизненный цикл мегакариоцита — 10 суток. Стимулятором его роста и дифференцировки является тромбопоэтин (ТП). В развитии и дифференцировке мегакариоци тов принимают участие многие другие факторы, среди которых:

ИЛ-1, ИЛ-3. ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-9, НЛ-11, ЭРП, лейкозингибирую щий фактор (ЛИФ), колониестимулирующие факторы ГМ-КСФ, М-КСФ и многие другие (Chatelain С, 1999). Регулятором мегака риопоэза является также количество тромбоцитов, избыток кото Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови рых тормозит тромбоцитопоэз, и наоборот. В цитоплазме зрелых мегакариоцитов находятся гранулы, содержащие большое количе ство белков, среди которых фактор Виллебранда, тромбоспондин, тромбоцитарный фактор 4, фибронектин, фибриноген, тромбоци тарный ростовой фактор, IV7 и V факторы свертывания крови и др.

Ультраструктурным маркером мегакариоцитов является выявляе мая при электронной микроскопии тромбоцитарная пероксидаза.

Мегакариоциты составляют 0,2-0,6% миелокариоцитов.

Функции тромбоцитов Эффекторными клетками мегакариоцитоноэза, участвующими в процессах свертывания крови, являются тромбоциты — произ водные мегакариоцитов. Это сферические образования диаметром 1-4 мкм, их количество составляет в среднем 250 тыс. в 1 мкл.

В кровяном русле тромбоциты находятся в активированном (40%) и неактивированном состоянии. Они имеют периферическую зону, условно называемую цитоплазмой, или гиаломером, и зону-гель, а также мембраны и органеллы (Иванов Е. П., 1991). Зона-гель со держит гранулы, включающие множество факторов, обеспечиваю щих функции тромбоцитов. Главные функции тромбоцитов — ан гиотрофическая и адгезивно-агрегационная. Известно 11 пластин чатых факторов свертывания, которые содержатся в тромбоцитах.

Среди них тромбоцитарный тромбопластин, акцелератор тромби на, активатор фибринолиза, фибринстабилизирующий фактор, сс ротонин, антигепаригговый фактор, фибриноген тромбоцитов и др.

(Козинец Г. И., Макаров А. А., 1997). Тромбоциты обеспечивают тромбоцитарное звено гемостаза. Повреждение сосуда немедленно влечет за собою его спазм и прилипание (адгезию) тромбоцитов к коллагеновым волокнам и другим адгезивным белкам субэндоте лия. Пластинки агрегируют в месте повреждения под влиянием многих факторов, в частности тромбина, и в результате фазы обра тимой или первичной агрегации образуется тромбоцптарная проб ка. Дальнейшая агрегация и уплотнение пробки обеспечивают не обратимую, вторичную агрегацию — первичный гемостаз (Петри щев Н. Н., Папаяп Л. П., 1999). На основе первичного тромба образуется фибриновый сгусток и формируется тромбоцитарно фибриновая пробка, обеспечивающая окончательный, или вторич ный гемостаз. Плазменно-коагуляционный механизм гемостаза так же происходит при непосредственном участии тромбоцитов, кото рые секретируют многие факторы, активирующие плазменный гемостаз.

56 Часть 1. Теоретическая гематология Лимфоциты Лимфопиты имеют общую с миелоидными элементами клетку предшественника на уровне СКК, но затем они приобретают неза висимую линию дифференцировки (Morrison S.J.etal., 1997). Лим фоциты представлены в основном тремя клеточными линиями — В-, Т- и NK-клетками, — и имеют общую для них клетку-предше ственника, коммитированную в направлении лимфопоэза. В кост ном мозге В- и Т-лимфобласты присутствуют в очень небольшом количестве (-0,5%). Лимфобласт характеризуется более мелкими размерами, чем миелобласт, круглым ядром с 1-2 нуклеолами и нежнозернистой структурой хроматина. Его неширокая голубая цитоплазма в норме лишена зернистости.

Следующие клетки — пролимфоцит и лимфоцит. Пролимфо цит характеризуется более грубым ядерным хроматином и реже выявляемыми нуклеолами. Лимфоциты даже морфологически очень гетерогенная группа, которая объединяет многие типы этих иммунокомпетентных клеток. Давая морфологическую характе ристику лимфоцитам, учитывают их форму и размеры, структуру хроматина, особенности цитоплазмы, наличие или отсутствие в ней включений и другие признаки. Обычный лимфоцит крови име ет размер 7-12 мкм. Он имеет овальное или круглое ядро, глыбча тую структуру ядерного хроматина, отличается отсутствием нук леол. Клетка чаще не содержит зернистости, но есть категории гранулированных лимфоцитов, например большие гранулирован ные лимфоциты размером 9-15 мкм. По ширине цитоплазмы их делят на узко-, средне- и широкоцитоплазменные. Первые из них — это малые лимфоциты диаметром 6-7 мкм с плотным ядром. Деле ние лимфоцитов на В- и Т-типы обусловлено их специализацией и функциями. В костном мозге В-лимфоциты при участии цито* кинов проходят антигеннезависимую стадию созревания и диф ференцировку от про-В-типа, через пре-пре-В-тип, пре-В тип до В-типа — зрелого лимфоцита. В костном мозге формируется анти генраспознающий иммуноглобулиновый рецептор В-лимфоци тов — BCR. Из костного мозга В-лимфоциты, зкепрессирующие IgM и IgD, поступают в периферическую кровь и заселяют В-зави симые зоны лимфоидных органов — фолликулы, в зародышевых центрах которых они проходят антигензависимую пролиферацию и дифференцировку в плазматические клетки, продуценты анти тел, или В-клетки памяти (Фрейндлин И. С, Тотолян А. А., 2001;

Тупицын Н. Н., 2002). Активированный антигеном В-лимфоцит превращается в В-иммунобласт, затем плазмобласт. Это крупная клетка диаметром 15-22 мкм. Она имеет округлое ядро, располо Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови женное эксцентрично, 2-4 нуклеолы, резкобазофильную ••цито плазму без включений. Иногда наблюдается зона просветления во круг ядра. Проплазмоцит характеризуется эксцентрично располо женным ядром, боле плотной структурой ядерного хроматина, менее отчетливыми нуклеолами и базофильной цитоплазмой.

Плазмоциты очень различаются по размеру. Они имеют округлое, эксцентрически расположенное ядро с грубым хроматином. Ядрыш ки отсутствуют;

цитоплазма базофильна, часто вакуолизирована.

Плазматические клетки продуцируют антитела, одной специфич ности и одного класса иммуноглобулинов. Предшественники Т-лим фоцитов — протимоциты — из костного мозга мигрируют в корко вый слой тимуса — центральный орган Т-лимфопоэза. Здесь они подвергаются антигеннезависимой дифференцировке и проходят стадии про-Т-клетки, пре-Т-клетки и Т-клетки. На стадии про-Т лимфоцита начинает формироваться антигенраспознающий Т-кле точный рецептор — TCR. При переходе из коркового слоя в мозго вой Т-лимфоциты превращаются в СО4+Т-хелперы (Th) и C D 8 предшественники цитотоксических лимфоцитов (киллеров).

«Наивные» СО4*Т-лимфоциты после встречи с антигеном и акти вации представляют собою ThO, секретирующие ИЛ-2, ИЛ-4, ИНФ-у, и могут дифференцироваться в ТЫ и Th2. Thl способны активировать макрофаги, участвовать в клеточном иммунном от вете. Th2 активируют В-лимфоциты к продукции антител, т. е.

участвуют в гуморальном ответе. Эти две популяции продуциру ют цитокины, которые способны противодействовать дифферен цировке и активации противоположной субпопуляции (Фрейнд лин И. С, 2000). Морфологически различить Т- и В-лимфоциты практически невозможно. Единственно надежным способом их идентификации является иммунофенотипирование с использова нием моноклональных антител.

Классические NK-клетки (natural killer — естественные килле ры) — 3-я очень небольшая популяция лимфоцитов — не несет на своей поверхности маркеров В- или Т-клеток. Они составляют око ло 5% от числа лимфоцитов периферической крови. Морфологи чески это большие гранулированные лимфоциты, способные не посредственно, без помощи антител убивать клетки-мишени — опу холевые или инфицированные вирусом — или микроорганизмы, т. е. они обладают клеточной цитотоксичностью. Специфический белок NK-клетоК — перфорин способен разрушать мембрану клет ки-мишени. Полагают, что NK-клетки, возможно, включают в себя + супрессорные цитотоксические СО38 Т-клетки. Вся популяция лимфоцитов в костном мозге составляет 8-9% миелокариоцитов.

58 Часть 1. Теоретическая гематология Функции лимфоцитов Основной функцией лимфоцитов является распознавание соб ственных и чужеродных антигенов и обеспечение гуморального и клеточного иммунитета. В-лимфоциты получили свое название от слова «bursa» — сумка, так как впервые были обнаружены у птиц в органе, называемом «бурса Фабрициуса». Они ответственны за гуморальный иммунитет и способны распознавать антигены с по мощью экспрессируемых ими на мембране специфических рецеп торов. В-лимфоциты способны самостоятельно распознавать ан тигены и отвечать продукцией соответствующих антител, но в ос новном для реализации иммунного ответа они нуждаются в кооперации с Т-лимфоцитами, которые представляют им антиген и стимулируют к дифференцировке в плазматические клетки и выработке антител. Т-лнмфоциты обеспечивают клеточный имму нитет и распознают антигены с помощью антигенпрезентирующих клеток, к которым относятся макрофаги и главным образом денд ритные клетки. В результате этих контактов происходит актива ция Т-лимфоцитов хелперов и секреция ими цитокинов, стимули рующих к пролиферации и дифференциации макрофаги, В-лим фоциты и сами Т-клетки.

Цитокины, секретируемые Т-лимфоцитами, инициируют вы ход нейтрофилов из крови в ткани к очагам воспаления, и сами активированные Т-лимфоциты — Т-цитотоксические лимфоци ты — способны лизировать клетки, несущие чужеродные антигены и внутриклеточные паразиты: грибы, микобактерии туберкулеза, вирусы и простейшие. Цитотоксические Т-лимфоциты принима ют прямое участие в реакции отторжения трансплантата.

Лимфоциты находятся в состоянии постоянной циркуляции между кровью, лимфой и лимфоидными органами, и это делает возможной встречу каждого антигена с соответствующей очень немногочисленной популяцией лимфоцитов, несущих специфиче ские маркеры для распознавания именно данного антигена. Одной из форм иммунного ответа является иммунологическая память, которая формируется при контакте лимфоцита с чужеродным ан тигеном и способствует быстрой выработке соответствующих ан тител при повторном контакте с тем же антигеном. Это вторичный иммунный ответ, который обеспечивается клоном долгожнвущих клеток памяти - соответствующих Т- и В-лимфоцитов.

Т-лимфоциты являются секреторными клетками, и их цитоки ны играют большую роль в регуляции гемопоэза. иммунного отве та, процессов воспаления и др. Они секретируют:

Глава 3. Морфология и функции клеток костного мозга и крови 1) гемопоэтины ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-9, ИЛ-10, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17,ТМ-КСФ;

2) интерфероны, в том числе ИНФ-у;

3) факторы некроза опухоли — ФНОа, ФНОр и др.;

4) хемокины — цитокины, обладающие активностью хемоат трактантов, в частности М1Р-1а и -1(3 и RANTES — хемоаттрак тант для эозинофилов и базофилов, принимающий участие в ал лергических реакциях;

5) TGF-J3 н фактор, ингибирующий миграцию, — MIF и др.

Синтез и секреция иммуноглобулинов В-лимфоцитами - завер шающая стадия специфического гуморального иммунного ответа.

Продукты иммунного ответа — иммуноглобулины — относятся к фракции гамма-глобулинов. Активированные В-лимфоциты также способны секретировать некоторые цнтокины, например ИНФ-а, IUI-12,TGF-p.

Таким образом, координированное взаимодействие клеток кро ви, опосредованное влиянием регуляторов пролиферации и диф ференциации — цитокинов, обеспечивает постоянство клеточного состава крови и равновесие внутренней среды организма.

Литература ВиноградоваJO. Э. Строение и функции лейкоцитов. Гранулоциты // Руковод ство по гематологии / Под рел. А. И. Воробьева. М., 2002. С. 88-106.

Воробьев А. И. Клетка// Руководство по гематологии / Пол ред. А. И. Воробье ва. М., 2002. Т. 1.С. 13-28."

Долгов В. В., Луговская С. А., Морозова В. Т. и др. Лабораторная диагностика анемий: Пособие для врачей. Тверь, 2001. 88 с.

Иванов Е. П. Руководство по гемостазиологии. Минск, 1991.

Козинец Г. И., Макаров В. А. Исследование системы крови в клинической прак тике. М., 1997. 480 с.

Лукина Е. А. Моноциты и макрофаги // Руководство по гематологии / Под ред.

А. И. Воробьева. М„ 2002. Т. 1. С. 100 - 106.

Маянскип Д. Н. Клетка Купфера и система мононуклеарных фагоцитов. Ново сибирск: Наука, 1981. 168 с.

Мая некий А. Н., Маянскип Д. II. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новоси бирск: Наука, 1983. 256 с.

Петрищев А. Л., Напаян Л. П. Гемостаз. Физиологические механизмы, прин ципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. СПб., 1999.

117с.

Проценко В. А., Шпак С. И., Доценко С. М. Тканевые базофилы и базофильные гранулоциты крови. М., 1987. 128 с.

Птушкин В. В. Дендритические клетки и роль цитокинов is их дифференциров ке и функционировании /'/' Клиническая онкогематология / Под ред. М. А. Вол ковой. М.: Медицина, 2001. С. 72-76.

Глава ТРЕПАНОБИОПСИЯ КОСТНОГО МОЗГА.

СТРОМАЛЬНОЕ МИКРООКРУЖЕНИЕ:

СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И УЧАСТИЕ В ГЕМОПОЭЗЕ Главным кроветворным органом человека является деятельный костный мозг губчатого вещества костной ткани. Являясь сложно регулируемой иерархической системой, гемопоэз возможен только при обязательном условии взаимодействия со стромой костного мозга. Как известно, в основе интенсивного обновления различ ных клеточных форм гемолимфопоэза.[ежит единая клеточная линия. Мультипотентная стволовая кроветворная клетка является общим предшественником всех известных линий гемопоэтическоп дифференцировки и всей мозаики лимфоидных элементов. Про цессы, лежащие в основе самоподдержания, коммитирования, про лиферации и дифференцировки стволовых клеток, определяются регуляторными механизмами на уровне генома и эпигеномными факторами.

Ведущими среди эпигеномных факторов, играющих ключевую роль в жизнедеятельности стволовых клеток, являются межкле точные взаимодействия гемопоэтических предшественников с эле ментами стромального микроокруженйя, которые представлены в костном мозге синусоидальными сосудами, ретикулярными, жировыми и эндостальными клетками (Ругаль В. И. и др., 1991;

Mayany H. et al., 1992;

Van Damme A. et al, 2002). Регуляторный потенциал указанных элементов реализуется путем их непосред ственных контактов с кроветворными предшественниками, а так же благодаря широкому спектру стимуляторов и ингибиторов ге молимфопоэза, продуцируемых стромой костного мозга — цитоки нов, рестриктинов, циклинов, адгезшюв и других, локальный эффект которых обеспечивается как их продукцией in situ, так и Глава 4. Трепанобиопсия костного мозга иммобилизацией на компонентах внеклеточного матрикса. Стро ма костного мозга является источником сигналов, которые вос принимаются рецепторами плазматических мембран гемопоэти ческих клеток, преобразуются при участии сложных взаимодей ствий клеточных органоидов и поступают в ядро, где происходит запуск экспрессии генов, необходимых для клеточной пролифера ции и дифференцировки. В результате этого начинают реализовы ваться генетические программы, ответственные за формирование тканеспецифических и стадиеспецифических клеточных феноти пов с соответствующими морфофункциональными особенностя ми клеток гемолимфопоэза.

Одним из доступных и информативных методов изучения кост ного мозга в целом и стромы костного мозга в частности является трепанобиопсия (Теодорович В. П., Абдулкадыров К. М., 1977).

Признавая неоценимое диагностическое значение при заболевани ях системы крови стернальной пункции, необходимо подчеркнуть, что метод трепанобиопсии костного мозга позволяет получить бо лее полную информацию о состоянии костномозгового кроветво рения. Так, с помощью трепанобиопсии возможно изучить истин ное соотношение кроветворной ткани и жировой субстанции. При трепанобиопсии также легко выявляются и изменения со стороны костной ткани, стромы костного мозга и гемопоэтического микро окружения. Однако данный метод не может заменить, тем более вытеснить стернальную пункцию. Он является весьма информа тивным, объективным и обязательным при диагностике заболева ний системы крови.

Методика исследования При трепанобиопсии забор губчатого вещества костной ткани осуществляют иглой Jamshidi или Islam из задней ости подвздош ной кости. Для исследования необходим столбик костной ткани не менее 2 см длиной, поскольку субкортикальные лакуны не отража ют состояние кроветворения. Материал фиксируется в 10% вод ном растворе формальдегида или жидкости Карнуа. Объем фикси рующих сред должен превышать объем трепаната не менее чем в 10 раз. Кусочек ткани после фиксации декальцинируется и прово дится через ряд спиртов восходящей концентрации, хлороформ и жидкий парафин. Обезвоженный материал, пропитанный парафи ном, погружают в специальные кассеты с жидким парафином. По лученные после охлаждения блоки закрепляют в микротоме и при готовляют гистологические препараты толщиной около 5 мкм. Сре зы прикрепляют к предметным стеклам, депарафинируют и 64 Часть 1. Теоретическая гематология окрашивают Азур-2-эозином или гематоксилин-эозином, заклю чают в оптически прозрачную среду и покрывают покровным стек лом. При необходимости производится окраска азотнокислым се ребром по Гомори или пикрофуксином по Ван-Гизону.

При ря/[е патологических состояний бывает трудно, даже не возможно с помощью указанных методов окраски определить тип клеток и их происхождение (гистогенез). В связи с этим, наряду с гистологическим методом, используют дополнительно иммуноги стохимические исследования трепанобиопсий подвздошной кос ти. При использовании этого метода на гистологические препара ты наносят раствор с антителами к определенным антигенам. Ан титела иснользуемых сывороток имеют на себе метку флюорохром либо красящий фермент. Более распространен иммунопероксидаз ный метод, при котором антитела красящей сыворотки несут фер мент — пероксидазу хрена. Для иммуногистологических реакций используют два типа антител: поли- и моноклональные. Имеется большое количество коммерческих наборов (kits) сывороток к раз личным антигенам. Использование маркеров позволяет дагь им мунофенотипическую характеристику кроветворных и лимфоид ных клеток костного мозга для диагностики заболеваний, назначе ния и оценки лечения. Ниже представлены результаты исследова ний структурной организации стромы костного мозга на основании изучения трепанобиоптатов подвздошной кости здоровых лиц с использованием стандартных методов гистологических, морфомет рических и ультрамикроскопических исследований.

Стромалыюе микроокружение:

структурная организация и участие в гемопоэзе Синусоидальные сосуды Клетки крови человека формируются в экстравазальных секто рах костного мозга и в сосудистое русло проникают через васку лярную стенку. Ежесуточно у взрослого человека образуется около 1/3 триллиона клеток. Их миграция в кровоток обеспечивается особенной структурной организацией сосудистого русла костного мозга. Как известно, активный гемопоэз происходит в тех участках костной ткани, которая имеет губчатую структуру и, в отличие от компактной, не обладает системой гаверсовых каналов, обеспечи вающих кровоток. В губчатой кости снабжение кровью костных балок и интрамедуллярной кроветворной паренхимы осуществля ется за счет периостальных артерий, которые в виде a. perforans входят внутрь костного мозга через плотную кортикальную плас Глава 4. Трепанобиопсия костного мозга тинку. Указанные сосуды в лакунах губчатого вещества разделяют ся на костномозговые артерии, переходящие в артериальные ка пилляры. Последние, расширяясь в виде воронки, образуют сину соиды костного мозга. Венозный отток осуществляется посред ством балочковых синусов, которые проходят через компактный слой губчатой кости, вливаясь в периостальные вены. Таким обра зом, синусы костного мозга — это «чудесная сеть» внутри венозно го русла. Именно в этих участках в условиях нормального крове творения происходит миграция клеток крови в сосудистое русло..

В гистологических препаратах подвздошной кости здоровых людей синусы представлены тонкостенными сосудами, которые на разрезе имеют вытянутую, овальную или округлую форму. Их вид зачастую зависит от размеров. Мелкие и средние синусоиды име ют преимущественно удлиненную и вытянутую форму. Для более редко встречающихся крупных синусоидальных сосудов характер ны овальные или округлые очертания. В интрамедуллярных про странствах костного мозга иногда выявляются синусоиды непра вильной формы вследствие неравномерного расширения просвета (грушеобразные, колбовидные и др.).

Представляя собой начальное звено венозного русла, синусои дальные сосуды образуются в результате слияния узких капил ляров или ветвления артериол. Венозные сосуды, следующие за синусами, имеют значительно меньший диаметр. Однако в гисто логических препаратах синусоидальные сосуды не всегда представ лены с их приносящими и выносящими ветвями. В большинстве наблюдений морфологический рисунок синусоидального русла представлен преимущественно только синусоидами. Стенка сину соида состоит из одного слоя эндотелиоцитов, цитоплазма кото рых имеет вид истонченного тяжа, ограничивающего просвет.

Встречаются клетки как с увеличенными просветленными, так и пикнотическими ядрами. В просветах сосудов находились эритро циты, небольшое количество гранулоцитов, а в некоторых — незре лые элементы эритроидного ряда. Фагоцитоз эндотелиальным клет кам не свойственен. При морфометрическом исследовании пло щадь, занимаемая в гистологических препаратах синусоидальными сосудами, составляет около 5%.

При обзорном просмотре электронно-микроскопических срезов обнаруживаются синусоиды двух видов. В одних эндотелиоциты имеют уплощенную форму с длинными, резко истонченными ци топлазматическими отростками. Ядра в этих клетках плоские, с грубым, конденсированным по всему сечению хроматином. Яд рышки не выявляются. Как в перикарионе, так и в маргинальных 3 Гематология. Нов. справочник 66 Часть 1. Теоретическая гематология участках цитоплазмы обнаруживается небольшое количество ор ганоидов: единичные митохондрии с небольшим числом крист и матриксом умеренной плотности, незначительное количество nv зырьков, гетерогенные по размеру электронноплотные гранулы, тельца Вейбеля-Палладе. В просвете синусоидов выявляются толь ко зрелые клетки гранулоцитарного ряда, эритроциты и тромбоци ты. В состав стенки таких синусов входит тонкая базальная мемб рана.

В синусоидах другого типа эндотелиоциты отличаются от опи санных выше структурой ядра и содержанием органелл в цитоплаз ме. Как правило, эти клетки выбухают в просвет синусов и имеют крупные ядра с у меренной конденсацией хроматина по периферии и четким преобладанием эурохроматина. Цитоплазма богата органо идами и имеет хорошо выраженные признаки пино- и экзоцитоза.

Базальная мембрана имеет прерывистую структуру. В синусах тако го тина наблюдается трансмуральный проход зрелых клеток, а в их просветах наря!су со зрелыми элементами гемопоэза обнаруживают ся эритроидные клетки на стадии эритробластов.

Полученные ультрамикроскопические данные подтверждают существование в костном мозге человека замкнутой системы кро вообращения. Вместе с этим наблюдается отчетливая функцио нальная мозаичность эндотелия. Трансцеллюлярная миграция кле ток крови происходит в местах наличия прерывистой базальной мембраны и расположения функционально активных, богатых орга неллами эндотелиоцитов с признаками пино- и экзоцитоза. Впол не вероятно, что миграция стволовых гемопоэтических клеток так же осуществляется в этих зонах.

Учитывая сведения о непосредственном влиянии эндотелиаль ных клеток на кроветворение, можно предполагать, что богатые органоидами эндотелиоциты способны не только передавать, но и секретировать функционально активные вещества, регулирующие процессы дифференцировки и созревания гемопоэтических пред шественников. Резкое увеличение диаметра просвета синусоидаль ных сосудов приводит к значительному снижению в них скорости кровотока, поэтому синусы могут выполнять роль своеобразного отстойника, создавая условия для созревания ядросодержащих ге мопоэтических клеток. Это предположение подтверждается обна ружением эритробластов в просветах синусов.

Несомненно, что синусоиды, обеспечивая упорядоченное по ступление в кровоток физиологически важных веществ и клеток крови, создают благоприятные условия для деятельности костного мозга как кроветворного органа. Их значение не ограничивается Глава 4. Трепанобиопсия костного мозга 67 • функцией гистогематического барьера. Входящие в их состав эн дотелиальные клетки могут играть инструктивную роль в гемопоэ зе, а регуляторный эффект может осуществляться посредством сек реции ростовых факторов либо путем межклеточных контактов эндотелиоцитов с гемопоэтическими предшественниками.

Интрамедуллярные ретикулярные клетки Ретикулярные клетки костного мозга являются одним из ос новных клеточных компонентов кроветворного микроокружения.

В интрамедуллярных пространствах трубчатой кости цитоплазма тические отростки ретикулярных клеток контактируют с отрост ками соседних клеток, а также с периваскулярными адвентициаль ными и покрывающими поверхность костных балок клетками, фор мируют цитоплазматическую сеть — ретикулум, в ячейках которого располагаются гемопоэтические клетки. В костномозговых про странствах подвздошной кости человека в одном поле зрения им мерсионного увеличения микроскопа заметны около трех ретику лярных клеток. Размеры и форма ретикулярных клеток весьма изменчивы. Чаще обнаруживаются крупные клеточные элементы с деформациями и длинными цитоплазматическими выростами.

Как правило, цитоплазма интрамедуллярных стромальных клеток слабо базофильна, мелкоячеистого строения. Ядра неправильной формы с мелкодисперсной структурой хроматина. Также встре чаются малоотростчатые клетки с овальными светлыми ядрами.

В центральных отделах лакун, вокруг них в виде островков распо лагаются эритроидные клетки. Когда ретикулярные клетки выяв ляются вблизи поверхности костных трабекул, их цитоплазма на ходится в тесном контакте с властными элементами гранулоци тарного ростка. Наряду с цитоплазматическими отростками рети кулярные клетки костного мозга способны образовывать тонкие волокна, которые могут располагаться свободно либо связываться с цитоплазматическими отростками.

В гемопоэтической ткани в зависимости от локализации можно выделить два основных типа ретикулярных клеток, отл ичающихся по ультраструктуре. Клетки первого типа с очень длинными ци топлазматическими отростками располагаются диффузно и фор мируют сеть, в ячейках которой располагаются кроветворные эле менты. Ядра с мелкодисперсным хроматином иногда содержат яд рышки. Цитоплазма содержит большое количество рибосом, хорошо развитую сеть канальцев эндоплазматического ретикулу ма и пучки микрофнламентов.

68 Часть 1. Теоретическая гематология В эндостальных и периваскулярных зонах среди кроветворных элементов гранулоцитарного ряда выявляются ретикулярные клет ки другого типа — малоотростчатой формы со светлым ядром и наличием ядрышек. Они имеют тесный контакт с гемопоэтически ми бластными элементами. Довольно часто в местах контактов таких клеток их плазмолеммы как самостоятельные структуры не определяются. Отмечается их способность к фагоцитозу.

Как разновидность ретикулярных клеток рассматриваются ад вентициальные клетки, тесно прилегающие к стенкам капилляров и синусов. Большинство периваскулярных клеток имеют темное ядро и умеренных размеров цитоплазму. В части клеток обнаружи ваются крупные жировые капли, окруженные богатым органелла ми ободком цитоплазмы. Наличие переходных форм между ука занными клетками и адипоцитами указывает на возможности раз вития жировой ткани костного мозга человека из адвентициальных ретикулярных клеток.


Полученные в ходе исследований ретикулярной стромы резуль таты прежде всего свидетельствуют о функциональной мозаичное ти клеток стромального ретикулума. Кроме того, они указывают на существование функциональных взаимосвязей стромальной и кро ветворной ткани.

Отростчатые ретикулярные клетки первого типа своими длин-' ными цитоплазматическими ответвлениями пронизывают интра медуллярные пространства, формируют механический каркас, на котором располагаются гемопоэтические клетки. Они, вероятно, выполняют роль своеобразного якоря, который задерживает клет ки крови и участвует в их движении в циркуляцию. Контактируя между собой, а также с костью и сосудами, они создают прочную основу для синусов, не позволяя спадаться их стенкам, состоящим из единственного слоя эндотелия.

Кроме того, в их цитоплазме обнаружены микрофиламенты.

Известно, что ретикулярные клетки лимфатических узлов способ ствуют транспортировке лимфоцитов в межуточной ткани и далее в лимфатические сосуды. По всей вероятности, в костном мозге ретикулярные клетки первого типа вместе с опорной функцией способствуют, по аналогии с лимфатическими узлами, миграции клеток крови в интрамедуллярных пространствах костномозговых лакун.

Нельзя исключить, что ретикулярные клетки первого типа на ряду с отмеченными свойствами выполняют и более специфичес кие функции. Имея в цитоплазме хорошо развитый белоксинтези рующий аппарат, дендритические клетки ретикулума являются Глава 4. Трепанобиопсия костного мозга основным источником образования экстрацеллюлярного матрик са, формирующего микросреду интрамедуллярных пространств костного мозга. Синтезируя коллаген, гликозаминогликаны и дру гие физиологически активные субстанции, ретикулярные клетки способны непосредственно влиять на процессы пролиферации и дифференцировки кроветворных предшественников. Особенно следует отметить роль коллагена. Как известно, экстрацеллюляр ный коллагеновый матрикс интрамедуллярных пространств кост ного мозга представлен коллагеном первого и третьего типов. Хи мическая структура коллагена и его биологические функции хоро шо изучены. Роль этого белка не ограничивается только опорной функцией. Он необходим в процессах эмбрио- и морфогенеза, ока зывает влияние на рост и дифференцировку клеток различных органов и систем организма.

В гемопоэтических очагах, преимущественно гранулоцитарных и в меньшей мере эритроидных, выявляются ретикулярные клетки второго типа. Они характеризуются отсутствием цитоплазмати ческих отростков, наличием молодого ядра, содержащего ядрыш ки. Их отличительной особенностью является тесный контакт с молодыми гемопоэтическими элементами. В местах контактов на блюдаются структурные перестройки мембран. На наличие функ циональных взаимоотношений указывают отмеченные анатоми ческие характеристики, а также перемещение гемопоэтических клеток, по мере созревания, от центра кроветворного очага с распо ложенными в нем стромальными клетками к периферии фокусов гемопоэза. Эритрокариоциты чаще ассоциированы с макрофага ми. Однако, учитывая возможность трансформации ретикулярных клеток в элементы, обладающие фагоцитарной способностью, мож но предположить, что среди макрофагальных элементов эритро цидных островков имеются ретикулярные клетки, способные к фагоцитозу.

Тесная гистотопографическая взаимосвязь ретикулярных и ге мопоэтических клеток подтверждает положение о функциональ ных взаимоотношениях между ними. Таким образом, совершенно очевидно, что гетерогенность популяции ретикулярных клеток мо жет быть проявлением их функциональных различий и отражени ем специфической роли в формировании кроветворного микро окружения.

Адипоциты. В условиях нормального кроветворения жировые клетки за полняют у взрослых все пространство костномозговой полости, не 70 Часть 1. Теоретическая гематология занятое миелоидной тканью. Как правило, форма адипоцитов ша ровидная или слегка овальная. Обычно клетка содержит единствен ную крупную жировую вакуоль, занимающую практически всю цитоплазму. Последняя видна в виде небольших участков по краям ядер. В зрелых адипоцитах ядра всегда расположены эксцентрич но, имеют ровные контуры, вытянутую форму, мелкозернистую структуру хроматина с конденсацией по периферии. В промежут ках между жировыми клетками диффузно расположены грануло циты. Иногда адипоциты тесно прилежат к поверхности костных балок. В таких участках молодые гемопоэтические клетки не выяв ляются. В интрамедуллярных пространствах подвздошной кости взрослых объем жировой ткани составляет около 30% площади гистологического препарата.

При ультраструктурном исследовании органеллы обнаружива ются в перинуклеарной зоне. Выявляются в небольшом количе стве канальцы незернистой эндоплазматической сети, свободные рибосомы, крупные митохондрии с элетроннопрозрачным матрик сом и короткими кристами. Наряду с такими зрелыми адипоцита ми встречаются молодые формы, имеющие широкую цитоплазму с большим количеством органелл и пусками микрофиламентов, про ходящих в различных направлениях.

Каких-либо ультраструктурных особенностей в местах межкле точных контактов зрелых адипоцитов с гемопоэтическими пред шественниками, которые позволили бы предположить наличие функциональной связи, не выявлено. В то же время при электрон но-микроскопическом исследовании можно отметить тесные взаи моотношения незрелых жировых клеток (преадипоцитов) с мо лодыми гранулоцитарными элементами. У незрелых адипоцитов отмечена высокая функциональная активность, а в местах межкле точных контактов с кроветворными предшественниками обнару жены перестройки плазмолемм преадипоцитов, подобные тем, ко торые наблюдали в межклеточных контактах ретикулярных и кро ветворных клеток. По всей видимости, незрелые жировые клетки оказывают влияние на гранулоцитопоэз. Как известно, in vitro по казана способность молодых жировых клеток влиять на пролифе рацию и дифференцировку гранулоцитарных предшественников с помощью гуморальных факторов и межклеточных контактов. Что касается зрелых жировых клеток, то они являются энергетически ми депо костного мозга и лабильным матриксом, легко теряющим липиды для обеспечения плацдарма развития гемопоэтических клеток в условиях повышенного запроса при различных экстре мальных ситуациях. Способность адипоцитов адсорбировать на Глава 4. Трепанобиопсия костного мозга своей поверхности широкий спектр физиологически активных суб станций позволяет жировым клеткам непосредственно участво вать в гуморальной регуляции процессов пролиферации и диффе ренцировки гемопоэтических предшественников.

Эндостальные клетки При морфометрическом исследовании площадь трабекул губ чатого вещества подвздошной кости в норме составляет 20,0 ± 4%.

Костные балки правильной формы, имеют гладкие ровные края.

Их эндостальная поверхность выстлана сплошным слоем клеток, среди которых выявляются клетки двух основных типов. Первые характеризуются резко уплощенной вытянутой формой, неболь шим объемом цитоплазмы, темными узкими ядрами. Вторые отли чаются полигональными очертаниями, более обильной цитоплаз мой, округлыми, содержащими ядрышки ядрами. В некоторых участках отчетливо прослеживается двуслойное расположение эн достальных клеток. Число клеток первого и второго типов в едини це площади эндостальной поверхности составляет соответственно 1,17 ±0,26 и 0,09 ±0,02.

Молодые кроветворные клетки (миелобласты, промиелоциты) и мононуклеары типа лимфоцитов зачастую определяются вблизи трабекулярной поверхности в местах расположения эндостальных клеток с просветленными ядрами. В таких очагах количество стро мальных клеток увеличено. Часть из них находится в тесном кон такте с кроветворными клетками. По мере созревания гранулоци ты смещаются в центральные отделы лакун.

Электронно-микроскопический анализ эндостальной и субэн достальной зон подвздошной кости показывает присутствие в них довольно гетерогенной группы стромальных клеток, отличающих ся ультраструктурной организацией. Непосредственно на поверх ности кости наиболее часто выявляются резко уплощенные вытя нутые клетки с небольшим количеством органоидов и электронно плотной цитоплазмой, распространявшей остростки в костное вещество. Реже встречаются крупные клетки со сравнительно глад кими контурами. Их цитоплазма характеризуется большим коли чеством внутриклеточных органелл. Округлые ядра всегда имеют электронноплотные ядрышки. Оба типа клеток располагаются на матриксе, который состоит из большого количества примерно оди наковой толщины коллагеновых фибрилл с отчетливой попереч ной исчерченностью.

Кроме описанных двух видов зндостальных элементов на кост ных балках обнаруживаются стромальные клетки третьего типа.

.72 Часть 1. Теоретическая гематология Вне зон активного гемопоэза, когда к кости прилежит жировая ткань или зрелые гемопоэтические элементы, кроветворная паренхима отделяется от эндоста истонченным клеточным пластом, элементы которого обозначаются как клетки «костномозгового мешка».

Толщина слоя эндостальных клеток в различных участках тра бекулярной кости варьирует. Прежде всего клеточность эндоста и его структура находится в зависимости от присутствия в эндос тальной зоне молодых гемопоэтических клеток гранулоцитарного ряда. В тех местах, где определяются признаки повышенной про лиферативной активности гемопоэтической ткани, эндостальная зона отличается увеличенным количеством стромальных клеток в состоянии повышенной функциональной активности, которые тес но прилежат к молодым кроветворным элементам. Характер меж клеточных контактов указывает на существование функциональ ных взаимосвязей между стромальными элементами эндоста и ге мопоэтическими предшественниками. Кроме этого, эндостальные клетки играют роль сеплективно проницаемой мембраны, регули рующей ионный обмен между костным матриксом и интрамедул лярной средой костного мозга. При этом особо важное значение имеет обмен кальция, который, как известно, играет значительную роль в развитии гемопоэтических клеток. Этому способствует при сутствие в популяции эндостальных клеток — остеобластов, объем которых достигает 10%. Также хорошо известно, что в костном мозге наибольшая концентрация стволовых кроветворных клеток обнаруживается эндостально, а пролиферативная активность эн достальных зон значительно выше таковой на расстоянии от эндо ста. С одной стороны, это связано с оптимальной концентрацией ионов кальция, с другой, — со способностью стромальных клеток создавать соответствующее микроокружение для стволовых кле ток и влиять на развитие гемопоэтических предшественников по средством межклеточных контактов и широкого спектра гумораль ных факторов.


Следует отметить, что кроме охарактеризованных выше кле точных элементов в состав стромы костного мозга входят также миоциты сосудов, фибробласты и фиброциты, располагающиеся по ходу части сосудов, нервные клетки. Естественно, они прини мают участие в поддержании функции костного мозга как крове творного органа. При этом их влияние сводится к обеспечению кровотока. Инструктивная, регуляторная роль процессов самопод держания, пролиферации и дифференцировки кроветворных пред шественников осуществляется эндотелием синусоидальных сосу дов, жировыми, ретикулярными и эндостальными клетками.

Глава 4. Трепанобиопсия костного мозга Совершенно очевидно, что функциональные и структурные из менения элементов микроокружения могут быть причиной нару шений кроветворной функции костного мозга. В связи с этим клю чевым является вопрос об участии стромы костного мозга в разви тии патологических состояний гемопоэза. В настоящее время твердо установлено значение дефектов стромы костного мозга в развитии апластической анемии, миелодисплазий, острых и хронических форм лейкозов, иммунодефицитных состояний (Duhrsen U., Hossfeld D., 1996;

Tauros S. et al., 2002). В связи с этим учет измене ний стромального микроокружения необходим как для определе ния оптимального лечения, так и для целей прогнозирования забо леваний.

Как известно, клетки стромы костного мозга, так же как и все клеточные линии гемолимфопоэза, имеют мезенхимальное проис хождение. Также установлено присутствие мезенхимальных ство ловых клеток, подобных эмбриональным, в костном мозге взрос лых. Указанные клетки являются источником развития стромы костного мозга в течение жизни человека и, по мнению некоторых исследователей, они обладают способностью развиваться в крове творные предшественники. Интерес к стволовым клеткам вообще и стволовым клеткам костного мозга в частности повысился в свя зи с обнаруженным свойством пластичности стволовых клеток, т. е. способности стволовых клеток одной линии развиваться в дру гие клеточные линии (Yannaki Е., 2001;

Krause D., 2001;

La Russa V.

et al., 2002). Так, мезенхимальные стволовые клетки костного моз га взрослого человека могут дифференцироваться в кардиомиоци ты, гепатоциты, нервные клетки и др. В связи с этим использова ние стволовых клеток костного мозга взрослых не ограничивается их применением только в лечении гематологических заболеваний.

В настоящее время стволовые клетки костного мозга, перифери ческой и пуповиннои крови начинают использовать в лечении ряда соматических заболеваний.

Литература Ругань В. И., Блинова Т. С, Пономаренко В. М., Абдулкадыров К. М. Ультра структурная организация кроветворного микроокружения костного мозга чело века //' Гематология и трансфузиология. 1991. № 3. С. 11-14.

Теодорович В. П., Абдулкадыров К. М. Трепанобиопсия костного мозга при неко торых гематологических заболеваниях. Л.: Медицина, 1977. 95 с.

Duhrsen i'., Hossfeld D. Stromal abnormalities in neoplastic bone marrow diseases // Ann. Hematol. 1996. V 73. P. 53-70.

Krause D. Plasticity of marrow-derived stem cells // Gene Ther. 2001. V. 9, N 11.

P. 754-758.

Глава ЦИТОХИМИЯ КЛЕТОК КРОВИ И КОСТНОГО МОЗГА Среди многих современных и высокоинформативных методов диагностики лейкозов морфоцитохимия прочно сохраняет свое место, и необходимость применения морфоцитохимических мето дов диагностики лейкозов не вызывает сомнений.

Цитохимия основывается на использовании цветных химичес ких реакций для определения химической природы клеток и выяв ления в них метаболически активных энзимов и веществ. Хими ческий состав нормальных клеток крови и костного мозга изучен достаточно хорошо. Диагностическая цитохимия лейкозов базиру ется на том, что лейкозные клетки, особенно до начала химиотера пии, сохраняют особенности метаболизма и многие из основных свойств, присущих их нормальным аналогам. Поэтому идентифи кация лейкозных бластов, а значит, и установление варианта лей коза в немалой степени основываются на выявлении этих свойств.

Одним из способов идентификации клеток и определения их при надлежности к соответствующей клеточной линии является опре деление с помощью цитохимических реакций характеризующих их субстанций и энзимов. Среди них наибольшее диагностическое значение имеют ферменты — миелопероксидаза, кислая и щелоч ная фосфатазы, неспецифические эстеразы (а-нафтилацетат-эсте раза, кислая неспецифическая эстераза, сх-нафтилбутират-эстера за и хлорацетат-эстераза), а также такие субстанции, как липиды и углеводы.

Цитохимическая характеристика клеток крови Углеводы играют важную роль в клеточном метаболизме. Их расщепление сопровождается выделением большого количества энергии, обеспечивая таким образом энергетические потребности 76 Часть 1. Теоретическая гематология клетки. Разнообразные соединения углеводов включают моно- и полисахариды, в том числе гликоген, кислые мукополисахариды, а также гликопротеиды, гликолипиды и др. Для выявления углево дов применяют реакцию с использованием реактива Шифф и йод ной кислоты — ШИК-реакция, она же PAS-реакция (Periodic Acid Schiff). Реакция выявляет в клетках не только гликоген, но и неко торые другие углеводы, однако гликоген — самый распространен ный и основной полисахарид.

В миелобластах полисахариды могут отсутствовать или может наблюдаться слабая диффузная или мелкогранулярная реакция.

По мере созревания клеток нейтрофильного ряда их количество возрастает. Наибольшее количество полисахаридов содержится в зрелых нейтрофилах, где они выявляются в виде ярко-малиновых гранул или интенсивной диффузной окраски цитоплазмы. Целе сообразно использование контрольной реакции с амилазой, кото рая устраняет розовое окрашивание цитоплазмы в случае гликоге новой природы углевода. В эозинофилах полисахариды диффузно окрашивают цитоплазму и не содержатся в гранулах. По данным Д. Ф. Глузмана (1978), Ф. Г. Дж. Хейхо и Д. К. Кваглино (1983), в базофилах они не определяются, в то же время S. J. Galli и соавторы (1983) выявили PAS-положительное вещество в этих клетках. Лим фоциты содержат умеренное количество полисахаридов в виде мел ких немногочисленных гранул, иногда в виде венчика вокруг ядра, на фоне неокрашенной цитоплазмы. Согласно Ф. Г. Дж. Хейхо, Д. К. Кваглино, в норме 10-40% лимфоцитов содержат PAS-поло жительное вещество. В моноцитах оно распределяется в виде мел ких пылевидных гранул на фоне бледно-розовой цитоплазмы. Ре акция тромбоцитов на полисахариды высокоположительна. Мега кариоциты содержат их в виде рассеянных гранул на диффузном фоне. Контрольный тест с амилазой подтверждает гликогеновую природу полисахарида в этих клетках.

Кислые сульфатированные мукополисахариды включают хон дроитин-4-сульфат и выявляются цитохимически, главным обра зом в незрелых миелоидных клетках (Морозова В. Т., 1977;

Хар ченко М. Ф. и др., 1986;

Kolset S. О., Gallagher J. Т., 1990).

Оксидазы — ферменты, катализирующие окислительные про цессы молекулярным кислородом. Среди них особое значение имеет миелопероксидаза (МП). Энзим миелопероксидаза является очень важным компонентом клеток, особенно нейтрофилов. Она служит маркером клеток нейтрофильного ряда и располагается в основ ном в первичных лизосомальных гранулах (Бронштейн М. И., Френкель М. А., 2002). Этот фермент катализирует окисление раз Глава 5. Цитохимия клеток крови и костного мозга личных субстратов, например фенолов и некоторых аминокислот в присутствии перекиси водорода, которую он расщепляет. Актив ность МП обнаруживается уже на стадии миелобласта и возраста ет в процессе созревания клетки, однако наибольшую активность фермента демонстрируют промиелоциты. Слабое окрашивание цитоплазмы эритроцитов и нормобластов выявляет псевдоперок сидазу — продукт реакции с гемоглобином (Koike T. et al., 1986).

В эозинофилах выявляется специфическая эозинофильная перок сидаза. По данным одних авторов, МП никогда не выявляется в базофилах (Глузман Д. Ф. и др., 2000), в то время как другие нахо дят, что она содержится в базофильных про- и миелоцитах и почти отсутствует в зрелых базофилах (Parwaresch M. R., 1976). Мы же не наблюдали активность МП в зрелых базофилах. В мегакариоцитах и тромбоцитах присутствует специфическая тромбоцитарная МП, которая определяется с помощью электронной микроскопии. Часть моноцитов дает реакцию на пероксидазу от умеренной до слабой.

Липиды — важная составная часть лейкоцитов — представляют собой разнообразные соединения, включающие простые липиды:

эфиры жирных кислот, в том числе нейтральные жиры, и сложные липиды в составе фосфолипидов, гликолипидов (цереброзидов), аминолипидов, сульфолипидов и др. Они содержатся во многих клетках крови, за исключением лимфоцитов и эритроидных кле ток. Для выявления липидов существует несколько методов, но чаще применяют метод Sheehan и Storey (1947) и Ackerman (1952) с Суданом черным Б, который окрашивает фосфолипиды в черный цвет. Наибольшее их количество содержится в клетках нейтро фильного ряда, начиная с миелобласта, и реакция усиливается с увеличением зрелости клетки. Половина нейтрофилов содержит фосфолипиды в составе специфической зернистости. Эозинофи лы демонстрируют'сильно положительную реакцию на липиды, которые содержатся в их гранулах. Реакция на липиды в базофи лах, особенно незрелых, положительна, хотя и очень вариабельна (Хейхо Ф. Г. Дж., Кваглино Д. К., 1983). Моноциты могут давать отрицательную реакцию на липиды, но чаще в них выявляется вариабельное количество мелких гранул, иногда в виде пылевид ной зернистости.

Фосфатазы входят в состав гидролаз. Эти ферменты широко распространены в клетках человека и животных. Они участвуют в обменных процессах с жирами, полисахаридами и нуклеопротеи дами.

Кислые фосфатазы (КФ) включают изоферменты, катализи рующие освобождение фосфата из спиртовых или фенольных 78 Часть 1. Теоретическая гематология моноэфиров при кислой рН среды. Кислые фосфатазы локализо ваны в лизосомах и цитохимически выявляются благодаря образо ванию окрашенных участков красного цвета в местах гидролиза субстрата. В качестве субстрата могут быть использованы нафтол AS-фосфат, а-нафтилфосфат натрия, нафтол-А8-О-фосфат и др.

Кислая фосфатаза присутствует в большинстве клеток крови и костного мозга. В гранулоцитах, моноцитах, эозинофилах и базо филах она выявляется, начиная с незрелых клеток этих рядов, где ее активность наиболее высокая. Во многих клетках, в том числе в моноцитах, она ингибируется ионами тартрата (Глузман Д. Ф. и др., 2000). Активность фермента определяется в лимфобластах и лимфоцитах, где она очень вариабельна. Наибольшая активность среди клеток этой серии наблюдается в Т-лимфоцитах. Реакция положительна в плазматических клетках, мегакариоцитах, тром боцитах и эритробластах. Высокую активность КФ демонстриру ют макрофаги. Активность фермента снижена в лимфоцитах при хроническом миелолейкозе (ХМЛ). В нейтрофилах повышение ее активности наблюдается при ХМЛ, истинной полицитемии и мие лофиброзе.

Щелочные фосфатазы (ЩФ) также относятся к группе гид ролитических ферментов. Они способны освобождать фосфат, ка тализируя отщепление фосфатных групп из фосфомоноэфиров в щелочной среде. ЩФ принимают участие в обмене липидов и нук леиновых кислот (Хейхо Ф. Г. Дж., Кваглино Д. К., 1983). Актив ность ЩФ присуща только зрелым гранулоцитам. Иногда она может выявляться в метамиелоцитах (Бронштейн М. И., Френ кель М. А., 2002). Фермент локализуется во вторичных гранулах и пластинчатом комплексе. В эритроцитах, тромбоцитах, моноцитах ЩФ не выявляется. Небольшая ее активность наблюдается в еди ничных лимфоцитах. Базофилы реагируют отрицательно, а эози нофилы могут демонстрировать слабую фоновую окраску (Хей хо Ф. Г. Дж., Кваглино Д. К., 1983). Содержание ЩФ повышается при воспалительных состояниях, бактериальных инфекциях, лёй кемоидных реакциях, миелофиброзе, полицитемии и снижается при хроническом миелолейкозе, некоторых миелодиспластиче ских синдромах и пароксизмалыюй ночной гемоглобинурии. Фер мент выявляется в виде желто-коричневых гранул в цитоплазме.

Изофермент N-щелочная фосфатаза определяется иногда в лим фоидных клетках у больных хроническим лимфолейкозом, при лимфомах мантийной зоны (Nanba К. et.al., 1975).

Неспецифические эстеразы (НЭ) также относятся к гидрола зам. Эти ферменты способны гидролизовать простые эфиры N-CBO Глава 5. Цитохимия клеток крови и костного мозга бодных спиртов жирных кислот. Это весьма неоднородная группа энзимов, названия которых обусловлены субстратом, который они гидролизу ют. Получено более 9 шоферментов НЭ. Фракции 1, 2, 7, 8, 9 выявляются при использовании нафтол-АБ-О-хлорацетата и представляют активность хлорацетат-эстеразы (ХАЭ), которая присутствует в гранулоцитах. Фракции 3, 4, 5, 6 взаимодействуют с эфирами а-нафтилацетата или ос-нафтилбутирата и представля ют собою НЭ, выявляемые в моноцитах, плазматических клетках и тромбоцитах (Хейхо Ф. Г. Дж., Кваглино Д. К., 1983). Наибольший интерес для гематологов представляют хлорацетат-эстераза, ос-на фтилацетат-эстераза (аНАЭ), а-нафтилбутират-эстераза (осНБЭ).

Неспецифические эстеразы являются лизосомальными фермента ми. Существует мнение, что эстеразы участвуют в киллерной функ ции Т-лимфоцитов (Fcrluga I. J. et al., 1972). а-Нафтилацетат эстераза обнаруживается во всех миелоидных клетках (Wach stein M., Wolf G., 1958), но наибольшая ее активность определяется в моноцитах, в которых присутствует изоформа аНАЭ, подавляе мая фторидом натрия и свойственная только клеткам моноцитар ной линии (Дульцина С. М. и др., 1986;

Fischer R., Schmalze F., 1964). Реакция на осНАЭ может быть положительной в нейтрофи лах, эозинофилах, лимфоцитах, но в них она не подавляется фто ридом натрия. В лимфоцитах, преимущественно Т-клетках, фер мент располагается локально, фокусно или в виде 1-2 гранул в цитоплазме. Фермент выявляется в мегакариоцитах и тромбоци тах. Высокая, нечувствительная к ингибитору активность аНАЭ наблюдается в макрофагах. В клетках эритроидного ряда в норме она не определяется.

Кислая НЭ — это фермент, локализующийся в лизосомальных гранулах. Его активность выявляется в реакции с а-нафтилацета том в кислой среде при рН 5,8. Она характерна для Т-хелперов и, по мнению J. Kullenkampf и соавторов (1977), может служить мар кером Т-лимфоцитов. Кроме того, она выявляется в клетках моно цитарного ряда.

Хлорацетат-эстеразу (ХАЭ) называют гранулоцитарной, в отличие от моноцитарных аНАЭ и аНБЭ. Как и миелопероксида за, она является маркером нейтрофилов. Хлорацетат-эстераза вы является чаще всего, начиная с промиелоцита, редко миелобласта, и ее активность постепенно снижается по мере созревания клетки (Глузман Д. Ф., 1978). Активность фермента выявляется в виде гранул синего цвета. Часть эозинофилов и моноцитов может де монстрировать слабую активность ХАЭ. Эритроидные клетки от рицательно реагируют в реакции на ХАЭ. Возможно, хлорацетат 80 Часть 1. Теоретическая гематология эстераза принимает участие в иротеолитической и перевариваю щей функции нейтрофилов (Ferluga J. et al, 1972).

Сдвоенную реакцию на ХАЭ и аНАЭ проводят последователь но на одном мазке. Это позволяет разделить клетки гранулоцитар ной и моноцитарной линий, что имеет значение при диагностике миеломоноцитарного лейкоза. При выявлении клеток, демонстри рующих одновременно активность двух ферментов, есть основа ние диагностировать бифенотипичный вариант этого лейкоза.

Цитохимическая диагностика лейкозов Франко-американо-британская классификация миелоидных и лимфоидных опухолей (ФАБ-классификация) (Bennet J. M. et al., 1976, 1985) основана на морфоцитохимических особенностях не зрелых лейкозных клеток. Одновременно с появлением ФАБ-клас сификации и на смену подобным ей пришли классификации мор фоиммуноцитогенетические (MlС-working classification, 1986, 1988), иммунологические — EGIL (Бене М. К. и др., 1996) и др.

В последнее время появились классификации миелоидных и лим фоидных опухолей, которые дополнили существовавшие прежде и кроме морфоиммуноцитогенетических свойств клеток учитывают их молекулярно-генетические характеристики (Воробьев А. И. и др., 2002;

"Классификация ВОЗ /Хэррис Н. Л. и др., 2000/;

Wardi man J. W. и др., 2002). Кроме острых лейкозов, представленных в ФАБ-классификации, они включают ряд новых наименований, в частности вторичные миел областные лейкозы, связанные с прово димым лечением алкилирующими препаратами и радиационным облучением, ряд лейкозов со специфическими цитогенетическими и молекулярно-генетическими нарушениями, миел областный лей коз с мультилинейной дисплазией и др. Согласно рекомендациям создателей классификации ВОЗ, диагноз острого лейкоза может быть установлен при достижении 20%-ного уровня бластных кле ток в костном мозге (30%-ного — по ФАБ-классификации).

С развитием техники получения моноклональных антител (МКА) появилась возможность изучения иммунологических мар керов клеток различных клеточных линий (линейные маркеры) и маркеров различных уровней дифференцировки клеток. Мето ды проточной цитометрии, иммуноцитохимические, метод непря мой иммунофлюоресценции и другие позволяют выявить экспрес сию поверхностных клеточных иммунных маркеров, объединяе мых в группы дифференцировочных антигенов — кластеров диф ференцировки (CD), — определить принадлежность клеток к Глава 5. Цитохимия клеток крови и костного мозга миелоидной или лимфоидной клеточным линиям и стадию созре вания клетки на пути ее дифференцировки. Благодаря иммунофе нотипированию клеток среди Т-клеточных острых лимфобласт ных лейкозов (ОЛЛ) были выделены в зависимости от стадии дифференцировки про-Т-тип, пре-Т-тип, кортикальный Т-тип, зре лый Т-тип. Среди В-клеточных ОЛЛ выделены про-В-тип, тип Common, пре-В-тип, зрелый В-тип ОЛЛ. Кроме этого, выделены иммунологические варианты так называемых стволовоклеточных лейкозов.

Значительная часть острых миелобластных лейкозов диагнос тируется морфоцитохимически. Определение иммунофенотипа миелобластов необходимо при отсутствии в лейкозных клетках основных цитохимических маркеров — миелопероксидазы, хлор ацетат-эстеразы, липидов или их слишком слабой активности.

Поэтому определение антигенного профиля субстратных клеток лейкозной популяции необходимо при острых миелобластных лей козах с минимальной дифференцировкой, монобластных, мегака риобластных лейкозах, эритромиелозе и эритробластном лейкозе.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 25 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.