авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЛАЗЕРНОЙ МЕДИЦИНЫ ФЕДЕРАЛЬНОГО МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОГО АГЕНТСТВА» ...»

-- [ Страница 3 ] --

p 0,001), очень сильной отрицательной значимой связи во все сроки между выраженностью признака «степень обсеменнности ран» и группами «без лечения» и «с лечением» (Rpr = -0,930 -0,993, n = 80;

p 0,001), а также очень сильной отрицательной связи во все сроки между выраженностью признака «степень обсеменнности ран» и опытными группами (Rpr = -0, -0,874, n = 60;

p 0,001), что свидетельствует о значимом сокращении степени инфицированности ран от контрольной группы к 3-й группе во все сроки бактериологического исследования.

На основании результатов микробиологического исследования гнойных ран у крыс, можно заключить, что наилучшим эффектом в виде сокращения степени обсеменнности гнойных ран также обладает местное лечение с помощью лазерной ФХТ с фотодитазином в водном растворе.

При использовании ФХТ с фотосенсибилизаторами в водном растворе в лечении гнойных плоскостных ран на 3-е сутки эксперимента начинается выраженное сокращение степени инфицированности ран, которое значимо отличается от контрольной группы и сохраняется на протяжении всего периода забора бактериологических посевов (3 - 10-е сутки). Однако во все сроки проводимого исследования не выявлено статистически значимых различий в степени обсеменнности между опытными группами, хотя сильная корреляционная связь подтверждает тенденцию к уменьшению инфицированности в 3-й группе по сравнению с 1-й и 2-й группами. Это свидетельствует о том, что на сокращение степени обсеменнности гнойных ран ФХТ с фотосенсом и холосенсом влияют в незначительно меньшей степени, чем ФХТ с фотодитазином в водном растворе, но лазерная ФХТ с любым фотосенсибилизатором имеет значимо выраженный бактерицидный эффект по сравнению с традиционным лечением антисептиками и местными антибактериальными средствами.

Анализ результатов цитологического исследования.

В каждый срок исследования (на 0, 3, 7 и 14-е сутки наблюдений) у животных всех 4-х групп исследования забирали мазки-отпечатки. При исследовании картины отпечатков учитывали динамику количества клеточных цитологических признаков – неизменнных нейтрофильных лейкоцитов, изменнных нейтрофилов, незрелых мононуклеарных элементов, макрофагов, юных и зрелых фибробластов и фиброцитов.

До начала лечения цитологическая картина в мазках-отпечатках была примерно однородная и характеризовалась наличием, в основном, нейтрофилов в стадии дегенеративного распада (98,2 ± 0,09), максимально выраженных признаков «МО», «Детрит», «Фибрин», следовым количеством МН, МФ и нейтрофилов в стадии фагоцитоза (0,1 ± 0,01 / 0,2 ± 0,01 / 1,5 ± 0,12), а также полным отсутствием фибробластов. Результаты числовых относительных оценок (в процентах от общего числа клеточной популяции в мазке) 7 признаков и балльных оценок 3-х цитологических признаков представлены по всем группам во все опытные сроки.

Распределение значений клеточных цитологических признаков в тесте Колмогорова-Смирнова подчиняется закону нормального распределения (KS = 0,7822,741, n = 28;

p 0,05), а неклеточных – не подчиняется (KS = 1,1262,441, n = 28;

p 0,05). Статистический анализ клеточных признаков проводили с применением параметрических методов, а неклеточных – с применением непараметрических методов.

При проведении анализа ANOVA статистически значимые различия не выявлены по всем клеточным признакам между контрольной и всеми опытными группами на 0-е сутки исследования (AN\B, n = 28;

p = 0,8221,000).

Ниже представлены графические изображения (боксплоты медиан, 95% доверительного интервала и выпадающих значений), характеризующие процесс стихания выраженности гнойно-некротического детрита в экспериментальных плоскостных ранах всех групп в зависимости от сроков проводимого цитологического исследования на примере динамики содержания нейтрофильных лейкоцитов в стадии дегенерации и распада (Нейтр-дег) (рисунки 8-9), а также активации регенераторных клеточных процессов в ранах всех групп во все экспериментальные сроки на примере динамики относительного состава юных фибробластов (ФБ-ю) (рис. 8-13).

При проведении множественных сравнений выраженности признаков в Н тесте Краскела-Уоллиса выявлено, что статистически значимые различия присутствуют для всех трх неклеточных цитологических признаков, за исключением измерений, проведнных на 0-е сутки эксперимента (KW, n = 28;

p 0,05 / р = 0,001). При попарном сравнении между контролем и опытными группами в U-тесте Манна-Уитни выявлены следующие данные.

При сравнении признаков контрольной группы со всеми опытными во всех случаях выявлены достоверные различия (MW, n = 14;

p 0,05 / р = Рис 8 Различия в значениях Рис 9 Различия в значениях показателя «Нейтр-дег» в показателя «Нейтр-дег» в зависимости от группы на 3-е сутки зависимости от группы на 7-е сутки эксперимента на примере 95% ДИ. эксперимента на примере 95% ДИ.

Рис. 10 Различия в значениях Рис. 11. Различия в значениях показателя «Нейтр-дег» в показателя «ФБ-ю» в зависимости от зависимости от группы на 14-е группы на 3-е сутки эксперимента на сутки на примере 95% ДИ. примере 95% ДИ.

0,001), при сравнении 1-й и 2-й основных групп значимых различий не обнаружено (MW, n = 14;

p 0,05 / р = 0,7101,000), при сравнении контрольной и основными группами по большинству признаков выявлены различия (MW, n = 14;

p 0,05 / р = 0,0010,017) за исключением МО_14, Детрит_14, Фибрин_14 (MW, n = 14;

p 0,05 / р = 1,000).

Рис. 12. Различия в значениях Рис. 13. Различия в значениях показателя «ФБ-ю» в зависимости показателя «ФБ-ю» в зависимости от от группы на 7-е сутки группы на 14-е сутки эксперимента эксперимента на примере 95% ДИ. на примере 95% ДИ.

При анализе многопольных таблиц сопряжнности с применением критерия 2 Пирсона выявили признаки, между которыми не существует статистически значимой связи: МО / Детрит / Фибрин на 7-е и 14-е сутки и порядковый номер группы.

Корреляционный анализ взаимосвязи между группой и проявлением клеточных цитологических признаков выявил наличие сильной отрицательной значимой связи во все сроки для признака воспаления: Нейтр дег (Rpr = -0,866 -0,958, n = 28;

p 0,001), сильной положительной связи для признаков репарации МН, МФ, ФБ-ю, ФБ-з, Нейтр-фаг на 3-14-е сутки и для ФЦ_14 (Rpr = 0,775 0,947, n = 28;

p 0,001). Полученные данные подтверждают ускорение репаративных клеточных процессов в ранах, которые получали ФХТ, в особенности с фотодитазином.

Корреляционный анализ взаимосвязи между группой и проявлением неклеточных цитологических признаков выявил наличие сильной отрицательной значимой связи во все сроки для всех трх признаков (Rpr = 0,771 -0,927, n = 28;

p 0,001), она же сохраняется и при проведении анализа среди опытных групп (Rpr = -0,643 -0,820, n = 21;

p 0,001).

Следовательно, признаки альтерации и воспаления более выражены в контрольной группе и в меньшей степени в опытных, особенно в 3-й группе.

Результаты нашего анализа цитологической картины с раневой поверхности позволяют заключиь, что:

в контрольной группе в динамике были наиболее выражены признаки альтерации и воспаления (нейтрофильные лейкоциты в стадии дегенерации и распада, свободно лежащие скопления микроорганизмов, нити фибрина и детрит) и наименее выражены признаки репарации (фагоциты, макрофаги, моноциты, дифференцирующиеся фибробласты), процессы заживления ран происходили медленнее, чем в опытных группах, что подтверждает большую эффективность любого из средств для фотодинамической терапии в сравнении с традиционным лечением;

в 3-й основной группе были наименее выражены альтерация и воспаление и наиболее выражена репарация, что подтверждает наибольшее репаративное действие ФХТ с фотодитазином;

в сравнении с группами 1-я (фотосенс) и 2-я (холосенс) в 3-й группе (фотодитазин) эффективнее происходила элиминация некротического и гнойного компонента раневого экссудата, а также быстрее появлялись клеточные элементы репаративного характера.

В целом проведнное цитологическое исследование в первой серии экспериментов показывает высокую эффективность ранозаживляющих и бактерицидных свойств при применении метода ФХТ с фотодитазином в форме водного раствора в сравнении с фотосенсом и холосенсом при лечении полнослойных гнойных ран кожи у крыс.

Результаты изучения проникающей способности 1.2.

фотосенсибилизаторов в ткани ожоговых ран.

Целью исследований, выполненных во 2-ой серии экспериментов, явилось сравнительное изучение проникающей способности фотосенсибилизирующих средств в виде различных лекарственных форм (фотосенса, холосенса и фотодитазина в форме водного раствора или геля), применяемых при фотодинамической терапии, в некротические ткани ожоговых ран крыс в остром опыте на свежем полнослойном контактном ожоге.

Выполнено пять групп опытов в зависимости от применяемого вещества (таблица 3).

Критериями спектрофотометрического метода считали признаки:

интенсивность флюоресценции снаружи струпа (Iext), интенсивность флюоресценции внутри некротического ожогового струпа (Iint) и вычисляемый по формуле индекс проникающей способности (Кp). Все признаки имели соответствующие значения на 20, 40 и 60 минуту от начала опыта, проводимого в каждой группе.

Распределение значений признаков Iext и Iint в тесте Колмогорова Смирнова не подчиняется закону нормального распределения (KS = 1,6984,180, n = 100;

p 0,05), а признака Кp – подчиняется (KS = 1,0633,544, n = 100;

p 0,05). Статистический анализ зарегистрированных прибором спектрофотометрических признаков проводили с применением непараметрических методов, а вычисляемого индекса – с применением параметрических методов.

При проведении множественных сравнений выраженности признаков в Н-тесте Краскела-Уоллиса выявлено, что статистически значимые различия присутствуют для всех признаков во все сроки измерений (KW, n = 100;

p 0,05 / р 0,001). Попарное сравнение, учитывая неоднородность данных, полученных при измерении экзогенной флюоресценции, проводили только между сроками измерений внутри каждой отдельно взятой группы.

Описательная статистика медиан значений признаков Iext и Iint приведена в виде графиков boxplot (рисунки 14-19).

При попарном сравнении выраженности признака Iext между минутой и последующими сроками (40-й и 60-й минутами) внутри опытных групп в U-тесте Манна-Уитни выявлены следующие данные. В 1-й группе значения, полученные в отдельно взятые сроки измерений, не имеют между собой статистически значимой разницы (MW, n = 20;

p 0,05 / р = 0,5410,989), но имеют достоверные различия между сроками измерений (MW, n = 20;

p 0,05 / р 0,001).

Рис. Интенсивность Рис. 15 Интенсивность 14. (I) (I) флюоресценции раствора холосенса флюоресценции раствора фотосенса снаружи струпа и в тканях в снаружи струпа и в тканях в зависимости от срока (95% ДИ). зависимости от срока (95% ДИ).

Во 2-й группе внутри каждого срока различий в значениях не отмечено (MW, n = 20;

p 0,05 / р = 0,7360,998), а между сроками – получена достоверная разница (MW, n = 20;

p 0,05 / р 0,001).Те же данные получены и в группах III, IV, и V (MW, n = 20;

p 0,05 / р = 0,4270,991 // MW, n = 20;

p 0,05 / р 0,001). При попарном сравнении выраженности признака Iint между 20 минутой и последующими сроками внутри групп в U тесте Манна-Уитни выявлены аналогичные соотношения – значения, полученные в одной группе в один срок, не имеют статистически значимых различий (MW, n = 20;

p 0,05), но достоверно различаются между собой в разные сроки измерений (MW, n = 20;

p 0,05).

При анализе многопольных таблиц сопряжнности с применением Пирсона не выявили признаков, между которыми не существует статистически значимой связи.

Корреляционный анализ взаимосвязи между порядковым номером группы и выраженностью признаков выявил наличие статистически Рис. 16. I флюоресценции Рис. 17. I флюоресценции геля раствора фотодитазина снаружи холосенса снаружи струпа и в струпа и в тканях в зависимости от тканях в зависимости от срока срока (95% ДИ). (95% ДИ).

Рис. 18. I флюоресценции геля фотодитазина снаружи струпа и в тканях в зависимости от срока (95% ДИ).

значимой корреляционной связи между значениями признаков Iext и Iint и сроками проведения измерений флюоресценции в экспериментальных группах. Сильная или средняя отрицательная связь выявлена для признака Iint во всех группах кроме 4-й на 20/40 минутах (Rs = -0,675-0,882, n = 100;

p 0,001), средняя или сильная положительная – для признака Iext в группах 1-я с 20 по 60 минуту измерений, 2-я и 3-я 20/40, 4-я и 5-я 40/60 (Rs = 0,6250,917, n = 100;

p 0,001), сильная или средняя отрицательная – для признака Iext в группах 2-я и 3-я 40/60, 4-я и 5-я 20/40 (Rs = -0,711-0,875, n = 80;

p 0,001).

Значения признака «индекс проникающей способности» (Кp) подвергали статистическому анализу при помощи параметрических критериев (рисунок 19). При проведении анализа ANOVA статистически значимые различия между всеми группами в значении признака выявлены при первом измерении на 20-й минуте исследования и в другие сроки измерений (AN\B, n = 100;

p 0,001), исключая отсутствие различий в выраженности признака в группах 2-я, 3-я и 4-я на 40-й минуте и 1-я и 4-я на 60-й минуте (AN\B, n = 100;

p = 1,000). Корреляционный анализ взаимосвязи между порядковым номером группы и выраженностью признака выявил наличие статистически значимой положительной корреляционной связи между значением признака и группами. Слабая положительная связь выявлена для сроков 20 и 60 мин (Rpr = 0,2780,387, n = 100;

p 0,001), сильная положительная – для срока 40 мин (Rpr = 0,758, n = 100;

p 0,001).

При проведении анализа между признаком и условными группами «раствор»

и «гель» в сроки 20 и 60 мин достоверной связи не выявлено, однако в срок 40 мин определена средняя положительная статистически значимая связь (Rpr = 0,625, n = 100;

p 0,001).

По результатам статистического анализа спектрофотометрических измерений тканей ожоговых ран, на которые в остром опыте были нанесены различные фотосенсибилизаторы в различных формах, можно сказать, что:

в целом, наихудшей проникающей способностью характеризовались холосенс в растворе и холосенс в геле;

проникающая способность на 40-й минуте измерений у фотосенса в растворе, фотодитазина в растворе и холосенса в геле была идентичной, а на 60-й минуте она была идентична у холосенса в различных формах;

20 мин 40 мин 60 мин I группа II группа III группа IV группа V группа Рис. 19. Среднее значение индекса проникающей способности фотосенсибилизаторов (Кр) в зависимости от срока измерения.

лучшей проникающей способностью по сравнению с другими средствами обладает фотодитазин в различных формах – значения флюоресценции, измеренной с внутренней поверхности струпа приближаются в таковым, снимаемым с наружной поверхности струпа, а для ожоговых ран, с нанеснным на них фотодитазином в геле, на 40-й минуте значения внутренней флюоресценции в 5 раз превышают значения наружной флюоресценции;

наивысшей проникающей способностью характеризовался фотодитазин в геле – на 20-й минуте она была не менее чем в 1,5 раза выше, чем в остальных группах, на 40-й минуте - не менее чем в 5 раз выше, лишь только на 60-й минуте она была в 0,8 раз меньше, чем показатели раствора фотосенса, но достоверно выше по сравнению с другими средствами.

Таким образом, результаты наших исследоваий свидетельствуют о высокой проникающей способности в некротические ткани ожоговой раны растворов фотосенса и фотодитазина и наивысшую степень проникновения имеет фотодитазина в форме геля.

Результаты фотохимической терапии экспериментальных 1.3.

ожоговых ран.

Целью исследований, выполненных в 3-ей серии экспериментов, явилось сравнительное изучение эффективности местного использования фотохимической терапии с фотосенсибилизаторами в форме водных растворов и гелей при лечении ожоговых ран.

Клинические исследования показали, что влияние лазерной ФХТ с применением фотосенсибилизаторов холосенс и фотодитазин на репаративные процессы ожоговых ран находилось в четкой зависимости от лекарственной формы фотосенсибилизаторов (таблица 11).

Таблица Результаты лечения экспериментальных ожоговых ран у крыс Средний срок, сутки Ускорение Группы заживления ран по Отторжения Заживления отношению к животных первичного струпа контролю,% 15,4±0,8 29,6±0, Контрольная 13,2±0,5* 26,4,±0,5* 1-я опытная 11, 13,1±0,5* 26,1±0,5* 2-я опытная 12, 11,4±0,5** 24,2±0, 3-я опытная 18, 17,2±0,9*** 7,4±0, 4-я опытная 42, Отличия статистически достоверны (р0,05) при сравнении:

* - с контрольной группой животных, ** - со второй опытной группой, *** - с третьей опытной группой Использование традиционного лечения экспериментальных ожоговых ран (салфетками с антисептиками, мазевыми повязками) (контрольная группа), привело к отторжению первичного струпа через 15,4±0,8 дней и заживлению ожоговых ран к исходу 29,6±0,9 суток.

Применение в комплексном лечении экспериментальных ожоговых ран лазерной ФХТ с фотосенсибилизаторами - холосенс и фотодитазин в форме водного раствора стимулировало процессы заживления. В первой и второй опытных группах сроки очищения ожоговых поверхностей не превышали 13,2±0,5 суток, а полное заживление ран наблюдалось к исходу 26,1±0, суток с момента начала лечения, что статистически достоверно было лучше, чем в контрольной группе животных (р0,05).

Использование ФХТ с холосенсом в форме геля при лечении экспериментальных ожоговых ран обусловило возможность добиться отторжения струпа через 11,4±0,5 дней, а заживление ожогов на 24,2±0, сутки (р0,05 относительно второй опытной группы).

Среди изучаемых форм сенсибилизаторов, наиболее эффективным было лечение ожоговых ран у крыс четвертой опытной группы – так срок отторжения первичного струпа составил 7,4±0,4 дней, а полное заживление наблюдали через 17,2±0,9 суток, что статистически достоверно отличается от показателей в других группах (р0,05). Следовательно, использование ФХТ с фотодитазином, комплексованным с амфифильными полимерами, ускоряет заживление экспериментальных ожоговых ран на 42,3% по сравнению с традиционным лечением.

Полученные результаты также свидетельствуют, что лечение экспериментальных ожогов кожи с применением ФДТ с фотосенсибилизаторами в форме геля (холосенс, фотодитазин, комплексированный с амфифильными полимерами) более эффективно по сравнению с теми же сенсибилизаторами в форме раствора.

Результаты планиметрических исследований коррелировали с данными клинических наблюдений.

В контрольной группе животных использование антисептиков и мазевых повязок позволило добиться сокращения площади ран к десятым суткам наблюдений до 315,7±4,5 мм, на 15 сутки площадь раны в среднем составляла 208,5±3,5 мм, на 20-е сутки - 110,5±2,5 мм (таблица 12).

Применение ФХТ с водными растворами холосенса и фотодитазина положительно влияло на скорость сокращения ожоговых ран – к 10-м суткам лечения площадь ран в первой опытной группе находилось в пределах 255,6±2,5 мм, а во второй не превышала 256,2±3,2 мм, достоверно отличаясь Таблица Результаты планиметрических исследований у крыс с ожоговыми ранами Площадь ран (мм) М±м Группы животных и 10 сутки 15 сутки 20 сутки метод лечения 315,7±4,5 208,5±3, Контрольная 110,5±2, 1-я опытная 255,6±2,5* 193,4±2,8* 81,5±1,8* 2-я опытная 256,2±3,2* 79,4±2,1* 194,5±2,4* 205,6±3,2** 60,5±1,6** 170,5±2,5** 3-я опытная 4-я опытная 190,4±2,1*** 145,4±2,1*** Отличия статистически достоверны (р0,05) при сравнении:

* - с контрольной группой животных;

** - со второй опытной группой животных;

*** - с третьей опытной группой животных;

от аналогичного показателя животных контрольной группы (р0,05). Через 15 и 20 суток лечения площадь ожоговых ран были также достоверно меньше, чем при традиционном лечении (193,4±2,8 мм, 81,5±1,8 мм;

194,5±2,4 мм, 79,4±2,1 мм). В тоже время, использование ФХТ с упомянутыми сенсибилизаторами в форме геля обуславливало сокращение ожоговой поверхности к десятым суткам лечения до 205,6±3,2 мм и 190,4±2,1 мм соответственно, а на 15-е сутки - 170,5±2,5 мм и 145,4±2, мм. В четвертой группе в среднем через 17,2±0,9 дней наблюдали полное заживление экспериментальных ожоговых ран. Динамика уменьшения площади экспериментальных ожоговых ран в четвертой группе статистически достоверно отличалась от показателей 1-й и 2-й опытных групп и, особенно, контрольной группы животных (р0,05).

В процессе проведения лечебных мероприятий определялась определенная динамика в весе крыс. В течение первых семи суток лечения наблюдалось его снижение до 20% от исходного показателя в контрольной группе, до 12-15% у животных первой и второй опытных групп и до 9% у крыс, леченных ФДТ с холосенсом и фотодитазином в форме геля.

Таким образом, использование ФХТ с фотосенсибилизаторами холосенс и фотодитазин при лечении экспериментальных ожоговых ран у крыс позволяет сократить сроки их лечения по сравнению с традиционным лечением. Применение при лазерной ФХТ с сенсибилизаторами в форме геля активнее стимулирует процессы репарации ожоговых ран. Из изученных лекарственных форм фотосенсибилизаторов наибольшей эффективностью обладает фотодитазин, комплексированный с амфифильными полимерами, в форме геля, который ускоряет заживление экспериментальных ожоговых ран на 42,3% по сравнению с традиционным лечением.

.

Сравнительная оценка течения процессов репарации ожоговых ран по данным морфологических исследований.

У животных контрольной группы на 3-и сутки лечения в раневом дефекте определяется обширный некротический струп, представленный некротизированными клеточными элементами и коллагеновыми волокнами дермы. Вокруг струпа – со стороны подлежащей жировой клетчатки и прилежащей дермы выявляются выраженные признаки воспалительной реакции, что в первую очередь проявляется в резком расстройстве микроциркуляторной сосудистой системы. При этом большинство сосудов резко расширены и полнокровны, повышена проницаемость стенок сосудов, что проявляется в резком отке ткани и многочисленных диапедезных кровоизлияниях. В просвете сосудов выявляются микротромбы смешанного характера, признаки сладж-феномена, выраженная периваскулярная клеточная инфильтрация.

Струп отделн от прилежащих тканей лейкоцитарно-фибринозным валом (Рисунок 20), в котором большинство лейкоцитов подвержено распаду.

Между лейкоцитарным валом и прилежащими тканями выявляются новообразованные неориентированные сосуды и многочисленные клеточные элементы, среди которых видны нейтрофильные лейкоциты, макрофаги, единичные неориентированные фибробласты (Рисунок 21). Собственно грануляционная ткань к данному сроку исследования ещ не сформирована.

В неориентированных фибробластах и эндотелиоцитах новообразованных сосудов выявляется пиронинофилия цитоплазмы и ядрышек при окраске срезов по Браше.

Рис. 20. Струп и подлежащий лейкоцитарно-фибринозный слой. Контрольная группа животных. 3 сутки лечения. Окр.гематоксилином и эозином. Ув.х 400.

На 7-е сутки лечения раневой дефект покрыт лейкоцитарно фибринозным слоем, в котором определяются остатки некротизированной ткани струпа. Ткань последнего постепенно лизируется за счт ферментов распадающихся нейтрофильных лейкоцитов и макрофагов. Под лейкоцитарно-фибринозным слоем располагается новообразованная Рис. 21. Новообразованная отчная ткань в дне раны, представленная макрофагами, нейтрофильными лейкоцитами, отдельными неориентированными фибробластами. Контрольная группа животных. сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х грануляционная ткань с характерными для не слоями. В самом поверхностном слое – слое сосудистых аркад преобладают нейтрофильные лейкоциты, а также многочисленны макрофаги, встречаются отдельные фибробласты. Слой вертикальных сосудов представлен ориентированными перпендикулярно к поверхности раны стволиками новообразованных сосудов в виде артериол и венул. В поверхностных участках этого слоя преобладают макрофаги, также многочисленны нейтрофильные лейкоциты, встречаются неориентированные фибробласты. Тогда как в глубоких участках этого слоя содержание нейтрофильных лейкоцитов уменьшается, чаще обнаруживаются неориентированные фибробласты, но преобладают в основном макрофаги (Рисунок 22). Лишь у отдельных животных в наиболее зрелых участках грануляционной ткани можно видеть начальные этапы формирования в глубине слоя вертикальных сосудов участков параллельно ориентированных фибробластов (слой горизонтальных фибробластов).

Рис. 22. Грануляционная ткань, содержащая вертикальные сосуды, макрофаги, малочисленные неориентированные фибробласты. Контрольная группа. 7 сутки лечения. Окр. гематоксилином и эозином. Ув.х 400.

Необходимо отметить, что в лейкоцитарно-фибринозном слое вблизи струпа у части животных выявлялись колонии микроорганизмов, кроме того в поверхностных участках грануляционной ткани выявлялись отдельные микроабсцессы (Рисунок 23).

Рис. 23. Формирование в грануляционной ткани микроабсцессов.

Контрольная группа животных. 7 сутки лечения. Окр. гематоксилином и эозином. Ув.х 200.

По сравнению с предыдущим сроком исследования в контрольной группе животных отмечается ослабление микроциркуляторных расстройств, при этом несколько уменьшается отчность ткани, менее выражены диапедезные микрокровоизлияния, реже выявляются микротромбы и признаки сладж-феномена в просвете сосудов. При окрашивании срезов толуидиновым синим вблизи сосудов обнаруживаются единичные тучные клетки (Рисунок 24).

Рис. 24. Метахроматичные тучные клетки вблизи сосуда. Контрольная группа животных. 7 сутки лечения. Окраска толуидиновым синим. Ув.х 900.

На 14 сутки традиционного лечения поверхность раневого дефекта покрыта лейкоцитарно-фибринозным слоем, в котором ещ сохраняются отдельные элементы ожогового струпа в виде фрагментов некротизированных коллагеновых волокон. Под струпом располагается относительно развитая грануляционная ткань с характерными для не слоями. Зрелость грануляционной ткани увеличивается от поверхности ко дну раны и от е центра к периферии. В поверхностных участках слоя вертикальных сосудов ещ сохраняются относительно многочисленные нейтрофильные лейкоциты, хотя преобладают в этих участках макрофаги, видны немногочисленные неориентированные фибробласты. В тоже время в глубине грануляционной ткани уменьшается число нейтрофильных лейкоцитов, значительно чаще определяются макрофаги и фибробласты. В наиболее зрелом слое грануляционной ткани – слое фибробластов преобладают функционально активные фибробластические элементы с выраженной пиронинофилией цитоплазмы и ядрышек. Вблизи этих клеток обнаруживаются новообразованные коллагеновые волокна, часть из которых окрашивается по Ван Гизону в красный цвет. В этих же участках отмечается активный синтез кислых гликозаминогликанов, выявляемых при окрашивании срезов толуидиновым синим.

Следует отметить, что по сравнению с предыдущим сроком исследования наблюдается ослабление микроциркуляторных расстройств, и как следствие, уменьшение отчности ткани и е инфильтрации нейтрофильно-гистиоцитарными элементами. Вместе с тем у отдельных животных в поверхностных участках грануляционной ткани определяются локальные микроабсцессы, в некоторых из них видны колонии микроорганизмов. В краевых участках раны отмечается регенерация поврежднного эпидермиса, при этом тонкий пласт новообразованных клеток многослойного плоского эпителия подрастает под лейкоцитарно фибринозный слой.

Таким образом, заживление ожоговых ран у крыс контрольной группы характеризуется постепенным ослаблением признаков острого воспаления и медленной активизацией репаративных процессов. В течение этого времени наблюдается очищение раневой поверхности от девитализированных тканей, уменьшение признаков микроциркуляторных нарушений, отека и нейтрофильной инфильтрации, при одновременной активизации реакции пролиферации, формирования островков грануляционной ткани, которая постепенно заполняет весь раневой дефект. В глубине грануляционная ткань постепенно фиброзируется, поверхность раневого дефекта постепенно покрывается регенерирующим эпидермисом.

Первая-вторая опытные группы.

На 3-и сутки лечения раневая поверхность покрыта оксифильным струпом, окрашивающимся гематоксилином и эозином в розовый цвет.

Струп преимущественно состоит из некротизированных коллагеновых волокон дермы и распадающихся клеточных элементов – фиброцитов. В прилежащих к струпу тканях со стороны дермы и дна раны – выраженные расстройства микроциркуляции и признаки воспалительного процесса.

Однако выраженность сосудистых нарушений несколько меньше, по сравнению с крысами контрольной группы. Повышенная сосудистая проницаемость, стазы, периваскулярные, диапедезные и очаговые кровоизлияния, отк ткани несколько ослабевают, особенно во второй опытной группе животных. В формирующейся между струпом и дном раны новообразованной ткани преобладают нейтрофильные лейкоциты и макрофаги, несколько чаще, по сравнению с контролем, обнаруживаются неориентированные фибробласты. В подкожной клетчатке и окружающей дерме, в отличие от контрольной группы животных, обнаруживается формирование отдельных вертикальных сосудов, что свидетельствует об образовании островков грануляционной ткани 25).

(Рисунок Новообразованные сосуды обычно отпочковываются от поврежднных сосудов жировой клетчатки. Наиболее активно процесс ангиогенеза выявляется во второй опытной группе животных. В эндотелиоцитах новообразованных сосудов выявляется выраженная пиронинофилия цитоплазмы и ядрышек.

На 7-е сутки лечения в данных группах животных раневая поверхность покрыта лейкоцитарно-фибринозным струпом, в котором выявляются остатки ожогового струпа. Следует отметить, что по сравнению с контрольными животными, в результате проводимого лечения струп резорбировался более активно клеточными элементами, особенно, во второй опытной группе животных.

Рис. 25.. Формирование вертикальных сосудов грануляционной ткани в глубине раневого дефекта. Вторая опытная группа животных. 3 сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 400.

Непосредственно под лейкоцитарно-фибринозным слоем располагается грануляционная ткань, имеющая более зрелый характер по сравнению с контрольной группой животных. Следует отметить некоторое снижение числа нейтрофильной инфильтрации ткани в поверхностных участках слоя вертикальных сосудов. Здесь увеличивается число макрофагов и несколько чаще встречаются неориентированные фибробласты. В тоже время в глубоких отделах грануляционной ткани, по сравнению с контролем, увеличивается число фибробластических элементов. Слой горизонтальных фибробластов более развит, особенно во второй группе животных. В этом слое чаще обнаруживаются коллагеновые волоконца, окрашиваемые по Ван Гизону в розовый и красный цвет. В этом же слое определяется довольно выраженная метахромазия межклеточного матрикса, что свидетельствует об активном синтезе кислых гликозаминогликанов.

В результате проводимого лечения, по сравнению с контрольной группой животных, несколько менее выражены микроциркуляторные изменения, что проявляется в первую очередь в уменьшении проницаемости стенок сосудов и отчности ткани, периваскулярной клеточной инфильтрации, менее выраженных диапедезных микрокровоизлияниях. В отличие от контрольной группы животных в грануляционной ткани реже обнаруживаются колонии микроорганизмов и микроабсцессы.

На 14-е сутки лечения поверхность раневого дефекта покрыта остатками лейкоцитарно-фибринозного струпа, причем последний более выражен в группах животных, леченных ФХТ с холосенсом в форме раствора. Под струпом располагается относительно зрелая грануляционная ткань, имеющая более зрелый характер, особенно при лечении крыс ФДТ с фотодитазином. По сравнению с предыдущим сроком исследования несколько уменьшается объм грануляционной ткани за счт е созревания и контракции. Наиболее зрелые участки грануляционной ткани выявляются в глубине раны и на границе с неповрежднной дермы. В слое горизонтальных фибробластов увеличивается число ориентированных параллельно поверхности раны фибробластических элементов, а также формирующихся здесь коллагеновых волокон. Чаще обнаруживаются пучки зрелых коллагеновых волоконец окрашиваемых в красный цвет. При этом по мере созревания коллагеновых волокон в межклеточном матриксе уменьшается содержание кислых гликозаминогликанов, что объясняется связыванием последних в процессе фибриллогенеза. По сравнению с предыдущим сроком исследования уменьшается слой вертикальных сосудов, который постепенно замещается слоем горизонтальных фибробластов. Также наблюдается ослабление микроциркуляторных изменений, особенно в краях и дне раневого дефекта. Полнокровные и расширенные сосуды с повышенной проницаемостью стенок сосудов сохраняются лишь в центральных и поверхностных участках грануляционной ткани. В краевых участках раны отмечается пролиферация регенерирующего эпителия, наползающего на поверхность грануляционной ткани под струп. Регенерация эпидермиса несколько более выражена во второй группе животных.

Третья-четвертая опытные группы.

На 3-и сутки лечения, как и в предыдущих группах животных, раневой дефект покрыт струпом, представленным преимущественно некротизированными коллагеновыми волокнами дермы. Непосредственно между струпом и подлежащей тканью располагается лейкоцитарно фибринозный слой. Также как и в других группах животных выявляются расстройства микроциркуляторного русла, но выраженные в меньшей степени, особенно при лечении ран фотодитазином в форме геля (4-я группа животных). Действительно, в дне раны и прилежащей дерме был менее выражен отк тканей и диапедезные микрокровоизлияния, периваскулярная нейтрофильная инфильтрация, реже в просвете сосудов выявлялись микротромбы и признаки сладж-феномена. В тоже время в этих группах в большей степени активировались признаки ангиогенеза, что проявлялось в более частом выявлении островков грануляционной ткани, представленной формирующимися вертикальными сосудами (Рисунок 26). Эндотелиоциты Рис. 26. Грануляционная ткань с многочисленными вертикальными сосудами и клеточными элементами. Четвртая опытная группа животных. сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х новообразованных сосудов отличались выраженной пиронинофилией цитоплазмы и ядрышек, что свидетельствовало об их высокой функциональной активности (Рисунок 27).

Рис. 27. Пиронинофилия цитоплазмы и ядрышек эндотелиоцитов и фибробластов. Третья опытная группа животных. 3 сутки лечения. Окраска реакция по Браше. Ув.х 900.

Между лейкоцитарно-фибринозным слоем и подлежащей жировой клетчаткой формируются островки грануляционной ткани, при этом клеточный состав раны довольно полиморфный. Однако можно отметить, что по сравнению с предыдущими группами животных ослабевает нейтрофильная инфильтрация ткани, увеличивается число активных макрофагов и, особенно, чаще обнаруживаются пролиферирующие фибробласты. Последние в основном определяются периваскулярно. В краевых участках раны наблюдаются признаки регенерации поврежднного многослойного плоского эпителия, чего не наблюдалось в ранее исследованных группах животных.

На 7-е сутки лечения в 3-ей и 4-ой группах животных поверхности раневого дефекта покрыты лейкоцитарно-фибринозным слоем с остатками активно резорбируемого струпа. В данных группах животных лизис некротизированной ткани струпа протекает наиболее активно, по сравнению с ранее изученными животными. В краях раневого дефекта наблюдаются признаки наползания под лейкоцитарно-фибринозный слой регенерирующего эпидермиса. Эти признаки наиболее выражены в 4-ой опытной группе животных.

Под лейкоцитарно-фибринозным слоем, как и в других группах животных, располагается грануляционная ткань, имеющая наиболее зрелый характер в глубине и по краям раны. Следует отметить, что более зрелый характер грануляционная ткань имеет в 3-ей и, особенно, 4-ой группах животных (Рисунок 28). В данных группах животных в большей степени ослабевают микроциркуляторные расстройства и, как следствие, уменьшается отк и нейтрофильная инфильтрация верхних отделов слоя вертикальных сосудов. По сравнению с другими группами животных и, особенно, контрольной, увеличивается содержание тучных клеток, часть из которых подвержена дегрануляции (Рисунок 29). Увеличение числа тучных клеток корригирует с нормализацией микроциркуляторного русла. Здесь также чаще выявляются функционально активные макрофаги с ШИК положительной пенистой цитоплазмой. В этой группе животных наиболее выражена пролиферация фибробластических элементов, в связи с чем, более развит слой горизонтальных фибробластов грануляционной ткани. В 3-ей и 4-ой группах животных в слое горизонтальных фибробластов наиболее часто выявляются относительно зрелые фуксинофильные коллагеновые волокна. В наиболее зрелых участках наблюдается ослабление метахромазии межклеточного матрикса, что объясняется связыванием кислых гликозаминогликанов в процессе фибриллогенеза.

В данной группе животных, по сравнению с ранее исследованными и, особенно контрольной группой, не обнаруживаются колонии микроорганизмов и лишь у отдельных животных редко формируются микроабсцессы.

Рис. Относительно зрелая грануляционная ткань с 28.

ориентированными фибробластами и выраженным фибриллогенезом.

Четвртая опытная группа животных. 7 сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 400.

Рис. 29. Скопление метахроматичных тучных клеток с признаками дегрануляции. Третья опытная группа животных. 7сутки лечения.

Окраска толуидиновым синим. Ув.х 900.

На 14-е сутки лечения поверхность раневого дефекта на значительном протяжении эпителизирована за счт наползающего на поверхность грануляционной ткани регенерирующего эпидермиса (Рисунок 30). Лишь на небольшом участке поверхности неэпителизированной раны определяются остатки лейкоцитарно-фибринозного слоя. Грануляционная ткань подвергается активному созреванию и фиброзированию (Рисунок 31), что сопровождается контракцией раны. Слой вертикальных сосудов сохраняется Рис. 30. Наползание регенерирующего эпидермиса на поверхность грануляционной ткани. Четвртая опытная группа животных. 14 сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 200.

Рис. 31. Фиброзирование грануляционной ткани. Коллагеновые волокна приобретают извитой характер. Четвртая опытная группа животных. сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х 400.

преимущественно в центральных верхних отделах грануляционной ткани, тогда как в более зрелых участках сосуды подвержены коллабированию.

Слой вертикальных сосудов постепенно замещается слоем горизонтальных фибробластов. В этом слое в наиболее зрелых участках постепенно уменьшается число клеточных элементов, а оставшиеся фибробласты замещаются малоактивными фиброцитами, которые приобретают извитой характер и отличаются слабовыраженной пиронинофилией цитоплазмы и ядрышек. Также в этих участках ослабевает метахромазия межклеточного матрикса, что объясняется связыванием кислых гликозаминогликанов в процессе фибриллогенеза. Незначительные микроциркуляторные изменения в виде расширенных и полнокровных сосудов, слабо выраженной отчности ткани и мелких диапедезных микрокровоизлияний, сохраняются лишь в поверхностных неэпителизированных участках грануляционной ткани.

Таким образом, ФХТ с фотосенсибилизаторами холосенс и фотодитазин способствует ослаблению воспалительной реакции и более раннему развитию процессов репарации ожоговых ран у крыс. Это проявляется в ослаблении микробной обсемененности, микроциркуляторных расстройств, нейтрофильной инфильтрации и отечности ткани, особенно в случае их использования в форме геля. Из изученных лекарственных форм фотосенсибилизаторов наибольшей эффективностью обладает ФХТ с фотодитазином в форме 0,1% геля, комплексированного с амфифильными полимерами. ФХТ с холосенсом несколько уступает по выраженности влияния на заживление огнестрельных ран мягких тканей вышеупомянутой форме. Учитывая полученные результаты наиболее перспективным к использованию при лечении огестрельных ран мягких тканей следует считать ФДТ с 0,1% гелем фотодитазина, комплексированного с амфифильными полимерами.

Динамика степени микробной обсемененности ожоговых ран в эксперименте.

Количественный бактериологический контроль проводили на 3, 5, 10 и 15 сутки лечения. Перед началом лечения ожоговые раны отличались высокой степенью обсемененности, в среднем 1х109-10 КОЕ/мл раневого отделяемого.

По результатам теста Колмогорова-Смирнова, распределение значений бактериологических признаков (обсеменнность раны в определнный срок) не подчиняется закону нормального распределения (KS = 2,0182,854, n = 35;

0,001), поэтому дальнейший анализ проводили при помощи p непараметрических критериев.

На 3-и сутки лечения показатели микробной обсеменнности ожоговых ран уже имели различия - в опытных группах по сравнению с контролем отмечается заметное снижение степени обсеменнности, которое примерно схоже во 2-й и 3-й опытных группах (находится примерно в пределах одного уровня степени инфицированности). Наименьшая обсеменнность ожоговых ран во все сроки отмечали в 4-й опытной группе (таблица 13, рисунок 32).

При проведении множественных сравнений выраженности признака в Н тесте Краскела-Уоллиса выявлено, что статистически значимые различия обсеменнности ран во всех группах присутствуют во все сроки (KW, n = 35;

р 0,05 / р 0,001). При попарном сравнении выраженности признака между контрольной и всеми опытными группами в U-тесте Манна-Уитни выявлены следующие данные. При сравнении выраженности признаков между контрольной группой и большинством опытных групп во все сроки измерений выявлены статистически значимые различия (MW, n = 14;

p 0, / р = 0,0010,002). Не выявлено достоверных различий лишь при сравнении признака, определнного на 3-и сутки эксперимента во 2-й и 3-й опытных группах (MW, n = 14;

p 0,05 / р = 0,128).

Таблица Динамика микробной обсемененности ожоговых ран в процессе лечения 3-и сутки 5-е сутки 10-е сутки 15-е сутки 10 9 6,3 х Контрольная 8 х 10 5,5 х 10 7,2 х [7,1х1010;

[4,9х109;

[6,7х108;

[5,7х106;

группа 8,6х1010] 5,8х109] 8,4х109] 6,9х106] 8,2 х 109 7,6 х 108 4,2 х 106 4,0 х 1-я группа [7,0х109;

[4,2х108;

[3,8х106;

[2,7х105;

9,0х109] 2,5х109] 5,6х106] 4,8х105] 5,1 х 109 3,5 х 108 1,8 х 106 7,0 х 2-я группа [2,6х109;

[2,9х108;

[1,3х106;

[3,2х104;

8,7х109] 4,1х108] 2,1х106] 2,3х105] 6,8 х 108 3,9 х 107 1,8 х 105 6,4 х 3-я группа [5,0х108;

[3,1х107;

[1,4х105;

[5,1х103;

7,9х108] 4,8х107] 2,0х105] 7,5х103] 5,8 х 107 3,6 х 106 2,2 х 104 3,4 х 4-я группа [4,9х107;

[2,9х106;

[2,8х104;

[1,1х102;

6,8х107] 4,3х106] 3,6х104] 2,8х103] При анализе многопольных таблиц сопряжнности с применением Пирсона не выявили признаки, между которыми не существует статистически значимой связи.

Корреляционный анализ взаимосвязи между порядковым номером группы и выраженностью степени обсеменнности ран выявил наличие статистически значимой корреляционной связи между значениями признака и экспериментальными группами. Очень сильная отрицательная связь выявлена между выраженностью признака во все сроки исследования и порядковым номером группы (Rs = -0,955-0,980, n = 35;

p 0,05), средняя отрицательная связь – между выраженностью признака и условными группами «контроль» и «лечение ФХТ» (Rs = -0,693, n = 35;

p 0,05), а также очень сильная отрицательная связь между клиническими признаками и условными группами «традиционное лечение» /«лечение ФХТ с растворами»

/ «лечение ФХТ с гелевыми средствами» (Rs = -0,929-0,930, n = 35;

p 0,05).

Это свидетельствует о значимом сокращении степени обсеменнности ран от контрольной группы к 4-ой опытной группе во все сроки исследования.

контроль II группа III группа 4 IV группа 3 V группа 2-е сутки 5-е сутки 10-е сутки 14-е сутки Рис. 32. Динамика степени обсеменнности полнослойных ожоговых ран (в КОЕ/мл) в зависимости от группы. По оси ординат - степень инфицированности ран, в КОЕ.

На основании результатов микробиологических исследований термических ран у крыс, можно заключить, что наибольшее сокращение степени обсеменнности ран отмечается при местном лечении с использованием ФХТ с различными фотосенсибилизаторами, среди которых более эффективно применение гелевых форм препаратов в сравнении с растворами. Не отмечено значимых различий в степени обсеменнности между группами при использовании холосенсом и фотодитазином в водном растворе на 3-и сутки лечения. Достоверно наибольшим бактерицидным эффектом обладает ФХТ с фотодитазином, комплексированным амфифильными полимерами, в форме геля. Сильная корреляционная связь подтверждает тенденцию к уменьшению инфицированности в 4-й опытной группе по сравнению с контрольной и другими опытными группами.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что на сокращение степени обсемененности ожоговых ран ФХТ с холосенсом и фотодитазином в растворе влияют в меньшей степени, чем те же препараты, в форме геля, в особенности фотодитазин в гелевой форме. В тоже время ФХТ с обоими фотосенсибилизаторами имеет более выраженный бактерицидный эффект по сравнению с традиционным лечением антисептиками и местными антибактериальными средствами.

Таким образом, применяемые методы лечения по-разному влияют на степень микробной обсемененности ожоговых ран у крыс. При использовании традиционных методов в течение длительного времени наблюдается высокая микробная обсемененность. ФХТ с холосенсом и фотодитазином в форме водного раствора положительно влияют на количественный микробиологический показатель. При этом использование сенсибилизаторов в форме геля более эффективно по сравнению с раствором.

У животных, леченных ФХТ с гелем фотодитазина, комплексированного амфифильными полимерами, уже к исходу 3-х суток исследований наблюдается выраженное уменьшение числа микробных тел в единице объема раневого отделяемого (1х105 КОЕ). Наблюдаемое уменьшение числа микробных тел в 1 мл раневого отделяемого трое суток лечения, у животных четвертой опытной группы, можно объяснить выраженным антимикробным действием ФХТ с гелем фотодитазина, комплексированного с амфифильными полимерами, в виде и проникающей способности препарата в некротический струп, обеспечивающих относительно быструю ликвидацию инфекционного агента воспаления.

Результаты лечения огнестрельных ран с использованием 1.4.

фотохимической терапии с гелем фотодитазина.

С целью выявления возможностей ФХТ при оказании помощи раненым с огнестрельными ранами в передовых военно-полевых учреждениях, а так же определения наиболее оптимальной лекарственной дозы фотосенсибилизатора, выполнена 4-я серия испытаний (таблица 5 в главе 2).

Экспериментальные исследования проведены на моделях огнестрельных ран на 123 крысах массой 250,0±20,0г.

Критериями клинического исследования считали признаки, отражающие сроки:

- исчезновения признаков воспаления (Inflam), - отторжения первичного некротического струпа и очищения раны от гнойного отделяемого (Detrit), - появления грануляций и начальной краевой эпителизации (GranEpit), - полного ранозаживления (WH).

Производили оценку сроков меняющихся характеристик заживления ран в группах и индекса ускорения ранозаживления в опытных группах по сравнению с контролем. По результатам теста Колмогорова-Смирнова, распределение значений срока заживления ран подчиняется закону нормального распределения (KS = 2,762, n = 60;

p 0,05), поэтому анализ проводили при помощи параметрических критериев.

Результаты клинических наблюдений.

Результаты наших исследований показали, что до начала лечения экспериментальные огнестрельные раны крыс всех групп исследования характеризовались наличием обильного гнойного отделяемого и некротизированных тканей. Края ран выбухали, были синюшного цвета, а отек и гиперемия мягких тканей определялась на значительном расстоянии.

На третьи сутки лечения в контрольной группе животных огнестрельная рана характеризуется наличием большого количества жидкого гнойного отделяемого с резким, ихорозным запахом и некротических масс. По сравнению с предыдущим сроком исследования отмечается увеличение отека и гиперемии тканей вокруг ран. У крыс первой опытной группы, при лечении ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,5% геля, отек и гиперемия тканей вокруг ран уменьшились. Отделяемое в небольшом количестве, в большинстве случаев серозно-гнойного характера. Раневая поверхность покрыта рыхлым, белесовотого цвета струпом, некротические массы покрывают дно и стенки раневого канала, выявляется обильное гнойное отделяемое без резкого ихорозного запаха. Отек и гиперемия тканей вокруг входного отверстия огнестрельной раны сохраняются, однако, без тенденции к увеличению.

При лечении ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля, отек и гиперемия тканей вокруг ран менее выражен, чем в предыдущей группе. Раневая поверхность покрыта рыхлым, белесовотого цвета струпом, после удаления которого выявляются некротические ткани в дне и на стенках раневого канала в меньшем количестве, чем в 1-й группе, отделяемое незначительное, гнойное.

Результаты лечения огнестрельных ран представлены в таблице 14.

На пятые сутки лечения крысы во всех группах активны. Отек и гиперемия тканей вокруг огнестрельных ран незначительны, более выражены у крыс контрольной группы, у которых выявляется плотный струп темно коричневого цвета, под которым имеется обильное гнойное отделяемое. У крыс опытных групп раны покрыты тонким плотным струпом, под которым имеются участки, свободные от некротических тканей, и незначительное серозное отделяемое.


Таблица Динамика клинических проявлений заживления огнестрельных ран Средние сроки, сутки Группы Исчезновения Очищения Появления Полное животных признаков ран от грануляций заживления ран воспаления детрита Контрольная 12,5±1,1 10,9±0,6 10,4±0,5 31,3±1, 1-я опытная 8,9±0,8 8,7±0,3 8,5±0,6 27,8±1, группа Р10,05 Р10,05 Р10,05 Р10, 2-я опытная 6,9±0,8 6,5±0,1 6,1±0,4 25,2±1, группа Р20,05 Р20,05 Р20,05 Р20, Р1 - различие достоверно относительно контрольной группы Р2 - различие достоверно относительно 1-й опытной группы Очищения раневой поверхности от девитализированных тканей и появления грануляционной ткани у крыс контрольной группы отмечали на 10,9±0,6 и 10,4±0,5 сутки, а полное заживление ран происходило через 31,3±1,8 дней.

Исчезновение отека и гиперемии тканей вокруг ран у крыс, пролеченных с использованием ФДТ с 0,5% гелем фотодитазина, наблюдается к исходу 8,9±0,8 суток наблюдений, что статистически достоверно отличается от показателей контрольной группы (Р10,05), а сроки очищения раневой поверхности от девитализированных тканей и появления грануляционной ткани не превышают 8,7±0,3 и 8,5±0,6 суток соответственно. Полное заживление ран в упомянутой группе отмечали на 27,8±1,4 сутки лечения, что на четверо суток раньше по сравнению с контрольными крысами.

При использовании ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля (вторая опытная группа) исчезновение явлений местной воспалительной реакции в виде отека и гиперемии тканей определяли к исходу шестых-седьмых суток лечения, а очищение ран от некротических тканей и появление грануляционной ткани наступало на шестые сутки лечения. При этом, сроки полного заживления огнестрельных ран не превышали 25,2±1,5 суток, статистически достоверно отличаясь от показателя второй опытной группы (Р20,05). Следует отметить, что характерным было серо-зеленое окрашивание тканей раневой поверхности крыс изучаемых опытных групп. Окрашивание тканей носило стойкий характер, не исчезало после обработки раневой поверхности растворами антисептиков и наблюдалось до пяти суток лечения.

Самое быстрое очищение, репарация и заживление огнестрельных ран по сравнению со всеми остальными группами отмечено во 2-й опытной группе при использовании ФХТ с 0,1% гелем фотодитазина, комплексированного с амфифильными полимерами (таблица 15, рисунки - 40).

При проведении однофакторного дисперсионного анализа ANOVA выявлены статистически значимые различия между всеми группами по срокам всех характеристик ранозаживления – Inflam, Detrit, GranEpit и WH (AN\B, n = 60;

p 0,001).

Таблица Сроки заживления ран (M ± s) и индекс ускорения заживления в группах Группы животных и метод WH, сутки КWH, % лечения I группа (контроль) 31,3±1,8 II группа (ФХТ с 0,5% ФДЗг) 27,8 ± 1,4 12, III группа (ФХТ с 0,1% ФДЗг) 25,2 ± 1,5 19, Корреляционный анализ взаимосвязи между номером группы и проявлением клинических признаков Inflam, Detrit, GranEpit выявил наличие очень сильной отрицательной статистически значимой корреляционной связи Рис. 37. Различия в значениях Рис. 38. Различия в значениях показателя Inflam огнестрельных показателя Detrit огнестрельных ран (95% ДИ). ран (95% ДИ).

(Rpr = -0,837-0,882, n = 60;

p 0,001), что свидетельствует о том, что темпы купирования воспалительных явлений, очищения ран от некротического и гнойного детрита, появления грануляционной ткани и краевой эпителизации ран значимо возрастают от контрольной группы к группе, в которой проводили ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля. Очень сильная отрицательная связь отмечена при анализе взаимосвязи признака WH и группами (Rpr = -0,837, n = 60;

p 0,001).

Рис. 39. Различия в значениях Рис. 40. Различия в значениях показателя GranEpit показателя «срок огнестрельных ран (95% ДИ). ранозаживления» огнестрельных ран в зависимости от группы (95% ДИ).

Основываясь на результатах клинического наблюдения за процессом заживления огнестрельных ран у крыс, можно заключить, что наилучшим эффектом на очищение и репаративные процессы, а также на ускорение заживления экспериментальных огнестрельных ран обладает фотодинамическая терапия с применением фотодитазина, в большей мере 0,1% геля фотодитазина, комплексированного с амфифильными полимерами.

При лечении огнестельных ран с применением фотодитазина, комплексованного с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля в через 6 суток выявляется очищение тканей от гнойно-некротического детрита и активный рост грануляционной ткани, к 7-м суткам стихает перифокальное воспаление, происходит изменение качества раневого экссудата с гнойного на серозно-фибринозный и начинается краевая эпителизация раневого дефекта. Применение фотодитазина в форме 0,5% геля также вызывает стимуляцию репаративных процессов в ране в сравнении с контролем, но они идут с запозданием на 1-2 дня по сравнению со 2-й группой.

Статистически достоверна разница и в сроках заживления огнестрельных ран: применение ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля ускоряет заживление на 19,5% по сравнению с контролем, а фотодитазин в форме 0,5% геля лишь на 12,9%. Это также подтверждает более высокую эффективность стимуляции репаративных процессов в огнестрельных ранах ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля по сравнению с контролем и фотодитазином в форме 0,5% геля.

Таким образом, анализ клинической картины заживления огнестрельных ран у крыс показывает стимуляцию заживления ран ФХТ с фотодитазином в форме 0,1% и 0,5% гелей, но тем не менее с небольшим отрывом в пользу фотодитазина, комплексированного с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля. При использовании фотодинамической терапии ран с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля сроки очищения огнестрельных ран не превышают 6,5±0,1 суток с момента начала лечения, что на двое суток быстрее по сравнению со 2-й опытной группой и пять суток в сравнении с традиционным методом лечения. Сокращение первой фазы воспаления закономерно уменьшало и полные сроки заживления ран, которые наступали к исходу двадцать пятых суток наблюдений.

Динамика микробной обсемененности огнестрельных ран в эксперименте.

Количественный бактериологический контроль осуществляли через 1, 3, 5 и 10 суток лечения у 20 животных каждой группы. В первой «точке»

проведения бактериологического исследования показатели микробной обсеменнности ран уже имели различия, так как к данному сроку на протяжении одних суток раны обрабатывали лекарственными средствами, а также в опытных группах уже был произведн сеанс ФХТ (таблица 16).

По результатам теста Колмогорова-Смирнова, распределение значений бактериологических признаков (обсеменнность раны в определнный срок) не подчиняется закону нормального распределения (KS = 1,5783,633, n = 21;

p 0,001), дальнейший анализ проводили при помощи непараметрических критериев.

Таблица Динамика обсеменнности огнестрельных ран в группах Срок 1-е сутки 3-е сутки 5-е сутки 10-е сутки Группа 7,8 х 1010 5,5 х 1010 7,2 х 109 6,3 х контрольная [7,1х1010;

[4,9х1010;

[6,7х109;

[5,7х105;

группа n= 8,6х1010] 5,8х1010] 8,4х109] 6,9х105] 8,2 х 108 7,6 х 106 4,2 х 105 4,0 х 1-я опытная [7,0х108;

[4,2х106;

[3,8х105;

[2,7х102;

группа n= 9,0х108] 2,5х106] 5,6х105] 4,8х102] 5,8 х 107 3,6 х 105 2,2 х 104 3,4 х 2-я опытная [4,9х107;

[2,9х105;

[2,8х104;

[1,1х102;

группа n= 6,8х107] 4,3х105] 3,6х104] 2,8х102] Уже с 1-х суток эксперимента и во все остальные сроки во 1-й и 2-й опытных группах по сравнению с контрольной отмечается заметное снижение степени обсеменнности огнестрельных ран, которое примерно схоже в группах I и II (находится примерно в пределах одного или соседнего уровня степени инфицированности), во все сроки обсеменнность ран наименьшая в группе II, (рисунок 41).

контроль II группа 4 III группа 1-е сутки 3-е сутки 5-е сутки 10-е сутки Рис. 41. Динамика степени обсеменнности огнестрельных ран (в КОЕ/мл) в зависимости от группы. По оси ординат - степень инфицированности ран, в КОЕ/мл.

При проведении множественных сравнений в Н-тесте Краскела Уоллиса выявлено, что статистически значимые различия обсеменнности ран в группах присутствуют во все сроки (KW, n = 21;

р 0,05 / р 0,001).

При попарном сравнении между контрольной и всеми опытными группами в U-тесте Манна-Уитни выявлены следующие данные. При сравнении выраженности признака между контрольной группой и опытными группами во все сроки измерений выявлены статистически значимые различия (MW, n = 14;

p 0,05 / р 0,001), при сравнении признака между 1 ой и 2-ой опытными группами не выявлено различий лишь в последний срок (MW, n = 14;

p 0,05 / р = 0,209).

При анализе многопольных таблиц сопряжнности с применением Пирсона не выявили признаки, между которыми не существует статистически значимой связи. Корреляционный анализ взаимосвязи между порядковым номером группы и выраженностью степени обсеменнности ран выявил наличие статистически значимой корреляционной связи между значениями признака и экспериментальными группами. Очень сильная отрицательная связь выявлена между выраженностью признака во все сроки исследования и порядковым номером группы (Rs = -0,805-0,944, n = 21;

p 0,05), также выявлена очень сильная отрицательная связь между степенью инфицированности ран и группами «традиционное лечение» / «лечение ФХТ с гелевыми средствами» (Rs = -0,817-0,818, n = 21;

p 0,05). Это свидетельствует о значимом сокращении степени обсеменнности ран от контрольной группы ко 2-ой опытной группе во все сроки проводимого бактериологического исследования.


На основании результатов микробиологических исследований огнестрельных ран у крыс, можно заключить, что наибольшим влиянием на уменьшение микробной обсеменнности ран обладает местное лечение с помощью ФХТ с фотодитазином в форме геля, среди которых более эффективно применение фотодитазина, комплексированного с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля в сравнении с 0,5% гелем.

Не отмечено значимых различий в степени обсеменнности между группами с применением различных концентраций геля фотодитазина на 10-е сутки эксперимента. Достоверно наибольшим бактерицидным эффектом обладает фотодитазин, комплексированный с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля.

Морфология огнестрельной раны при применении ФХТ с фотодитазином.

В каждый срок исследования (на 3, 5 и 10-е сутки наблюдений) у животных в 3-й серии эксперимента из всех 3-х морфологических групп иссекали фрагменты ран, далее этих животных выводили из эксперимента.

При исследовании гистологической картины учитывали динамику отобранных морфологических признаков, аналогичных гистологической картине в 3-й серии, которые аналогичным образом оценивали по 4-балльной шкале. Неоднородность картины раневой архитектоники отмечалась во все сроки исследования.

Распределение значений морфологических признаков в тесте Колмогорова-Смирнова более чем в 35% случаев не подчиняется закону нормального распределения (KS = 1,1182,591, n = 63;

p 0,05).

Контрольная группа животных.

Третьи сутки лечения.

При гистологическом исследовании препаратов контрольной группы животных выявлены характерные для огнестрельной раны зоны: первичный раневой канал, зона контузии (первичного некроза) и зона сотрясения (зона бокового удара, коммоции).

Первичный раневой канал, сформированный вдоль оси полета пули, представлен полостью, заполненной фибрином, элементами тканевого детрита, нейтрофильными лейкоцитами, часть из которых распадается и остатками гемолизированных эритроцитов.

Зона контузии представлена некротизированной тканью, в основном состоящей из поперечно-полосатых мышечных волокон (рисунок 41). При этом в мышечных волокнах исчезает характерная поперечная исчерченность, при ШИК-реакции не выявляются зерна гликогена. Ядра волокон подвержены кариопикнозу и кариолизису, теряются четкие очертания волокон, саркоплазма и миофибриллярная часть волокон превращаются в бледно-эозинофильную гомогенную массу, что свидетельствует о некрозе мышечных волокон. Некоторые некротизированные мышечные волокна за счет протеолитических ферментов полиморфноядерных лейкоцитов подвергается лизированию. Наиболее активно резорбция некротизированных мышечных волокон выражена в участках, прилежащих к первичному раневому каналу. В дерме зона контузии занимает меньшую площадь по сравнению с мышечной тканью. Однако и здесь коллагеновые волокна резко набухают, разволокняются, теряют фуксинофилию и приобретают слабую метахромазию. Коллагеновые волокна приобретают вид гомогенных эозинофильных масс, что свидетельствует об их деструкции. Наружная часть зоны контузии отграничена от зоны коммоции слоем распадающихся нейтрофильных лейкоцитов.

Рис. 42. Зона контузии и внутренние отделы зоны сотрясения, разделнные лейкоцитарным валом. Контрольная группа животных.

3-и сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х200.

В зоне коммоции можно выделить два слоя – внутренний и наружный слои. Внутренний слой, прилежащий к зоне контузии, представлен вторично некротизирующейся мышечной тканью, а в наиболее зрелых участках элементами формирующейся грануляционной ткани, развивающейся на месте вторично некротизированной мышечной ткани. Наружный слой, прилежащий к зоне визуально здоровых тканей, состоит из мышечных волокон с признаками дистрофических изменений.

Зона коммоции в мышечной ткани характеризуется преобладанием дистрофических процессов, протекающих на фоне резкого расстройства микроциркуляторного русла. Во внутренних отделах зоны коммоции наблюдается резкое расширение и полнокровие сосудов различного калибра, значительно повышенная проницаемость стенок сосудов, явления гемо- и лимфостаза, геморрагические кровоизлияния. В просвете сосудов обнаруживаются микротромбы смешанного характера. Большинство мышечных волокон разрыхлено, отечно, о чем свидетельствует утолщение мионов и разволокнение их фибрилл. В большинстве мионов исчезает характерная поперечная исчерченность, при ШИК-реакции не выявляются зерна гликогена, теряются четкие очертания волокон. Увеличивается число дистрофически измененных мышечных волокон, часть из которых подвергается вторичному некрозу. При этом наблюдается полная фрагментация мионов с последующим миоцитолизом в виде дисковидного распада мионов или в виде зернистого колликвационного некроза.

Дистрофически изменнные и некротизированные мышечные волокна подвержены лизису и резорбции полиморфноядерными лейкоцитами и макрофагами, которые определяются по периферии и внутри мионов. В макрофагах выявляется умеренно выраженная ШИК-положительная пенистость цитоплазмы, при ШИК-реакции в полиморфноядерных лейкоцитах обнаруживаются зерна гликогена. На месте некротизированных поперечно-полосатых мышц формируется соединительная ткань, представленная преимущественно макрофагами, нейтрофильными лейкоцитами, отдельными фибробластами и неориентированными сосудами (рисунок 43).

В периферических участках зоны сотрясения, на границе с визуально здоровыми тканями, отмечается очаговая отечность мышечных волокон, пери - и эндомизия. Выявляются утолщенные мионы, разволокнение фибрилл, превалирование продольной исчерченности мионов над поперечной. Между измененными мышечными волокнами обнаруживаются полиморфноядерные лейкоциты и немногочисленные макрофаги, отдельные фибробластические элементы. В ряде случаев мышечные волокна в состоянии набухания с формированием колбовидных вздутий с последующим их миолизом. Лишь в отдельных наиболее зрелых участках ткани среди дистрофически изменнных мышечных волокон наблюдается формирование отдельных вертикальных сосудов (рисунок 44).

Рис.43. Формирующаяся новообразованная соединительная ткань на месте некротизированных мышечных волокон внутренних отделов зоны коммоции. Контрольная группа животных. 3-и сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув х400.

Расстройства микроциркуляции в виде явлений гемо - и лимфостаза, повышенной проницаемости стенок сосудов, сладж-феномена в наружных участках зоны сотрясения, по сравнению с внутренними, выражены слабее.

На границе зоны визуально здоровых тканей и наружных участков зоны сотрясения формируются отдельных капилляры, ориентированные к просвету канала огнестрельной раны. Вблизи новообразованных капилляров выявляются неориентированные немногочисленные фибробласты. В последних, также как и в эндотелиоцитах капилляров, выявляется при реакции Браше пиронинофилия цитоплазмы и ядрышек, что свидетельствует о повышенной функциональной активности этих клеток. В межклеточном матриксе вблизи фибробластов в отдельных участках определяются неориентированные незрелые аргирофильные коллагеновые волоконца, окрашиваемые при обработке срезов по Гомори в чрный цвет. Здесь же можно обнаружить локальные участки метахромазии основного вещества, что свидетельствует о синтезе фибробластами кислых гликозаминогликанов.

Рис. 44. Формирование отдельных вертикальных сосудов в периферических отделах зоны сотрясения. Контрольная группа.

3-и сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув х400.

На 3-и сутки лечения в опытных группах животных также как и в контрольной группе, в канале огнестрельной раны выявляются элементы тканевого детрита, массы фибрина, гемолизированные эритроциты и в отдельных участках - колонии микроорганизмов.

Зона контузии представлена первично некротизированной поперечно полосатой мышечной тканью. Со стороны просвета раневого канала зона контузии покрыта относительно толстым слоем фибрина, инфильтрированным нейтрофильными лейкоцитами. Наружная часть зоны контузии отграничена от зоны коммоции слоем распадающихся нейтрофильных лейкоцитов.

В области зоны сотрясения также как и в контрольной группе определяются выраженные расстройства микроциркуляторного русла, а также дистрофические и некротические процессы в мышечных волокнах.

Однако эти изменения выражены в меньшей степени, особенно при использовании ФДТ с 0,1% гелем фотодитазина, комплексованного с амфифильными полимерами.

Действительно, во внутренних отделах зоны коммоции в меньшей степени выражен некроз поврежднных мышечных волокон, чаще обнаруживаются мышечные волокна с признаками различной степени дистрофии. По сравнению с контролем, дистрофически изменнные и сохранные мышечные волокна чаще выявляются в центральных и наружных отделах зоны сотрясения. В результате проводимого лечения несколько изменяется клеточный состав раневого дефекта - менее выражена нейтрофильная инфильтрация тканей, тогда как увеличивается содержание макрофагов и неориентированных фибробластов (рисунок 45). Наиболее заметно изменение клеточного состава раны в 3-ей группе животных.

Макрофаги в основном отличаются ШИК-положительной пенистой цитоплазмой, что свидетельствует об их функциональной активности. В фибробластах как и в эндотелиоцитах новообразованных сосудов выявляется пиронинофилия цитоплазмы и ядрышек при реакции Браше.

Рис. 45. Макрофаги и отдельные неориантированные фибробласты вблизи сосудистых элементов. 3-я группа животных. Третьи сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х900.

Следует отметить, что по сравнению с контрольной группой животных чаще обнаруживаются новообразованные сосуды. В некоторых участках они формируют группы ориентированных сосудистых стволиков, что позволяет говорить о формировании грануляционной ткани (рисунок 46). Наиболее выражена активизация ангиогенеза при использовании ФДТ с 0,1% гелем фотодитазина, комплексованного с амфифильными полимерами.

В наружных отделах зоны коммоции и прилежащей зоне визуально здоровых тканей также определяется более сохранная мышечная ткань, по сравнению с контрольной группой животных. Здесь также наблюдаются довольно многочисленные функционально активные макрофаги и пролиферация фибробластов, преимущественно периваскулярная.

Отмечаются также и немногочисленные нейтрофильные лейкоциты.

Клеточные элементы, преимущественно в виде макрофагов и фибробластов распределяются по соединительнотканным прослойкам мышечных волокон (эндо- и перимизию).

Рис.46. Вертикальные сосуды формирующейся грануляционной ткани.

3-я группа животных. Третьи сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х400.

При проведении множественных сравнений выраженности признака в Н-тесте Краскела-Уоллиса выявлено, что статистически значимые различия выраженности морфологических признаков присутствуют во всех группах (KW, n = 21;

р 0,05 / р = 0,0010,005), исключая признаки GranI/II_3 и Epit_3.

При попарном сравнении выраженности признака между контрольной и всеми опытными группами в U-тесте Манна-Уитни выявлены следующие данные. При сравнении выраженности признака между контрольной группой и 1-й опытной различия выявлены лишь по 3 признакам из 16 (FbPAS+, Meta и DemLeu), между контрольной и 2-й опытной различия присутствуют почти во всех случаях, кроме признаков GranI/II и Epit (MW, n = 14;

р 0,05 / р = 0,0010,004), а при сравнении 1-й и 2-й опытных групп различия выражены по признакам Vasa, FbPAS+, Meta, Oedema, которые к данному сроку уже характеризуют начало активации репаративного раневого процесса.

Полностью различается морфологическая картина в контрольной и 2-й опытной группах, что подтверждает высокую степень активации заживления ран при использовании ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля.

При анализе многопольных таблиц сопряжнности с применением Пирсона не выявили признаки, между которыми не существует статистически значимой связи. Корреляционный анализ взаимосвязи между порядковым номером группы и выраженностью признаков в большинстве случаев выявил наличие статистически значимой корреляционной связи между значениями признака и экспериментальными группами. Сильная отрицательная связь выявлена между выраженностью альтеративных и воспалительных признаков и порядковым номером группы (Rs = -0,735, n = 21;

p 0,05), очень сильная или средняя положительная связь выявлена для признаков ранней репарации – Vasa, FbPAS+, Meta, GranI (Rs = 0,5530,980, n = 21;

p 0,05), для признаков поздней репарации связь не выявлена, а для признака DemLeu она была сильно отрицательной (Rs = -0,756, n = 21;

p 0,05). Для анализа связи между выраженностью признаков и условными группами «контроль» и «лечение с использованием ФХТ» определены аналогичные статистически значимые взаимоотношения.

Это свидетельствует о начальном появлении некоторых различий в ускорении купирования альтеративных и воспалительных процессов и развитии репарации тканей на ранней стадии раневого процесса в огнестрельных ранах, говорящих в пользу метода фотодинамической терапии, в особенности в пользу применения рациональных концентраций гелевых фотосенсибилизаторов. На данном сроке более выраженный репаративный эффект на огнестрельные раны оказывала ФХТ с фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами, в форме 0,1% геля, показывая лучшие результаты по сравнению с 0,5% гелем фотодитазина.

5 сутки наблюдений.

В просвете первичного раневого канала выявляются фибриновые массы, инфильтрированные распадающимися нейтрофильными лейкоцитами, элементами тканевого детрита. Следует отметить, что в контрольной группе животных, по сравнению с предыдущим сроком исследования, отмечается увеличение числа колоний микроорганизмов (рисунок 47). В тоже время в опытных группах, в результате проводимого лечения, число колоний микроорганизмов по сравнению с контролем и предыдущим сроком исследования - уменьшается.

Рис. 47. Отдельные первично-некротизированные мышечные волокна, многочисленные нейтрофильные лейкоциты, элементы тканевого распада, колонии микроорганизмов. Контрольная группа животных. Пятые сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х400.

Зона контузии представлена некротизированными волокнами поперечно-полосатой мускулатуры, в виде гомогенных бесклеточных эозинофильных масс. Наблюдается некоторое уменьшение зоны контузии, особенно в опытных группах животных. Это можно объяснить тем, что в результате лечения активируются процессы ангиогенеза и клеточной пролиферации. При этом в ранах опытных групп животных, по сравнению с контрольной, увеличивается число сосудов и клеточных элементов, в частности, макрофагов. Последние совместно с нейтрофильными лейкоцитами участвуют в резорбции первично некротизированной мышечной ткани зоны коммоции.

Зона сотрясения имеет полиморфный состав - внутренние е отделы представлены грануляционной тканью, сформировавшейся на месте некротизированной ткани, тогда как наружные отделы - относительно сохранной мышечной тканью. В контрольной группе животных грануляционная ткань занимает большее пространство (рисунок 48), по Рис.48. Грануляционная ткань, сформированная на месте первично- и второчно некротизированной мышечной ткани. Контрольная группа животных. 5-е сутки лечения. Окр. гематоксилином и эозином. Ув.х200.

сравнению с опытными группами животных, что объясняется значительно более выраженным вторичным некротизированием поврежднной мышечной ткани. В 1-ой и, особенно, 2-ой группе животных, грануляционная ткань занимает меньшую площадь, по сравнению с контролем.

Сформированная грануляционная ткань имеет все характерные для не слои - слой сосудистых аркад, слой вертикальных сосудов и наиболее зрелый слой слой горизонтальных фибробластов. Степень зрелости грануляционной ткани возрастает от е внутренних отделов - к наружным.

Наиболее обширная и наименее зрелая грануляционная ткань определяется в контрольной группе животных.

В слое сосудистых аркад из клеточных элементов преобладают нейтрофильные лейкоцита, также многочисленны макрофаги, неориентированные фибробласты единичны и располагаются вблизи сосудов. В межклеточном матриксе этого слоя кислые гликозаминогликаны не выявляются, также не определяются признаки коллагеногенеза. В некоторых участках встречаются остатки некротизированных мышечных волоконец, подверженных резорбции клеточными элементами.

В слое вертикальных сосудов в основном определяются макрофаги и фибробласты, а также немногочисленные нейтрофильные лейкоциты.

Причм во внутренних отделах слоя вертикальных сосудов, расположенных ближе к каналу огнестрельной раны, преобладают макрофаги и нейтрофильные лейкоциты, тогда как в наружных - чаще выявляются фибробласты. Сами вертикальные сосуды образуются путм отпочкования от сосудистых элементов, расположенных в глубине мышечной или жировой ткани. Эндотелиоциты новообразованных сосудов отличаются пиронинофилией цитоплазмы и ядрышек. В межклеточном матриксе наиболее зрелых участков слоя вертикальных сосудов выявляются признаки метахромазии, что свидетельствует о синтезе фибробластами кислых гликозаминогликанов. Также вблизи фибробластов выявляются отдельные незрелые аргирофильные коллагеновые волоконца.

В отдельных наиболее зрелых участках грануляционной ткани опытных групп животных появляются признаки формирования слоя горизонтальных фибробластов (рисунок 49). При этом фибробласты постепенно ориентируются перпендикулярно по отношению к вертикальным сосудам. В этом слое уменьшается содержание макрофагов, значительно реже встречаются нейтрофильные лейкоциты. К данному сроку исследования в слое горизонтальных фибробластов отмечается наиболее активный синтез фибробластами кислых гликозаминогликанов и коллагена. Это проявляется в более выраженной метахромазии межклеточного матрикса и в формировании пучков неориентированных аргирофильных волоконец, окрашиваемых при обработке срезов по Гомори в чрный цвет.

Рис. 49. Появление в грануляционной ткани отдельных ориентированных параллельно относительно друг друга фибробластов. 3-я группа животных.

5-е сутки лечения. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х400.

В наружных отделах зоны сотрясения грануляционная ткань граничит с незначительно измененными мышечными волокнами. В этих мышечных волокнах дистрофические изменения не привели к некрозу и оказались обратимыми. К данному сроку исследования в наружных отделах этой зоны, граничащей с визуально здоровыми тканями, наблюдается отк и повышенная клеточная инфильтрация мышечной ткани. Из клеточных элементов преобладают фибробластические элементы, но также встречаются макрофаги и малочисленные нейтрофильные лейкоциты.

По сравнению с предыдущим сроком исследования и, особенно, в результате проводимого лечения, в ранах 2-ой и, особенно, 3-ей групп животных отмечается ослабление микроциркуляторных изменений.

Несколько уменьшается число расширенных и полнокровных сосудов, их повышенная проницаемость и отк тканей, с меньшей частотой встречаются микрокровоизлияния, микротромбы в просвете сосудов и признаки сладж феномена.

При проведении множественных сравнений выраженности признака в Н-тесте Краскела-Уоллиса выявлено, что статистически значимые различия выраженности морфологических признаков присутствуют во всех группах (KW, n = 21;

р 0,05 / р = 0,0010,034).

При попарном сравнении выраженности признака между контрольной и опытными группами в U-тесте Манна-Уитни выявлены следующие данные.

При сравнении выраженности признака между контрольной и 1-й опытной группой различия выявлены по всем признакам из 16 (MW, n = 14;

р 0,05 / р = 0,0010,017), между контрольной группой и 2-й опытной различия также присутствуют по всем признакам (MW, n = 14;



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.