авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 | 2 || 4 |

«Иркутский государственный университет путей сообщения А.И. Илларионов, Е.А. Илларионова, И.П. Сыроватский ОПТИЧЕСКИЕ ОБРАЗЦЫ СРАВНЕНИЯ В СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОМ ...»

-- [ Страница 3 ] --

Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа сульгина по оптическому образцу сравнения феррицианиду калия Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0461 0,6440 698,48 0,1697 0,6345 37,39 0, S2=0, 0,0445 0,6162 692,36 0,1708 0,6345 37,15 0, 0,0417 0,5817 697,48 0,1721 0,6459 37,53 0,0538 S=0, S х =0, 0,0431 0,6003 696,40 0,1700 0,6308 37,11 0, К=0, 0,0435 0,6021 692,07 0,1715 0,6421 37,44 0, 0,0415 0,5850 704,82 0,1710 0,6383 37,33 0,0530 Е%=0, 0,0440 0,6144 698,18 0,1712 0,6402 37,39 0,0536 Sг=0, 0,0430 0,5935 690,12 0,1701 0,6364 37,41 0, 0,0419 0,5884 702,15 0,1702 0,6326 37,17 0, 0,0425 0,5901 694,24 0,1685 0,6289 37,32 0, Результаты количественного определения содержания сульгина в субстанции и таблетках по оптическим образцам сравнения феррицианиду калия и по образцу сравнения препарата представлены в табл. 4.21 – 4.22.

Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения сульгина по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Феррицианид калия 100,00 0,1897 0,4355 0,1377 0,31 0,31 0, 050302 Сульгин 99,64 0,4601 0,6783 0,2145 0,49 0,49 0, Феррицианид калия 100,12 0,1067 0,3265 0,1032 0,23 0,23 0, 060402 Сульгин 99,46 0,1697 0,4120 0,1303 0,30 0,30 0, Феррицианид калия 99,93 0,2730 0,5225 0,1652 0,38 0,37 0, 070502 Сульгин 99,61 0,2696 0,5192 0,1642 0,37 0,37 0, Из представленных в табл. 4.21 – 4.22 экспериментальных данных следует, что при спектрофотометрическом определении сульгина можно использовать как образец сравнения лекарственного вещества, так и опти ческий образец сравнения. Относительное стандартное отклонение не пре вышает 0,02.

Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения сульгина в таблетках по 0,5 г по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Феррицианид калия 0,512 0,0002 0,0103 0,0033 0,007 1,44 0, 060703 Сульгин 0,501 0,00006 0,0080 0,0025 0,006 1,14 0, Феррицианид калия 0,499 0,00006 0,0079 0,0025 0,006 1,13 0, 050603 Сульгин 0,503 0,00005 0,0072 0,0022 0,005 1,03 0, Феррицианид калия 0,491 0,00009 0,0094 0,0030 0,007 1,37 0, 040503 Сульгин 0,503 0,00007 0,0088 0,0027 0,006 1,25 0, 4.

6. Спектрофотометрическое определение норсульфазола Спектр поглощения норсульфазола (2-(n-аминобензолсульфамидо) тиазола) при рН 1,8 характеризуется одной полосой поглощения с макси мумом при длине волны 280±1 нм (рис. 4.8). Наличие в структуре нор сульфазола остатка тиазола оказывает существенное влияние на спектр поглощения этого органического соединения. Увеличение рН от 2,97 до 12,86 приводит к гипсохромному смещению максимума поглощения до 257±1 нм. При рН 2,67 в спектре поглощения норсульфазола отмечается наличие максимума при 282±1 нм и «плеча» в области 260 – 265 нм, в ин тервале pH 2,97 – 9,96 отмечается батохромное смещение «плеча» в об ласть 270 – 280 нм, однако при дальнейшем увеличении рН «плечо» исче зает. Наличие амфотерных свойств объясняет солеобразование при кислых и щелочных значениях рН, различное электронное строение солевых форм, протонизацию по атомам азота и серы при низких значениях рН и, следо вательно, различия в спектрах поглощения растворов норсульфазола.

Изучение стабильности растворов норсульфазола при различных значениях рН в течение трех суток показало, что изменений в спектрах по глощения растворов не происходит, наблюдается лишь незначительное увеличение интенсивности поглощения (табл. 4.23). В качестве раствори телей для спектрофотометрического определения норсульфазола можно выбрать 0,1М раствор хлористоводородной кислоты (рН 1,8) либо 0,1M раствор гидроксида натрия (pH 13,0).

Для количественного определения норсульфазола при рН 1,1 (длина волны 280 нм) оптимальным оптическим образцом сравнения является бензойная кислота либо фенолфталеин, а при рН 13,0 (длина волны нм) – феррицианид калия (табл. 1.2).

УФ-спектр поглощения 0,001% раствора норсульфазола 12,9 9, А 0, 2, 0, 11, 0, 2, 0,2 1,,нм 220 240 260 280 300 номер кривой соответствует значению рН Рис. 4. Таблица 4. Изменение оптических характеристик растворов норсульфазола при хранении Оптические характеристики рН 1-е сутки 2-е сутки 3-и сутки max, нм А max, нм А max, нм А 1,81 280 0,66 282 0,67 282 0, 2,67 283 0,64 280 0,54 280 0, 2,97 257 0,73 257 0,73 257 0, 9,96 257 0,70 257 0,71 257 0, 10,22 257 0,71 257 0,71 257 0, 10,40 257 0,70 257 0,68 257 0, 10,68 257 0,69 257 0,7 257 0, 11,79 257 0,65 257 0,66 257 0, 12,86 257 0,72 257 0,74 257 0, Разработанные условия спектрофотометрического анализа норсуль фазола были использованы для его количественного определения в суб станции и таблетках [48].

В связи с несовпадением удельных показателей поглощения иссле дуемого вещества и оптических образцов сравнения в формулу расчета содержания вещества вводят коэффициент пересчета, который рассчиты вают по формуле (11). Для определения удельных показателей поглоще поглощения были использованы образцы сравнения норсульфазола, полу ченные ОАО «Усолье-Сибирский химфармкомбинат» путем перекристал лизации промышленных серий препаратов и очистки углем активирован ным, и оптические образцы сравнения квалификации ч или хч.

Авторы разработали методики и провели количественное определе ние норсульфазола (используя формулу (16)) по образцу сравнения лекар ственного вещества и по оптическим образцам сравнения бензойной кис лоте, фенолфталеину, феррицианиду калия.

В табл. 4.24 – 4.26 представлены результаты определения ко эффициентов пересчета для спектрофотометрического определения нор сульфазола по оптическим образцам сравнения бензойной кислоте, фенол фталеину, феррицианиду калия, полученные при проведении десяти неза висимых определений.

Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа норсульфазола по оптическому образцу сравнения фенолфталеину Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0500 0,5100 510,00 0,0501 0,4802 119,81 0, S2=0, 0,0505 0,5171 511,98 0,0502 0,4815 119,90 0, 0,0511 0,5200 508,81 0,0510 0,4868 119,31 0,2345 S=0, S х =0, 0,0512 0,5214 509,18 0,0515 0,4881 118,47 0, К=0, 0,0514 0,5229 508,66 0,0517 0,4895 118,35 0, 0,0505 0,5129 507,82 0,0505 0,4789 118,54 0,2334 Е%=0, 0,0501 0,5114 510,38 0,0503 0,4763 118,36 0,2319 Sг=0, 0,0502 0,5114 509,36 0,0503 0,4776 118,69 0, 0,0498 0,5100 512,05 0,0501 0,4750 118,51 0, 0,0504 0,5129 508,83 0,0502 0,4789 119,25 0, Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа норсульфазола по оптическому образцу сравнения бензойной кислоте Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0502 0,5129 510,86 0,1002 0,4112 51,30 0, S2=0, 0,0512 0,5229 510,64 0,1003 0,4112 51,25 0, 0,0506 0,5186 512,45 0,1005 0,4134 51,42 0,1003 S=0, S х =0, 0,0503 0,5171 514,02 0,1001 0,4123 51,49 0, К=0, 0,0497 0,5100 513,08 0,0997 0,4101 51,42 0, 0,0500 0,5129 513,00 0,0995 0,4101 51,52 0,1004 Е%=0, 0,0500 0,5157 515,70 0,1009 0,4168 51,64 0,1001 Sг=0, 0,0509 0,5200 510,81 0,1022 0,4191 51,26 0, 0,0510 0,5214 511,18 0,1025 0,4202 51,24 0, 0,0499 0,5086 509,62 0,0998 0,4089 51,21 0, Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа норсульфазола по оптическому образцу сравнения феррицианиду калия Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0405 0,5885 726,54 0,1500 0,5406 36,04 0, S2=0, 0,0400 0,5766 720,75 0,1501 0,5467 36,42 0, 0,0401 0,5817 725,31 0,1502 0,5498 36,60 0,0505 S=0, S х =0, 0,0402 0,5834 725,62 0,1501 0,5482 36,52 0, К=0, 0,0401 0,5800 723,19 0,1502 0,5421 36,09 0, 0,0402 0,5834 725,62 0,1503 0,5391 35,87 0,0494 Е%=0, 0,0403 0,5850 725,81 0,1504 0,5376 35,74 0,0492 Sг=0, 0,0401 0,5867 731,55 0,1505 0,5346 35,52 0, 0,0400 0,5784 723,00 0,1506 0,5436 36,10 0, 0,0402 0,5867 729,73 0,1504 0,5391 35,84 0, Результаты количественного определения содержания норсульфазо ла в субстанции и таблетках по оптическим образцам сравнения бензой ной кислоте, фенолфталеину, феррицианиду калия и по образцу сравнения препарата представлены в табл. 4.27 и 4.28.

Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения норсульфазола по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Бензойная кислота 99,84 0,20996 0,4582 0,15 0,33 0,33 0, Фенолфталеин 100,01 0,16945 0,4116 0,13 0,29 0,29 0, 100502 Феррицианид калия 99,87 0,3638 0,6031 0,19 0,43 0,43 0, Норсульфазол 99,90 0,1663 0,4078 0,14 0,29 0,29 0, Бензойная кислота 99,98 0,07309 0,2703 0,09 0,19 0,19 0, Фенолфталеин 99,73 0,22831 0,4778 0,15 0,34 0,34 0, 110602 Феррицианид калия 99,67 0,2565 0,5064 0,16 0,36 0,36 0, Норсульфазол 99,99 0,1474 0,3840 0,12 0,27 0,27 0, Бензойная кислота 99,64 0,21337 0,4619 0,15 0,33 0,33 0, Фенолфталеин 100,17 0,15788 0,3973 0,13 0,28 0,28 0, 120702 Феррицианид калия 100,00 0,2528 0,5028 0,16 0,36 0,36 0, Норсульфазол 99,86 0,1187 0,3445 0,11 0,25 0,25 0, Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения норсульфазола в таблетках по 0,5 г по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Бензойная кислота 0,500 0,00005 0,0067 0,0021 0,005 0,96 0, Фенолфталеин 0,502 0,00008 0,0091 0,0029 0,007 1,30 0, 120503 Феррицианид калия 0,498 0,00005 0,0074 0,0023 0,005 1,07 0, Норсульфазол 0,505 0,00004 0,0060 0,0019 0,004 0,85 0, Бензойная кислота 0,502 0,00007 0,0082 0,0026 0,006 1,18 0, Фенолфталеин 0,504 0,00009 0,0095 0,0030 0,007 1,35 0, 110403 Феррицианид калия 0,499 0,00008 0,0093 0,0029 0,007 1,33 0, Норсульфазол 0,501 0,00004 0,0066 0,0021 0,005 0,94 0, Бензойная кислота 0,503 0,00005 0,0072 0,0022 0,005 1,03 0, Фенолфталеин 0,505 0,00007 0,0086 0,0027 0,006 1,23 0, 100303 Феррицианид калия 0,500 0,00007 0,0087 0,0027 0,006 1,25 0, Норсульфазол 0,498 0,00008 0,0088 0,0023 0,006 1,27 0, Из представленных в табл. 4.27 – 4.28 экспериментальных данных следует, что при спектрофотометрическом определении норсульфазола можно использовать как образец сравнения лекарственного вещества, так и оптические образцы сравнения. Результаты, полученные по различным оп тическим образцам сравнения и по РСО, являются сопоставимыми. Отно сительное стандартное отклонение не превышает 0,02.

4.7. Спектрофотометрическое определение фталазола Фталазол (фталилсульфатиазол, 2-[n-(о-карбоксибезамидо)- бензол сульфамидо]- тиазол) характеризуется наличием в его структуре остатков фталевой кислоты и норсульфазола, поэтому в спектре поглощения этого препарата при рН 2,0 – 3,0 отмечается наличие двух полос поглощения при длинах волн 262±2 нм и 284±1 (рис. 4.9). При рН7 в спектре поглощения раствора фталазола наблюдается один максимум поглощения при длине волны 263 нм (рис. 4.9).

Изменение интенсивности поглощения растворов фталазола в зави симости от рН представлено на рис. 4.10. Видно, что величина рН практи чески не влияет на изменение интенсивности поглощения растворов фта лазола. В интервале pH 2 11 оптическая плотность раствора препарата незначительно увеличивается, а при рН11 оптическая плотность раствора незначительно снижается.

УФ спектр поглощения 0,001% раствора фталазола А 0, 10, 0,6 2, 0, 0,, нм 220 230 240 250 260 270 280 290 номер кривой соответствует значению рН Рис. 4. Влияние рН на интенсивность поглощения раствора фталазола А 0, 0, 0, 0, рН 0, 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Рис. 4. На оптические характеристики фталазола оказывает влияние время стояния рабочих растворов. При хранении растворов фталазола с рН 7;

13 более трех суток происходит незначительное уширение полосы по глощения. Для растворов фталазола с рН 2 3, хранящихся в течение трех суток, наблюдается уменьшение интенсивности, уширение полосы погло щения и гипсохромный сдвиг максимумов поглощения на 2 4 нм.

Аналитическая длина волны для количественного определения фта лазола (263 нм) входит в интервал, оптимальный для дихромата калия, хромата калия и феррицианида калия (табл. 1.2). В связи с тем, что хромат калия, феррицианид калия и фталазол имеют общий растворитель (раствор с рН 10 13), оптическими образцами сравнения для количественного определения фталазола были выбраны хромат калия и феррицианид калия.

На основании полученных экспериментальных данных можно сде лать вывод, что при рН 11 13 раствор фталазола более устойчив, поэтому для спектрофотометрического определения фталазола оптимальным рас творителем является 0,1М раствор гидроксида натрия.

Разработанные условия спектрофотометрического анализа фталазола были использованы для его количественного определения в субстанции и таблетках [47, 48].

Так как удельные показатели поглощения исследуемого вещества и оптических образцов сравнения не совпадают, в формулу расчета содер жания вещества вводят коэффициент пересчета (11). Для определения удельных показателей поглощения были использованы образцы сравнения фталазола, полученные ОАО «Усолье-Сибирский химфармкомбинат» пу тем перекристаллизации промышленных серий препаратов и очистки уг лем активированным, и оптические образцы сравнения квалификации ч или хч.

Авторами были разработаны методики и проведено количественное определение фталазола (по формуле (16)) по образцу сравнения лекар ственного вещества и по оптическим образцам сравнения хромату калия и феррицианиду калия.

В табл. 4.29 – 4.30 представлены результаты определения ко эффициентов пересчета для спектрофотометрического определения фтала зола по оптическим образцам сравнения хромату калия и феррицианиду калия, полученные при проведении десяти независимых определений.

Результаты количественного определения содержания фталазола в субстанции и таблетках по оптическим образцам сравнения феррицианиду калия и хромату калия и по образцу сравнения препарата представлены в табл. 4.31 и 4.32.

Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа фталазола по оптическому образцу сравнения хромату калия Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0483 0,6091 630,54 0,0795 0,5607 176,43 0, S2=0, 0,0502 0,6271 624,60 0,0817 0,5735 175,49 0, 0,0490 0,6234 636,12 0,0814 0,5766 177,09 0,2784 S=0, S х =0, 0,0505 0,6289 622,67 0,0836 0,5884 175,96 0, К =0, 0,0507 0,6271 618,44 0,0827 0,5684 171,83 0, 0,0501 0,6289 627,64 0,0827 0,5834 176,47 0,2812 Е%=0, 0,0522 0,6478 620,50 0,0805 0,5670 176,09 0,2838 Sг=0, 0,0470 0,5952 633,19 0,0802 0,5622 175,25 0, 0,0513 0,6517 635,19 0,0814 0,5784 177,64 0, 0,0496 0,6271 632,16 0,0812 0,5719 176,19 0, Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа фталазола по оптическому образцу сравнения феррицианиду калия Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0507 0,6271 618,44 0,1502 0,5575 37,12 0, S2=0, 0,0505 0,6234 617,23 0,1498 0,5513 36,80 0, 0,0509 0,6289 617,78 0,1500 0,5544 36,96 0,0598 S=0, S х =0, 0,0495 0,6126 618,79 0,1509 0,5607 37,16 0, К=0, 0,0510 0,6308 618,43 0,1489 0,5452 36,62 0, 0,0501 0,6234 622,16 0,1495 0,5591 37,40 0,0601 Е%=0, 0,0511 0,6326 618,98 0,1510 0,5622 37,23 0,0601 Sг=0, 0,0515 0,6345 616,02 0,1505 0,5528 36,73 0, 0,0508 0,6271 617,22 0,1508 0,5560 36,87 0, 0,0499 0,6216 622,85 0,1498 0,5607 37,43 0, Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения фталазола по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения S2 Х Sх S Е% Sr Х Хромат калия 99,99 0,3186 0,5644 0,1784 0,40 0,40 0, Феррицианид калия 99,93 0,1558 0,3948 0,1248 0,28 0,28 0, Фталазол 99,96 0,2415 0,4914 0,1554 0,35 0,35 0, Хромат калия 100,02 0,2413 0,4912 0,1553 0,35 0,35 0, 080602 Феррицианид калия 100,00 0,1768 0,4204 0,1329 0,30 0,30 0, Фталазол 99,51 0,2194 0,4684 0,1481 0,33 0,33 0, Хромат калия 99,91 0,4173 0,6459 0,2042 0,46 0,46 0, 090702 Феррицианид калия 99,97 0,2727 0,5221 0,1651 0,37 0,37 0, Фталазол 99,90 0,1544 0,3929 0,1242 0,28 0,28 0, Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения фталазола в таблетках по 0,5 г по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Хромат калия 0,503 0,00007 0,0083 0,0026 0,006 1,19 0, 060603 Феррицианид калия 0,501 0,00005 0,0071 0,0023 0,005 1,02 0, Фталазол 0,504 0,00005 0,0069 0,0022 0,005 0,98 0, Хромат калия 0,503 0,00007 0,0086 0,0027 0,006 1,23 0, 050603 Феррицианид калия 0,501 0,00005 0,0070 0,0022 0,005 1,00 0, Фталазол 0,504 0,00006 0,0076 0,0024 0,005 1,07 0, Хромат калия 0,503 0,00007 0,0083 0,0026 0,006 1,19 0, Феррицианид калия 0,502 0,00005 0,0071 0,0022 0,005 1,01 0, Фталазол 0,504 0,00005 0,0072 0,0023 0,005 1,02 0, Из представленных в табл. 4.31 – 4.32 экспериментальных данных следует, что при спектрофотометрическом определении фталазола можно использовать как образец сравнения лекарственного вещества, так и опти ческие образцы сравнения. Результаты, полученные по различным оптиче ским образцам сравнения и по РСО, являются сопоставимыми. Относи тельное стандартное отклонение не превышает 0,02.

4.8. Спектрофотометрическое определение сульфадимезина Спектр поглощения сульфадимезина (2-(n-амино бензолсульфамидо)-4,6-диметилпиримидина) (рис.4.11) характеризуется двумя полосами поглощения, которые соответствуют наличию в его моле куле двух структурных частей: стрептоцида и диметилпиримидина. Нали чие в структуре остатка пиримидина оказывает существенное влияние на спектры поглощения этого органического соединения. В зависимости от рН происходят изменения в спектре поглощения данного препарата. При рН 11,5 – 13,0 сульфадимезин имеет два максимума поглощения на длинах волн 240±1 нм и 258±1 нм. Уменьшение рН приводит к батохромному смещению второго максимума поглощения. При рН 4,0 – 7,0 максимум сдвигается на 7 нм и соответствует длине волны 265±1 нм, дальнейшее уменьшение рН до 1,1 приводит к батохромному смещению обоих макси мумов поглощения соответственно до 245±1 нм и 305±1 нм.

Батохромный сдвиг максимума поглощения при уменьшении рН связан с протонизацией по атому азота аминогруппы остатка стрептоцида. Из рис.

4.11 видно, что с уменьшением рН снижается интенсивность поглощения растворов сульфадимезина. Изучение стабильности растворов сульфади мезина в течение двух суток при различных значениях рН показало, что наиболее устойчивы солевые формы сульфадимезина (рН 13,0 и рН 1,1) (рис. 4.12).

УФ спектр поглощения 0,001% раствора сульфадимезина А 0, 13, 11, 0, 4, 0, 1, 0,,нм 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 номер кривой соответствует значению рН Рис. 4. Зависимость оптической плотности растворов сульфадимезина от времени хранения А 0,4 рН 13, рН 7, рН 1, 0, время, ч 0 0,5 4 8 12 24 36 Рис. 4. Поэтому оптимальным растворителем для спектрофотометрического определения сульфадимезина можно выбрать 0,1М раствор хлористоводо родной кислоты либо 0,1М раствор гидроксида натрия. В качестве анали тической длины волны для определения сульфадимезина выбран макси мум поглощения его раствора в длинноволновой области спектра, кото рый связан с фармакологически активной частью молекулы. Сульфадиме зин имеет аналитическую длину волны при 305 нм (рН 1,1) и 258 нм (рН 13,0), поэтому оптическим образцом сравнения для его спектрофотометри ческого определения был выбран феррицианид калия, имеющий соответ ствующие оптимальные области поглощения при рН 1,1 и рН 13,0 (табл.

1.2). Разработанные условия спектрофотометрического анализа сульфади мезина были использованы для его количественного определения в суб станции и таблетках [48].

Удельные показатели поглощения исследуемого вещества и оптиче ского образца сравнения не совпадают, поэтому был рассчитан по формуле (11) коэффициент пересчета для количественного определения вещества.

Для нахождения удельных показателей поглощения были использованы образцы сравнения сульфадимезина, полученные ОАО «Усолье Сибирский химфармкомбинат» путем перекристаллизации промышленных серий препаратов и очистки углем активированным, и оптические образцы сравнения квалификации ч или хч.

Авторами были разработаны методики и проведено количественное определение сульфадимезина (по формуле (16)) по образцу сравнения ле карственного вещества и по оптическому образцу сравнения. В табл. 4. представлены результаты определения коэффициента пересчета для спек трофотометрического определения сульфадимезина по оптическому об разцу сравнения феррицианиду калия, полученные при проведении десяти независимых определений.

Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа сульфадимезина по оптическому образцу сравнения феррицианиду калия (0,1М NaOH) Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0685 0,5607 409,27 0,1502 0,5575 37,12 0, S2=0, 0,0680 0,5560 408,82 0,1498 0,5513 36,80 0, 0,0687 0,5622 409,17 0,1500 0,5544 36,96 0,0903 S=0, S х =0, 0,0690 0,5654 409,71 0,1509 0,5607 37,16 0, К=0, 0,0680 0,5575 409,93 0,1489 0,5452 36,62 0, 0,0689 0,5622 407,98 0,1503 0,5591 37,20 0,0912 Е%=0, 0,0691 0,5638 407,96 0,1510 0,5622 37,23 0,0913 Sг=0, 0,0692 0,5654 408,53 0,1505 0,5528 36,73 0, 0,0679 0,5513 405,96 0,1508 0,5560 36,87 0, 0,0675 0,5544 410,67 0,1508 0,5607 37,18 0, Таблица 4. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа сульфадимезина по оптическому образцу сравнения феррицианиду калия (0,1М HCl) Метрологические 1% 1% Е Е аос Аос авос Авос Кпер характеристики 1см ос 1см вос (n=10, Р=95%) К =0, 0,2100 0,5391 128,36 0,1000 0,4962 49,62 0, S2=0, 0,2105 0,5346 126,98 0,1002 0,5045 50,35 0, 0,2110 0,5376 127,39 0,1010 0,5031 49,81 0,3910 S=0, S х =0, 0,2109 0,5421 128,52 0,1009 0,4921 48,77 0, К =0, 0,2105 0,5317 126,29 0,1011 0,4908 48,55 0, 0,2101 0,5482 130,46 0,1001 0,5017 50,12 0,3842 Е%=1, 0,2102 0,5302 126,12 0,1003 0,5045 50,30 0,3988 Sг=0, 0,2103 0,5436 129,24 0,1005 0,5003 49,78 0, 0,2104 0,5406 128,47 0,1003 0,4989 49,74 0, 0,2106 0,5391 127,99 0,1012 0,4976 49,17 0, Результаты количественного определения содержания сульфадиме зина в субстанции и таблетках по оптическому образцу сравнения ферри цианиду калия и по образцу сравнения препарата представлены в табл.

4.35 – 4.36.

Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения сульфадимезина по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения S2 Х Е% Sх S Sr Х Феррицианид 100,05 0,4198 0,6478 0,2048 0,46 0,46 0, калия (0,1M HCl) 110902 Феррицианид 99,97 0,2371 0,4869 0,1539 0,35 0,35 0, калия (0,1MNaOH) Сульфадимезин 99,87 0,1939 0,4403 0,1392 0,31 0,31 0, Феррицианид 99,91 0,3774 0,6143 0,1942 0,44 0,44 0, калия (0,1M HCl) 121002 Феррицианид 99,89 0,2953 0,5434 0,1718 0,39 0,39 0, калия (0,1M NaOH) Сульфадимезин 99,87 0,1958 0,4425 0,1399 0,32 0,32 0, Феррицианид 100,06 0,4382 0,6620 0,2094 0,47 0,47 0, калия (0,1M HCl) 131102 Феррицианид 99,90 0,2588 0,5087 0,1608 0,36 0,36 0, калия (0,1M NaOH) Сульфадимезин 99,71 0,2533 0,5033 0,1592 0,36 0,36 0, Таблица 4. Результаты спектрофотометрического определения сульфадимезина в таблетках по 0,5 г по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=10, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Феррицианид 0,500 0,00006 0,0076 0,0024 0,005 1,09 0, калия (0,1M HCl) 101003 Феррицианид 0,500 0,00005 0,0069 0,0022 0,005 0,99 0, калия (0,1M NaOH) Сульфадимезин 0,504 0,00008 0,0091 0,0029 0,007 1,29 0, Феррицианид 0,503 0,00007 0,0085 0,0027 0,006 1,21 0, калия (0,1M HCl) 110903 Феррицианид 0,502 0,00005 0,0069 0,0022 0,005 0,99 0, калия (0,1M NaOH) Сульфадимезин 0,511 0,00006 0,0075 0,0024 0,005 1,05 0, Феррицианид 0,500 0,0007 0,0081 0,0025 0,006 1,16 0, калия (0,1M HCl) Феррицианид 0,499 0,00006 0,0081 0,0025 0,006 1,15 0, калия (0,1M NaOH) Сульфадимезин 0,508 0,00009 0,0098 0,0031 0,007 1,38 0, Из представленных в табл. 4.35 – 4.36 экспериментальных данных следует, что при спектрофотометрическом определении сульфадимезина можно использовать как образец сравнения лекарственного вещества, так и оптический образец сравнения. Относительное стандартное отклонение не превышает 0,02.

В табл. 4.37 приведена сравнительная оценка результатов, получен ных при спектрофотометрическом определении сульфаниламидных препа ратов по оптическим образцам сравнения и методикам, предложенным НД. Сравнительная оценка методик анализа проводилась по правильно сти, воспроизводимости и длительности. Из таблицы видно, что метод спектрофотометрического определения стрептоцида, стрептоцида раство римого, сульгина, норсульфазола, фталазола и сульфадимезина по оптиче скому образцу сравнения дает правильные результаты (tвыч tтабл). Сравне ние методик спектрофотометрического определения сульфаниламидных препаратов с методиками НД по воспроизводимости показало, что нитри тометрический метод уступает спектрофотометрическому (FвычFтабл). Ме тодики анализа фталазола не различаются по воспроизводимости. В каче стве оптимальной выбирается та методика, у которой S2 наименьшая [23], т.е. в данном случае оптимальной является методика спектрофотометриче ского определения фталазола по оптическому образцу сравнения. По про должительности анализа разработанные методики менее длительны, чем методики НД.

Таблица 4. Сравнительная оценка методик количественного определения сульфаниламидных препаратов (n=7, t(P, f)(табл)=2,45;

Р=95%;

F(P, f1, f2)(табл)=8,47;

Р=99%) Лекарст- Наимено- Продолжи- Число S2,% венное ве- вание S tвыч Fвыч Х,% тельность опе анализа, мин. раций щество метода Спектро 100 99,92 0,3593 0,5994 0,43 0,35 24,75 17 фотометрия Стрепто цид Нитрито 100 99,40 8,8923 2,9820 2,77 0,53 25 метрия Спектро Стрепто 100 99,86 0,4525 0,6727 0,48 0,55 19,62 17 фотометрия цид раство- Нитрито 100 99,32 8,8780 2,9796 2,77 0,60 25 римый метрия Спектро 100 100,1 0,1897 0,4356 0,31 0,61 46,85 17 фотометрия Сульгин Нитрито 100 99,37 8,8870 2,9811 2,77 0,56 25 метрия Спектро 100 99,84 0,2100 0,4582 0,33 0,92 18,73 17 фотометрия Норсуль фазол Нитрито 100 99,16 3,9331 1,9832 1,85 1,12 25 метрия Спектро 100 99,99 0,3186 0,5644 0,40 0,05 1,12 17 фотометрия Фталазол Алкали 100 99,74 0,3581 0,5984 0,55 1,02 12 метрия Спектро 100 99,97 0,2371 0,4870 0,35 0,16 16,80 17 фотометрия Сульфа димезин Нитрито 100 99,79 3,9832 1,9958 1,85 0,28 25 метрия В табл. 4.38 приведены результаты сравнительной оценки методик количественного определения стрептоцида, сульгина, норсульфа зола, фталазола, сульфадимезина в таблетках, рекомендованных НД и раз работанных нами.

Таблица 4. Сравнительная оценка методик количественного определения сульфаниламидных препаратов в таблетках (n=10, t(P, f)(табл)=2,26;

Р=95%;

F(P, f1, f2)(табл)=5,26;

Р=99%) Лекарственное Наименование S2,% S tвыч Fвыч Х,% вещество метода Спектрофотометрия 100 100,41 1,3398 1,1578 0,82 0,94 6, Таблетки стрептоцида Нитритометрия (НД) 100 99,96 8,9928 2,9988 2,77 0, Спектрофотометрия 100 100,16 2,5682 1,6026 1,14 0,26 3, Таблетки сульгина Нитритометрия (НД) 100 100,28 9,0505 3,0084 2,77 0, Спектрофотометрия 100 100,69 3,6507 1,9107 1,36 0,96 1, Таблетки норсульфазола Нитритометрия (НД) 100 99,89 6,7451 2,5971 2,40 0, Спектрофотометрия 100 100,18 1,9651 1,4019 1,00 0,34 1, Таблетки Спектрофотометрия фталазола 100 100,51 2,8104 1,6764 1,19 0, (НД) Из таблицы видно, что результаты, полученные по разработан ным методикам и методикам, рекомендованным НД, не отягощены систе матической ошибкой (tвыч tтабл). Таким образом, результаты, полученные спектрофотометрическим методом, являются правильными, а по воспро изводимости превосходят результаты, полученные по методикам НД, так как характеризуются меньшим значением S2.

ГЛАВА СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИДИНА Количественное определение изониазида, метазида и фтивазида со гласно НД проводится титриметрическими методами [28, 67, 118]. Для анализа метазида предлагается метод обратной иодометрии, а для изони азида и фтивазида – ацидиметрия в среде ледяной уксусной кислоты. Ука занные методы характеризуются длительностью, токсичностью, трудоем костью. Поэтому анализ данных препаратов требует совершенствования. В связи с тем, что изониазид, метазид и фтивазид обладают способностью избирательно поглощать энергию в УФ и видимых областях спектра, для их количественного определения была использована спектрофотометрия.

5.1. Спектрофотометрическое определение изониазида Спектральные характеристики полос поглощения изониазида (гид разид изоникотиновой кислоты) приведены в табл. 5.1. Спектр поглощения изониазида представлен на рис. 5.1.

Как видно из приведенного графика, спектр поглощения изониазида при рН от 1,1 до 6,1 характеризуется одной полосой поглощения с макси мумом поглощения при 266 нм. В спектре поглощения изониазида при рН 7,5 13,0 наблюдается три максимума поглощения на длинах волн 238, 274 и 297 нм. Сдвиг максимума поглощения изониазида в щелочной среде в длинноволновую область спектра происходит за счет увеличения цепи сопряжения в результате таутомерных превращений.

Спектры поглощения изучаемого вещества изменяются в интервале рН от 1,1 до 13,0. Это объясняется тем, что данное соединение обладает амфотерными свойствами за счет азота пиридинового цикла и остатка гид разина. Таким образом, изониазид может находиться в ионизированной и неионизированной формах, которые имеют отличия в электронном строе нии [89]. Поэтому при спектрофотометрическом определении изониазида существенное значение имеет правильный выбор растворителя, обеспечи вающего оптимальное значение рН.

УФ-спектр 0,001% раствора изониазида Е 1% 1см 13, 6, 1,, нм 220 240 260 280 300 320 340 номер кривой соответствует значению рН Рис. 5. Таблица 5. Характеристики полос поглощения изониазида Растворитель 0,1М раствор 0,1M раствор хлористоводородной гидроксида натрия Вода Исследуемое кислоты (pH 1,1) (pH 13,0) вещество max, min, max, min, 1% max, 1% min, 1% Е1% Е1% Е1% Е1см Е1см Е1см 1см 1см 1см нм нм нм нм нм нм 238 228 Изонизид 266 400 235 205 274 370 266 435 233 251 297 Важным является подбор условий, при которых определяемые веще ства находятся в одной форме: ионизированной или молекулярной. При подборе таких условий авторы исходили из следующих соображений. В связи с тем, что у изониазида выражены основные свойства, то для их ана лиза удобнее выбрать в качестве растворителя 0,1М раствор хлористово дородной кислоты (рН 1,1), в которой изониазид хорошо растворяется, об разуя аммонийную соль. К тому же, было установлено, что солевая форма изониазида более стабильна.

Аналитическая длина волны в выбранных условиях для изониазида равна 266 нм.

Для установления границы подчиняемости закону Бугера-Ламберта Бера были построены градуировочные графики. В результате проведенных исследований были определены границы концентраций, при которых наблюдается подчинение закону Бугера-Ламберта-Бера, которые для изо ниазида составляют 5,00 – 40,00 мкг/мл.

Методом наименьших квадратов рассчитаны уравнения градуиро вочных графиков: А=(0,0440,001)С, SА=0,007 (для раствора изониазида), где А оптическая плотность раствора, С концентрация раствора, мкг/мл.

Разработанные оптимальные условия спектрофотометрического ана лиза изониазида были использованы для количественного определения изониазида в субстанции и готовых лекарственных формах (в растворах для инъекций и таблетках).

Из представленных в табл. 1.2 данных видно, что максимум погло щения изониазида (266 нм) входит в интервал, оптимальный для дихрома та калия и хромата калия. Поэтому в качестве оптического образца срав нения для спектрофотометрического определения изониазида можно ре комендовать либо дихромат калия, либо хромат калия. Свой выбор авторы остановили на дихромате калия. Дихромат калия и изониазид имеют об щий оптимальный растворитель – 0,1М раствор хлористоводородной кис лоты, поэтому при спектрофотометрическом определении измерения мож но проводить с данными веществами параллельно, относительно одного раствора сравнения, что значительно уменьшает погрешность анализа.

Авторами разработаны методики спектрофотометрического опреде ления изониазида с использованием оптических образцов сравнения [33, 35, 38, 44, 45].

Удельные показатели поглощения исследуемого вещества и оптиче ского образца сравнения не совпадают, поэтому в формулу расчета содер жания вещества вводят коэффициент пересчета, который рассчитывают по формуле (11).

Для определения удельных показателей поглощения были использо ваны рабочие стандартные образцы изониазида, полученные ОАО «Усо лье-Сибирский химфармкомбинат» путем перекристаллизации промыш ленных серий препаратов из спирта этилового и очистки углем активиро ванным, и оптический образец сравнения дихромат калия квалификации хч.

В табл. 5.2 представлены результаты определения коэффициента пе ресчета для спектрофотометрического определения изониазида по дихро мату калия при длине волны 266 нм в 0,1М растворе хлористоводородной кислоты, полученные при проведении десяти независимых определений.

Авторами рассчитаны коэффициенты пересчета для двух спектрофотомет ров типа СФ-26 и одного спектрофотометра типа СФ-46. Относительная ошибка определения коэффициента пересчета на разных приборах не пре вышает 0,4% (табл. 5.3).

Для сравнения было проведено количественное определение изони азида по РСО препарата и оптическому образцу сравнения.

Таблица 5. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа изониазида по оптическому образцу сравнения дихромата калия Метрологические аос, г авос, г Аос Авос Еос Евос Кпер характеристики (n=10, P=95%) 0,0499 0,1499 0,7696 0,4202 385,571 140,160 0,364 К =0, S20, 0,0498 0,1499 0,7790 0,4260 391,064 142,095 0, 0,0501 0,1503 0,7190 0,3925 358,782 130,572 0,364 S=0, S х =0, 0,0503 0,1503 0,7399 0,3979 367,744 132,369 0, К =0, 0,0498 0,1503 0,7328 0,4012 367,871 133,466 0, 0,0503 0,1503 0,7447 0,4034 370,129 134,198 0,363 Е%=0, 0,0501 0,1501 0,7696 0,4202 384,032 139,973 0,364 Sr=0, 0,0503 0,1501 0,7670 0,4202 381,213 139,973 0, 0,0503 0,1501 0,7721 0,4145 383,748 138,075 0, 0,0503 0,1503 0,7447 0,4034 370,129 134,198 0, Таблица 5. Результаты определения коэффициентов пересчета для спектрофотометрического анализа изониазида по оптическому образцу сравнения дихромата калия на двух приборах СФ-26 и приборе СФ- Кпер Условный номер прибора (n=10) 1. (СФ-26) 0, 2. (СФ-26) 0, 3.(СФ-46) 0, К = 0, s = 0, s x = 0, Метрологические характеристики К = 0, Е%= 0, Sr=0, Результаты проведенных экспериментов на пяти сериях изониазида представлены в табл. 5.4. Из представленных в таблице данных следует, что при спектрофотометрическом определении изониазида по РСО изони азида и оптическому образцу сравнения дихромату калия получены сопо ставимые результаты. Относительная погрешность определения находится в пределах от 0,65 до 1,00 %.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения изониазида по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=7, P=95%) № серии сравнения S2 Х Sх S Е% Sr Х Дихромат калия 99,87 0,9110 0,9544 0,3607 0,88 0,88 0, 2072000 Изониазид 99,92 0,5278 0,7265 0,2746 0,67 0,67 0, Дихромат калия 99,86 0,5877 0,7666 0,2897 0,71 0,71 0, 4072000 Изониазид 99,81 0,8010 0,8950 0,3383 0,83 0,83 0, Дихромат калия 99,94 0,8182 0,9045 0,3419 0,84 0,84 0, 8072000 Изониазид 99,89 0,4991 0,7065 0,2670 0,65 0,65 0, Дихромат калия 99,79 0,8651 0,9301 0,3515 0,86 0,86 0, 9072000 Изониазид 99,79 1,1341 1,0649 0,4025 0,99 0,99 0, Дихромат калия 99,88 0,8922 0,9446 0,3570 0,88 0,88 0, 1072000 Изониазид 99,88 1,1610 1,0775 0,4073 1,00 1,00 0, При разработке методик количественного определения изониазида в таблетках и растворах для инъекций использовали оптимальные условия, найденные для спектрофотометрического анализа индивидуального лекар ственного вещества изониазида. Расчет содержания лекарственного веще ства в таблетках и растворе для инъекций проводили по оптическому об разцу сравнения дихромату калия. Результаты спектрофотометрического определения изониазида в таблетках представлены в табл. 5.5.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения изониазида в таблетках по 0,3 г по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=7, P=95%) № серии сравнения S2 Х Sх S Е% Sr Х Дихромат калия 0,301 0,00003 0,0057 0,0022 0,005 1,77 0, 10122000 Изониазид 0,303 0,00002 0,0045 0,0017 0,004 1,38 0, Дихромат калия 0,301 0,00001 0,0036 0,0014 0,003 1,12 0, 150599 Изониазид 0,299 0,00001 0,0035 0,0013 0,003 1,10 0, Дихромат калия 0,299 0,00003 0,0055 0,0021 0,005 1,69 0, 40599 Изониазид 0,300 0,00003 0,0056 0,0021 0,005 1,72 0, Дихромат калия 0,306 0,00004 0,0061 0,0023 0,006 1,84 0, 9032000 Изониазид 0,305 0,00004 0,0060 0,0023 0,006 1,83 0, Дихромат калия 0,301 0,00001 0,0037 0,0014 0,003 1,15 0, 6082000 Изониазид 0,303 0,00003 0,0052 0,0020 0,005 1,57 0, Результаты спектрофотометрического определения изониазида в растворе для инъекций представлены в табл. 5.6.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения изониазида в 10% растворе по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=7, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Дихромат калия 0,1003 0,000001 0,0011 0,0004 0,001 1,05 0, 18042000 Изониазид 0,1001 0,000002 0,0012 0,0005 0,001 1,15 0, Дихромат калия 0,1003 0,000001 0,0010 0,0004 0,001 0,92 0, 1042000 Изониазид 0,1006 0,000002 0,0014 0,0005 0,001 1,26 0, Дихромат калия 0,1009 0,000003 0,0017 0,0006 0,002 1,56 0, 51198 Изониазид 0,1010 0,000003 0,0018 0,0007 0,002 1,67 0, Дихромат калия 0,1015 0,000002 0,0015 0,0008 0,001 1,38 0, 20699 Изониазид 0,1009 0,000002 0,0015 0,0006 0,001 1,41 0, Дихромат калия 0,1008 0,000002 0,0014 0,0005 0,001 1,25 0, 6032000 Изониазид 0,1005 0,000003 0,0016 0,0006 0,002 1,50 0, Авторами была проведена сравнительная оценка определения коли чественного содержания изониазида в таблетках и растворе для инъекций спектрофотометрическим методом с использованием оптического образца сравнения и РСО лекарственного вещества.

Из представленных в табл. 5.55.6 данных следует, что при анализе изониазида в лекарственных формах спектрофотометрическим методом по оптическому образцу сравнения и РСО лекарственного вещества получены сопоставимые результаты. Относительная ошибка определения не превы шает 1,67 %. Это свидетельствует о возможности использования дихрома та калия в качестве оптического образца сравнения для спектрофотомет рического определения изониазида. Применение этого образца сравнения при спектрофотометрическом анализе изониазида позволяет получать хо рошо воспроизводимые результаты.

5.2. Спектрофотометрическое определение метазида Спектральные характеристики полос поглощения метазида (1,1 метилен-бис-(изоникотиноилгидразин) приведены в табл. 5.7. Спектр по глощения данного веществ представлен на рис. 5.2. Как видно из приве денных графиков, спектр поглощения метазида при рН от 1,1 до 6,1 харак теризуется одной полосой поглощения с максимумом поглощения на длине волны 266 нм. Спектр поглощения метазида при рН 7,5-13,0 имеет одну полосу поглощения на длине волны 273 нм, т.е. в данном случае про изошел батохромный сдвиг максимума поглощения. Сдвиг максимума по глощения метазида в щелочной среде в длинноволновую область спектра происходит за счет увеличения цепи сопряжения в результате таутомерных превращений. Таким образом, спектры поглощения метазида изменяются в интервале рН от 1,1 до 13,0. Это объясняется тем, что данное соединение обладает амфотерными свойствами, однако сильнее в нём выражены ос новные свойства за счет азота пиридинового цикла. Следовательно, мета зид может находиться в ионизированной и неионизированной формах, ко торые имеют отличия в электронном строении [89].

Таблица 5. Характеристики полос поглощения метазида Растворитель 0,1М раствор 0,1M раствор хлористоводородной гидроксида натрия Вода Исследу кислоты (pH 1,1) (pH 13,0) емое вещество max, min, max, min, max, Е1% min, 1см Е1% Е1% Е1% Е1% Е1% 1см 1см 1см 1см 1см нм нм нм нм нм нм Метазид 266 390 235 180 273 375 237 280 266 405 233 Поэтому при спектрофотометрическом определении метазида суще ственное значение имеет правильный выбор растворителя, обеспечиваю щего оптимальное значение рН.

Важным является подбор условий, при которых определяемые веще ства находятся в одной форме: ионизированной или молекулярной. В связи с тем, что у метазида более выражены основные свойства, то для их ана лиза удобнее выбрать в качестве растворителя 0,1М раствор хлористово дородной кислоты (рН 1,1). Метазид хорошо растворяется в кислотах. Со левая форма метазида достаточно стабильна. Аналитическая длина волны в выбранных условиях для метазида соответствует 266 нм.

В результате проведенных экспериментальных исследований были определены границы концентраций, при которых наблюдается подчинение закону Бугера-Ламберта-Бера для метазида: 5,00 – 40,00 мкг/мл.

Методом наименьших квадратов было рассчитано уравнение градуи ровочного графика для раствора метазида: А=(0,03750,0009)С, SА=0, (для раствора метазида);

где А оптическая плотность раствора, С кон центрация раствора, мкг/мл.

Разработанные оптимальные условия спектрофотометрического ана лиза метазида были использованы для количественного определения мета зида в субстанции и готовых лекарственных формах (в растворах для инъ екций и таблетках).

УФ-спектр 0,001% раствора метазида Е 1% 1см 13, 1,, нм 220 240 260 280 300 320 340 номер кривой соответствует значению рН Рис. 5. Из представленных в табл. 1.2 данных видно, что максимум погло щения метазида (266 нм) входит в интервал, оптимальный для дихромата калия и хромата калия. Поэтому в качестве оптического образца сравне ния для спектрофотометрического определения метазида можно рекомен довать либо дихромат калия, либо хромат калия. Оптимальнее использо вать дихромат калия, так как дихромат калия и метазид имеют общий оп тимальный растворитель – 0,1М раствор хлористоводородной кислоты.

Поэтому при спектрофотометрическом определении измерения с ними следует проводить параллельно, относительно одного раствора сравнения, что значительно уменьшает погрешность анализа.

Авторами разработаны методики спектрофотометрического опреде ления метазида с использованием оптического образца сравнения [33, 35, 38, 44, 45].

В связи с тем, что удельные показатели поглощения исследуемого вещества и оптического образца сравнения не совпадают, в формулу рас чета содержания вещества (16) вводят коэффициент пересчета, который рассчитывают по формуле (11).

Для определения удельных показателей поглощения были использо ваны рабочие стандартные образцы метазида, полученные ОАО «Усолье Сибирский химфармкомбинат» путем перекристаллизации промышленных серий препаратов из спирта этилового и очистки углем активированным, и оптический образец сравнения дихромат калия квалификации хч.

В табл. 5.8 представлены результаты определения коэффициента пе ресчета для спектрофотометрического определения метазида по дихромату калия при длине волны 266 нм в 0,1М растворе хлористоводородной кис лоты, полученные при проведении десяти независимых определений. Ко эффициенты пересчета рассчитаны для двух спектрофотометров типа СФ 26 и одного спектрофотометра типа СФ-46. Относительная ошибка опре деления коэффициента пересчета на разных приборах не превышает 0,4% (табл. 5.9).

Для сравнения было проведено количественное определение метази да по РСО препарата и оптическому образцу сравнения.

Таблица 5. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа метазида по оптическому образцу сравнения дихромату калия Метрологические аос, г авос, г Аос Авос Еос Евос Кпер характеристики (n=10, P=95%) 0,0504 0,1501 0,7545 0,4023 374,256 134,011 0,358 К = 0, S2=0, 0,0503 0,1501 0,7721 0,4145 383,748 138,075 0, 0,0500 0,1499 0,7825 0,4202 391,250 140,160 0,358 S=0, S х =0, 0,0500 0,1503 0,7328 0,3915 366,400 130,240 0, К =0, 0,0501 0,1503 0,7328 0,3925 365,669 130,572 0, 0,0502 0,1503 0,7352 0,3925 366,135 130,572 0,357 Е%=0, 0,0500 0,1503 0,7328 0,3925 366,400 130,572 0,356 Sr=0, 0,0498 0,1503 0,7423 0,3979 372,641 132,369 0, 0,0501 0,1503 0,7328 0,3925 365,669 130,572 0, 0,0500 0,1503 0,7328 0,3925 366,400 130,572 0, Таблица 5. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа метазида по оптическому образцу сравнения дихромату калия на двух приборах СФ-26 и приборе СФ- Кпер Условный номер прибора (n=10) 1. (СФ-26) 0, 2. (СФ-26) 0, 3.(СФ-46) 0, К = 0, s = 0, s x = 0, Метрологические характеристики К = 0, Е%= 0, Sr=0, Результаты проведенных экспериментов на пяти сериях метазида приведены в табл. 5.10. Из них следует, что при спектрофотометрическом определении изониазида по РСО метазида и оптическому образцу срав нения дихромату калия получены сопоставимые результаты. Относитель ная погрешность определения находится в пределах от 0,91 до 1,07 %.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения метазида по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы срав- (n=7, P=95%) № серии нения S2 Х Sх S Е% Sr Х Дихромат калия 99,69 0,8858 0,9412 0,3557 0,87 0,87 0, 5082000 Метазид 99,71 0,9519 0,9757 0,3688 0,90 0,91 0, Дихромат калия 99,80 0,5168 0,7189 0,2717 0,67 0,67 0, 6082000 Метазид 99,85 1,2070 1,0986 0,4152 1,02 1,02 0, Дихромат калия 99,85 0,4412 0,6643 0,2511 0,62 0,62 0, 7082000 Метазид 99,82 1,3321 1,1542 0,4362 1,07 1,07 0, Дихромат калия 99,88 0,8161 0,9034 0,3414 0,84 0,84 0, 9082000 Метазид 99,82 0,8996 0,9485 0,3585 0,88 0,88 0, Дихромат калия 99,67 1,2932 1,1372 0,4298 1,05 1,06 0, 10082000 Метазид 99,62 0,5643 0,7512 0,2839 0,70 0,70 0, При разработке методик количественного определения метазида в таблетках использовали оптимальные условия, найденные для спектрофо тометрического анализа индивидуального лекарственного вещества мета зида. Расчет содержания лекарственного вещества в таблетках проводили по оптическому образцу сравнения дихромату калия. Результаты спектро фотометрического определения метазида в таблетках представлены в табл.

5.11.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения метазида в таблетках по 0,5 г по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы срав (n=7, P=95%) № серии нения Х Sх S S Е% Sr Х Дихромат калия 0,511 0,00002 0,0048 0,0018 0,004 0,86 0, 60799 Метазид 0,510 0,00002 0,0044 0,0017 0,004 0,80 0, Дихромат калия 0,506 0,00004 0,0062 0,0023 0,005 1,13 0, 91099 Метазид 0,504 0,00006 0,0080 0,0030 0,007 1,47 0, Дихромат калия 0,508 0,00004 0,0065 0,0025 0,006 1,18 0, 202200 Метазид 0,509 0,00003 0,0052 0,0020 0,005 0,94 0, Дихромат калия 0,509 0,00004 0,0065 0,0024 0,006 1,17 0, 120998 Метазид 0,508 0,00004 0,0066 0,0025 0,006 1,20 0, Дихромат калия 0,503 0,00007 0,0084 0,0032 0,008 1,54 0, 100399 Метазид 0,504 0,00002 0,0047 0,0018 0,004 0,87 0, Авторами была проведена сравнительная оценка определения коли чественного содержания метазида в таблетках спектрофотометрическим методом с использованием оптического образца сравнения и РСО лекар ственного вещества.

Из представленных в табл. 5.11 данных следует, что при анализе ме тазида в лекарственных формах спектрофотометрическим методом по оп тическому образцу сравнения и РСО лекарственного вещества получены сопоставимые результаты. Относительная ошибка определения не превы шает 1,54 %. Это свидетельствует о возможности использования дихрома та калия в качестве образца сравнения для спектрофотометрического определения метазида. Применение данного оптического образца сравне ния при спектрофотометрическом анализе метазида позволяет получать хорошо воспроизводимые результаты.

5.3. Спектрофотометрическое определение фтивазида Спектральные характеристики полос поглощения фтивазида (3 метокси-4-оксибензилиденгидразидизоникотиновой кислоты) приведены в табл. 5.12. Спектр поглощения данного веществ представлен на рис. 5.3.

Как видно из приведенных графиков, спектр поглощения фтивазида при рН 5,3 характеризуется двумя полосами поглощения, а при рН 1,1-4,5 и 8,5-13,0 – тремя полосами поглощения. Следует отметить, что в зависимо сти от рН в спектрах поглощения раствора фтивазида наблюдается сдвиг максимумов и минимумов поглощения как в длинноволновую, так и в ко ротковолновую области спектра. Сдвиг максимумов поглощения фтивази да в щелочной среде в длинноволновую область спектра происходит за счет увеличения цепи сопряжения в результате таутомерных превращений.

Таблица 5. Характеристики полос поглощения фтивазида Растворитель 0,1М раствор 0,1M раствор хлористоводородной гидроксида натрия Вода Исследуе кислоты (pH 1,1) (pH 13,0) мое вещество max, min, Е1% max, min, max, min, 1см Е1% Е1% Е1% Е1% Е1% 1см 1см 1см 1см 1см нм нм нм нм нм нм 229 156 217 247 140 234 155 228 Фтивазид 274 300 360 773 239 302 260 275 258 275 309 270 246 УФ-спектр 0,001% раствора фтивазида Е 1% 1см 13, 1, 100, нм 5, 210 230 250 270 290 310 330 350 370 390 номер кривой соответствует значению рН Рис. 5. Спектры поглощения фтивазида изменяются в интервале рН от 1, до 13,0. Это объясняется тем, что данное соединение обладает амфотер ными свойствами, основные свойства проявляются за счет атома азота пи ридинового цикла, а кислотные свойства обусловлены остатком ванилина и наличием в его структуре фенольного гидроксила. Следовательно, фти вазид может находиться в ионизированной и неионизированной формах, которые имеют отличия в электронном строении [89]. Поэтому при спек трофотометрическом определении фтивазида существенное значение име ет правильный выбор растворителя, обеспечивающего оптимальное значе ние рН. В связи с тем, что у фтивазида преобладают более выраженные кислотные свойства, в качестве растворителя можно использовать 0,1М раствор гидроксида натрия (рН 12,5), к тому же фтивазид хорошо раство ряется в растворителях основного характера. Солевые формы фтивазида более стабильны. Аналитическая длина волны в выбранных условиях для фтивазида – 360 нм.


С целью установления границы подчиняемости закону Бугера Ламберта-Бера был построен градуировочный график раствора фтивазида.

В результате проведенных исследований были определены границы кон центраций, при которых наблюдается подчинение закону Бугера Ламберта-Бера. Эти границы составляют 2,00 – 20,00 мкг/мл. Методом наименьших квадратов рассчитаны уравнения градуировочного графика:

А=(0,08310,0012)С, SА=0,003, где А оптическая плотность раствора, С концентрация раствора, мкг/мл.

Разработанные оптимальные условия спектрофотометрического ана лиза фтивазида были использованы для количественного определения суб станции фтивазида и готовой лекарственной формы (таблеток).

Максимум поглощения фтивазида соответствует 360 нм и входит в область, оптимальную для хромата калия и нитрита натрия (табл. 1.2). В качестве оптического образца сравнения для спектрофотометрического определения фтивазида выбран хромат калия. Хромат калия и фтивазид имеют общий оптимальный растворитель – 0,1М раствор гидроксида натрия, поэтому при спектрофотометрическом определении работу с ними следует проводить параллельно, относительно одного раствора сравнения, что значительно уменьшает погрешность анализа.

Авторами разработаны методики спектрофотометрического опреде ления фтивазида с использованием оптического образца сравнения [33, 35, 38, 44, 45].

Для определения удельных показателей поглощения были использо ваны рабочие стандартные образцы фтивазида, полученные ОАО «Усолье Сибирский химфармкомбинат» путем перекристаллизации промышленных серий препаратов из спирта этилового и очистки углем активированным, и оптический образец сравнения хромат калия квалификации хч.

В табл. 5.13 представлены результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического определения фтивазида по хрома ту калия при длине волны 360 нм в 0,1М растворе гидроксида натрия, по лученные при проведении десяти независимых определений. Коэффици енты пересчета рассчитаны для двух спектрофотометров типа СФ-26 и од ного спектрофотометра типа СФ-46. Относительная ошибка определения коэффициента пересчета на разных приборах не превышает 0,4% (табл.

5.14).

Таблица 5. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа фтивазида по оптическому образцу сравнения дихромата калия Метрологические аос, г авос, г Аос Авос Еос Евос Кпер характеристики (n=10, P=95%) 0,0500 0,1500 0,4495 0,5960 899,000 198,667 0,221 К =0, S2=0, 0,0502 0,1500 0,4495 0,5952 895,418 198,400 0, 0,0501 0,1500 0,4455 0,5952 889,222 198,400 0,223 S=0, S х =0, 0,0503 0,1501 0,4504 0,5960 895,427 198,534 0, К =0, 0,0499 0,1501 0,4435 0,5960 888,778 198,534 0, 0,0500 0,1501 0,4495 0,6012 899,000 200,266 0,223 Е%=0, 0,0500 0,1502 0,4495 0,5990 899,000 199,401 0,222 Sr=0, 0,0502 0,1502 0,4435 0,5990 883,466 199,401 0, 0,0501 0,1503 0,4455 0,5990 889,222 199,268 0, 0,0499 0,1501 0,4425 0,5960 886,774 198,534 0, Таблица 5. Результаты определения коэффициентов пересчета для спектрофотометрического анализа фтивазида по оптическому образцу сравнения хромата калия на двух приборах СФ-26 и приборе СФ- Кпер Условный номер прибора (n=10) 1. (СФ-26) 0, 2. (СФ-26) 0, 3.(СФ-46) 0, К = 0, s = 0, s x = 0, Метрологические характеристики К = 0, Е%= 0, Sr=0, Для сравнения было проведено количественное определение изони азида по РСО препарата и оптическому образцу сравнения.

Результаты проведенных экспериментов на пяти сериях фтивазида приведены в табл. 5.15. Из них следует, что при спектрофотометрическом определении фтивазида по РСО фтивазида и оптическому образцу срав нения хромату калия получены сопоставимые результаты. Относительная погрешность определения находится в пределах от 0,96 до 1,09 %.

При разработке методик количественного определения фтивазида в таблетках использовали оптимальные условия, найденные для спектрофо тометрического анализа индивидуального лекарственного вещества фтива зида. Расчет содержания лекарственного вещества в таблетках проводили по оптическому образцу сравнения хромату калия. Результаты спектрофо тометрического определения фтивазида в таблетках представлены в табл.

5.16.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения фтивазида по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=7, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Хромат калия 99,01 1,0557 1,0275 0,3883 0,954 0,96 0, Фтивазид 98,86 0,6379 0,7987 0,3019 0,740 0,75 0, Хромат калия 99,51 0,3403 0,5834 0,2205 0,540 0,54 0, Фтивазид 98,91 0,7565 0,8697 0,3287 0,805 0,81 0, Хромат калия 98,74 0,6997 0,8365 0,3162 0,775 0,78 0, Фтивазид 99,52 1,0121 1,0060 0,3802 0,932 0,94 0, Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения фтивазида в таблетках по 0,5 г по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=7, P=95%) № серии сравнения Х Sх S S Е% Sr Х Хромат калия 0,504 0,00003 0,0055 0,0020 0,005 1,00 0, 6022000 Фтивазид 0,502 0,00004 0,0063 0,0023 0,006 1,16 0, Хромат калия 0,502 0,00005 0,0070 0,0026 0,006 1,28 0, 1042000 Фтивазид 0,501 0,0001 0,0084 0,0032 0,008 1,55 0, Хромат калия 0,503 0,00001 0,0033 0,0012 0,003 0,60 0, 100599 Фтивазид 0,506 0,0001 0,0071 0,0027 0,007 1,30 0, Была проведена сравнительная оценка определения количественного содержания фтивазида в таблетках спектрофотометрическим методом с использованием оптического образца сравнения и РСО лекарственного вещества. Из представленных в табл. 5.16 данных следует, что при анализе фтивазида в лекарственных формах спектрофотометрическим методом по оптическому образцу сравнения и РСО лекарственного вещества получены сопоставимые результаты. Относительная ошибка определения не превы шает 1,62 %. Это свидетельствует о возможности использования хромата калия в качестве образца сравнения для спектрофотометрического опре деления фтивазида. Применение этого образца сравнения при спектрофо тометрическом анализе фтивазида позволяет получать хорошо воспроиз водимые результаты.

Была проведена сравнительная оценка методов, разработанных ав торами и предложенных НД в соответствии с рекомендациями литературы [14, 18, 21, 123], для количественного определения изониазида, метазида и фтивазида, которая проводилась путем сопоставления правильности и вос производимости получаемых результатов. При оценке правильности мето дик рассматривался вопрос о наличии или отсутствии систематической ошибки. Для этого рассчитывался критерий Стьюдента и его значение сравнивалось с табличным (табл. 5.17). Если рассчитанное значение коэф фициента Стьюдента не превышало табличное, то по правилам математи ческой статистики систематическая ошибка отсутствует. Из табл. 5.17 вид но, что метод спектрофотометрического определения содержания изони азида, метазида и фтивазида по оптическому образцу сравнения дает пра вильные результаты (tвыч tтабл). Методы иодометрического определения метазида и ацидиметрического определения фтивазида отягощены систе матической ошибкой (tвыч tтабл). Для сравнения воспроизводимости разра ботанных методик вычисляли критерий Фишера по величинам дисперсий результатов, полученных по разработанной методике, и методике, предло женной НД (табл. 5, 17). Вычисленные значения критерия Фишера сравни вали с табличными [23]. Если Fвыч превышало табличное значение крите рия Фишера F(P, f1, f2)табл, то различия в воспроизводимости методик при нимались как значимые. Из данных табл. 5, 17 видно, что методики опре деления метазида и фтивазида по НД уступают по воспроизводимости спектрофотометрическому определению (FвычFтабл).

Таблица 5. Сравнительная оценка методик количественного определения Р=95%;

F(P,f1, f 2) (табл.)=8,47, Р=99%) (n=7, t(P,f) =2,45, (табл.) Продолжитель Лекарств. Наименование Число t выч Fвыч, % s х, % s ность анализа, вещество метода операций мин.

Спекрофото 100 99,79 0,8651 0,9301 0,86 0,60 17 метрия 2, Изониазид Ацидиметрия 100 98,75 1,7502 1,3229 1,24 2,50 12 Спекрофото 100 99,85 0,4412 0,6643 0,62 0,60 17 метрия 9, Метазид 100 99,04 4,2589 2,0637 1,93 1,23 39 Йодометрия Спекрофото 100 99,51 0,3403 0,5834 0,54 2,22 17 метрия 11, Фтивазид Ацидиметрия 100 98,11 3,9578 1,9894 1,88 2,51 12 Методики анализа изониазида не различаются по воспроизводимо сти. В качестве оптимальной выбирается та методика, у которой S2 имеет меньшее значение [23], т.е. в данном случае оптимальной является мето дика спектрофотометрического определения изониазида по оптическому образцу сравнения.

Была проведена сравнительная оценка результатов количественного определения изониазида, метазида и фтивазида, полученных спектрофото метрическим методом с использованием оптических образцов сравнения и методом ВЭЖХ. Метод ВЭЖХ позволяет определять содержание основно го действующего вещества в присутствии специфических примесей и про дуктов деструкции. Для анализа был выбран обращенно-фазный вариант хроматографии. Все эксперименты выполнялись на микроколоночном вы сокоэффективным жидкостном хроматографе «Милихром-А02». При вы боре хроматографических условий добивались полного разделения основ ных веществ и продуктов деструкции. Учитывая, что молекулы исследуе мых сорбатов (изониазид, метазид, фтивазид, а также примеси: изоникоти новая кислота и ванилин) полярны и, согласно теории Хорвата, будут не значительно «прижиматься» к гидрофобной поверхности сорбента ввиду способности образовывать водородные связи с неполярными компонента ми подвижной фазы, для них целесообразно использовать в качестве по движной фазы воду с небольшими добавками ацетонитрила. Оптимальны ми условиями хроматографирования для метазида и фтивазида являются:

градиентное элюирование в системе 0,05М фосфатный буфер с рН 3,0 ацетонитрил с линейным увеличением доли органического компонента от 5 до 80% за 10 минут при расходе элюента 200 мкл/мин. При использова нии кислого элюента изониазид имеет очень малое время удерживания, поэтому его анализ проводили в основном элюенте: 0,05М ацетатный бу фер, доведенный триэтиламином до рН 8,0 ацетонитрил при градиент ном элюировании с повышением доли органического компонента от 0 до 40% за 10 минут при расходе элюента 200 мкл/мин. Методом остановки потока были записаны УФ-спектры изучаемых веществ и определены их максимумы поглощения. Регистрация хроматограмм проводилась при длинах волн, соответствующих значениям коротковолновых максимумов.


Детектирование метазида проводили при 270 нм, фтивазида при 330 нм, изониазида при 266 нм. Исследуемые растворы в метаноле концентрации 0,1 мкг/мл вводили в колонку. Объем вводимой пробы равнялся 4 мкл.

Время анализа 7 минут. Время удерживания для изониазида составило минуты, а для его специфической примеси изоникотиновой кислоты минуты (рис. 5.4). Время удерживания для фтивазида составило 4 минуты, а для ванилина 4,5 минуты (рис. 5.5). Время удерживания метазида со ставило 3,5 минуты, а для изониазида в этих условиях 1,5 минуты (рис.

5.6). Количественное определение исследуемых веществ проводили мето дом оптического стандарта. В качестве образцов сравнения использовали изониазид, метазид и фтивазид, перекристаллизованные из этилового спирта. Расчеты выполняли с использованием компьютерного программ ного обеспечения «Мультихром». Результаты количественного определе ния изониазида, метазида и фтивазида методом ВЭЖХ приведены в табл.

5.18 – 5.20.

Хроматограмма изониазида О.Е. 0, 0, 0, 0, 0 1 2 3 4 5 время, мин Рис. 5. Хроматограмма метазида О.Е.

0, 0, 0, 0, 0, 0, 0 2 4 6 8 время, мин Рис. 5. Хроматограмма фтивазида О.Е.

1, 0, 0, 0, 0, 0,2 1 1,8 2,6 3,4 4,2 5 5, время, мин Рис. 5. Таблица 5. Результаты количественного определения изониазида методом ВЭЖХ Результаты количественного определения Метрологические характе № серии tос Sос tх мин Sх х,% ристики (n=7, мин P=95%) 3,04 4,179 3,05 4,173 99,86 Х =99, S2=0, 3,08 4,301 3,07 4,215 98, 3,06 4,242 3,08 4,221 99,50 S=0, S х =0, 02072000 3,03 4,321 3,04 4,328 100, Х =0, 3,06 4,203 3,07 4,197 99, 3,03 4,241 3,02 4,229 99,72 Е%=0, 3,02 4,238 3,01 4,236 99,95 Sr=0, Таблица 5. Результаты количественного определения метазида методом ВЭЖХ Результаты количественного определения Метрологические характе № серии tос Sос tх мин Sх х,% ристики (n=7, мин P=95%) 3,44 4,452 3,44 4,487 100,79 Х =99, S2=0, 3,46 4,334 3,46 4,321 99, 3,47 4,973 3,45 3,913 98,48 S=0, S х =0, 50822000 3,45 4,153 3,49 4,123 99, Х =0, 3,48 4,154 3,49 4,138 99, 3,47 4,971 3,45 3,982 100,28 Е%=0, 3,47 4,162 3,46 4,121 99,01 Sr=0, Таблица 5. Результаты количественного определения фтивазида методом ВЭЖХ Результаты количественного определения Метрологические характе № серии tос tх Sос Sх W, % х,% ристики мин мин (n=7, P=95%) 6, 4,03 11,034 4,02 10,288 99,569 Х =99, S2=0, 4,02 10,921 4,01 10,118 98, 4,01 11,036 4,03 10,273 99,40 S=0, S х =0, 12082000 4,02 11,288 4,02 10,636 100, Х =0, 4,02 10,482 4,02 9,728 99, 3,99 11,190 4,01 10,544 100,62 Е%=0, 4,02 11,198 4,01 10,464 99,78 Sr=0, Из представленных в табл. 5.18 – 5.20 экспериментальных данных видно, что результаты, полученные методом ВЭЖХ, согласуются с данны ми, полученными спектрофотометрическим методом по оптическим об разцам сравнения. Специфические примеси, присутствующие в количестве менее 0,5% в препарате, практически не оказывают влияния на результаты спектрофотометрического определения. Сравнительная оценка методов по правильности и воспроизводимости получаемых результатов (табл.

5.21) показала, что оба метода дают правильные результаты (tвычtтабл) и не отличаются по воспроизводимости. Однако спектрофотометрический ме тод не требует сложного дорогостоящего оборудования, более прост в вы полнении, не требует токсичных и дорогостоящих реактивов.

Таблица 5. Сравнительная оценка методик количественного определения изониазида, мета зида и фтивазида в субстанциях (n=7, t (P, f) (табл.)=2,45, Р=95%;

F(P, f1, f2)(табл.)=8,47, Р=99%) Лекарственное Наименование ме S S Е,% tвыч Fвыч Х,% вещество тода Спектрофотометрия 100 99,79 0,8651 0,9301 0,86 0, Изониазид 1, ВЭЖХ 100 99,58 0,5250 0,7250 0,67 1, Спектрофотометрия 100 99,85 0,4412 0,6643 0,62 0, Метазид 1, ВЭЖХ 100 99,59 0,5989 0,7740 0,72 1, Спектрофотометрия 100 99,51 0,3403 0,5834 0,54 2, Фтивазид 1, ВЭЖХ 100 99,71 0,4570 0,6760 0,63 1, В табл. 5.22 приведены результаты сравнительной оценки методик количественного определения изониазида, метазида и фтивазида в лекарственных формах, рекомендованных НД и разработанных авторами.

Из таблицы видно, что результаты, полученные по разработанной методи ке не отягощены систематической ошибкой (tвычtтабл). Результаты опытов, полученные при анализе таблеток фтивазида по методике, реко мендованной НД, свидетельствуют о наличии систематической ошибки (tвычtтабл). Сравнение методов анализа лекарственных форм производных изоникотиновой кислоты по воспроизводимости показало, что они не от личаются по этому показателю (FвычFтабл). Исключение составляет мето дика анализа таблеток фтивазида по НД (FвычFтабл). Таким образом, ре зультаты, полученные спектрофотометрическим методом с использовани ем оптического образца сравнения, являются правильными, а по воспроиз водимости превосходят методики НД (S2 имеет меньшее значение).

Разработанные методики количественного определения производных изоникотиновой кислоты внедрены в практику работы ОАО «Усолье Сибирский химико-фармацевтический комбинат» и включены в ФСП на субстанции фтивазида, метазида и таблетки фтивазида.

Таблица 5. Сравнительная оценка методик количественного определения изониазида, метазида, фтивазида в лекарственных формах Р=95%;

F(P,f1, f 2)(табл.)=8,47, Р=99%) (n=7, t(P,f) =2,45, (табл.) Наименование х, %, % s2 s tвыч Fвыч S_ лекарственной Метод анализа x формы Разработанная 100,38 0,33805 0,58142 0,54 1, 0, Таблетки методика 3, 0, изониазида по 0,3 г 100,90 1,12860 1,06235 0,97 2, Методика НД Разработанная 0, Таблетки 100,63 0,77234 0,87883 0,81 1, методика 1, 0, метазида по 0,5 г 100,80 0,89333 0,94516 0,87 2, Методика НД Разработанная 0, Таблетки 100,60 0,42667 0,65320 0,60 2, методика 11, 2, фтивазида по 0,5 г 104,29 5,10190 2,25874 2,01 5, Методика НД 10% раствор Разработанная 100,29 1,00207 1,00103 0,92 0, 0, методика для инъекций 2, 101,00 2,32310 1,52417 1,40 1, 1, Методика НД изониазида 5.4. Спектрофотометрическое определение никотиновой кислоты На рис. 5.7 представлен спектр поглощения никотиновой кислоты.

Как видно из рисунка, УФ-спектр поглощения никотиновой кислоты при рН 10,0-13,0 характеризуется тремя полосами поглощения с максимума ми на длинах волн 258±1 нм, 264±1 нм, 270±1 нм и минимумом по глощения на длинах 240 нм, в области рН 1,1-4,5 имеется максимум по глощения на длине волны 260 нм.

Результаты исследования спектра поглощения никотиновой кислоты свидетельствуют о том, что он меняется в зависимости от значения рН среды. Известно, что рКа кислоты никотиновой равен 4,73. Следователь но, оптимальная область рН раствора никотиновой кислоты находится в пределах 1,737,73. Значение рН раствора 0,1 моль/л кислоты хлористово дородной равно 1,1, в растворителе кислого характера ионизация кислоты никотиновой полностью подавляется;

следовательно, она будет находиться только в молекулярной форме. Кроме того, изучение стабильности раство ра никотиновой кислоты в течение двух суток показало, что наиболее устойчива солевая форма (соль по типу аммония) органического соедине ния при рН 1,1 (рис. 5.8). При переходе от рН 1,1 к рН 13,0 в молекуле ни котиновой кислоты происходит переход от соли по типу аммония к соли, УФ-спектр 0,001% раствора никотиновой кислоты А 0, 0,4 1, 2, 10, 4, 13, 0,,нм 220 230 240 250 260 270 280 номер кривой соответствует значению рН Рис. 5. Зависимость оптической плотности растворов никотиновой кислоты от времени хранения А 0, рН 1. 0, рН 13, 0, 0, 0, 0, 0, 0 0,5 1 6 12 24 36 время, ч Рис. 5. образованной сильной кислотой и слабым органическим основанием, по этому отмечается гипохромное смещение всех максимумов поглощения с их одновременным новообразованием.

Исходя из этого, в качестве оптимального растворителя для спектро фотометрического определения кислоты никотиновой выбран раствор 0, моль/л кислоты хлористоводородной, аналитическая длина волны соответ ствует =260 нм.

Оптимальным оптическим образцом сравнения для спектрофотомет рического анализа кислоты никотиновой является дихромат калия. Анали тические длины волн испытуемого соединения 260 нм входят в оптималь ную область светопоглощения дихромата калия: 248,5-265,5 нм (табл. 1.2).

Следует отметить, что у дихромата калия и никотиновой кислоты практи чески совпадают максимумы поглощения, и они имеют общий оптималь ный растворитель – 0,1М раствор хлористоводородной кислоты. Следова тельно, можно предположить, что погрешность анализа никотиновой кис лоты при отмеченных выше оптимальных условиях не будет превышать допустимую.

С целью установления границы подчиняемости закону Бугера для раствора никотиновой кислоты нами был построен градуировочный гра фик и методом наименьших квадратов определено уравнение градуиро вочного графика (n=10;

Р=95%): А=(0,0321±0,0006)С, SA=0,007, где А оптическая плотность вещества, С концентрация раствора, мкг/мл.

В связи с тем, что удельные показатели поглощения никотиновой кислоты и дихромата калия не совпадают, был рассчитан коэффициент пе ресчета (формула (11)). Результаты экспериментальных исследований по определению коэффициента пересчета никотиновой кислоты по дихромату калия представлены в табл. 5.23.

Таблица 5. Результаты определения коэффициента пересчета для спектрофотометрического анализа никотиновой кислоты по оптическому образцу сравнения дихромату калия Метрологические 1% 1% Е1см ос Е1см вос аос Аос авос Авос Кпер характеристики (n=10, Р=95%) К =0, 0,0501 0,4131 412,6 0,1501 0,4134 140,0 0, S2=0, 0,0501 0,4067 405,1 0,1501 0,4318 138,1 0, 0,0501 0,4134 412,6 0,1501 0,4067 140,1 0,339 S=0, S х =0, 0,0503 0,3809 378,6 0,1501 0,4389 129,0 0, К=0, 0,0501 0,3862 385,4 0,1501 0,4295 130,7 0, 0,0503 0,4318 429,2 0,1499 0,4271 146,0 0,340 Е%=0, 0,0497 0,3820 384,3 0,1501 0,4377 130,4 0,339 Sr=0, 0,0499 0,3778 378,6 0,1501 0,4401 130,0 0, 0,0502 0,3883 386,8 0,1501 0,4449 131,14 0, 0,0502 0,4318 430,1 0,1499 0,4377 146,0 0, Результаты проведенных экспериментов на четырех сериях никоти новой кислоты спектрофотометрическим методом по оптическому образцу сравнения дихромату калия, а также по образцу сравнения лекарственного вещества представлены в табл.

5.24. Из приведенных экспериментальных данных видно, что результаты, полученные с использованием образца сравнения лекарственного вещества и оптического образца сравнения, со поставимы. Относительная погрешность определения не превышает 0,67%. Методика характеризуется хорошей воспроизводимостью (Sr со ставляет не более 0,005).

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения никотиновой кислоты по образцам сравнения Метрологические характеристики (n=6, P=95%) № серии Образцы сравнения S2 Х Sх S Е% Sr Х Дихромат калия 100,41 0,2401 0,49 0,20 0,51 0,51 0, 5510991 Никотиновая кислота 100,11 0,2279 0,48 0,18 0,44 0,44 0, Дихромат калия 100,12 0,1764 0,42 0,17 0,44 0,44 0, 5550991 Никотиновая кислота 99,51 0,1509 0,39 0,15 0,36 0,36 0, Дихромат калия 100,01 0,4096 0,64 0,26 0,67 0,67 0, 6461091 Никотиновая кислота 99,62 0,2179 0,47 0,18 0,43 0,43 0, Проведена сравнительная оценка результатов количественного опре деления по разработанной методике и методике НД [52]. Результаты полу ченных экспериментальных данных приведены в табл. 5.25.

Таблица 5. Сравнительная оценка методов количественного определения никотиновой кислоты (n=6, t(P, f)(табл)=2,57;

Р=95%;

F(P, f1, f2)(табл)=10,97;

Р=99%) Продолжи Число Наименование тельность S S Е,% tвыч Fвыч опера Х,% метода анализа, ций мин.

Спектрофотометрия по 100 100,40 0,240 0,490 0,51 2,00 25 дихромату калия 1, Алкалиметрия 100 99,70 0,250 0,500 0,53 1,47 25 (метод НД) Из табл. 5.25 видно, что метод спектрофотометрического определе ния никотиновой кислоты по дихромату калия и метод НД дают правиль ные результаты (tвычtтабл) и не различаются по воспроизводимости (FвычFтабл). Разработанный метод можно предложить в качестве альтерна тивного методу НД, основным достоинством его является возможность унификации количественного определения никотиновой кислоты в суб станциях и лекарственных формах.

Авторами разработаны методики количественного определения ни котиновой кислоты в таблетках по 0,05 г и 1% растворе для инъекций.

Результаты спектрофотометрического определения никотиновой кислоты в таблетках по оптическому образцу сравнения дихромату калия и по образцу сравнения лекарственного вещества представлены в табл. 5.26.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения никотиновой кислоты в таблетках по 0,05 г по образцам сравнения Метрологические характеристики № Образцы (n=6, P=95%) серии сравнения Х Е% Sх S S Sr Х Дихромат калия 0,0455 0,00000025 0,0005 0,0002 0,0005 1,10 0, Никотиновая кислота 0,0495 0,0000003 0,0006 0,0002 0,0005 1,09 0, Дихромат калия 0,0464 0,00000005 0,0002 0,0004 0,0004 0,80 0, Никотиновая кислота 0,0497 0,0000003 0,0006 0,0002 0,0005 1,07 0, Дихромат калия 0,0478 0,00000025 0,0005 0,0002 0,0005 1,10 0, Никотиновая кислота 0,0496 0,0000003 0,0006 0,0002 0,0005 1,07 0, Результаты спектрофотометрического определения никотиновой кислоты в 1% растворе для инъекций представлены в табл. 5.27.

Таблица 5. Результаты спектрофотометрического определения никотиновой кислоты в 1% растворе для инъекций по образцам сравнения Метрологические характеристики Образцы (n=6, P=95%) № серии сравнения S2 Х Sх S Е% Sr Х Дихромат 0,0099 0,000000004 0,00006 0,000026 0,0001 0,67 0, калия Никотиновая 0,0099 0,00000001 0,0001 0,00003 0,0001 0,78 0, кислота Дихромат 0,0099 0,000000002 0,00005 0,000019 0,0001 0,50 0, калия Никотиновая 0,0099 0,00000001 0,0001 0,00003 0,0001 0,75 0, кислота Из представленных данных следует, что при спектрофотометриче ском определении никотиновой кислоты в лекарственных формах по об разцу сравнения лекарственного вещества и по оптическому образцу срав нения получены близкие результаты. Относительная ошибка определения не превышает 1,1 %.

Разработанные методики спектрофотометрического определения ни котиновой кислоты в субстанциях и лекарственных формах защищены Па тентом РФ на изобретение [73].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Рассмотрены основные погрешности одноволнового спектрофотометрического определения органических соединений и определено, что наибольшее значение имеет погрешность градуировки.

Указанная погрешность минимальна для спектрофотометрического определения органических соединений по методу стандарта, или сравнения.

Разработана методология выбора оптических образцов сравнения для одноволнового спектрофотометрического определения органических соединений: оптимальным является тот оптический образец сравнения, для которого расстояние между его максимумом поглощения и максимумом поглощения анализируемого вещества (аналитической длиной волны) не превышает половины полуширины полосы поглощения оптического образца сравнения.

Найдены оптимальные условия для использования оптических образцов сравнения в одноволновой спектрофотометрии органических соединений: оптимальное значение рН, растворитель, оптимальная концентрация, оптимальная область поглощения.

Методом наименьших квадратов рассчитаны уравнения градуировочных графиков для оптических образцов сравнения, позволяющие находить интервалы оптимальных концентраций, и уравнения, описывающие погрешность измерения оптической плотности оптического образца сравнения в оптимальной области его поглощения, позволяющие прогнозировать ошибку количественного определения органических соединений.

На примере лекарственных средств ароматического и гетероциклического рядов показана возможность количественного определения с использованием оптических образцов сравнения.

Оптимизированы условия спектрофотометрического определения указанной группы соединений. Показано, что для количественного определения методом одноволновой спектрофотометрии некоторых азотсодержащих органических соединений существует несколько оптических образцов сравнения из числа изученных, что позволяет аналитическим лабораториям осуществлять выбор образцов сравнения.

Разработанные методики позволяют проводить количественное определение исследуемой группы соединений с относительной погрешностью не более 2%.

Сравнительная оценка методик количественного определения органических соединений производных пурина, индола, пиридина, амидов сульфаниловой кислоты и антибиотиков группы хлорамфеникола спектрофотометрическим методом по оптическому образцу сравнения и методом ВЭЖХ показала, что методики спектрофотометрического определения по оптическим образцам сравнения не уступают по точности и воспроизводимости, отличаются доступностью, экспрессностью, отсутствием высокотоксичных реактивов.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 1. Абрамова Л. В. Новый способ количественного определения субстанции синтомицина / Л. В. Абрамова, Е. А. Илларионова, А. И.

Илларионов // Актуальные проблемы теории и практики фармации : Сб.

науч. статей. – Барнаул, 2000. – С. 59 – 60.

2. Адаптовит 100 мл. Временная фармакоп. ст. № 42-3295-98. – 5 с.

3. Аекол. – Фармакоп. ст. № 42-3182-95. – 6 с.

4. Алиев А.М. Фотометрическое определение никотиновой кислоты в лекарственных препаратах / А. М. Алиев // Фармация. – 1986. – Т. 35, № 5. – С. 59 – 59.

5. Амниоцен для инъекций. – Фармакоп. ст. № 42-3053-94. – 6 с.

6. Арзамасцев А. П. Стандартные образцы лекарственных веществ/ А.

П. Арзамасцев, П. Л. Сенов. – М. : Медицина, 1978. – 247 с.

7. Аэрозоль «Ампровизоль». – Фармакоп. ст. № 42-3140-95. – 9 с.

8. Аэрозоль «Пропосол». – Фармакоп. ст. № 42-3463-97. – 7 с.

9. Бальзам «Первопрестольный». – Временная фармакоп. ст 42-2780-96. – 5 с.

10. Бейсенбеков А. С. Фотометрическое определение никотиновой кислоты в лекарственных препаратах / А. С. Бейсенбеков, А. М. Алиев. // Фармация. – 1983. – Т. 32, № 2. – С. 61– 62.

11. Беликов В. Г. Использование заменителей растворов сравнения в дифференциальной фотоколориметрии / В. Г. Беликов, В. И. Кузьменко // Фармация. – 1972. – № 6. – С. 47 – 50.

12. Беликов В.Г. Расширение области применения дифференциального метода / В. Г. Беликов, С. Н. Степанюк // Хим.-фармац. журн. – 1982. – № 10. – С. 1253 – 1255.

13. Беликов В. Г. Разработка спектрофотометрической методики анализа цитомединов тимуса / В. Г. Беликов, И. П. Ремезова // Фармация, фармакология и подготовка кадров : (материалы регион. конф.) – Пятигорск, 2001. – С. 86.

14. Беликов В. Г. Применение математического планирования и обработка результатов эксперимента в фармации./ В. Г. Беликов, В. Д. Пономарев, Н. И. Коковкин-Щербак – М. : Медицина, 1973. – 232 с.

15. Берштейн И. Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии / И. Я. Берштейн, Ю. Л. Каминский – Л. : Химия, 1986. – 200 с.

16. Булатов М. И. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа / М. И. Булатов, И. П. Калинкин – М : Химия, 1986. – 431 с.

Бу сев А.И. Определение - гликольной группировки в 17.

компонентах нуклеиновых кислот. II. Новый амплификационный метод титриметрического определения рибонуклеозидов и нуклеозид-5 1 фосфатов / А. И. Бусев, В. Я. Захаранс, У. Я.

Микстайс // Хим.-фармац.. журн. – 1977 – Т. 14, № 3 – С. 128 – 132.

18. Быстров С. П. Системы и ошибки методов определения мышьяка : Дис.

… докт. фармац. наук. – М., 1967. – 144 с.



Pages:     | 1 | 2 || 4 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.