авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |

«Российская Академия Наук Дальневосточное отделение Институт биологических проблем Севера На ...»

-- [ Страница 2 ] --

Подопытных рыб отлавливали во время отливов под камнями или в литоральных ваннах. Эксперимент проведен в лабораторных условиях в июне и в сентябре-ноябре 2012 года и был поделен на два этапа.

Опытную группу рыб поместили в необогреваемый аквариум с морской водой, объем которого составил 80 л (размеры 553543 см). На дне аквариума распределили крупногалечный грунт, взятый из естественного биотопа подопытных животных. В качестве укрытий были сооружены нагромождения из крупных камней и установлены полые керамические изделия. На протяжении всего эксперимента вода в аквариуме обогащалась кислородом посредством аэрирующего фильтра. С целью максимального приближения условий эксперимента к естественным, помещение, где был установлен аквариум, также не отапливалось. Перед каждым экспериментом только что пойманных рыб выдерживали в покое в течение недели. Примерно через два-три дня рыбы начинали принимать корм. Кормили рыб один раз в день по 5 грамм мороженого мотыля.

Первый этап эксперимента был проведен в июне 2012 года с целью исследования начальных этапов процесса инкапсуляции скребней, поэтому все подопытные рыбы были вскрыты через трое суток после начала эксперимента.

Опытную группу рыб составили 12 толстощеков длиной от 8,2 до 11,8 см.

Температура воздуха в помещении с аквариумом колебалась в пределах от 12 до 18 С. Заражение подопытных рыб проводили инкапсулированными скребнями, извлеченными из других естественных паратенических хозяев (бельдюги, толстощека Миддендорфа), выловленных в районе мыса Нюкля, в котором была отмечена высокая зараженность рыб этим скребнем (Карта 2). Рыбу заражали пероральным способом. Для привлечения внимания рыб в аквариуме и облегчения процесса заражения инкапсулированных скребней бросали в воду с кусочками прилежащих органов. Всего было скормлено 32 скребня. Поскольку одна из рыб в качестве постоянного убежища использовала участок на поверхности фильтра, мы точно знаем, что во время заражения она проглотила скребней. Остальные 22 скребня были скормлены оставшимся рыбам. Вскрытие экспериментальных рыб провели спустя 3 суток после заражения.

Второй этап эксперимента был проведен в сентябре-ноябре того же года с целью изучения более поздних этапов процесса инкапсуляции скребней. Опытная группа рыб насчитывала 11 особей длиной от 6,3 до 18,2 см. Условия содержания подопытных рыб и способ их заражения были аналогичны отработанным в течение первого этапа эксперимента. В помещении, где располагался аквариум, температура воздуха в начале эксперимента достигала 12 С, затем постепенно снижалась и к концу эксперимента составила – 3 °С. Поскольку рыбы предпочитали держаться в определенных участках аквариума, это позволило нам провести индивидуальное заражение каждой из них. Каждому толстощеку было скормлено от 5 до 11 скребней. Вскрытие проводили через 14 (две особи), 30 (две особи) и 50 (семь особей) суток после заражения.

2.4.2. Эксперимент по заражению хромиса-красавца В эксперименте использовано 11 аквариумных рыб – хромисов-красавцев Hemichromis bimaculatus, приобретенных в специализированном зоомагазине.

Рыбок содержали в аэрируемом аквариуме объемом 80 л (размеры 553543 см) с отстоянной водопроводной водой. Подогрев воды в аквариуме держался на уровне 25-26 °С. Кормили один раз в сутки по 4-5 грамм сухого корма (гаммарусы) или мороженного мотыля. Непосредственно перед началом эксперимента рыб держали в состоянии покоя в течение 7 суток.

Для заражения использовали кориносом, извлеченных из естественных паратенических хозяев – толстощека Миддендорфа Hadropareia middendorffii и тихоокеанской зубастой корюшки Osmerus mordax dentex, отловленных в окрестностях г. Магадана. Каждой рыбе скармливали от 5 до 15 скребней. Всего было скормлено 147 скребней. Вскрытия осуществляли через 3, 10, 12, 19 и суток после заражения. Перед вскрытием рыб измеряли от вершины рыла до конца лучей хвостового плавника (TL).

2.4.3. Эксперимент по заражению прыткой ящерицы В эксперименте использовано 24 особи прыткой ящерицы Lacerta agilis.

Животных отлавливали в пригороде г. Киева (Украина) в апреле-мае 2009 и гг. и содержали в отдельных террариумах при температуре 20-25 С. В качестве грунта использовали песок, покрывающий дно террариума слоем 5-7 см.

Обогреватель располагался в верхней части террариума. В одном из углов террариума было сделано укрытие из камней и коряг, а в другом углу была установлена неглубокая поилка. Большая коряга располагалась непосредственно под обогревателем. Обогреватель включали ежедневно на 5-6 часов. Кормление производили ежедневно личинками мучного хрущака Tenebrio molitor. Заражали ящериц в июне 2009 и 2011 гг. Длину животных измеряли от кончика морды до переднего края отверстия клоаки. В качестве инвазионного материала использовали скребней C. strumosum, извлеченных из полости тела тихоокеанской зубастой Osmerus mordax dentex и обыкновенной малоротой Hypomesus olidus корюшек, толстощека Миддендорфа Hadropareia Middendorffii, керчака Стеллера Myoxocephalus stelleri и терпуга пятнистого Hexagrammos stelleri, пойманных в Охотском море в окрестностях г. Магадана. Скребни, извлеченные из керчака, зубастой корюшки, терпуга и толстощека были окружены хорошо выраженной капсулой, легко распознаваемой невооруженным глазом. Некоторые из скребней, извлеченные из малоротой корюшки, также были заключены в тонкую капсулу, но большинство находились в свободном состоянии. При этом хоботки большинства не инкапсулированных скребней были инвагинированы и только у трех кориносом были частично эвагинированы. Скребней вместе с кусочками прилежащей ткани или с кусочками печени скармливали подопытным животным.

Всего было заражено 24 ящерицы: десяти ящерицам скормлено по 15 скребней, трем ящерицам скормлено по 20 гельминтов, шесть ящериц попарно получили по 8, 10, и 21 скребню, оставшимся пяти ящерицам было дано по 6, 12, 13, 14 и скребней. Экспериментальных животных вскрывали спустя 1.5, 2, 4, 5, 6, 10, 25, 30, 34, 90, 105 и 572 суток.

Глава 3. СВЕДЕНИЯ О ЖИЗНЕННОМ ЦИКЛЕ СКРЕБНЯ CORYNOSOMA STRUMOSUM Corynosoma strumosum Скребень является одним из наиболее распространенных в Голарктике паразитических червей (Делямуре, 1955;

Петроченко, 1958). Облигатными окончательными хозяевами являются морские млекопитающие множества видов, а также рыбоядные и хищные морские и околоводные птицы (Петроченко, 1958;

Хохлова, 1986). Обладает патогенным эффектом: известно заболевание (коринозоматоз) домашних и клеточных животных (Паразитические черви…, 2005). В качестве промежуточных хозяев зарегистрированы морские ракообразные родов Pontoporeia и Gammarus (см.

обзор: Атрашкевич, 2008). В бассейне Охотского моря отмечены другие три вида промежуточных хозяев: Eogammarus schmidti, Locustogammarus locustoides и Spinulogammarus ochotensis (Атрашкевич, 2009). Для скребня этого вида, как и для других представителей рода в целом характерен паратенический (резервуарный) паразитизм (Петроченко, 1958). Спектр паратенических хозяев чрезвычайно широк и включает множество видов морских, проходных и пресноводных рыб (Петроченко, 1958).

Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 4.1. Морфология покровов скребней Corynosoma strumosum Согласно современным представлениям, покровы скребней образованы пограничной (тегументом) и мышечной (кольцевая и продольная мускулатура) тканями и их производными. К производным пограничной ткани относятся внутренние выросты тегумента – лемниски, в число производных мышечной ткани входит базальная пластинка, подстилающая тегумент, межклеточный материал, а также центральные части хоботковых крючьев. Организация покровов исследованных скребней полностью соответствует этой схеме.

4.1.1. Световая микроскопия На полутонких срезах общая толщина тегумента метасомы скребней колеблется от 31 до 40 мкм1. При этом в задней половине тела она несколько больше и составляет 35-40 мкм, тогда как в передней половине варьирует от 31 до 39 мкм. На препаратах в тегументе скребней отчетливо выявляются три слоя:

поперечно-полосатый, войлочно-волокнистый и радиально-волокнистый (Рисунок 5А, 6А, 73, 74А). Поверхностная часть тегумента представлена плотной полоской, толщиной около 1 мкм. На внешней ее стороне одного из исследованных скребней выявляется четко выраженный толстый гликокаликс, имеющий вид рыхлого, светлоокрашенного слоя, толщиной около 2 мкм (Рисунок 71). В толщу этого гликокаликса были погружены цитоплазматические отростки макрофагов хозяина (при их наличии). Несколько менее интенсивно окрашен глубжележащий поперечно-полосатый слой, толщина которого не превышает 4 мкм. Войлочно волокнистый слой – светлый, имеет сетчатую внешность и образован волокнистыми структурами, ориентированными в разных направлениях, как параллельно поверхности тегумента, так и перпендикулярно к ней. Его толщина составляет 6-7 мкм. Радиально-волокнистый слой наиболее толстый и достигает Все измерения тегумента на светооптических препаратах выполнены в наиболее узких его участках, чтобы исключить искажения на косых срезах.

20-30 мкм в толщину. В его составе обнаружены многочисленные волокна, ориентированные перпендикулярно к поверхности тегумента, и расположенные между ними лакуны и тегументные ядра. Лакуны выглядят как обширные светлые пространства, ограниченные скоплениями волокон и тегументными ядрами (Рисунок 5А, 6А, 9А, 11А, 16А, Б, 19А, Б, 56А, Б, 57А, 58, 71, 72А, 73, 74А).

Базальная пластинка имеет толщину 0,4-1,4 мкм и окрашена менее интенсивно, чем внутренний слой тегумента. При использовании метода Маллори она приобретает интенсивный синий цвет (Рисунок 14А, Б).

Кольцевая кожная мускулатура располагается под базальной пластинкой;

на полутонких срезах имеет вид сплошного слоя, образованного плотно расположенными в один ряд элементами: мышечными клетками и их отростками (Рисунок 5А, 6А, 11А, 16А, Б, 19А, Б, 56А, 71, 72А, 73, 74А, 87А, Б). Их проксимальные и центральные части в большинстве случаев – светлые, а сократительные элементы располагаются в дистальных и латеральных участках.

Иногда при использовании окраски смесью метиленового синего и кристаллического фиолетового светлые части миобластов окрашиваются в фиолетовый цвет, а сократительные элементы – в синий (Рисунок 6А). В этом случае хорошо видно разделение сократительного пласта плотными септами на отдельные блоки (Рисунок 6А). В других случаях все элементы мускулатуры окрашиваются одинаково в синий цвет. Продольная мускулатура не образует сплошного пласта и представлена отдельными клетками и их протяженными отростками. Лакуны в продольной мускулатуре выражены значительно слабее, чем в кольцевых мышцах.

В единственном случае нам удалось получить удовлетворительные полутонкие срезы пресомы скребня (Рисунок 58). В пресоме тегумент характеризуется меньшей толщиной (не более 20 мкм), чем в метасоме скребня. В его строении слабо различимы войлочно-волокнистый и радиально-волокнистый слои. В последнем слое имеются светлые лакуны, окруженные немногочисленными волокнами, ориентированными перпендикулярно поверхности тела паразита. Также в отличие от тегумента метасомы, в этом слое отсутствуют тегументные ядра.

4.1.2. Электронная микроскопия При проведении электронно-микроскопических исследований покровов скребней основное внимание уделено поверхностным отделам тегумента.

Электронно-микроскопически на поверхности тегумента в большинстве исследованных случаев выявляется светлый слой гликокаликса. У скребней из тихоокеанской наваги его толщина составляет 0,7-0,8 мкм (Рисунок 25А, Б), из тихоокеанской зубастой корюшки толщина – 1,1-1,9 мкм (Рисунок 5Б, 9Б).

Гликокаликс образован густо расположенными переплетающимися тонкими филаментами, ориентированными более или менее перпендикулярно к поверхности скребней, и мелкими гранулами.

У скребней из толстощека Миддендорфа гликокаликс, толщина которого составляет 0,6-2,4 мкм, организован в два слоя (Рисунок 75А, Б, 83А, Б).

Внутренний слой прерывистый (0,2-0,5 мкм) и вследствие более плотной организации образующего его материала имеет несколько более высокую электронную плотность, чем наружный слой. В целом наружный слой многократно толще внутреннего, характеризуется неровными очертаниями наружной границы.

Скребни из керчака Стеллера отличаются хорошо развитым двухслойным гликокаликсом, толщина которого составляет 1,0-2,5 мкм при толщине внутреннего слоя от 0,09 до 0,2 мкм (Рисунок 47, 48, 49, 50Б). Наружная граница внутреннего слоя неровная и соответствует неровностям поверхности тегумента:

над устьями каналов поперечно-полосатого слоя этот слой сужается, а в промежутках между ними – расширяется. Во многих случаях в гликокаликс погружены, иногда достигая поверхности тегумента, отростки клеток, образующих капсулу (Рисунок 48, 49). В таких случаях толщина слоя гликокаликса может быть уменьшена, или же он теряет свою непрерывность и представлен в виде отдельных рыхлых скоплений образующего его материала.

У двух из шести исследованных скребней из камбалы гликокаликс был развит довольно хорошо, и его толщина составляла 1,7-2,4 мкм (Рисунок 52Б). На поверхности остальных скребней из камбалы гликокаликс не образует сплошного слоя, а выявляется в виде отдельных, толщиной не более 0,1 мкм, скоплений тонких фибрилл (Рисунок 52А).

Поверхность тегумента образована покровным комплексом, имеющим вид двух электронно-плотных пластинок, разделенных слоем умеренно-плотного материала (Рисунок 25А, Б, 47, 60А, Б). Общая толщина покровного комплекса относительно постоянна и составляет около 0,1 мкм.

Основными характеристиками поперечно-полосатого слоя являются относительно более плотная, чем в других участках тегумента, цитоплазма и многочисленные каналы, пересекающие его в радиальном направлении (Рисунок 25А, Б, 60А, Б, 61). Ширина каналов составляет 38-51 нм, однако их устья сужены и выглядят «закрытыми». У скребней из желтоперой камбалы терминальные участки каналов расширены в виде мелких светлых везикул диаметром 0,1-0, мкм (Рисунок 61). У тихоокеанской наваги эти везикулы имеют размер 0,04-0, мкм (Рисунок 25А). Однако у скребней из керчака Стеллера терминальные расширения каналов поперечно-полосатого слоя исключительно крупные, имеют размеры до 1,2-1,6 мкм, и часто содержат рыхлый хлопьевидный материал и (или) ламеллярные тельца (Рисунок 47). В некоторых случаях везикулярные расширения настолько многочисленны, что могут рассматриваться как самостоятельный везикулярный слой.

Войлочно-волокнистый, радиально-волокнистый и трубочковый слои, а также базальная пластинка и кожная мускулатура с применением электронной микроскопии детально не рассматривались. Тем не менее, отметим обширные скопления митохондрий в дистальной части войлочно-волокнистого слоя, наблюдаемые у всех исследованных скребней из естественно инвазированных рыб (Рисунок 25Б, 47, 49, 52А, 60А, Б, 61). Митохондрии овальной или удлиненной формы, имеют плотный матрикс и небольшое количество крист.

Среди митохондрий наблюдаются многочисленные мелкие везикулы, диаметром не более 0,2 мкм, со светлым содержимым. В радиально-волокнистом слое форма тегументных ядер звездчатая, диаметр до 12 мкм (Рисунок 53А, Б). Кариоплазма включает 1-3 плотных округлых ядрышек и мелкие скопления хроматина. Каждое ядрышко имеет диаметр до 4 мкм. Ядра окружены тонким слоем фибриллярного материала. В промежутках между волокнами радиально-волокнистого слоя встречаются округлые липидные капли диаметром до 1,6 мкм.

Трубочковый слой тегумента скребней выявляется только электронно микроскопически (Рисунок 6Б, 26А, Б). Его толщина колеблется в пределах 0,3 0,8 мкм. Он образован многочисленными инвагинатами внутренней цитоплазматической мембраны тегумента. Поблизости от инвагинатов или среди них видны мелкие везикулы, диаметром 60-100 нм, а на некотором расстоянии от них – более крупные, диаметром 0,22-0,25 мкм. В некоторых крупных везикулах имеется рыхлое и темное содержимое.

Базальная пластинка имеет умеренную электронную плотность, близкую к общей плотности трубочкового слоя (Рисунок 6Б, 26А, Б). Она состоит из плотно расположенных переплетающихся фибрилл, ориентированных параллельно поверхности тела. Из подобных же фибрилл состоит межклеточный материал, наблюдающийся между элементами кольцевой мускулатуры. Однако, в отличие от базальной пластинки, образующие его фибриллы организованы рыхло и ориентированы хаотично (Рисунок 6Б).

Кожная мускулатура скребней представлена мышечными клетками и их отростками. Мышечные отростки имеют форму многоугольников, миофиламенты располагаются по периферии мышечных отростков, центральные и базальные части которых заняты лакунами. Между миофиламентами располагаются скопления -частиц гликогена (Рисунок 6Б). На некоторых срезах видны связи базальной части тегумента с отростками мышечных клеток, образованные сгущениями межклеточного материала (Рисунок 26А, Б). В лакунах миоцитов наблюдаются светлые пузырьки и мелкие митохондрии.

4.2. Морфология капсулы, окружающей скребня Corynosoma strumosum в паратенических хозяевах разных видов В данном разделе представлены результаты исследования строения капсул, окружающих кориносом в естественных паратенических хозяевах – морских рыбах разных видов.

4.2.1. Тихоокеанская зубастая корюшка Osmerus mordax dentex Результаты вскрытия рыб и распределение найденных скребней по внутренним органам приведены в Таблице 1. Было вскрыто восемь корюшек, интенсивность инвазии которых составила от 3 до 24 скребней на одну рыбу.

Всего обнаружен 91 скребень, строение капсул исследовано у 47. Большинство скребней располагалось на брыжейке кишечника (81 экз.);

реже они обнаруживались на поверхности других органов: селезенки (4 экз.), печени ( экз.), плавательного пузыря (2 экз.) и гонад (1 экз.). Скребни имели инвагинированный хоботок, и подавляющее большинство из них были окружены капсулой, легко наблюдаемой в бинокулярную лупу (Рисунок 1А, Б). Электронно микроскопически на поверхности всех скребней наблюдался хорошо развитый слой гликокаликса. У всех свежевыделенных скребней окружающая капсула настолько плотно прилегает к телу паразита, что ее довольно трудно отделить от тегумента гельминта.

В процессе препарирования скребней для наилучшей фиксации и последующей пропитки смолами они иногда разрезались пополам, в результате чего могло происходить либо отслоение, полное или частичное, капсулы от их поверхности (Рисунок 3Б, 4А), либо расслоение капсулы, обычно вдоль ее внутреннего слоя (Рисунок 8А, Б, 9А). При этом между скребнем и стенкой капсулы или в ее толще образуется «пустое» пространство, шириной от 2,5 до мкм, содержащее светлый хлопьевидный материал, а также элементы внутреннего слоя капсулы, реже эритроциты и липидные капли.

Ниже приводятся результаты исследования капсул, окружающих найденных скребней, в соответствии с их локализацией.

Брыжейка кишечника. Из 81 скребня, обнаруженного на брыжейке кишечника, были исследованы 41. Большинство скребней были инкапсулированы полностью (37 экз.), в том числе и дегенерировавший скребень, найденный в одной из капсул. У двух гельминтов капсула была сравнительно тонкой и окружала скребня не полностью (Рисунок 15). У двух скребней капсула покрывала лишь небольшой фрагмент скребня, а на поверхности большей части паразита были видны лишь небольшие скопления клеток (Рисунок 16А, Б). Важно отметить, что и «тонкая» капсула, и «фрагментарная», равно как и «нормальная»

были найдены в одной и той же рыбе (№ 6).

Таблица Количество и локализация обнаруженных (в скобках – исследованных) скребней Corynosoma strumosum из тихоокеанской зубастой корюшки Osmerus mordax dentex Локализация и количество скребней на органах плавательный кишечника брыжейка селезенка Длина (см) гонады пузырь печень № и пол рыб Всего 1 15,3 3 (1) 3 (1) 2 16,7 5 (2) 5 (2) 3 20,2 8 (8) 2 (2) 1(1) 11 (11) 15 (11)а/с 4 20,5 1 (1) 1(1) 1 18 (13) 11 (6)б 5 20,8 11 (6) 14 (10)б/а 6 20,7 14 (10) 7 20,3 21 (2) 1 1 1 (1) 24 (3) 8 19,8 4 (1) 1 5 (1) Всего 81 (41) 4 (3) 3 (2) 2 1 (1) 91 (47) Примечания: – один из скребней окружен тонкой прерывистой капсулой;

б – капсула вокруг а одного из скребней отсутствует, а вблизи его поверхности имеется лишь небольшое скопление клеток хозяина;

с – один из скребней дегенерирован.

В целом, капсула довольно равномерно окружает всего скребня, и ее толщина варьирует в пределах от 15 до 91 мкм. В заднем и переднем полюсах скребня, где имеются депрессии, вызванные инвагинацией этих участков тела, толщина капсулы возрастает. Так, в одном случае вблизи заднего полюса скребня капсула была наиболее толстой и достигала в толщину 352 мкм, тогда как в других участках ее толщина составляла 38-80 мкм (Рисунок 7Б). Также капсула увеличивается в складках и изгибах поверхности скребня. Например, в изгибе передней половины тела одного из исследованных скребней толщина капсулы составила 120 мкм, тогда как в других участках она колебалась от 45 до 80 мкм (Рисунок 7А).

Большинство инкапсулированных скребней свободно располагается на брыжейке кишечника и связывается с ней посредством редких тонких «полосок»

соединительной ткани. На полутонких и парафиновых срезах между брыжейкой и инкапсулированным паразитом обычно видно пространство, толщиной приблизительно 15-20 мкм (Рисунок 7А, 14А, Б). Меньшая часть капсул плотно лежит на органе, и в таких случаях капсула или связана с ним посредством многочисленных соединительнотканных «полосок», или сливается с тканью брыжейки (Рисунок 3Б, 4А).

В большинстве случаев, то есть, когда капсула полностью окружает скребня, ее строение сходно. В ее составе можно выделить три слоя: внутренний, наиболее плотный, средний или промежуточный, менее плотный, и наружный, наиболее рыхлый (Рисунок 8А, Б, 10А, 11Б, 14А, Б). У некоторых гельминтов наружный слой капсулы отсутствует (Рисунок 9А, 11А).

Внутренний слой капсулы представляет собой зону некроза. Его толщина достигает 25 мкм. Он подразделяется на две части: проксимальную и дистальную (Рисунок 8А, Б, 10А, 11Б). Проксимальная часть внутреннего слоя состоит из рыхло расположенных фрагментов разрушенных клеток (Рисунок 8А, Б, 9А, Б, 10А, 11Б). В ряде случаев эта часть внутреннего слоя отсутствует, капсула вплотную прилегает к гельминту, и между ними отсутствует описанное выше «пустое» пространство (Рисунок 4Б, 7А, 14А, Б). В целом проксимальная часть внутреннего слоя капсулы характеризуется слабым восприятием красителей и, в отличие от дистальной части, имеет более светлую окраску. В ее составе определяются удлиненные фрагменты клеток, напоминающие «фибриллы», которые ориентированы параллельно поверхности паразита (Рисунок 9Б). Между ними располагаются более темные фрагменты клеток, выпадающие из дистальной части слоя (Рисунок 9А, Б, 10А, 11Б).

Дистальная часть внутреннего слоя капсулы представлена плотно расположенными разрушенными клетками (Рисунок 8А, Б, 10А, 11Б, 14А, Б). Эта часть капсулы окрашивается гистологическими красителями наиболее интенсивно и относительно равномерно окружает всего скребня, однако из-за своей незначительной толщины не во всех случаях хорошо определяется (Рисунок 9А, 11А). Наружная граница дистальной части всегда имеет относительно ровную поверхность. Границы погибших клеток не прослеживаются, однако отчетливо видны плотные удлиненные или веретеновидные ядра в окружении более светлых цитоплазматических отростков (Рисунок 10Б, В). Кроме них в составе дистальной части внутреннего слоя капсулы выявляются миелиноподобные структуры и многочисленные вакуоли, а также мелкие липидные капли, окраска которых совпадает с таковой липидных капель тегумента скребня. Во многих случаях клеточная структура дистального отдела внутреннего слоя полностью исчезает, не видны даже ядра, и отмечаются лишь несколько рядов плотных волокнистых элементов, напоминающих фрагменты дегенерировавших клеток (Рисунок 12А).

Средний (промежуточный) слой на парафиновых и полутонких срезах в отличие от внутреннего слоя окрашивается менее плотно (Рисунок 8А, Б, 9А, 10А, 11Б, 14А, Б). Он образован крупными уплощенными фибробластами с многочисленными отростками (Рисунок 12А, Б). Относительно светлая цитоплазма клеток включает многочисленные митохондрии, небольшое количество мелких цистерн гранулярной эндоплазматической сети (ГЭС), свободные рибосомы и полисомы и множество мелких везикул. Клетки связаны друг с другом многочисленными десмосомами и располагаются настолько плотно, что межклеточные пространства отсутствуют. Кроме того, клетки соединяются посредством интердигитаций (Рисунок 12Б).

По способности воспринимать гистологические красители наружный слой не отличается от среднего. Участками этот слой отделяется от среднего слоя, в результате чего образуется широкое пространство (Рисунок 10А). Основными его компонентами являются фибробласты и фиброциты, в промежутках между которыми располагаются коллагеновые волокна. Морфология фибробластов несколько различается по направлению к гельминту. Во внешнем отделе наружного слоя фибробласты – крупные с хорошо выраженными границами и длинными цитоплазматическими отростками (Рисунок 13А). Форма клеток варьирует от округлой до вытянутой. Цитоплазма включает крупные митохондрии, расширенные цистерны ГЭС, рибосомы и многочисленные филаменты, обычно организованные в виде изогнутых (серповидных) пучков.

Ядра фибробластов содержат отчетливое округлое ядрышко. Между клетками рыхло располагаются коллагеновые фибриллы, ориентированные как параллельно поверхности гельминта, так и под различными углами к ней. По методу Маллори коллаген окрашивается в темно-синий цвет (Рисунок 14А, Б). Кроме того, на продольных срезах электронно-микроскопическим методом выявляется характерная для коллагена поперечная исчерченность фибрилл. По направлению вглубь наружного слоя капсулы межклеточные пространства и размеры фибробластов визуально уменьшаются, электронная плотность последних повышается, коллагеновые фибриллы располагаются более плотно (Рисунок 13Б).

Внутренняя граница наружного слоя капсулы представлена сильно уплощенными фиброцитами и плотно организованными коллагеновыми фибриллами (Рисунок 13Б). На электронных фотографиях границы фиброцитов не видны, клетки характеризуются высоким ядерно-плазменным отношением, их ядра имеют веретеновидную форму и визуально значительно меньшие размеры, чем у фибробластов. Помимо фибробластов и фиброцитов в наружном слое капсулы иногда наблюдаются единичные эритроциты.

В одном случае в составе среднего слоя капсулы, а также на границе между ним и наружным слоем обнаруживались скопления клеток, морфологически отличающиеся от фибробластов и фиброцитов (Рисунок 11Б). Они имели неправильную форму с отростками, располагались группами от 3 до 6 клеток, иногда на некотором расстоянии друг от друга. Их ядра окрашивались более интенсивно, чем цитоплазма;

на некоторых срезах в одной клетке наблюдались два фрагмента ядра. На полутонких срезах гранулы в цитоплазме клеток не выявлялись. По всей вероятности, эти клетки являются лейкоцитами, однако какими именно, определить не удалось.

Толщина прерывистой капсулы вокруг двух исследованных скребней не превышает 25-30 мкм (Рисунок 15). В обоих случаях, та часть капсулы, которая прилежала к брыжейке, была прерывистой и состояла из отдельных фибробластов. Остальная ее часть, окружающая скребня с его противоположной стороны, была сплошной и состояла из нескольких рядов таких клеток.

Капсула, окружающая дегенерировавшего скребня, образована двумя слоями: внутренним плотным и рыхлым наружным (Рисунок 17А, Б). Внутренний слой – некротический, состоит из плотно расположенных погибших клеток. По своей структуре этот слой сходен с остатками дегенерировавшего скребня, поэтому граница между ними на свето-микроскопических препаратах определяется с трудом и относительно хорошо заметна лишь в тех участках, где тегумент скребня частично сохраняется. Наружный слой образован рыхло расположенными фибробластами и пучками коллагеновых волокон.

Селезенка. На селезенке обнаружено 4 инкапсулированных скребня, из которых исследованы 3. Все найденные скребни располагаются на поверхности селезенки и не проникают вглубь органа. Общая толщина капсул колеблется от до 85 мкм. Как и капсулы на брыжейке пищеварительного тракта, они состоят из трех слоев, образованных остатками разрушенных клеток (внутренний слой), фибробластами, фиброцитами и коллагеновыми волокнами (средний и наружный слои), однако есть некоторые отличия. В капсуле у одного скребня коллагеновые волокна располагались не только в наружном слое, но и по всей толще капсулы, которая, таким образом, была образована пучками коллагеновых волокон и лежащими между ними фибробластами и фиброцитами (Рисунок 18А). У другого скребня внутренний слой капсулы имел неровную, складчатую наружную поверхность (Рисунок 18Б).

Печень. На печени обнаружено 3 инкапсулированных скребня, исследовано 2. В обоих случаях капсула вплотную прилегает к скребню и отличается сравнительно небольшой толщиной (25-42 мкм). В ее составе можно выделить два слоя (Рисунок 19А, Б). Характерной особенностью капсулы является наличие широкой зоны некроза (внутренний слой), образующейся за счет деструкции фибробластов. Этот слой характеризуется относительно равномерной толщиной (14-17 мкм) и подразделяется на две части: проксимальную и дистальную.

Проксимальная часть внутреннего слоя состоит из светлых «фибрилл»

расположенных параллельно поверхности скребня и представляющих собой фрагменты дегенерировавших клеток. Дистальная часть внутреннего слоя имеет вид плотного гомогенного образования, в котором равномерно распределены более плотные вытянутые ядра погибших клеток. Метиленовым синим эта часть капсулы окрашивается в темный цвет по сравнению с окрашенным в светлый цвет проксимальным отделом внутреннего слоя, а также наружным слоем капсулы.

Толщина наружного слоя составляет 11-25 мкм. Он образован уплощенными фибробластами и незначительным количеством коллагеновых волокон.

Фибробласты имеют длинные отростки и включают вытянутые светлые ядра с плотным ядрышком.

Гонады. На семеннике обнаружен и исследован один инкапсулированный скребень (Рисунок 2Б). Гельминт располагался непосредственно на соединительнотканной оболочке органа, в небольшом углублении на его поверхности, с которой капсула связана тонкими «полосками» соединительной ткани (Рисунок 3А). Капсула, в отличие от вышеописанных, однослойная и состоит из плотно расположенных фибробластов и немногочисленных пучков коллагеновых волокон. То, что эти волокна являются именно коллагеновыми, доказано исследованием по методу Маллори, показавшим их окрашивание в синий цвет. В направлении от заднего к переднему концу скребня наблюдается постепенное увеличение толщины капсулы от 15 до 35 мкм. Вблизи ее наружной поверхности наблюдаются немногочисленные эритроциты.

4.2.2. Обыкновенная малоротая корюшка Hypomesus olidus Результаты вскрытия рыб и распределение найденных скребней по внутренним органам представлены в Таблице 2. Было вскрыто 5 корюшек, в которых обнаружено 17 скребней. Большинство из них (13 экз.) располагались на брыжейке кишечника, реже они обнаруживались на селезенке (2 экз.), печени ( экз.) и гонадах (1 экз.). Скребни, обнаруженные на брыжейке кишечника, имели инвагинированный хоботок и были полностью окружены капсулой. Скребни, найденные на поверхности печени, селезенке и гонад, располагались свободно, капсула отсутствовала, а хоботки были инвагинированы.

Таблица Количество и локализация обнаруженных (в скобках исследованных) скребней Corynosoma strumosum из обыкновенной малоротой корюшки Hypomesus olidus Локализация и количество скребней на органах Длина кишечника брыжейка селезенка № (см) гонады печень и пол рыб Всего 1 18,7 2 (1) 2 (2) 4 (3) 2 19,0 2 1 (1) 3 (1) 3 19,3 4 (4) 4 (4) 4 19,8 1 (1) 1 (1) 5 21,9 4 (2) 1 5 (2) Всего 13 (8) 2 (2) 1 1 (1) 17 (11) Брыжейка кишечника. На брыжейке кишечника найдено 13 скребней, из которых исследовано 8. Все исследованные гельминты были окружены плотно облегающей сплошной капсулой (Рисунок 21А, Б). В некоторых случаях между скребнем и капсулой имелось незначительное «пустое» пространство, образованное в результате отслоения капсулы от поверхности гельминта в процессе подготовки последнего к изучению (Рисунок 20А, Б). Толщина капсулы колеблется в широких пределах от 5 до 30 мкм, в складках скребня толщина капсулы увеличивается в несколько раз. В ее составе четко выделяются два слоя:

внутренний и наружный (Рисунок 20А, Б, 21А, Б).

Внутренний слой представлен неоднородным слоем дегенерировавших клеток. Отдельные разрушенные клетки иногда также наблюдаются в наружном слое вблизи его внутренней границы. Внутренний слой четко определяется благодаря высокой интенсивности окрашивания. Наружная граница слоя неровная, извилистая. В отличие от внутреннего слоя наружному слою характерна более светлая окраска. Свето-микроскопически в его составе выявляется несколько рядов однотипных клеток. Это клетки имеют вытянутое светлое ядро, содержащее плотное ядрышко. Морфологически они напоминают описанные выше фибробласты из капсулы, окружающей скребней в тихоокеанской зубастой корюшке.

На селезенке обнаружено и изучено два скребня.

Селезенка.

Непосредственный осмотр в бинокулярную лупу, а также свето микроскопическое изучение показали, что скребни полностью лишены капсулы (Рисунок 22А). Вблизи поверхности скребней отсутствуют даже единичные клеточные элементы.

Печень. На печени найден и исследован один скребень (Рисунок 22Б, В, Г).

Наблюдение в бинокулярную лупу показало, что капсула вокруг скребня отсутствует. Светооптическим методом у поверхности гельминта обнаружены редкие группы из 3-5 клеток (Рисунок 22Б, Г). Некоторые из этих клеток являются эритроцитами. Принадлежность остальных клеток к какому-либо определенному типу установить не удалось.

4.2.3. Тихоокеанская навага Eleginus gracilis Материал для изучения взят от шести рыб, интенсивность инвазии которых составила от 2 до 13 скребней. Всего найдено 39 кориносом, из которых исследовано 20. Все обнаруженные скребни были окружены капсулой.

Результаты вскрытия рыб и распределение найденных скребней по внутренним органам представлены в Таблице 3.

Брыжейка кишечника. На брыжейке кишечника найдено 35 скребней, из которых исследовано 18 (Рисунок 2А). В большинстве случаев инкапсулированные скребни относительно свободно располагались на брыжейке кишечника, связываясь с органом лишь с помощью немногочисленных тонких соединительнотканных прослоек. В одном случае капсула была плотно связана с тканью брыжейки кишечника, при этом на границе контакта капсулы с органом видны уплотненные участки волокнистого материала (Рисунок 23А).

В большинстве случаев капсула плотно прилегает к поверхности скребня (Рисунок 23А, 29А) или же между ними имеется узкая полость, толщиной не более 3-9 мкм (Рисунок 23Б). Иногда в результате препарирования капсула отслаивается от поверхности скребня, при этом пространство между ними увеличивается и может достигать 20 мкм (Рисунок 24А, 29Б).

Поверхность скребней покрыта неоднородным слоем гликокаликса, толщиной до 0,8 мкм (Рисунок 25А, Б). Он образован преимущественно гранулярным, а также тонкофибриллярным материалом, сгущающимся в дистальной части слоя. При большем увеличении заметно, что этот материал также образует нечетко выраженные радиальные сгущения. Наружная поверхность слоя гликокаликса относительно ровная, и к ней вплотную примыкают остатки дегенерировавших клеток хозяина.

Толщина капсулы у исследованных скребней варьирует в пределах от 30 до 172 мкм. В ее составе выявляются два четких слоя: внутренний и наружный (Рисунок 23А, Б, 24А, Б, 29А). В целом, клеточные элементы, входящие в состав капсулы, располагаются плотно и с минимальными межклеточными пространствами, лишь во внешней части наружного слоя их расположение может быть менее плотным, а межклеточные пространства, соответственно, увеличены.

Толщина внутреннего слоя достигает 7-11 мкм, причем в некоторых капсулах отмечается обратная закономерность: чем меньше общая толщина капсулы, тем толще внутренний слой (Рисунок 24А), и в случаях, когда толщина капсулы достигает максимальных значений, этот слой определяется с трудом (Рисунок 23Б). На свето-микроскопических препаратах внутренний слой капсулы имеет темную окраску (Рисунок 23А, 24А, Б, 29А). Иногда в его составе видны крупные липидные капли диаметром до 16 мкм. На ультратонких срезах видно, что он состоит из электронно-плотных некротизированных клеток. Внешняя и внутренняя границы слоя относительно ровные.

Таблица Количество и локализация обнаруженных (в скобках – исследованных) скребней Corynosoma strumosum из тихоокеанской наваги Eleginus gracilis Локализация и количество скребней на органах Длина кишечника брыжейка cелезенка желчный № (см) пузырь печень и пол рыб Всего 1 12,0 2 (2) 2 (2) 2 17,9 2 (2) 2 (2) 3 26,0 11 (2) 11 (2) 4 26,7 12 (4) 1 13 (4) 5 21,5 6 (6) 6 (6) 6 25,0 2 (2) 1 (1) 2 (1) 5 (4) Всего 35 (18) 1 (1) 1 2 (1) 39 (20) В составе наружного слоя (23-161 мкм) преобладают фибробласты, фиброциты и скопления коллагеновых волокон, располагающиеся в межклеточных пространствах. Значительно реже в капсулах встречаются гранулоциты, макрофаги и пигментные клетки. Фибробласты имеют крупные размеры 8,11-13,46,3-10,4 мкм и характеризуются овальной формой и относительно небольшим ядерно-плазменным отношением (Рисунок 24А, Б, 27А, Б). Их крупные светлые ядра расположены центрально, имеют округлую или овальную форму;

гетерохроматин в виде различных по размеру скоплений преимущественно распределен по периферическим участкам кариоплазмы. В цитоплазме имеются хорошо развитая в виде канальцев и мелких цистерн гранулярная эндоплазматическая сеть, округлые или овальные митохондрии с хорошо выраженными кристами и умеренно-плотным матриксом и множество окруженных мембраной пузырьков. Характерной особенностью клеток является наличие хаотично организованных пучков филаментов, чаще концентрирующихся вблизи ядра (Рисунок 27А, Б). Боковые поверхности фибробластов соединены посредством многочисленных десмосом.

Между фибробластами в межклеточных пространствах расположены коллагеновые волокна, более многочисленные во внешней части наружного слоя.

В этом же участке капсулы помимо фибробластов и коллагеновых волокон обнаружены фиброциты, которые характеризуются уплощенной формой с минимальным количеством отростков, относительно крупным ядром, занимающим почти все тело клетки, и скудным набором органелл (Рисунок 24Б, 28А, Б). Обычно фиброциты окружены широкими тяжами из плотно расположенных фибрилл коллагена. Коллагеновые волокна имеют типичную поперечную исчерченность. По методу Маллори они окрашиваются в темно синий цвет (Рисунок 29Б).

Гранулоциты и макрофаги в капсулах немногочисленны, но их можно встретить по всей толще наружного слоя капсулы. Диаметр гранулоцитов составляет приблизительно 7 мкм, форма округлая, с короткими отростками. Ядра клеток округлые. Для цитоплазмы характерно наличие плотных гранул, диаметром до 0,8 мкм (в среднем 0,4 мкм), а также зон Гольджи и крупных митохондрий с расширенными кристами. Периферические участки цитоплазмы во многих случаях выглядят просветленными.

Макрофаги выявлены только свето-микроскопическим методом (Рисунок 29А). Их размеры клеток составляют 8,6-11,04,5-6,8 мкм. Они легко идентифицируются по многочисленным фагосомам в цитоплазме, которые достигают крупных размеров, сравнимых с размерами ядер, и на полутонких срезах окрашиваются в темно-синий цвет. Крупные ядра располагаются эксцентрично и характеризуются светлой кариоплазмой с мелкими (при свето микроскопических исследованиях) скоплениями хроматина.

В одной капсуле, найденной на брыжейке кишечника, в наружном слое отмечено скопление пигментных клеток в окружении нескольких макрофагов (Рисунок 29А). На одном срезе насчитывается до 20-30 клеток, размерами 8,7 14,36,1-8,2 мкм. Пигментоциты имеют округло-овальную форму, их цитоплазма заполнена плотно расположенными пигментными гранулами. На полутонких срезах, окрашенных смесью метиленового синего и кристаллического фиолетового, гранулы принимают темно-коричневую окраску.

Светлоокрашенные ядра этих клеток расположены центрально.

Селезенка. На селезенке найден и исследован один скребень, который был полностью окружен двухслойной капсулой, толщиной от 17 до 70 мкм (Рисунок 30А, Б, 31А). Оба слоя образованы преимущественно волокнистыми элементами, организованными более или менее рыхло и ориентированными параллельно поверхности паразита, с включением немногочисленных предполагаемых фибробластов, и различаются интенсивностью окрашивания. Внутренний слой окрашивается интенсивнее наружного, а элементы последнего организованы более рыхло. Характерной особенностью описываемой капсулы являются обширные скопления элементов внутреннего слоя, наблюдаемые в некоторых ее участках, за счет которых толщина капсулы существенно увеличивается (Рисунок 30А). Утолщения внутреннего слоя капсулы особенно часто встречаются в складках тегумента скребня.

В соединительной ткани, прилегающей к капсуле в изгибах скребня, выявляются относительно крупные кровеносные сосуды, заполненные эритроцитами (Рисунок 30А, Б). Эритроциты в просвете сосудов имеют угловатую форму, их цитоплазма окрашивается интенсивно и гомогенно.

Желчный пузырь. Исследован один инкапсулированный скребень из двух обнаруженных на поверхности желчного пузыря. Морфологически капсула сходна с таковой, описанной у скребня на поверхности селезенки (Рисунок 31Б).

Она также состоит из двух слоев волокнистых элементов с включением редких фибробластов и имеет толщину 24-50 мкм. Наружный слой – светлоокрашенный, состоит из тонких, идущих параллельно друг другу, волокон, разделенных более или менее выраженными межклеточными пространствами. В пространствах между волокнами наблюдаются единичные фибробласты. Во внутреннем слое капсулы волокна организованы более плотно, из-за чего он приобретает более темную окраску. В складках тела скребня его толщина достигает значительной величины, в других же участках он тонкий и иногда даже может отсутствовать.

Во внутреннем слое капсулы среди волокон иногда видны структуры, напоминающие ядра клеток.

4.2.4. Пятнистый терпуг Hexagrammos stelleri В шести вскрытых рыбах было найдено 18 скребней, из которых исследовано 14. Все скребни располагались на брыжейке кишечника. Результаты вскрытия рыб представлены в Таблице 4.

Инкапсулированные скребни либо тесно Брыжейка кишечника.

контактируют с тканью брыжейки кишечника, либо располагаются относительно свободно, связываясь с ней посредством немногочисленных «полосок»

соединительной ткани. У одного скребня, плотно прилегающего к брыжейке, наблюдалось включение в толщу наружного слоя капсулы небольших скоплений клеток поджелудочной железы (Рисунок 32).

Все исследованные скребни были окружены сплошной трехслойной капсулой (Рисунок 33А, Б). Ее минимальная толщина составляет 30 мкм, максимальная – 83 мкм. Капсула вплотную прилегает к телу гельминта, однако в результате подготовки образцов к исследованию у некоторых скребней она отодвигается от его поверхности, и между ними образуется «пустое»

пространство, являющееся, по сути, артефактом (Рисунок 32, 33Б).

Таблица Количество обнаруженных (в скобках – исследованных) скребней Corynosoma strumosum на брыжейке кишечника пятнистого терпуга Hexagrammos stelleri № Длина (см) и пол рыб Количество скребней на органе 1 25,0 2 (2) 2 24,0 9 (6) 3 24,0 1 (1) 4 18,0 1 (1) 5 21,0 3 (2) 6 18,8 2 (2) Всего 18 (14) Толщина внутреннего слоя варьирует от 6 до 16 мкм и в каждой капсуле на бльшем ее протяжении относительно постоянна, однако она заметно возрастает в складках скребня. Кроме того, в определенной степени она обратно пропорциональна общей толщине капсулы и в тонких капсулах она достигает максимальных значений (Рисунок 33А), тогда как в толстых капсулах она минимальна (Рисунок 32, 33Б). Этот слой состоит из некротизированных клеток и от других слоев отличается на полутонких срезах более интенсивной окраской (Рисунок 32, 33А, Б).

В составе среднего слоя капсулы выявляются удлиненные фибробласты, с многочисленными отростками, размерами 10,2-11,64,6-7,7 мкм (Рисунок 34А, Б).

Ядра фибробластов овальные, светлая кариоплазма включает единичные скопления хроматина и относительно крупное, эксцентрично расположенное, ядрышко. В цитоплазме имеются митохондрии разнообразной, часто гантелевидной, формы, рибосомы, а также небольшие, по размерам близкие к митохондриям, тельца в количестве от 2 до 5, неправильной формы с электронно плотным содержимым. Особенностью клеток является наличие пучков филаментов, сходных с описанными в фибробластах капсулы из наваги, которые формируют концентрические сгущения вокруг ядра и между органоидами (Рисунок 34А, Б). Фибробласты связаны друг с другом многочисленными десмосомами.

В составе наружного слоя помимо фибробластов обнаружены эозинофилы и макрофаги, а также немногочисленные и небольшие пучки коллагеновых фибрилл. Фибробласты наружного слоя отличаются от фибробластов среднего слоя бльшими размерами (14,2-18,22,0-3,0 мкм), уплощенной формой и особенностями организации цитоплазмы (Рисунок 35А, Б). Наиболее яркой особенностью является хорошо развитая эндоплазматическая сеть, в виде системы длинных разветвленных канальцев, обычно ориентированных вдоль наибольшей оси клетки. Кроме того, в цитоплазме фибробластов наружного слоя капсулы не обнаружены пучки филаментов, отмеченные в фибробластах среднего слоя.

Коллагеновые фибриллы, немногочисленные пучки которых обнаруживаются вокруг фибробластов, имеют толщину примерно 30-40 нм.

Макрофаги и эозинофилы в умеренном количестве наблюдались только в наружном слое капсулы;

встречались как поодиночке, так и в виде небольших скоплений (Рисунок 36). Их размеры 10,7-11,04,6-5,0 мкм, форма неправильная, иногда несколько удлиненная или полигональная. Ядра эксцентричные, округлые, со светлой кариоплазмой и небольшими скоплениями гетерохроматина.

Цитоплазма отличается богатым и разнообразным набором органелл: хорошо развитым комплексом Гольджи, многочисленными, разнообразными по форме митохондриями с плотным матриксом, мелкими цистернами и короткими канальцами гранулярной эндоплазматической сети, часто располагающимися в виде своеобразных «цепочек». Многочисленные лизосомоподобные плотные гранулы рассеяны по всей цитоплазме и образуют скопления вблизи зон Гольджи.

Также в цитоплазме видны фагосомы и остаточные тельца.

Эозинофилы, диаметром 7-8 мкм, имеют характерную округлую форму с небольшим количеством коротких цитоплазматических отростков (Рисунок 33Б, 37). Ядра располагаются в центральной части клеток, характеризуются почти сплошным «пояском» из гетерохроматина, подстилающим ядерную оболочку.

Кариоплазма светлая, содержит четко очерченное ядрышко и несколько крупных скоплений гетерохроматина. Цитоплазма гранулоцитов значительно плотнее кариоплазмы и четко подразделяется на эндоплазму и обедненную органеллами и включениями эктоплазму. Эндоплазма плотнее эктоплазмы и содержит множество мелких овальных митохондрий, хорошо развитую в виде системы мелких цистерн и коротких канальцев гранулярной эндоплазматической сети, свободные рибосомы, липидные капли. Характерной особенностью гранулоцитов являются крупные миндалевидные гранулы с гомогенным, электронно-плотным содержимым, размерами 0,7-1,00,4-0,5 мкм. Азур II-эозином эти гранулы окрашиваются в интенсивный красный цвет, что свидетельствует о принадлежности этих клеток к эозинофилам.

4.2.5. Керчак Стеллера Myoxocephalus stelleri Объектом исследования послужили восемь рыб, интенсивность инвазии которых варьировала от 1 до 11 скребней. Из 45 обнаруженных скребней экземпляра располагались на брыжейке кишечника и 3 – на селезенке. Результаты вскрытия рыб представлены в Таблице 5.

Брыжейка кишечника. Из 42 обнаруженных скребней было исследовано 23. За исключением одного все исследованные скребни были покрыты трехслойной капсулой (Рисунок 38А), толщиной 24-92 мкм. В одном случае капсула тесно контактирует с брыжейкой кишечника, связываясь с ней многочисленными тонкими «полосками» соединительной ткани. В остальных случаях капсулы скребней свободно лежат на органе и соединяются с ним посредством немногих соединительнотканных тяжей. Обычно капсула плотно прилегает к наружной поверхности скребня, но иногда между ними видно пустое пространство (Рисунок 38А), образующееся в результате подготовки гельминтов к исследованию.

Таблица Количество и локализация обнаруженных (в скобках – исследованных) скребней Corynosoma strumosum из керчака Стеллера Myoxocephalus stelleri Локализация и количество скребней на органах Длина (см) № и пол рыб брыжейка кишечника селезенка Всего 1 11,7 7 (6) 1 8 (6) 2 15,7 3 (1) 3 (1) 3 16,0 7 (2) 7 (2) 4 12,5 3 (1) 3 (1) 5 13,5 7 (4) 7 (4) 6 16,6 10 (6) 1 (1) 11 (7) 7 13,2 1 (1) 1 (1) 8 16,0 4 (2) 1 5 (2) Всего 42 (23) 3 (1) 45 (24) Стенка капсулы состоит из внутреннего, электронно-плотного, более светлого среднего и рыхлого наружного слоев. Толщина внутреннего слоя – 7- мкм. Его содержимое выглядит как гомогенная бесструктурная масса и состоит из остатков деструктурированных клеток (Рисунок 38А).

Толщина среднего слоя колеблется от 7 до 22 мкм. Слой образован плотно расположенными фибробластами, с минимальными межклеточными пространствами (Рисунок 38А). Форма клеток уплощенная (Рисунок 39, 40), их ширина составляет 1,6-2,2 мкм, длина – 11,3-24,8 мкм. Ядра имеют вытянутую форму, содержат незначительное количество гетерохроматина, занимающего в основном пристеночное «положение». В цитоплазме наблюдается хорошо выраженный комплекс Гольджи и умеренное количество удлиненных митохондрий. Друг с другом фибробласты связаны многочисленными десмосомами (Рисунок 39, 40). Особенностью клеток является то, что у внутренней поверхности плазматической мембраны сосредоточены множественные пиноцитозные пузырьки (Рисунок 39). Коллагеновые волокна в этом слое не видны.


Наружный слой капсулы (10-53 мкм) занимает основной объем капсулы и образован округлыми или несколько удлиненными клетками нескольких типов со значительными межклеточными пространствами (Рисунок 38А). Клеточный состав наружного слоя представлен фибробластами, макрофагами, гранулоцитами и лимфоцитами (Рисунок 38А). Фибробласты этого отдела капсулы отличаются от описанных в среднем слое заметно бльшим ядерно-плазменным отношением и наличием более четко выраженного ядрышка, а в их цитоплазме найдены крупные митохондрии и канальцы гранулярной эндоплазматической сети (Рисунок 41). В межклеточных пространствах фибробластов располагаются коллагеновые волокна, ориентированные в разных направлениях параллельно поверхности гельминта (Рисунок 40, 41). На продольных срезах выделяется характерная поперечная исчерченность волокон. Диаметр отдельной коллагеновой фибриллы составляет приблизительно 40-60 нм (Рисунок 40).

Макрофаги, размерами 8,0-10,73,6-4,5 мкм, характеризуются неправильно овальной формой с немногочисленными короткими псевдоподиями (Рисунок 42).

Округлое ядро с относительно светлой кариоплазмой, эксцентрично расположенным ядрышком и значительным количеством гетерохроматина, большая часть которого занимает пристеночное положение, располагается на периферии клетки. Цитоплазма несколько светлее кариоплазмы, включает канальцы гранулярной эндоплазматической сети, зоны Гольджи, окруженные мелкими везикулами, округлые или сильно вытянутые митохондрии с более темным, чем цитоплазма, матриксом, многочисленные рибосомы и полисомы, а также многочисленные лизосомоподобные гранулы и фагосомы.

Среди гранулоцитов выявлено два типа: нейтрофилы и эозинофилы.

Нейтрофилы (5,7-8,43,3-5,4 мкм) обычно округлой формы с немногочисленными короткими и широкими отростками, но в скоплениях их форма может меняться.

Иногда наблюдаются своеобразные «цепочки» из нескольких нейтрофилов, связанных друг с другом латеральными участками цитоплазматической мембраны;

в этих случаях клетки принимают кубическую форму (Рисунок 43).

Форма ядер варьирует от округлой до подковообразной. В некоторых случаях ядра типично сегментированы (Рисунок 44). Все ядра характеризуются кариоплазмой средней электронной плотности, большим количеством гетерохроматина, большая часть которого располагается вдоль оболочки ядра, и отчетливым ядрышком. Цитоплазма подразделяется на эндо- и эктоплазму, последняя несколько светлее эндоплазмы и, как правило, отделена от нее одиночными длинными канальцами гранулярной эндоплазматической сети (Рисунок 43, 44). Такие же канальцы располагаются вокруг ядра. Кроме того, пул органоидов представлен довольно многочисленными овальными или грушевидными митохондриями различного размера с плотным матриксом, а также зонами Гольджи, окруженными скоплениями мелких везикул.

Относительно некрупные (0,4-0,70,1-0,2 мкм) гранулы имеют овальную, удлиненную или гантелевидную форму и образованы электронно-плотным содержимым с менее плотной центральной частью. Эктоплазма не содержит органоидов, но включает мелкие везикулы и скопления мелко гранулярного материала, которые также отмечаются в цитоплазматических отростках. Клетки связаны друг с другом контактами, напоминающими плотные соединения (Рисунок 43).

Эозинофилы отличаются от нейтрофилов несколько бльшими размерами (5,9-10,74,3-4,5 мкм), иными соотношением и организацией органелл и морфологией гранул (Рисунок 45). Последние на срезах характеризуются ромбовидной, миндалевидной, овальной или округлой формой. Длина гранул составляет 0,6-1,5 мкм, ширина – 0,2-0,7 мкм. Обычно гранулы заполнены гомогенным электронно-плотным содержимым, в некоторых случаях между содержимым и окружающей мембраной виден узкий просвет. Некоторые клетки характеризуются радиальным расположением гранул. Как и нейтрофилы, предполагаемые эозинофилы разделены на эктоплазму, образующую короткие и широкие псевдоподии, и эндоплазму (Рисунок 45). Ядра неправильной формы, располагаются эксцентрично. Кариоплазма несколько светлее умеренно-плотной цитоплазмы и содержит крупные скопления гетерохроматина, вдоль ядерной оболочки гетерохроматин располагается в виде почти сплошного «пояска».

Митохондрии немногочисленные, мелкие, овальные, плотность матрикса примерно равно плотности цитоплазмы. Короткие канальцы ГЭС многочисленны и распределены по всей цитоплазме. Гематоксилин-эозином и азур II-эозином гранулы эозинофилов окрашиваются в красный цвет.

Лимфоциты (диаметр 3-4 мкм) отличаются типично высоким ядерно плазменным отношением. Их сферические ядра содержат крупные глыбки гетерохроматина. Цитоплазма имеет вид тонкого ободка вокруг ядра, включает отдельные митохондрии, рибосомы.

В наружном слое капсулы иногда наблюдаются капилляры (Рисунок 38А).

Люминальная поверхность капилляров неровная в результате образования эндотелиальными клетками коротких отростков. Цитоплазма эндотелиальных клеток содержит небольшое количество органелл, включая комплекс Гольджи, митохондрии, свободные рибосомы и отдельные цистерны гранулярной эндоплазматической сети. Их ядросодержащие части характерно выпячиваются в просвет капилляра. На обеих поверхностях эндотелиальных клеток имеются многочисленные пиноцитозные пузырьки.

В одном случае вокруг скребня наблюдалась однослойная капсула неравномерной толщины (Рисунок 38Б, 46). На продольном срезе через заднюю половину скребня толщина капсулы на дорсальной поверхности составила мкм, на вентральной поверхности она была существенно меньшей и не превысила 26 мкм.

На поверхности скребня, окруженного однослойной капсулой, обнаружен хорошо развитый двухслойный гликокаликс, толщиной от 1,0 до 2,5 мкм (Рисунок 47, 48, 49, 50Б). Гликокаликс образован рыхло организованным мелкогранулярным, филаментным и хлопьевидным материалом, плотность расположения которого уменьшается в дистальном направлении. Внутренний слой гликокаликса несколько плотнее остальной его части и имеет очень неровную поверхность, повторяющую контур поверхности тегумента;

его толщина не превышает 0,2 мкм. Примечательно, что терминальные расширения каналов поперечно-полосатого слоя тегумента скребня, образующие везикулярный слой, исключительно крупные, часто достигают в диаметре 1,0-1, мкм и имеют неправильную, часто угловатую, форму (Рисунок 47). Среди них, а также в подлежащем войлочно-волокнистом слое наблюдаются массивные скопления митохондрий, большинство из которых имеют округлую или овальную форму, но некоторые удлинены в виде серпа.

Среди клеток однослойной капсулы обнаружены макрофаги, гранулоциты, лимфоциты и эритроциты. Клетки расположены рыхло и с довольно значительными межклеточными пространствами между ними. Отдельные клетки, обращенные к паразиту, характеризуются признаками начавшейся деструкции (Рисунок 49).

На Рисунках 48 и 49 представлен феномен, часто наблюдаемый в описываемом случае. Макрофаги и гранулоциты (преимущественно, нейтрофилы), находящиеся вблизи поверхности скребня, образуют многочисленные, часто терминально расширенные пальцевидные отростки (псевдоподии), направленные к паразиту. Мембрана на апикальных концах псевдоподий, а также, часто, на их латеральных участках, более плотная.

Псевдоподии внедряются в слой гликокаликса и нередко достигают наружной мембраны тегумента скребня, вступая с ней в контакт. При этом организация гликокаликса становится более рыхлой, гетерогенной, его толщина уменьшается и в ряде случаев он исчезает совсем (Рисунок 49).

Макрофаги в целом по своей морфологии сходны с описанными выше (Рисунок 48). Ядра имеют округлую форму, одно-два ядрышка и мелкие, но многочисленные скопления гетерохроматина. Хорошо развиты гранулярная эндоплазматическая сеть в виде множества канальцев, которые иногда располагаются параллельными рядами, а также комплекс Гольджи, в зоне которого наблюдаются скопления мелких везикул. Митохондрии немногочисленны, но имеется большое количество свободных рибосом и полисом. Кроме того, цитоплазма включает множество плотных лизосомоподобных гранул и светлых вакуолей, а также некрупных фагосом;

иногда встречаются липидные капли.

Нейтрофилы (Рисунок 49) и эозинофилы морфологически не отличаются от описанных из трехслойной капсулы. На электронных фотографиях контакты между близко расположенными макрофагами, нейтрофилами и эозинофилами напоминают плотные соединения (Рисунок 48, 49). Клетки также связаны между собой посредством многочисленных интердигитаций.

Ни на полутонких, ни на ультратонких срезах нам не удалось обнаружить фибробласты. В межклеточных пространствах соседних клеток иногда наблюдается рыхлый волокнистый материал, состоящий из отдельных тонких фибрилл, но без характерной для коллагена поперечной исчерченности (Рисунок 50). В некоторых участках между клетками эти фибриллы образуют плотные сгущения.

Селезенка. На поверхности селезенки было обнаружено три скребня, из которых один был исследован. Скребень был заключен в трехслойную, плотно облегающую, тонкую капсулу, толщиной 24-32 мкм (Рисунок 51). Ее строение принципиально не отличается от такового трехслойной капсулы на брыжейке кишечника, однако визуально в составе наружного ее слоя отмечается меньшее количество макрофагов и лейкоцитов.


4.2.6. Желтоперая камбала Limanda aspera Материал для исследования взят от пяти рыб, интенсивность инвазии которых составила от 4 до 24 скребней. Всего было обнаружено 62 скребня, из них 4 локализовались в стенке кишечника, а остальные на внутренних органах: на брыжейке кишечника (50 экз.), селезенке (1 экз.) и печени (7 экз.). Все скребни, обнаруженные на внутренних органах, были инкапсулированы. Всего было исследовано 27 гельминтов (Таблица 6). Электронно-микроскопическим методом на поверхности тела скребней обнаружен слой гликокаликса, толщина которого колеблется в широких пределах от 0,1 до 2,4 мкм (Рисунок 52А, Б). На полутонких срезах, окрашенных смесью кристаллического фиолетового и метиленового синего, он имел вид рыхлого и светлого слоя, интенсивность окраски которого уменьшалась в дистальном направлении (Рисунок 71). На электронно-микроскопических препаратах слой имел волнистую наружную поверхность и был образован густо организованными тонкими филаментами и мелко гранулярным материалом (Рисунок 52Б).

Стенка кишечника. Из найденных в стенке передней половины кишечника камбалы четырех скребней исследован один. Этот скребень находился в процессе миграции сквозь стенку кишечника рыбы, в мышечном слое которого и был обнаружен в момент вскрытия (Рисунок 54). Вокруг скребня наблюдалась узкая зона из деформированных сжатием миоцитов, но какие-либо клетки воспалительного ряда отмечены не были. Исследование этого участка с применением электронной микроскопии показало, что к поверхности скребня прилежит зона, приблизительно 4-5 мкм толщиной, образованная удлиненными плотно упакованными мышечными клетками, находящимися в состоянии некроза (Рисунок 55А, Б). Миоциты, расположенные в два-три слоя за пределами этой зоны, отличаются светлой цитоплазмой и округлой формой ядер (Рисунок 55Б).

Таблица Количество и локализация обнаруженных (в скобках – исследованных) скребней Corynosoma strumosum из желтоперой камбалы Limanda aspera Количество (экз.) и местоположение скребней кишечника кишечника брыжейка Длина (см) селезенка № печень стенка и пол рыб Всего 1 38,0 18 (1) 3 (1) 3 (1) 24 (3) 2 36,0 3 (3) 1 (1) 4 (4) 3 40,0 9 (9) 2 (1) 11 (10) 4 37,5 11 (6) 1 (1) 12 (7) 5 34,5 9 (2) 1 (1) 1 11 (3) Всего 50 (21) 7 (4) 1 (1) 4 (1) 62 (27) Брыжейка кишечника. Одни паразиты располагались на брыжейке относительно свободно, другие были прочно связаны с ней за счет ее разрастаний.

Из 21 исследованного скребня 17 были заключены в однослойную капсулу, а 4 – в двухслойную.

Толщина однослойных капсул колеблется от 30 до 85 мкм, а в складках тела скребня достигает 100 мкм (Рисунок 56А, Б). Как правило, капсула плотно облегает поверхность скребней, однако иногда между ними видно светлое «пустое» пространство. Стенка капсулы сформирована преимущественно фибробластами, коллагеновыми волокнами, макрофагами и моноцитами.

Значительно реже в ее составе встречаются гранулоциты, лимфоциты и эритроциты;

в наружной, еще реже во внутренней, части капсулы иногда наблюдаются кровеносные сосуды. В межклеточных пространствах могут обнаруживаться липидные капли. Внутренняя часть капсулы образована компактно уложенными уплощенными клетками с минимальными межклеточными пространствами, при этом наружная часть капсулы рыхлая, расслоенная и состоит из более или менее округлых клеток (Рисунок 56А, Б, 57Б).

В отдельных участках капсулы присутствуют скопления эритроцитов и макрофагов, примыкающих к поверхности паразита и ограниченных от остальной части капсулы узким промежутком (Рисунок 56Б, 57А). Эти скопления клеток чаще встречаются в глубоких складках тела скребней (Рисунок 57А). На свето микроскопических препаратах эритроциты отличаются полигональной или звездчатой формой и интенсивным восприятием красителей, окрашиваясь в темно-синий цвет.

Один скребень был окружен однослойной капсулой, толщина которой составила 28-74 мкм (Рисунок 58, 59). В отличие от вышеописанных капсул в ее составе преобладали моноциты, макрофаги, гранулоциты и лимфоциты, тогда как фибробласты и коллагеновые фибриллы наблюдались редко. Столь же редкими были кровеносные сосуды. Строение клеток, входящих в состав этой капсулы, сходно с таковым в остальных однослойных капсулах.

Фибробласты во внутренней части капсулы представляют собой вытянутые клетки, включающие веретеновидное ядро с плотным ядрышком и мелкими скоплениями гетерохроматина, равномерно рассеянными в электронно-светлой кариоплазме (Рисунок 60А, Б, 61). Ширина тел клеток составляет примерно 2- мкм, длина – 12-16 мкм. Между собой фибробласты связаны многочисленными типичными десмосомами (Рисунок 60Б, 61). Отдельные фибробласты, прилежащие к поверхности паразита, часто в той или иной степени деструктурированы. В наружной части капсулы фибробласты имеют форму близкую к овальной (Рисунок 62). В их цитоплазме наблюдаются канальцы гранулярная эндоплазматическая сеть, рибосомы и полисомы, митохондрии и мелкие липидные капли. Некоторые фибробласты из наружной части капсулы отличаются наличием в цитоплазме многочисленных расширенных цистерн гранулярная эндоплазматическая сеть с электронно-светлым содержимым (Рисунок 62), что свидетельствует об интенсивном синтезе ими коллагена.

Фибробласты во внутренней и особенно в наружной частях капсулы окружены пучками коллагеновых волокон с характерной для них поперечной исчерченностью. Волокна ориентированы в разных направлениях параллельно поверхности паразита. Диаметр отдельного коллагенового волокна составляет 30 60 нм.

Макрофаги благодаря наличию в их цитоплазме крупных темных фагосом, легко определяются как на свето-микроскопических (Рисунок 57А, Б), так и на электронно-микроскопических препаратах (Рисунок 63А, Б). Клетки характеризуются крупными размерами (9,5-14,76,2-9,2 мкм) и содержат относительно небольшое эксцентрично расположенное ядро со светлой кариоплазмой и хорошо выраженным плотным ядрышком. Цитоплазма клеток поделена на эктоплазму и эндоплазму;

последняя включает короткие канальцы гранулярной эндоплазматической сети, комплекс Гольджи в окружении скоплений мелких светлых пузырьков, митохондрии, множество лизосомоподобных гранул, остаточных телец и многочисленных фагосом, достигающих значительных размеров, иногда превышающих размеры ядра.

Моноциты не менее многочисленны, чем макрофаги, и представлены крупными (8,9-11,46,3-8,8 мкм) клетками, округлой или кубической формы, с умеренным или довольно высоким ядерно-плазменным отношением (Рисунок 64А, Б). Их ядра расположены эксцентрично, характеризуются округлой или слегка вогнутой формой и отчетливым ядрышком;

хроматин мелкими глыбками равномерно распределен по всей кариоплазме. В цитоплазме клеток имеется хорошо развитый синтетический аппарат в виде канальцев гранулярной эндоплазматической сети и зон Гольджи, а также немногочисленные лизосомоподобные гранулы и мелкие фагосомы. На поверхности клеток отмечаются редкие и короткие пальцевидные отростки. Некоторые моноциты вплотную контактируют с тегументом скребня;

в этих случаях они образуют отростки, распластывающиеся по поверхности гельминта. Моноциты и макрофаги, облегающие шипики на поверхности скребней, часто выглядят дегенерированными.

Гранулоциты, имеют размеры 8,7-10,07,3-8,6 мкм и характеризуются эксцентрично расположенным ядрами с дисперсным гетерохроматином в кариоплазме (Рисунок 65А, Б). Цитоплазма клеток подразделена на эктоплазму и эндоплазму. Тонкий ободок эктоплазмы свободен от органоидов клетки и лишь иногда включает мелкие везикулы. Эндоплазма клеток содержит многочисленные округлые или, чаще, миндалевидные гранулы, размерами 0,7-1,00,4-0,6 мкм, заполненные электронно-плотным гомогенным содержимым. Характерной особенностью этих клеток также является хорошо развитый комплекс Гольджи (на одном срезе может обнаруживаться до пяти и более диктиосом – Рисунок 65Б), с которым связано множество мелких, иногда довольно крупных, светлых везикул. В цитоплазме встречаются также канальцы гранулярной эндоплазматической сети и митохондрии с относительно светлым матриксом и расширенными в виде везикул кристами.

Лимфоциты характеризуются небольшими размерами (5,0-6,32,0-3,7 мкм) и умеренным или высоким ядерно-плазменным отношением (Рисунок 66А, Б).

Ядра отличаются плотной кариоплазмой, в которой равномерно рассеяны многочисленные скопления хроматина, и локальными расширениями перинуклеарного пространства. Цитоплазма включает митохондрии с относительно плотным матриксом и расширенными кристами, мелкие везикулы с содержимым умеренной плотности и многочисленные рибосомы и полирибосомы.

Следует отметить, что толщина капсулы заметно возрастает в местах контакта с органом. Увеличение толщины капсулы достигается за счет повышенного содержания в ней фибробластов и коллагеновых волокон, а также крупных скоплений макрофагов, при этом макрофаги морфологически отличаются от таковых остальной части капсулы. Большая часть их цитоплазмы заполнена крупными фагосомами с электронно-плотным содержимым, максимальный диаметр которых достигает 4 мкм (Рисунок 67). Остаточные тельца и лизосомоподобные гранулы, в изобилии наблюдаемые в макрофагах остальной части капсулы, встречаются значительно реже.

Четыре скребня, найденных на брыжейке кишечника, были окружены двухслойной капсулой (Рисунок 68). По толщине (80-110 мкм) она несколько превышает однослойную и отчетливо подразделяется на два слоя. Толщина внутреннего слоя варьирует в пределах от 20 до 60 мкм – столь широкий интервал объясняется тем, что наибольшей толщины этот слой достигает в складках тела скребня, куда элементы наружного слоя не проникают. Рассматриваемый слой состоит, главным образом, из макрофагов, между которыми рассеяны многочисленные липидные капли. Последние характеризуются округлой формой и крупными размерами (от 1,4 до 8,0 мкм), часто превышающими размеры отдельных клеток. Благодаря окрашиванию в различные оттенки коричневого цвета липидные капли легко идентифицируются на препаратах, окрашенных смесью метиленового синего и кристаллического фиолетового. На полутонких срезах макрофаги имеют разнообразную форму и включают темное ядро, а в их цитоплазме хорошо заметны плотные фагосомы и липидные капли.

Наружный слой капсулы имеет толщину около 60 мкм и на свето микроскопических препаратах всегда окрашивается интенсивнее внутреннего.

Слой образован плотно расположенными коллагеновыми волокнами, между которыми лежат макрофаги, фибробласты и лимфоциты. Строение макрофагов похоже на таковое макрофагов внутреннего слоя капсулы. Фибробласты легко идентифицируются по уплощенной форме и плотному ядрышку в вытянутом ядре. Лимфоциты отличаются небольшими размерами и мелким плотным ядром.

В отдельных участках внешний слой капсулы переходит в разрастания ткани брыжейки, от которой он не всегда может быть дифференцирован. В разрастаниях ткани брыжейки располагаются немногочисленные кровеносные капилляры.

Все обнаруженные на печени скребни (7 экз.) были Печень.

инкапсулированы. Из них изучено четыре, три из которых локализовались на поверхности печени, как бы вдавливаясь в ткань органа, а один располагался в печеночной ткани на глубине приблизительно в 1 мм. Во всех четырех случаях капсула плотно облегает поверхность скребня. Структура капсулы во всех четырех случаях имеет свои особенности.

Капсула вокруг первого скребня, расположенного в углублении печени (Рисунок 69А, Б), имеет неодинаковые толщину и плотность расположения образующих ее элементов. В участке, погруженном вглубь печени, клетки располагаются более компактно, а толщина капсулы составляет примерно 30- мкм. В участке, обращенном в полость тела, клетки в стенке капсулы располагаются рыхло, а ее ширина возрастает до 167 мкм (Рисунок 69А). Между капсулой и тканью печени наблюдается «пустое» пространство до 94 мкм шириной. Капсула связана с органом лишь в одном участке. В составе капсулы наблюдаются различные клеточные элементы и крупные отложения коллагеновых волокон. Среди клеток преобладают макрофаги и фибробласты, в меньшем количестве встречаются гранулоциты и совсем небольшую часть клеточного пула составляют эритроциты, лимфоциты и предполагаемые плазматические клетки. Коллагеновые волокна располагаются, преимущественно, во внешней части капсулы.

Макрофаги характеризуются округлой или овальной формой (Рисунок 69Б).

Их округлые ядра с небольшим количеством гетерохроматина располагаются эксцентрично. В цитоплазме видны мелкие плотные включения и светлые вакуоли. Некоторые макрофаги содержат одну-две крупные фагосомы.

Лимфоциты отличаются мелкими размерами и округлыми интенсивно окрашенными ядрами. Гранулоциты характеризуются округлой формой, их ядра занимают эксцентричное положение, а цитоплазма отчетливо подразделяется на интенсивно окрашенную зернистую эндоплазму и слабо окрашенную эктоплазму.

В цитоплазме видны многочисленные плотные гранулы. Фибробласты имеют уплощенную форму с нечеткими клеточными границами;

ядра также имеют вытянутую форму и светлую кариоплазму.

Капсула вокруг второго скребня состоит из плотно организованных фибробластов, макрофагов и коллагеновых волокон (Рисунок 70). Значительно реже выявляются гранулоциты. В складке тегумента скребня наблюдалось скопление эритроцитов и макрофагов, отделенное от остальной части капсулы узким просветом. На свободной поверхности, обращенной в полость тела, толщина капсулы уменьшается до 14 мкм, а в части, расположенной в углублении на печени, она составляет примерно 42 мкм. Участками фибробласты и коллагеновые волокна наружной части капсулы располагаются довольно рыхло, вследствие чего толщина капсулы увеличивается до 100 мкм (Рисунок 70).

Третий скребень заключен в очень тонкую однослойную капсулу, толщиной 16-30 мкм, состоящую преимущественно из макрофагов (Рисунок 71). На полутонких срезах отчетливо видно, как макрофаги образуют длинные цитоплазматические выросты, вступающие в контакт с гликокаликсом на поверхности гельминта. Значительно реже в капсуле выявляются гранулоциты и фибробласты.

Капсула, окружающая четвертого скребня (160-170 мкм), морфологически сходна с двухслойной капсулой, отмеченной у скребней на брыжейке кишечника, но отличается от нее следующими особенностями. Во-первых, в межклеточных пространствах клеток внутреннего слоя визуально содержится гораздо меньше липидных капель (Рисунок 72Б). Во-вторых, помимо макрофагов во внутреннем слое капсулы встречаются многочисленные гранулоциты и, изредка, фибробласты и эритроциты.

Селезенка. На поверхности селезенки найден и исследован один скребень, окруженный очень тонкой однослойной капсулой, не превышающей 15-18 мкм (Рисунок 72А). Обычно стенка капсулы плотно покрывает скребня, но иногда она несколько отходит от него;

при свето-микроскопическом изучении этих участков, гликокаликс на поверхности гельминта не наблюдается. Во внутренней части капсулы наблюдается 1-2 слоя макрофагов, которые снаружи покрыты рыхло организованными фибробластами. Макрофаги легко определяются по округлому ядру и крупным фагосомам в цитоплазме. Фибробласты, напротив, имеют удлиненную форму, их ядра окрашиваются менее интенсивно, чем цитоплазма, и включают плотные ядрышки.

4.2.7. Толстощек Миддендорфа Hadropareia middendorffii Материал для исследования взят от 12 рыб, интенсивность инвазии которых составила от 1 до 19 скребней. Всего обнаружено 62 скребня: 57 гельминтов локализовались на брыжейке кишечника, 3 – на селезенке и 2 – на печени (Таблица 7). Среди скребней, найденных на брыжейке кишечника, обнаружены две крупные капсулы – в одной было заключено шесть скребней, во второй – два.

Брыжейка кишечника. На брыжейке кишечника найдено 57 скребней, из которых исследовано 33. Обычно скребни имели инвагинированный хоботок и были заключены в капсулу, однако в одном случае скребень, также с инвагинированным хоботком, не был окружен капсулой. Обычно капсулы свободно располагались на брыжейке кишечника, связываясь с ней немногочисленными соединительнотканными тяжами. В одном случае скребень в капсуле локализовался глубоко в ткани брыжейки, однако между капсулой и органом имелось широкое «пустое» пространство.

Таблица Количество и локализация обнаруженных (в скобках – исследованных) скребней Corynosoma strumosum из толстощека Миддендорфа Hadropareia middendorffii Локализация и количество (экз.) скребней кишечника Длина брыжейка селезенка печень № (см) и Всего пол рыб 1 16,0 1 (1) 1 (1) 2 13,5 1 (1) 1 (1) 3 13,3 1 (1) 1 (1) 4 13,8 1 (1) 1 (1) 5 15,8 2 (2) 2 (2) 6 11,0 8 (6) 3 (1) 11 (7) 7 17,0 3 (1) 3 (1) 8 16,2 7 (3) 7 (3) 9 14,2 6 (2) 6 (2) 10 17,0 6 (6) 1 (1) 7 (7) 11 18,0 18 (7) 1 19 (7) 12 14,1 3 (2) 3 (2) Всего 57 (33) 2 (1) 3 (1) 62 (35) Во всех случаях, исследованных с применением электронной микроскопии, на поверхности скребня обнаруживался слой гликокаликса, толщиной 0,6-2,4 мкм (Рисунок 74Б, 75А, Б, 83А, Б). Гликокаликс образован плотно расположенными филаментами умеренной электронной плотности, в которых рассеяны мелкие скопления более плотного материала. На косом срезе видно, что этот материал имеет тенденцию накапливаться на внешней поверхности слоя гликокаликса, а также в его основании (Рисунок 75А, Б). В большинстве случаев клетки капсулы находятся в прямом контакте с гликокаликсом, однако в одном случае клетка хозяина проникла сквозь толщу гликокаликса и посредством пальцевидных отростков непосредственно контактировала с поверхностью тегумента скребня. В некоторых случаях между гликокаликсом и капсулой наблюдается более или менее выраженное «пустое» пространство (Рисунок 74Б), вероятно, образовавшееся в результате препарирования.

Толщина капсулы у исследованных скребней варьирует в небольших пределах от 31 до 45 мкм (Рисунок 73, 74А, 78А, 84А, 85А, Б). В ее составе выделяются три слоя: внутренний, средний и наружный. Внутренний слой капсулы на полутонких срезах окрашивается наиболее интенсивно, имеет вид гомогенного пласта, состоящего из остатков дегенерированных клеток (84А, Б, 85А, Б). В некоторых капсулах в его составе видны спорадически расположенные группы разрушающихся клеток (Рисунок 73, 74А, Б, 75А, Б, 76Б).

Средний и наружный слои капсулы на свето-микроскопических препаратах окрашиваются слабо, но различаются особенностями организации составляющих их элементов. Наружный слой капсулы характеризуется рыхлым расположением клеток с более или менее выраженными межклеточными пространствами (Рисунок 73, 74А, 78А, 85А, Б). В среднем слое капсулы клетки уложены плотно, и межклеточные пространства отсутствуют или, если имеются, то минимальны (Рисунок 73, 74А, 78А, 85А, Б). Клетки этого слоя часто имеют уплощенную или веретеновидную форму. В составе среднего и наружного слоев капсулы обнаруживаются фибробласты, макрофаги, лейкоциты (гранулярные и агранулярные) и эритроциты, распределенные в их толще более или менее равномерно. В наружном слое, кроме того, наблюдаются кровеносные сосуды (Рисунок 73, 74А). В одном случае в наружном слое капсулы обнаружена небольшая группа из пяти-шести (на одном срезе) пигментных клеток. В другом случае в толще наружного отдела капсулы отмечены небольшие группы клеток поджелудочной железы.

Внутренний слой капсулы, толщиной около 4-14 мкм, либо сплошной, либо образован одним-двумя прерывистыми рядами плотных клеток. Электронно микроскопически границы входящих в его состав дегенерирующих клеток не определяются (Рисунок 84А, Б, 85А, Б). Прерывистые группы клеток, образующие внутренний слой, отличаются от остальных элементов бльшей электронной плотностью и более интенсивной окраской при окрашивании метиленовым синим и кристаллическим фиолетовым (Рисунок 73, 74А). Клетки имеют разнообразную форму с крупными отростками и располагаются довольно свободно, так что между ними всегда видны узкие межклеточные пространства.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.