авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 9 |

«Министерство здравоохранения Российской Федерации Министерство промышленности и торговли Российской Федерации Правительство Новосибирской области ...»

-- [ Страница 4 ] --

В настоящий момент Всемирной организацией здравоохранения применяются три основных метода расчета ПГП и рекомендации по их использованию. Для стран с развивающейся системой здравоох ранения рекомендуют использовать метод согласованного мнения экспертов с учетом бюджета здравоохранения, где основной целью является оптимизация распределения ресурсов в рамках ограничен ных расходов на здравоохранение, и метод, базирующийся на расче тах ВВП страны [2]. Для стран с развитой системой здравоохранения рекомендуют использовать метод опроса различных групп населения.

В связи с вышеизложенным было проведено первое исследование определения ПГП методом условной оценки, путем открытого анке тирования случайной выборки респондентов Российской Федерации.

В ходе исследования адаптирован опросник Японского медицин ского университета, с помощью которого проводилось измерение пороговых величин ПГП за дополнительный сохраненный год ка чественной жизни (QALY) в нескольких странах Азии и США. Для определения денежной суммы под каждым вопросом были размеще ны варианты так называемого ценового предложения, среди которых респондент отмечал выбранные им суммы. Шесть цен предложения от 15 000 рублей до 300 000 рублей (15, 30, 75, 150, 225, 300) были продемонстрированы респондентам в анкете, при этом респонден там задавался вопрос о готовности заплатить за новую медицинскую технологию, которая может привести к одному дополнительному со храненному году качественной жизни (QALY). Изучены следующие переменные: пол респондента, возраст респондента, уровень полу ченного образования, число госпитализаций за последние пять лет, число госпитализаций любых членов семьи за последние пять лет, социально-профессиональный статус. Анализ проводился путем рас чета эмпирических коэффициентов эластичности, широко исполь зующегося в маркетинговых исследованиях [1].

Выборка респондентов составила 1160 человек. На первом эта пе после перевода и адаптации опросника Токийского университета было проведено восемь фокус-групп в каждом федеральном окру ге РФ, в которых участвовало 160 респондентов. Первоначальная цена предложения, представленная респондентам, соответствовала аналогичным опросам в США, Великобритании, Тайване, Южной Корее, Японии, Австралии. Пороговые значения были снижены в десять раз, поскольку респонденты не воспринимали цифры выше 300 000 рублей и отмечали, что они не могут выбрать ни один из предложенных вариантов.

В результате сформировалась окончатель ная анкета-опросник, описанная в статье, и цены предложения, опи санные выше. (см. Таб. 1) В субъекты РФ разослано 1000 пронумерованных анкет (шифр но мера состоял из четырех цифр от 0001), общее количество принявших в исследовании городов равно 27-ми, включая все столицы федераль ных округов и города с численностью населения более 1 млн. жите лей. Все данные используются только в агрегированном виде. Опрос проводился сотрудниками ЦНИИ организации и информатизации здравоохранения, при участии сотрудников МНИОИ им. П.А. Герце на. В опросе приняли участие пациенты онкологических диспансеров, их родственники и друзья, а также средний медицинский персонал и врачи ЛПУ. Проведен анализ 1000 анкет, 20 из них попало в брак по причине непонимания вопросов респондентами и отказа ответить хотя бы на один вопрос. Таким образов в окончательном анализе при няло участие 980 анкет. Статистическая и математическая обработка Таблица 1.

Ценовое предложение для респондентов в зарубежном и российском исследовании Цены предложения Цена предложения В российских рублях в исследовании в РФ в зарубежном опроснике, $ 15 000 150 000 30 000 300 000 10 75 000 750 000 25 150 000 1 500 000 50 225 000 2 250 000 75 300 000 3 000 000 100 данных проведена компанией «Афэкс-Софт» с использованием про грамм MS Excel и MS Access.

Определены средние величины ПГП в целом и для каждой кате гории респондентов в отдельности. Определен разброс между мак симальными и минимальными средними по каждой категории ре спондентов. Определено влияние каждой категории респондентов на общее среднее, т.е. насколько изменился бы показатель общего сред него, если бы в опросе приняли участие респонденты только одной категории, например, только мужчины или только женщины.

Общие средние величины ПГПлич и ПГП5лич примерно одинако вы (69 000 и 72 000 руб. соответственно), величина ПГПсем выше ПГПлич на 16 %, что говорит о большей значимости жизни родствен ников респондента, чем его собственной, а величина ПГПсоц более чем в два раза превышает ПГПлич. В исследования приняло участие 398 респондентов-мужчин (41 %), и 582 респондента – женщины (59 %). Респонденты-мужчины определили более высокую среднюю величину ПГП, чем респонденты-женщины. Так, пороговые значения личные для мужчин и женщин составили 81 000 и 61 000 рублей со ответственно, личный показатель порогового значения через пять лет болезни выше как у мужчин, так и у женщин (84 000 и 65 000 рублей).

За любого члена семьи и мужчины и женщины также готовы платить больше, чем за самих себя (93 000 и 71 000 рублей соответственно).

Полученные результаты отражают две тенденции: во-первых, сред ний заработок мужчин выше среднего заработка женщин, во-вторых, женщины при выборе ответа в большей степени учитывают бремя повседневных расходов. Максимальное влияние полового фактора оказывается на личные и семейные расходы – ПГПлич, ПГП5лич, ПГПсем (разброс 29 %-31 %), в то время как его влияние на общественные расходы – ПГПсоц – в два раза ниже (разброс 16 %). Ввиду того что женщин-респондентов в опросе приняло участие больше, чем муж чин-респондентов (59 % и 41 % соответственно), общие средние ве личины ПГП могут быть немного занижены.

Все респонденты были распределены на 6 возрастных групп с до 75 лет. При сохранении общей тенденции линейного возраста ния величин ПГП от личного к общественному в каждой возрастной группе наблюдается стремление пожилых людей к большему уча стию в семейных (ПГПсем) и общественных (ПГПсоц) расходах, при этом, если у самой молодой возрастной группы (20-29 лет) рост по роговых значений от личного к общественному составляет 51 %, то для самой пожилой группы (70-75 лет) рост составляет уже 258 %.

Полученные результаты говорят о том, что ценность собственной жизни респондентов с возрастом снижается – это наглядно видно из средних величин ПГПлич и ПГП5лич, а общественный ПГПсоц имеет от носительно стабильную величину. Выделяются три более крупные возрастные группы, что связано, в первую очередь, с рабочим стату сом и жизненной активностью: высокий ПГПлич – 20-39 лет, средний ПГПлич – 40-59 лет, низкий ПГПлич – 60-75 лет.

Фактор образования в значительной степени влияет на средние ве личины ПГПлич и ПГПсем, а средняя ПГПсоц практически одинакова и не зависит от фактора образования. Ввиду того что респонденты с за конченным средним или высшим образованием составляли подавля ющее большинство (86 %), средние величины личного и семейного ПГП могут быть завышены, что в первую очередь связано с уровнем среднего заработка для каждого уровня образования.

Фактор госпитализации в определенной степени влияет на сред ние величины ПГПлич и ПГПсем, а средняя ПГПсоц практически одина кова и не зависит от фактора госпитализации. Интересно, что средние величины личных и семейных пороговых величин у респондентов, имевших в анамнезе госпитализацию, ниже, чем у тех, кто не был госпитализирован. Таким образом, готовность платить за качествен ный год жизни у респондентов, имевших медицинское вмешатель ство, ниже. В данном случае имеет влияние возрастной фактор: чем старше респондент, тем более вероятны госпитализации и тем ниже средний уровень ПГПлич, что связано, прежде всего, со значительны ми издержками наших пациентов при госпитализациях.

Фактор госпитализации члена семьи за последние пять лет, прежде всего, отражает затраты родственников в период болезни. Данный фактор в малой степени влияет на средние величины ПГПлич и ПГПсем, а вот средняя ПГПсоц существенно от него зависит, т.е. респонденты, имевшие расходы по госпитализации родственников, считают, что затраты государства и степень его расходов должно быть в два раза больше, чем их собственные.

Рабочий статус респондента в значительной степени влияет на все средние величины пороговых значений готовности граждан платить (ПГП) за дополнительный сохраненный качественный год жизни.

Представленные данные позволяют нам утверждать, что чем выше будет уровень жизни граждан в стране, тем больше государство долж но принимать участие в обеспечении сохранения здоровья каждого из его граждан. Полученные данные могут быть использованы лица ми, принимающими решения в области здравоохранения для расчета целесообразности использования бюджетных средств на программы здравоохранения.

Список литературы:

1. Березин И. Маркетинговые исследования. Как это делают в России. – Москва. – Вершина. – 2005- стр.- 190-195.

2. Figueras J, McKee M, Lessof S, Duran A, Menabde N. – Системы здра воохранения, здоровье и благосостояние: Оценка аргументов в пользу инве стирования в системы здравоохранения. -Всемирная организация здравоох ранения.- 2008.- стр.- 27- 3. Ягудина Р.И., Куликов А.Ю., Нгуен Т. Определение «порога готовно сти платить» в России, в Европейских странах и в странах СНГ. Фармако экономика. – Т.4. – №1.- 2010.- стр. – 5-8.

4. George B, Harris A, Mitchell A. 2001. Cost-effectiveness analysis and the consistency of decision making: evidence from pharmaceutical reimbursement in Australia (1991 to 1996). Pharmacoeconomics.- 2001. – №19. – стр. -52- 5. Gyrd-Hansen D. Willingness to pay for a QALY. Health Economics. – №12 – 2007.

6. Hirth RA, Chernew ME, Miller E, Fendrick AM, Weissert WG. Willing ness to pay for a quality-adjusted life year: in search of a standard. Medical Decision Making.- 2000. – № 20.- стр. 6542-6548.

7. Kaplan RM, Bush JW. Health-related quality of life measurement for evaluation research and policy analysis. Health Psychology.-1982. – №1. стр. 1072-1079.

8. King J T, Tsevat J, Lave JR, Roberts MS. Willingness to pay for a qual ity-adjusted life year: implications for societal health care resource alloca tion. – Medical Decision Making. 2005. – №25.- стр. – 2035-2040.

9. Laupacis A, Feeny D, Detsky AS, Tugwell PX. How attractive does a new technology have to be to warrant adoption and utilization? Tentative guidelines for using clinical and economiс evaluations. Canadian Medical As sociation Journal. – 1992. – №5. – стр. -146-150.

10. Ubel PA, Hirth RA, Chernew ME, Fendrick AM. What is the price of life and why doesn’t it increase at the rate of ination? Archives of Internal Medicine. –2003. – №6. – стр.- 1056- К ВОПРОСУ ОБ ОПТИМИЗАЦИИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РЕСУРСОВ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ В СИБИРСКОМ ФЕДЕРАЛЬНОМ ОКРУГЕ НА ОСНОВЕ ИННОВАЦИОННЫХ УПРАВЛЕНЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ОРГАНИЗАЦИИ ОКАЗАНИЯ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ НАСЕЛЕНИЮ В.М. Чернышев1, М.А. Садовой2, О.В. Стрельченко1, Е.В. Мамонова ФГБУЗ СОМЦ ФМБА России, Новосибирск ФГБУ «Новосибирский НИИ травматологии и ортопедии Минздава России»

Инновационный медико-технологический центр (медицинский технопарк), Новосибирск, Россия Аннотация. В статье проведен анализ рациональности использования финан совых средств, выделяемых здравоохранению субъектов Федерации в Сибирском федеральном округе (СФО) в рамках территориальных программ государственных гарантий (ТПГГ) обеспечения населения бесплатной медицинской помощью, а так же мер, принимаемых в регионах по оптимизации расходов, совершенствованию и повышению эффективности медицинской помощи населению.

TO THE QUESTION ON OPTIMIZATION OF USE OF RESOURCES OF PUBLIC HEALTH SERVICES IN THE SIBERIAN FEDERAL DISTRICT ON THE BASIS INNOVATIVE ADMINISTRATIVE TECHNOLOGIES AND PERFECTION OF THE ORGANIZATION OF RENDERING OF MEDICAL AID TO THE POPULATION V.M. Chernyshev1, M.A. Sadovoy2, O.V. Strelchenko1, E.V. Mamonova FSBHO SDMC FMBA Russia, Новосибирск, FSBO «Novosibirsk scientic research institute of traumatology and orthopedy Ministries of Health of Russia»

Innovative medico-technological center (medical science and technology park), Novosibirsk, Russia Abstract. In article the analysis of rationality of use of the nancial assets, sub jects of Federation allocated to public health services in Siberian federal district is lead within the framework of territorial programs of state guarantees of maintenance of the population by free-of-charge medical aid, and as the measures accepted in regions on optimization of charges, to perfection and increase of efciency of medical aid to the population.

Состояние здоровья населения – весьма точный индикатор со циально-экономического развития страны в целом. В связи с этим, целью государственной политики в сфере здравоохранения является совершенствование доступности медицинской помощи, повышение эффективности и качества медицинских услуг на основе передовых достижений медицинской науки.

В Концепции долгосрочного социально-экономического разви тия Российской Федерации на период до 2020 года говорится: что бы улучшить ситуацию с состоянием здоровья граждан, необходимо обеспечить качественный прорыв в системе здравоохранения.

Отрасли нужны инновационные разработки в сфере профилакти ки, диагностики и лечения заболеваний (включая восстановительное лечение), эффективная система подготовки медицинских кадров и квалифицированных специалистов, способных решать задачи инно вационного развития.

Внедрение инновационных технологий, обеспечивающих совре менное решение конкретных клинических задач, приводит не только к повышению качества жизни пациентов, достижению нового уровня терапии, более эффективному расходованию средств, но и значимо му повышению квалификации медицинского персонала. Однако все это приводит к удорожанию медицинских услуг, к увеличению по требности в финансовых ресурсах, дефицит которых постоянно ис пытывает здравоохранение.

В последние годы принимаются меры по рационализации ис пользования ресурсов отрасли. Внедряется аутсорсинг (вывоз мусо ра, техническое обслуживание медицинской и другой техники, пи тание больных и т.д.), много внимания уделяется компьютеризации, в т.ч. лечебно-диагностического процесса, все шире применяются стационар-замещающие технологии и т.д. Вместе с тем, очевидно, что принятых мер недостаточно и имеет место нерациональное ис пользование возможностей, которыми располагает здравоохранение нашей страны, даже в части обеспечения минимального социального стандарта, в роли которого в здравоохранении выступает Программа государственных гарантий обеспечения населения бесплатной меди цинской помощью. На реализацию данной Программы выделяется недостаточно средств, что не способствует повышению доступности и качества медицинской помощи.

Как уже отмечалось, важную роль в достижении целей играет фи нансирование, дефицит которого в здравоохранении присутствует постоянно. Вместе с тем, в течение последних 3-х лет произошло его уменьшение. Наиболее заметное в Алтайском – на 15,3 % (с 40,3 % до 25,0 %), Красноярском – на 14,1 % (с 31,6 до 17,5 %) краях. На именьшее сокращение дефицита в Республике Алтай – на 3,4 % (с 35,0 до 31,6 %) и Иркутской области – на 4,2 % (с 30,9 до 26,7 %).

В 2012 году наиболее выраженным дефицит финансирования был в Республике Хакасия (36,9 %), Томской области (33,1 %).

Сохраняются значительные колебания расходов на одного жителя в субъектах Федерации в СФО. Так в 2012 году они составили от 6784 руб. в Алтайском до 10379 руб. в Красноярском крае. О недоста точном внимании к проблемам здравоохранения со стороны руковод ства регионов, прежде всего в обеспечении достаточного финансиро вания, свидетельствует тот факт, что дефицит консолидированного бюджета остается значительным. Так в Республике Хакасия он со ставляет 49,2 %, а в Иркутской области 41,2 %. Минимальным он остается в Забайкальском крае, а в Омской области его нет совсем (по данным Минздрава области).

Значительные колебания бюджетов ТПГГ обусловлены в опреде ленной степени различными природно-климатическими условиями, в частности связанными с этим коммунальными платежами, доплата ми персоналу медицинских организаций и др.

Дефицит финансирования ТПГГ в 2011 году имел место во всех регионах округа за исключением Омской области. Более 30 % он составил в республиках Алтай (31,4 %), Бурятия (35,8), Хакасия (40,7), Алтайском крае (31,2 %) и Томской области (35,8 %), в т.ч.

за счет средств консолидированных бюджетов в республиках Буря тия (37,5 %), Хакасия (46,9 %), Алтайском (40,7 %) и Красноярском (40,5 %) краях, Кемеровской (33,7 %) и Томской (35,8 %) областях.

Финансирование из средств ОМС в большинстве регионов осу ществляется тоже с дефицитом. Наиболее выражен он в республиках Алтай (28,6 %) и Бурятия (30,6 %). Минимальный он в Кемеровской области (2,2 %) и Красноярском крае (4,9 %). В Омской области от сутствует совсем.

Улучшение финансирования ТПГГ в 2011 году позволило увели чить фактические расходы практически по всем видам медицинской помощи. Во всех регионах округа увеличилась стоимость 1 посеще ния в амбулаторно-поликлинические учреждения, размеры которой значительно колебались (186 руб. в Республике Алтай и 403 руб. в Новосибирской области). Стоимость одного дня пребывания в днев ных стационарах составила в 2011году от 254 в Кемеровской области до 579 рублей в Забайкальском крае.

Во многих регионах округа увеличилась оплата стоимости вызо ва скорой помощи, которая составила от 857 в Алтайском крае до 1935 руб. в Забайкальском крае. В стационарах с круглосуточным пре быванием стоимость одного дня пребывания колебалась в 2011 году от 1095 (Алтайский край) до 1719 рублей (Красноярский край).

Сохраняющийся дефицит финансирования здравоохранения в субъектах Федерации в СФО требует активизации инновационной деятельности, т.е. принятия мер по рационализации использования выделяемых финансовых средств. С этой целью в регионах округа проводятся мероприятия по снижению объемов дорогостоящей меди цинской помощи (скорой и стационарной) путем реструктуризации коечного фонда, оптимизации сети лечебных учреждений, повыше нию доступности амбулаторной помощи, в том числе стационар замещающих технологий (дневной стационар, стационар на дому).

Так в Республике Бурятия в течение 2007-2011гг. сокращены неэффективно функционирующих койки стационаров с круглосуточ ным пребыванием в муниципальных и республиканских учреждени ях здравоохранения. 36 маломощных участковых больниц реоргани зованы во врачебные амбулатории с дневным стационаром.

В целях рационального использования средств обязательного ме дицинского страхования в регионах округа применяется подушевое финансирование первичной медико-санитарной помощи (в Респу блике Бурятия, Алтайском крае, Кемеровской области), централи зованное обеспечение медицинских учреждений, работающих в си стеме ОМС, лекарственными препаратами, изделиями медицинского назначения, расходными материалами и продуктами питания (Крас ноярский край, Кемеровская область).

Для снижения затрат ЛПУ на непрофильные виды деятельно сти, как отмечалось ранее, все чаще используется аутсорсинг. На пример, в Забайкальском крае в течение нескольких лет по такому принципу осуществляется питание больных в стационарах. В Том ской области рассматривается вопрос о передаче на аутосорсинг специализированным организациям части второстепенных работ и услуг (клининговые услуги, организация питания, охраны и проч.).

В Красноярском крае с целью обеспечения жителей качественной медицинской помощью при заболеваниях, требующих примене ния дорогостоящих технологий, с 2009 года применяется метод программно-целевой индексации тарифов на медицинские услуги, который предусматривает дополнительное финансирование меди цинских организаций на приобретение лекарственных средств и расходных материалов.

Несмотря на недостаточное финансирование, во многих регионах не уделяется должного внимания вопросам более экономного исполь зования выделяемых средств. Прежде всего, развитию стационар замещающих технологий, которые не получили должного развития.

Так количество пациенто-дней на одного жителя в них ниже, чем в среднем по СФО (0,67) и составляет в Алтайском крае – 0,62-0,59, Ир кутской области – 0,56-0,57, в Томской области – 0,59-0,64, в то время как в Кемеровской области достигло – 0,87, в Омской – 0,7. Резуль татом недостаточного использования стационар-замещающих техно логий является высокая нагрузка на стационары с круглосуточным пребыванием. Самая большая она в Республике Тыва (4,0-4,33 койко дня на одного жителя в год), в Алтайском крае (3,5-3,2), в Иркутской области (3,24-3,13). При этом вызывают сомнения объяснения этого природно-климатическими условиями и низкой плотностью расселе ния жителей региона, т.к. в других субъектах, при таких же услови ях, рассматриваемый показатель гораздо ниже: в республиках Алтай и Хакасия он равен соответственно 2,8 и 2,61 койко-дня на одного жителя в год.

Еще один очень серьезный резерв, это обеспечение оптимального взаимодействия поликлинической службы и скорой медицинской по мощи (СМП). Известно, что при хорошей организации работы поли клинических учреждений снижается нагрузка на скорую медицинскую помощь и наоборот. Очень важна и экономическая сторона этого взаимо действия. Посещение поликлиники в 4-8 раз дешевле, чем вызов скорой медицинской помощи. Несмотря на это, даже при выраженном дефици те финансовых средств, нагрузка на СМП остается высокой в расчете на одного жителя в год в Новосибирской области (0,43), Республике Хака сия (0,39), Алтайском крае (0,37), Иркутской (0,36) и Томской (0,36) об ластях. При этом количество посещений врача на одного жителя в год в этих регионах не превышает 9,0. Оптимальное соотношение количества посещений врача в поликлинике и вызовов СМП на одного жителя в год имеет место в Забайкальском крае (9,8 / 0,29) и Омской области (10,8 / 0,31), что является важным с точки зрения рационального использова ния не только финансовых средств, но и транспорта, кадров и т.д.

Заключение. Несмотря на сохраняющийся дефицит финансирова ния отрасли почти во всех субъектах СФО, меры по рационализации использования финансовых средств принимаются в недостаточном объеме. Так в Республике Тыва мало внимания уделяется внедрению стационар-замещающих технологий, при этом нагрузка на стациона ры с круглосуточным пребыванием самая высокая в СФО. Безуслов но, определенную роль играют климато-географические особенно сти, но в регионах с аналогичными условиями (республики Алтай и Хакасия) указанные технологии используются более активно. Недо статочно работ, осуществляемых в ЛПУ, передается на аутсорсинг.

Во многих регионах не обеспечивается использование в полной мере дорогостоящего и дефицитного оборудования, КПД которого далек от 1,0. Медленно происходит дифференциация коечного фонда, в связи с чем паллиативная помощь продолжает оказываться в дорого стоящих стационарах с круглосуточным пребыванием.

Список литературы:

1. Жилинский Е.В. Кластерный подход к инновационному развитию Российского здравоохранения/ Е.В. Жилинский // Главврач. – 2011. – № 5. – с. 58 – 62.

2. Зинчук Ю.Ю. Критерии и индикаторы эффективности и качества ме дицинской помощи для пациентов, учреждения и органа управления здраво охранением / Ю.Ю. Зинчук // Главврач. – 2011. – № 2. – с. 29 – 34.

3. Пирогов М.В. Комплексный подход к формированию территориальной программы ОМС и расчету тарифов / М.В. Пирогов // Главврач. – 2011. – № 4. – с. 74 – 81.

4. Лимонов В.И. Финансово-экономический анализ деятельности меди цинских организаций / В.И. Лимонов // Главврач. – 2011. – № 1. – с. 33 – 41.

Раздел IV. ИННОВАЦИОННЫЕ РЕГЕНЕРАТИВНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ И НОВЫЕ МАТЕРИАЛЫ ОПЫТ СОЗДАНИЯ КЕРАМИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ЭНДОПРОТЕЗОВ СУСТАВОВ И ДРУГИХ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ А.М. Аронов, И.В. Шемякина, О.В. Медведко ООО «НЭВЗ-Н», ЗАО «НЭВЗ-КЕРАМИКС» Холдинговая компания ОАО «НЭВЗ-Союз», г. Новосибирск Аннотация. Следуя современным суждениям об эффективности медицинских технологий, керамика должна обеспечивать срок эксплуатации имплантатов и эн допротезов до 25 лет, что превышает уровень, достигнутый в настоящее время.

Для этого авторами ведется разработка керамики с субмикронной и нанораз мерной структурой из порошков Al2O3 и ZrO2, с легирующими добавками.

Для достижения улучшенных эксплуатационных свойств, на всех технологиче ских стадиях и в разрабатываемых режимах применяется комплекс современных подходов к принципам создания изделий медицинского назначения из нанострук турированной биосовместимой керамики, благодаря чему будут получены прин ципиально новые свойства конечного продукта по сравнению с металлическими эндопротезами и существующими керамическими аналогами.

Организация промышленного производства этих изделий в ЗАО «НЭВЗ-КЕ РАМИКС», г. Новосибирск, впервые в России позволит решать задачи доступной высокотехнологичной медицинской помощи в травматологии, ортопедии, стома тологии.

THE EXPEIRIENCE IN DESIGNING OF CERAMIC MATERIALS FOR JOINT IMPLANTS AND OTHER MEDICAL PRODUCTS A.M. Aronov, I.V. Shemyakina, O.V. Medvedko NEVZ-N Ltd., PHD NEVZ-CERAMICS, CJSC Holding company NEVZ-Soyuz JSC, Novosibirsk Abstract. According to the modern understanding of medical technologies efciency ceramics shall ensure 25 years of lifetime for implants and endoprosthesis, that is more then the current achieved level.

For this purpose the authors are developing ceramics with submicron and nanosized structure made from Al2O3 and ZrO2 powders with dopants.

In order to achieve improved working properties at all technological stages and in working-out regimes there is a complex of modern approaches to the development of products for medical application on the basis of nanostructured biocompatible ceramics, thereby if to compare with metal endoprosthesis and the current ceramic analogues the fundamentally new properties of the nal product will be received For the rst time ever in Russia The industrial company NEVZ-CERAMICS CJSC, Novosibirsk try to resolve the tasks of available high technological medical assistance in traumatology, orthopedics and stomatology.

Актуальность проблемы. Первичная инвалидность вследствие травм и заболеваний костно-мышечной системы занимает третье ме сто после болезней органов кровообращения и злокачественных но вообразований.

В то же время, актуальным является увеличение продолжитель ности использования имплантатов и эндопротезов без ревизионных вмешательств. Общеизвестные данные по скорости износа в узле трения указывают на преимущества керамических материалов:

материалы имеют высокую степень адаптации к биологическим тканям и высокую биомеханическую совместимость;

материалы обладают фрикционными характеристиками, обе спечивающими длительную эксплуатацию изделия;

материалы обладают биоинертностью (химической и коррози онной стойкостью, обеспечивающими отсутствие биохимических обменных реакций со структурами организма);

способность керамических материалов работать при высоких температурах позволяет применять высокотемпературную стерилиза цию или -облучение изделия без потери эксплуатационных свойств.

Другая причина, по которой современной медицине необходимы в широкой номенклатуре изделия из алюмоксидной и циркониевой ке рамики и их композиций, это возрастающие требования потребителя – человека с заболеваниями опорно-двигательного аппарата, который не желает тратить время и средства на реконструктивные операции, вследствие окончания срока службы имплантата, а напротив, стре мится вести активный образ жизни в зрелом и пожилом возрасте.

При этом должны быть изучены и решены технические проблемы на каждой технологической стадии производства керамики, начиная от получения новых композиционных масс со специальными свой ствами и до достижения медицинским изделием той биосовместимо сти, которая необходима по условиям его применения.

Материал и методы. Следуя современным суждениям об эффек тивности медицинских технологий, полагаем, что керамика, получен ная в результате научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, должна обеспечивать срок эксплуатации имплантатов и эндо протезов до 25 лет, что превышает уровень, достигнутый в настоящее время.

Для достижения указанной выше цели, ХК ОАО «НЭВЗ-Союз», в инновационном предприятии ООО «НЭВЗ-Н» и компании «НЭВЗ КЕРАМИКС» ведется разработка керамики с субмикронной и нано размерной структурой из порошков Al2O3 и ZrO2, с легирующими добавками.

2. Основными проблемными вопросами, изучаемыми при прове дении исследований, являются:

выбор и обоснование композитных смесей и биоактивных ма териалов;

разработка комплексных технологий компактирования;

исследование и обоснование температурно–временного режима консолидации компактов и спекания, изучение зависимостей основ ных переменных;

разработка технологических режимов и специализированного обрабатывающего инструмента прецизионной обработки керамиче ских деталей.

Выбор метода получения композитных смесей определяется обла стью их применения, желательным набором свойств конечного про дукта. Характеристики получаемого продукта – гранулометрический состав и форма частиц, содержание примесей, величина удельной поверхности – могут колебаться в зависимости от способа получения в весьма широком диапазоне.

Из наиболее распространенных «мокрых» методов синтеза: осаж дение, пропитка, золь-гель и гидротермальный, наиболее часто при меняются осаждение и золь-гель метод.

Способ осаждения заключается в осаждении различных соедине ний металлов из растворов их солей с помощью осадителей. Про дуктом осаждения являются гидроксиды исходных материалов.

В качестве осадителя чаще всего используют аммиак. Регулируя рН и температуру раствора, создают условия, при которых получаются высокие скорости кристаллизации и образуется высокодисперсный гидроксид. Этим методом можно получать порошки сферической, игольчатой, чешуйчатой или неправильной формы с размером частиц до 100 нм.

Основное преимущество золь-гель метода заключается в высокой степени гомогенизации исходных компонентов. Это достигается бла годаря растворению солей и оксидов исходных веществ в исходном растворе. Становится возможным получение продуктов, которые ха рактеризуются: монофазной кристаллической структурой, обладаю щей высокой степенью совершенства;

строго стехиометрическим со ставом;

отсутствием посторонних фаз.

В настоящее время ООО «НЭВЗ–Н» отработана лабораторная технология получения ряда оксидных порошков субмикронного и на нометрового диапазона размеров, с допирующими добавками: ZrO2, стабилизированный 3mol % Y2O3;

Al2O3, c 1 – 3 mol % MgO;

ZrO2, допированный 3mol % Y2O3 в сочетании с Al2O3.

К нано- и ультрадисперсным порошкам, актуальным для исполь зования в медицине, относятся и биосовместимые материалы, в част ности гидроксиапатит.

Нанокристаллический гидроксиапатит (ГАП) обладает повышен ной способностью адсорбировать белки, необходимые для жизнедея тельности клеток, а также избирательностью по отношению к функ циям клеток, образующих фиброзную и костную ткань.

Получить гидроксиапатит стехиометрического состава, высо кой чистоты и однородности можно тем же золь-гель методом, либо осаждением из водного раствора.

В проводимых исследованиях при выборе метода следовало руко водствоваться технологичностью последующих операций, предпола гающих нанесение ГАП на керамические и металлические поверхно сти имплантатов. Поскольку использование при покрытии порошка с дисперсностью в единицы микрона вызывает дополнительные тех нологические трудности, избрана технология механосинтеза с ис пользованием мощной планетарной мельницы.

В эксперименте в течение 12 минут помола в мельнице типа АПФ синтезирован ГАП, удовлетворяющий поставленной задаче.

Для получения изделий из ультрадисперсных материалов требу ется провести компактирование порошков. Наиболее применимы для этого технологии прессования в высоком вакууме, спекание под давлением, горячее изостатическое прессование и высокотемпера турная газовая экструзия. В последние годы применяется ряд новых технологий компактирования наноструктурных материалов. Напри мер, гидродинамическое или ударно-волновое компактирование, магнитно-импульсное прессование, компактирование с наложением ультразвукового воздействия, электроимпульсное и другие.

Однако при любом из методов компактирования возникают про блемы технологического характера. Одна из них это сохранение на нокристаллической структуры, предотвращение рекристаллизации и образования крупных пор, обеспечение равномерной плотности.

Другие, связанные с первой – наличие зон разной межзёренной плот ности, вследствие чего образуются объемы с различной объёмной усадкой, а также необходимость преодоления при прессовании боль шого межзёренного трения.

Износостойкость является важнейшим функциональным свой ством материала, отражающим комплекс его механических свойств.

В первую очередь, износостойкость чувствительна к неоднородности свойств материала.

Сравнительное исследование износостойкости керамики, прове денное в лабораторных условиях, показало, что для достижения вы сокой износостойкости необходимо уменьшение размера зерна для достижения высокой плотности изделия.

Керамические элементы эндопротезов суставов должны обеспечи вать высокую прочность и износоустойчивость на протяжении всего срока эксплуатации. Для этого решается задача определения условий и технологических режимов достижения высокой степени стойкости керамики к абразивному износу.

Выполненная нами работа позволяет решить проблемы получе ния высокоплотной, более чем 0,99 %относительно теоретической плотности, керамики с субмикронным размером зерна, путем син теза из нанопорошков, допированных редкоземельными элементами.

Для этого проводится исследование и установление зависимости влияния малых добавок оксидов магния, титана, церия и других эле ментов на полиморфные превращения, рекристаллизацию и уплотне ние Al2O3, ZrO2 при спекании плотных прессовок из нанопорошков.

Исследование влияния баротермической обработки на структуру и свойства композитной наноструктурированной керамики также на правлено на решение этой задачи.

Данная технология наиболее эффективна для деталей, изготовлен ных из наноразмерных керамических масс, причем уплотнение начи нается при 1200 оС, давлении 100 Мпа и времени экспозиции более 1 часа. В результате достигается более высокий предел прочности на изгиб, а также уменьшение скорости износа пары трения.

Потребность практической медицины в биосовместимых по крытиях может быть удовлетворена применением различных ме тодов формирования покрытий, таких как плазменное напыление, метод микродугового оксидирования, электрофорез, золь-гель или шликерный метод, биомиметический метод, метод распылительной сушки, магнетронное распыление (ВЧ-магнетронное распыление), детонационно-газовый метод и др. Каждый из этих методов имеет свои достоинства и недостатки.

Поскольку в проекте ведется разработка технологии производ ства биоактивного покрытия, отвечающая потребностям нанесения как на керамику, проводящую электрический ток выполненную на основе TiO2, так и непроводящую выполненную из алюмоцир кониевого композита, то наиболее близким методом является метод ВЧ-магнетронного распыления, позволяющий создать покрытие за данной наноразмерной толщины.

Результаты и обсуждение. В ходе работы были рассмотрены возможности получения нанопорошков керамических материалов методом осаждения и золь-гель методом, совместно с ИМЕТ РАН (Трусова Е.А.) проведено сравнение порошкообразных продуктов, полученных этими двумя методами.

1. Разработана технология, с применением «модифицированного»

золь-гель метода, для получения высоко- и ультрадисперсных порош ков оксидных композитов, отличающаяся использованием органиче ских комплексообразователей (осадителей) в составе реакционной смеси. Технология опробована на ряде растворов. Водные растворы исходных солей получали при температуре 60-65 оС при перемеши вании на магнитной мешалке (600 об/c) в течение 30-40 мин. Затем в растворы добавляли осадитель и перемешивали реакционную смесь при температуре 65-70 оС в течение 10-15 мин. После этого темпе ратуру повышали до 95-97 оС, и в этих условиях проводили упари вание маточного раствора. Полученный гель переносили в печь, где проводили термообработку в интервале температур 20-500/850 оС по ступенчатому графику. Подъем температуры проводили в течение 3-5 ч, выдерживая образцы на заключительном этапе в изотерме при 500/850 оС 1 ч.

2. Для обсуждения принят порошок шпинели Mg-Al-оксидного композита, полученного указанным методом. Проведенный анализ показывает, что этот композит представляет собой хорошо окристал лизованную двухфазную систему, состоящую из l -Al2O3 (61 вес.%) и MgAl6O10 (39 вес.%) с размером кристаллитов 7 и 2 нм, соответ ственно. При этом отмечено, что повышение концентрации исходных солей в 2 раза в маточном растворе не сказывается на фазовом соста ве и дисперсности получаемых композитных порошков.

3. Для получения порошка гидроксиапатита использован метод механосинтеза, который позволил синтезировать в течение предель но короткого времени без последующего отжига нанокристалличе ский гидроксиапатит заданного гранулометрического состава. Работа проведена по методике, разработанной ИХТТМ СО РАН (Чайки на М.В.).

4. В зависимости от соотношения структуры исходного фосфата и апатита, синтез осуществлялся через аморфное состояние реакцион ной смеси, либо на поверхности фосфата по топотаксическому меха низму (для топотаксических процессов требование сходства структур не ограничивается поверхностью раздела, а распространяется также и на примыкающие к ней объемы обеих фаз. Такое соответствие на блюдается, в частности, при нарастании МgА1204 на поверхности МgО: кислородная подрешетка оксида может, не прерываясь на гра нице, переходить в кислородную подрешетку шпинели).

5. Для создания керамического слоя на поверхности титановой основы протеза сустава в проекте использована технология микро плазменного воздействия, разработанная в Институте неорганиче ской химии СО РАН (Надолинный В.А., Киреенко И.Б.).

6. Проходящие в рамках этой технологии процессы микродуговой и дуговой обработки можно рассматривать как совокупность различ ных процессов, общим признаком которых является наличие высоко температурных химических превращений и транспортирования ве щества в дуге электрического разряда между электродами.

7. Особенности процесса микроплазменного оксидирования, та кие как высокие температуры в разрядных каналах и миграция ми кроплазменных разрядов по обрабатываемой поверхности, позволя ют получать на поверхности эндопротеза (или иного медицинского имплантата) биосовместимый керамический слой с ячеистой гради ентной структурой и уникальными свойствами – высокой твердо стью, износостойкостью, адгезионной прочностью и коррозионной стойкостью.

8. Для достижения высокой прочности и особенно трещиностой кости керамических материалов используют эффекты, связанные с полиморфным превращением диоксида циркония из метастабильной моноклинной и тетрагональной модификации в стабильную кубиче скую.

9. С учетом этого, был получен образец керамики с субмикронной структурой из наноразмерных порошков Al2O3 и ZrO2, с легирующи ми добавками, окончательная плотность которого обусловливается режимами термообработки (обжига) и, в особенности, финишной ба ротермической обработки.

Методы баротермической обработки керамических деталей – го рячего изостатического прессования – хорошо проявляют себя для получения массивных равноплотных компактов с гомогенной зерен ной структурой, какими являются элементы эндопротеза тазобедрен ного сустава. Эта часть исследования проведена в ООО «НЭВЗ–Н»

совместно с ИМЕТ РАН (Падалко А.Г.) и зарубежными центрами, в частности институтом Фраунхофера в Германии, и результаты по зволяют получить керамику с плотностью, близкой к теоретической плотности материала.

1. Создание биоактивного покрытия осуществляется методом магнетронного распыления. Процесс состоит в ионном травлении керамической мишени из стехиометрического ГАП в плазме высоко частотного разряда в среде аргона. Полученные в процессе ионного травления элементы переносятся к покрываемой поверхности, и об разуют плотное, однородное покрытие с высокой адгезионной проч ностью. Преимущество метода заключается в возможности нанесе ния покрытий, как с контролируемой кристаллической структурой, так и аморфных.

2. За счет этого, в технологии получения изделий из пористой био керамики важным нововведением является возможность выстилания открытых пор нанокристаллическим ГАП, при этом сами поры оста ются открытыми для биологических субстратов, контактирующих с имплантатом.

Заключение. Полученные результаты подтверждают перспектив ность создания новых керамических материалов, основанных на раз работанных композитах, получаемых композицией субмикронных порошков со специальными добавками.

Для достижения улучшенных эксплуатационных свойств, на всех технологических стадиях и в разрабатываемых режимах применяется комплекс современных подходов к принципам создания изделий ме дицинского назначения из наноструктурированной биосовместимой керамики, благодаря чему конечный продукт будет иметь принципи ально новые свойства по сравнению с металлическими эндопротеза ми и существующими керамическими аналогами.

Для получения высокоэффективной пары, обеспечивающей под вижность эндопротеза в течение длительного времени, разрабатыва ются технологические режимы и специализированный инструмент прецизионной обработки керамических деталей, что обусловливает достижение низких показателей шероховатости и высоких показате лей смачиваемости поверхности.

Использование в НИОКР достижений в области наноматериалов, открывает перспективу создания имплантатов, эндопротезов и их ча стей из наноструктурированных керамических материалов с высокой биосовместимостью и механическими свойствами.

Организация промышленного производства этих изделий при выполнении в ЗАО «НЭВЗ-КЕРАМИКС» комплексного проекта со вместно с ОАО «РОСНАНО» впервые в России позволит решать задачи доступной высокотехнологичной медицинской помощи в хи рургии позвоночника и суставов, челюстно-лицевой хирургии, сто матологии.

Список литературы:

1. А. И. Смирнов, В. А. Батаев, А. Ю. Ерошенко, В. С. Козырева, Е. В. Ле гостаева, Г. В. Лямина, Ю. П. Шаркеев. Влияние структурного состояния титана и циркония и кальций-фосфатных покрытий на их поверхности на коррозионное поведение в агрессивной среде. // Обработка металлов. – 2012. – № 3 (56). – С. 75–79.

2. Аронов А. М. Анализ источников и критериев риска применения ме дицинских изделий. – Новосибирск: Издательство ФГОУ ВПО «НГАВТ», 2010. – 202 с.3.

3. Аронов А.М., Пичугин В.Ф., Ешенко Е.В. и др. Тонкие кальций-фос фатные покрытия, полученные методом высокочастотного распыления и перспективы их применения в медицинской технике. // Медицинская техни ка. – 2008.- 3. – С. 18 – 22.4. А 4. Аронов А.М., Пичугин В.Ф., Твердохлебов С.И. Разработка и внедре ние новых медицинских изделий: учебное пособие для ВУЗов. – Томск: Из дательство Томского политехнического университета, 2010. – 238 с.

5. Кульков С.Н., Буякова С.П. Фазовый состав и особенности формирова ния структуры в нанокристаллическом ZrO2 // Российские нанотехнологии.

2007 г. № 1-2. С. 119-132.

6. Коллективная монография «Фундаментальные основы механической активации, механосинтеза и механохимических технологий» – Новоси бирск, Издательство СО РАН, 2009.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КОМПОЗИЦИОННОГО КОСТНО-ПЛАСТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА «ДЕПРОТЕКС»

В ОРТОПЕДИИ (ОПИСАНИЕ КЛИНИЧЕСКОГО СЛУЧАЯ) Т.И. Александров, И.А. Кирилова, С.И. Чорний, В.Т. Подорожная ФГБУ «Новосибирский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Минздрава России»

Аннотация. Описан клинический случай использования костно-пластического материала «Депротекс» при лечении остеобластокластомы основания средней фа ланги V пальца правой кисти отягощенной консолидирующимся патологическим переломом основания фаланги. Через 5 месяцев после операции рентгенологи чески определяется восстановление анатомической структуры и функции фаланги кисти. Материал «Депротекс» может быть рекомендован к использованию и при лечении ортопедической патологии у пациентов.

THE USE OF COMPOSITE OSTEOPLASTIC MATERIAL DEPROTEX IN ORTHOPAEDICS: CLINICAL CASE REPORT T.I. Aleksandrov, I.A. Kirilova, S.I. Chorniy, V.T. Podorozhnaya Novosibirsk Research Institute of Traumatology and Orthopaedics, Novosibirsk Abstract. A clinical case is presented describing the application of osteoplastic material Deprotex in the treatment of osteoblastoclastoma of the base of the right 5th nger middle phalanx burdened by the healed pathological fracture of the phalanx base. At ve month after surgery the X-ray evidence of the phalanx anatomical structure and function restoration was observed. Deprotex material may be recommended for using in the treatment of orthopedic pathology in patients.

Композиционные остеопластические материалы на основе тканей биологического происхождения достаточно широко используются в реконструктивной хирургии для восстановления структурной целост ности тканей опорно-двигательного аппарата. Потребность в биотка нях для реконструкции скелета, при костных опухолях, ревизионной артропластике в хирургической травматологии увеличилась за по следнее десятилетие. И это связано с недавними успехами в понима нии биологических процессов при трансплантации кости [2,8].

Композиционный костно-пластический материал «Депротекс»

приготовлен из аллогенных костных фрагментов после депротеи низации, коллагенсодержащего раствора и антибактериальных пре паратов по авторской методике [4,5]. Из публикаций по изучению репаративной регенерации губчатой кости при использовании костно пластического материала «Депротекс» в эксперименте известно, что использование материала «Депротекс» для остеопластики губчатой кости приводит к остеогенезу с формированием в срок наблюдения 30 суток костного регенерата, в 90 суток – к полному замещению де фекта органотипической костной тканью и ремоделированию в срок наблюдения до 180 суток.

Использование данного материала при лечении стоматологиче ской патологии у пациентов подтвердило эффективность материала при клиническом использовании. Мы использовали «Депротекс» для лечения ортопедической патологии у пациентки А., 37 лет с диагно зом: Остеобластокластома основания средней фаланги V пальца пра вой кисти, консолидирующийся патологический перелом основания средней фаланги V пальца правой кисти.

Из анамнеза заболевания известно, что 4 месяца назад имела ме сто травма V пальца правой кисти. Пациентка лечилась амбулатор но. При обращении в клинику рентгенологически выявлен перелом основания средней фаланги V пальца правой кисти, одномоментно выявлена остеобластокластома. Пациентке наложена гипсовая повяз ка и даны рекомендации по хирургическому лечению и восстановле нию целостности средней фаланги V пальца правой кисти.

Жалобы при поступлении: на опухолевидное образование в об ласти средней фаланги V пальца правой кисти.

Общее состояние пациентки удовлетворительное, со стороны вну тренних органов и систем патологии не выявлено.

При осмотре кисти признаков активного воспаления и следов опе ративного вмешательства не отмечалось. Объем движений в лучеза пястном и пястно-фаланговых суставах полный. Функциональные тесты выполняла в полном объеме, что свидетельствовало о сохран ности мышечно-связочного аппарата правой кисти.

Выполнена реконструктивно-восстановительная операция на основании средней фаланги V пальца правой кисти с замещением костного дефекта композиционным костно-пластическим материа лом «Депротекс».

В ходе операции был забран операционно-биопсийный материал для гистологического исследования. В препаратах имелся толстый пласт гиалинового хряща с крупными хрящевыми клетками, не равномерно и беспорядочно расположенными, вдающимися в под лежащую костную ткань;

субхондрально в толще костных балок было заключено хрящевое вещество. Структура костного матрикса неоднородна с очаговыми включениями гиалиноподобного хряща.

В спонгиозе между балками – миелоидно-жировой костный мозг, разрастание рыхлой фибро-ретикулярной эндостальной ткани.

По гистологической картине выставлен диагноз: костно-хрящевой экзостоз, хотя вероятнее всего имело место сращение патологическо го перелома по энхондральному пути с нарушением васкуляризации и формированием в зоне перелома энхондромы.

Для остеопластики использовали материал «Депротекс» №2-927- 0,3 грамма. Выполнено послойное ушивание раны, наложена асепти ческая повязка. Пациентке с первого дня после операции рекомендо ваны активные движения в суставах кисти.

В раннем послеоперационном периоде, отмечалась некоторая от ечность и болезненность в зоне оперативного вмешательства. Швы были сухие. Заживление первичным натяжением. Через 2 суток отек уменьшился, и пациентка была выписана домой на амбулаторное до лечивание.

При контрольном рентгенологическом исследовании через 5 ме сяцев после операции полость в основании средней фаланги V паль ца правой кисти отсутствует, контуры фаланги четко очерчены, вну тренняя структура фаланги соответствует трабекулярной структуре губчатой кости фаланги, отмечено восстановление анатомической целостности и губчатой структуры средней фаланги V пальца правой кисти. Движения в суставах в полном объеме, безболезненны.


Таким образом, использование композиционного костно-пласти ческого материала «Депротекс» у пациентов при ортопедической патологии приводит к восстановлению анатомической структуры и функции кости и материал может быть рекомендован к использова нию и при лечении подобной патологии у пациентов.

Список литературы:

1. Ардашев И.П., Подорожная В.Т., Кирилова И.А., Черницов С.В., Афо нин Е.А., Герасимов С.О. Передний спондилодез в эксперименте // Хирур гия позвоночника. – 2008. – №1. – С.66–73.

2. Кирилова И. А., Фомичев Н. Г., Подорожная В. Т., Трубников В. И.

Новые виды материалов для костной пластики в свете современных пред ставлений о костных трансплантатах // Хирургия позвоночника. – 2007. – № 2. – С. 66– 3. Кирилова И. А. Репаративная регенерация губчатой кости при ис пользовании костно-пластического материала «Депротекс» // Политравма. – 2011. – № 1. – С. 22– ИННОВАЦИОННАЯ ТРИБОЛОГИЧЕСКАЯ ПАРА В ГИБРИДНОМ ПРОТЕЗИРОВАНИИ ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА И.В. Бауэр, А.А. Ангельский ГБУЗ НСО Государственная Новосибирская областная клиническая больница, ФГБУЗ Центральная клиническая больница Сибирского отделения РАН, г. Новосибирск, Россия Аннотация. У 44 пациентов с деформирущим коксартрозом и медиальными переломами шейки бедра проводилось гибридное тотальное эндопротезирова ние тазобедренного сустава. В качестве трибологической пары в комбинации с полиэтиленом UHMWPE применялся инновационный материал OXINIUM, являю щийся металлом с поверхностью похожей на керамику. При сроках до 24 месяцев не обнаружено остеолиза вокруг имплантированных эндопротезов.

INNOVATIVE TRIBOLOGICAL PAIR OF HYBRID HIP REPLACEMENT I.V. Bauer, A.A. Angelskiy Novosibirsk State Regional Hospital, Central Clinical Hospital of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, Russia Abstract. Hybrid total hip arthroplasty was carried in 44 patients with a degeneration coxarthrosis and medial fractures of the femoral neck. Innovational material OXINIUM, a metal with a surface similar to the ceramics was used as tribological pairs in combination with polyethylene UHMWPE. Osteolysis was not observed around the implanted hip endoprosthesis for up to 24 months.

Наиболее частыми осложнениями при эндопротезировании тазобе дренного сустава являются асептическая нестабильность и воспаление в зоне оперативного вмешательства. Выбор трибологической пары, методов фиксации компонентов протеза и материалов из которых они изготовлены, являются не только основой предоперационного плани рования для хирургического лечения для восстановления двигатель ной активности пациентов с патологией тазобедренного сустава, но и первичным звеном профилактики послеоперационных осложнений и основой длительного выживания эндопротеза. Наиболее остро эта проблема стоит у пациентов старческого возраста с переломом шейки бедренной кости, у пациентов при крайних степенях коксартроза, осо бенно с дисплазией и при двусторонности поражения, а также при на личии обширных сопутствующих соматических проблем, влияющих, в том числе и на возникновение остеопороза и остеолиза. Обе группы пациентов объединяет проблема невысоких ожидаемых сроков выжи вания эндопротеза. Что позволяет делать предварительные выводы, изучая и ближайшие сроки после эндопротезирования [1,2,3].

Безусловно, краткосрочные клинические наблюдения не могут дать достоверных статистических данных выживаемости протезов, однако они могут помочь в предсказании долгосрочных ожиданий.

Применяя гибридный протез, мы исходили из наличия высокого уровня остеопороза у пациентов с одной стороны. Это требовало це ментной фиксации. И наличия высокого риска проведения анестезии, при наличии тяжелых сопутствующих заболеваний, при цементиро вании, с другой. Что требовало безцементной фиксации компонентов протезов.

При наличии двух взаимоисключающих требований наш компро мисс заключался в применении гибрида: цементной фиксации верт лужного компонента протеза и безцементной – бедренного компонен та. Мы применяли полиэтиленовую чашку Мюллера в вертлужной впадине. В области бедра у более молодых пациентов с деформирую щим артрозом: покрытую гидроксиаппатитом, безцементную, безво ротниковую, банановидную, плоскую ножку с эффектом компактиза ции окружающей кости. А у более пожилых пациентов с переломом шейки бедра – безцементную, безворотниковую ножку прямоуголь ного сечения с надежной ротационной стабильностью.

Основным фактором, ограничивающим выживаемость эндопро теза, является остеолиз из-за образования продуктов износа полиэти лена [3]. Для уменьшения количества частиц полиэтилена при функ ционировании искусственного сустава применяются новые пары трения, основанные не только на изменении свойств полиэтиленовой впадины, но и свойств материалов, из которых изготовлена головка эндопротеза. При выборе для пациентов трибологической пары мы хотели получить хорошее скольжение с низким уровенем образова ния полиэтиленого дебриса, гипоаллергенность пары, максимальное благоприятное соотношение «цена-качество».

С 2011 года начато применение в г. Новосибирске материала в виде сплава циркония и ниобия с коммерческим названием «Oxinium».

Из него изготовлена головка эндопротеза тазобедренного сустава.

Оксиниум (Oxinium) – оксидированный цирконий (Smith&Nephew, Memphis, TN) – новый тип материала с металлическим ядром и устой чивой к царапанию керамической поверхностью, используемой в мо дульных головках.

Производство Oxinium включает запатентованный процесс, в ко тором кислород поглощается металлом цирконием, в результате на гревания свыше 500°С. В результате поверхность трансформируется, приобретая гладкость керамики, и образуется превосходная несущая поверхность – керамизирующая поверхность сплава всего 5 мкм. Эта поверхность не является нанесенным слоем, т.е. покрытием, поэтому не расслаивается и не скалывается. Данный сплав состоит из 97,5 % циркония и 2,5 % ниобия. Глубжележащие слои остаются металличе скими, со свойственной металлу прочностью.

Этот циркониево-ниобиевый сплав (Zr.2.5.Nb) обладает меньшей степенью износа и образования частиц в паре с высокомолекулярным полиэтиленом. Керамическая циркониевая оксидная поверхность длительно работает без образования пор или полостей, химически связана с подлежащим металлическим субстратом, устойчива к про трузии и при тестировании на симуляторах тазобедренного сустава практически не определятся износ, в отличие от CoCr-головки в паре со стандартным или «кросс-линк» полиэтиленом. Оксиниум не цара пает полиэтилен, резко снижая абразивный износ. Как и у керамики, у оксиниума отсутствует окислительный износ головки. Oxinium со держит только 0,0035 % примеси никеля и является идеальным реше нием для пациентов с повышенной чувствительностью к металлам и аллергиями.

Таким образом, мы имеем на головке эндопротеза инновационный материал – сплав металлов циркония и ниобия (с биосовместимостью титана) с поверхностью, трансформированной в керамику. Материал обладает: свойствами металла – его прочностью и неспособностью раскалываться, как керамика, и при этом скользящая поверхность этого материала обладает свойствами керамики – её твердостью, прекрасным скольжением и смачиваемостью, низкой способностью образовывать абразивный дебрис при контакте с полиэтиленом, ги поаллергенностью [4,5,6].

Головка эндопротеза из Oxinium применялась нами в паре с полиэ тиленом Ultra-high Molecular Weight Polyethylene (UHMWPE) чашки вертлужной впадины. Возможности использовать полиэтиленовые чашки типа Highly Cross-linked Polyethylene (XLPE) мы не имели.

Нами инновационная трибологическая пара Oxinium – UHMWPE применена у 44 пациентов. При этом пациентов с медиальным пере ломом шейки бедра (3 тип по Garden) было 17. У больных деформи рующим остеоартрозом тазобедренного сустава мы применяли эту пару трения в 27 случаях.

В первой группе средний возраст пациентов составил 80 лет (71 93 года). В первой группе наблюдался во всех случаях остеопороз 5-3 фазы по Singh, в двух случаях имелась 2 фаза. Коэффициент Spo torno-Romagnoli у всех пациентов превышал 6. Все пациенты имели сопутствующие заболевания в виде патологии сердечно-сосудистой системы, в 2 случаях имелись астматические проблемы, в 3 случаях наблюдался сахарный диабет 2 типа. Сопутствующая патология тре бовала консультации терапевта и предоперационной терапии в срок до 14 дней. Применялась головка протеза из оксиниума диаметром 32 мм. Оперативное вмешательство проводилось под проводниковой анестезией. В послеоперационном периоде осложнений не наблюда лось. Нагрузка на оперированную конечность начиналась в срок от 14 дней.

Во второй группе возраст пациентов составил в среднем 56 лет (36-80 лет). У всех пациентов имелась 3-4 стадия коксартроза.

В 11 случаях имелся двусторонний процес. У 12 пациентов мы на блюдали диспластическую этиологию коксартроза в виде дисплазии вертлужной впадины, однако без вывиха бедренной кости. Укроче ние конечности не превышало 5 см у всех пациентов. Остеопороз имелся у 12 с коэффициентом Spotorno-Romagnoli 4-2. Значимая со путствующая патология имелась у 20 из 27 пациентов. И была пред ставлена сердечно-сосудистой, почечной и эндокринной патологией.

В 3 случаях имелась бронхиальная астма. У 2 пациентов проводилась коррекция второй конечности. Тем не менее, предоперационная под готовка в стационаре потребовалась только 4 пациентам. Применя лась головка из оксиниума 28 мм у 11 пациентов и 32 мм – у 16 па циентов. При оперативном вмешательстве проводилась свободная костная пластика вертлужной впадины из удаленной головки бедра в 4 случаях при интраоперационном определении недопокрытия чаш ки до 10-15 %. Нагрузка на оперированную конечность начиналась не ранее, чем через 30 суток с момента оперативного вмешательства.

Послеоперационное наблюдение в обеих группах проводилось в сроки 3-6-12-24 месяцев.

В сроки наблюдения до 24 месяцев мы не получили клинических и рентгенологических признаков нестабильности протеза. При рентге нологической оценке зон Gruen на бедре и зон DeLee-Charnley в зоне вертлужной впадины мы не обнаружили явных признаков остеолиза.


По шкале Harris Hip Score средний балл составил 82 единицы в первой группе пациентов и 86 во второй, что можно оценить как хороший [5].

Таким образом, использование трибологической пары трения в виде головки из инновационного материала Oxinium и чашки Мюл лера из полиэтилена UHMWPE дает обнадеживающие положитель ные результаты в ближайшие сроки после применения в гибридном протезировании тазобедренного сустава.

Список литературы 1. Ахтямов И.Ф. Хирургическое лечение дисплазии тазобедренного су става./ И.Ф Ахтямов., О.А. Соколовский. – Казань, Центр оперативной пе чати, 2008. – 371с.

2. Прохоренко В.М. Первичное и ревизионное эндопротезирование та зобедренного сустава. / В.М. Прохоренко. – Новосибирск: АНО «Клиника НИИТО», 2007 – 348 с.

3. Шубняков И.И. Достоинства и недостатки современных пар трения эндопротезов тазобедренного сустава (обзор иностранной литературы). / И.И. Шубняков, Р.М. Тихилов, М.Ю. Гончаров, А.С. Карпухин, А.В. Мазу ренко, Д.Г. Плиев, В.В. Близнюков // Травматология и ортопедия России. – № 3(57),2010. – с. 147-158.

4. Good V. Reduced wear with Oxidized Zirconium femoral heads/ Good V, Ries M, Barrack R, Widding K,Hunter G, Heuer D.// J Bone Joint Surg. Am. – 2003.- 85A.Supl.4. – p105-p110.

5. Harris W.H. Traumatic arthritis of the hip after dislocation and acetabu lar fractures: treatment of mold arthroplasty/ W.H. Harris // J. Bone Joint Surg. -1969. – Vol. 54A. – p 61-p76.

6. Lewis P.M. Comparison of mid-term clinical outcomes after primary total hip arthroplasty with Oxinium vs cobalt chrome femoral heads/ Lewis PM, Moore CA, Olsen M, Schemitsch EH, Waddell JP.// Orthopedics.- 2008.- Vol.31(Number 12 Suppl.2). – p109-p112.

ХАРАКТЕРИЗАЦИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ ПЛАЗМИД – КАНДИДАТОВ ДНК-ВАКЦИНЫ ПРОТИВ МЕЛАНОМЫ Е.А. Боробова, Е.В. Старостина, Д.В. Антонец ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Россия, Новосибирская обл., Кольцово Аннотация. С использованием оригинального программного обеспечения проведен дизайн двух Т-клеточных иммуногенов MEL-TCI-A0201 и MEL-TCI – кан дидатов ДНК-вакцины против меланомы. Первый «аллелеспецифический» имму ноген MEL-TCI-A0201 включает CTL-эпитопы, рестриктированные только одним алломорфом HLAA* 0201. Второй «универсальный» иммуноген MEL-TCI содер жит CTL-эпитопы, рестриктированные 12 мажорными аллельными вариантами молекул HLA I класса. Гены, кодирующие целевые иммуногены, получены хими ческим синтезом и клонированы в векторной плазмиде pcDNA3.1. Подлинность полученных рекомбинантных плазмид pMEL-TCI-A0201 и pMEL-TCI подтверждена рестрикционным анализом и секвенированием. Подтверждена экспрессия генов MEL-TCI и MEL-TCI-A0201 в клетках эукариот.

CHARACTERIZATION OF RECOMBINANT PLASMIDS – CANDIDATES DNA–VACCINES AGAINST MELANOMA E.A. Borobova, E.V. Starostina, D.V. Antonets The State Research Center of Virology and Biotechnology, Russia, Novosibirsk Region, Koltsovo Abstract. Design of two T-cell immunogens MEL-TCI-A0201 and MEL-TCI – candidates of DNA vaccine against melanoma was carried out using the original software. The rst «allele-specic» immunogen MEL-TCI-A0201 includes a CTLepitopes restricted with only one allomorph HLA-A*0201. The MEL-TCI, second «universal» immunogen, contains CTL-epitope restricted with 12 major allelic variants of HLA class I molecules. The genes encoding the target immunogens were obtained by chemical synthesis, and cloned into the vector plasmid pcDNA3.1. The authenticity of the developed recombinant plasmids pMEL-TCI-A0201 and pMEL-TCI was conrmed by restriction analysis and DNA sequencing. The expression of both MEL-TCI and MEL-TCI-A0201 genes in eukaryotic cells transfected with plasmids pMEL-TCI and pMEL-TCI-A0201 was conrmed.

Меланома – опухоль, развивающаяся из меланоцитов. Патология является наиболее агрессивным и опасным видом рака кожи, по скольку отличается чрезвычайно быстрым развитием и метастази рованием. Проблема лечения меланомы кожи продолжает оставать ся актуальной, так как увеличивается заболеваемость и смертность во всех странах мира и отсутствуют качественные успехи в лечении данной патологии [1]. В России ежегодный прирост заболеваемо сти меланомой составляет около 5 %. Значительный интерес пред ставляет иммуногенность клеток меланомы. Описан ряд высоко иммуногенных белковых антигенов, специфичных для меланомы и некоторых других видов рака, отсутствующих (или практически отсутствующих) в нормальных тканях организма человека. Из них известны такие антигены, как Melan-A/MART-1, gp100, тирозиназа, MAGE-3 и NY-ESO-1 и др. [2-4]. Иммунная система способна узна вать антигенные детерминанты опухолевых клеток. Дендритные клетки, известные как профессиональные антиген-представляющие клетки, способны процессировать опухолевые антигены и пред ставлять их на своей поверхности в комплексе с молекулами MHC цитотоксическим Т-лимфоцитам. Однако это не всегда приводит к эффективной элиминации опухолевых клеток, что обусловлено су ществованием ряда механизмов ухода опухоли из-под иммунологи ческого надзора.

Иммуногенность меланомных опухолей позволяет предположить возможность создания эффективной терапевтической вакцины или разработки эффективной иммунотерапевтической стратегии, исполь зующей последние достижения молекулярной иммунологии и клеточ ных технологий.

Одним из перспективных подходов к созданию эффективных и безопасных вакцин нового поколения является получение мозаичных полиэпитопных антигенов на основе широкого спектра протектив ных В- и/или Т-клеточных детерминант патогена [5]. В частности, одним из таких подходов является создание искусственных полиэ питопных ДНК-конструкций, оптимизированных для повышения эф фективности процессинга и включающих большое количество кон сервативных Т-клеточных эпитопов, взаимодействующих с широким спектром аллельных вариантов молекул MHC.

Цель исследования – провести характеризацию сконструирован ных рекомбинантных плазмид – кандидатов ДНК-вакцины против меланомы, содержащих множественные Т-клеточные эпитопы основ ных раковых антигенов меланомы. Подтвердить экспрессии генов, кодирующих эти целевые иммуногены, в эукариотических клетках.

Предсказание Т-клеточных эпитопов и дизайн последователь ностей двух искусственных Т-клеточных иммуногенов (MELTCI A0201 и MEL-TCI) осуществлялись с использованием программного обеспечения TEpredict и PolyCTLDesigner [5;

6]. Гены, кодирующие целевые иммуногены, синтезированы и затем клонированы в соста ве плазмиды pcDNA3.1, являющейся эукариотическим экспрессион ным вектором. Трансформацию клеточной культуры E. Coli DH5FI (№ B-593 из коллекции микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор»

Роспотребнадзора) рекомбинантными плазмидами проводили стан дартным методом [7]. Подлинность целевых генов подтверждена секвенированием на автоматическом секвенаторе. Правильность вставки гена, кодирующего полиэпитопный иммуноген, проверена с помощью рестрикционного анализа с использованием рестриктаз NheI, HindIII, BglII, PsiI. Анализ продуктов гидролиза проводили с помощью электрофореза в 1 % агарозном геле в аппарате фирмы «BioRad» для горизонтальных гелей при комнатной температуре и напряженности электрического поля 5 В/см в течение 1 ч. с даль нейшей визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете. На ращивание биомассы клеточной культуры E. coli DH5FI для препа ративного выделения рекомбинантных плазмидных ДНК проводили по стандартной схеме [7]. Препаративные количества рекомбинант ной плазмидной ДНК, пригодной для трансфекции эукариотических клеток, получали щелочным методом, включающим дополнительные стадии с рядом осаждений ацетатом аммония [8]. Для оценки чисто ты препарата ДНК измеряли оптическое поглощение при длинах волн 260-280 нм. Для оценки экспрессии целевых генов проводили трансфекцию клеток 293Т c использованием реагента FuGENE®HD («Roche») согласно инструкции производителя набора, когда коли чество пролиферирующих клеток в монослое достигало 60-70 %.

Клетки выращивали в среде DMEM c 10 % содержанием FBS.

В дальнейшем оценивался синтез специфической мРНК с помощью ОТ-ПЦР. Выделение суммарной РНК проводили из 0,8 106 клеток 293Т, трансфицированных плазмидами pMELTCI-A0201, pMEL-TCI, а также вектором pcDNA3.1 (отрицательный контроль) и плазмидой pcDNA-mart1, кодирующей полноразмерный белок MART-1 (по ложительный контроль), с использованием набора для выделения суммарной РНК фирмы «Promega» (cat. № Z3100) по прилагаемой инструкции с использованием соответствующих для данных генов праймеров. Наличие целевого белка в трансфицированных клетках определяли с помощью иммуноокрашивания и иммуноблота. Окра шивание цитоплазмы трансфицированных клеток осуществлялось с помощью антител Mab29F2 (Вектор-Бэст) к эпитопу белка р24 ВИЧ и конъюгата антител кролика против IgG мыши с пероксидазой хре на. При окрашивании использован субстрат 3,3'-диаминобензидина тетрагидрохлорид.

Результаты исследования и обсуждение Для дизайна полиэпитопных конструкций, на основе анализа ли тературы, выбрано шесть антигенов: Cancer / testis antigen 1 (CTA G1A, NY-ESO-1), Melanoma antigen recognized by T-cells 1 (MART1), MAGE-A1, MAGE-A11, MAGE-A3, MAGE-C1. С помощью про граммы TEpredict [6] в составе выбранных антигенов предсказаны Т-клеточные эпитопы (как CD8+ CTL, так и CD4+ Тh эпитопы), рестриктированные различными аллельными вариантами молекул HLA (Human Leukocyte Antigen) I и II классов. Предсказание CTL эпитопов проведено для наиболее распространенных в мировой по пуляции аллельных вариантов молекул HLA I класса (HLA-A*0101, A*0201, A*0301, A*1101, A*2402, A*6801, B*0702, B*0801, B*3501, B*1801, B*4402, B*2705). Из множества предсказанных пептидов выбрано 74 эпитопа, имеющих высокую или среднюю аффинность связывания с молекулой HLA I класса (для отбора пептидов ис пользовано пороговое значение pIC50 = 6,8, так что пептиды, для которых pIC50 6,8, исключались из рассмотрения).

Для наиболее эффективной индукции Т-клеточного ответа для проектирования целевых иммуногенов отобраны не только цитотоксические (CTL), но и Т-хелперные (Тh) эпитопы. Для этого с помощью программно го обеспечения TEpredict в составе выбранных раковых антигенов предсказаны Th-эпитопы с наиболее широкой специфичностью по отношению к молекулам HLA-II класса, которые были локализова ны в шести фрагментах длиной от 20 до 30 а.к.о. С помощью данной программы отобранные пептиды использовались для проектирова ния последовательностей двух искусственных Т-клеточных имму ногенов MEL-TCI и MEL-TCI-A0201 – кандидатов ДНК-вакцины против меланомы. Первый «универсальный» иммуноген (MEL-TCI) содержит множественные Т-клеточные эпитопы (как CD4+ Th, так и CD8+ CTL) опухолевых антигенов меланомы, рестриктированные множественными аллельными вариантами молекул HLA I класса, тогда как второй «аллелеспецифический» иммуноген содержит эпи топы, рестриктированные только одним алломорфом HLA-A*0201.

Выбор двух конструкций (универсальной и аллелеспецифической) обусловлен двумя разными подходами к созданию противораковых вакцин. Первая универсальная конструкция является прототипом вакцины для широкого применения, вторая аллелеспецифическая конструкция является прототипом одного из компонентов вакцины, предназначенной для индивидуализированной иммунотерапии, при которой лечение осуществляется с использованием набора аллеле специфических поли-CTL-эпитопных конструкций, несущих CTL эпитопы, рестриктированные аллельными вариантами молекул HLA, присутствующими у пациента. Чтобы оптимизировать MHC I- и / или MHC II-зависимую презентацию антигенов, в состав обеих кон струкций включены специальные сигнальные последовательности.

На N-конец обоих полиэпитопов был добавлен сигнальный пептид (Signal) белка HER2 (P04626) (MELAALCRWGLLLALLPPGAAS), направляющий образующийся полипептид в эндоплазматический ретикулум (ЭПР). На С-конец добавлен мотив RKRSHAGYQTI, включающий 11 последних аминокислотных остатков белка LAMP- человека, обеспечивающих перенаправление полипептида из секре торного пути на деградацию в лизосомы, где его пептидные фраг менты, образующиеся в результате протеолиза, могут связываться с рециркулирующими молекулами MHC II класса. Для оценки экс прессии и метаболической стабильности полученных иммуногенов в их состав был включен Gag-эпитоп из белка р24 ВИЧ-1, с которым связываются МАТ 29F2 и 30A6. Структуры спроектированных целе вых иммуногенов MEL-TCI-A0201 и MEL-TCI схематически можно представить в следующем виде: Signal_polyCTL-A0201_polyTh_Gag эпитоп_LAMP;

Signal_polyCTL_polyTh_Gag-эпитоп_LAMP. С помо щью программы Gene Designer спроектированы последовательности искусственных генов, кодирующих целевые иммуногены, которые оптимизированы для экспрессии в клетках человека. На 5’-конце перед инициирующим кодоном ATG добавлена последовательность Козак (CCGCCACC). В конце кодирующих последовательностей размещены три стоп-кодона (TAGTGATGA). Последовательности искусственных генов имеют длину 3 428 и 1 535 п. н. соответствен но. Гены, кодирующие универсальный (MEL-TCI) и аллелеспеци фический (MELTCI-A0201) иммуногены, получены химическим синтезом и клонированы в составе векторной плазмиды pcDNA3.1.

Кроме этих двух плазмид, кодирующих искусственные иммуногены, также сконструирована рекомбинантная плазмида pcDNA-mart1, ко дирующая полноразмерный раковый антиген MART1, являющий ся одним из маркеров клеток меланомы, которая использовалась в качестве положительного контроля при оценке активности целе вой ДНК-вакциной конструкции. Подлинность сконструированных ДНК-вакцин подтверждена рестрикционным анализом. Для под тверждения структуры синтезированных генов фрагменты плазмид, содержащие промоторную область и структурную часть целевых ге нов, секвенированы на автоматическом секвенаторе. Плазмиды на работаны и очищены в препаративном количестве в клетках E. coli DH5FI. На эукариотических клетках 293Т проведена трансфекция полученных плазмид.

Оценку экспрессии целевых генов проводили тремя способа ми: 1) по определению наличия синтеза специфических мРНК в клетках 293Т, трансфицированных плазмидами pMEL-TCI-A и pMEL-TCI;

2) по окрашиванию клеток с помощью МАТ к Gag эпитопу;

3) путем иммуноблоттинга. В первом случае суммарную РНК выделяли из трансфицированных клеток, затем получали кДНК в реакции обратной транскрипции. Полученную кДНК ис пользовали для проведения ПЦР с использованием специфических праймеров к соответствующим генам. Продукты реакции анализи ровали с помощью электрофореза в 1 % агарозном геле. На элек трофореграмме наблюдалось наличие амплифицируемых фрагмен тов, соответствующих исследуемым генам, что подтверждает их экспрессию. Окрашивание трансфицированных клеток проводили с помощью антител к р24 и конъюгата антител кролика против IgG мыши с пероксидазой хрена. Окрашивание цитоплазмы наблюда лось только при трансфекции плазмидами, несущими целевой им муноген, и не наблюдалось при трансфекции исходным вектором pcDNA3.1, что подтверждает экспрессию соответствующих генов.

Максимальное количество окрашенных клеток (25–26 %) наблю далось в случае трансфекции плазмидой рсDNA-mart1, кодирую щими полноразмерный белок MART1, тогда как в случае транс фекции плазмидами pMEL-TCI-A0201 и рMEL-TCI количество окрашенных клеток составило 1,6 %. Низкий уровень окрашен ных клеток по-видимому, обусловлен быстрой деградацией целе вых иммуногенов, поскольку они спроектированы таким образом, чтобы обеспечить высокую скорость процессинга, необходимую для освобождения ЦТЛ-эпитопов. Иммуноблоттинг проводили по сле разделения клеточных белков в полиакриламидном геле и пере носа на нитроцеллюлозную мембрану. Выявление специфических белков осуществляли с МКА 29F2 к эпитопу-маркеру, включенно му в состав всех исследуемых белков. Оказалось, что в трансфици рованных клетках присутствуют целевые белки, выявляемые МАТ 29F2, что подтверждает их синтез, направляемый целевыми ДНК вакцинными конструкциями. При этом результаты показывают, что в клетках, трансфицированных плазмидой pcDNA-mart1, МАТ 29F выявляют только полноразмерный раковый антиген MART1, тогда как в клетках, трансфицированных целевыми плазмидами pMEL TCI-A0201 и pMEL-TCI МАТ 29F2, выявляют не полноразмерные белки, а их короткие фрагменты. Полученные результаты являются вполне закономерными, поскольку иммуногены MEL-TCI и MEL TCI-A0201 проектировались так, чтобы обеспечить процессинг иммуногенов, необходимый для связывания освободившихся пеп тидов с молекулами MHC I и II классов и индукции ответов CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов.

Заключение С использованием оригинального программного обеспечения в со ставе шести раковых антигенов меланомы предсказаны Т-клеточные эпитопы, на основе которых проведен дизайн двух полиэпитопных иммуногенов MEL-TCI и MEL-TCI-A0201 и сконструированы реком бинантные плазмиды – кандидаты ДНК-вакцины против меланомы, кодирующие эти иммуногены. Структура плазмид охарактеризована рестрикционным анализом и секвенированием. Показано, что все по лученные ДНК-вакцинные конструкции обеспечивают синтез соот ветствующих мРНК и белков в культуре эукариотических клеток и являются перспективными кандидатами для дальнейших исследова ний их противоопухолевой активности.

Список литературы:

1. Давыдов М. И., Аксель Е. М. Статистика злокачественных новообра зований в России и странах СНГ в 2005 г. // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. 2007. Т. 18, № 2. С. 156.

2. Parmiani G. Melanoma Antigens and Their Recognition by T Cells // Keio J. Med. 2001. Vol. 50, № 2. P. 86–90.

3. Pandol F., Cianci R., Lolli S., Dunn I. S., Newton E.E., Haggerty T. J., Boyle L. A., Kurnick J. T. Strategies to Overcome Obstacles to Successful Im munotherapy of Melanoma // Int. J. Immunopathol. Pharmacol. 2008. Vol. 21, № 3. P. 493–500.

4. Halama N., Zoernig I., Jaeger D. Advanced Malignant Melanoma: Im munologic and Multimodal Therapeutic Strategies // J. Oncol. 2010. ID 689893.

doi:10.1155/2010/689893.

5. Bazhan S. I., Karpenko L. I., Ilyicheva T. N., Belavin P. A., Seregin S. V., Danilyuk N. K., Antonets D. V., Ilyichev A. A. Rational Design Based Synthetic Polyepitope DNA Vaccine for Eliciting HIV-specic CD8+ T Cell Responses // Mol. Immunol. 2010. Vol. 47, № 7–8. P. 1507–1515.

6. Антонец Д. В., Максютов А. З. TEpredict: программное обеспечение для предсказания Т-клеточных эпитопов // Мол. биол. 2010. Т. 44, № 1.

С. 130–139.

7. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование:

Пер. с англ. М., 1984.

8. Saporito-Irwin S. M., Geist R. T., Gutmann D. H. Ammonium Acetate Pro tocol for the Preparation of Plasmid DNA Suitable for Mammalian Cell Transfec tions // Biotechniques. 1997. Vol. 23, № 3. Р. 424–442.

КОСТНАЯ ПЛАСТИКА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОСТЕОМИЕЛИТЕ ПОЗВОНОЧНИКА И.Ю. Веретельникова, И.П. Ардашев, И.А. Кирилова Кемеровская Государственная Медицинская Академия, ФГБУ «Новосибирский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Минздрава России»

Аннотация. Разработана экспериментальная модель хронического остео миелита позвоночника у крыс, которая позволяет исследовать процессы репара тивного остеогенеза и влияние на него материла «Костма». При использовании костнопластического материала «Костма» происходит его биотрансформация и формирование костного блока в течение 6-ти месяцев после замещения остео миелитического дефекта позвоночника за счет непосредственного включения трансплантата в процессы восстановительного остеогенеза. Хирургическая сана ция остеомиелитического процесса в позвоночнике с использованием материала «Костма» способствует формированию костного блока и полному регрессу воспа лительных явлений с отсутствием рецидива и выздоровлением животного.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 9 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.