авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 || 3 | 4 |

«ЭКСТРАКТЫ МИЦЕЛИЯ ВЕШЕНКИ (Pleurotus ostreatus): МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ И ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ Под редакцией: ...»

-- [ Страница 2 ] --

5. Милевич Т.И. Использование экстракта вешенки для снижения гематотоксических эффектов у животных, вызванных противоопухолевыми препаратами / Т.И. Милевич, Е.Ф. Конопля, Л.А. Путырский, В.П. Герасименя, А.Е. Орлов // Экология человека в постчернобыльский период: Материалы IX Междунар. науч.-практич.

конф., Минск, 27-29 сентября 2001г. // Экологическая антропология.

Ежегодник. - Минск: Беларусь, комитет «Дзень Чарнобыля», 2001. С. 156-160.

6. Конопля Е.Ф. Использование экстракта вешенки для снижения гематотоксических эффектов у животных, вызванных противо опухолевыми препаратами / Е.Ф. Конопля, Т.И. Милевич, Л.А.

Путырский, А.Е. Машкович, В.П. Герасименя, А.Е.Орлов // Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника: Тез. докл. Междунар. науч. конф., Минск, 14- 16 ноября 2001г. – Минск. 2001.- С. 73-74.

7. V.P.Gerasimenya, O.V. Efremenkova, O.V. Kamsolkina et ol.

Antimicrobial and Antitoxical Action of Edible and Medicinal Mushroom P.

ostreatus (Jacg.: Fr.) Kumm. Extrasts./ International Journal of Medicinal Mushrooms, Vol. 4, p.p. 127-132 (2002).

8.Герасименя В.П., Орлов А.Е. Камзолкина О.В., Ефременкова О.В и др. Препарат, влияющий на тканевый обмен, и применение штамма гриба P. Ostreatus 1137 для его получения, патент РФ 2192873. 20.11.2002. Бюл. № 32.

9. Конопля Е.Ф. Антимикробная и антитоксическая активность экстрактов Pleurotus ostreatus (Fr.) Kumm/ Е.Ф. Конопля, Т.Н. Милевич, В.П.

Герасименя, А.Е. Орлов, О.В. Ефременкова, Т.А Богуш // Becцi HAH Беларусi Сер. мед.-бiял. Навук. 2002. - № 3. - С. 92-96.

10. Герасименя В.П. Потивоопухолевое действие экстракта мицелия вешенки. Экспериментальные и клинические исследования: инфор мационные материалы. Выпуск 3/ В.П. Герасименя, С.В. Захаров, Л.А.

Путырский и др. - М.: ООО «Инбиофарм», 2009. - 44 с.

ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИГИПЕРТЕНЗИВНОГО ДЕЙСТВИЯ ЭКСТРАКТА МИЦЕЛИЯ Pleurotus ostreatus (ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ) С.В. Захаров, В.П. Герасименя.

ООО «Инбиофарм», Москва, Россия.

Исследования проводились на базе Московского государ ственного университета им. М.В. Ломоносова (г. Москва) при участии ученых Научно-исследовательского института физико химической биологии им. А.Н. Белозерского Московского госу дарственного университета им. М.В. Ломоносова (г. Москва) доктора биологических наук Кирьянова Г.И., доктора биологических наук, профессора Полякова В.Ю. и специалистов ООО «Инбио фарм» (г. Москва) под научным руководством доктора биологи ческих наук, профессора Медведевой Н.А.

Артериальная гипертония является одним из самых распространенных заболевания индустриального общества. Она характеризуется повышением артериального системного давления, увеличением общего периферического сопротивления большого круга кровообращения, гипертрофией левого желудочка, и как результат всего этого - сердечной недостаточностью. Эссенсиаль ная форма системной гипертензии, которой страдают большинство заболевших, как правило, имеет сложную этиологию и патогенез.

Одним из основных звеньев увеличения артериального давления является увеличение периферического сопротивления кровеносной системы за счет увеличения активности ренинангиотензивной систе мы. Исходя из этого, современные антигипертензивные средства в большинстве своем являются, либо антагонистами рецепторов к ангиотензину II (лозаратан), либо блокаторами ангиотензин-превра щающего фермента (энап). Все эти препараты имеют большое коли чество побочных эффектов, к которым относятся нарушение работы желудочно-кишечного тракта, стимуляция кашлевого рефлекса, импо-тенция и т.д. [1-8]. В связи с этим поиск новых антиги пертензивных препаратов является безусловно актуальной проблемой как фундаментальных наук, так и практического здравоохранения.

1. Действия экстракта мицелия Pleurotus ostreatus (препарата ЭМВ) на развитие легочной гипертензии у крыс, вызванной введением монокроталина Известно несколько способов моделирования легочной гипертензии и острого повышения давления в легочных сосудах:

гипоксическая и монокроталиновая модели, гипероксия, увели чение давления в легочных сосудах с помощью введения антибиотика или липополисахаридов, острой синоаортальной денервации, использования линии крыс, предрасположенных к легочной гипертензии. Одной из наиболее распространенных моде лей ЛГ является монокроталиновая модель легочной гипертензии.

Монокроталин (МКТ) макроциклический пирролизидиновый алкалоид, экстрагированный из Crotalaria spectabilis. Многие пирро лизидиновые алкалоиды, продукты тропических растений несколь ких родов, токсичны для млекопитающих.

МКТ, вводимый в больших дозах (более 100 мг/кг, подкожно), как и многие другие токсины, вызывает некроз клеток печени. Однако в низких дозах (40-60 мг/кг, подкожно) МКТ селективно действует на эндотелий сосудов легких. Увеличение общей дозы МКТ приводит к нарушениям сосудов почек и тонкого кишечника. Сейчас общепринято мнение, что пневмотоксическим действием обладает не сам МКТ, а его производное, образующееся в печени, возможно, это дегидрогенированный продукт - монокроталин-пиррол. При введении животным МКТ-пиррол имеет более сильное токсическое действие на сосуды легких, чем МКТ, его действующая доза в 12- раз меньше, чем у его предшественника. Метаболит достигает легочных сосудов, накапливаясь в эритроцитах. В первую очередь метаболит МКТ действует на эндотелиальные клетки легочных сосудов, вызывая их воспаление с последующим ремоделингом сосудистой стенки. Для монокроталиновой легочной гипертензии (МКТ-ЛГ) характерно образование тромбов, особенно в посткапил лярном русле и воспаление легочных вен, что сближает модель с легочным веноокклюзионным синдромом - одним из патолого анатомических проявлений первичной ЛГ (Wilson et al., 1992).

Впервые МКТ был применен в 1965 году для создания модели «легочного сердца». До развития гипертрофии и недостаточности правых отделов сердца у крыс, обработанных МКТ, наблюдается тромбоцитопения, скопление макрофагов в адвентиции легочных сосудов и отек из-за повышенной проницаемости эндотелиальных клеток. Обработка МКТ подавляет активность систем ферментов, расположенных на поверхности эндотелиальных клеток сосудов легких - ангиотензин-превращающего фермента, активатора плаз миногена, систем обратного захвата и метаболизма серотонина.

Через 3-4 недели, в зависимости от дозы МКТ - 40 или 60 мг/кг развивается легочная гипертензия и наблюдается гипертрофия правого желудочка сердца (Wilson et al., 1992). К этому времени уменьшается воспалительная реакция - последствие токсического действия МКТ. Так, например, уменьшается содержание субстанции Р в легочной ткани, которое резко (примерно в 3 раза) возрастает в легких после монокроталиновой инъекции (Lai et al., 1996 ).

Монокроталиновая модель ЛГ является адекватной моделью ЛГ, на что указывает ряд авторов (Hilliker et al., 1985;

Kay et al., 1985;

Li et al., 1992;

Wilson et al., 1992;

Arcot et al., 1993;

Уейр и Ривс, 1995;

Madden et al., 1995;

Mathew et al., 1995;

Lai et al., 1996;

Morita et al., 1996;

Hill et al., 1997;

Prie et al., 1998;

Kim et al., 1999;

Давыдова, 2000;

Chen et al., 2001).

По данным международной медицинской информационной базы данных PubMed монокроталиновая модель применяется более чем в 400 публикациях для моделирования ЛГ. По своей этиологии и патофизиологическим проявлениям легочная гипертензия, вызыва емая МКТ близка к первичной легочной гипертензии у людей.

Материалы и методы В исследование участвовали 4 группы животных:

1. Группа МКТ - животным вводился монокроталин (МКТ).

Развитие заболевание происходит в течение 28 дней. После этого животных брали в физиологический эксперимент и гистологическое исследование правого желудочка сердца;

2. Группа МКТ+Э - животным вводился МКТ и в течение 3-х недель, начиная со второй недели развития заболевания, животным внутрижелудочно, через катетер вводили экстракт мицелия Pleuro tus ostreatus 1137 (препарат ЭМВ);

3. Группа К - животным внутрижелудочно в течение 3-х недель вводится экстракт мицелия Pleurotus ostreatus 1137 (препарат ЭМВ);

4. Группа ВК - животные в течение 4-х недель находятся в виварии - возрастной контроль.

В каждой группе использовалось по 10 животных. Производили измерение веса животных каждую неделю.

Физиологический эксперимент Через четыре недели животных брали в физиологический эксперимент, в ходе которого животных катетезировали в бедренную вену и артерию и правый желудочек сердца для измерения:

системного артериального давления (САД), частоты сердечных сокращений (ЧСС), давления в правом желудочке сердца (ПСД). Для анализа реактивности сердечно-сосудистой системы проводили регистрацию барорефлекторной регуляции - изменение ЧСС, в ответ на повышение или понижение АД. Для повышения АД был использован агонист альфа 1 адрено-рецепторов - фенилэфрин, а для понижения АД - донор оксида азота нитропруссид (НП) натрия.

После физиологического эксперимента производили взвеши вание правого отдела сердца животных, как показатель развития гипертрофии. Кроме того, были сделаны гистологические препараты правого желудочка сердца животных всех экспериментальных групп.

Эффект действия препарата был тестирован по изменению ПСД, САД, сдвигу барорефлекторной регуляции сердца, степени гипертрофии сердца и сосудов.

Результаты Результаты измерения веса крыс за все 4 недели эксперимента показали, что средний прирост веса животных в контрольной группе составил 0,113 ± 0,005 кг, что достоверно больше ( р0,05) прироста веса в группе, принимавшей препарат экстракт (0, 098 ± 0,006 кг).

У всех животных перед введением препарата ЭМВ производили регистрацию среднего и систолического системного давления, частоты сердечных сокращений, а также среднего и систолического давления в правом желудочке сердца.

Полученные данные показали, что в контрольной группе среднее артериальное давление составляло 121,18 ± 2,81 мм рт. ст., что было достоверно (р 0,05) выше артериального давления ( 103,67± 3,66) в группе животных, потреблявших препарат ЭМВ. Однако на давление в правом желудочке сердца у контрольных животных препарат ЭМВ не влиял. В контрольной (К) и экспериментальных (Э) группах среднее и систолическое право-желудочковое давление составляло 18,5 ± 2,64 и 16,57 ± 0,96, и 30,2 ± 2,3 и 30,53 ± 1, соответственно.

Анализ реактивности сердечно-сосудистой системы в ответ на введение гипертензивного агента - фенилэфрина в дозе 1,5 мкг/кг показал, что изменение среднего АД в ответ на введение ФЭ у животных в контрольной группе составило 27,73 ± 0,83 мм рт. ст., что достоверно больше ( р0,05) среднего АД, равного 21, 74 ± 2,22 мм рт.ст. в группе, принимавшей препарат ЭМВ.

Влияние ФЭ на систолическое артериальное давление имеет такую же тенденцию, как и на среднее артериальное давление. В контрольной группе (К) ответ составлял 34,14 ± 1,00 мм рт. ст., 21,31 ± 1,29 мм рт. ст., в экспериментальной группе (Э) - 16,7 ± 2,4 мм рт. ст.

В контрольной группе изменение ЧСС, в среднем, составляло 18,1 ± 0,9 мм рт. ст., что достоверно (р 0,05) ниже ЧСС в группе, потреблявших препарат ЭМВ ( 25, 7± 4,7 мм рт. ст.).

Достоверного изменения реакции давления в правом желудочке сердца у контрольных животных в ответ на ФЭ препарат ЭМВ не вызывал. В группах К и МКТ+Э среднее изменение правожелу дочкового давления (ПЖД) было равно 6,0 ± 1,1 и 7,9 ± 1,1 мм рт. ст.

соответственно.

Влияние ФЭ на систолическое ПЖД имеет такую же тенденцию, как и на среднее ПЖД. В контрольной группе ответ составлял 8,3 ± 0,8 мм рт. ст., 10,4 ± 1,2 мм рт. ст. в группе МКТ + Э;

3,6 ± 0,3 мм рт. ст.

Было показано, что изменение среднего АД в ответ на введение НП у животных в контрольной группе составил -18,7 ± 0,1 мм рт. ст., что достоверно больше ( р0,05) изменения среднего АД, равного 20, 8 ± 1,8 мм рт.ст. в группе, принимавшей препарат ЭМВ.

Влияние ФЭ на систолическое артериальное давление имеет такую же тенденцию, как и на среднее артериальное давление. В контрольной группе ответ составлял -25,5 ± 1,5 мм рт. ст., -20,3 ± 1,8 мм рт. ст. в группе МКТ+Э;

-16,8 ± 2,0 мм рт. ст.

В контрольной группе изменение ЧСС, в среднем, было равно 16,1 ± 0,7 мм рт. ст., что достоверно (р 0,05) не отличалось от такового (15, 7± 2,3 мм рт. ст.) в группе, потреблявших препарат ЭМВ.

Достоверного изменения реакции давления в правом желудочке сердца у контрольных животных в ответ на НП препарат ЭМВ не вызывал. В группах К и МКТ+Э среднее изменение правожелу дочкового давления было равно -3,5 ± 0,4 и -3,4 ± 0,6 мм рт. ст.

соответственно.

Влияние НП на систолическое ПЖД имеет такую же тенденцию, как и на среднее ПЖД. В контрольной группе ответ составлял -3,7 ± 0,4 мм рт. ст., -4,3 ± 1,0 мм рт. ст. в группе МКТ+Э;

-2,6 ± 0,3 мм рт. ст.

Из полученных данных видно, что коэффициент чувствитель ности барорефлекса в группе МКТ+Э достоверно не отличается от такового в контроле.

Обсуждение Полученные данные позволяют прийти к заключению о том, что хроническое применение препарата ЭМВ крысам с легочной гипертензией (монокроталиновая модель) не приводило к умень шению симптомов заболевания и улучшению состояния модельных животных.

В целом, полученные данные показывают, что у нормо тензивных крыс линии Wistar хроническое (в течение 3 недель) внутрижелудочковое применение экстракта приводило к умень шению следующих физиологических показателей: веса тела, среднего системного артериального давления, частоты сердечных сокращений, относительного веса левого желудочка и реактивности к сосудосуживающим факторам. При этом наблюдалось увеличение чувствительности барорефлекса к сосудосуживающим факторам и увеличение чувствительности к сосудорасширяющим факторам.

Полученные данные позволяют рассматривать препарат ЭМВ как потенциально возможное антигипертензивное средство.

2. Антигипертензивное действие препарата ЭМВ на модели нормотензивных крыс и линейных гипертензивных крыс линии SHR в острых опытах на бодрствующих животных Материалы и методы Согласно результатам, полученным на нормотензивных животных, хроническое внутрижелудочное введение препарата ЭМВ в течение трех недель приводило к достоверному снижению системного артериального давления, уменьшению реактивности к сосудосуживающим факторам и восстановлению рефлекторной регуляции АД. Это позволяет высказать предположение, что исследуемый препарат может обладать антигипертензивным действием. В связи с вышеизложенным было проведено исследование действия препарата ЭМВ при его внутривенном введении крысам линии SHR и нормотензивным животным (острый эксперимент).

В исследование вводилось 4 группы животных.

1. Группа Wistar - нормотензивные животные линии Wistar, которым в течение физиологического эксперимента вводили растворитель 4 раза с интервалом в 10 -15 мин.

2. Группа Wistar + ЭМВ - нормотензивные животные линии Wistar, которым в течение физиологического эксперимента вводили препарат ЭМВ последовательно 4 раза с интервалом 10 -15 мин.

3. Группа SHR - спонтанно гипертензивные животные линии SHR, которым в течение физиологического эксперимента вводили растворитель, 4 раза с интервалом в 10 -15 мин.

4. Группа SHR + препарат ЭМВ - спонтанно гипертензивные животные линии SHR, которым в течение физиологического эксперимента вводили препарат ЭМВ последовательно 4 раза с интервалом 10 -15 мин.

В каждой группе использовалось по 8 животных.

Животных брали в физиологический эксперимент, в ходе которого в бедренную вену и артерию вводили катетеры для измерения: системного артериального давления (САД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС). Для анализа реактивности сердечно сосудистой системы проводили регистрацию барорефлекторной регуляции сердечно-сосудистой системы - изменение ЧСС в ответ на повышение или понижение АД. Для повышения АД был использован агонист альфа1 адренорецепторов - фенилэфрин, а также пептид ангиотензин II, а для понижения АД - донор оксида азота нитропруссид натрия. Для изучения действия экстракта на реактивность сердечно-сосудистой системы животным повторно вводили фенилэфрин, нитропруссид натрия и ангиотензин II после четырехкратного введения либо растворителя, либо экстракт в дозах 10мг/кг в объеме 15 мкл. В качестве растворителя использовался физиологический раствор.

Об эффекте действия препарата судили по изменению САД, реакции АД и ЧСС на сосудосуживающие и сосудорасширительные факторы, а также барорефлекторной регуляции сердца.

Cхема эксперимента Результаты анализа реактивности сердечно-сосудистой системы в ответ на введение гипертензивного агента – фенилэфрина в дозе 1,5 мкг/кг.

В таблице 1 приведены результаты изменения среднего, систолического артериального давления и частоты сердечных сокращений (n=8) в ответ на введение фенилэфрина (ФЭ) в дозе 1, мкг/кг во всех экспериментальных группах нормотензивных (Wistar)и гипертензивных животных (SHR).

Таблица 1. Результаты изменения среднего, систолического артерииального давления и частоты сердечных сокращений в ответ на введение фенилэфрина (ФЭ) в дозе 1,5 мкг/кг в контрольных и опытных группах крыс Wistar и SHR.

до после Группы животных введения введения ФЭ ср сис чсс ср сис чсс Wistar реакции Среднее 23,7 25,1 -52,0 22,8 24,2 -53, Стан.откл. 1,1 2,0 5,7 1,1 2,0 5, Ош.сред.. 0,5 0,8 2,3 0,5 0,8 2, Wistar+Х реакции Среднее 23,9 25,5 -45,2 2,82 2,81 -0, Стан.откл. 2,9 2,6 4,1 1,44 1,45 6, Ош.сред.. 1,2 1,1 1,7 0,59 0,59 2, SHR реакции Среднее 23,0 24,8 -15,0 22,8 26,3 -21, Стан.откл. 4,3 4,9 3,7 5,1 4,1 2, Ош.сред.. 1,8 2,0 1,5 2,1 1,7 1, SHR+X реакции Среднее 23,5 26,7 -21,4 7,0 8,8 -8, Стан.откл. 9,9 11,2 12,4 4,6 4,7 4, Ош.сред.. 4,0 4,6 5,1 1,9 1,9 1, Показано, что изменение среднего АД в ответ на введение ФЭ у нормотензивных животных линии Wistar контрольной группы в начале эксперимента составило 23,7 ± 0,5 мм рт. ст., что достоверно не отличалось от изменения среднего АД, равного 22, 8 ± 0,5 мм рт.ст. в конце эксперимента, после 4-х кратного введения раство рителя. Сравнение изменения среднего АД в ответ на введение ФЭ у животных в группе Wistar+Х показало, что в начале эксперимента оно составляло 23,9 ± 1,2 мм рт. ст., а в конце опыта, после 4-х кратного введения препарата ЭМВ, - (2,8 ± 0,6) мм рт.ст, различия достоверны ( р0,05).

В группе животных линии SHR изменение среднего АД в ответ на введение ФЭ в начале эксперимента составило 23,0± 1,8 мм рт. ст., что достоверно не отличалось от изменения среднего АД, равного 22, 8 ± 2,1 мм рт.ст. после 4-х кратного введения растворителя.

Изменение среднего АД в ответ на введение ФЭ у животных в группе SHR+ препарат ЭМВ в начале эксперимента составило 23,5 ± 4,0 мм рт. ст., что достоверно отличалось (р0,05) от изменения среднего АД, равного 7,0 ± 1,9 мм рт.ст. после 4-х кратного введения экстракта.

Достоверных отличий в реакции АД на фенилэфрин после введения экстракта между нормо- и гипертензивными животными не было.

Рисунок 1 - Изменение среднего артериального давления у всех групп крыс в ответ на введение ФЭ в дозе 1,5 мкг/кг На рисунке 2 приведены данные изменения частоты сердечных сокращений в ответ на введение ФЭ в дозе 1,5 мкг/кг.

Рисунок 2 - Изменение частоты сердечных сокращений у всех групп крыс в ответ на введение ФЭ в дозе 1,5 мкг/кг В контрольной группе изменение ЧСС, в ответ на изменение АД, вызванное введением ФЭ, в среднем, было равно -52,0 ± 2,3 уд/мин, что достоверно не отличалось от ЧСС (-53,0 ± 2,3 уд/мин) в контрольной группе, после введения растворителя.

Изменение ЧСС у животных Wistar+ препарат ЭМВ достоверно (р 0,05) уменьшалось после введения препарата ЭМВ:

-45,2 ± 1,7 и -0,1 ± 2,5 уд/мин соответственно, что, по-видимому, связано с уменьшением реакции АД на введение фенилэфрина после 4-х кратного введения исследуемого препарата.

Уменьшение ЧСС в ответ на возрастание АД, вызванного введением ФЭ, у животных SHR достоверно изменялось по сравнению с нормотензивными животными линии Wistar как в начале эксперимента, так и после введения растворителя и составляло 15,0 ± 1,5 и -21,3 ± 1,0 уд/мин соответственно. Введение препарата ЭМВ у этих крыс достоверно снижало уменьшение ЧСС в ответ на изменение АД, вызванного введением фенилэфрина, с -21,4 ± 5,1 до -8,8 ± 1,9 уд/мин.

Этот эффект, по-видимому, так же, как и в случае нормо тензивных животных линии Wista,r связан с уменьшением реакции на ФЭ после 4-х кратного введения исследуемого препарата.

Необходимо отметить, что частота сердечных сокращений изменялась в достоверно меньшей степени у гипертензивных крыс в ответ на сравнимую реакцию АД, вызванную введением ФЭ, относительно нормотензивных животных линии Wistar, что соответствует литературным данным.

Таблица 2 - Коэффициент чувствительности барорефлекса в ответ на введение фенилэфрина в дозе 1,5 мкг/кг у всех экспери ментальных животных Wistar до введения после введения КБР Среднее -2,197732958 -2, Стан.откл. 0,269318908 0, Ош.сред.. 0,109948984 0, Wistar+Х КБР Среднее -1,901318178 -0, Стан.откл. 0,087963253 1, Ош.сред.. 0,035910848 0, SHR КБР Среднее -0,647979313 -0, Стан.откл. 0,063856462 0, Ош.сред.. 0,026069291 0, SHR+X КБР Среднее -0,898323161 -1, Стан.откл. 0,455337088 0, Ош.сред.. 0,185890588 0, Из полученных данных видно, что коэффициент чувстви тельности барорефлекса в группе Wistar+Х почти в 10 раз снижался после введения экстракта. Но в группе SHR+Э препарат достоверно не влиял на коэффициент барорефлекса. Введение растворителя не влияло на коэффициент барорефлекса ни контрольной, ни группы гипертензивных животных.

Результаты анализа реактивности сердечно-сосудистой системы в ответ на введение гипотензивного агента – нитропруссида натрия В таблице 3 приведены результаты изменения среднего, систолического артериального давления и частоты сердечных сокращений в ответ на введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 3мкг/кг для всех экспериментальных групп.

Таблица 3 - Результаты изменения среднего, систолического артериального давления и частоты сердечных сокращений в ответ на введение НП в дозе 3 мкг/кг у животных всех экспериментальных групп до после Группы животных введения введения НП ср сис чсс ср сис чсс Wistar реакции Среднее -21,7 -24,0 45,4 -22,6 -24,9 44, Стан.откл. 1,5 2,4 2,9 1,5 2,4 2, Ош.сред.. 0,6 1,0 1,2 0,6 1,0 1, Wistar+Х реакции Среднее -24,1 -24,1 46,5 -20,7 -18,8 39, Стан.откл. 3,3 3,5 2,9 2,3 3,0 11, Ош.сред.. 1,4 1,4 1,2 0,9 1,2 4, SHR реакции Среднее -23,2 -25,6 47,3 -23,4 -26,2 51, Стан.откл. 3,6 3,6 10,4 3,1 4,8 10, Ош.сред.. 1,5 1,5 4,2 1,2 2,0 4, SHR+X реакции Среднее -19,2 -20,9 38,6 -26,8 -28,0 49, Стан.откл. 4,4 6,0 5,7 5,6 6,3 10, Ош.сред.. 1,8 2,5 2,3 2,3 2,6 4, Показано, что уменьшение среднего АД в ответ на введение НП у крыс линии Wistar составил -21,7 ± 0,6 мм рт. ст., что достоверно не отличалось от реакции среднего АД, равного - 22, 6 ± 0,6 мм рт.ст.

после 4-х кратного введения растворителя. Введение препарата ЭМВ этим животным достоверно не влияло на изменение среднего АД в ответ на введение нитропруссида натрия.

В эксперименте уменьшение среднего АД у животных линии SHR достоверно (р 0,05) увеличивалось после 4-х кратного введения препарата ЭМВ с -19,2 ± 1,8 до -26,8 ± 2,3 мм рт.ст., соответственно.

Введение растворителя не влияло на данный показатель у гипертензивных животных. Изменение среднего АД у гипертензивных животных, до введения экстракта, достоверно не отличалось от изменения АД у крыс линии Wistar.

Достоверно большее изменение среднего АД у животных SHR+препарат ЭМВ после введения экстракта в ответ на введение нитропруссида натрия, в то время как у нормотензивных животных линии Wistar препарат не оказывал влияния на изменение АД.

Рисунок 3 - Изменение среднего АД у крыс в ответ на введение НП в дозе 3 мкг/кг во всех экспериментальных группах животных В группе крыс линии Wistar изменение ЧСС, в среднем, было равно 45,4 ± 1,2 уд/мин, что достоверно не отличалось от изменения ЧСС (44,4± 1,2 уд/мин) в этой же группе, после введения растворителя. Изменение ЧСС у животных Wistar+ препарат ЭМВ достоверно не изменялось после введения 4-х кратного введения экстракта, 46,5 ± 1,2 и 39,2 ± 4,6 соответственно.

Изменение ЧСС у животных SHR достоверно не изменялось после 4-х кратного введения растворителя и составляло 47,3 ± 4,2 и 51,4 ± 4,1 уд/мин соответственно. Введение экстракта достоверно не изменяло ответ ЧСС на введение НП (с 38,6 ± 2,3 до 49,2 ± 4, уд/мин соответственно).

Достоверных отличий между изменениями ЧСС в ответ на введение нитропруссида натрия у гипертензивных и нормотен зивных крыс обнаружено не было. Введение экстракта не влияло на изменение ЧСС в ответ на введение НП как у крыс линии Wistar, так и у крыс линии SHR.

Рисунок 4 - Изменение частоты сердечных сокращений у крыс в ответ на введение НП в дозе 3 мкг/кг во всех экспериментальных группах Таблица 4 - Коэффициент чувствительности барорефлекса в ответ на введение нитропруссида натрия в дозе 3 мкг/кг для всех экспериментальных групп животных.

КБР Wistar до введения после введения реакции Среднее -2,09835318 -1, Стан. откл. 0,129245441 0, Ош. сред. 0,05276423 0, Wistar +Х реакции Среднее -1,961308217 -1, Стан. откл. 0,307792384 0, Ош. сред. 0,125655714 0, SHR реакции Среднее -2,117815462 -2, Стан. откл. 0,13766966 0, Ош. сред. 0,056203403 0, SHR+X реакции Среднее -2,058939228 -1, Стан. откл. 0,330621567 0, Ош. сред. 0,134975689 0, Из полученных данных видно, что коэффициент чувстви тельности барорефлекса достоверно не изменялся в группе крыс Wistar и в группах крыс линии SHR как до, так и после введения растворителя или введения препарата ЭМВ.

Результаты анализа реактивности сердечно-сосудистой системы в ответ на введение гипертензивного агента – ангиотензина II В таблице 5 приведены результаты изменения среднего, систолического артериального давления и частоты сердечных сокращений в ответ на введение ангиотензина II в дозе 1 нмоль/кг для всех исследовавшихся групп животных.

Таблица 5 - Результаты изменения среднего, систолического артериального давления и частоты сердечных сокращений в ответ на введение ангиотензина II в дозе 1 нмоль/кг.

Группы животных до введения после введения Анг II ср сис чсс ср сис чсс Wistar реакции Среднее 54,4 58,9 -111,8 53,5 58,0 -112, Стан.откл. 4,2 6,8 11,8 4,2 6,8 11, Ош.сред.. 1,7 2,8 4,8 1,7 2,8 4, Wistar +Х реакции Среднее 58,4 60,7 -121,3 40,5 42,4 -123, Стан.откл. 7,4 5,0 31,5 4,9 3,4 14, Ош.сред.. 3,0 2,0 12,9 2,0 1,4 6, SHR реакции Среднее 50,6 61,9 -29,1 55,1 61,6 -39, Стан.откл. 3,3 5,2 5,1 14,6 16,7 11, Ош.сред.. 1,3 2,1 2,1 6,0 6,8 4, SHR+X реакции Среднее 47,9 63,5 -31,5 41,5 51,0 -28, 4,9 6,3 12,1 7,9 9,3 8, Стан.откл.

2,0 2,6 4,9 3,2 3,8 3, Ош.сред..

Из полученных результатов следует, что изменение среднего АД в ответ на введение Анг II у животных в группе Wistar составил 54,4 ± 1,7 мм рт. ст., что достоверно не отличалось (р0,05) от изменения среднего АД, равного 53, 5 ± 1,7 мм рт.ст. после введения растворителя. Изменение среднего АД в ответ на введение Анг II у животных в группе Wistar + препарат ЭМВ составил 58,4 ± 3,0 мм рт.

ст., что достоверно отличалось (р0,05) от изменения среднего АД, равного 40,5 ± 2,0 мм рт.ст. после введения препарата ЭМВ.

В группе животных линии SHR изменение среднего АД в ответ на введение Анг II составило 50,6± 1,3 мм рт.ст., что достоверно не отличалось ( р0,05) от изменения среднего АД, равного 55, 1 ± 6, мм рт.ст. после введения растворителя. Изменение среднего АД в ответ на введение Анг II у животных в группе SHR+ препарат ЭМВ составил 47,9 ± 2,0 мм рт. ст., что достоверно не отличалось от изменения среднего АД, равного 41,5 ± 3,2 мм рт.ст. после 4-х кратного введения препарата ЭМВ.

Достоверных отличий в реакции АД на Анг II после введения экстракта между нормо- и гипертензивными животными не было, но наблюдалось меньшее увеличение среднего АД у крыс линии SHR в ответ на введение Анг II до введения веществ.

Рисунок 5 - Изменение среднего АД у крыс в ответ на введение АнгII в дозе 1 нмоль/кг у всех экспериментальных групп На рисунке 6 приведены данные изменения частоты сердечных сокращений в ответ на введение ФЭ в дозе 1,5 мкг/кг.

Рисунок 6 - Изменение среднего АД у крыс в ответ на введение АнгII в дозе 1 нмоль/кг для всех экспериментальных групп В группе Wistar изменение ЧСС, в среднем, было равно -111,8 ± 4,8 уд/мин, что достоверно (р 0,05) не отличалось от ЧСС (-112,8 ± 4,8 уд/мин) в группе Wistar, после введения растворителя.

Изменение ЧСС у животных Wistar + препарат ЭМВ достоверно не изменялось после введения экстракта, -121,3 ± 12,9 и -123,2 ± 6, соответственно.

Изменение ЧСС у животных SHR достоверно не изменялось после введения растворителя и составляло -29,1 ± 2,1 и -39,1 ± 4, уд/мин соответственно. Введение препарата ЭМВ также не влияло на изменение ЧСС в ответ на Анг II и составило -31,5 ± 4,9 и -28,8 ± 3,5 уд/мин соответственно. Изменения ЧСС в группах SHR и SHR+ препарат ЭМВ были достоверно меньше, примерно в 4 раза, по сравнению с контрольными группами.

Частота сердечных сокращений изменялась в достоверно меньшей степени у гипертензивных крыс, относительно нормо тензивных. Введение препарата ЭМВ не влияло на изменение ЧСС в ответ на введение Анг II как у крыс линии Wistar, так и у крыс линии SHR.

Результаты анализа реактивности сердечно-сосудистой системы в ответ на однократное введение растворителя и препарата ЭМВ В таблице 6 приведены результаты изменения среднего, систолического артериального давления и частоты сердечных сокращений в ответ на введение растворителя и экстракта в дозах 10мг/кг для всех экспериментальных групп.

Таблица 6 - Результаты изменения среднего, систолического артериального давления и ЧСС, в ответ на введение растворителя и препарата ЭМВ в дозах 10мг/кг для всех экспериментальных групп Группы животных ср сис чсс Wistar реакции Среднее -1,9 -2,1 3, Стан.откл. 0,6 0,5 2, Ош.сред.. 0,2 0,2 0, Wistar +Х реакции Среднее -15,2 -15,7 18, Стан.откл. 8,0 7,0 9, Ош.сред.. 3,3 2,9 4, SHR реакции Среднее -3,3 -4,3 3, Стан.откл. 0,9 0,5 2, Ош.сред.. 0,4 0,2 1, SHR+X реакции Среднее -13,1 -16,5 9, Стан.откл. 3,0 3,5 4, Ош.сред.. 1,2 1,4 2, Показано, что изменение среднего АД в ответ на введение растворителя у животных в группе Wistar составил -1,9 ± 0,2 мм рт.ст., что достоверно отличалось от изменения среднего АД, равного -15,2 ± 3,3 мм рт.ст. после введения препарата ЭМВ.

Изменение среднего АД у животных линии SHR было достоверно (р 0,05) больше в ответ на введение препарата ЭМВ, чем на растворитель, -13,1 ± 1,2 и -3,3 ± 0,4 мм рт.ст. соответ-ственно.

Изменение среднего АД у гипертензивных животных на введение препарата ЭМВ достоверно не отличалось от изменения АД в группе животных линии Wistar.

Достоверно большее изменение среднего АД у животных SHR и Wistar на введение препарата ЭМВ, чем на растворитель.

Необходимо отметить, что гипотензивный эффект на введение экстракта в дозе 10мг/кг веса сохранялся по величине и длительности и при последующих трехкратных введениях препарата как в группе гипертензивных, так и в группе нормотензивных животных.

Рисунок 7 - Изменение среднего АД у крыс в ответ на введение растворителя и экстракта в дозах 10 мкг/кг для всех эксперимен тальных групп На рисунке 8 приведены данные изменения частоты сер дечных сокращений в ответ на введение растворителя и препарата ЭМВ в дозах 10 мкг/кг.

Рисунок 8 - Изменение частоты сердечных сокращений у крыс в ответ на введение растворителя и препарата ЭМВ в дозах 10 мкг/кг для всех экспериментальных групп Согласно полученным результатам, в группе Wistar изменение ЧСС, в ответ на введение растворителя, в среднем, было равно 3,0 ± 0,9 уд/мин, что достоверно не отличалось от ЧСС (3,9 ± 1,1 уд/мин) в группе SHR. Изменение ЧСС у животных Wistar+препарат ЭМВ достоверно (р0,05) увеличивалось после введения препарата ЭМВ и составляло 8,8± 4,0 уд/мин, что, в свою очередь, было достоверно больше изменения ЧСС в ответ на введение экстракта в группе SHR+ЭМВ: 9,5 ± 2,0 уд/мин.

Изменение ЧСС у животных SHR было достоверно больше на введение препарата ЭМВ.

Достоверных отличий между изменениями ЧСС в ответ на введение растворителя у гипертензивных и нормотензивных крыс обнаружено не было. Введение препарата ЭМВ достоверно увеличивало изменение ЧСС в ответ на его введение, чем на введение растворителя. Данное изменение в большей степени было выражено у крыс группы Wistar Обсуждение Внутривенное однократное введение экстракта в дозе 10 мг/кг веса животного вызывает достоверное уменьшение среднего АД как в группе нормотензивных, так и в группе гипертензивных животных.

Достоверных отличий в реакции АД между крысами Wistar и SHR обнаружено не было, т.е. гипотензивный эффект экстракта при остром введении не зависит от величины исходного артериального давления. Гипотензивный эффект сохранялся по величине и длительности при последующих трехкратных введениях экспери ментальным животным.

Анализ изменения величины гипертензивного ответа на введение фенилэфрина до и после 4-х кратного введения экстракта показал достоверное уменьшение этой реакции как в группе гипертензивных, так и в группе нормотензивных животных. Достоверных отличий в реакции уменьшения ответа на ФЭ после введения препарата ЭМВ между группами животных Wistar и SHR выявлено не было, т.е. эффект не зависел от исходной величины АД.

Изучение влияния экстракта на гипертензивный эффект, вызываемый введением Aнг II, выявило достоверное уменьшение этой реакции у нормотензивных животных, по сравнению с гипер тензивными животными, у которых отличия были недостоверны.

У гипертензивных животных 4-х кратное введение препарата ЭМВ достоверно потенцировало гипотензивный эффект на веление донора NO - нитропруссида натрия. У нормотензивных животных подобный эффект выявлен не был.

Таким образом острое введение препарата ЭМВ в дозе 10 мг/кг веса вызывает достоверное уменьшение среднего АД у бодрствующих животных, которое не зависит от исходной величины АД. Наблюдается также после 4-х кратного введения препарата ЭМВ уменьшение гипертензивной реакции на агонист альфа адренорецепторов - фенилэфрин. Эффект также не зависит от величины исходного АД. Кроме того, у нормотензивных животных наблюдается уменьшение гипертензивной реакции на экзогенное введение эндогенного пептида - Aнг II. Таким образом, показано наличие гипотензивного эффекта и уменьшение реактивности на ФЭ и Aнг II при остром введении препарата ЭМВ у нормотензивных бодрствующих животных.

Полученные результаты позволяют рассматривать их как возможную модель для последующего тестирования гипотензивной активности фракций изучаемого препарата ЭМВ.

Список литературы:

1. Бонарцев А.П. Влияние хронического введения аминогуанидина на реактивность легочных сосудов у крыс с монокроталиновой моделью легочной гипертензии / А.П. Бонарцев, А.В. Славуцкая, А.Б.

Постников, Н.А.Медведева. // Российск. Физиол. Журн. 90(7), - 2004.

–С. 908-915.

2. Cingolani О.Н. et al. Increased systolic performance with diastolic dysfunction in adult spontaneously hypertensive rats / Hypertension.41:

p.p. 249-254, 2003.

3. Huang В.S. Leenen F.H.H. Brain ouabain, sodium and arterial baroreflex in spontaneously hypertensive rat / Hypertension 25: p.p.

814-817, 1995.

4. Di Lu, Raizada M.K. et al., Chronic control of hogh blood pressure in spontaneously hypertensive rats. / Hypertensive.30: p.p. 363-383,1997.

5. M.A.Grafov, S.A.Gavrilova, A.Yu.Rubina, V.P.Masenko, N.A.

Medvedeva Adtive immunization against endothelin-1 is associated with a decrease in plasma endothelin-1 and change in vascular reactivity / Joumal of cardiovascular pharmacology 36(suppl.l): p.p. 132 - 134, 2000.

6. Yu Guolong et al Apoptosis, myocardial fibrosis and angiotensin II in the left ventricle of hypertensive rats treated with fosinopril or losartan./ Chinese Medical Journal 115(9): p.p. 1287-1291, 2002.

7. Zhang J, Leenen F.H.H. ATI receptor blockers prevent sympathetic hyperactivity and hypertension by chronic ouabain and hypertonic saline./Am J Heart Circ Physiol 280: p.p. 1318-1323, 2001.

8. Zelezna B., Veselsky L., et al., Influence of active immunization against angiotensin ATI or AT2 receptoon hypertension development in young and adult SHR/Physiol.Res.48: p.p. 259-265, 1999.

ИЗУЧЕНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО И ПРОТИВОВИРУСНОГО ДЕЙСТВИЯ ЭКСТРАКТА МИЦЕЛИЯ Pleurotus ostreatus 1137 НА ИНФЕКЦИЮ, ВЫЗВАННУЮ ВИРУСОМ ПРОСТОГО ГЕРПЕСА, В КЛЕТОЧНОЙ СИСТЕМЕ in vitro Климова Р.Р., Чичев Е.В., *Захаров С.В., *Герасименя В.П., Кущ А.А.

ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского», Минздрава России, Москва;

* ООО «Инбиофарм», Россия, Москва.

Введение Вирус простого герпеса (ВПГ) чрезвычайно широко распрос транен в человеческой популяции и может поражать различные органы и ткани. У лиц со сниженным иммунитетом герпесвирусные инфекции часто приводят к тяжелым осложнениям, нередко - со смертельным исходом. Особую опасность ВПГ-инфекция представ ляет для беременных женщин и для новорожденных детей. В настоящее время существует несколько патентованных лекарст венных препаратов, применяемых при лечении герпесвирусных инфекций, однако большинство из них не разрешены для лечения беременных женщин и новорожденных детей. Основными недос татками химиопрепаратов являются их высокая токсичность, ограниченная биодоступность и при длительном использовании развитие лекарственной устойчивости [1-7]. В связи с этим в настоящее время проводится поиск новых средств и новых схем терапии, позволяющих избежать проявления побочных токсических эффектов при сохранении высокой противовирусной эффективности.

Цель работы состояла в изучении действия экстракта мицелия Pleurotus ostreatus 1137 (препарата ЭМВ) на клетки культуры, а также способности подавлять инфекционную активность вируса простого герпеса (ВПГ) при разных схемах его введения, в том числе в сочетании с противоопухолевыми препа-ратами доксорубицином и циклофосфаном.

Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить цитотоксические свойства препарата ЭМВ in vitro;

- провести анализ действия препарата ЭМВ на ВПГ-инфекцию при однократном введении препарата в клеточную культуру;

сравнить противовирусный эффект препарата ЭМВ при однократном и при повторном (двукратном) внесении в культуру клеток;

- изучить цитотоксическое действие доксорубицина и циклофос фана на клетки культуры;

- определить противовирусные свойства препарата ЭМВ при сочетанном действии с доксорубицином и циклофосфаном.

Материалы и методы Клетки В экспериментах использовали монослойную культуру клеток почек зеленой мартышки перевиваемой линии Vero, полученных из коллекции клеточных культур ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И.

Ивановского» Минздрава России. Клетки Vero не проявляют онкогенных свойств и не образуют злокачественные опухоли при введении животным. Клетки выращивали в минимальной среде Игла (ПанЭко, Россия), содержащей 10% сыворотки эмбрионов коровы (ЭТС) (ПанЭко, Россия), 2 мМ глутамина, 50 мкг/мл гентамицина.

Репродукция вируса Для получения необходимого количества вируса использовали референс штамм F ВПГ типа 1, любезно предоставленный проф.Л.Перейра (L.Pereira), США. Вирус поддерживали путем пассирования, используя культуру клеток Vero. Инфекционная множественность (ИМ) инокулята составляла 0,01 бляшко образующих единиц на 1 мл (БОЕ/мл). Вирус вносили в культуральные флаконы объемом 250 мл (Costar, США). Адсорбцию вируса проводили в течение 1 часа при 37 0С. В качестве поддерживающей среды использовали среду Игла с 2% ЭТС. Клетки инкубировали при 370С до выявления морфологических признаков цитопатогенного действия (ЦПД). Сбор культуральной жидкости проводили при обнаружении признаков ЦПД в 90% клеток (в среднем, через 72 часа). Все этапы культивирования проводили в CO2-инкубаторе (Sanyo, Япония) при 370С в атмосфере, содержащей 5% CO2.

Получение вируссодержащей культуральной жидкости Культуральную жидкость, собранную от зараженных клеток и содержащую ВПГ1, освобождали от крупных клеточных фрагментов путем центрифугирования при 2000 об/мин. в течение 10-15 мин., используя центрифугу MR1812 (Jouan, Франция). Отбирали пробу надосадочной культуральной жидкости и определяли инфекционную активность содержащегося в ней вируса как описано ниже.

Определение инфекционной активности ВПГ Инфекционную активность ВПГ1 определяли в культуре клеток Vero модифицированным методом бляшек. Об активности судили по последнему разведению (титру) вируса, при котором наблюдали вирусспецифические бляшки - очаги инфицированных клеток, образующих группы увеличенных в размерах слившихся клеток поликариоцитов. Для титрования готовили возрастающие десяти кратные разведения вируса, суспензии вносили на монослой клеток Vero по 0,2 мл в 24-х луночные планшеты (Costar, США), в которые за 24 часа до этого высаживали клетки культуры. Панели с материалом инкубировали при 370С до появления вирусспеци фических бляшек, в среднем, время инкубации составляло 7 дней.

Титр вируса выражали в количестве бляшкообразующих единиц, содержащихся в 1 мл (БОЕ/мл), используя формулу А=а *b/v, где А число бляшкообразующих единиц в 1 мл;

a - среднее число бляшек на одну лунку;

b - разведение вируса;

v - объём вносимого вирус содержащего материала.

Исследуемый экстракт мицелия Pleurotus ostreatus (препарат ЭМВ) Исходное количество предоставленного препарата ЭМВ составляло 1г. Препарат разводили в ростовой среде без сыворотки до концентрации 100 мг/мл и использовали как исходную при проведении опытов.

Определение цитотоксического действия экстракта мицелия Pleurotus ostreatus 1137 (препарата ЭМВ) Для изучения цитотоксического действия препарата ЭМВ использовали 7 концентраций вещества - 50 мг/мл, 20 мг/мл, мг/мл, 1 мг/мл, 0,1 мг/мл, 0,01 мг/мл и 0,001 мг/мл. Данные рабочие разведения готовили в ростовой среде, содержащей 2% ЭТС.

Препарат вносили в лунки 24-панелей на монослой клеток Vero и ежедневно оценивали состояние монослоя и состояние клеток.

Подсчитывали количество жизнеспособных клеток в контрольных (без внесения препарата) и опытных лунках, используя тест исключения красителя с применением трипанового синего.

О цитотоксическом действии препарата ЭМВ судили по концентрации, вызывающей гибель 50% клеток на 3-и сутки после внесения препарата, определяя, таким образом, 50%-ную цито токсическую дозу (ЦД50).

Оценка противовирусной активности экстракта мицелия Pleurotus ostreatus 1137 (препарата ЭМВ) Определение антивирусной активности in vitro проводили в 4-х схемах: микробицидной, профилактической, терапевтической и вирулицидной. Исследования проводили в 96-луночных панелях (Costar, США), в лунки которых предварительно вносили клетки Vero и инкубировали до образования субконфлуентного монослоя. В качестве отрицательного контроля служили лунки с интактными клетками, не подвергавшимися воздействию ни препарата ни вируса;

в качестве положительного контроля служили лунки с клетками, зараженными ВПГ1. Ранее нами было установлено, что при внутрибрюшинном заражении лабораторных животных с последу ющим развитием бессимптомного носительства в их органах обнаруживается ВПГ1 в концентрации 0,0006 БОЕ/мл. В связи с этим при изучении противовирусного действия препарата ЭМВ были использованы эти концентрации вируса (0,0006 БОЕ/мл и 0, БОЕ/мл) и дополнительно 2 более высокие концентрации.

Микробицидная схема (экстренная профилактика). На клеточный монослой вносили среду поддержки, содержащую препарат в изучаемых концентрациях, и инкубировали в течение часа. После обработки клетки промывали и заражали вирусом в различных разведениях ВПГ1 - 10-3, 10-4, 10-5, что соответствовало 0,06;

0,006 и 0,0006 БОЕ/мл. После инкубации в течение 1 часа при 37С монослой клеток промывали и вносили среду поддержки.

Профилактическая схема. В культуру клеток Vero вносили среду поддержки, содержащую препарат в иcследуемых концен трациях, и инкубировали в течение 24 часов. После обработки клетки промывали и заражали вирусом, как описано выше.

Терапевтическая схема. Монослой клеток заражали ВПГ 1 в различных разведениях: 10-4, 10-5, 10-6, что соответствовало 0, БОЕ/мл;

0,005 БОЕ/мл и 0,0005 БОЕ/мл. После адсорбции вируса в течение 1 часа при 370С клетки промывали и вносили СЛ-493 в различных концентрациях (10 мг/мл;

1мг/мл;

0,1 мг/мл;

0,01 мг/мл;

0,001 мг/мл).

Вирулицидная схема. Вирус с различной ИМ - от 0,05 БОЕ/мл до 0,0005 БОЕ/мл инкубировали совместно с препаратом в различных концентрациях в течение 1 часа при 37 0С. Затем инкубационную смесь наносили на монослой клеток и выдерживали в течение 1 часа. Монослой клеток промывали, вносили среду поддержки, клетки инкубировали и оценивали изменение их морфологии и жизнеспособности.

Клетки инкубировали при температуре 37оС в атмосфере 5% СО2, продолжительность наблюдения во всех схемах составляла дней.

Антивирусную активность во всех схемах оценивали по способности препарата ЭМВ подавлять цитопатогенное действие ВПГ 1. Концентрацию соединения, вызывающую ингибирование вирусного ЦПД на 50% по отношению к контролю, принимали за 50%-ную ингибирующую дозу (ИД50).

Определение противовирусной активности экстракта мицелия Pleurotus ostreatus 1137 (препарата ЭМВ) при повторном введении препарата Препарат ЭМВ в исследуемых концентрациях повторно вносили в культуру через двое суток после первого введения и изучали противовирусное действие в терапевтической и в вирулицидной схемах как описано выше.

Результаты исследования Клетки Vero заражали ВПГ1 с ИМ 0,05;

0,005;

0,0005 БОЕ/мл.

Через 1 час вносили препарат ЭМВ. Действие препарата во всех схемах наблюдали в течение 10 дней. Антивирусную активность оценивали по стандартным тестам.

Инфекционная активность ВПГ Оценка активности вируса, используемого в проведенных экспериментах, методом титрования показало, что последнее разведение вируса, при котором наблюдали формирование бляшки, составило 10 -7. Таким образом, инфекционный титр использованного в опытах ВПГ1 был равен 107 БОЕ/мл. В работе использовали ВПГ1 в 3-х разведениях: 10-4, 10-5 и 10-6, что соответствовало 0,05;

0,005 и 0,0005 БОЕ/мл.

Цитотоксическое действие препарата ЭМВ Результаты изучения токсичности препарата представлены на рисунке 1. Установлено, что в концентрациях от 1 мкг/мл до 10 мг/мл препарат ЭМВ не оказывает токсического действия на клетки Vero.

При концентрации 20 мг/мл наблюдалась гибель 75% клеток, при концентрации 50 мг/мл – практически всех (100%) клеток. Методом экстраполяции было установлено, что гибель 50% клеток Vero соответствует концентрации препарата 16,7 мг/мл (рисунок 1).

Таким образом, ЦД50 для препарата ЭМВ составляет 16,7 мг/мл.

Рисунок 1 - Определение ЦД-50 для препарата ЭМВ на культуре клеток Vero.

Противовирусная активность препарата ЭМВ Изучение влияния препарата ЭМВ на противовирусную активность в отношении ВПГ1 в клеточной системе in vitro показало, что препарат в изученных концентрациях не обладает микро бицидными и профилактическими свойствами при использовании как высоких, так и низких концентраций вируса.

Для изучения терапевтических свойств препарата на монослой клеток Vero вносили ВПГ1 с различной ИМ и инкубировали в течение 1 часа. Затем клетки промывали и вносили среду поддержки, содержащую препарат ЭМВ в исследуемых концентрациях (10 мг/мл, 1мг/мл, 0,1мг/мл, 0,01мг/мл и 0,001 мг/мл).

Было показано, что при заражении вирусом с ИМ 0,05 и 0, БОЕ/мл 100% вирусспецифическое ЦПД наблюдается через 2- суток как в контроле (без препарата ЭМВ), так и в опыте (при всех использованных концентрациях препарата ЭМВ).

Результаты изучения действия препарата ЭМВ (партия СЛ-493) при снижении инфекционной дозы вируса показаны на рисунке 2.

Рисунок 2 - Противовирусная активность препарата ЭМВ (партия СЛ - 493) при заражении клеток Vero c с инфекционной множественностью 0,0005 БОЕ/кл.

В контроле при заражении ВПГ1 с ИМ 0,0005 БОЕ/мл на 3 сутки наблюдали ЦПД, затрагивающее 30% клеток. В опыте, при внесении препарата ЭМВ в концентрации 10 мг/мл, вирус-специфичес-кое ЦПД было минимальным. Данные на рисунке 2 показывают, что обработка клеток препаратом ЭМВ в концентрации 10 мг/мл задерживает развитие вирусного ЦПД в культуре клеток не только на третьи сутки, но также на 4 - 7 сутки воздействия вируса. 100%-ная гибель клеток в присутствии препарата ЭМВ наблюдалась на сутки, что на 3 дня позже, чем в контрольной культуре.

Для анализа терапевтического действия препарата ЭМВ при повторном введении препарата в лунки с клетками, зараженными ВПГ 1 с ИМ 0,0005 БОЕ/мл, препарат ЭМВ вносили через 1 час после заражения и повторно - через 3 суток. В обоих случаях препарат ЭМВ вносили в концентрации 10 мг/мл. ВПГ 1 вызывал гибель 100% клеток через 5 суток после заражения (контроль). После внесения препарата ЭМВ гибель клеток на 3-и сутки составляла около 5%, на этом сроке в культуру повторно вносили данный препарат. Через 5 суток после повторного внесения препарата ( суток от начала опыта) наблюдали гибель 40% инфицированных клеток. В это время препарат вносили третий раз. Через сутки после третьей обработки препаратом (9 сутки от начала опыта) наблюдали гибель 50% клеток. Полная гибель клеток отмечена на 10-тые сутки после начала опыта. Таким образом, 3-х кратное применение препарата задерживало развитие инфекционного процесса на суток по сравнению с однократным введением. Изучение повторного действия препарата ЭМВ на ВПГ-инфекцию при более высоких концентрациях ВПГ 1 (ИМ 0,05 и 0,005 БОЕ/мл) оказалось невозможным, так как уже на 2 сутки при указанных концентрациях вируса наблюдали 100%-ное ЦПД как в контроле, так и в опыте.


Таким образом, можно заключить, что в терапевтической схеме препарат ЭМВ с концентрацией 10 мг/мл задерживает как начало развития вирусспецифического ЦПД (при заражении низкой дозой ВПГ1), так и гибель всех клеток в популяции на трое суток.

Повторное внесение препарата ЭМВ в этой же концентрации не влияет на течение ВПГ-инфекции в клетках Vero.

Для определения вирулицидных свойств препарата ЭМВ его в исследуемых концентрациях инкубировали в течение 1 часа с ВПГ при различной ИМ. Затем инкубационную смесь вносили на монослой клеток Vero и наблюдали в течение 10 дней. Результаты наблюдений через 2 суток после внесения инкубационной смеси представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Вирулицидные свойства СЛ-493 в отношении ВПГ инфекции Количество погибших клеток, % ИМ ВПГ1, Концентрация СЛ-493, мг/мл Контроль ВПГ БОЕ мг/мл 10 1 0,1 0,01 0, 0,05 100 100 100 100 100 0,005 50 50 50 100 100 0,0005 0 0 30 30 30 повторное введение 0 0 0 0 0 0, Показано, что при использовании препарата в концентрациях мг/мл и 1 мг/мл и заражении клеток Vero с низкой ИМ (0, БОЕ/мл) в опыте наблюдали отсутствие ЦПД при 30% ЦПД в контроле без препарата ЭМВ. При инкубации препарата ЭМВ в концентрациях 10, 1 и 0,1 мг/мл с ВПГ в концентрации 0,005 БОЕ/мл ЦПД вируса составляло 50% по сравнению со 100% - в контроле без препарата ЭМВ. Минимальная концентрация препарата ЭМВ, ингибирующая вирусспецифическое действие ВПГ1 на 50% составляла 0,1 мг/мл (значение ИД50). Показателем противовирусной активности препарата является химиотерапевтический индекс (ХТИ), который рассчитывается как отношение ЦД 50 к ИД50. Для препарата ЭМВ ХТИ равен 167. По общепринятым данным, соединение, ХТИ которого превышает или равно 100, считается перспективным препаратом для дальнейших исследований, в том числе на моделях in vivo с использованием экспериментальных животных.

При более высокой концентрации вируса (0,05 БОЕ/мл) препарат не обладал вирулицидными свойствами относительно ВПГ1 типа.

Следует отметить, что через 3 суток после внесения смеси ВПГ в концентрациях 0,05 и 0,005 мг/мл с препаратом ЭМВ (партия СЛ 493) во всех изученных концентрациях наблюдали 100%-ное ЦПД как в контроле, так и в опыте, то есть вирулицидное действие препарата ЭМВ отсутствовало. Поэтому опыты с повторным внесением препарата ЭМВ были проведены при использовании ВПГ1 с ИМ 0,0005 БОЕ/мл.

ВПГ1 инкубировали с препаратом ЭМВ в 5 концентрациях, указанных в таблице 1, и смеси повторно вносили в лунки с клетками на 3 сутки от начала опыта. Было установлено, что препарат ЭМВ при повторном введении полностью предотвращает ЦПД ВПГ1 во всех концентрациях. В то же время в контроле без препарата ЭМВ вирус вызывал 100%-ное поражение клеток.

Таким образом, повторное внесение препарата ЭМВ, даже в низких концентрациях (до 0,001 мг/мл) в вирулицидной схеме полностью ингибирует вирусспецифическое ЦПД при заражении ВПГ1с ИМ 0,0005 БОЕ/мл.

Выводы 1. Токсичность препарата ЭМВ в отношении клеток Vero характеризуется 50%-ной цитотоксической дозой (ЦД50), равной 16, мг/мл.

2. Препарат ЭМВ в концентрации 10 мг/мл обладает частичным терапевтическим эффектом: тормозит начало вирусспецифического ЦПД при заражении ВПГ1 с ИМ 0.0005 БОЕ/мл на 3 суток. Повторные введения препарата ЭМВ усиливают лечебный эффект, задерживая развитие инфекционного процесса и гибель зараженных клеток дополнительно на 2-е суток.

3. Препарат ЭМВ в концентрации 0,001 мг/мл обладает выраженными вирулицидными свойствами, полностью ингибируя вирусспецифическое ЦПД при двукратном применении. Химиотера певтический индекс для препарата ЭМВ составил 167.

Таким образом, результаты исследования, проведенного in vitro, показали перспективность препарата ЭМВ и целесообразность его дальнейшего изучения в системе in vivo на моделях экспери ментальных животных.

Список литературы:

1. Баринский И.Ф. Герпес (этиология, диагностика, лечение)/ И.Ф.

Баринский, А.К Шубладзе., А.А. Каспаров, В.Н. Гребенюк и др. // М.: Медицина, -1986. -С. 4-22, 169-173.

2. Whitley R.J., Roizman B. Herpes simplex viruses: is a vaccine tenable?

// J. Clin. Invest. 2002. V.110 (2): p.145-151.

3. Sauerbrei A., Wutzler P. Herpes Simplex and varicella-zoster virus infections during pregnancy: current concept of preventions, diagnosis and therapy. Part 1: Herpes Simplex virus infections. Med. Microbiol. Immunol.

2006. V. 24: p 132-141.

4. Kimberlin D.W. Neonatal Herpes Simplex infection. Clin. Microbiol.

Rew. 2004. V. 17(1): p.1-13.

5. Whithly R.S. Herpes Simplex Virus (in Fields Virology ed. by DM Knipe and RM Howley). Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. 2001. p.

2461-2509.

6. Тихонова Л.И. О состоянии заболеваемости болезнями, передаваемыми половым путем, и мерах по их предупреждению в России/ Л.И. Тихонова // Заболевания, передаваемые половым путем. -1999. - №.4. – 24 с.

7. Козлова В. И. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий / В. И. Козлова, В. И.Пухнер. –М.: 1997. – 536 с.

КЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ ЭКСТРАКТА МИЦЕЛИЯ ВЕШЕНКИ ОВОДОРИН® СИРОП НА КОРРЕКЦИЮ ЛЕКАРСТВЕННОЙ НЕПЕРЕНОСИМОСТИ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ В.В. Ерохин, Н.Л. Карпина, И.А. Васильева, Ю.Е. Коссий, М.В. Ерохина, *В.П. Герасименя, *С.В. Захаров, * А.В. Трезвова, *В.Н. Григорьева Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза РАМН, Москва, Россия.

*ООО «Инбиофарм», Москва, Россия.

Экстракт мицелия вешенки ОВОДОРИН® сироп (далее по тексту препарат «ЭМВ») разработан ООО «Инбиофарм» (г. Москва, Россия) и в 2008 году зарегистрирован в Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Основу препарата составляет экстракт мицелия Pleurotus ostreatus [1]. Мицелий выращивали в регулируемых асептических условиях методом глубинного культивирования на жидкой питательной среде, содержащей растительное сырье [2, 3]. После переработки мицелия экстракт получали путем упаривания на роторном испарителе спиртового раствора до состояния вязкого однородного концентрата в форме сгущенного экстракта постоянного веса с содержанием воды до 30 %.

Экстракта мицелия вешенки ОВОДОРИН® сироп, производится в виде смеси сгущенного экстракта мицелия Pleurotus ostreatus (штамм 1137 ВКПМ F-819) [2], и сиропа фруктозы, изготовленного из смеси фруктозы, лимонной кислоты, бензоата натрия, дигидро кверцетина и воды (далее по тексту - сироп «ОВОДОРИН») [4].

Цель медико-биологических исследований - изучение клиниче ской эффективности применения экстракта мицелия вешенки ® ОВОДОРИН сироп (препарат «ЭМВ») в профилактике и лечении лекарственной непереносимости у больных туберкулезом легких.

Для решения вышеуказанной задачи были проведены клини ческие исследования применения препарата «ЭМВ», предназ наченного для коррекции лекарственной непереносимости в комплексной терапии туберкулеза легких [5,6,7].

Проведение клинических исследований у больных туберкулезом легких с побочными реакциями на противотуберкулезные препараты с «терапией сопровождения» препарата «ЭМВ» осуществлялось на базе Центрального НИИ Туберкулеза РАМН (г. Москва). При этом частными задачами исследований являлись [6]:

- изучение переносимости противотуберкулезной химиотерапии (по 10-бальной системе) у больных впервые выявленным туберку лезом легких на фоне приема препарата «ЭМВ»;

- оценка частоты, характера и длительности нежелательных реакций противотуберкулезной терапии у больных впервые выявленным туберкулезом легких на фоне приема препарата «ЭМВ»;

- сравнение переносимости противотуберкулезной химио терапии (по 10-бальной системе) у больных впервые выявленным туберкулезом легких на фоне приема препарата «ЭМВ» с переносимостью противотуберкулезной химиотерапии у больных впервые выявленным туберкулезом легких, не получавших препарат «ЭМВ»;

- сравнение частоты, характера и длительности нежелательных реакций противотуберкулезной терапии у больных впервые выявленным туберкулезом легких на фоне приема препарата «ЭМВ»

с частотой, характером и длительностью нежелательных реакций противотуберкулезной терапии у больных впервые выявленным туберкулезом легких, не получавших препарат «ЭМВ»;

- изучение гепатопопротективного действия препарата «ЭМВ» у больных туберкулезом легких с токсическим (медикаментозным) гепатитом;

- оценка эффективности препарата «ЭМВ» в нивелировании токсико-аллергических реакций на противотуберкулезные препараты у больных туберкулезом легких.

В исследование было включено 40 больных туберкулезом легких, находящихся на лечении в 3-ем терапевтическом отделении Центрального научно-исследовательского института РАМН в период с октября 2009 года по март 2010 года. В соответствии с целью и задачами исследования больные были распределены на 4 группы по 10 человек в каждой. Три группы больных - основные и одна группа группа сравнения.

Основные группы:

Группа А - 10 пациентов впервые выявленным туберкулезом легких, которые принимали препарат «ЭМВ» в качестве «терапии сопровождения» для профилактики побочного действия противо туберкулезных препаратов.

Группа Б - 10 пациентов туберкулезом легких, в том числе с лекарственно-устойчивым туберкулезом легких, у которых на фоне приема противотуберкулезных препаратов развился токсический гепатит принимали препарат «ЭМВ», в качестве гепатопро тективного препарата.

Группа В - 10 пациентов туберкулезом легких, в том числе с лекарственно-устойчивым туберкулезом легких, у которых на фоне приема противотуберкулезных препаратов развились токсико аллергические реакции принимали препарат «ЭМВ» для нивелирования реакций лекарственной непереносимости.


Группа Г (сравнения) - 10 пациентов впервые выявленным туберкулезом легких, у которых проведено изучение переносимости противотуберкулезной химиотерапии (по 10-бальной системе), частоты, характера и длительности нежелательных реакций противотуберкулезной терапии.

Схема лечения препаратом «ЭМВ» в виде геля и сиропа описана в работе [6].

Объем лабораторных и инструментальных исследований определялся согласно существующим диагностическим стандартам Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ STATISTICA 6,0 и редактора электронных таблиц Excel.

Результаты клинических испытаний применения препарата «ЭМВ» в виде геля и сиропа, как препарата сопровождения химиотерапии у больных туберкулезом легких, подтверждают эффективность его применения для коррекции лекарственной непереносимости в комплексной терапии туберкулеза легких.

Изучение переносимости противотуберкулезной химиотерапии у больных с диагнозом «впервые выявленный туберкулез легких» на фоне приема препарата «ЭМВ»

В соответствии с поставленными задачами переносимость противотуберкулезной терапии у больных группы А изучена по 10 бальной системе и проведен сравнительный анализ переносимости противотуберкулезной терапии больных группы А и группы Г.

Сопоставлены частота, характер и длительность нежелательных реакций противотуберкулезной терапии у больных группы А с результатами у больных группы Г (таблица 1, 2).

Распределение впервые выявленных больных группы А и Г по клиническим формам туберкулеза легких представлено в таблице 1.

Как видно из данных представленных в таблице 1, у больных групп А и Г преимущественно наблюдался инфильтративный туберкулез легких, соответственно в 80% и 70% случаев.

Распределение больных по частоте бактериовыделения и харак теру лекарственной устойчивости МБТ представлено в таблице 2.

Как видно из данных таблицы 2 у больных обеих групп практически одинаково часто имела место множественная и обширная лекарственная устойчивость (в 50% наблюдений в группе А и в 60% наблюдений в группе Г), определяющая исходно неблагоприятный прогноз лечения, так как резерв противо туберкулезной терапии у данных больных был минимальным и предполагал применение препаратов 2 и 3 ряда.

Сохранение лекарственной чувствительности диагностировано лишь у 1 больного в каждой группе наблюдения.

Таким образом, среди впервые выявленных больных туберкулезом легких в группах А и Г преобладали больные с распространенным лекарственно-устойчивым туберкулезом легких, т.е. по клиническим формам туберкулеза и наличию ЛУ МБТ анализируемые группы были сопоставимы.

При поступлении в клинику по данным ультразвукового исследования органов брюшной полости у половины больных группы А были выявлены различные изменения: дискинезия желчного пузыря (ЖП), перегиб шейки ЖП - 3 чел., гепатомегалия - 2 чел. У больных группы Г аналогичные изменения были диагностированы у 4 больных (40% наблюдений) соответственно: дискинезия желчного пузыря (ЖП), перегиб шейки ЖП- 3 чел., гепатомегалия - 1 чел.

При поступлении в клинику биохимические показатели функции печени, почек у больных групп А и Г были в пределах вариантов нормы.

В клиническом анализе крови у больных инфильтративным туберкулезом легких имели место: лейкоцитоз (11,5 - 15,6* лейкоцитов), умеренный палочкоядерный сдвиг (6-11% палочко ядерных нейтрофилов), лимфопения (5-10% лимфоцитов). У остальных больных клинико-биохимические показатели были в пределах вариантов нормы.

Сопутствующие заболевания у больных групп А и Г представлены в таблице 3.

Исходя из данных таблицы 3 видно, что по частоте и тяжести сопутствующей патологии менее благоприятной была группа А, в ней сопутствующие заболевания наблюдались в 2,2 раза чаще, чем в группе Г, соответственно 11 и 5 случаев.

Учитывая наличие большого числа сопутствующих заболе ваний, можно было предположить, что у данных больных наиболее высокий риск развития побочных реакций на лекарственные препараты.

Учитывая клинико-лабораторные данные, и в соответствии с приказом № 109, у больных была начата противотуберкулезная терапия. У больных группы А в качестве терапии «сопровождения» с первого дня приема противотуберкулезных препаратов применялся препарат «ЭМВ», для профилактики побочных реакций ПТТ.

Больные группы Г принимали известные гепатопротекторы и витамины для профилактики побочного действия противотубер кулезных препаратов. Кроме того, пациенты получали по показаниям дезинтоксикационную терапию (реамберин 400,0 в/в, ежедневно в течение 5 дней), у всех больных группы Г применяли лечебный плазмаферез.

Ежедневное наблюдение за переносимостью проводимой тера пии было абсолютно необходимым требованием, оно проводилось особенно внимательно, что позволило своевременно выявлять побочные реакции и соответственно реагировать на них.

Характер и частота побочных реакций на ПТП у больных групп А и Г представлены в таблице 4.

Как видно из данных, представленных в таблице 4 у больных группы А побочные реакции на ПТП были в 4 раза реже, чем у больных группы Г, у которых в 80% наблюдений отмечены побочные реакции.

Таким образом, из 10 больных группы А, получавших ПТП в сочетании с препаратом «ЭМВ» («терапия сопровождения»), побочные реакции появились лишь у 2-х пациенток, причем эти реакции были устранимыми.

При пероральном приеме препарата «ЭМВ» в виде сиропа и/или в виде геля побочных реакций отмечено не было, более того, пациенты отмечали повышение жизненного тонуса и улучшение настроения.

Побочные реакции у двух больных из десяти в группе А наблюдались в сроки 5 и 14 дней от начала проведения ПТТ, а у восьми больных из десяти в группе Г в сроки от 10 до 56 дней от начала проведения ПТТ, в среднем через 28,3 дня + 5,6. То есть у больных, принимавших препарат «ЭМВ», побочные реакции развились на раннем сроке химиотерапии и, очевидно, были спровоцированы сочетанием заболеваний и осложнений у конкретных 2-х больных.

Из-за развившихся побочных реакций у восьми больных группы Г противотуберкулезная терапия была частично или полностью отмена на срок от 5 до 32 дней (в среднем 14,7+ 7,5), в отличие от больных группы А, у которых срок отмены терапии был в 3,7 раза короче и составил 3 и 5 дней (в среднем 4 дня).

После нивелирования побочных реакций противотуберкулезная терапия была возобновлена у всех пациентов. Режимы ПТТ у больных группы А и Г представлены в таблице 5.

Из данных таблицы 5 видно, что у преимущественного большинства больных группы А (9 чел. из 10) удалось проводить противотуберкулезную терапию в соответствии с данными лекарст венной чувствительности МБТ, в отличие от больных группы Г, у которых в половине наблюдений (5 чел. из 10) вынуждены были проводить химиотерапию по индивидуально подобранному режиму, исключая порой активные противотуберкулезные препараты из схемы лечения из-за неустранимых побочных реакций.

В результате приема препарата «ЭМВ» достоверно удалось не только предотвратить развитие побочных реакций противо туберкулезных препаратов, но и значительно сократить срок отмены терапии, из-за побочных эффектов у впервые выявленных больных туберкулезом легких, даже с множественной лекарст-венной устойчивостью.

В целом у больных группы А показатели функции печени (АлАТ, АлАТ, ЩФ, ГГТП) до начала противотуберкулезной терапии и через месяц оставались в пределах вариантов нормы, что свидетельствовало о высокой гепатопротективной активности препарата «ЭМВ» (рисунки 1 - 4).

Оценка переносимости противотуберкулезной терапии в данных группах больных (группы А, Г) по 10-бальной системе показала, что:

- применение препарата «ЭМВ» в качестве терапии «сопровож дения» позволило улучшить переносимость противотуберкулезной терапии у больных впервые выявленным туберкулезом легких. При оценке по 10-бальной системе переносимость у больных данной группы составила - 9,3 балла (амплитуда 6-10 баллов);

- при использовании препарата «ЭМВ» в качестве терапии «сопровождения» побочные реакции наблюдались у 2 из больных. Реакции непереносимости носили токсический (1 чел.) и смешанный характер (1 чел.), были обратимыми и непродолжи тельными;

- анализ переносимости противотуберкулезной терапии по 10 бальной системе у больных впервые выявленным туберкулезом легких показал, что при применении препарата «ЭМВ» достоверно улучшается переносимость терапии в 1,6 раза (9,3 балла в группе А против 5,9 баллов в группе Г);

- в группе больных без применения терапии «сопровождения»

препарат «ЭМВ» частота побочных реакций была в 4 раз выше, чем в группе больных, у которых применяли препарат «ЭМВ»: 20% и 80% наблюдений, соответственно в группе А и группе Г. При этом значительно сокращается срок отмены терапии (в 3,7 раза), из-за побочных эффектов у впервые выявленных больных туберкулезом легких, даже с множественной лекарственной устойчивостью: 4 дня против 14,7+ 7,5, соответственно у больных групп А и Г.

При этом, в отличии от больных группы А, у больных группы Г наблюдалось значительное нарушение функции печени после проведения химиотерапии в течение 1 месяца.

Изучение гепатопопротективного действия препарата «ЭМВ» у больных туберкулезом легких с токсическим (медикаментозным) гепатитом Группа больных с гепатотоксическими медикаментозными реакциями вызывает огромный интерес, так как печень является, как известно, главным органом метаболизма в организме человека – более чем с 70 функциями, которые обеспечиваются процессами, происходящими в гепатоцитах. Кроме того, барьерное располо жение печени между кишечником и кровотоком делает ее особенно чувствительной к повреждениям.

В соответствии с поставленными задачами проведено изучение гепатопопротективного действия препарата «ЭМВ» у больных туберкулезом легких с токсическим (медикаментозным) гепатитом.

Распределение больных по клиническим формам туберкулеза легких представлено в таблице 7.

Как видно из данных, представленных в таблице 7, у больных группы Б преимущественно наблюдался инфильтративный туберку лез легких - 70% случаев.

Среди больных группы Б впервые выявленный туберкулез легких был диагностирован у 6 человек, у остальных больных ( чел.) имел место хронический туберкулез легких.

Бактериовыделение было выявлено в 100% наблюдений.

Распределение больных по частоте бактериовыделения и харак-теру лекарственной устойчивости МБТ представлено в таблице 8.

Как видно, из данных таблицы 8, преимущественно выявлялись лекарственно-устойчивые штаммы микобактерий туберкулеза (МБТ) - в 8 случаях и только в 2 наблюдениях лекарственная чувствительность штаммов МБТ была сохранена. По характеру лекарственной устойчивости в половине наблюдений имела место множественная лекарственная устойчивость.

Таким образом, среди больных группы Б преимущественно наблюдались больные впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких с лекарственной устойчивостью.

Сопутствующие заболевания у больных группы Б представлены в таблице 9.

Исходя из данных таблицы 9 видно, что больные группы Б имели тяжелые сопутствующие заболевания, требующие медика ментозной коррекции, что создавало дополнительную нагрузку на печень.

До момента развития токсического гепатита все больные получали противотуберкулезную терапию, режимы химиотерапии представлены в таблице 10.

Как видно, из представленных в табл. 10 данных, у преимущественного большинства больных (6 чел.) туберкулезом легких с развившимся осложнением в виде токсического гепатита применялся 4-й режим химиотерапии. Указанный режим предпо лагает применение резервных препаратов: офлоксацин, капрео мицин, ПАСК, циклосерин, протионамид, пиразинамид, клацид, амоксиклав.

После лабораторного подтверждения гепатотоксической меди каментозной реакции больным был назначен курс препарата «ЭМВ»

по указанной выше схеме.

Результаты лечения токсического гепатита у больных группы Б представлены в таблице 11.

Как видно из данных таблицы 11, гепатотоксическая меди каментозная реакция в целом у больных группы Б сопровождалась наиболее значительным ростом активности трансаминаз (цитоли тический синдром) – АлАТ - 236,9+27,8 Ед/л и АсАТ) - 150,4+19, Ед/л. Холестатический синдром у наблюдаемых больных был менее выражен: уровень ЩФ в среднем не превышал 134,4+11,2 Ед/л и показатель ГГТП составил 95,4+14,2 Ед/л.

После проведения курса препарата «ЭМВ» (1 мес.) достоверно нормализовались все показатели функции печени (рисунки 5, 6, 7, 8).

Необходимо отметить, что у больных с острым токсическим гепатитом помимо препарата «ЭМВ» применялась инфузионная гепатотропная терапия (гептрал, эссенциале) и дезинтоксикацион ная терапия (плазмаферез, реамберин), что, безусловно, способ ствовало нормализации функции печени в короткий срок (7 -10 дней).

У больных с подострым хроническим гепатитом показатели функции печени нормализовались в интервале 21-30 дней от начала терапии препаратом «ЭМВ». При этом у больных в течение всего периода приема препарата «ЭМВ» сохранялась противо туберкулезная терапия. В этот период не было отмечено роста активности трансаминаз, субъективно больные чувствовали себя удовлетворительно.

Таким образом, при остром токсическом гепатите у больных туберкулезом легких препарат «ЭМВ»-сироп целесообразно приме нять в сочетании с другими средствами, обеспечивающими высокоэффективную дезинтоксикацию.

Полная нормализация показателей функции печени у больных группы Б происходила в сроки от 7 до 30 дней (в среднем 18,4 + 11, дней).

Несмотря на то, что восстановление функции печени на фоне проведения терапии препаратом «ЭМВ» у больных группы Б было продолжительным, изучение лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) выявило определенные изменения по данным клинического анализа крови в более ранние сроки 7-15 дней (в среднем через 11, + 2,3 дней).

При анализе ЛИИ индивидуально у каждого больного из группы Б обнаружена закономерность: у 6-ти больных с хро ническим течением токсического гепатита ЛИИ оказался значительно ниже нормы, варьируясь от 0,03 у.е. до 0,42 у.е., что свидетельствовало о крайней степени иммуносупрессии и хронической интоксикации, а у 4-х больных ЛИИ оказался выше нормы, варьируясь от 1,8 у.е. до 3,5 у.е., что свидетельствовало о значительном уровне острой интоксикации.

Результаты проведенных исследований в этой серии испытаний представлены в таблице 12.

Оценка переносимости противотуберкулезной терапии в данной группе больных (группа Б) по 10-бальной системе показала, что:

- в 60% наблюдений гепатотоксические медикаментозные реакции развились у больных впервые выявленным туберкулезом легких на раннем этапе интенсивной химиотерапии – через 25,7+ 5, дней;

- наличие сопутствующей патологии органов гепатобиллиарной системы у больных туберкулезом легких предопределяет высокий риск развития гепатотоксических медикаментозных реакций, так из 10 больных туберкулезом легких с токсическим гепатитом у 8 чел.

(80% наблюдений) при поступлении в стационар по данным ультра звукового исследования были диагностированы различные изменения печени и желчного пузыря;

- анализ режимов химиотерапии показал, что гепатотоксические медикаментозные реакции развились в 60% наблюдений при применении 4-го режима химиотерапии;

- гепатотоксические медикаментозные реакции у наблюдаемых больных туберкулезом легких способствовали развитию острого токсического гепатита в 40% наблюдений и хронического подострого гепатита в 60% наблюдений;

- применение препарата «ЭМВ» привело к нормализации функции печени через 21-30 дней, при этом у 60% больных противотуберкулезная терапия не отменялась;

- при остром токсическом гепатите у больных туберкулезом легких препарат «ЭМВ» целесообразно применять в сочетании с другими средствами, обеспечивающими высокоэффективную дезинтоксикацию, что приводит к сокращению сроков восста новления функции печени;

- включение в терапию токсического гепатита у больных туберкулезом легких препарата «ЭМВ» способствовало умень шению острого и хронического эндотоксикоза;

- в результате применения препарата «ЭМВ» для лечения токсического гепатита у больных туберкулезом легких перено симость химиотерапии улучшилась в 2 раза: 4,3 балла до лечения против 9,1 баллов после лечения токсического гепатита.

Оценка эффективности препарата «ЭМВ» в нивелировании токсико-аллергических реакций на противотуберкулезные препараты у больных туберкулезом легких Для изучения влияния препарата «ЭМВ» на компенсацию токсико-аллергических реакций при проведении химиотерапии у больных туберкулезом легких проведено динамическое иссле дование у 10 больных (группу В) туберкулезом легких с развив шимися побочными реакциями.

Распределение больных по клиническим формам туберкулеза легких представлено в таблице 13.

Как видно из данных, представленных в таблицы 13 у половины больных группы В наблюдался инфильтративный туберкулез легких.

Бактериовыделение было выявлено в 100% наблюдений.

Распределение больных по частоте бактериовыделения и характеру лекарственной устойчивости микробактерий туберкулеза (МБТ) представлено в таблице 14.

Как видно, из представленных данных в таблицы 14, преимущественно выявлялись лекарственно-устойчивые штаммы МБТ - в 9 случаях, и только в 1 наблюдении лекарственная чувствительность штаммов МБТ была сохранена.

По характеру лекарственной устойчивости в большинстве наблюдений (у 6 чел.) имела место множественная и обширная лекарственная устойчивость.

До начала курса препарата «ЭМВ» все больные получали стандартную терапию. Режимы химиотерапии представлены в таблице 15.

Как видно из представленных в таблице 15 данных, у преимущественного большинства больных (6 чел.) группы В применялась индивидульно подобранная схема химиотерапии.

Применение индивидуального режима химиотерапии у больных было обусловлено реакциями непереносимости, из-за которых вынужденно менялась схема и осуществлялся подбор препаратов.

Первые реакции непереносимости появились у наблюдаемых больных через 1-1,5 месяца от начала химиотерапии. Проводимые курсы дезинтоксикационной и десенсебилизирующей терапии были малоэффективны, в связи с чем, у 7-ми больных применялся лечебный плазмаферез.

Препарат «ЭМВ» был включен в схему лечения у 3-х больных с впервые появившимися реакциями непереносимости через 1,5 - месяца химиотерапии и у 7-ми больных, ранее неэффективно леченных по поводу побочных реакций (длительность химиотерапии от 2-х до 6-ти мес.).

Характер и частота побочных реакций на ПТП у больных группы В представлены в таблице 16.

Как видно их данных, представленных в табл. 16, у больных группы В преобладали побочные реакции аллергического харак-тера - 6 чел., реакции смешанного характера отмечены у 4 чел., изолированно токсические реакции отсутствовали.

В связи с развитием побочных реакций был начат курс приме нения препарата «ЭМВ» по указанной выше схеме.

Полихимиотерапия туберкулеза легких продолжалась у 8-ми больных (80% наблюдений), а полная отмена терапии на 3 недели была только у 2-х больных (20% наблюдений).

На фоне приема препарата «ЭМВ» происходил регресс токсико аллергических реакций:

- в течение первых трех дней приема препарата «ЭМВ» больные отмечали значительное уменьшение кожного зуда;

- регресс кожных изменений происходил в течение 7-15 дней приема препарата «ЭМВ», в этот период времени отмечалось отсутствие отека кожи, значительное уменьшение гиперемии кожи;

- полное прекращение кожных высыпаний происходило к 21 дню приема препарата «ЭМВ» у всех больных с токсикодермией;



Pages:     | 1 || 3 | 4 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.