авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:   || 2 | 3 |
-- [ Страница 1 ] --

СПИСОК ОСНОВНЫХ ИСПОЛНИТЕЛЕЙ

по Государственному контракту П1080 от 24 августа 2009 на выполнение поисковых научно-

исследовательских работ для государственных нужд

Организация-Исполнитель: Государственное образовательное учреждение высшего профессио-

нального образования «Забайкальский государственный гуманитарно-педагогический университет

им. Н.Г. Чернышевского»

Руководитель темы:

кандидат медицин- Альфонсова Е. В.

ских наук, доцент подпись, дата Исполнители темы:

кандидат медицин- Бочкарникова Н. В.

ских наук, доцент подпись, дата без ученой степени, Забродина Л. А.

без ученого звания подпись, дата без ученой степени, Скипор А. И.

без ученого звания подпись, дата без ученой степени, Козовников В. А.

без ученого звания подпись, дата Реферат Отчет 115 с., 5 ч., 73 рис., 16 табл., 107 источн., 1 прил.

"МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ АЦИДОЗ, ЛАКТАТ-АЦИДОЗ, РН, ГЕМОСТАЗ, ДВС-СИНДРОМ, МОРФОЛОГИЯ ОРГАНОВ, ИММУННАЯ СИСТЕМА, СЕРДЦЕ, ПЕЧЕНЬ, ЖЕЛУДОК, ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА, ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫЙ ТРАКТ" В отчете представлены результаты исследований, выполненных по 2 этапу Государствен ного контракта № П1080 "Закономерности и механизмы развития сдвигов в системе гемостаза, ДВС-синдром и морфология органов при метаболическом ацидозе" (шифр "НК-193П") от 24 ав густа 2009 по направлению "Фундаментальная медицина и физиология" в рамках мероприятия 1.3.1 "Проведение научных исследований молодыми учеными - кандидатами наук.", мероприятия 1.3 "Проведение научных исследований молодыми учеными - кандидатами наук и целевыми аспи рантами в научно-образовательных центрах", направления 1 "Стимулирование закрепления моло дежи в сфере науки, образования и высоких технологий." федеральной целевой программы "Науч ные и научно-педагогические кадры инновационной России" на 2009-2013 годы.

Цель работы - Исследование нарушений структурной организации органов и тканей в усло виях экспериментального лактат-ацидоза, пато- и морфогенеза ДВС-синдрома в различных регио нах сердечно-сосудистой системы Методы исследования:

Взятие материала для микроскопического исследования тканей осуществлялось у лабора торных животных под гексеналовым наркозом в контроле, и после введения 3% раствора молоч ной кислоты на 0,85% растворе хлорида натрия. Кусочки тканей и органов размером 0,5 – 1,0 см фиксировались в 10% забуференном нейтральном растворе формальдегида (рН 7,0) при темпера туре 18 - 20°С в течение 24 – 48 ч. Заливка осуществлялась с использованием парафина (Г.А.Меркулов, 1969).

Методы окрашивания морфологического материала:

Окраска гемотоксилин-пикрофуксином по Ван-Гизон.

1.

Окраска гематоксилином Вейгерта в модификации Харта.

2.

Импрегнация азотнокислым серебром по Футу.

3.

Окраска кармином по Бесту.

4.

Гематоксилин-эозином.

5.

Окраска Суданом III.

6.

Электронная микроскопия.

Морфометрическое исслдеование проводилось с использованием программного обеспече ния "Мастер-Морфология 5.2".

Статистическая обработка материала проводилась на ПЭВМ Pentium 5 с использованием пакета программ Microsoft Excel 2007 для операционной системы Windows-7. Достоверность раз личий показателей в группах оценивали по величине t – критерия Стьюдента.

Инструментарий, использованный при выполнении отдельных видов работ (этапов) по Гос ударственному контракту:

1. Оlymрus ВХ41 микpocкoп лабораторно-иccлeдoвaтeльcкого класса 2. Специализированная фотовидеокамера для микроскопии цифровая цветная камера ProgRes C 3. Программное обеспечение для анализа изображения Мастер морфология 5.2.

4. Стереоскопический микроскоп ЛабоСтеми-Лонгер со специализированной фотовидеокамерой 5. Цифровая камера DCМ500 для использования с микроскопом 6. Весы технические аптечные ВА-4М (до 1 кг.) 7. Аквадистиллятор ДЭ- 8. Фотоколориметр КФК- 9. рН-метр стационарный pH 10. Центрифуга лабораторная СМ- 11. Баня лабораторная TW- 12. Электрокоагулограф Н- 13. Микротом санный "МС-2" 14. Термостат ТС-1/80 СПУ 15. Шкаф сушильный 16. Весы лабораторные ВЛР 17. Персональный компьютер с программным обеспечением 18. Межгосударственный стандарт ГОСТ 7.32-2001.

Выявлены закономерности и механизмы развития структурных нарушений в жизненно важных органах (сердце, печень, почка, легкие, органы иммунной системы) при метаболическом ацидозе в зависимости от глубины и продолжительности.

Подготовлено 5 статей и 2 тезисов с изложением полученных результатов по 2 этапу иссле дования и из них 3 статьи в журналах рекомендованных Президиумом Высшей аттестационной комиссией.

Подготовлен научно-технический отчет по 2 этапу на бумажном и электронном носителе, в том числе презентация результатов НИР в формате Microsoft PowerPoint, аннотация объемом страниц.

Создан центр коллективного пользования по микроскопии биологических объектов на базе лаборатории "Физиологии и патологии гемостаза и морфологии органов" Оглавление ВВЕДЕНИЕ............................................................................................................................................ Основная часть..................................................................................................................................... 1. Аналитический отчет о проведении теоретических и экспериментальных исследований....... Глава 1. Краткие сведения о нарушении кислотно-щелочного гомеостаза при различных заболеваниях........................................................................................................................................ 1.1. Ацидоз при различных патологических состояниях................................................................ 1.2.Морфология органов и тканей при метаболическом ацидозе................................................... Глава 2. Материал и методы исследования......................................................................................... 2.1. Методика экспериментальной модели лактат-ацидоза............................................................ 2.2. Морфологические методы исследования органов и тканей..................................................... Глава 3. Морфология органов иммунной системы при метаболическом ацидозе............................ 3.1. Влияние ацидоза на морфологию тимуса................................................................................. 3.2. Влияние сдвига рН в кислую сторону на структуру селезенки............................................... 3.3. Влияние метаболического ацидоза на морфологию лимфатических узлов........................... Глава 4. Влияние метаболического ацидоза на морфологию органов пищеварения........................ 4.1. Влияние лактат-ацидоза на морфологию печени..................................................................... 4.2. Влияние лактат-ацидоза на морфологию поджелудочной железы.......................................... 4.3. Морфология желудочно-кишечного тракта при лактат-ацидозе............................................. 4.4. Влияние лактат-ацидоза на иммунные образования желудочно-кишечного тракта............... Глава 5. Механизмы развития морфологического эквивалента ДВС – синдрома........................... Выводы:................................................................................................................................................ 2. Результаты теоретических и экспериментальных исследований................................................... Систематизация и предварительная оценка полученных результатов........................................... Оценка полноты решения задач и достижения поставленных целей............................................. Сопоставление и обобщение результатов анализа научно-информационных источников и экспериментальных исследований................................................................................................... Оценка эффективности полученных результатов в сравнении с современным научно техническим уровнем..................................................................................................................... Разработка рекомендаций по возможности использования результатов проведенных НИР в реальном секторе экономики......................................................................................................... Разработка рекомендаций по использованию результатов НИР при создании научно образовательных курсов................................................................................................................. Заключение......................................................................................................................................... Список литературы............................................................................................................................ Список сокращений и обозначений Содержит перечень обозначений и сокращений, применяемых в данном отчете о НИР:

АГГ – антигемофильный глобулин АДФ – аденозин-5'-дифосфат АКТГ – адренокортикотропный гормон АМФ – аденозин-5'-монофосфат АТФ – аденозин-5'-трифосфат ДВС – диссеминированное внутрисосудистое свертывание ИБС- ишемическая болезнь сердца ИК – искусственное кровообращение КФК – креатинфосфокиназа КЩР – кислотно-щелочное равновесие ЛА – лактат-ацидоз ЛДГ – лактатдегидрогеназа МК – молочная кислота МИАКШ – мини-инвазивное аорто-коронарное шунтирование НАДФ+ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат (окисленная форма) НАДФН + Н+ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат (восстановленная форма) ПВК – пировиноградная кислота ПДФ – продукты деградации фибрина ПКС - пороки клапанов сердца ТГС – тромбогеморрагический синдром ФАД – флавинадениндинуклеотид (окисленная форма) ФАДН2 – флавинадениндинуклеотид (восстановленная форма) ШИК – реакция – гистохимическое исследование для выявления гликогена в тканях и соединений белка с углеводами рН – стандартный водородный показатель ВВЕДЕНИЕ Шоки различного происхождения, травмы, кровотечения, пересадки внутренних органов сопровождаются повышением уровня молочной кислоты, которая играет важную роль в развитии ДВС-синдрома. Накопление молочной кислоты, не только изменяет гемостатические свойства крови, но приводит и к морфологическим изменениям в органах и тканях Проблема тромбозов в артериях, венах, микроциркуляторном русле является одной из са мых актуальных в современной медицине (Чазов Е.И. и соавт., 1966, 2008, 2010;

Савельев, Л.А. и соавт., 1970, 1982;

Бокерия и соавт, 2001, 2006, 2008, 2010). Окклюзия микроциркуляторного русла в виде различных вариантов внутрисосудистого микросвертывания крови не имеет точной стати стической оценки, хотя встречается при многих заболеваниях, сопровождающихся гипертонией, интоксикацией, сепсисе, нарушениями иммунитета (И.Н.Бокарев, 2005;

B.R.Soller, 2001;

P.Brincean, 2001;

А.Ш.Бышевский и соавт., 2000;

В.П.Балуда и соавт., 2005;

Б.И.Кузник и соавт., 1987-2010). Поэтому внутрисосудистое тромбообразование – один из важных патологических процессов, требующий постоянного внимания со стороны исследователей и практических врачей (K.A.Webster, 2000).

Продукты анаэробного метаболизма, вызывающие ацидоз, представляют реальную опас ность для организма, так как способны не только нарушать функцию, но и приводить к морфоло гическим изменениям в различных органах и тканях. Накопление молочной кислоты, известной в качестве крупного донора протонов, изменяет гемостатические и реологические свойства крови, усиливает гипоксию тканей и уменьшает функцию энергообразования в клетках, вследствие раз общения гликолиза и цикла Кребса, снижает ресинтез АТР и ведет к увеличению энтропии в орга низме. В этих условиях особое значение приобретает исследование взаимосвязи между ацидозом, гемостазом и изменением морфологии органов, для понимания динамики патологического про цесса при различных заболеваниях.

В настоящее время появились многочисленные работы, в которых система гемостаза пере стает рассматриваться изолированно, как мультиферментный каскад кровотока, а ее анализ пере водится в плоскость взаимосвязей с другими системами организма (Н.Н.Цыбиков и соавт., 1982 2009;

Б.И.Кузник и соавт., 1981-2009;

А.П.Ельчанинов и соавт., 2000;

А.Ш.Бышевский и соавт., 2000;

Д.М.Зубаиров и соавт., 2009).

Важную роль в развитии диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови играют продукты анаэробного метаболизма, вызывающие ацидоз. Они представляют реальную опасность для организма, так как способны не только нарушать функции, но и приводить к морфологиче ским изменениям в различных органах и тканях. Накопление молочной кислоты, известной в ка честве крупного донора протонов, изменяет гемостатические и реологические свойства крови, усиливает гипоксию тканей, уменьшает функцию энергообразования (В.В.Альфонсов и соавт., 1986-2005). Влияние ацидоза на свертывание крови изучалось многими авторами (Е.В.Ройтман, 2000;

J.Mikhail, 1999;

В.В.Альфонсов и соавт., 1968-2001 и др.). В этих условиях особое значение приобретает исследование взаимосвязи между ацидозом, гемостазом, развитием морфологическо го эквивалента ДВС-синдрома и изменением морфологии органов и тканей для понимания дина мики патологического процесса при различных заболеваниях.

Цель проекта в целом. Исследование особенностей пато- и морфогенеза ДВС-синдрома в различных регионах сердечно-сосудистой системы, нарушений структурной организации органов и тканей в условиях ацидоза в эксперименте и клинике. Совершенствование методов лечения аци дотических состояний.

Цель исследования 2 этапа. Исследование структурной организации органов и тканей при экспериментальном лактат-ацидозе в зависимости от глубины и продолжительности.

Объект исследования: Закономерности и механизмы развития морфологических измене ний в органах и тканях при экспериментальном лактат-ацидозе.

Задачи экспериментального исследования 2 этапа:

1. Изучить структурные и ультраструктурные изменения в органах иммунной системы (ти мус, селезенка, лимфатические узлы различных регионов) при экспериментальном лактат ацидозе различной глубины и продолжительности.

2. Исследовать структурные и ультраструктурные изменения в органах пищеварительной си стемы (печень, поджелудочная железа, желудочно-кишечный тракт, лимфоидные образо вания ЖКТ) при экспериментальном лактат-ацидозе различной глубины и продолжитель ности.

3. Выявить значение структурных нарушений в различных органах (сердце, легкие, почки, печень, желудок, поджелудочная железа и т.д.), возникающих при метаболическом ацидозе в развитии ДВС-синдрома.

4. Исследовать закономерности и механизмы развития морфологического эквивалента ДВС синдрома в различных органах и тканях.

Научная новизна.

Впервые описан морфологический эквивалент ДВС-синдрома при ацидозе. Полученные данные свидетельствуют о том, что ДВС-синдром и его морфологический эквивалент развиваются не только под влиянием метаболического ацидоза, но также связаны с морфологическими нару шениями эндотелиоцитов, микровезикуляцией эндотелия, изменениями соединительнотканного матрикса и структуры клеток при ацидозе.

Приорететными в работе являются исследования морфологии органов имунной системы (селезенка, тимус, лимфатические узлы различных регионов), были выявлены ряд изменений, ко торые носят неспецифический характер: выраженная делимфатизация лимфатических фолликулов до полного их разрушения, набухание коллагеновых и эластических волокон, разрушение аргиро фильного каркаса органа.

Морфологические изменения тимуса при ацидозе различной глубины и продолжительности характеризуются нарушением структуры, делимфатизацией органа и пролиферацией жировой ткани в паренхиме и соединительнотканной строме органа. Впервые изучена морфология лимфа тических узлов различных регионов при метаболическом лактат-ацидозе.

Деструктивные процессы в лимфоидных тканях при ацидозе можно расценивать как неспе цифическую морфологическую блокаду органов иммунной системы.

В органах пищеварения (печень, поджелудочная железа, отделы желудочно-кишечного тракта) при ацидозе развиваются неспецифические изменения, которые зависят от глубиныи про должительности ацдиоза. В клетках желудка (главные, обкладочные, париетальные) на уль траструктурном уровне однотипные изменения проявляются в нарушении структуры ядра, мито хондрий, аппарата Гольджи, эндоплазматического ретикулума и др.

По данным световой микроскопии при рН 7,2 и продолжительности ацидоза от 15 до минут сердечная мышца реагирует на изменение уровня рН ограниченным набором неспецифиче ских структурных изменений, которые можно расценивать как « миокардиодистрофии». При дальнейшем сдвиге рН до 7,1 и продолжительности более 60-100 минут обнаруженные изменения в кардиомиоцитах следует трактовать как «необратимые», отмеченные изменения следует тракто вать как « очаговые повреждения» миокарда Сдвиг рН до 7,0 приводит к дистрофии и некробиозу кардиомиоцитов, неравномерно вы раженная гиперэозинофилии цитоплазмы, происходит гиперхромия и покнотическое сморщива ние ядер, внутриклеточный миоцитолиз и очаговый глыбчатый распад, периваскулярному и меж клеточному отеку. Дальнейший сдвиг уровня рН до 6,9 и ниже приводит к более выраженным изменениям миокарда. Сердечная мышца реагирует неоднородной структурой поражения миокарда: на одних участках обнаруживаются изменения тинкториальных свойств, в других- дискоидный распад и контракруры, в третьих - полиморфноядерные лейкоциты. Повреждения миокарда в разных его местах наступают не одновре менно. Полученные изменения свидетельствуют о развитии острого инфаркта миокарда фазе некро за Теоретическая и практическая значимость.

На основании полученных результатов установлена роль ацидоза в возникновении ДВС синдрома и его морфологического эквивалента. Полученные данные позволяют расширить пред ставления о глубине изменений в различных органах и тканях и системе гемостаза, микроциркуля торном русле при метаболическом ацидозе, который приводит к развитию ДВС-синдрома. Можно говорить, что ацидоз приводит к развитию, и в то же время является следствием полиорганной не достаточности.

Полученные нами данные имеют не только теоретическое, но и практическое значение, так как могут быть использованы в клинической практике, анестезиологии и реаниматологии, кардио хирургии при оценке тяжести патологических процессов, возникающих при некомпенсированном ацидозе. Знание механизмов и закономерностей возникновения структурных изменений в органах и тканях необходимо учитывать при составлении индивидульного плана лечения пациентов в кри тических состояниях, сопровождающихся ацидозом.

Основная часть.

1. Аналитический отчет о проведении теоретических и экспериментальных ис следований.

Глава 1. Краткие сведения о нарушении кислотно-щелочного гомеостаза при различных за болеваниях В литературе значительное место занимают вопросы изучения лактат-ацидоза. Впервые он был описан W.E.Huckabee в 1961 году как синдром, характеризующийся резким увеличением концентрации молочной кислоты в крови (до 26 ммоль/л). С этого времени постоянно растет чис ло исследований, посвященных ЛА. К настоящему времени известны обзоры по различным аспек там ЛА (A.J.Skowzonek et al., 1995;

M.Otsuka et al., 1996;

M.Eriksson et al., 1998;

N.Ferrandiere et al., 1998;

P.J.Dann, 1998;

А.А.Байрамов и соавт., 1999;

T.Duell, 2000;

R.P.Ostrowski, 2000;

C.P.Bleeker Rovers et al., 2000). Этот интерес, не угасающий в течение многих лет, объясняется до конца не изученным патогенезом ЛА, его неожиданным развитием и малой эффективностью терапии. Если дыхательные нарушения можно компенсировать адекватной искусственной вентиляцией, то про блема коррекции метаболического ацидоза и, в частности, лактат-ацидоза, остается до сих пор нерешенной окончательно, и дискутируется в многочисленных работах (M.Otsuka et al., 1996;

N.Ferrandiere et al., 1998;

P.J.Dann, 1998;

И.О.Загс и соавт., 1999;

M.J.Chandi, 2000;

Q.Shu, 2001).

Повреждение структуры клеток, межклеточного вещества, тканей и органов, сопровожда ющееся нарушением их жизнедеятельности, является, как правило, результатом расстройства ме таболических регуляций. Ведущей причиной, вызывающей дистрофические нарушения, является снижение окислительно-восстановительных процессов и внутриклеточного дыхания, приводящие к накоплению в тканях протонов и к развитию ацидоза.

Многочисленные химические реакции в организме протекают с образованием или потреб лением протонов (Н+). Пищевые белки и жиры расщепляются в пищеварительной системе до ами нокислот и жирных кислот, которые всасываются и циркулируют в крови. Глюкоза превращается в организме в пировиноградную кислоту в процессе гликолиза (окисление глюкозы). Очень боль шое количество протонов выделяется при образовании СО 2 в процессе метаболизма, который реа гирует с водой с образованием Н+ протонов и НСО3-. При интенсивных физических нагрузках происходит мощное выделение кислоты в кровоток (молочная кислота образуется в работающих мышцах для восстановления NAD+, обеспечивая тем самым продолжение гликолиза в условиях дефицита кислорода), при диабетическом кетозе (ацето-уксусная кислота и - гидроксимасленная кислота образуются в результате распада жиров). Пищевые щелочи присутствуют во фруктах в виде натриевых и калиевых солей слабых кислот. В организме людей, придерживающихся типич ной западной мясо-содержащей диеты, образуется избыток Н+. Суточная продукция протонов у взрослого человека (13-20 молей) эквивалентна 475-730 г чистейшей соляной кислоты, поврежда ющие свойства которой хорошо известны. Изменение концентрации ионов водорода в среде со провождается многочисленными сдвигами:

насыщения протонакцепторных группировок в молекулах органических веществ, срод ства между субстратом и ферментом и активности образуемого ими комплекса стабильности структур макромолекул (белков, нуклеиновых кислот, полисахаридов) величины онкотического давления диссоциации и растворимости многих веществ направленности и выраженности окислительно-восстановительных реакций, непремен ным участником которых является сам протон стабильности золей, составляющих биологическую среду межкатионных соотношений, определяющих возбудимость и специфические эффекты клетки Избыток СО2 и протонов (Н+) выводится, в итоге, легкими и почками, поддерживая уро вень Н+ в организме приблизительно постоянным. Различные буферные механизмы, препятству ют сильному изменению концентрации [Н+]. В стабилизации кислотно-щелочного состояния и в транспорте конечных продуктов обмена к выделительным органам решающее значение придается буферным системам. Они называются еще и транспортными буферными, поскольку истинное назначение этих систем не в коррекции КЩР, которое недостижимо без участия выделительных систем, а именно в смягчении (буферировании) нарушений на этапе транспортировки. Тем самым подразумевается их зависимость от состояния гидродинамики и выделительных органов.

В компенсации сдвигов рН всегда участвует внеклеточное пространство. Именно сюда из клетки поступают недоокисленные продукты обмена. В процессе водообмена кислые продукты разносятся по всему организму и перераспределяются в зоны с малой собственной продукцией протонов. В этом отношении значительной катионадсорбционной способностью обладает основ ное вещество соединительной ткани и коллагеновая сеть. Буферные свойства соединительной ткани могут существенно изменяться.

Благодаря многочисленным исследованиям (А.Ленинджер, 1985;

R.Hainsworth, 1986;

D.Attwel et al., 1986;

W.F.Boron, P.C.Aronsen, 1986;

R.Nuccitelli, D.W.Deamer, 1982;

A.Roos, W.F.Boron, 1981 и др.) было показано, что у всех живых организмов внутриклеточные и внекле точные жидкости имеют характерную и постоянную величину рН, которая поддерживается с по мощью различных биологических систем. Эволюционное развитие привело к формированию в ор ганизме нескольких систем, которые служат для сохранения кислотности жидкостей тела в преде лах узкого диапазона, регуляция рН обнаруживается у всех исследованных до сих пор организмов.

Это позволяет управлять клеточными биохимическими процессами, так как клеточные катаболи ческие энзимы сильно подвержены изменению кислотно-основного равновесия. Например, изме нение внутриклеточного содержания протонов (Н +) с 7910-9 моль/л до 6310-9 приводит к сдвигу рН с 7,1 до 7,2, при этом активность ключевого фермента, регулирующего скорость гликолиза, фосфофруктокиназы, изменяется в 20 раз (D.Attwell et all., 1986). Изменение кислотности оказы вает большое влияние на нервную систему. При ургентных состояниях в организме часто развива ется ацидоз, это приводит к угнетению активности нервной системы, развитию комы и смерти. И, наоборот, при алкалозах спонтанная активность периферических нервов может привести к смерти в результате спазма дыхательной мускулатуры.

Нарушение механизмов, регулирующих величину рН, возникающее при различных патоло гических состояниях, может приводить к падению рН плазмы крови до величины 6,8 и ниже.

Следует учитывать, что изменение рН влияет на многие структурные и функциональные свойства клетки, однако к изменениям рН особенно чувствительна каталитическая активность ферментов. В связи с этим особое значение приобретает исследование значений внутриклеточного показателя концентрации водородных ионов. До последнего времени не было точного представ ления о рН цитоплазмы клеток, однако благодаря исследованиям Boron et Aronsen (1986);

Busa et Nuccitelli (1984);

Moody (1984);

Roos et Boron (1981);

Thomas (1984) и др. Этот вопрос успешно был решен. Точные данные были получены благодаря применению внутриклеточных рН индика торов, ядерного магнитного резонанса и микроэлектродов, чувствительных к изменению рН. По средством этих методов было показано, что в норме, внутриклеточный рН колеблется от 7,0 до 7,4. Например, при температуре 200С в мышце рН составляет 7,27, а при 370С – 7.0. В настоящее время известны основные буферные системы клетки и механизмы регуляции кислотно-основного состояния внутриклеточной среды. Эти механизмы во многом аналогичны характеру поддержания рН внеклеточных жидкостей.

Следует отметить, что при различных патологических состояниях рН внутриклеточной среды подвержено значительным колебаниям. Например, при ишемии скелетных мышц у кроли ков в течение 4 часов рН снижается до 6,6 – 6,4. Продукты анаэробного метаболизма, вызы вающие ацидоз, представляют реальную опасность для организма, так как способны не только нарушать функцию, но и приводить к морфологическим изменениям в различных органах и тка нях. Накопление молочной кислоты, известной в качестве крупного донора протонов, изменяет гемостатические и реологические свойства крови, усиливает гипоксию тканей и уменьшает функ цию энергообразования в клетках, вследствие разобщения гликолиза и цикла Кребса, снижает ре синтез АТР и ведет к увеличению энтропии в организме.

1.1. Ацидоз при различных патологических состояниях Определение лактат-ацидоза, казалось бы, ясно: это нарушение кислотно-основного равно весия, вызванное накоплением в организме молочной кислоты. Однако количественные критерии этого состояния оцениваются по-разному. Так, P.J.Dann (1998) считает, что диагноз ЛА может быть установлен, если концентрация МК превышает 7 ммоль/л, при этом состояние с содержани ем МК ниже 7 ммоль/л следует называть гиперлактацидемией;

P.A.Dietz (1996) – если количество МК 5 и более ммоль/л;

М.М.Горн и соавт. (2000) – если уровень МК выше нормального (1, ммоль/л) и рН (с коррекцией к рСО2 40 мм.рт.ст.) ниже 7,36 в артериальной крови. Применительно к практике анестезиологии и реаниматологии целесообразно относить к лактат-ацидозу состояния, сопровождающиеся значительным (более 5 ммоль/л) увеличением МК (Л.Н.Тверской, 1980).

L.Kette и соавт. (1990), применяя метод прямого измерения интрамиокардиального рН во время сердечно-легочной реанимации, показали, что даже короткий период остановки сердца, вы званный фибрилляцией, характеризуется глубоким ацидозом миокарда – после 5 минут остановки сердца, когда рН артериальной крови все еще остается нормальным, а смешанной венозной со ставляет 7,26, интрамиокардиальный рН снижается до 6,95.

В настоящее время распространена клиническая (М.М.Горн и соавт., 2000) классификация, согласно которой, различают 2 типа молочно-кислого ацидоза: А – при клинически выраженной гипоксии и В – не связанной с гипоксией. Лактат-ацидоз типа В делят на группы: В1 (возникает на фоне различных заболеваний), В2 (связан с введением различных веществ), В3 (наследственные формы ЛА), В4 (смешанные формы).

Метаболический ацидоз часто обусловлен гиперлактацид- и гиперпируватемией и сочета ется с резким нарушением целостности мембранных структур. Об этом свидетельствует значи тельное повышение активности цитоплазматических (ЛДГ) и митохондриальных (изоцитратде гидрогеназы) ферментов в сыворотке крови (А.А.Байрамов и соавт., 1999).Молочная кислота представляет собой конечный продукт гликолиза и образуется в результате восстановления пиро виноградной кислоты. Источником протонов и электронов является глицеральдегид-3-фосфат, роль их переносчика играет кофермент НАД+. Реакция катализируется ЛДГ:

НАД Н СН 3 НСОНСООН НАД СH 3 COCOO В нормальных условиях равновесие этой реакции сдвинуто в сторону образования МК и соотношение МК/ПВК равно 10. Общая продукция МК организмом взрослого человека около 1300-1500 ммоль/сут.

При физической нагрузке продукция лактата может увеличиваться в тысячи раз. В обычных условиях большая часть молочной кислоты подвергается метаболическим пре вращениям в печени, а также в почках, миокарде, и других органах (А.Л.Тверской, 1980). При фи зической нагрузке скелетные мышцы способны одновременно продуцировать и утилизировать МК. Лактат, поступивший в печень, окисляется в пируват, чему благоприятствует низкое отноше ние [NADH]/[NAD+] в цитозоле печени. Пируват затем превращается в печени в глюкозу в реак циях глюконеогенеза. Молочная кислота может также поглощаться легкими из сосудов малого круга кровообращения. Доля МК, подвергающейся окислению, по данным разных авторов, со ставляет от 10 – 12% до 50 – 90%, а превращается в глюкозу (глюконеогенез) – 10 – 30% (F.J.Liskaker et al., 2006). В патологических условиях метаболизм молочной кислоты может значи тельно меняться, что особенно важно для понимания патогенеза ЛА (F.J.Gennari, 2007). В свое время еще E.E.Gordon (1973) выделил 6 факторов, которые могут привести к развитию ЛА: сни жение доступа кислорода к клеткам;

нарушение процессов энергообразования;

блокада дыхатель ной цепи на уровне цитохромов, ферментов цикла Кребса, торможение транспорта восстанови тельных эквивалентов через мембрану митохондрий;

нарушение метаболизма пировиноградной кислоты.

Метаболический ацидоз развивается при травмах (C.Zacharias at al., 1999);

кровотечениях (P.A.Dietz, 1996;

J.Mikhail, 1999);

отравлениях (M.Otsuka et al., 1996;

N.Ferrandiere et al., 1998;

P.J.Dann, 1998);

сахарном диабете (Y.Buyukasik et al., 1998);

при острых инфекционных заболева ниях (A.J.Skowzonek et al., 1995;

M.Eriksson et al., 1998);

пересадке органов (S.Bkirchbaum et al., 1997), острой миокардиальной недостаточности в послеоперационном периоде (А.А.Байрамов и соавт., 1999) и многих других состояниях, которые приводят к коагулопатии потребления, гипер фибринолизу и активации функции тромбоцитов.

Компенсированный метаболический ацидоз лежит в основе таких заболеваний, как сахар ный диабет, гипертоническая болезнь, заболевания почек, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, атеросклероз и пародонтит (В.Ф.Жалко-Титаренко, 1989 и др.).

К числу немногих из агентов, роль которых в развитии ЛА в клинике установлена, относят ся некоторые представители бигуанидов (антидиабетические средства), особенно фенформин и метформин. Этому вопросу посвящен ряд работ и обзоров (Л.В.Рослякова и др., 1998;

J.A. Janssen, 2000;

F.Holleman et al., 2000;

G.Machet et al., 2006;

K.Lovas et al., 2000;

E.J.Houwerzijl et al., 2007 ).

Описаны случаи развития метаболического ацидоза и коагулопатии при отравлении фенформи ном (M.Ferrandiere et al., 2000). Использование антидиабетического препарата метформина в ряде случаев вызывает молочнокислый ацидоз, особенно у пациентов с нарушением функции печени и почек (F.Holleman et al., 2003;

G.Machet et al., 2000;

K.Lovas et al., 2000, 2004;

J.D.Latau et al., 2000;

A.A.Abbasi et al., 2000, 2005). Это обусловлено усилением процессов анаэробного гликолиза в стенке кишечника. Однако J.A. Janssen (2000) считает, что ЛА связан не столько с накоплением метформина, сколько с течением основного заболевания. По данным G.M.Reaven (1997) уровень лактата после 3-месячного приема метформина составил 1,23±0,09 ммоль/л против 0,95±0, ммоль/л наблюдаемого до лечения. Согласно другому исследованию (H.G.Wahl et al., 1997) уро вень лактата изменился с 1,22±0,04 до 1,68±0,31 ммоль/л после приема метформина в дозе от до 2250 мг в сутки в течение 10 недель. Таким образом, вероятность развития лактат-ацидоза, по данным авторов, на фоне приема данных препаратов крайне мала (0 – 0,084 случая на 1000 паци ентов в год). Этот риск повышается у больных с гипоксическими состояниями, тяжелой почечной, печеночной, сердечной недостаточностью и у лиц, злоупотребляющих алкоголем. Введение про дуктов парентерального питания: растворов фруктозы, сорбитола, ксилитола и сбалансированных жировых эмульсий для парентерального питания новорожденных (H.Paust et al., 1983), а также сокращение объема внеклеточной жидкости, отрицательный баланс калия может привести к воз никновению внутриклеточного метаболического ацидоза (M.L.Halperin, A.Gougoux, 1997). Часто ЛА встречается при отравлении различными ядами и лекарственными препаратами, в частности, формалином (M.Ferrandiere et al., 1998;

T.H.Trivedi et al., 2000);

приеме высоких доз парацетамола и сульфасалазина (50 мг) (R.D.Drun, 1998);

отравлении мышьяком (M.Ghariani, M.L.Adrien, 1991);

метилэтилкетонпероксидом (P.J.Karhulen et al., 1990). W.Hasse et al. (2000) считают, что высокие дозы эпинефрина и метилпреднизолона и других стероидных препаратов, используемые в лечении политравмы с повреждением спинного мозга, являются фактором риска в развитии метаболиче ского ацидоза, особенно на фоне гипергликемии. В клинической практике встречаются случаи ЛА после приема некоторых противоопухолевых антибиотиков и противоглистных средств (А.Л.Тверской, 1981). Некоторые авторы развитие ЛА наблюдали не только при выраженной ги поксии, но и при лейкемии, голодании, отравлениях этанолом, сепсисе.

В последние годы появились сообщения о развитии тяжелого ЛА у ВИЧ – инфициро ванных пациентов на фоне антиретровирусной терапии. Молочнокислый ацидоз наступает до вольно неожиданно и, часто, с быстрым фатальным исходом. Вопрос контроля этого синдрома все еще остается открытым (B. Megarbane et al., 2000;

R.Rubin et al., 2000;

J.A. Shaer et al., 2000;

H.J. Ter Hoestede et al., 2000;

C.A.Thompson, 2002). По данным A.Panadero et al. (1993), гиперлак тацидемия развивается у пациентов с нарушениями функции печени, в частности, при транс плантации печени в операционном и раннем послеоперационном периоде. Концентрация молоч ной кислоты прямо коррелирует со степенью нарушения функции печени – уровнем билирубина и активностью трансаминаз в крови. Это подтверждают работы H.Grosse et al. (1990), W.N. Dzik et al. (1988).

В патогенезе ЛА до сих пор остается много неясных вопросов. Накопление МК предпола гает стойкое нарушение баланса между ее продукцией и утилизацией. Наиболее очевидной при чиной увеличения продукции МК является гипоксия. Однако далеко не всегда, даже резкая, гипо ксия или другие состояния, характеризующиеся гиперлактацидемией, приводят к развитию ЛА. С другой стороны, ЛА нередко возникает на фоне состояний, не имеющих ничего общего, на первый взгляд, с гипоксией (А.Л.Тверской, 1981). E.Naito et al. (1999) связывают лактацидемию с дефек том пируватдегидрогеназного комплекса, катализирующего тиаминзависимое декарбоксилирова ние пирувата. Недостаточность тиамина у людей и экспериментальных животных приводит к серьезному нарушению функции митохондрий (P.Pannunzio et al., 2000). При этом отмечается уменьшение активности тиамин-зависмой -кетоглутаратдегидрогеназы и транскетолазы, досто верно увеличивается концентрация лактата вдвое и отмечается снижение рН плазмы и спиномоз говой жидкости.

Ряд статей и обзоров посвящены ЛА при MELAS синдроме (C.Y.Tsao et al., 2000;

Y.Compos et al., 2000;

P.N.Hsiao et al., 2000;

A.Bekker et al., 2000;

P.Zwirner et al., 2001;

D.Maion, 2001). Это один из примеров классической митохондриальной энцефаломиопатии. Молекуляр ный анализ показал наличие дефекта в дыхательной цепи митохондрий, при котором практически у всех пациентов развивается лактат-ацидоз. Подобный синдром может быть связан с мутациями различных генов (M. Hirano et al, 1994;

P. Lertrit et al, 1992;

S. T. Moraes, 1992). A.Flierl et al. (1997), R.K.Naviaux et al. (2000) описывают одиночные мутации в геноме митохондрий, ведущие к раз личным метаболическим нарушениям, в том числе и ЛА. I.D.Wexler et al. (1998) связывают семей ную гиперлактацидемию с недостаточной активностью пируваткарбоксилазы. Многие авторы считают, что без нарушения утилизации молочной кислоты развитие ЛА в организме невозможно.

Важнейший путь утилизации молочной кислоты - глюконеогенез. Среди ферментов, участвующих в этом процессе высокой чувствительностью к изменениям рН обладает пируваткарбоксилаза. При снижении рН угнетение ее активности может резко затормозить глюконеогенез (А.Л.Тверской, 1980). По данным М.М.Горн и соавт. (2000) способность печени утилизировать МК в нормальных условиях составляет 3400 ммоль/сут. Это вдвое превышает ее продукцию. При ацидозе этот про цесс нарушается, при рН крови ниже 7,1 происходит угнетение поглощения МК печенью в 10 раз.

Значительную роль в патогенезе лактат – ацидоза отводят нарушению функции почек (F.J.Gennari, 2000). Снижение рН перфузата до 7,2 – 7,1 активирует удаление МК изолирован ными почками (в отличие от печени), но при дальнейшем снижении рН этот процесс все же нарушается. В почках при ацидозе и других патологических процессах МК может превращаться в глюкозу в результате глюконеогенеза (J.E.Gerich, 2001). Хотя авторы считают, что почки уда ляют молочную кислоту преимущественно в результате метаболических, а не экскреторных про цессов, роль последних при ЛА не следует недооценивать. После повышения концентрации МК в крови (6 ммоль/л) экскреция лактата с мочой возрастает в линейной зависимости от ее содержа ния в крови и при выраженном ЛА становится весьма значительной. В этой связи можно еще раз сказать, что молочнокислый ацидоз нередко возникает на фоне сопутствующего нарушения функ ции почек. Доказательством этого является тот факт, что фенформин на 50% угнетает способ ность почек к выведению кислот (Л.А.Тверской, 1980). При сдвиге рН крови ниже 7,2 выведение МК почками снижается (R.Dzurik, 2001). ЛА часто сопровождается повышением концентрации метаболитов, свидетельствующих о почечной недостаточности (мочевины, креатинина, мочевой кислоты).

Л.А.Тверской (1980) отмечает, что для развития ЛА необходимо начальное повышение молочной кислоты в крови вследствие гипоксии или других факторов, вторым условием является нарушение функции органов и тканей (особенно печени) ответственных за утилизацию МК. Далее процесс может развиваться по механизму порочного круга.

Продукты анаэробного метаболизма, вызывающие ацидоз, представляют реальную опас ность для организма, так как способны не только нарушать функцию, но и приводить к морфоло гическим изменениям в различных органах и тканях. Накопление молочной кислоты, известной в качестве крупного донора протонов, изменяет гемостатические и реологические свойства крови, усиливает гипоксию тканей и уменьшает функцию энергообразования в клетках, вследствие раз общения гликолиза и цикла Кребса, снижает ресинтез АТР и ведет к увеличению энтропии в орга низме. В этих условиях особое значение приобретает исследование взаимосвязи между ацидозом, гемостазом и изменением морфологии органов, для понимания динамики патологического про цесса при различных заболеваниях.

1.2.Морфология органов и тканей при метаболическом ацидозе.

Влияние ацидоза на морфологию внутренних органов изучалось А.К.Хорольским и соавт.

(1989). Гистохимическими и электронно-микроскопическими методами было показано, что сдвиг рН от 7,4 в контроле до 6,5 в опыте приводит к деструктивно-дистрофическим изменениям мио карда, печени и других органов. Ацидоз вызывает изменения стенки сосудов, отек соединительной ткани и нарушение мягкого остова внутренних органов.

S.Behmanesh, O.Kempski (2000) изучали влияние молочнокислого ацидоза на структуру эн дотелиоцитов in vitro. Одним из ранних признаков ишемии является увеличение концентрации лактата, которое происходит в результате интенсификации анаэробного метаболизма. Сдвиг рН среды от 7,4 до 6,8 не вызывает набухания эндотелиоцитов, а при рН ниже 6,6, 6,4 и 6,0 происхо дит существенный Н+-зависимый отек и вздутие клеток.

A.J.Skowronek et al. (1995) считают, что патологические процессы в легких при сдвиге рН в кислую сторону сопровождаются появлением очагов эмфиземы и ателектаза, которые увеличива ются с нарастанием ацидоза. Авторы приходят к выводу, что динамика и характер наблюдаемых при экспериментальном ацидозе морфологических изменений в различных органах зависят от продолжительности и степени сдвига рН в кислую сторону.

В.В.Альфонсов и соавт. (1991, 2005) показали, что продукты метаболизма, вызывающие ацидоз, представляют реальную опасность для организма, так как способны не только нарушать функции, но и приводят к морфологическим изменениям в различных органах. Эксперименталь ный ацидоз различной глубины (от рН 7,3 до 6,5 и продолжительности от 5 мин. до 3 часов) при водит к неспецифическим морфологическим изменениям во всех изучаемых органах и тканях (печени, почках, легких, сердце, желудочно-кишечном тракте). В кровеносном русле всех органов появляются признаки диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови. В сосудистой стенке обнаруживается набухание интимы и слущивание эндотелия, разбухание фрагментация соединительнотканных элементов. Авторами установлено, что в цитозоле гепатоцитов при ацидо зе появляется крупная зернистость и множество жировых вакуолей, зерна гликогена образуют комплексы, располагающиеся около митохондрий и ядерной оболочки. Выраженные изменения возникают в почке. При рН 7,2 – 7,0 в течение 5 – 30 минут развивается набухание цитоплазмы проксимальных канальцев нефроцитов, появляются зернистая дистрофия, жировые вакуоли, де струкция щеточной каемки. В отдельных участках коркового вещества наблюдаются изменения структуры сосудистого клубочка почечного тельца.

Таким образом, в литературе имеются единичные работы, которые свидетельствуют о мор фологических изменениях в различных органах и тканях при метаболическим ацидозе. Показано, что эти изменения зависят от глубины и продолжительности ацидоза. Данные о структурных нарушениях при ацидозе в органах иммунной системы практически отсутствуют. Между тем, Ю.Шутеу и соавт. (1981) отмечают, что при различных видах шока, сопровождающихся ацидозом, в системном кровообращении появляются антитела к ДНК и к другим структурам через 6 минут от начала шока. Наиболее уязвима функция тимуса, а затем и периферических иммунных образо ваний – лимфатических узлов и селезенки. Если больному удается выжить после критического состояния шока, то на восстановление нормальной деятельности иммунной системы потребуется более шести месяцев и даже несколько лет.

В связи с вышеизложенным, изучение влияния сдвигов кислотно-основного равновесия на морфологию органов и тканей, гемокоагуляционный и сосудисто-тромбоцитарный гемостаз пред ставляется весьма значимым.

Глава 2. Материал и методы исследования.

2.1. Методика экспериментальной модели лактат-ацидоза.

Исследования проведены на беспородных животных (42 кошках), которые содержались в виварии на стандартном рационе. Животные (кошки) были разделены на 5 групп: 6 животных от носились к контрольной группе и 4 группы по 8 животных подвергались экспериментальному лактат-ацидозу. Дополнительно были использованы 4 животных для проведения электронной микроскопии. Лактат-ацидоз создавали введением 3% раствора молочной кислоты в изотониче ском растворе NaCl в бедренную вену под гексеналовым наркозом. Различный сдвиг рН в кис лую сторону достигали дозированным капельным введением лактата обычно от 20 до 38 капель в мин, и через каждые пять минут забирались порции крови для определения сдвига рН на рН метре. По достижении необходимого значения рН (от 7,2, 7,0, 6,8, 6,5), в течение 5 – 10 мин дозу вводимой молочной кислоты уменьшали до 3 – 5 капель в мин, и поддерживали необходимый уровень соответственно 30, 60, 120, 180 мин, затем брали пробы крови для изучения показателей системы гемостаза и кусочки органов для гистологических, гистохимических и электронномик роскопических исследований. Выведение животных из опытов проводилось с соблюдением пра вил эвтаназии, предусмотренных «Международными рекомендациями (этический кодекс) по про ведению медико-биологических исследований с использованием животных», 1985;

Приказом Ми нистерства высшего и среднего специального образования СССР №742 «Об утверждении Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных»;

УК РФ, статья 245 «Жесткое обращение с животными». Морфологические изменения в органах и показатели гемостаза изуча лись в зависимости от продолжительности и глубины ацидоза. Объем и структура исследованного материала приведены в таблице 1.

Таблица Структура и объем выполненных исследований № Исследуемый материал и лабо- Величина рН в контроле и Количе раторные показатели в опытах ство ис (кол-во стекол) следова К 30 60 120 ний 7,4 7,2 7,0 6,8 6, Тимус.

Качественные показатели 30 40 40 40 40 Селезенка.

Морфометрия и стат.обработка. 216 108 108 Качественные показатели. 30 40 40 40 40 Лимфатические узлы.

Морфометрия и стат.обработка.

Качественные показатели. 520 260 260 260 260 Иммунные органы ЖКТ. 288 384 384 384 384 Качественные показатели.

Сердце. 10 40 40 40 40 Качественные показатели.

Печень. 10 30 30 30 30 Качественные показатели.

Почки. 10 30 30 30 30 Качественные показатели.

Легкие. 10 10 10 10 10 Качественные показатели.

Электронная микроскопия. 10 30 30 30 30 9 10 15 15 10 10 Итого 2.2. Морфологические методы исследования органов и тканей.

Взятие материала для микроскопического исследования тканей органов иммунной системы осуществлялось у лабораторных животных под гексеналовым наркозом в контроле, и после вве дения 3% раствора молочной кислоты на 0,85% растворе хлорида натрия. Кусочки тканей и орга нов размером 0,5 – 1,0 см фиксировались в 10% забуференном нейтральном растворе формальде гида (рН 7,0) при температуре 18 - 20°С в течение 24 – 48 ч. Заливка осуществлялась с использо ванием парафина (Г.А.Меркулов, 1969).

Методы окрашивания морфологического материала:

1. Окраска гематоксилин-эозином.

2. Окраска гемотоксилин-пикрофуксином по Ван-Гизон.

3. Окраска гематоксилином Вейгерта в модификации Харта.

4. Импрегнация азотнокислым серебром по Футу.

5. Окраска кармином по Бесту.

6. Электронная микроскопия кусочков органов производилась при рН 7,4 (контроль), 7,2 и 7, (опыт) через 15 и 30 мин после начала ацидоза. Фиксация тканевых блоков размером 0,5 – мм2 и длиной 5 мм осуществлялась четырехокисью осмия в течение 1,5 – 2 часов с последую щей отмывкой в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) с добавлением кальция хлорида (из расчета 0,5 мл 1% раствора кальция хлорида на каждые 100 мл буфера) 4 свежие порции (по 15 мин в каждой). Для подготовки к пропитке водо-нерастворимыми смолами, отмытые от излишков фиксатора, тканевые блоки проводили через спирты возрастающей крепости (схема проводки:

50% - три свежие порции по 10 минут;

70% - три свежие порции по 10 минут;

80% - три свежие порции по 10 минут;

95% - три свежие порции по 10 мин;

100% - три свежие порции по мин). Далее обезвоженные кусочки тканей заливались в ЭПОН – 812. Полимеризацию матери ала производили ступенчато при температуре 37, 65 0С в течение 24 ч. Срезы блоков готовили на ЛКВ (III модель) с помощью стеклянных ножей. Для исследования отбирали ленты срезов серебристого цвета. Увеличение контрастности препаратов достигали при использовании не скольких методик: 1. Контрастирование материала в блоках уранилацетатом;

2. Контрастиро вание срезов сначала в 2 – 5% растворе уранилацитата, затем цитратом свинца;

3. Комбиниро ванными способами контрастирования материала в блоках и срезах. Ультраструктурный ана лиз тканей и фотографирование на фото пластинки для ядерных исследований производили с помощью микроскопа IEM – 7A (Япония) при ускоряющем напряжении 50 кВ и увеличениях на экране микроскопа 6000 – 30000 раз.


7. Микрофоторграфии были созданы с помощью аппаратно-компьютерного комплекса, включа ющего лабораторно-иccлeдoвaтeльcкий микpocкoп Оlymрus ВХ41, специализированную циф ровую фотовидеокамеру для микроскопии камера ProgRes C 8. Системное медицинское морфометрическое исследование включало в себя следующие этапы:

описание морфометрического материала, собственно морфометрическое исследование – изме рение и подсчет изучаемых объектов, определение объемных долей, процентного соотношения объектов с использованием программного обеспечения для анализа изображения «Мастер морфология 5.2».

9. Статистическая обработка материала проводилась на ПЭВМ Pentium с использованием пакета программ Microsoft Excel 2007 для операционной системы Windows-7. Достоверность разли чий показателей в группах оценивали по величине t – критерия Стьюдента.

Глава 3. Морфология органов иммунной системы при метаболическом ацидозе.

В настоящее время система гемостаза перестает рассматриваться изолированно, как муль тиферментный каскад кровотока, ее анализ переводится в плоскость взаимосвязей с другими си стемами организма, в том числе, и с иммунитетом (Б.И.Кузник и соавт., 1985 – 2009;

Н.Н.Цыбиков и соавт., 1997-2009;

А.П.Ельчанинов и соавт., 2004;

J.H.McLinden, 2001;

N.Bos, 2001;

D.Carville, 2001). Окклюзия микроциркуляторного русла в виде различных вариантов внутрисосудистого свертывания крови может сопровождаться нарушением функции иммунных органов (B.R.Soller, 2004;

P.Brincean,2001).

Одним из важных повреждающих факторов метаболизма является молочная кислота (МК), приводящая к развитию лактат-ацидоза (ЛА), впервые описанного Huckabee (1961). Молочная кислота представляет собой конечный продукт гликолиза и образуется в результате восстановле ния пировиноградной кислоты. Общая продукция МК организмом взрослого человека составляет около 1300-1500 ммоль/сут. При физической нагрузке продукция лактата может увеличиваться в тысячи раз. В обычных условиях большая ее часть подвергается метаболическим превращениям в печени, почках, миокарде, и других органах. Скелетные мышцы способны одновременно проду цировать и утилизировать МК. Накопление молочной кислоты, известной в качестве крупного до нора протонов, изменяет гемостатические и реологические свойства крови, усиливает гипоксию тканей и уменьшает функцию энергообразования в клетках, вследствие разобщения гликолиза и цикла Кребса, снижает ресинтез АТР и ведет к увеличению энтропии в организме. Продукты анаэ робного метаболизма, вызывающие ацидоз, способны не только нарушать функции, но и приво дить к морфологическим изменениям в различных органах и тканях.

3.1. Влияние ацидоза на морфологию тимуса.

Вилочковая железа кошки представляет собой крупный железистый орган розового цвета, диаметром 5-10 мм, имеет две асимметричные доли, плотно примыкающие друг к другу и связанные между собой рыхлой соединительной тканью. Форма долей варьирует. Тимус вытянут, сплющен с боков, лежит в грудной полости, непосредственно за грудиной в переднем средостении под трахеей и легкими. Краниально тимус двумя выростами выходит за пределы 1 ребра в область шеи.

Гистологически каждая доля тимуса у кошки окружена соединительнотканной капсулой, она посылает отроги в вещество каждой доли, образуя септы, разделяющие долю, не полностью, на дольки шириной 1-2 мм. В центральной части ткань тимуса непрерывна. При гистологическом ис следовании тимуса интактных животных прослеживается дольчатое строение. Между дольками находятся прослойки соединительной ткани, пучки которой ответвляются от тонкой капсулы орга на. Соединительнотканные волокна проникают в паренхиму тимуса на разную глубину. Величина капсулы составляет 32,2 – 38,8 мкм. Ретикулиновые волокна в фиброзной оболочке капсулы тол щиной от 0,6 до 1,0 мкм, хорошо импрегнируются азотнокислым серебром. В поверхностном слое они ориентированы параллельно поверхности капсулы, а в глубоком – параллельно ее поперечнику.

Эластические волокна от 0,2 – 0,8 мкм в диаметре располагаются равномерно по всему срезу капсу лы. Коллагеновые волокна толщиной 1,6 – 2,0 мкм в поверхностном слое фиброзной оболочки кап сулы плотно прилегают друг к другу и образуют пучки. В междольковой соединительной ткани ар гирофильные волокна хорошо импрегнируются азотнокислым серебром, толщина их составляет 0, – 1,2 мкм, эластические волокна 0,2 – 0,8 мкм равномерно располагаются в поперечнике соедини тельнотканных перегородок. Коллагеновые волокна плотно прилежат друг к другу, интенсивно окрашиваются кислым фуксином, равномерно лежат в поперечнике септ. Микроскопически дольки паренхимы железы часто сливаются друг с другом. В них отчетливо видно наружное темное корко вое вещество и центральное светлое мозговое вещество. Корковое вещество густо населено лим фодными клетками, медуллярная часть содержит меньшее количество лимфоцитов, а в основном ретикулярные клетки.

При метаболическом ацидозе (рН 7,2 – 7,0) продолжительностью от 30 до 60 мин, вызванном внутривенной инъекцией молочной кислоты наблюдаются существенные изменения в соединитель нотканных структурах, паренхиме и сосудистом русле вилочковой железы. По ходу фиброзной оболочки капсулы коллагеновые волокна интенсивно окрашиваются кислым фуксином, однако по являются единичные участки с бледным окрашиванием в местах отека и набухания волокон. В бо лее глубоких слоях капсулы коллагеновые волокна также сохраняют способность окрашиваться кислым фуксином, при этом их структурная целостность не нарушается. На поверхности капсулы наблюдаются разрывы и отек фиброзной оболочки, происходит разделение капсулы на 2-3 слоя (фото 3.1). Толщина капсулы увеличивается до 125 мкм. В наружном фиброзном слое коллагеновые волокна собираются в пучки (он более компактный, чем внутренний фиброзный слой) толщиной 4, мкм – 6,5 мкм.

Междольковая соединительная ткань находится в состоянии отека, наблюдается набухание и утолщение коллагеновых и эластических волокон. Толщина междольковых соединительнотканных перегородок в различных участках составляет 85мкм;

50мкм;

30мкм;

25мкм (фото 3.2). Аргиро фильные волокна в капсуле вилочковой железы сохраняют способность импрегнироваться сереб ром, некоторые из них находятся в состоянии отека. Толщина их колеблется от 0,8 мкм до 1,2 мкм (фото 3.3, 3.4). В паренхиме долек имеются фрагментированные ретикулиновые волокна, однако структура аргирофильного каркаса в целом сохраняется. В светлых центрах волокна окрашиваются в меньшей степени, чем в темных центрах. По видимому, деструкция этих волокон более выражено в мозговом веществе тимуса. В стенке сосудов аргирофильные волокна слабо импрегнируются се ребром, встречаются утолщенные, фрагментированные волокна. Эластические волокна толщиной 0,8 мкм – 1,0 мкм слабо окрашиваются в коричневый цвет, многие из них отечны и утолщены. В междольковых артериях внутренние эластические мембраны утолщены, в некоторой части артерий наружная эластическая мембрана разрушена. В венозной стенке наблюдается аналогичная картина.

В просвете междольковых артерий и вен наблюдаются сладжи эритроцитов и лейкоциты, происходит расслоение крови на форменные элементы и плазму. Просвет междольковых артерий в пределах 50-75 мкм, толщина стенки составляет 25-36 км. Междольковые вены имеют просвет 100 200мкм, толщина стенки варьирует от 18 до 28 мкм, встречаются вены с оптически пустым просве том. В мозговых зонах долек просвет капилляров расширен, они забиты форменными элементами крови, наблюдается отек стенки сосудов, расширение межклеточных щелей мозгового вещества.

Толщина темных зон составляет: 180 мкм;

300 мкм;

350 мкм;

некоторые дольки не имеют светлых центров. Размеры светлых центров 800 мкм на 1100 мкм;

700 мкм на 700 мкм;

300 мкм на 600 мкм.

Фото 3.1. Вилочковая железа кошки. Отек и расслоение капсулы при рН крови 7,0 и продол жительности ацидоза 60 мин. Ван-Гизон. Ув.: об. 40, ок. 7.

Микрофотография.

Фото 3.2. Вилочковая железа кошки. Долька тимуса, отмечается расширение междольковых щелей при рН крови 7,2 и продолжительности ацидоза 30 мин. Гематоксилин-эозин. Ув.: об.40, ок.

7. Микрофотография.

Фото 3.3. Вилочковая железа кошки. Капсула тимуса, набухание, фрагментации и расслоение аргирофильных волокон капсулы и паренхимы при рН крови 7,15 и продолжительности ацидоза мин. Импрегнация серебром по Футу. Ув.: об. 20, ок. 8. Микрофотография.

Фото 3.4 Вилочковая железа кошки. Капсула тимуса, набухание, фрагментации и расслоение аргирофильных волокон капсулы и паренхимы при рН крови 7,0 и продолжительности ацидоза мин. Импрегнация серебром по Футу. Ув.: об. 40, ок 7.

Границы между светлыми и темными зонами долек сохраняются (фото 3.5). В паренхиме ор гана выражены процессы диффузной делимфатизации (фото 3.6).

При метаболическом ацидозе рН 6,8 продолжительностью 120 мин нарастают изменения стромального и паренхиматозного компонентов вилочковой железы. В междольковой артерии диа метром 112 мкм отмечается отек стенки: внутренний слой – 9,6 мкм, средняя оболочка 34 мкм, наружная оболочка – 71,6 мкм, общая толщина стенки 115,2 мкм, а также десквамация эндотелия (фото 3.7). В междольковой вене диаметром 60,5 мкм отмечается отек стенки сосуда, в просвете со суда также обнаруживается плазма и эритроциты, а рядом вена с оптически пустым просветом.

Междольковая соединительная ткань находится в состоянии отека. Коллагеновые волокна трабекул в большенстве окрашиваются кислым фуксином, однако большое количество из них утолщено, отечно, выявляются фрагментации, коллагеновые волокна с диаметром 1,6 мкм лежат рыхло, соби раются в пучки 4,4 мкм – 8,4 мкм. В междольковой соединительной ткани обнаруживается жировая инфильтрация (фото 3.8).


В дольках вилочковой железы отсутствует деление на мозговое и корковове вещество, внут ридольковые сосуды находятся в состоянии отека, расширены междольковые щели, имеются участ ки, пропитанные плазмой. По периферии и внутри некоторых долек отмечается жировая инфиль трация.

По данным морфологических исследований можно предполагать, что идет разрушение до лек и их жировая инфильтрация. Те же процессы выявляются и в капсуле органа (фото 3.8). В не которых дольках интенсивно увеличивается объем соединительной ткани. Характерной особенно стью изменений тимуса при экспериментальном лактат-ацидозе является частичная делимфатизация органа, которая нарастает при увеличении сдвига рН в кислую сторону.

Фото 3.5. Вилочковая железа кошки. Долька тимуса, сохраняется граница между корковым и мозго вым веществом, расширение междольковых щелей, отек и кровоизлияния в паренхиме при рН крови 7,2 и продолжительности ацидоза 30 мин. Гематоксилин-эозин. Ув.: об. 8, ок. 7. Микрофотография.

Фото 3.6. Вилочковая железа кошки. Очаговая делимфатизация, расширение межклеточных щелей при рН крови 7,0 и продолжительности ацидоза 60 мин. Гематоксилин-эозин. Ув.: об. 8, ок. 7.

Микрофотография.

Фото 3.7. Вилочковая железа кошки. Расслоение, отек эластических волокон междольковой трабекулы, трабекулярных артерии и вены, околососудистого пространства при рН крови 7,0 и про должительности ацидоза 115 мин. Гематоксилин-эозин. Ув. Ок. 8, об. 9. Микрофотография.

Фото 3.8. Вилочковая железа кошки. Жировая инфильтрация паренхимы тимуса при рН кро ви 6,8 и продолжительности ацидоза 120 мин. Гематоксилин-эозин. Ув.: об. 20, ок. 7. Микрофото графия.

В наружной оболочке артерии единичные ретикулиновые волокна толщиной 1,2 мкм фраг ментированы. В средней оболочке половина волокон находится в состоянии геля (серые), другие волокна толщиной 1,2 - 1.8 мкм утолщены и фрагментированы. В междольковой ткани основная масса ретикулиновых находится волокон в состоянии геля (серые), только единичные (черные) фрагментированы, толщина этих волокон составляет 1,4 – 2,0 мкм. В части внутридольковых сосу дов ретикулярная строма сохранена, но волокна разорваны. Большинство ретикулиновых волокон долек сохраняет черный цвет, но в них отмечаются разрывы в виде очагов серого цвета. В меж дольковых артериях (крупных) внутренняя эластическая мембрана толщиной 4,0 мкм сохранена, наружная эластическая мембрана подвергается деструкции, но сохраняется вид непрерывного коль ца, в наружной оболочке эластические волокна слабо окрашиваются фуксилином Вейгерта, боль шинство из них фрагментированны. В малых междольковых артериях сохранена только внутренняя эластическая мембрана, выявляются единичные фрагментированные эластические волокна.

При метаболическом ацидозе рН 6,5 продолжительностью 180 мин отмечаются более глу бокие изменения стромы и паренхимы вилочковой железы. Капсула находится в состоянии отека, разделяется на три слоя: толщина поверхностного слоя увеличивается до 125 - 150 мкм, глубокий слой фиброзный (рыхлый) отечный, толщина его варьируется от 37 - 55 мкм. Общий диаметр попе речника капсулы возрастает до 250 - 300 мкм и более. По ходу фиброзной оболочки отмечаются участки с бледным окрашиванием коллагеновых волокон, в основной массе оболочки, в глубине слоя коллагеновые волокна окрашиваются кислым фуксином, а на поверхности бледно окрашены, отмечаются разрывы фиброзной оболочки. В поверхностном слое последней обнаруживаются участки пигмента черного цвета среди коллагеновых волокон, коллагеновые волокна собираются в пучки толщиной 9,0 – 15,0 мкм. Междольковая соединительная ткань находится также в состоянии отека. Толщина междольковых соединительнотканных перегородок увеличивается до 150 мкм;

мкм;

50 мкм. Просвет междольковых артерий и вен забит эритроцитами и лейкоцитами. Просвет артерий 75 мкм – 50 мкм, толщина сосудистой стенки 86 мкм – 50 мкм, параметры междольковой вены – диаметр 200 мкм, толщина стенки 28 мкм;

при диаметре 100 мкм толщина стенки вены мкм. Встречаются единичные междольковые вены с оптически пустым просветом. В междольковой соединительной ткани отмечается жировая инфильтрация.

В светлых центрах долек просвет капилляров расширен, они забиты форменными элемента ми крови, стенка сосуда отечна, отмечается расширение межклеточных щелей светлого центра.

Толщина темных зон (по периферии долек) 300;

350;

600 мкм. Некоторые дольки без светлых цен тров. Размеры светлых центров 1250780;

800770 мкм. Границы между темными и светлыми зо нами долек размыты. Аргирофильные волокна находятся в состоянии геля. Волокна не импрегни руются серебром, серого цвета, утолщены до 5,0 мкм – 9,0 мкм, разорваны. Только в непосред ственной близости от дольки (в самом глубоком слое капсулы) сохраняется в единичных волокнах способность захватывать серебро, толщина этих волокон 1,5 – 2,0 мкм. Толщина аргирофильных волокон 1-2 мкм. В межуточной соединительной ткани выражены явления отека и рассорение воло кон. В поперечнике долек аргирофильные волокна разорваны, толщина их 1,0 – 2,0 мкм, они импре гнированы серебром, а основная часть аргирофильных волокон находится в состоянии геля (серого цвета при импрегнации серебром по Футу, рыхлые, толщиной до 4.0-6.8мкм). В светлых центрах аргирофильные волокна также находятся в состоянии геля (серые, рыхлые, лежат сплошной мас сой).

При окраске по Харту в фиброзной оболочке капсулы эластические волокна толщиной 0,8 – 1,2мкм, они слабо окрашены, имеют коричневый цвет. В поперечнике капсулы эластические волок на 2 – 4 мкм разорваны. В междольковых артериях сохранены внутренняя эластическая мембрана, толщиной 3,2 – 4,8 – 5,2 мкм, и наружная, толщиной 2,8 – 3,2 мкм, выражены набухание и рассло ение волокон сосудистой стенки, отек околососудистого пространства (фото 23). В паренхиме до лек эластические волокна в сосудах не выявляются.

Таким образом, ацидоз оказывает выраженное влияние на стромальные и паренхиматозные компоненты вилочковой железы. Наиболее характерными изменениями в тимусе являются: отек со судистых стенок артерий и вен, околососудистых пространств и соединительнотканных структур, набухание и отек капсулы и междольковых перегородок, деструкция аргирофильного каркаса, а также нарастающая делимфатизация паренхимы органа, а также жировая инфильтрация паренхимы и соединительнотканной стромы. Все эти процессы усиливаются при углублении и увеличении продолжительности ацидоза.

3.2. Влияние сдвига рН в кислую сторону на структуру селезенки.

Размеры селезенки кошки в контроле в среднем составляют: длинник 10,25±0,06, ширина 2,9±0,03, толщина 0,62±0,04 см. Селезенка кошки имеет капсулу, толщина которой в среднем равна 34,5 1,8 мкм. В фиброзной оболочке капсулы ретикулиновые волокна толщиной от 0,8 до 2,4 мкм ориентированы в различных направлениях, ветвятся, контактируют между собой и образуют сеть с петлями полигональной формы, размерами от 8,5 9,6 мкм до 9,2 10,6 мкм. Ретикулиновые во локна в поверхностном слое фиброзной оболочки ориентированы параллельно поверхности капсу лы, а в глубоком слое – параллельно поперечнику ее. Они составляют, в среднем, 52,10 1,0% в по перечнике фиброзной оболочки капсулы. Эластические волокна толщиной от 0,2 до 0,8 мкм распо лагаются равномерно в поперечнике фиброзной оболочки капсулы, слабо извитые, редко контакти руют между собой и при этом образования петель проследить не удается. Эластические волокна со ставляют, в среднем, 12,05 0,14% в поперечнике фиброзной оболочки капсулы селезенки. Колла геновые волокна толщиной от 6,0 до 7,4 мкм в поверхностном слое фиброзной оболочки ориентиро ваны параллельно поверхности капсулы, плотно прилежат друг к другу. В глубоком слое фиброзной оболочки волокна располагаются рыхло, ориентированы в различных направлениях. В целом по ор гану коллагеновые волокна составляют, в среднем, 35,85 1,16% в поперечнике фиброзной капсу лы селезенки.

Клеточный компонент представлен фибробластами с ядрами шаровидной и овоидной формы и гладкомышечными клетками с ядрами веретеновидной формы. Количество фибробластов с ядра ми шаровидной и овоидной форм невелико, и в среднем они составляют соответственно 15, 0,17% и 24,65 0,16% на 100 клеток фиброзной оболочки, а гладкомышечные клетки – 60, 0,01%.

Толщина подкапсулярных трабекул в среднем равна 62,6 5,6 мкм. Ретикулиновые волокна толщиной от 0,6 до 1,0 мкм, ветвясь и контактируя между собой, формируют равномерно выражен ную по всей толщине трабекул сеть с петлями полигонально-овоидной формы, размерами от 4, 8,5 мкм до 4,3 9,8 мкм и составляют от 56,5 до 69,8% (в среднем 63,15 1,65%) в поперечнике подкапсулярных трабекул. Эластические волокна толщиной от 0,2 до 0,8 мкм равномерно распола гаются в поперечнике подкапсулярных трабекул. Они прямолинейные, редко ветвятся и контакти руют между собой так, что образования петель проследить не удается. Эластические волокна со ставляют от 10,6 до 12,6% (в среднем 11,60 0,25%) в поперечнике подкапсулярных трабекул, плотно прилежат друг к другу и составляют от 19,6 до 30,9% (в среднем 25,25 1,40%) в попереч нике.

В подкапсулярных трабекулах количество гладкомышечных клеток значительно, и они со ставляют от 58,61 до 62,1% (в среднем 60,36 0,4%), фибробластов с ядром овоидной формы от 28, до 29,2% (в среднем 28,85 0,09%) на 100 клеток подкапсулярных трабекул. Количество фибробла стов с ядрами шаровидной формы в среднем составляет 10,79±0,10%.

Поперечник общих сосудистых влагалищных оболочек варьирует от 100,0 до 280,0 мкм и в среднем равен 210,0 22,4 мкм.

В общих сосудистых влагалищных оболочках ретикулиновые во локна толщиной от 0,6 до 1,2 мкм ориентированы в различных направлениях, ветвятся и контакти руют между собой с образованием сети, густота которой увеличивается от центра к периферии об щих сосудистых влагалищных оболочек, и составляют от 52,5 до 72,0% (в среднем 62,25 2,40%) в их поперечнике. Эластические волокна толщиной от 0,2 до 0,8 мкм ориентированы параллельно длиннику общих сосудистых влагалищных оболочек, редко контактируют между собой и составля ют от 12,0 до 13,0% (в среднем 12,50 0,12%) в поперечнике общих сосудистых влагалищных обо лочек. Коллагеновые волокна толщиной от 5,9 до 7,3 мкм в общих сосудистых влагалищных обо лочках располагаются рыхло и составляют от 16,0 до 34,5% (в среднем 25,25 2,30) в поперечнике.

В общих сосудистых влагалищных оболочках количество гладкомышечных клеток, так же как и в подкапсулярных трабекулах, значительно и составляет от 57,6 до 61,5% (в среднем 59, 0,49%) на 100 клеток, а фибробластов с ядрами шаровидной и овоидной формы соответственно от 8,9 до 9,9% (в среднем 9,40 0,12%) и от 29,6 до 32,5% (в среднем 31,05 0,36%) на 100 клеток.

Процентное отношение площади соединительной ткани в 1 мм2 к площади среза селезенки составляет от 7,59 до 8,9% и в среднем равно 8,25 0,19%.

Лимфатические фолликулы шаровидной и овоидной формы, размерами от 200,0 500,0 мкм разделяются на Т- и В-зоны, четко отграниченные друг от друга. Фолликулы отстоят друг от друга на расстоянии от 300,0 до 1100,0 мкм. Процентные отношения площади лимфатических фолликулов в 1 мм2 площади среза селезенки составляют от 4,4 до 6,62% (в среднем 5,51 0,28%), а красной пульпы варьируют от 84,48 до 88,01% и в среднем равны 86,25 0,44%.

Метаболический ацидоз (рН – 7,2 – 7,0) приводит во всех случаях к достоверному уменьше нию длины, ширины органа соответственно на 9,8%, 29,3% по сравнению с контролем. От момента введения молочной кислоты и на протяжении 1 часа отмечается увеличение поперечника капсулы на 97,1%, подкапсулярных трабекул на 38,9% (рис. 5). В фиброзной оболочке капсулы селезенки прослеживается увеличение объема коллагеновых волокон на 96,2% на фоне снижения процентных отношений содержания эластических на 43,2% и ретикулиновых волокон на 56,1% в поперечнике фиброзной оболочки капсулы (рис. 6) (фото 3.9).

Рис 5.

Изменение соединительно-тканных структур селезенки кошки при лактат-ацидозе 200 рН 7,4 рН 7,2 – 7, ** ** Поперечник капсулы Поперечник Поперечник общ их (мкм) подкапсулярных сосудистых трабекул (мкм) влагалищ ных оболочек (мкм) Рис 6.

Соотношение соединительно-тканных волокон в капсуле селезенки кошки при % лактат-ацидозе ** 70 рН 7,4 рН 7,2 – 7, ** ** коллагеновые ретикулиновые аргирофильные волокна волокна волокна Ретикулиновые волокна толщиной от 0,6 до 1,0 мкм располагаются в глубоком слое оболоч ки. Они ориентированы в различных направлениях, ветвятся, контактируя между собой. По ходу ретикулиновых волокон отмечаются разрывы, фрагментации. Ретикулиновые волокна как бы вы тесняются в глубокие отделы фиброзной оболочки капсулы. Эластические волокна толщиной от 0, до 0,8мкм располагаются в центре фиброзной оболочки, они становятся более извитыми, редко контактируют между собой, некоторые из них фрагментированы, разорваны, находятся в состоянии отека. Коллагеновые волокна толщиной от 6,2 до 7,8 мкм в поверхностном слое фиброзной оболоч ки ориентированы параллельно поверхности капсулы и плотно прилегают друг к другу. В глубоком слое оболочки волокна располагаются рыхло, ориентированы в различных направлениях, отмечает ся отек и утолщение волокон. Характерна интенсивная окраска волокон кислым фуксином. В целом по органу объем коллагеновых волокон значимо возрастает почти вдвое в поперечнике фиброзной оболочки капсулы селезенки.

Клеточный компонент фиброзной оболочки капсулы селезенки при ацидозе (в эксперимен тальной группе с рН от 7,2 до 7,0) также претерпевает изменения. Он представлен фибробластами с ядрами шаровидной формы, размерами от 2,62,6 мкм до 2,92,9 мкм, фибробластами с ядрами овоидной формы от 3,210,8 мкм до 4,014,6 мкм и гладкомышечными клетками с ядрами верете новидной формы, размерами от 1,214,2 до 1,314,5 мкм. Количество фибробластов с ядрами ша ровидной формы достоверно уменьшается на 30,1%, фибробластов с ядром овоидной формы на 24,9% по сравнению с контролем и они составляют соответственно от 8,6% до 9,5% и от 28,4 до 33,2% на 100 клеток фиброзной оболочки селезенки, а число гладкомышечных клеток практически не изменяется по сравнению с контролем и составляет от 57,3 до 63,0% на 100 клеток фиброзной оболочки (рис. 7).

Рис 7.

Процентное соотношение клеток в капсуле селезенки кошки при лактат-ацидозе % 60 рН 7,4 рН 7,2 – 7, ** ** Фибробласты с Фибробласты с Гладкомышечные ядрами шаровидной ядрами овоидной клетки формы формы В подкапсулярных трабекулах при метаболическом лактат-ацидозе (рН крови 7,2 – 7,0) так же, как в фиброзной капсуле органа отмечается изменения количественного состава волокон. Рети кулиновые волокна толщиной от 0,6 до 1,0 мкм располагаются по периферии подкапсулярных тра бекул. Они фрагментированы, отмечается достоверное уменьшение количества ретикулиновых во локон на 61,9% в поперечнике подкапсулярных трабекул по сравнению с контролем. Эластические волокна толщиной от 0,2 до 0,8 мкм располагаются в центральных отделах трабекул, они более из витые по сравнению с контролем, редко контактируют между собой, их количество достоверно снижается на 15,1%. Коллагеновые волокна толщиной от 6,0 до 7,4 мкм ориентированы параллель но длиннику подкапсулярных трабекул, плотно прилегают друг к другу, рыхлые, в состоянии оте ка, сохраняется способность волокон окрашиваться кислым фуксином. Объем коллагеновых воло кон возрастает при ацидозе (рН крови 7,2) более чем в два раза (р 0,001) (рис. 8).

Рис. 8.

Проценткое соотношение соединительно тканных волокон в подкапсулярных трабекулах селезенки кошки при лактата-ацидозе % 80 рН 7,4 рН 7,2 – 7, ** ** коллагеновые ретикулиновые аргирофильные волокна волокна волокна Клеточный компонент подкапсулярных трабекул представлен также фибробластами с ядра ми шаровидной формы, размерами от 2,82,8 мкм до 3,03,0 мкм, фибробластами с ядрами овоид ной формы, размерами от 3,613,8 мкм до 4,114,8 мкм и гладкомышечными клетками с ядрами ве ретиновидной формы, размером от 1,316,3 мкм до 1,518,2 мкм. Клеточный состав подкапсуляр ных трабекул изменяется недостоверно (рис. 9).

Рис. 9.

Процентное соотношение клеток в подкапсулятных трабекулах селезенки кошки при лактат-ацидозе % * рН 7,4 рН 7,2 – 7, * Фибробласты с Фибробласты с Гладкомышечные ядрами шаровидной ядрами овоидной клетки формы формы Поперечник общих сосудистых влагалищных оболочек при сдвиге рН крови в кислую сторо ну до 7,2 – 7,0 варьирует от 124,0 мкм до 260,0 мкм, и в среднем равен 203,5±16,9 мкм. Ретикулино вые волокна толщиной от 0,6 мкм до 1,0 мкм, в общих сосудистых влагалищных оболочках ориен тированы в различных направлениях, фрагментированы, ветвятся, контактируют между собой, их количество достоверно уменьшается более чем в 6 раз. Эластические волокна толщиной от 0,2 до 0,8 мкм ориентированы параллельно длиннику общих сосудистых влагалищных оболочек, они ста новятся извитыми, в них отмечаются разрывы, склеивание, волокна редко контактируют между собой, их количество статистически значимо уменьшается на 25%. Коллагеновые волокна общих сосудистых влагалищных оболочек толщиной от 6,7 до 8,4 мкм располагаются рыхло, находятся в состоянии отека, ориентированы в различных направлениях, неравномерно окрашиваются кислым фуксином, особенно в наружной оболочке трабекулярных артерий. Происходит резкое увеличение объема коллагеновых волокон более чем в три раза по сравнению с контролем (рис.10).

Рис 10.

Процентное соотношение соединительно-тканных волокон в общих сосудистых влагалищных % оболочках селезенки кошки при лактат-ацидозе ** рН 7,4 рН 7,2 – 7, ** ** коллагеновые ретикулиновые аргирофильные волокна волокна волокна В общих сосудистых влагалищных оболочках количество гладкомышечных клеток, практи чески, не меняется, число фибробластов с ядрами шаровидной увеличивается на 15,42%, а фиб робластов с ядрами овоидной формы снижается на 9,18% с высокой степенью достоверности (рис.

11).

Рис. 11.

Процентное соотношение клеток в общих сосудистых влагалищных оболочках % селезенки кошки при лактат-ацидозе 60 рН 7,4 рН 7,2 – 7, ** ** Фибробласты с Фибробласты с Гладкомышечные ядрами шаровидной ядрами овоидной клетки формы формы Просвет трабекулярных артерий остается не спавшимся, происходит расслоение крови, аг регация форменных элементов, десквамация эндотелия. Стенка трабекулярных артерий находится в состоянии отека. Просвет вен также расширен, наблюдается расслоение крови, агрегация формен ных элементов, венозное полнокровие. Сосудистая стенка вены и артерии, соединительная ткань капсулы, подкапсулярных трабекул находится в состоянии отека, но ядра фибробластов и гладко мышечных клеток отчетливо окрашиваются гематоксилин-эозином. Границы лимфатических фол ликулов селезенки становятся нечеткими, размытыми, отмечается расширение межклеточных ще лей, что свидетельствует о делимфатизации. При рН крови 7,2 делимфатизация чаще всего носит очаговый характер. В красной пульпе синусы расширены и по всей плоскости среза селезенки наблюдаются мелкоочаговые кровоизлияния. В лимфоидных клетках белой пульпы выявляется гликоген.

Аргирофильные волокна трабекулярных сосудов, общих сосудистых влагалищных оболочек неравномерно импрегнированы азотнокислым серебром, по ходу волокон отмечаются утолщения, отек. В капсуле, в подкапсулярных трабекулах аргирофильные волокна также неравномерно импре гнируются азотнокислым серебром, по ходу волокон отмечаются фрагментации. В лимфатических узелках и в красной пульпе в местах кровоизлияний и отека структура ретикулярной сети нарушает ся.



Pages:   || 2 | 3 |
 





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.