авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 12 |

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Департамент ветеринарии Ульяновской области ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» ...»

-- [ Страница 3 ] --

7.Mugv M, J DR, Nu JK, Cx NA, H MA.// J Fd P. 2004 Nw;

67(11):

2613-6.

8.d Su OV, V RN, d M FG, d R CM, H E.// Rv I Md S Pul.

2004 M-A;

46 (2): 59-62.

9.Lv LV, Rg II, Bv SV.//Gg S. 1997My –Iu;

(3): 24-6.

10.P A, Nuw C, By A, Du IM, K A.// J Ab C. Fb;

39 (2): 157-62.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК: 636.32:619:616.33008. ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОФЛОРЫ ФЕКАЛИЙ ПРИ ДИСПЕПСИИ НОВОРОЖДЕННЫХ ЯГНЯТ Батуев Б.Б., соискатель КГУ «Могойтуйская станция по борьбе с болезнями животных» Забайкальского края Сиразиев Р.З., доктор биологических наук, профессор ГНУ НИИВ Восточной Сибири Россельхозакадемии тел. 8(3022) 23-21-39, srz1963@mail.ru,vetinst@mail.ru Ключевые слова: новорожденные ягнята, диспепсия, микрофлора фекалий, диарон, бифи добактерии, лактобактерии.

репарат «Диарон при 1-2кратном применении позволяет восстановить качественный и количественный состав кишечной микрофлоры, нормализовать функциональную деятельность кишечника у больных диспепсией новорожденных ягнят.

Введение. В период молозивного питания расстройства пищеварения у ягнят могут быть об условлены диспепсиями (острые расстройства пищеварения), раневой инфекцией (пупочный сепсис) и инфекционными болезнями (анаэробная энтеротоксемия, кандидамикоз, колибактериоз, протейная инфекция, сальмонеллез и др.). При этом наблюдается разносторонняя взаимосвязь причинно-след ственных факторов, которая в ряде случаев затрудняет выяснение причин этих болезней. Сохранение новорожденных ягнят и выращивание здорового, хорошо развитого молодняка составляет основу уве личения выхода продукции овцеводства (Горлов И.Ф., 1995;

Трофимов А.Ф. с соавт., 2006). Основные потери молодняка обусловлены желудочно-кишечными заболеваниями (Федоров Ю.Н., 2008;

Мищенко В.А., 2008), а тесная функциональная связь всех органов и систем организма вынуждает говорить не о желудочно-кишечных болезнях, а о заболеваниях с преимущественным поражением органов пищева рения, поскольку в патологический процесс вовлекается весь организм ягнят.

Регулирующая роль кишечной микрофлоры выходит далеко за пределы желудочно-кишечного тракта. Ее участие в огромном спектре биохимических процессов объясняет широкий спектр клиниче ских последствий кишечного дисбактериоза.

По локализации в кишечнике выделяют пристеночную и полостную микрофлору. В тонкой кишке численность пристеночной микрофлоры на 6 порядков превышает численность полостной, она тесно связана с кишечным эпителием и морфологически, и функционально. В толстой же кишке преоб ладает менее стабильная по составу полостная микрофлора, которая фиксируется на непереваренных пищевых волокнах.

Микрофлора тонкой кишки относительно немногочисленна и представлена аэробной флорой:

лактобактериями, стафилококками, стрептококками. Общая ее численность в тощей кишке составляет 103–105 клеток в 1 мл содержимого. По мере приближения к толстой кишке количество микроорганизмов возрастает и в подвздошной кишке достигает 105–108 в 1 мл. Два различающихся по составу и функци ям биотопа: тонкая и толстая кишка – разделены эффективно функционирующим барьером – баугини евой заслонкой.

Толстая кишка отличается самой высокой плотностью микроорганизмов, которая составляет 109–1012 клеток в 1 мл. Здесь преобладают анаэробы: бифидобактерии и бактероиды (Аликаев В.А., 1964;

Коршунов В.М. с соавт., 1994;

Бондаренко В.М. с соавт., 1995.). При анализе количественного и качественного состава микрофлоры фекалий животных необходимо учитывать, что вся микрофлора желудочно-кишечного тракта условно подразделяется на нормальную (полезную), условно-патогенную и патогенную (Джупина С.И., 2001).

При диспепсии - остром функциональном расстройстве пищеварения у молодняка животных Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы происходит активизация условно-патогенной и токсигенной микрофлоры. Новорожденные животные особенно чувствительны к этим факторам, т.к. у них недостаточно развиты собственные защитные силы организма и не сформирована микроэкологическая система кишечника.

Цель исследований. С целью коррекции желудочно-кишечных заболеваний новорожденных ягнят и нормализации нарушенного пищеварения применяли «Диарон», который является комплекс ным препаратом с антибактериальными, буферными, ионообменными и сорбционными свойствами.

Препарат «Диарон» разработан в ГНУ НИИ ветеринарии Восточной Сибири Россельхозакадемии (Па тент № 2381796. Приоритет изобретения от 09.01.2008. Зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.02.2010.).

Материал и методы исследований. В условиях племенного хозяйства «Догой» Могойтуйско го района Забайкальского края была сформирована экспериментальная группа новорожденных ягнят забайкальской тонкорунной породы с клиническими признаками диспепсии, угнетением и обезвожива нием организма (=37). У больных животных до применения, через 24 часа и 48 часов после выпаива =37).

=37).

ния препарата производили взятие фекалий для бактериологических и микробиологических исследо ваний. Руководствовались методическими рекомендациями «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных» (2004). Биометрический анализ числовых данных производили по Н.А. Плохинскому (1971) и компьютерным программам «M Exl».





Посевы из внутренних паренхиматозных органов павших ягнят оставались стерильными, что позволяет рассматривать заболевание как диспепсию, а не инфекционную (колибактериоз, иерсиниоз, сальмонеллез и др.) болезнь (Джупина С.И., 2001;

Колычев Н.М.,2010).

Результаты исследований и их анализ. Анализ литературных данных и результатов мно голетних собственных исследований показывает, что лечение при диарее может быть эффективным, если оно проводится путем применения комплексных препаратов, обладающих способностью пода влять широкий спектр возбудителей желудочнокишечных заболеваний, нормализующих нарушенное пищеварение, повышающих резистентность организма, обладающих антитоксическими свойствами (Аликаев В.А., 1964;

Подкопаев В.М., 1965;

Иванов А.В., 2000;

Джупина С.И., 2001;

Машеро В.А., 2004;

Топурия Г.М., Инякина К.А., 2009).

У больных ягнят, до применения препарата, в кишечном микробиоценозе преобладали эшери хии, их выделяли в количестве 109 микр. тел в 1 г, протеи (102 микр. тел в 1 г), аэробные бациллы (105), стафилококки (104), бифидобактерии (106), лактобактерии (105 микр. тел в 1 г). Состояние животных угнетенное, аппетит отсутствует, фекалии водянистые, желто-серого и серо-белого цвета. Температура тела в пределах нормы (39.0 40.5°С), реже ниже нормы (38.0°С).

По литературным данным, кишечная микрофлора представляет собой важнейшую защит ную систему организма. Ее суть заключается в предотвращении колонизации желудочно–кишечного тракта условно–патогенными и патогенными микроорганизмами. Микробный антагонизм многогранен и реализуется посредством следующих механизмов:

1. Конкуренция за питательные вещества (сапрофитная флора легче утилизирует питатель ные вещества и кислород).

2. Конкуренция за рецепторы адгезии (большее сродство к кишечным рецепторам).

3. Выработка органических кислот, перекиси водорода, антибиотикоподобных веществ – бак терицинов и других веществ, препятствующих росту патогенных микроорганизмов.

По мнению большинства ученых, желудочно-кишечные расстройства у молодняка развивают ся при действии на их организм как стрессовых факторов (холод, сырость в помещениях, нарушение режима кормления и т.д.), так и возбудителей (микробы, вирусы, грибы и т.д.) инфекционных болезней (Джупина С.И., 2001;

Машеро В.А.,2004;

Колычев Н.М., 2010). ти факторы могут действовать как по отдельности, так и в различных сочетаниях друг с другом. Развитию болезней в овцеводстве спо собствует недостаточное или неполноценное кормление суягных овцематок, в результате чего от них рождаются слабые ягнята, чувствительные к действию неблагоприятных факторов, особенно условно Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы патогенной микрофлоры.

Через 24 часа после применения препарата диарона в содержимом кишечной трубки пони зилось содержание эшерихий до 106 микр. тел. в 1 г, бактерии рода Pu выделяли в количестве микр. тел в 1 г, аэробные бациллы 104, стафилококки 103.

Бифидобактерии и лактобактерии высевались в количестве 107 и 105 микр. тел в 1 г соответ ственно (что объясняется подавлением условно-патогенной микрофлоры, снятием интоксикации). Кли ническое состояние 80% ягнят удовлетворительное, аппетитом сосут молозиво, фекальные массы ка шицеобразной консистенции, светло-желтого цвета. Температура тела в пределах нормы (39 40.5°С).

Продукты жизнедеятельности бифидо– и лактобактерий усиливают всасывание кальция, же леза, витаминов D и С. Синтезируемый микрофлорой оксид азота регулирует моторную активность кишечника. Под влиянием ферментов нормальной микрофлоры в подвздошной кишке осуществляется деконъюгация желчных кислот, 80–95% из которых подвергаются обратному всасыванию и повторно участвуют в пищеварении (при синдроме избыточного бактериального роста деконъюгация происходит преждевременно и приводит к развитию секреторной диареи).

Табл. 1 – Микрофлора фекалий здоровых и больных диспепсией ягнят Наименование микробов Здоровые животные, Больные животные, Животные после Животные после (количество (количество 24 часов после 48 часов после микробных тел в 1 г). микробных тел в 1 г). применения применения препарата «Диарон» препарата «Диарон»

Эшерихии 106-107 109 106 Протей 0-105 102 10 Аэробные бациллы 103-104 105 104 Стафилококки 103-104 104 103 Бифидобактерии 107-109 106 107 Лактобактерии 106-107 105 105 Через 48 часов после применения препарата диарон доминирующей по численности группой бактерий в кишечном микробиоценозе являются бифидобактерии (108микр. тел в 1г), вторыми по чис ленности были лактобактерии (106). Протей не выделялся, аэробные бациллы высевались в количе стве 102 микр. тел в 1 г, стафилококки 102, эшерихии выделялись в количестве 104 микр. тел в 1 грамме кишечного содержимого (табл. 1). Клиническое состояние 100% животных удовлетворительное, хоро ший аппетит, фекальные массы кашицеобразной консистенции, светло - желтого цвета. Температура тела в пределах нормы (39 40.5°С).

Важнейшая роль нормальной микрофлоры заключается в способности нейтрализовать мно гие токсические субстраты и метаболиты (нитраты, ксенобиотики, гистамин, мутагенные стероиды).

Она предохраняет не только клетки кишечника, но и отдаленные органы от воздействия повреждающих факторов. Кишечная микрофлора участвует в формировании и местного, и системного иммунитета.

Само наличие микрофлоры оказывает постоянный антигенный тренирующий эффект.

Ранее проведённые нами исследования и анализ крови новорожденных ягнят до применения, через 24 и 48 часов после выпаивания препарата диарон также подтверждают процесс нормализации клинического состояния, гематологических и биохимических показателей крови при острых желудочно кишечных расстройствах новорожденных ягнят (Сиразиев Р.З. с соавт., 2010).

Заключение. Результаты наших исследований свидетельствуют, что препарат «Диарон» при 1-2кратном применении позволяет восстановить качественный и количественный состав кишечной микрофлоры, нормализовать функциональную деятельность кишечника у больных диспепсией ново рожденных ягнят.

Библиографический список:

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы 1. Аликаев, В.А. Острые желудочно-кишечные заболевания молодняка с.-х. животных /В.А.

Аликаев //Профилактика и лечение заболеваний молодняка с.-х. животных. Москва, 1964. С. 2. Бондаренко, В.М. Дисбиоз. Современные возможности профилактики и лечения /В.М.Бондаренко, В.Ф.Учайкин, А.О.Мурашова, Н.А. Абрамов // М., 3. Горлов, И.Ф. Основы адаптивной технологии содержания крупного рогатого скота /И.Ф. Гор лов //Волгоград: Перемена, 1995.– 284 с.

4. Джупина, С.И. Колибактериоз инфекция факторная /С.И. Джупина //Ветеринария Сибири.

2001. №5. С. 5. Иванов, А.В. Применение цеолитов для профилактики расстройства пищеварения у ново рожденных телят /А.В. Иванов //Ветеринария.– 2000.– №4.– С. 6. Колычев, Н.М. Руководство по микробиологии и иммунологии /Н.М. Колычев //Новосибирск:

Арта, 7. Коршунов, В.М. Нормальная микрофлора кишечника /В.М.Коршунов, Н.П.Иванов, Л.И.Кафарская и др. //Методические разработки. М., 8. Машеро, В.А. Нормальная микрофлора животного организма и коррекция дисбактериозов препаратом «Диалак» /В.А. Машеро //Ветеринарная практика.– 2004.– №1.– С.28- 9. Мищенко, В.А. Проблемы сохранности поголовья крупного рогатого скота /В.А.Мищенко // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Матер. межд. научно-практ. конф. Курск, 2008. С.

10. Сиразиев, Р.З. Изменение морфологического и биохимического состояния крови под влия нием диарона при диарее у новорожденных ягнят /Р.З.Сиразиев, Б.Б.Батуев, Б.Ц.Гармаев //Ветеринар ный врач. 2010. №5. С. 11. Топурия, Г.М. кология и воспроизводство животных /Г.М. Топурия, К.А. Инякина //Орен бург: Издательский центр ОГАУ, 2009.– 97 с.

12. Трофимов, А.Ф. Оптимальные режимы сохранения новорожденных телят /А.В.Трофимов, В.Н.Тимошенко, А.П.Музыка //Практик. 2006. С. 13. Федоров, Ю.Н. Иммунологические факторы в проблеме сохранения телят в ранний пост натальный период /Ю.Н. Федоров //Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики ин фекционных болезней животных и птиц: Сб. научных трудов ведущих ученых России, СНГ и др. стран.

– Екатеринбург, 2008.– С. УДК: 619:615.33:577.1:616.34-002:636.2-053. ВЛИЯНИЕ ТИЛОКОЛИНА И ЕГО СОЧЕТАНИЯ С ЛИПОТОНОМ НА БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ТЕЛЯТ И ИХ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ В.И. Беляев, доктор биологических наук, профессор ГНУ Всероссийский Научно-Исследовательский Ветеринарный Институт патологии, фармакологии и терапии Тел. 8(4732) 53-93-21, vnivipat@mail.ru С.Н. Кабицкий, кандидат ветеринарных наук ОАО АПО «Дружба», Липецкая обл.

Т.Ю. Баранова, аспирант отдела фармакологии ГНУ Всероссийский Научно-Исследовательский Ветеринарный Институт патологии, фармакологии и терапии Тел. 8(4732) 53-93-21, vnivipat@mail.ru Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ключевые слова: Тилоколин, липотон, сочетание, колибактериоз, телята, эффектив ность.

рименение тилоколина и, в большей степени, его сочетания с липотоном оказывает вы раженный терапевтический эффект при лечении колибактериоза телят и более положительное влияние на клинико-физиологический статус животных, нормализацию обменных процессов и функ ций органов, полноценность выздоровления.

Введение. Болезни телят остаются одной из серьезнейших причин, сдерживающих развитие животноводства и наносящих ему значительный экономический ущерб [1;

4]. Одной из основных причи ной падежа телят раннего возраста являются, обусловленные энтеропатогенными штаммами кишечной палочки, желудочно-кишечные болезни.

Исследования последних лет свидетельствуют, что при колибактериозе наиболее эффектив ны комплексные препараты, главное преимущество которых, по сравнению с монопрепаратами, состо ит в аддитивном или синергидном механизме действия, более широком спектре активности и высокой антимикробной эффективности компонентов [2;

3;

5;

6].

Поскольку данных о действии нового антибактериального препарата и его сочетания с ткане вым препаратом в литературе нет, целью наших исследований являлась оценка терапевтической эф фективности и состояния гомеостаза телят, больных колибактериозом, при применении им тилоколина или его сочетания с липотоном.

Материалы и методы. Объектом наших исследований были телята 3-4-дневного возраста, больные колибактериозом. Диагноз на заболевание ставили комплексно на основании клинических наблюдений, данных патологоанатомических вскрытий и бактериологического исследования с учётом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

Телятам контрольной группы применяли тилозин-50 в соответствии с наставлением по при менению, животным первой опытной группы внутримышечно тилоколин в дозе 0,05 мл/кг массы тела с интервалом 24 часа до выздоровления и 2 дня после исчезновения клинических признаков, второй - тилоколин по схеме 1-й группы и липотон – внутримышечно в дозе 10 мкг/кг массы тела трехкратно с интервалом в 24 часа. До лечения и через 5 дней после брали кровь для биохимического анализа. За телятами вели клиническое наблюдение, учитывали аппетит, сосательный рефлекс, состояние слизи стых оболочек, тургор кожи, определяли температуру тела, частоту сердечных сокращений и дыхатель ных движений.

Таблица 1. - Терапевтическая эффективность тилоколина (1 группа) и его сочетания с липотоном (2 группа) при колибактериозе телят Группы Контрольная Опытная 1 Опытная Показатели Количество животных 7 7 Масса тела до лечения, кг 30,5±2,4 29,8±1,7 31,4±2, Масса тела на 10-й день после начала лечения, кг 29,1±1,7 29,2±2,1 31,3±1, Выздоровело телят, 5 6 % 57,1 85,7 100, Пало телят, 1 - % 14, Изменение схемы лечения, 2 1 % 28,6 14, Сроки выздоровления, дни 4,5±0,7 4,2±0,5 3,9±0, Терапевтическая эффективность, % 71,4 85,7 100, Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Результаты исследований и их обсуждение. Результаты клинического осмотра, бактерио логических исследований, патологоанатомического вскрытия, показали, что имела место ассоциатив ная кишечная инфекция, основными возбудителями которой являлись Е. l (сероварианты 026, 0117, 0139 и 0149), Eu l и Cb ud.

При оценке результатов применения препаратов установлено, что терапевтическая эффек тивность в первой и второй группах, по сравнению с контрольной, была на 14,3% и 28,6% выше. Сроки выздоровления у телят 1-2 групп были короче, чем при базовой схеме лечения, на 6,7-13,3% соответ ственно (таблица 1).

У телят контрольной группы на 10-й день после начала лечения происходило снижение массы тела в среднем на 140 г., по сравнению с массой тела до лечения, у телят первой группы снижение массы тела было в среднем на 60г., а во второй – лишь на 10г.

Уровень общего белка у животных опытных групп после лечения, при сравнении с контролем, увеличивался на 5,5-7,1% соответственно (таблица 2). Увеличение уровня общего белка в организме телят в опытных группах, происходило за счет повышения содержания - и -глобулинов. После про веденного лечения у животных опытных групп, по сравнению с контролем, наблюдалась тенденция к снижению уровня альбуминов на 6,99-13,95% и -глобулинов на 13,7-18,8% соответственно.

Таблица 2. - Биохимические и гематологические показатели крови телят, больных коли бактериозом до и после лечения тилоколином (1 группа) и его сочетанием с липотоном (2 группа) Группы Фон, После лечения Контрольная Опытная 1 Опытная Показатели до опыта Белок, г/л 52,31±1,72 58,05±1,27 61,23±2,66 62,17±0, Альбумины, % 51,20±3,22 52,76±2,63 49,07±0,62 45,40±3, -глобулины, % 18,27±0,87 17,73±2,28 15,30±1,89 14,40±2, -глобулины, % 19,43±0,36 23,16±2,49 23,78±2,80 24,84±2, -глобулины, % 7,23±0,48 7,86±2,33 8,19±0,87 10,36±0, Глюкоза, мМ/л 2,06±0,40 3,11±0,31 3,37±0,50 4,01±0, Липиды, г/л 2,25±0,30 2,79±0,93 3,16±0,19 3,34±0, Холестерин, мМ/л 1,02±0,25 1,28±0,52 1,55±0,27 1,68±0, Кальций, мМ/л 2,63±0,08 2,76±0,09 2,69±0,08 2,62±0, Фосфор, мМ/л 2,78±0,07 2,33±0,66 2,30±0,06 2,48±0, Мочевина, мМ/л 5,20±0,43 3,23±0,39 2,82±0,72 2,44±0, Креатинин, мкМ/л 89,16±3,40 66,67±3,78 64,40±4,31 63,20±2, -ГТ, Е/л 276,90±56,9 79,16±41,31 81,43±35,22 71,47±11, ЩФ, Е/л 183,75±32,06 186,25±34,08 170,25±16,33 173,50±29, АсАТ, мМ/л*ч 1,92±0,04 1,14±0,04 1,08±0,05 0,85±0, АлАТ, мМ/л*ч 1,08±0,05 0,97±0,09 0,89±0,05 0,68±0, Эритроциты,1012/л 7,20±0,18 7,60±0,23 7,90±0,29 8,50±0, Гемоглобин, г/л 105,00±3,46 116,40±8,14 117,10±2,68 127,40±3, Гематокрит, % 47,50±0,88 45,70±0,72 41,00±0,80 40,50±1, Лейкоциты, 10 /л 8,70±1,17 8,40±0,83 7,80±0,48 7,70±0, Юные нейтр., % - - - Палочк. нейтр., % - - - Сегмент. нейтр.,% 4,16±2,00 3,84±1,20 4,11±0,58 3,79±1, Эозинофилы, % - - - Базофилы, % - - - Моноциты, % 0,37±0,15 0,30±0,10 0,29±0,20 0,34±0, Лимфоциты, % 3,67±0,81 3,73±0,51 4,27±0,42 4,19±0, Содержание глюкозы у больных телят было ниже физиологической нормы, т.е. происходило угнетение углеводной функции печени, развитие гипогликемии. В сравнении с контрольной группой после лечения у животных 1-2 опытных групп содержание глюкозы было выше на 8,4-28,9% соответ Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ственно.

Количество общих липидов после лечения в первой и второй группах было выше, чем в кон трольной - на 13,3-19,7% соответственно. Более высокое содержание в сыворотке крови телят первой и второй групп общих липидов свидетельствует о лучших адаптивных возможностях их организма и способности более активно использовать липиды на энергетические нужды в период новорожденности.

Концентрация холестерина у телят первой-второй групп, при сравнении с контрольной, после лечения увеличивалась на 21,1-31,3% соответственно.

Количество неорганического фосфора и кальция после лечения, при сравнении с контролем, у телят первой и второй групп не изменялось.

Содержание мочевины после лечения в 1-2 опытных группах было при сравнении с контроль ной группой – ниже на 12,7-24,5%, креатинина - на 3,4-5,2% соответственно.

Активность -глутамилтрансферазы (-ГТ) после лечения в 1-2 опытных группах при сравне нии с контролем, в первой группе – незначительно выше (на 2,9%), во второй - ниже на 9,7%. По отно шению к физиологической норме после лечения содержание -ГТ у всех подопытных животных было оптимальным.

Активность щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотки крови телят 1-2 групп при сравнении с контрольной группой ниже на 8,6-6,8% соответственно, а активность АсАТ и АлАТ - на 5,3-25,4% и 8,2-29,9% соответственно. Оптимальный уровень ферментов переаминирования свидетельствует об оптимизации работы печени.

Количество эритроцитов в крови животных после лечения при сравнении с контрольной груп пой увеличилось на 4,0-11,8% соответственно в первой и второй, а уровень гемоглобина у животных второй группы на 9,5%, а с первой – различий не было. Величина гематокрита после лечения у телят первой – второй групп снижалась на 10,3-11,4%, а содержание лейкоцитов - на 7,1-8,3%.

При анализе лейкоформулы (таблица 2) выявлено, что содержание сегментоядерных ней трофилов в крови телят после лечения, при сравнении с контрольной группой, в первой группе было выше на 7,0%, во второй – существенных различий не было, а количество моноцитов при сравнении с контрольной группой, в первой группе не изменялось, во второй – увеличивалось на 13,3%, количество лимфоцитов увеличивалось на 14,5-12,3%.

Заключение. Таким образом, лечение телят, больных колибактериозом, тилоколином поло жительно влияет на биохимические и гематологические показатели крови животных. Однако, приме нение тилоколина в сочетании с липотоном оказывает более выраженный терапевтический эффект и существенное влияние на клинико-физиологический статус животных, что проявилось в выраженной тенденции ориентированной на нормализацию обменных процессов и функций органов и полноцен ности процессов выздоровления.

Библиографический список 1. Джупина С.И. пизоотический процесс и его контроль при факторных инфекционных бо лезнях / С.И. Джупина. – М., 2002. – 212с.

2. Соколов В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева // Фарма кологические корректоры Андреева, А.В. Соколов. Ветеринария. 1992. 7-8. 49-50.

3. Татарчук О.П. Новые тенденции антибиотикотерапии / О.П. Татарчук // Ветеринария. – 2004. - №12. – С.12-14.

4. Шабунин С.В. Антимикробная активность и клиническая эффективность левоэритроци клина нео / С.В. Шабунин // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях // Межд. науч.-практ. конф. – Воронеж. – 2002. – С.691-693.

5. Шахов А.Г. с соавт. тиология факторных инфекций животных и меры их профилактики / А.Г. Шахов с соавт. // Ветеринарная патология. – 2005. - №3. – С.22-24.

6. Hwy P.M. Mlul dlgy llly gfi b g / P.M.

Hwy // B J. Plgy. – 2008. – 153. –.406- Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК 619:616.98:578.842. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛЕВЫХ ВЫСОКОВИРУЛЕНТНЫХ И НИЗКОВИРУЛЕНТНЫХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА АЧС С.А. Белянин, аспирант ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной виру сологии и микробиологии, тел. 8 (49243) 62125, sbeljanin@list.ru Ключевые слова: африканская чума свиней, изоляты вируса АЧС, вирулентность, пато генность, домашние свиньи, дикие свиньи.

В статье представлены результаты оценки патогенности низковирулентного штамма вируса АЧС PSA-1-NH и 6-ти полевых изолятов вируса АЧС, вызвавших вспышки болезни в Северо Кавказском и Южном Федеральных округах в 2007-2010 гг.

Введение Африканская чума свиней (болезнь Монтгомери) – высококонтагиозная вирусная геморрагиче ская болезнь домашних и диких европейских свиней (семейство Suidae), вызываемая ДНК-содержащим вирусом семейства Avd, рода Avu и характеризующаяся лихорадкой, цианозом кожи и об, ширными геморрагиями во внутренних органах. Относится к списку А согласно Международной класси фикации заразных болезней животных. Болезнь имеет огромное значение в эпизоотологическом, соци ально-экономическом отношении, так как её ликвидация основана на применении стратегии g u и уничтожении больных и подозреваемых в заражении животных[1,2].

После объявления МБ в 2007 г. АЧС в Грузии, затем Армении и Азербайджане, примерно в октябре - ноябре того же года вирус был занесён в популяцию диких свиней на территории РФ – Респу блики Чечня [3]. В течение последующих лет болезнь регистрировали во всех административных регио нах Южного и Северо-Кавказского Федеральных округов, как среди диких, так и домашних свиней [4,5].

A M. l., [6] сообщали, что через 3 года после заноса вируса в 1960 г. на Пиренейский полуостров смертность среди инфицированных домашних свиней снизилась до 5%. Поэтому, оценка патогенности циркулирующих изолятов вируса и изучение вызываемого ими типа инфекционного про цесса имеют большое значение как для уточнения стратегии использования лабораторных методов диагностики, так и мониторинговых исследований.

Цель исследований Определение патогенности и формы течения африканской чумы свиней при эксперименталь ном заражении домашних и диких свиней «полевыми» изолятами вируса, выделенными при вспышках АЧС в РФ период 2007-2010гг., а также изолятом вируса, выделенным во время вспышки АЧС в Порту галии в 1978 г.

Материалы и методы исследований Гемадсорбирующие изоляты вируса АЧС, выделенные от инфицированных диких и домашних свиней в разные сроки эпизоотии АЧС на Кавказе в период 2007-2010 гг. и негемадсорбирующий низко вирулентный изолят, поступивший из Португалии в 1978 г. (табл.1).

Таблица 1. - Происхождение изолятов вируса АЧС № Номер* Дата вспышки Вид Географическая локализация Статус вспышки изолята жив-х вспышки 1 001/20 10. 2007 Дик. Чечня Первичные 2 041/15 06. 2008 Дом. Северная Осетия 3 116/05 09. 2009 Дик. Дагестан Вторичные 4 154/20 11. 2009 Дик. Чечня 5 162/23 01. 2009 Дик. Краснодарский край 6 163/23 02. 2010 Дом. Краснодарский край 7 PSA-1-NH 1978 Н.и Португалия Н.и.

Обозначение. * - порядковый номер/номер региона, Н.и.-не известно Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Для заражения животных использовали вируссодержащую кровь или 20% суспензию селе зёнки инфицированных АЧС свиней с содержанием 100ЕД/см3 пенициллина и 100 мг/см3 стрептомицина.

Инфекционную активность вируса АЧС определяли титрованием в первичной 2-х суточной культуре клеток костного мозга свиней (ККМС).

Для экспериментального заражения использовали 12 свиней крупной белой породы (живой массой 25-30 кг) и 4 диких (живой массой 40-50 кг). Материал вводили внутримышечно по 1,0-2,0 см3, перорально - по 5,0 см3. Ежедневно у свиней измеряли температуру тела, у диких свиней с этой целью использовали дистанционный лазерный измеритель температуры поверхностей 830-4.

Время от заражения до появления лихорадки (400С) считали инкубационным периодом, а от начала лихорадки до гибели - инфекционным периодом. Наличие антигена вируса АЧС в пробах органов подтверждали реакцией прямой иммунофлуоресценции (РПИФ), а специфических антител – иммуноферментным анализом (непрямой вариант).

Титр вируса вычисляли по методу Рида и Менча в модификации по Ашмарину и выражали в lg ГАЕ50/см3.

Результаты исследований Характеристики изолятов вируса АЧС.

В начале была определена инфекционная активность испытуемых изолятов вируса АЧС, кото рыми заражали животных и проведены серологические исследования с целью обнаружения специфи ческих антител.

Таблица 2. - Инфекционная активность изолятов вируса АЧС Титр вируса (lg ГАЕ) Наличие Вид № п/п № изолята в исходном в крови инфицир-х свиней Специф. АГ Специф. АТ жив-х материале 1 001/20 Дом. 1,0-2,0 6,5±0,10 + 2 041/15 Дом. 1,0-2,0 7,0±0,20 + 3 116/05 Дом. 1,0-2,0 6,5±0,10 + 4 154/20 Дик. 1,0-2,0 6,0±0,20 + 5 162/23 Дом. 1,0-2,0 5,5±0,10 + 6 163/23 Дом. 5,0 6,66±0,13 + 7 PSA-1-NH* Дом. 4,0 6,5±0,10 - + Обозначение. * - титр вируса в lg ТЦД50/см3;

АТ –антитела к вирусу АЧС, АГ- антиген вируса АЧС Содержание инфекционного вируса в исходных пробах органов было примерно одинаково низким уровне (1,0-2,0 lg ГАЕ50/см3), за исключением изолята №163/23, титр которого составлял 5,0 lg ГАЕ50/см3. Активность негемадсорбирующего изолята PSA-1-NH составляла 4,0 lg ТЦД 50/см3. Все домаш ние свиньи, зараженные «российскими» изолятами вируса АЧС погибали с признаками острой формы болезни.

Трое из шести животных, зараженных PSA-1-NH, погибли на 42, 68 сутки. Остальные свиньи этой группы были выведены из опыта на 110 – е сутки после заражения. Специфические антитела к вирусу АЧС были обнаружены с 7-х сут после заражения. Результаты этого опыта приведены в табл. Клинические признаки у домашних и диких свиней, экспериментально заражённых изолята ми вируса АЧС, вызвавшими вспышки в РФ На рис. 1 представлены данные термометрии после внутримышечного заражения домаш них свиней изолятами вируса АЧС, выделенными от диких (№№001/20, 116/05 и 162/23) и домашних (№№041/15 и 163/23) свиней. У первых - гипертермия установлена на 3-и сут после заражения. На 4-е сутки отмечали угнетение, снижение аппетита. На 5-е сут - залеживание, хромота задних конечностей (№116/05), а в последующем - нарушение координации движения. У подсвинка, инфицированного изо лятом №162/23 на 6-е сутки наблюдали цианоз кожи ушей и в области внутренней поверхности бедра.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы У свиньи №116/05 на 7 сут – снижение 0С температуры тела до 360С. Гибель жи 001/ вотных наступала на 8-12 - е сут по 116/ сле заражения.

162/ 39 У подсвинков, зараженных Инкуб.

38 изолятами вируса АЧС, выделенны 041/ период 37 ми от домашних свиней (№№ 041/15, 163/ 36 163/23), клинические признаки за Инфекционный период 35 болевания развивались на 3-и сутки Сутки 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 после заражения (температура тела 41,00С и выше) со снижением актив Рис. 1. - График температуры тела у домашних сви- ности. На 5-6-е сут наблюдали ано рексию, угнетение, животные слабо ней после внутримышечного заражения реагировали на внешние раздражите ли. На 8-е сутки подсвинок, зараженный изолятом №041/15, пал. У подсвинка №163/23 на 9-10-е сутки в фекалиях обнаружены примесь слизи с кровью, точечные кровоизлияния на коже в области паха и гибель наступила на 11-е сут.

Дополнительно был поставлен опыт для определения инкубационного и инфекционного пе риодов после контактной передачи «позднего» изолята №154/20 вируса АЧС, прошедшего неопреде лённое количество пассажей в популяциях диких свиней (табл.1). Для этого одному из 4-х кабанов (№1) вирус ввели внутримышечно, а оставшиеся три (№№2,3,4) содержались в том же станке. Первые клинические признаки у животного №1 наблюдали на 3-и сут после введения вируса - угнетение, повы шение температуры тела (рис.2), на следующие сутки затрудненное дыхание, а на 5-е сутки - гибель.

У «контактных» животных клинические признаки обнаружены на 8-е сутки (отсчёт после зара жения животного №1), длительность инкубационного периода примерно 4 сут у всех животных (отсчёт после гипертермии животного №1). Повышение температуры тела выше 400С обнаружили на 6-7 сут, а на 9-е сут животные скучились и не реагировали на внешнее раздражение. Дыхание - затрудненное с хрипами, нарушение координации движения, парез задних конечностей и общее состояние ступора.

На 10-е сутки все животные пали.

Независимо от вида свиней (дикие или домашние) после заражения изолятами вируса АЧС, выделенными при вспышках болезни в РФ, наблюдали выраженные клинические признаки африкан ской чумы свиней острой формы. У домашних свиней инкубационный период составил 3-4 сут, у диких – 3-5 сут, гибель наступала на 5-12 сутки после заражения.

Клинические признаки у домашних свиней, экспериментально заражённых низковирулентным изолятом PSA-1-NH вируса АЧС Подсвинки (6 животных) были разделены на 2 группы: в Инкуб.период № С Показания лазера №1 В/м первой группе свиньи №№1,2, 29 Инкуб. период №№ были заражены внутримышечно, 27 3, № Инкуб.

контакт период во второй- (№№4,5,6) - интрана 25 № 40 о №3 зально. Животные содержались контакт в изолированных боксах. Клини 21 № о ческие признаки болезни в виде 19 контакт кратковременного подъема тем Сутки 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 пературы наблюдали с 5-х суток после заражения, за исключением Рис. 2. - График температуры тела у диких свиней, ин животного №6, у которого лихо фицированных изолятом №154/20 вируса АЧС (№1 – внутри радка (40,5оС) была постоянного мышечное введение вируса, №№2,3,4 – контактное заражение) типа до момента гибели (42 сут).

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы У подсвинка №6 отмечали прогрессирующее исхудание, снижение аппетита и активности, цианоз пятачка, кожи в области подгрудка и живота, язвенные поражения на коже по все му телу. У других экспериментально заражен ных животных наблюдали угнетение, пониже ние аппетита и активности наблюдали только в период подъема температуры тела. Из зараженных животных у 3 подсвинков (№№ 1,4,5) начиная с 13-х суток после заражения, Рис. 3.- График температуры тела у домаш клинических признаков болезни не наблюда них свиней после внутримышечного (№№1,2,3) и ин ли (Рис. 3).

траназального (№№4,5,6) заражения вирусом АЧС, Патологоанатомические измене низковирулентный изолят PSA-1-NH ния у домашних и диких свиней, зараженных «российскими» изолятами вируса АЧС и виру сом, выделенным в Португалии, выражали в балльной системе и суммированы в табл. Как видно из табл.3 основные патологоанатомические изменения выражены у домашних свиней при заражении изолятами, циркулирующими в РФ и характеризуются общим геморрагическим синдромом в органах и тканях. У диких свиней геморрагический синдром менее выражен. В группе жи вотных, зараженных низковирулентным штаммом вируса АЧС PSA-1-NH, патологоанатомические изме -1-NH, NH,, нения имели место только у животных № 3и №6, которые характеризовались язвенными поражениями кожи, отеком легких и геморрагическим спленитом.

Обсуждение и заключение При экспериментальном заражении свиней изолятами вируса АЧС, выделенными в РФ, инку бационный период составил 4,0 (3,0-5,0) сут, инфекционный период (продолжительность болезни) - 6, (5,0-8,0) сут. Наблюдали изменения во всех органах, характеризующиеся геморрагическим синдромом, постоянно высоким уровнем виремии, отсутствием специфических антител и 100%-ю летальностью.

то свидетельствует о патогенности «российских» изолятов вируса АЧС, которые способны вызывать Таблица 3. - Патологоанатомические изменения у зараженных животных Изоляты вируса АЧС (РФ) Вирус АЧС PSA-1 Характер поражения органов NH (Португалия) Дом. Дик.

Цианоз кожи 5 0 скопление серозного экссудата в грудной полости 8 8 скопление серозного экссудата в брюшной полости 7 5 кровоизлияние в эпикарде и эндокарде 1 0 отек паренхимы и междольковой соединительной ткани легких 9 7 увеличение печени 4 2 воспаление и язвенные поражения сл.об.желудка 7 6 Отек стенки, гиперемия слизистой оболочки желчного пузыря 5 5 кровоизлияние под капсулу и в паренхиму почки 5 3 геморрагическая спленомегалия 10 7 инфаркты селезенки 3 1 геморрагический лимфаденит 9 6 воспаление тонкого отдела кишечника 5 4 воспаление толстого отдела кишечника 4 2 Всего: 82 56 Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы сверхострую, острую и подострую формы течения болезни. Низковирулентный изолят PSA-1-NH вируса АЧС был апотогенным (срок наблюдения 110 дней) для домашних свиней: клинические признаки болез ни в виде кратковременного подъема температуры, отсутствие выраженных патологоанатомических изменений, длительный период антителоносительства. В настоящее время для подтверждения АЧС при вспышках болезни в РФ наиболее точными будут методы обнаружения вируса - прямое обнаруже ние антигенов РПИФ и генома ПЦР в органах и крови и, при необходимости, изоляция инфекционного вируса v vv (биопроба).

Библиографический список:

1. Белянин С.А., Васильев А.П., Колбасов Д.В., и др. Патогенность вируса африканской чумы свиней, циркулирующего на территории РФ//Роль ветеринарной науки в реализации продовольствен ной доктрины РФ: материалы Международной научно-практической конференции/ГНУ ВНИИВВиМ. Покров, 2011.- с.14-20;

2. A M., S-V J.M. A w v. I: d Egg Vl I Sw, Iw S Uvy P, 2002,. 119–124;

3. www../w//0000006546_20071204_161907.d R : R OIE: 6546, R D: 04/12/2007, Cuy: Ru;

4. Куриннов В.В., Колбасов Д.В., Цыбанов С.Ж., и др. Диагностические и мониторинговые ис следования при вспышках африканской чумы свиней в республиках Кавказа в 2007-2008 гг.//Ветерина рия. 2008. №10. С.20-25;

5. Куриннов В.В., Колбасов Д.В., Цыбанов С.Ж. и др. Африканская чума свиней - главная про блема для свиноводства России// Жизнь без опасностей. Здоровье. Профилактика. Долголетие. 2010.

№3. С.82-87;

6. A M., S-V J.M. A w v d: S dl. I: d Egg Vl I Sw, Iw S Uvy P, 2002.-. 133– УДК 579.26.64:631. ПЕРЕМЕЩЕНИЕ ЧЕРЕЗ РАЗНЫЕ МЕСТООБИТАНИЯ И ВЫЖИВАНИЕ SALMONELLA В ЭКСКРЕМЕНТАХ, ПОЧВЕ, ВОДЕ И РАСТЕНИЯХ A.H.C. Van Bruggen1, J.M. Cevallos-Cevallos1, G. Gu1, S. Sellers1, А.М.Семенов2, В.В.Зеленев Кафедра фитопатологии и Институт потенциальных патогенов Университета Флориды, Почто вый ящик 110680, Гейнсвилл, Флорида 32611-0680, США.

Кафедра микробиологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова.

Ключевые слова: Slll, резервуар, заболевания, животные, растения В статье приведены результаты изучения выживания S. r Vr Tphuru во взаи мосвязанных местообитаниях и оценка риска загрязнения энтеропатогенами растений томатов.

Введение. Количество вспышек заболеваний, вызванных Salmonella enterica и связанных с потреблением свежих овощей все более и более увеличивается. Прямо или косвенно, но источником этого энтеропатогена являются экскременты диких или домашних животных. Загрязненная вода или почва могут быть важными непрямыми источниками контаминации. Исследования выживания энтеро Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы патогенов во взаимосвязанных местообитаниях все еще довольно редки, а тем более математическое моделирование этих процессов.

Цель: Предсказать выживание S. r V yuu во взаимосвязанных местообитани ях (экскрементах животных, почве, воде и растениях) и оценивать риск загрязнения энтеропатогенами растений томатов, как снаружи, так и внутри.

Методы: Суспензии GFP-меченной канамицин-устойчивой популяции Salmonella yuu (10 – 10 КОЕ/мл) были внесены в корм или экскременты животных. кскременты затем были сме 5 шаны с почвой или внесены в воду. После этого различные растения были посеяны в смесь экскре менты – почва или были инокулированы водной суспензией Salmonella yuu Интервалы между перемещениями из одной среды обитания в следующую, различались от одной до нескольких недель для разных экспериментов. Регулярно, ежедневно или еженедельно определяли количество КОЕ GFP меченой Salmonella в различных местообитаниях путем учета колоний на агаризованной LB среде с канамицином. В каждой пробе определяли и водорастворимый органический углерод (ВОУ). Была соз дана математическая модель, предсказывающая выживание S. r в разных средах обитания при последовательных перемещениях.

Результаты: Количество КОЕ S. yuu уменьшалось волнообразно в соответствующих местообитаниях. Наблюдалось неожиданное увеличение численности популяций на некоторых расте ниях по сравнению со смесью экскременты – почва. Моделируемые кривые выживания S. yuu также имели волнообразный характер, вполне удовлетворительно отражая экспериментальные данные.

Выживание и рост патогенна положительно коррелировали с содержанием ВОУ. Для некоторых расте ний выявлена более высокая плотность патогена на листьях по сравнению с корнями. S. yuu был обнаружена внутри листьев и плодов томатов, однако риск внутренней контаминации листьев и плодов томатов был низким.

Заключение. S. r может циклически перемещаться через ряд последовательных ме стообитаний, выживая или увеличиваясь в численности при высоких концентрациях ВОУ с поддержа нием популяционной плотности превышающей уровень численности необходимый для инфицирования человека. Некоторые части растений как среды обитания энтеропатогена – ризосфера и плоды являют ся благоприятными для размножения патогена и их можно рассматривать как резервуары.

УДК 619:616.98:578.842.1:577. КЛОНИРОВАНИЕ ГЕНА K’177L (P22) ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ.

А.А. Варенцова1, аспирант, А.С. Казакова2, аспирант, Н.Н. Власова3, доктор биологических наук Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветери нарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук Тел/факс.: 8(49243)6-21-25, VNIIVViM@niiv.petush.elcom.ru E-mail Staffilokokk@yandex.ru E-mail anna-kazakova85@mail.ru E-mail vlanany@yandex.ru Ключевые слова: африканская чума свиней (АЧС), клонирование генов, K’177 (р22), сик венс.

Cтатья посвящена клонированию полноразмерного гена K’177 вируса АЧС в прокариоти татья ческом векторе для последующего конструирования рекомбинантного продуцента р22. Специфич Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ность встройки гена K’177 подтверждена в ЦР и секвенированием. Сиквенс гена K’177 штамма K-73 публикуется впервые.

Введение.

АЧС - вирусная инфекция, характеризующаяся высокой контагиозностью и летальностью, сверхострым, подострым, острым и хроническим течением. Обладает высокой степенью патогенности (смертность приближается к 100%), способна в короткие сроки (3-5 мес.) привести к огромным экономи ческим потерям в свиноводстве или даже полной депопуляции свиней.

В 2000г. возбудитель отнесен к семейству Avd [3]. Геном вируса представлен двуспи ральной ДНК, размером от 170 до 190т.п.о., имеет до 167 открытых рамок считывания [1]. В 2007 году АЧС зарегистрирована в Грузии, с 2008 года вспышки ее регистрируются на территории Российской Федерации. Актуальной является проблема совершенствования средств и методов диагностики данно го вируса. Использование рекомбинантных технологий увеличивает безопасность приготовления пре паратов специфических антигенов, а синтезируемые генно-инженерные белки устойчивы при хранении и стандартны в применении.

Анализ данных литературы показал, что р22 является одним из основных диагностически значимых белков вируса АЧС. р22-ранний структурный белок с молекулярной массой 22 D, распо D, ложенный во внешней мембране вирусной частицы. Белок содержит гидрофобный регион на N-конце с характеристикой сигнального пептида и временно обнаруживается в плазматической мембране на ранних этапах вирусной инфекции [2]. Поскольку р22 является и ранним, и поверхностным белком, то целесообразность его использования в диагностических реакциях очевидна [4].

Целью нашего исследования было клонирование полноразмерного гена K’177L вируса АЧС в прокариотическом векторе для последующего конструирования рекомбинантного продуцента р22.

Материалы и методы исследований.

В качестве вектора для клонирования нами была выбрана многокопийная плазмида Z57R/Т, а носителя конструкции – компетентные клетки E.l штамма XL-1 (Pg).

Подбор праймеров, фланкирующих ген K’177L (р22), осуществляли с использованием про L грамм BEd 6.0 и Olg 6 на основе анализа опубликованных в GB первичных последователь ностей геномов изолятов возбудителя АЧС, проверив их в программе BLAS на сайте ://www.b.

l..gv/BLAS/). Сиквенс проводился в ГНУ ВНИВВиМ Малоголовкиным А.С.

Для постановки ПЦР использовали: q- и Pu- ДНК-полимеразы, буфер с (NH4)2SO4, 2,5мМ MgCl2, смесь трифосфатов 0,125мМ, (F), праймеры, фланкирующие ген K’177L (по 10пМ каж дого). В качестве матрицы для получения и накопления ПЦР-продукта использовали ДНК вируса АЧС штамма Mgd (100 мкг/мл) и штамма Kg-73 (100 мкг/мл).

Температуру отжига праймеров подбирали постановкой реакции с градиентом температур от 42 до 62°С на приборе «Терцик» (ДНК-Технологии, Россия). Размер амплифицированного фрагмента – 755 п.о. Режим ПЦР: предварительная денатурация при 95С-5мин 1цикл;

денатурация - 95С-30с, отжиг - 52С-30с, элонгация - 72С-1 мин 30 циклов;

заключительная элонгация при 72°C-5мин 1цикл.

Учет результатов проводили методом электрофоретического детектирования в 1,5 %-ном агарозном геле с бромистым этидием.

Для очистки ПЦР-продукта от агарозного геля использовали Набор реагентов для извлечения ДНК из агарозных гелей (F).

Лигирование проводили с использованием 5 е.а. Т4 ДНК-лигазы (F) при 60С в течение 16 часов.

В работе использовали ряд молекулярно-биологических методов - ПЦР, клонирование в про кариотическом векторе, выделение нуклеиновой кислоты, рестрикционный анализ[5].

Результаты исследований и их обсуждение.

Для клонирования последовательности гена K’177L штамма Kg-73 нами были проанали L - зированы профили гидрофильности по алгоритму H и Wd. Согласно этому алгоритму ген K’177L Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы содержит гидрофобный регион на N- конце с характеристикой сигнального пептида в участке с 1 по 32-ю аминокислоту (Рисунок 1). Данная область гена K’177L является наиболее консервативной.

Рис.1. - Профиль гидрофильности полипептида р22 по алгоритму H и Ws.

Для клонирования был накоплен и в последствие очищен от агарозного геля ПЦР-продукт пол норазмерного гена K’177L (755 п.о.), кодирующего белок 22 вируса АЧС штамма Mgd и Kg-73.

После проведения лигирования смесью трансфицировали компетентные клетки E. l штамма XL-1.

Получили 3 клона со встройкой гена K’177L штамма Mgd и 2 клона с геном K’177L штамма Kg-73, из которых отобрали по одному к каждому штамму. Проверили их однородность, сделав посев штрихом на 1,8% SOB-агаре с ампициллином (100 мкг/мл) в присутствии IPG и X-Gl.

Далее рекомбинантные клоны выращивали в жидкой питательной среде SOB с ампицил лином, затем из бактериальной культуры выделяли плазмидную ДНК [5] и определяли ориентацию встройки в плазмиде. Рестрикцию проводили по сайтам BHI и HdIII одновременно в буфере E (P P g) в течение 2 часов при температуре +37С. Данные сайты находятся в последовательности поли ) линкера плазмиды рZ57R и в последовательности прямого (BHI) и обратного (HdIII) праймеров. В электрофореграмме рестрицированной плазмиды клона выявлялось 2 видимых фрагмента: один – п.о., второй – 2853 п.о., что соответствует встройке и телу плазмиды Z57R соответственно. Фрагмен Z57R 57R R ты размером 25 п.о. и 36 п.о., также полученные в результате рестрикции на электрофореграмме не A Б Рис. 2. - А. Схема рекомбинантной плазмиды Z57R/ASFV22Kg-73.

Б. лектрофореграмма разделения продуктов рестрикции плазмиды Z57R/ASFV22K 57R/ASFV22K R/ASFV22K /ASFV22K ASFV22K 22K K g-73 по сайтам BHI и HdIII: 1- Z57R/ASFV22Kg-73 /BHI/HdIII;

2, 3 - Z57R/ASFV -73 : 57R/ASFV22Kg-73 BHI/HdIII;

R/ASFV22Kg- /ASFV22Kg- ASFV22Kg- 22Kg- Kg- -73 /HdIII;

HdIII;

;

57R/ASFV R/ASFV /ASFV ASFV 22Kg-73 не рестрицированная;

М – маркер молекулярной массы G Rul 100b DNA Ldd (F Kg- -73 b F ).

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы выявляются. Структура рекомбинантной плазмиды Z57R/ASFV22Kg-73 и электрофоретический анализ продуктов рестрикции клона представлены на Рисунке 2.

Специфичность встройки клонов Z57R/ASFV22Kg-73 и Z57R/ASFV22Mgd опре деляли методом ПЦР. В качестве матрицы использовали обработанную рестриктазой ERI плазмиду.

В электрофореграмме выявляли специфические продукты амплификации, соответствующие положи тельному контролю на уровне 755 п.о.

Нуклеотидную последовательность встройки K’177L штамма Kg-73 вируса АЧС определя L - ли секвенированием по Сэнгеру (Рисунок 3). Сиквенс K’177L штамма Kg-73 в GB не опублико L - ван. Максимальная степень гомологии 97% установлена с последовательностями гена K’177L штамма Е75, Gg 2007, B 97/1, Mu 1979 и Е70.

Рис. 3. - Нуклеотидные последовательности гена К’177L (р22) штаммов Kng-73, Е75, Ggi 2007 вируса АЧС.

Заключение.

В результате проведенных исследований сконструированы рекомбинантные плазмиды, несу щие последовательность гена K’177L, кодирующего р22 штамма Mgd и штамма Kg-73, пригодные для последующей разработки рекомбинантного продуцента гликопротеина р22. Впервые определена нуклеотидная последовательность ДНК гена K’177L (р22) штамма Kg-73. Клонированная последо L -73.

вательность соответствует таковой K’177L вируса АЧС и максимальная степень гомологии 97% наблю дается с аналогичным геном штаммов Gg 2007, Е75, B 97/1, Mu 1979 и Е70.

Библиографический список.

1. Aly l uld qu A w v vu/ R.J. Y, J.M.

Rdgu, M.L. Ngl, L. Yu, C. Equ, J.F. Rdgu, E. Vul// Vlgy. – 1995. – Vl. 208. – P.

249-278.

2. C, A., Vul, E. P 22 w v vu: ly uul d b d ll/ A. C, E. Vul// Vlgy. – 1991. - № 181. – Р.

251-257.

3. Fly Avd. Vu xy: Clfi d Nlu Vu/ L.K. Dx, J.V. C, J.M. Eb, D.L. R, E. Vul, P.J. Wl;

dd by M.H.V V Rgl, C.M.

Fuqu, D.H.L B, E.B. C, M.K. E, S.M. L, J. Ml, M.A. My, D.J. MG, C.R.

Pgl, R.B.F.A. W, C.M. Muy, D.H.L. Fuqu, S.A. B, A.W. Gbl, G.P. Jv, M.D. Mll [ l.]// Sv R Il C xy Vu. – Ad P. – S Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Dg, 2000. – P. 159-165.

4. Gl lgy d d fi uu w v vu l/ J.L. C, J.M. C, A.L. C l.// Vlgy. – 1984. - № 132. – Р. 160-172.

5. Mlul Clg. A lby Mul/. M, E.F. F, S. Sb// Cld Sg Hb Lby. – Cld Sg Hb, Nw Y, 2006.

УДК 619: ВЫДЕЛЕНИЕ И ТИПИРОВАНИЕ БАКТЕРИИ PSEUDOMONAS FLUARESCENS.

Викторов Д.А., аспирант кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Артамонов А.М. соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА, Богданов И.И. к в н, доцент УГСХА Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии УГСХА, г. Улья новск.

Pseudomonas flur выделяют главным образом из недоброкачественных пищевых про дуктов (яйца, мясо, рыба, молоко), что указывает на роль данных бактерий в порче пищевых продо вольственных товаров и сырья. Могут быть выделены из клинического материала (Сидоров М.А., 1995).

Является возбудителем псевдомоноза и лепидортоза прудовых рыб.

Наряду с другими видами бактерий неферментирующей группы, способны к биодеградации различных углеводородов, что придаёт Pseudomonas flur важное практическое значение при очистке почвы, воды и сточных вод промышленных предприятий от загрязнений нефтепродуктами.

Особенно актуально применение психрофильной бактерии Pseudomonas flur с этой целью в северных регионах страны при температуре 3-15С (Биттеева М.Б., 1998).

Широко населяет ризосферу и способствует значительному улучшению роста и развития рас тений, являясь потенциальным объектом агробиотехнологии для разработки на их основе биологи ческих средств защиты растений от фитопатогенов, а так же биопрепаратов, стимулирующих рост и повышающих продуктивность растений (S M.N., 1982).

Целью исследования является разработка схемы выделения и системы тестов для иденти фикации Pseudomonas flur. Данная цель достигалась путём предварительного изучения био логических свойств референс-штаммов Pseudomonas flur (ACC 13525 IV-96), Pseudomonas putida (№901 VI-89;

ACC 12633 IV-87), Pseudomonas ru (128, 1677) полученных из музея кафе дры микробиологии УГСХА, подбора имеющихся тестов и конструирования оригинальных питательных сред.

Результаты тестов, характерные для исследованных референс-штаммов бактерий рода Pseu domonas приведены в таблице 1.

Таблица 1. - Результаты тестов, характерные для референс-штаммов бактерий рода Psumns Ps.fluo-rescens Ps.putida Ps.putida Ps.aerugi-nosa Ps.aerugi-nosa Тест 13525 №901 12633 128 Рост на бульоне с сукцинатом + + + + + натрия Реакция на элективной среде с + + + + + глюкозой и фурадонином Оксидаза + + + + + Каталаза + + + + + Рост на агаре с 0,2% хлоридом - - - - бария Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Окраска по Граму - - - - Подвижность + + + + + Рост при 4C + + + - Рост при 41C - - - + + Тест на желатиназу + - - + + В дальнейшем образцами для исследования являлись сточные воды города Ульяновска. Пер воначальным этапом схемы выделения мы предлагаем посев 1 мл исследуемого субстрата на 5 мл предложенной нами синтетической среды – бульон с сукцинатом натрия и солями следующего состава:

сукцинат натрия – 4,0 г, нитрат калия – 0,5 г, фосфат калия двузамещённый – 0,5 г, фосфат калия одно замещённый – 0,1 г, сульфат магния – 0,2 г, хлорид кальция – 0,1 г, вода дистиллированная – 1 л.

Сукцинат натрия в данной среде служит единственным источником углерода и доступен в качестве питательного субстрата для бактерий неферментирующей группы. Нитрат калия служит ис точником азота, фосфат калия двузамещённый, фосфат калия однозамещённый, сульфат магния и хлорид кальция необходимы для обеспечения биохимических процессов в клетках Pud flur-flur scens. После 24 часов культивировния при 28C, наблюдалось образование взвеси бактериальной мас C,, сы, в некоторых случаях окраска среды в желтовато-зеленоватый цвет за счёт выделяемых бактерией пигментов. Рост бактерий на данной среде указывает на их способность использовать сукцинат натрия в качестве единственного источника углеродного питания.

Из бульона с сукцинатом натрия и солями осуществляли посев на чашки Петри с предлагае мой нами элективной средой следующего состава: фурадонин – 160,0 мг, глюкоза 10,0 г, пептон – 2, г, калий фосфорнокислый двузамещённый – 0,05 г, магний сернокислый – 0,1 г, бромтимоловый синий – 0,03 г, агар-агар – 15,0 г, вода дистиллированная – 1 л. Фурадонин в данной среде присутствует в качестве ингибирующего агента, подавляющего рост грамположительных палочек и кокков и грамо трицательных палочек семейства Eb. Пептон явяется источником аминокислот, калий фосфорнокислый двузамещённый и магний сернокислый обеспечивают электролитный состав среды, необходимый для биохимических процессов. Бромтимоловый синий присутствует в среде для инди кации повышения кислотности за счёт окисления глюкозы. После культивирования на данной среде в течение 24 часов при 28C, с её поверхности отвивали колонии различной морфологии, но дающие положительную реакцию, то есть, утилизирующие глюкозу путём окисления. Положительная реакция при этом характеризуется изменением цвета индикатора бромтимолового синего с зеленоватого цвета до жёлтого, что вызвано снижением H среды за счёт окисления глюкозы.

После получения чистых культур микроорганизмов, проводилось исследование их биохими ческих свойств по предлагаемым нами тестам: тест на оксидазу, тест на каталазу, рост на агаре с 0,2% хлоридом бария, изучение тинкториальных свойств, тест на подвижность, рост при 4C, рост при 41C, тест на желатиназу.

Все 65 выделенных культур являлись оксидазо- и каталазоположительными. Для постановки теста на оксидазу использовался 1% раствор 2-N-диметилпарафенилендиамина, теста на каталазу – 3% раствор перекиси водорода, которые наносили на колонии 24-часовой культуры бактерий на мясо пептонном агаре. Устойчивость бактерий к солям двухвалентного бария проверялась методом посева бактериальных культур на пробирки со скошенным мясопептонным агаром с добавлением 0,2% хлори да бария и последующей 24-часовой выдержкой при 28C. Положительная реакция, характерная для бактерий рода Pseudomonas, проявлялась в отсутствии роста на данной среде.

Все псевдомонады при окраске по Граму выявляются как грамотрицательные палочки, под вижные благодаря наличию полярных жгутиков. Подвижность выявлялась методом микроскопии бакте риальной взвеси в препарате раздавленная капля.

Способность к росту при 4C и 41C, а так же способность разжижать желатин, исследовались для дифференцирования Pseudomonas flur от штаммов других псевдомонад, отличающихся по этим признакам. Оценка способности к росту при 4C и 41C проводилась культивированием в пи C C тательном бульоне при соответствующей температуре в течение 72 часов. Для Pud flur- flur scens характерна способность к росту при 4C и отсутствие роста при 41C. Определение фермента желатиназы проводили путём засева чистой культуры уколом в столбик застывшего 15%-ного раствора Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы желатина в питательном бульоне с последующей инкубацией при 28C в течение 24 часов. Результат данного теста для Pseudomonas flur, по нашим данным, положительный, то есть бактерия Pseu domonas flur содержит фермента желатиназу и способна к разжижению желатина.

Исходя из этих данных, нами был сделан вывод, что из 65 выделенных культур, 27 штаммов проявляют свойства аналогичные Pseudomonas flur (таблица 1), что позволяет отнести их к данному виду бактерий.

Таким образом, разработанная нами схема позволяет дифференцировать Pud flu-flu rescens от других видов бактерий и выделять данный микроорганизм из объектов окружающей среды.

Литература 1. Беляков В.Д., Ряпис Л.А. Сапрофиты медицинского значения и природа их патогенности на примере псевдомонад // кология возбудителей сапронозов. М., 1988. С.7-20.

2. Вейант Р., Мосс У., Уивер Р., Холлис Д., Джордан Дж., Кук., Дейншвар М. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (анаэробных и факультативно анаэробных).

Пер. с англ. – М.: Мир, 1999. – 791 с., илл.

3. Викторов Д.А., Богданов И.И., Шестаков А.Г, Васильев Д.А. Разработка системы тестов для выделения и идентификации Pseudomonas putida. Материалы международной научно-практиче ской конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», Ульяновск:, ГСХА, т. 4, 2009.

4. Определитель Берджи. В 2-х т.Т.1: Пер. с англ./Под ред. Дж.Хоулта, Н.Крига, П.Снита, Дж.Стейли, С.Уилльямса. – М.: Мир, 1997. – 432с.: ил.

5. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas. М.: Наука, 1986.

6. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Федотов В. Б Определитель зоопатогенных микроорга низмов. М.: Колос, 1995. – 391с.: ил.

7. Смирнов В.В., Киприанова Е.А. Бактерии рода Pud. Киев. Наукова думка, 1990, с. 176-187.

8. Judl C. 1970 O 37. Dg ACC 13525 y Pud flu Mgul. I. J. Sy. Bl. 20: 18.

9. Rd M.E. 1959. Pud flu. J. G. Mbl. 21:

221-263.

10. S M.N., H J.G. D - Suv Sl d R-Clg B // S.

1982. Vl. 216. P. 1376-1381.

11. Sl Z. Nul ly Pud flu-ud l d ub u ul ulv Hug R (Cbu blgy P) // A Py l. El. Hug., 1991. V.26. N.3-4.P.3-4.

РОЛЬ PSEUDOMONAS FLUORESCENS ДЛЯ НАУКИ И ПРАКТИКИ.

Д.А. Викторов, соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА А.М Артамонов, соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА И.И. Богданов к в н, доцент УГСХА Бактерии рода Pud – гетерогенная группа микроорганизмов, широко распространён ных в природе и принимающих активное участие в процессах минерализации органических соедине ний, отчистке окружающей среды от загрязнения.

Среди псевдомонад имеются возбудители особо опасных инфекций – сапа, вызываемого бак терией Pud ll, и мелиоидоза, вызываемого Pud udll. Наряду с Pud,.

ug (синегнойной палочкой) многие псевдоманады приобретают в последнее время всё более широкое распространение в клинике как возбудители оппортунистических инфекций (Bg., 1981, V Gv A., 1985). Отдельные виды вызывают псевдомонозы рыб. Некоторые псевдомо., Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы нады являются фитопатогенными, другие играют важную роль в защите растений от бактериальных и грибных заболеваний.

Род Pud относится к семейству Pudd. Его представители – прямые или слегка изогнутые, но не спиральные, грамотрицательные палочки, 0,5-1,01,5-5,0 мкм. У многих видов накапливается в качестве запасного источника углерода поли--гидроксибутират, который виден как включения после окраски суданом. Покоящиеся стадии неизвестны. Подвижны за счёт одного или нескольких полярных жгутиков, в некоторых случаях неподвижные. Аэробы, используют кислород в ка честве конечного акцептора электронов. У отдельных видов и штаммов альтернативным акцептором электронов может служить нитрат, что обеспечивает анаэробный рост.

Большинство видов не растут в кислой среде (H 4,5), в органических факторах роста не нуж H даются, оксидазоположительные, в редких случаях -отрицательные. Все виды каталазоположительные, хемоорганотрофы, некоторые виды – факультативные автотрофы, способные использовать в качестве источника энергии водород и оксид углерода (II) (Берджи, 1997).

Вид Pud flu относится к первой РНК-секции второй ДНК-группы рода Pu flu d (Сидоров М.А., 1995), описаны пять биоваров (Вейант Р., 1999).

Бактерия Pud flu представляет собой грамотрицательные палочки, от корот flu ких до длинных, подвижные за счёт трёх или большего числа полярных жгутиков, аэробы. Образуют кислоту из глюкозы и ксилозы, отдельные штаммы – и из других углеводов, в частности, из сахарозы.

Оксидазоположительные, обладают аргининдигидролазой, лизиндекарбоксилазу не содержат. Разжи жают желатину, что является важнейшим дифференцирующим признаком. Некоторые штаммы вос станавливают нитраты. Индол-отрицательные. Предпочтительная температура для роста, как правило, 25С, при 35С рост слабый, при 42С не растут, способны к росту при 4С. Образуют флюоресцирую щий жёлто-зелёный пигмент (пиовердин), пиоцианин не образуют, ацетамид не используют (Вейант Р., 1999).

Pud flu выделяют главным образом из недоброкачественных пищевых про flu дуктов (яйца, мясо, рыба, молоко), что указывает на роль данных бактерий в порче пищевых продо вольственных товаров и сырья. Могут быть выделены из клинического материала (Сидоров М.А., 1995).

Нередко служат причиной ложноположительных результатов посева крови, а иногда и возбудителем инфекций. Чаще всего они развиваются в результате переливания длительно хранившихся компонен тов крови. Является возбудителем псевдомоноза и лепидортоза прудовых рыб (язвенная болезнь рыб).

Наряду с другими видами бактерий неферментирующей группы, способны к биодеградации различных углеводородов, что придаёт Pud flu важное практическое значение при очистке почвы, воды и сточных вод промышленных предприятий от загрязнений нефтепродуктами.

Особенно актуально применение психрофильной бактерии Pud flu с этой целью в северных регионах страны при температуре 3-15С (Биттеева М.Б., 1998).

Широко населяет ризосферу и способствует значительному улучшению роста и развития рас тений, являясь потенциальным объектом агробиотехнологии для разработки на их основе биологи ческих средств защиты растений от фитопатогенов, а так же биопрепаратов, стимулирующих рост и повышающих продуктивность растений (S M.N., 1982).

На основании вышесказанного правомерно сделать вывод, что бактерии Pud flu flu широко распространены во внешней среде, имеют важное научное, ветеринарное и клиническое значение, при недостаточной изученности их роли в биохимических процессах, протекающих в живой и неживой природе.

Библиографический список:

1. Беляков В.Д., Ряпис Л.А. Сапрофиты медицинского значения и природа их патогенности на примере псевдомонад // кология возбудителей сапронозов. М., 1988. С.7-20.

2. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных экосистемах. Екатеринбург:

УрО Ран, 1997. 277 с.

3. Вейант Р., Мосс У., Уивер Р., Холлис Д., Джордан Дж., Кук., Дейншвар М. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (анаэробных и факультативно анаэробных).

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Пер. с англ. – М.: Мир, 1999. – 791 с., илл.

4. Коритаев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология:

Учебник для мед.вузов. – 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: СпецЛит, 2002. – 591 с.: ил.

5. Медицинская микробиология / Гл.ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев – М.: ГОТАР МЕДИ ЦИНА, 1998. – 1200с.: ил.

6. Определитель Берджи. В 2-х т.Т.1: Пер. с англ./Под ред. Дж.Хоулта, Н.Крига, П.Снита, Дж.Стейли, С.Уилльямса. – М.: Мир, 1997. – 432с.: ил.

7. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas. М.: Наука, 1986.

8. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Федотов В. Б Определитель зоопатогенных микроорга низмов. М.: Колос, 1995. – 391с.: ил.

9. Смирнов В.В., Киприанова Е.А. Бактерии рода Pseudomonas. Киев. Наукова думка, 1990, с. 176-187.

10. Gbb A.P., l. 1992. Bl gw bld u. L 340: 1222-1223.

11. Gld, G.L. 1991. Pud d ld g. I: A. Blw, l. (Ed.), Mul Cl l Mblgy, 5 d., A Sy Mblgy, Wg, 429-441.

12. Judl C. 1970 O 37. Dg ACC 13525 y Pud flu Mgul. I. J. Sy. Bl. 20: 18.

13. Pll N.J. 1984. Gu I. Pud Mgul 1894. 237AL. (N. C. O. 5, Jud.

C. 1952, 237). I: N.R. Kg d J.G. Hl (Ed.).

14. Rd M.E. 1959. Pud flu. J. G. Mbl. 21:

221-263.

15. S M.N., H J.G. D - Suv Sl d R-Clg B // S.

1982. Vl. 216. P. 1376-1381.

16. Sl Z. Nul ly Pud flu-ud l d ub u ul ulv Hug R (Cbu blgy P) // A Py l. El. Hug., 1991. V.26. N.3-4.P.3-4.

17. V JL, B DJ, Su PM l. vl l v Eu. Rul Eu vl v (EPIC) udy. JAMA;

1995;

274(8):

639-44.

18. http://zhurnal.ape.relarn.ru/artikles/2005/128.pdf (Лечение местных инфекций у морских млеко питающих // Лебедева И.Е., Лаженцева Л.Ю. 2005).

УДК 619: БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ УТИЛИЗАЦИИ НЕФТЯНЫХ ЗАГРЯЗНЕНИЙ Викторов Д.А., соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Артамонов А.М. соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Сидорова М.М., студент кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии УГСХА, г. Улья новск.

Актуальность темы.

Нефть относится к наиболее интенсивно используемым природным полезным ископаемым.

Процессы добычи, транспортировки, переработки нефти и использования нефтепродуктов часто со провождаются технологическими и аварийными выбросами их во внешнюю среду, что приводит к за грязнению и нарушению экосистем различной интенсивности, вплоть до экологических катастроф.

Площади нефтезагрязненных земель и водоемов с каждым годом увеличиваются, поэтому продолжает Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы оставаться актуальной проблема разработки новых и совершенствования существующих технологий ликвидации последствий техногенных контаминаций нефтью и нефтепродуктами и восстановления биопотенциала нарушенных экосистем.

Методы ликвидации нефтяных загрязнений Среди методов ликвидации нефтяных загрязнений почв выделяются следующие группы ме тодов:

1. Механические: обваловка загрязнения, откачка нефти в емкости насосами и вакуумными сборщиками. Вывоз почвы на свалку для естественного разложения 2. Физико-химические:

- Сжигание (экстренная мера при угрозе прорыва нефти в водные источники). Таким путем уничтожается от 1/2 до 2/3 разлива, остальное просачивается в почву. При сжигании из-за недостаточно высокой температуры в атмосферу попадают продукты возгонки и неполного окисления нефти. Землю после сжигания необходимо вывозить на свалку;

- Предотвращение возгорания. Применяется при разливах в цехах, жилых кварталах, на ав томагистралях, где возгорание опаснее загрязнения почвы;

в этом случае изолируют разлив сверху противопожарными пенами или засыпают сорбентами;

-Промывка почвы. Проводится в промывных барабанах с применением ПАВ;

- Дренирование почвы. Разновидность промывки почвы на месте с помощью дренажных си стем;

может сочетаться с биологическими методами, использующими нефтеразлагающие бактерии;

-кстракция растворителями. Обычно осуществляется в промывных барабанах летучими рас творителями;

- Сорбция. Сорбентами засыпают разливы нефтепродуктов на сравнительно твердой поверх ности для поглощения нефтепродукта и снижения опасности пожара (Терещенко Н.Н., Лушников С.В., 2004);

-Термическая десорбция (крекинг).

- Химическое капсулирование. Новый метод, заключающийся в переводе углеводородов в не подвижную нетоксическую форму.

3. Биологические:

-Фитомелиорация. Устранение остатков нефти путем высева нефтестойких трав (клевер пол зучий, щавель, осока), активизирующих почвенную микрофлору;

- Биоремидиация. Применение нефтеразлагающих бактерий;

периодические подкормки рас творами удобрений;

процесс занимает 2-3 сезона.

Биодеструкция нефти Наиболее перспективным, экологически чистым и часто единственно возможным способом утилизации этих веществ является применение биологических технологий, основанных на использова нии микробных биопрепаратов.

Микроорганизмы, потребляющие углеводороды нефти, являются обычными компонентами биоценозов почв. Поступление в почву свежего энергетического материала вызывает интенсивное раз витие углеводородокисляющей микрофлоры, что обеспечивает утилизацию этого поллютанта.

Сущность данных технологий состоит в том, что в загрязненный объект вводятся биопрепара ты, изготовленные на основе активной биомассы углеводородокисляющих микроорганизмов;

для таких микроорганизмов углеводороды являются естественным источником питания, поэтому в процессе ро ста и размножения микроорганизмов количество углеводородов снижается вплоть до полного их исчез новения. Биопрепараты выпускаются в виде порошка живых бактерий, что позволяет перевозить их на любые расстояния любым видом транспорта.

Разработаны и успешно реализуются различные варианты технологии очистки почв, водо емов, сточных вод, резервуаров, загрязненных газовым конденсатом, нефтью, мазутом, светлыми не фтепродуктами и т. д. Технология очистки в данном случае заключается в нанесении препарата на загрязненную поверхность или в его смешивании с источником загрязнения в присутствии обычных ми неральных удобрений. При этом осуществляется аэрация. Степень очистки при однократной обработке биопрепаратами составляет от 60% до 100%, при этом процесс очистки занимает период от нескольких часов до нескольких месяцев, что зависит как от вида загрязнителя и его количества, так и от физико Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы химических и климатических факторов.

Условия, необходимые для деградации нефти микроорганизмами определил еще Таусон в 1928 г:

• наличие воды и минеральных солей, • наличие источников азота и фосфора, • присутствие свободного кислорода, • нейтральное значение рН.

Существующие биопрепараты для микробиологической нефтедеструкции К 2006 году в одной лишь России было разработано свыше 40 биопрепаратов на основе не фтеокисляющих бактерий, актиномицетов и микроскопических грибов.

Одной из наиболее важных характеристик биопрепаратов является максимальный уровень загрязнения, подлежащий устранению. Наиболее перспективными являются препараты, которые эф фективны при уровне загрязнения от 5% и выше (до 20 %). К таким препаратам относятся дизойл, де воройл, родер, нафтокс, дестройл, ленойл, руден. (Войно Л.И., 2006) Особый интерес представляют микроорганизмы из рода Pud, flv bu, Rdu, Rdul.

Наиболее известными биопрепаратами являются американские препараты Микробак и Па рабан. В товарном виде они представляют собой порошкообразные вещества, хорошо растворимые в воде.

В состав препарата Деворойл входит консорбциум микроорганизмов, в том числе и дрожжи рода dd. Всероссийским нефтяным НИИ геолого – разведовательным институтом разработана се рия биопрепаратов под общим названием нафтокс, предназначенных для очистки грунтов и водоемов от нефтезагрязнений. В биопрепаратах используются живые культуры УВ окисляющих микроорганиз мов (Mybu, Pud, Rdu, Ab).

Из нефтезагрязненной почвы был выделен штамм Pud ud 91 – 96, обладающий способностью использовать низкомолекулярные алканы, что позволило применить его для рекультива ции почв. На основе штамма Pud ud 91 – 96 был изготовлен торфяной препарат, назван ный псевдомин.

Препарат «Путидойл» разработан на основе штаммов бактерий рода Pud. Техноло.

гия применения заключается в обработке загрязненных участков грунтов раствором препарата вместе с минеральными солями, содержащими азот и фосфор. Препарат “Путидойл” применялся в аркти ческих условиях на о. Колгуев и на побережье Баренцева моря. Препаратом за 15 дней был полностью очищен каменистый берег Онежского озера, загрязненный в результате аварии танкера.

Резюмируя вышеперечисленное, можно сказать, что сегодня в России и развитых зарубежных странах ведутся интенсивные исследования в области биодеградации техногенных загрязнителей био ценозов бактериям рода Pud и грибами белой гнили.

Список литературы:

1. Викторов Д.А., Богданов И.И. Обоснование причин изучения бактерий Pud ud.

Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвящённой 65-летию Ульяновской ГСХА. Ульяновск: Ульяновская ГСХА, 2008, т. 2. Войно Л.И. Биодеградация нефтезагрязнителей почв и акваторий //Фундаментальные ис следования.-2006. - №5.- С.68-70.

3. Габбасова И.М., Сулейманов Р.Р., Бойко Т.Ф. и др. Использование биогенных добавок совместно с препаратом «Деворойл» для рекультивации нефтезагрязненных почв. Биотехнология. 2002.- №2. - С. 57 - 65.

4. Киреева Н. А. Биодеструкция нефти в почве культурами углеводородокисляющих микро организмов // Биотехнология. - 1996. - № 1. - 51-54.

5. Кочергин И.Е., Ознобихин В.И., Савельев А.В., Кереев В.О. Опыт биремедиации нефте загрязненной почвы в рамках полевого эксперимента в условиях Северного Сахалина – [лектронный ресурс]. Адрес доступа: ://b.ll.u Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы 6. Покровский В.И., Поздеев О.К. Медицинская микробиология – М.: ГОТАР МЕДИЦИНА, 1998. – 1200с.: ил.

7. Рубан Е.Л. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas. - М.: Наука, 1986.

8. Терещенко Н.Н., Лушников С.В. К вопросу о рациональном применении минеральных удо брений для ускорения микробиологической деструкции нефтяных углеводородов в почве. IV Между народный симпозиум “Контроль и реабилитация окружающей среды”. Материалы симпозиума.- Томск, 2004.-.117- УДК 619: ВЫДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИЙ-НЕФТЕДЕСТРУКТОРОВ РОДА PSEUDOMONAS.

Викторов Д.А., соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Артамонов А.М. соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Сидорова М.М., студент кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Богданов И.И. к в н доцент УГСХА Васильев Д.А. д.б.н., профессор кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии УГСХА, г. Улья новск.

Актуальность.

Нефть относится к наиболее интенсивно используемым природным полезным ископаемым.

Процессы добычи, транспортировки, переработки нефти и использования нефтепродуктов часто со провождаются технологическими и аварийными выбросами их во внешнюю среду, что приводит к за грязнению и нарушению экосистем различной интенсивности, вплоть до экологических катастроф.

Площади нефтезагрязненных земель и водоемов с каждым годом увеличиваются, поэтому продолжает оставаться актуальной проблема разработки новых и совершенствования существующих технологий ликвидации последствий техногенных контаминаций нефтью и нефтепродуктами и восстановления биопотенциала нарушенных экосистем.

Наиболее перспективным, экологически чистым и часто единственно возможным способом утилизации нефтяных загрязнений является применение биологических технологий, основанных на ис пользовании микробных биопрепаратов.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 12 |
 










 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.