авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 12 |

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Департамент ветеринарии Ульяновской области ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» ...»

-- [ Страница 5 ] --

2. Воронин Е.С., Грязнева Т.Н., Дервишов Д.А., Тихонов И.В. Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных с целью постановки диагноза и производства вакцинных и пробиотических препаратов: Учебно-методическое пособие. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 2004. - С. 72.

3. Жумагельдина З.Т. Клинико-эпидемиологические особенности гафниоза человека. - Алматы, 2009. - С. 4, 7, 13, 37-40, 45, 57, 58-64.

4. Золотухин С.Н. Малоизученные энтеробактерии и их роль в патологии животных. – Улья новск, 2004. – С. 3-9.

5. Золотухин С.Н., Каврук Л.С., Васильев Д.А. Смешанная кишечная инфекция телят и поро сят, вызываемая патогенными энтеробактериями. – Ульяновск, 2005. - С. 5-8.

6. Новиков В. Б. Пчёлы, цветы и здоровье//Пчеловодство. – 2005. - №1. – С. 12-15.

7. Поздеев О.К., Фёдоров Р.В. нтеробактерии: руководство для врачей. – М.: ГОТАР – Ме диа, 2007. – С. 309, 311, 313-315, 317-318.

8. Тарасова А.В., Феоктистова Н.А. Бактенрии рода H – возбудители инфекционной болезни пчёл. - ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА», 2007. – С. 172-174.

9. Тарасова А.В., Феоктистова Н.А., Золотухин С.Н. Роль бактерий рода H в патогенезе желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных. - ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА», 2007. – С. 175-176, 178.

10. Abb S.L., O’C J., Rb. l. Bl wly dbd E, E lb. // J. Cl. Mbl. - 2003. - V. 41. - P. 4852- Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы 11. Alb M.J., Al K., Il M. l. H lv, bbl u d u. // I.

Iu. - 1991. - V. 59. - P. 1507- 12 Alb M.J., Fqu S.M., Au M. l. Sg vul-d y d gy lvl bw g E l d H lv. // J. Md.

Mbl. - 1992. - V. 37. - P. 310 – 314.

13. Cw S. B u. // Z. Mbl. Iubl. – 1974. – V. 1. – P. 37-47.

14. Ewg W., Edwd P. C H lv l u ll x-l. // B. Pg. – 1972. – V. 5. – P. 79 – 96.

15. Gbg H.G., Gld J.P. H lv wg l. // J. Pl. - 1988. - V. 3. - P. 122-123.

16. Gl D. l. // Ab. Ag C. – 2000. – V. 22. – P. 1470 – 1478.

17. Dl R., Cl J. A ly u lg ud //Sw Rud Md Px. – 2004. – V. 1. – P. 54 – 62.

18. Kll A. l. // C. – 1994. – Vl. 105. – P. 1098 – 1100.

19. Mll V. Dbu d dbxyl Eb. // A Pl. M bl. Sd. - 1954. - V. 35. - P. 259-277.

20. Mjb A., Sd A. Eb g // J. Pd. - 1978. - V. 93. - P. 1062 1063.

21. S R., u K. // I: P: db blgy b ylgy, l, dfi, l d. By Blw A. l. – Bl: Sg – Vlg, 1991. – P. 2816 – 2821.

22. Wg J.A., B R.J., R R.E. J. Blg d dlg Eb d Eb lqu // J. I. D. - 1971. - V. 124. - P. 379- УДК 576.8:574. ВОДНЫЕ БЕСПОЗВОНОЧНЫЕ КАК ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ ХОЗЯЕВА ГЕЛЬМИНТОВ ПТИЦ УЛЬЯНОВСКОЙ ОБЛАСТИ Д.С. Игнаткин, кандидат биологических наук ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

тел. 8(84231)55-95-38, ignatkin82@yandex.ru М.А. Видеркер, кандидат биологических наук ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

тел. 8(84231)55-95-12, igwid@yandex.ru Ключевые слова: беспозвоночные, моллюски, гельминтозы птиц, промежуточные хозяева Исследована гельминтозная опасность основных групп водных беспозвоночных животных, являющихся естественным кормовым биоресурсом птиц Ульяновской области. Установлено, что основными промежуточными хозяевами гельминтов являются брюхоногие моллюски, личинки стре коз, а также водяные рачки ослики. Рассмотрено эпизоотологическое значение некоторых видов трематод и скребней.

Введение. Для Среднего Поволжья проблема гельминтозов птиц имеет большое значение.

то обусловлено тем, что регион является аграрным, со многими отраслями птицеводства, в т.ч. с развитым частным сектором птицеводства, обладает многообразием природных комплексов, развитой гидрографической сетью. Сложность ситуации во многом обусловлена биогельминтозами, общими для диких и домашних птиц. Большинство из них характеризуется общей закономерностью – развитием Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы личиночных стадий в водной среде. Следовательно, заражение птиц гельминтами происходит на во доемах и возникает при наличии в водоеме определенных видов промежуточных хозяев паразитов.

Промежуточными хозяевами выступают многие беспозвоночные гидро- и амфибионты, относящиеся к различным таксономическим группам, которые, в свою очередь, имеют наибольшее кормовое значе ние для птиц по своей питательной ценности и количеству биомассы. К ним относятся различные виды моллюсков, личинок насекомых, ракообразных, пиявок, малощетинковых червей, и т.п. Отрицательная роль этих животных как промежуточных хозяев гельминтов проявляется лишь при определенных усло виях, зависящих от типа водоема, условий содержания птиц и других факторов [1].

Лучших результатов в борьбе с гельминтозами можно добиться тогда, когда основные усилия направляются на разрыв звеньев в цепи механизма передачи инвазии. Для этого необходимо владеть исчерпывающей информацией о характере циркуляции возбудителей гельминтозов, в первую очередь, в промежуточных звеньях своего развития. При этом в качестве индикаторов целесообразно использо вать промежуточных хозяев гельминтов.

В связи с этим, цель данной работы заключалась в проведении эпизоотологического анализа параметров инвазированности основных групп беспозвоночных (моллюсков, личинок насекомых, рако образных и пиявок) в Ульяновской области личиночными формами гельминтов.





Материал и методы. Материал для исследований был собран в 26 водоемах Ульяновской области. Исследования проводились в мае-октябре 2005-2010 гг. Компрессорным методом было иссле довано почти 9000 моллюсков 22 видов. Из беспозвоночных дополнительно исследовались ракообраз ные, пиявки и личинки насекомых. Обнаружение и идентификацию личинок гельминтов в промежуточ ных хозяевах проводили компрессорным методом. Для количественной характеристики инвазирован ности животных личинками гельминтов определяли экстенсивность инвазии (И, в %).

Результаты и их обсуждение. Исследования показали, что в качестве промежуточных хозяев гельминтов в биоценозах Ульяновской области наибольшее значение имеют брюхоногие моллюски.

Они же значительно чаще выступают в роли первого промежуточного хозяина трематод, в то время как двустворчатые – в роли второго промежуточного хозяина.

Дефинитивными хозяевами трематод, личинки которых обнаружены у моллюсков в водоемах Ульяновской области, являются преимущественно птицы (72 % от установленной трематодофауны), а также млекопитающие, амфибии (по 10 %) и рыбы (8 %).

Из выявленной фауны личинок трематод самый многочисленный видовой состав отмечен в отношении сем. Sgd (девять видов), сем. Ed и Plgd (по шесть видов).

Многие виды трематод, из числа выявленных нами у моллюсков, на стадии мариты способны вызывать тяжелые инвазионные заболевания домашней птицы, особенно водоплавающей. Так, нами отмечались возбудители эхиностоматидозов, стригеидозов, циатокотилидозов, лейкохлоридиоморфи дозов, нотокотилидозов, плягиорхозов, меторхозов, диплостомозов.

Заражение домашней птицы трематодами происходит при использовании в качестве корма таких водных обитателей, как моллюски, амфибии, рыбы, пиявки, олигохеты, личинки насекомых, ра кообразные. Как показали исследования, перечисленные гидро- и амфибионты очень часто выступают в качестве вторых промежуточных хозяев трематод. Кроме этого, водоплавающая птица может быть инвазирована трематодами, например шистосоматидами, и контактным путем.

Трематоды сем. Dld, не приносящие существенного вреда окончательным хозяе вам – птицам, в метацеркарной фазе развития являются широко распространенными паразитами рыб и наносят немалый ущерб рыбному хозяйству, особенно прудовому [2]. Наибольшую опасность они представляют для личинок, мальков и сеголетков прудовых рыб. Потенциально неблагополучными по диплостомозам могут быть все водоемы, в которых обитают моллюски р. Ly, и которые хотя бы изредка посещаются рыбоядными птицами, выступающими окончательными хозяевами диплостомид.

Согласно нашим наблюдениям, моллюски р. Ly являются самыми распространенными и встречаются, за редким исключением, во всех водоемах. И моллюсков L. gl партенитами и церкариями трематод р. Dlu составила 4,06%. Учитывая то, что один зараженный партенитами Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы моллюск может быть источником инвазии многих особей второго промежуточного хозяина, становится очевидным высокий уровень инвазии рыб метацеркариями диплостомид в естественных гидробиоце нозах, что подтверждено нашими исследованиями.

Следует обратить внимание на то, что многие эхиностоматиды, являющиеся паразитами птиц, способны казуистически вызывать тяжелые инвазии и у человека. Более того, представляют опасность для человека и шистосоматиды. Считается, что основными видами шистосоматид, вызывающими цер кариозы человека на территории России, являются bl ll. В Ульяновской области И моллюсков L. gl личинками трематод. ll составила 0,16 %.

В качестве промежуточных хозяев трематод в биоценозах области наибольшее значение име ют брюхоногие моллюски. Как первые промежуточные хозяева доминантную роль в развитии трематод выполняют моллюски видов L. gl, V. vvu, B. ul и P. lb;

как вторые промежуточ ные хозяева – L. gl, L. v, V. u.

Основную гельминтозную опасность для домашних птиц в Ульяновской области из отмечен ных нами личинок трематод представляют гемипопуляции сем. Sgd, сем. Ed, сем.

Plgd, сем. Nyld и сем. Sd.

Высокая экстенсивность метацеркарной инвазированности отмечается у малых ложноконских пиявок Hbdll ul и улитковых Gl. Интенсивность метацеркарной инвазии Ap atemon minor у улитковых пиявок составила в среднем по 4±2 личинки в каждой. Дефинитивными хо зяевами указанных трематод являются преимущественно утиные птицы и кулики, что свидетельствует о возможности паразитирования этих трематод и у домашних птиц. Следует отметить также личинок стрекоз Od, которые почти повсеместно инвазированны метацеркариями плягиорхид и простого нимид. Помимо этого у 22% личинок вислокрылок Sialis sp. отмечены также метацеркарии плягиорхид по 1-2 личинки в одном насекомом.

Из ракообразных в качестве промежуточных хозяев следует выделить водяных осликов Allu quu, которые в 21% случаев были инвазированы личинками скребней Flll, при этом от мечалось по 1-2 личинки паразита в одном рачке.

Необходимо отметить, что водяные ослики наряду с бокоплавами часто доминируют по чис ленности среди остальной мезофауны, поскольку их интенсивное размножение обусловлено разлага ющейся на дне водоема листвой кустарников и пометом птиц, представляющими собой лучший пита тельный материал для рачков.

Источником распространения филликолеза служат инвазированные утки и гуси, а также раз ные дикие водоплавающие птицы (утки, гуси, лысухи и др.), которые способны распространять фили коллез на значительные расстояния. Развитие возбудителя и движение инвазии может осуществляться в природе независимо от домашних уток и гусей. Для снижения численности инвазированных водяных осликов В.И. Петроченко (1976) рекомендует сменить водоем для выпаса домашних птиц с возвраще нием на прежний участок не ранее, чем через два года (водяные ослики часто перезимовывают две зимы).

Таким образом, выявленные у промежуточных хозяев личинки гельминтов указывают на риск инвазирования домашних птиц, а, высоковероятно, и на реальную зараженность птиц многими гель минтозами. При этом, как правило, любой водоем, пригодный для выпаса птицы, следует считать по тенциально неблагополучным в отношении выявленных возбудителей заболеваний, что определяется высокой плотностью населения промежуточных хозяев и их зараженностью личинками гельминтов, а нередко и превышением нормы плотности посадки птицы. Причем возбудителям эхиностоматидозов и филликолеза следует уделить особое внимание в силу их выраженной патогенности для птиц.

В заключении отметим, что систематическое проведение плановой дегельминтизации, а также ежегодное попеременное использование водоемов либо их участков с последующим возвратом на ис ходную зону выпаса являются обоснованной мерой предотвращения чрезмерной биологической акку муляции личинок гельминтов в водоеме и, как следствие, минимизирует риски острых гельминтозных инвазий птиц.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Библиографический список 1. Петроченко В.И. Гельминтозы птиц / В.И. Петроченко, Г.А. Котельников М.: Колос, 1976. – с.

351.

2. Судариков В.Е. Метацеркарии трематод – паразиты пресноводных гидробионтов Централь ной России / В.Е. Судариков, А.А. Шигин, Ю.В. Курочкин и др. – М.: Наука, 2002. – 298 с.

УДК 619:616.98:578.842.1:577. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ГЛИКОПРОТЕИН P54, ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ А.С. Казакова, аспирант Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветери нарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук Тел/факс.: 8(49243)6-21-25, VNIIVViM@niiv.petush.elcom.ru E-mail anna-kazakova85@mail.ru Ключевые слова: африканская чума свиней (АЧС), E183 (р54), сиквенс.

Статья посвящена компьютерному анализу нуклеотидной последовательности гена E183 (р54) вируса африканской чумы свиней (АЧС). В результате сравнительного выравнивания последовательностей гена 183 (р54), взятых из, и сиквенсов гена 183 (р54), опре, деленных в ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии, получено разделение всех штаммов и изолятов вируса АЧС на 7 различных групп. Ряд сиквенсов гена E183 (р54) - KK-262, NV-1, Md и Armenia, - публикуются впервые.

Введение.

Африканская чума свиней (АЧС) известна почти на протяжении 100-летия как природно-очаго вая вирусная инфекция диких африканских и домашних свиней, а также кабанов[1]. Одним из важных моментов в изучении патогенеза АЧС является отсутствие продукции вируснейтрализующих антител при течении инфекции. Известно, что при репродукции в альвеолярных макрофагах свиньи высокови рулентного изолята Е70 синтезируется 57 кислых и 43 основных вирусспецифических белков [2].

Сложность антигенной структуры вириона, обусловленная синтезом более 100 полипептидов и генетическая гетерогенность ДНК возбудителя не позволяют до конца определить функциональную роль целого ряда вирусных белков. Структурный белок 54 – трансмембранный гликопротеин кодиру ется геном E183L, выявляется на позднем этапе репродукции вируса. тот белок обеспечивает при 183L, L,, крепление вируса АЧС к клетке хозяина. Молекулярные массы его полипептидной части у различных вирусных изолятов варьируют между 24 и 28 кДа [3].

Целью наших исследований являлось проведение анализа нуклеотидной структуры гена, ко дирующего р54 вируса АЧС различных штаммов и изолятов и группирование различных штаммов на основе анализа последовательностей гена E183L.

Материалы и методы исследований.

Подбор праймеров, состав компонентов для проведения ПЦР и режим постановки реакции опубликованы ранее [4].

Суммарную ДНК из вируссодержащего материала выделяли фенольно-детергентным мето дом.

В качестве матрицы для получения и накопления ПЦР-продукта использовали ДНК вирулент ных штаммов и изолятов вируса АЧС Mgd и A с концентрацией 100 мкг/мл по 1 мкл на реак Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы цию. Также в работе использовали ДНК авирулентных штаммов и изолятов вируса АЧС - KK-262, NVL-1, полученных ранее в ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии в результате адаптации вируса дикого типа к перевиваемым культурам клеток CV-1, V и PPK-66b.

Для очистки ПЦР-продукта от агарозного геля для проведения сиквенса использовали Набор реагентов для извлечения ДНК из агарозных гелей (F).

Сравнительный анализ опубликованных в GB первичных последовательностей геномов изолятов возбудителя АЧС Lb-57, Kg-67 (I серотип), Mbqu-79, g-62 (III серотип), F-64/32, E-70, Bl-78, Ml, Agl-70, B71V (IV серотип), Ugd-64 (VII серотип), G -64/32, -70, -78,, -70, 71V IV V -64 VII g 2007/1 (VIII серотип) и полученных нами результатов секвенирования ПЦР-продуктов гена E183L (р54) штаммов KK-262, NVL-1 (II серотип), Mgd (VII серотип) и A (VIII серотип) проводили с помощью программы BEd 6.0.

Результаты исследований и их обсуждение.

На первом этапе работы было проведено выделение ДНК вируса АЧС из инфицированной культуры клеток, затем проводили постановку ПЦР с детекцией наличия продуктов амплификации ме тодом электрофоретического разделения в 1,5% геле агарозы.

Рисунок. Группирование нуклеотидных последовательностей E183L (р54) различных изолятов и штаммов на основе компьютерного анализа Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Далее продукты амплификации гена, кодирущего р54 вируса АЧС штаммов и изолятов KK-262, NVL-1, Mgd и A, были элюированы из агарозного геля путем отжимания через стекловолок -1,, нистый фильтр. В последующем проводили очистку ампликонов от буфера для нанесения, примеси солей и бромистого этидия с использованием ДНК-сорбента (F). Сиквенс проводился в ГНУ ВНИВВиМ Россельхозакадемии Малоголовкиным А.С.

Выравнивание нуклеотидной последовательности гена E183L (54) различных штаммов и изо 183L 54) L 54) лятов вируса АЧС представлено ниже (Рисунок).

Результаты выравнивания показали высокую гомологию структуры гена E183L для изолятов и штаммов, имеющих происхождение из одной географической зоны (Таблица).

Очевидно, что циркуляция возбудителя АЧС на чувствительных животных поддерживает ста бильность его генома, что согласуется с данными F. Rdgu.l. [3], которые установили, что мак..l.

l.

.

симальные генетические изменения происходят в структуре гена E183L при длительном пассировании в перевиваемых культурах клеток, таких как CV-1, V и других линиях, не создающих пермиссивные условия для его репликации. В наших исследованиях таким штаммом является NVL-1, адаптированный к репродукции в культуре клеток CV-1 и прошедший на ней более 50 пассажей, отнесенный в отдельную III геногруппу.

Таблица. Распределение штаммов и изолятов вируса АЧС по геногруппам Геногруппа Штаммы и изоляты вируса АЧС Географическая зона происхождения I Lisbon-57, Katanga-67 Европа II KK-262 Западная Африка III NVL-1 Западная Африка IV Mozambique-79, Tengani-62 Юго-Восточная Африка Европа France-64/32, Espana-70, Malta, Ba71V V Brasilia- Южная Америка Angola- Юго-Западная Африка VI Uganda-64, Magadi Восточная Африка VII Georgia 2007/1, Armenia Кавказский регион Заключение.

Все исследуемые последовательности штаммов и изолятов вируса АЧС, взятые из GB, и те, что секвенированы в институте, были разделены по нуклеотидным последовательностям на геногрупп: изолят A, выделенный на территории Армении, по данным проведенного анализа от, носится к одной геногруппе со штаммом Gg 2007/1 (Грузия).

Представленные данные нуклеотидных последовательностей гена E183L (р54) штаммов KK 262, NVL-1, Mgd и A публикуются впервые.

Группирование различных изолятов и штаммов вируса АЧС по нуклеотидным последователь ностям E183L (р54) позволяет выявить общие закономерности соответствия структуры и функций бел 183LL ков вируса АЧС, что крайне важно для разработки средств профилактики и защиты от такой особо опасной болезни свиней, как АЧС[5].

Библиографический список.

1. Mgy R.E. O w v ug B E A (Ky Cly) // J.

C. Pl. – 1921. - № 34. – Р. 159-191.

2. Rdgu, J.M. A w v vu-dud lyd lvl g d V ll: w-dl gl ly / J.M. Rdgu, M.L. Sl, J.F. S // P. 2001. – Vl. 1, № 11. - P. 1447-1456.

3. C d lul b gy w v vu vl Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы 54 / F. Rdgu, C. Al, A. E [ l.] // J. Vl. – 1994. - № 68 (11). – Р. 7244-7252.

4. Казакова, А.С., Власова, Н.Н. Клонирование гена Е183L (р54) вируса африканской чумы свиней/ А.С. Казакова, Н.Н. Власова/ Аграрная наука и образование на современном этапе развития:

опыт, проблемы и пути их решения. Т.IV. Актуальные вопросы ветеринарной медицины, биологии и эко IV.

.

логии: материалы II-ой Междунар. науч.-практ. конф./УГСХА. - Ульяновск, 2010. – С.81-85.

5. Балышев В.М., Калантаенко Ю.Ф., Жуков А.Н., Цыбанов С.Ж., Калабеков И.М. Иммуно биологические и молекулярно-генетические свойства изолятов вируса африканской чумы свиней, вы деленных в Российской федерации (09-04-13759) Материалы Всероссийской научной конференции «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в агропромышленном комплексе России 14-15 апреля 2010 года». – РФФИ: Москва, 2010. – С.94-98.

УДК 619:578.832.1:616.98:636. ИНДИКАЦИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСА ГРИППА А ПТИЦ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОННОЙ И ИММУНОЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ А.С. Казарян, м.н.с., ГНУ ВНИИВВМиВ Россельхозакадемии, г. Покров Владимирской области;

тел.: 8 (49243) 6-2125;

kazaryanas@mail.ru В.Н. Пономарёв, д.в.н., ГНУ ВНИИВВМиВ Россельхозакадемии, г. Покров Владимирской области 8 (49243) 6-2125.

М.Ю. Щелканов, д.б.н., доцент, ФГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития Рос сии;

тел.: 8 (499) 190-3052;

adorob@mail.ru.

А.Т. Кушнир, д.в.н., профессор, ГНУ ВНИИВВМиВ Россельхозакадемии, г. Покров Владимирской области;

тел.: 8 (49243) 6-2125.

Д.В. Куренков, к.б.н., ГНУ ВНИИВВМиВ Россельхозакадемии, г. Покров Владимирской области 8 (49243) 6-2125;

dmit.kurenkov@gmail.com.

Е.А. Гущина, к.б.н., ФГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России;

тел.: 8 (499) 190-3044;

adorob@mail.ru.

Д.К. Львов, д.м.н., профессор, академик РАМН, ФГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрав соцразвития России;

тел.: 8 (499) 190-3074;

dk_lvov@mail.ru.

Ключевые слова: вирус гриппа А, ортомиксовирусы, птицы, электронная микроскопия, им муноэлектронная микроскопия.

В работе проведены результаты успешной верификации метода электронной и иммуноэ лектронной микроскопии для индикации и идентификации вируса гриппа А птиц на модели высоко вирулентного штамма А/rb/T/T06-1/2006 (H5N1).

Введение.

Грипп (классическая чума) птиц – остро протекающая, высококонтагиозная болезнь домаш них, синантропных и диких птиц. Заболевание протекает в виде эпизоотий с поражением желудочно кишечного тракта, органов респираторного тракта, сосудистой и центральной нервной систем. Возбуди телями болезни являются высоковирулентные штаммы вируса гриппа А – РНК-содержащего вируса из семейства Orhxrd, рода fluz A ru [7, 14].

Дикие птицы водно-околоводного экологического комплекса (в первую очередь пластинчато клювые Anatidae и чайковые rd) являются природным резервуаром вируса гриппа А [12, 13]. Благо даря высокой экологической пластичности, этот вирус способен проникать в популяции других хозяев Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы (в том числе – млекопитающих, включая человека), адаптироваться и длительно циркулировать в их популяциях [7, 13, 16, 17].

Вирион вируса гриппа А представляет собой сложную полиморфную структуру: встречаются как шарообразные (80–120 нм), так и нитчатые формы [8, 10]. Xимический состав вириона: липиды (око ло 23.5–25.0 %), белки (63.2 %), углеводы (7.0 %), РНК (1.8 %) [1]. Белки оболочки: гемагглютинин (НА), нейраминидаза (NA) и М2. НА отвечает за связывание вириона с клеточными рецепторами (полисаха NA)) ридами, терминированными остатком N-ацетилнейраминовой кислоты) и проникновение рибонуклео протеида в клетку-мишень. Против НА направлены вирусонейтрализующие антитела. Вторым по значи мости в возникновении иммунитета против гриппа является NА, которая осуществляет ферментативное отщепление терминального остатка N-ацетилнейраминовой кислоты. НА вируса гриппа А имеет 16, а NA – 9 различных подтипов, и все они были изолированы от различных видов птиц. М2 формирует ионный канал, закачивающий протоны внутрь вириона, что приводит к разрушению внешней липидной оболочки и высвобождению рибонуклеопротеида. Последний формирует ядро вириона и состоит из 8 генетических сегментов вирусного генома – PB2, PB1, PA, HA, NP, NA, M, NS – в комплексе с белками NP, NS2 (NEP) и протеазами PB2, PB1 и PA [7, 8, 10]. Диаметр свёрнутого в кольцо нуклеопротеида со NEP)) ставляет 8–10 нм [8].

В настоящее время, для индикации и идентификации вируса гриппа птиц наряду с известными серологическими реакциями (РГА, РТГА, ИФА, РДП) [5, 6, 14] широко используется ОТ-ПЦР в различных модификациях [3, 4] и метод биологических микрочипов [2], однако одним из наиболее надежных мето дов индикации и идентификации вируса гриппа А птиц по-прежнему является электронная и иммуноэ лектронная микроскопия [8–11].

Целью нашей работы была верификация методики электронно-микроскопической индикации и идентификации высоковирулентного вируса гриппа А (H5N1), получившего широкое распростране H5N1), 5N1), N1), 1), ние в экосистемах Северной Евразии, начиная с весны 2005 г., когда вирус был занесён мигрирующи ми дикими птицами по Джунгарскому пролётному пути из охваченной эпизоотией Юго-Восточной Азии [13, 15].

Материалы и методы.

Материалы: штамм высоковирулентного вируса гриппа А/gb/yv/yv06-1/2006 (H5N1);

за H5N1);

5N1);

N1);

1);

буференный физиологический раствор (ЗФР) с рН 7/2–7/4;

1 %-ая суспензия эритроцитов крови петуха;

специфическая сыворотка крови козы против вируса гриппа А подтипа Н5 с титром 1 : 512 в РТГА.

Электронная микроскопия. Концентрированный и очищенный вирус получали на конечном этапе очистки центрифугированием в градиенте (20–60 %) плотности сахарозы. Приготовленный пре парат наносили на медную сеточку с нитроцеллюлозной подложкой, напылённой углеродом, контрасти ровали 3–4 % фосфорно-вольфрамовой кислотой (ФВК) при H 7.0 и просматривали на просвечиваю щем электронном микроскопе J J-100S при инструментальном увеличении в 15 000–40 000 раз.

Иммуноэлектронная микроскопия осуществлялась по методу, описанному М.Б. Королё вым (1980). На сеточку наносили по 5–10 мкл очищенного вируса, инкубировали 30–40 мин до почти полного испарения жидкости, затем наносили 10 мкл специфической сыворотки козы против вируса гриппа А подтипа H5 (перед нанесением сыворотку с титром 1 : 512 дополнительно разбавляли ЗФР 1 : 100). Сеточку помещали во влажную камеру и инкубировали 30 мин при 37 С (избыток влаги удаля ли фильтровальной бумагой) и наносили 5 мкл белка А, меченного коллоидным золотом, в разведении от 1 : 5 до 1 : 10 на ЗФР. Через 15–30 мин препарат промывали дистиллированной водой, подсушивали и контрастировали 3–4 % ФВК. Приготовленный препарат просматривали под электронном микроско пом ( 15 000–40 000).

Результаты и обсуждение полученных результатов.

лектронная микроскопия показала, что вирионы использованного штамма высоковирулент Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ного вируса гриппа А/gb/yv/yv06-1/2006 (H5N1) представляют собой полиморфные частицы раз H5N1) 5N1) N1) 1) мером 80–120 нм (рис. 1). По размеру и форме вирионы соответствуют таковым вируса гриппа А.

Рисунок 1. Вирионы штамма А/gb/Tv/Tv06-1/2006 (H5N1) в электронном микроскопе при:

а - негативном контрастировании б - инструментальном увеличении (150 000).

Иммуноэлектронная микроскопия выявила на поверхности вирусных частиц или вблизи их иммунные комплексы в виде чёрных точек. Иммунный комплекс включал в себя значительное количе ство антител, выявляемых белком А, связанных с коллоидным золотом, что значительно облегчало их визуализацию (рис. 2).

Рисунок 2. Результат взаимодействия специфической антисыворотки против НА/Н5: а - о штаммом А/gb/Tv/Tv06-1/2006 (H5N1) б - с гетерологичным вирусом гриппа А подтипа Н1.

В качестве контроля использовался вирус гриппа А птиц подтипа Н1. На рис. 1, б видно, что иммунные комплексы с вирусом гриппа подтипа Н1 не образовывались.

Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать использо вание метода электронной и иммуноэлектронной микроскопии для индикации и идентификации вируса гриппа А птиц в научно-исследовательской работе.

Литература 1. Гараев М.М. Структурные компоненты и химический состав вирионов // В кн.: Медицинская вирусология. Руководство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. – С. 47–52.

2. Гребенникова Т.В. Биочипы // В кн.: Медицинская вирусология. Руководство / Ред.: акаде мик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. –С. 339–343.

3. Гребенникова Т.В., Бобкова М.Р., Альховский С.В. Полимеразная цепная реакция // В кн.:

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Медицинская вирусология. Руководство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. –С. 330– 335.

4. Гребенникова Т.В., Бобкова М.Р., Альховский С.В. Полимеразная цепная реакция в ре альном времени // В кн.: Медицинская вирусология. Руководство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов.

– М.: МИА, 2008. –С. 335–339.

5. Дерябин П.Г., Бутенко А.М. Реакция биологической нейтрализации (РН) // В кн.: Медицин ская вирусология. Руководство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. – С. 301–310.

6. Дерябин П.Г., Бутенко А.М., Бурцева Е.И. Реакция гемагглютинации (РГА) и реакция тормо жения гемагглютинации (РТГА) // В кн.: Медицинская вирусология. Руководство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. – С. 312–317.

7. Каверин Н.В., Львов Д.К. Ортомиксовирусы (Oyxvd) // В кн.: Медицинская виру сология. Руководство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. – С. 176–183.

8. Клименко С.М. Структура вириона // В кн.: Медицинская вирусология. Руковод ство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. – С. 52–61.

9. Клименко С.М., Григорьев В.Б., Маныкин А.А. лектронная микроскопия (М) // В кн.: Ме дицинская вирусология. Руководство / Ред.: академик РАМН Д.К. Львов. – М.: МИА, 2008. – С. 303–307.

10. Клименко С.М., Селиванов Я.М., Меньших Л.К., Меньших Л.К., Глаголев А.А. Структура вириона вируса гриппа // Вопросы вирусологии. – 1965. – № 3. –С. 315–319.

11. Королёв М.Б. лектронно-микроскопические методы выявления вирусов // В кн.: лектрон ная микроскопия вирусов и вирусных инфекций. Итоги науки и техники. – Сер. «Вирусология». – М.:

ВИНИТИ, 1980. – 114–157.

12. Львов Д.К. Возможное значение природных биоценозов в изменчивости вируса грип па А // Вопросы вирусологии. – 1974. – № 6. – С. 740–744.

13. Львов Д.К. Популяционные взаимодействия в биологической системе: вирус гриппа A – дикие и домашние животные – человек;

причины и последствия проникновения на территорию России высокопатогенного вируса гриппа A/H5N1 // ЖМИ. – 2006. – № 3. – С. 96–100.

14. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных.

– М.: ВНИИТИБП, 1998. – 928 с.

15. Щелканов М.Ю. волюция высоковирулентного вируса гриппа А (H5N1) в экосистемах Се H5N1) 5N1) N1) 1) верной Евразии // Автореф. дис. … д.б.н. – М.: НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского, 2010. – 53 с.

16. Wb R.G. S uvll l d bd // Iflu: vu, v d gy.

– Rg, 1976. – P. 33–37.

17. Wb R.G., B W.J., G O.., Cb.M., Kw Y. Evlu flu A vu // Mbl. Rv. – 1992. – V. 56. – N 1. – P. 152–179.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК 619:636.09: ЭКСПРЕСС ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ РЕПРОДУКТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ СВИНЕЙ: ПАРВОВИРУСА И ВИРУСА РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА А.Д. Козлова, научный сотрудник ФГУ “Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарствен ных средств для животных и кормов” тел. 8-903-254-96-90, kzv-ksn@nx.u Т.С. Астахова, кандидат биологических наук, научный сотрудник ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии»

(495)974-96-46, Tin.Asv@.u И.Л. Обухов, доктор биологических наук, профессор, заведующий отделом биотехноло гии ФГУ “Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарствен ных средств для животных и кормов”, (499) 253-14-73, bukv@vgnki.u Ключевые слова: цирковирус свиней 2 типа, парвовирус свиней, вирус РРСС, ЦР в «реаль ном времени Распространенными вирусными этиологическими агентами репродуктивных нарушений свиней являются парвовирус (ВС) и вирус репродуктивно-респираторного синдрома (РРСС), кото рые часто осложняются цирковирусом 2 типа. Для выявления данных вирусов в разном биологиче ском материале разработаны тест-системы для выявления ДНК ВС и ЦВС, а также генотипиро вания вируса РРСС методом ЦР в режиме «реального времени.

Введение. Репродуктивные патологии свиноматок наносят значительный экономический ущерб промышленному свиноводству. Важную роль среди вирусных этиологических агентов репродук тивных нарушений играют парвовирус свиней и вирус РРСС [1].

Парвовирус свиней – представитель рода Parvovirus, семейства Prrd, устойчивый к внешним неблагоприятным факторам. Парвовирусная инфекция свиней (ПВИС) – заболевание, прояв ляющееся репродуктивными нарушениями у супоросных свиноматок. У других групп животных в боль шинстве случаев протекает бессимптомно [2,3], но может быть причиной диарей [4,5], кожных пораже ний [6] и артритов у свиней [4,2].

Возбудителем РРСС является вирус рода Arterivirus, семейства Arteriviridae. Различают два генотипа данного вируса: европейский и американский. Гомология между ними на нуклеотидном уровне составляет 55-67% [7]. До 2006 г. в России наблюдалась циркуляция вируса только европейского гено типа [8], но с 2007г. регистрируются вспышки заболевания, вызванные вирусом РРСС американского генотипа [9, 10].

Для специфической профилактики РРСС применяются живые и инактивированные вакцины, содержащие только один из генотипов вируса. Иммунитет к РРСС генотипоспецифичен, поэтому важно не только обнаружение вируса в хозяйстве, но и его генотипирование.

Парвовирус и вирус РРСС проявляются схожими репродуктивными нарушениями: абортами, рождением мертвых, мумифицированных и нежизнеспособных поросят, погибающих в первые месяцы жизни. Кроме того, возможно коинфицирование животного вирусами РРСС и ПВС [11]. Также данные заболевания часто осложняются вторичными бактериальными и вирусными инфекциями. Наиболее распространенным патогеном, регистрируемым при смешанных инфекциях, является цирковирус сви ней 2 типа (ЦВС-2). В результате иммуносупрессорного действия ЦВС-2 [12], осложненные им РРСС или ПВИС протекают значительно тяжелее и не поддаются лечению [13].

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ЦВИС, ПВИС и РРСС могут протекать в форме бессимптомного носительства. При этом жи вотные-вирусоносители выделяют вирус в окружающую среду и являются источниками заражения здо ровых животных. Все вышесказанное не позволяет диагностировать эти заболевания на основании только эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных без использования совре менных методов лабораторной диагностики.

Классическим методом диагностики вирусных патогенов является вирусовыделение на куль туре клеток, но этот метод длителен, дорогостоящ и трудоемок. В РФ широко применяются ИФА и РТГА для обнаружения специфических антител. Но эти методы не дифференцируют поствакцинальные антитела от постинфекционных, и не позволяют выявлять вирусоносителей при обследовании вакцини рованного поголовья. Обнаружение вирусных антигенов методами ИФА и РГА не может использоваться при исследовании спермы. В настоящее время большую популярность приобретает полимеразная цеп ная реакция (ПЦР) – метод, обладающий высокой специфичностью, чувствительностью и позволяю щий выявлять вирусный геном даже при низкой вирусной нагрузке в любом биологическом материале.

В связи с этим целью нашей работы являлась разработка ПЦР-тест-систем с гибридизацион но-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени» для выявле ния парвовируса, цирковируса свиней 2 типа и генотипирования возбудителя РРСС и их применение в диагностике репродуктивных патологий свиней.

Материалы и методы исследований.

Штаммы и изоляты. В работе использовали штаммы ЦВС (НПО Нарвак), ПВС (шт. ВЛ-94), вируса РРСС (шт. БД американского генотипа, шт. VP046 европейского генотипа), вируса болезни Ауе ски (шт. ГНКИ, Арский, МБА), классической чумы свиней (шт. Синлак, ГМ-94), трансмиссивного гастро энтерита (НПО Нарвак);

кДНК из положительных образцов, содержащих вирус эпидемической диареи свиней;

ДНК генома свиньи.

Биологический материал. Проводилось тестирование клинического (фекалии, сыворотка крови, сперма) и патологического (селезенка, лимфатические узлы, легкие, печень, кишечник, аборт плоды) материала от свиней. Биологический материал получен из нескольких хозяйств Белгородской и Ростовской областей в период с октября 2008 по ноябрь 2010.

Выделение суммарной РНК/ДНК из материала проводили набором «Рибо-преп» (Al, ФГУН «ЦНИИ»), согласно инструкции.

Амплификацию проводили на приборах с флуоресцентным методом детекции в режиме «ре ального времени» RG 6000 (Cb R, Австралия) и Cyl (BRd, США) с использо Cb, BRd,, ванием реактивов Al (ФГУН «ЦНИИ»).

Результаты исследований и их обсуждение. В результате анализа литературных данных и нуклеотидных последовательностей, представленных в базе данных GB, в качестве генов-мише, ней для подбора праймеров и зондов выбраны: для ЦВС-2 – ген ORF1, для ПВС – ген NS1, для диффе 1, 1, ренцирования европейского и американского генотипа вируса РРСС – ген ORF7.

Специфичность всех пар праймеров проверялась на штаммах и кДНК, указанных в разделе «Материалы и Методы». В результате экспериментов доказана специфичность работы праймеров.

Определение аналитической чувствительности тест-систем проводилось на рекомбинантных положительных контролях (ПКО). Контроли для тест-системы, дифференцирующей РНК вируса РРСС американского и европейского генотипов, получены путем клонирования участка гена-мишени в фаг, а для тест-систем, обнаруживающих ДНК цирковируса и парвовируса – в фаг. ксперимент про веден на панелях образцов сыворотки крови (только для РРСС), суспензий фекалий, патматериала (смесь разных внутренних органов) и спермы, содержащих 5х104, 5х103, 103 и 5х102 коп/мл рекомбинат ного контроля.

Чувствительность тест-системы, выявляющей РНК вируса РРСС, составила при исследова нии сыворотки крови – 103 коп/мл, суспензий фекалий и патматериала – 5х103 коп/мл, спермы – 5х коп/мл для каждого генотипа. Чувствительность тест-систем, обнаруживающих ДНК ЦВС и ПВС, при тестировании суспензии фекалий и патматериала составила 5х102 коп/мл, а при исследовании спермы Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы – 5х103 коп/мл.

Для обеспечения контроля качества и предотвращения получения ложноотрицательных ре зультатов во все тест-системы введен внутренний контрольный образец (ВКО), который вносится в каждую пробу на этапе экстракции нуклеиновых кислот, что позволяет контролировать качество выпол нения всех этапов ПЦР-исследования. Амплификация и детекция данного препарата происходит с по мощью отдельной пары праймеров и зонда одновременно с амплификацией специфической мишени.

Следующим этапом работы было исследование биологического материала, полученного из хозяйств Белгородской и Ростовской областей. Всего исследовано 312 образцов.

Результаты исследований на ПВС и вирус РРСС представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1. Результаты обнаружения ДНК ПВС методом ПЦР в «реальном времени»

Количество образцов, Количество образцов ПВС, Всего образцов содержащих ДНК ПВС коинфицированных ЦВС- аборт. плод 59 2 (3,4%) сперма 20 0 патматериал 75 16 (21,3%) легкое 27 5 (18,5%) кишечник 8 2 (25%) сыворотка 18 0 фекалии 105 15 (13,4%) Итого 312 40 (12,8%) 39 (97,5%) Таблица 2. Результаты выявления РНК вируса РРСС методом ПЦР в «реальном време ни»

Количество образцов, содержащих Количество образцов содержащих РНК Всего образцов РНК РРСС РРСС и ДНК ЦВС патматериал 75 7 фекалии, сыворотка, 237 0 аборт. плоды, сперма Итого 7 (2,2%) Репродуктивные нарушения, вызываемые данными вирусами, проявляются абортами на раз ных сроках супоросности. С помощью разработанных тест-систем исследовано 59 абортированных плодов. ПВС выявлен в 2 исследованных образцах этого материала, что составляет 3,4%.

У хряков ПВC и вирус РРСС выделяются со спермой [14] и, при искусственном осеменении, могут заражать здоровых животных. Поэтому важной задачей является обнаружение вирусов в сперме.

В 20 исследованных нами образцах вирус РРСС и парвовирус обнаружены не были.

Известно, что при коинфицировании поросят ПВС и ЦВС-2 наблюдается синергетическое вли яние данных возбудителей, нередко приводящее к летальному исходу [13,15]. В нашем случае при тестировании патматериала от поросят в возрасте от 3 до 180 дней сочетанная инфекция ПВС + ЦВС- наблюдалась в 100% случаях. В 2 образцах патматериала были одновременно обнаружены ДНК ЦВС 2, ПВС и РНК РРСС европейского генотипа.

Для ПВС и вируса РРСС характерна персистирующая инфекция, при которой животные не проявляют клинических признаков, но выделяют вирус в окружающую среду и заражают здоровых жи вотных. Для выявления бессимптомно инфицированных животных проводится исследование сыворо ток крови и/или фекалий. В образцах сыворотки крови, протестированной в нашей лаборатории ПВС и вирус РРСС не обнаружены. ПВС выявлен в 15 пробах из 3 хозяйств, что составляет 13,4% от общего количества исследованных образцов фекалий.

Тест-система генотипирующая РНК вируса РРСС использовалась во время вспышки данного заболевания в Белгородской области в июле 2010 года. Нами исследовано 25 образцов: 3 пробы аборт плодов, 1 плаценты, 4 патматериала и 1 легкого от павших животных и 16 сывороток крови от поросят, Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы подозрительных на РРСС по клинической картине. Отрицательными оказались 2 пробы абортплодов, 1 патматериала и легкое. Во 21 пробе, что составляет 84% исследованных образов, обнаружен вирус РРСС европейского генотипа. Результаты ПЦР-исследования подтверждены секвенированием. Коин фицирования ЦВС-2 и ПВС в этих образцах не обнаружено.

Заключение.

Проведен эпизоотический мониторинг 17 хозяйств Белгородской и Ростовской областей с по мощью разработанных тест-систем для выявления ДНК возбудителей ЦВС-2 и ПВС и генотипирования вируса РРСС методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией результатов амплификации в режиме «реальном времени». Данный метод позволяет использовать для исследования разные виды биологического материала.

Библиографический список:

1. Ковалишин В.Ф. Диагностика инфекционных болезней импортируемых в Россию свиней// Материалы Международной конференции «инновационные пути развития свиноводства в России», Мо сква, МПА, 2009, с. 77- 2. C H.-Y., L X.-K., Cu B.-A., l. A qM-bd l- ly d vvu//Jul Vlgl Md, Vl.№156, 2009, р. 84–88.

3. Nl J., Rl L., S K.J. Exl u g u w vvu (PPV)// V.Mbl., Vl.28, 1991,. 1-11.

4. Bg J., Hb B., j P. G Og K S P Pv vu: Idfi All D d C w NADL-2 d Fld Il// Jul Vlgy, A. 1996,. 2508–2515.

5. D S., Ely M.A.S.Y., Mu G.P. l. Pvvu-l Pl Ad w D Uwd Pgl//C. J. C. Md., Vl.49, 1985,. 343-345.

6. W H.K., Nu S.M., P L.W. Pvvu g w xudv d//J.

V. Dg. Iv. Vl.2(3), 1990,.244-246.

7. Mg X.J. Hgy duv d y yd vu: l u v fiy d uu v dvl//Vy Mblgy, Vl.74, 2000,.309-329.9.

8. Sdj Т., Olw M.B., Sbv A.V., l. Dfi uby Eu gy duv d y yd vu: uld d gg l dbu Eu// A. Vl. Vl.153, 2008,.1479–1488.

9. ://wb../w/ubl.?g=gl_&=1& d =6410.

10. Русалеев В.С. Проблемы и перспективы вакцинопрофилактики актуальных бактериальных инфекций свиней на свинокомплексах Российской Федерации// Российский Ветеринарный Конгресс, секция Проблемы инфекционной патологи свиней, 2010 (://www.v./vd/fil/fil/3.l).

11. Ануфриев П.А., Першина С.И. Клинико-эпизоотологический мониторинг при применении вакцин против РРСС + ПВИС и ТГС// Ветеринарная патология, том № 3, 2003,.46-48.

12. Dw, L., J. Sgl, M. Dg l. Cg CD4+, CD8+, CD4+ CD8+, d Iu glbul M-Pv Pl Bld Mul Cll Pwg Muly Wg Syd Ad Pg d Ag-Md Ud Wd d Hly Pg Cl w L d P Cvu// Cl. Dg. Lb. Iul., Vl.9(2), 2002,. 236–242.

13. S R., Su G. P vvu- d vu 2-d duv lu d l ly bd Id g//. A. Hl. Pd. Vl.42, 2010,.515–522.

14. Gu B., P N. Vu b : d d ll wll dlgl qu gdg d by fil //glgy, Vl.63, 2005,.556– 572.

15. Kw S., Ell J.A., M B., l. Vl wg yd w: xl du wg uly wg yd gb w by w vu 2 d vvu// V. Pl. Vl.37(3), 2000,. 254-263.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК: 579.61:614. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ВОДЫ В ХОЗЯЙСТВАХ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ А.Н. Колотило, аспирант тел. 8(3812) 25-05-19, e-mail: kolotilo.an@list.ru О. Бирич, студентка ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет»

Ключевые слова: микроорганизмы, диагностическая система, биохимические свойства.

Статья посвящена изучению биологических свойств культур микроорганизмов выделен ных из воды, используемой для поения сельскохозяйственных животных.

Введение. В структуре патологии молодняка животных одно из ведущих мест занимают же лудочно - кишечные болезни, сопровождающиеся высокой летальностью и наносящие значительный экономический ущерб животноводческим хозяйствам. [1,2]Первостепенное значение при этом приобре тают патогенные и условно-патогенные бактерии семейства Eb. Источником инфекции может служить контаминированная посторонней микрофлорой питьевая вода. Способность микроор ганизмов адаптироваться к различным абиотическим и биогенным факторам, повсеместная распро страненность и постоянная циркуляция в объектах окружающей среды, в частности в водоисточниках, создает потенциальную угрозу развития, как моно, так и ассоциативных инфекций. [3] В связи с этим целью нашей работы явилось изучение биологических свойств микроорганиз мов, выделенных из воды.

Материалы и методы. Исследование проводили на базе кафедры ветеринарной микробиоло гии, вирусологии и иммунологии ИВМ ОмГАУ. В опыте использовали культуры микроорганизмов, выде ленные из проб воды, используемой для поения сельскохозяйственных животных в хозяйствах Омской области. Культуральные свойства выделенных микроорганизмов изучали путем посева на различные диагностические среды (Мак-Конки, ндо, ВСА, Плоскирева). Биохимические свойства определяли при помощи диагностической системы СИБ №2 для межродовой и видовой дифференциации энтеробакте рий ФГУП НПО «Микроген», а также различных сред (Олькеницкого, Клиглера, Симмонса, Гисса).

Результаты исследований. При изучении культуральных свойств выделенных микроорганиз мов на агаре Мак-Конки через 18-24ч культуры E. сl формировали округлые, выпуклые, матовые ро. l зового цвета колонии, диаметром 1,0-7,0мм, вокруг которых выпадал преципитат. Рост культур микро организмов рода Cb определялся в виде розовых, округлых колоний диаметром 2,0-6,0мм, со слегка вогнутым центром. Бактериальные клетки E. g образовывали колонии розового или красного цвета, выпуклые, блестящие, диаметром 3,0-6,0мм. K. – крупные розового цвета коло.

нии, диаметром 4,5 - 10мм, слизистые с выпуклым светло-розовым центром. Через 48ч культивирова ния наблюдался рост S. yuu в виде бесцветных, диаметром 4,0-5,0мм колоний. На среде ндо лактозоположительные культуры микроорганизмов образовывали малинового или темно-вишневого цвета колонии, с металлическим блеском или без него (E. сl, C. ud, C. dvu и др.). P. vulg, P. bl характеризовались ползучим ростом, распространяясь со временем на всю чашку. Лакто.

зоотрицательные культуры (P. ug, S. yuu, Y. l) на среде ндо образовывали прозрачные колонии бледно – розового цвета.

На висмут – сульфит – агаре рост сальмонелл, образующих сероводород характеризовал ся формированием черных с металлическим блеском колоний с прокрашиванием среды под ней, а культуры не продуцирующие сероводород, образовывали бледно-зеленые или зеленовато-коричневые колонии.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Для культивирования микроорганизмов рода Y использовали питательную среду для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза от больных и из объектов внеш ней среды. После инкубации при 37°C в течении 24ч наблюдали рост круглых блестящих колоний сине-зеленого цвета диаметром 1,5 - 2мм (Y. l). Колонии энтеробактерий (сальмонеллы, эше Y.

. ).

рихии) изменяли окраску среды, образовывали выпуклые, сочные колонии, ярко-желтого цвета, благо даря чему визуально дифференцировались от иерсиний.

На ЦПX-агаре (селективный питательный агар с цетилперидиниум-хлоридом для выделения синегнойной палочки) через18-24 часа (+37°C) культуры P. ug формировали блестящие, пло C) ).

ские, округлые флюоресцирующего желто-зелёного цвета колонии.

Выделение E. l, E. u осуществляли на селективных средах (энтерококк-агар, Сла.,.

нец – Бартли) в течение 24-48 часов. E. l образовывали круглые, выпуклые, блестящие темно бордового цвета колонии с ярко выраженным темным центром, при этом E. u более мелкие, бледно-розового цвета.

При изучении биохимических свойств было установлено, что культуры E. сl, имеющие высо. l,, кую ферментативную активность, сбраживающие глюкозу и лактозу с образованием кислоты и газа при 37°С и 44°С, в 80% случаев образовывали зону гемолиза на кровяном агаре. При росте на кровяном агаре гемолиз чаще всего отсутствовал у культур, которые отличались слабой активностью (лактозоо трицательные, ферментирующие лактозу с образованием кислоты, без газа только при 37°С).

Культуры P. ug давали положительный тест на образование каталазы, цитохромокси.

дазы, восстанавливали нитриты до нитратов, ферментировали глюкозу с образованием кислоты, не образовывали индол, реакции с метиловым красным и ацетилметилкарбинолом (Фогеса - Проскауэ ра)была отрицательной. Все культуры образовывали триметиламин, напоминающий запах жасмина.

Часть культур (40%) образовывали зону гемолиза при росте на кровяном агаре.

Выделенные культуры микроорганизмов P. vulg, P. bl характеризовались наличием фенилаланиндезаминазы, не ферментировали лактозу, арабинозу, дульцит. Дифференциацию P. vul-.

g и P. bl осуществляли с учетом способности P. vulg ферментировать мальтозу и продуци..

ровать индол. Установлено, что в воде с высоким микробным числом до 105 КОЕ/мл и наличием в воде общих и термотолерантных колиформных бактерий, чаще выделяются (60%) P. bl.

При изучении культур E. l, E. u была установлена ферментация лактозы, ман.,.

нита, глицерина, отрицательный тест на сорбит, арабинозу и сахарозу. Культура микроорганизмов Е.

l (75%) при росте на агаре, содержащем кровь лошади, образовывала участки -гемолиза, но на агаре с кровью барана гемолитические свойства не проявились.

При определении чувствительности к химиотерапевтическим препаратам выделенных культур наибольшая выявлена к группе фторхинолонов и аминогликозидов (энрофлону, норфлоксацину, гента мицину и амикацину) при этом зона задержки роста была свыше 30мм. У группы макролидов и цефало споринов (тилозина и цефтриаксона) зона задержки роста составила 17-25мм. Исключение составили энтерококки, которые оказались чувствительны к амоксициллину и левомицетину и резистентны к ген тамицину и тилозину. Все выделенные культуры были не чувствительны к ампициллину.

Заключение.

В результате проведенных исследований установлено наличие в воде условно - патогенных и патогенных микроорганизмов, которые по своим культуральным и биохимическим свойствам относятся к семействам Eb и Pudd. Культуры E. l (80%) с высокой ферментатив.

ной активностью, вызывали гемолиз на кровяном агаре, также гемолитические свойства проявляли вы деленные культуры микроорганизмов P. ug (40%), E. l(75%). Установлено, что в воде с вы. (75%).

соким микробным числом и наличием в воде общих и термотолерантных колиформных бактерий, чаще встречается (60%) P. bl. Наличие в воде условно-патогенной микрофлоры способной длительное время сохранять жизнеспособность, при определенных условиях (стресс, неполноценное кормление, неудовлетворительные условия содержания, иммунодефицитные состояния) является фактором, спо собствующим развитию диарейного симптомокомплекса у молодняка сельскохозяйственных.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Библиографический список 1. Горковенко Н.Е. Микробиологический мониторинг источников питьевой воды / Ветерина рия. – 2009. - №12 – С. 41-43.

2. Брылин А.П. Гигиена снабжения питьевой водой / А.П. Брылин, Н.А. Листкова / Ветерина рия. – 2006. - №11 – С. 11-12.

3. Хотько Н.И. Водный фактор в передаче инфекции / Н.И. Хотько, А.П. Дмитриев. - Пенза:

ПГУ, 2002. – 232 с.

УДК 619:618.19-002:636. САНИТАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПЛЕКСНОГО ДЕЗИНФИЦИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА «КРИОКС»

Л.Л. Кривенок РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского «, Беларусь e-mail: l.krivenok@tut.by Ключевые слова: Дезинфектант, аэрозоль, токсичность, композиция, антимикробная ак тивность.

В статье дается описание антимикробных свойств и токсичности комплексного дезинфи цирующего средства «Криокс.

Введение Все попытки по снижению микробной обсемененности животноводческих помещений сводят ся к расширению спектра противомикробных препаратов. то приводит к сильной экологической пере грузке окружающей среды, бессмысленной трате денежных средств, резистентности микробов через мутационные преобразования к новым и старым препаратам.

При всей своей эффективности хлорсодержащие препараты и соединения на основе фор мальдегида имеют целый ряд негативных свойств. Прежде всего, это устойчивость к ним микрофлоры, вызванная многолетним использованием препаратов и адаптацией микроорганизмов;

выраженное им мунодепрессивное действие;

возможность кумуляции остатков средств в организме животных;

транс формация во внешней среде до канцерогенов и экотоксикантов (диоксины, тригалометаны).

Не маловажным является и то что, эффективные дезинфектанты не всегда пригодны к при менению в присутствии животных. [5,6]. Особенно остро это ощущается на крупных промышленных комплексах при круглогодовом стойловом содержании. [1].

Наибольший эффект применительно к нашей зоне могут дать перекисные препараты. [2]. У перекисных и над перекисных препаратов низкая токсичность, нет хронического, канцерогенного, мута генного иммунодепрессантного действий, биоразлагаемы.

Механизм воздействия перекиси водорода на вегетативные формы микробов связан с нару шением морфологической структуры клетки. При этом наиболее выраженные изменения происходят в поверхностных структурах, как более лабильных. По мере увеличения времени воздействия дезинфек танта эти нарушения прогрессируют и в конечном итоге становятся причиной гибели (или приводят к необратимой потере жизнеспособности) микроорганизмов.

В РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» ведутся разра ботки по созданию и использованию комплексного дезинфицирующего средства «Криокс», которое малотоксичное и обладает выраженными антибактериальными, противогрибковыми свойствами при незначительной дозировке. Препарат относительно быстро расщепляется во внешней среде, обладает Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы антикоррозийными свойствами и дешевле существующих дезинфицирующих средств.

Целью наших исследований на начальном этапе являлось изучить санитарно-токсикологиче ские свойства дезинфектанта «Криокс» в лабораторных условиях.

Материалы и методы.

Было наработано 5 композиций препарата, для изучения антимикробной активности. В состав композиций входили перекись водорода, смесь кислот, в разных соотношениях и пропорциях. Опыты по изучению антимикробной активности композиций проводили согласно Методических указаний «Методы испытания противомикробной активности антисептиков профилактического назначения № 11-13-1-97, Временной инструкции «Методы испытания противомикробной активности дезинфицирующих средств»

рег. № 4718 от 24.12.98г» и СанПиН 21-112-99 «Дезинфекционные средства и технологии. Нормативные показатели безопасности и эффективности дезинфекционных средств» на тест культурах микробов Sylu uu АТСС 6538, Pu bl АТСС 14153, E l, Bllu ubl, Cdd ubu, Mu u с микробной концентрацией 5 х 108 КОЕ/мл, экспозиции 60 минут. Для уста новления белковой нагрузки в суспензию с изучаемыми композициями и тест-культурами, вносили % лошадиной сыворотки и после экспозиции 60 минут нейтрализовали и вносили в питательную среду для инкубации в термостате при температуре 370С.

При изучении противомикобактериальной активности дезинфектанта использовали культуру Mybu ACC 15755. После 60-ти минутной экспозиции и нейтрализации смеси изучаемых композиций с тест-культурой, высевали полученную взвесь на питательную среду Гельберга по две про бирки на каждую композицию. Пробирки инкубировали в термостате при 370С в течение 21 дня.

По результатам антимикробной активности изучаемых композиций была выбрана та, что об ладала выраженными биоцидными свойствами.

На виварии РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» на ла бораторных животных провели опыты по изучению острой и хронической внутрижелудочной токсич ности на белых мышах, раздражающее действие на кожу и слизистую оболочку глаза - на кроликах, аллергенные свойства - на морских свинках по общепринятым методикам («Методические указания по токсикологической оценке химических веществ и фармакологических препаратов, применяемых в ветеринарии», Минск 2007 г) [3].

Результаты исследований Антимикробные свойства экспериментальных композиций по отношению к тест культурам.

Согласно проведенным опытам по определению антимикробной активности пяти композиций установлено, что наибольшую активность имела композиция № 5. Так, в количественном суспензион ном методе у данной композиции фактор редукции ко всем исследуемым тест-культурам более 5 lg наблюдался в концентрации 1,0 %. Кроме того, композиция в 3,0 % концентрации даже при белковой нагрузке обладала бактерицидной активностью к культуре Mybu. Остальные композиции не проявляли высокой активности к исследуемым культурам, поэтому работа с ними была прекраще на. Для дальнейшей работы была выбрана композиция № 5 с рабочим названием дезинфицирующее средство «Криокс».

Острая и хроническая внутрижелудочная токсичность экспериментального образ ца дезинфицирующего средства «Криокс».

Острую токсичность изучали в опыте на белых мышах, живой массой 18,0±0,2г. В виварии ин ститута было сформировано 5 групп животных (белые мыши) по 10 голов в каждой. Изучаемый экспери ментальный образец средства вводили внутрижелудочно с помощью шприца и зонда в нативном виде на 0,5%-ном крахмальном клейстере. При этом установлено, что LD50 экспериментального образца составила 3900 мг/кг живой массы, что согласно ГОСТ 12.1.007 - 76, позволило отнести его к III классу опасности – умеренно опасные вещества. На основании результатов по острой токсичности проведены опыты по определению хронической токсичности изучаемого образца. Для этого было сформировано Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы три группы животных (белые мыши живой массой 18,0±0,2г) по 10 голов в каждой, которым в течение 16 дней задавали препарат внутрижелудочно: первой группе (опытной)- по 1/10 LD50, второй (опытной) - 1/20 LD50, третьей (контрольной) – дистиллированную воду.

Общее клиническое состояние животных всех групп на протяжении опыта находилось в преде лах физиологической нормы. По окончанию опыта животных усыпили и провели патолого-анатомиче ское исследование.

При вскрытии изменений со стороны внутренних паренхиматозных органов в опытных и кон трольной группах не отмечалось.

Острая и хроническая ингаляционная токсичность экспериментального образца де зинфицирующего средства «Криокс».

Для определения острой и хронической ингаляционной токсичности использовали методики, изложенные в трудах ВНИИВС [4]. В опыте по изучению острой ингаляционной токсичности экспери ментального образца препарата использовали белых мышей, живой массой 18,0-20,0 г, герметичную камеру и распылители для образования аэрозолей препарата. В специальную камеру помещали жи вотных, и непрерывно в течение 2-х часов пропускали через камеру мелкодисперсный аэрозоль из учаемого препарата. Установлено, что LK50 экспериментального образца дезинфицирующего средства «Криокс» составила 2000 см3/м3, LК100 - 3000 мл/м3, максимально недействующая доза – 1500 мл/м (таблица 1).

Таблица 1 – Результаты определения острой ингаляционной токсичности изучаемого экспериментального образца в опыте на белых мышах.

Количество животных Примечание Количество Группа Экспозиция, мин препарата, мл/м3 всего пало живых Симптомы интоксика ции: угнетение, отказ 1 3000 120 6 6 от корма, учащенное 2 2500 120 6 4 дыхание, взъерошен 3 2000 120 6 3 ность шерсти. Гибель животных в течение 4 1500 120 6 0 – 3 дней Для постановки опыта по хронической ингаляционной токсичности использовали три группы белых мышей. Ингаляционные обработки проводили в герметических камерах в течение 20 дней из расчета 1/10 и 1/20 LК50 в виде 3 % водного раствора с экспозицией 2 ч, контрольная группа аэро зольным обработкам не подвергались. Во время опыта животные во всех группах чувствовали себя удовлетворительно, клинических отклонений в их поведении не наблюдали, корм и воду животные при нимали охотно. При вскрытии животных после окончания опыта у мышей 1-й опытной группы в легких в 60% случаев отмечалась застойная гиперемия, в других внутренних органах видимые изменения от сутствовали. У мышей 2-й опытной и контрольной групп отклонений от нормы не обнаружено.

Раздражающие свойства экспериментального образца дезинфицирующего средства «Криокс»

на кожу и слизистые оболочки кроликов.

При изучении раздражающих свойств экспериментального образца препарата на кожу кроли ков использовалась шкала, приведенная в методике. Так, однократное нанесение на кожу кроликов 3 % раствора экспериментального образца препарата, не вызывало реакции в виде эритемы или отека на коже. При аппликации экспериментального образца препарата отмечались незначительная гиперемия, сухость, утолщение кожной складки: через 15 минут на 2,2 мм;

через 60 минут - на 2,1 мм, через 4 часа – на 1,2 мм. Через 24 часа реакция кожи практически отсутствовала (таблица 2).

Таблица 2 - Толщина кожной складки при однократных аппликациях кроликам экспери Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ментального образца дезинфектанта.

3% раствор Нативный препарат Время учета реакции №1 №2 №3 ср №1 №2 №3 ср До нанесения 3,0 3,1 2,9 3,0 3,0 2,9 3,1 3, через 15 мин 3,0 3,2 3,0 3,06 5,2 5,1 5,3 5, 60мин 3,1 3,2 3,0 3,2 5,1 5,0 5,2 5, 4ч 3,0 3,1 2,9 3,0 4,3 4,0 4,3 4, 16ч 3,0 3,1 2,9 3,0 3,5 3,6 3,7 3, 24ч 3,0 3,1 2,9 3,0 3,1 3,0 3,1 3, Многократное в течение 21 дня нанесение кроликам 3% раствора экспериментального образ ца препарата раздражения кожи не вызывало.

Общая оценка раздражающего действия на слизистую оболочку глаза кролика проводилась по нижеследующим баллам: 0 – 0,4 отсутствие раздражения;

0,5 – 3,0 слабое раздражение;

3,1 – 5, умеренное раздражение;

5,1 – 8,0 выраженное раздражение;

8,1 – 9,0 резко выраженное раздражение.

Установлено, что нанесение на слизистую оболочку глаза кроликов 1 % рабочего раствора экспериментального образца препарата вызывало незначительную гиперемию конъюнктивы в течение первых часов, исчезающую через 5 часов, разовая аппликация 3% рабочего раствора на слизистую оболочку глаза кроликов вызывала инъекцию сосудов. При дальнейшем наблюдении в течение 48 ча сов признаков раздражения глаз не наблюдалось.

Общая оценка раздражающего действия 1% рабочего раствора экспериментального образца препарата на слизистую оболочку глаза кроликов соответствует 1-ой группе – отсутствие раздражения, 3% рабочего раствора - соответствует 2-ой группе – слабое раздражающее действие.

Аллергенные свойства экспериментального образца дезинфицирующего средства «Криокс».

При изучении аллергенных свойств экспериментального образца дезинфицирующего сред ства «Криокс» установлено, что животные после нанесения разрешающей дозы препарата в течение суток оставались в пределах физиологической нормы, на коже у всех кроликов и морских свинок из менений не наблюдали, т.е. рабочий раствор препарата (3 %) не обладает аллергенными свойствами.

Выводы 1. Композиция № 5 (рабочее название дезинфицирующее средство «Криокс») при нагрузке тест-микробов 0,5 млрд, экспозиции 60 минут, в разведении 1 % обладала бактерицидной активностью, в т.ч. и с белковой нагрузкой. К культуре Mybu бактерицидное действие проявлялось в концентрации препарата 3 % и экспозиции 60 минут.

2. LD50 (внутрижелудочная) экспериментального образца дезинфицирующего средства «Кри окс» составила 3900 мг/кг живой массы, LК 50 (ингаляцонная) – 2000 мл/м3. Хроническая токсичность в опыте на белых мышах отсутствовала.

3. Рабочий раствор (3 %) экспериментального образца дезинфицирующего средства «Кри окс» обладает слабым местно- раздражающим свойством и не сенсибилизирует организм кроликов в течение опыта.

Литература.

1. Богуш А.А., Каменская Т.Н., Лукьянчик С.А., Бельмач М.М. Микробная обсемененность и аэрозольная обработка помещения оксоном в присутствии телят на комплексе по откорму крупного рогатого скота. // пизоотология, иммунология, фармакология, санитария. – 2007. №1. – с. 47 – 51.

2. Кожениаускас Е., Кудимов В., Тамулене А. Профилактике – особое внимание. // Птицевод ство №3/2004. с. 38 – 40.

3. Методические указания по токсикологической оценке химических веществ и фармакологи ческих препаратов, применяемых в ветеринарии. – Минск, 2007, 120с.

4. Скворцов Ф.Ф. Методические подходы к оценке безопасности и токсических уровней воз Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы действия аэрозолей химических веществ на сельскохозяйственных животных // Труды ВНИИВС. – 1985.

– Москва. – с. 131 – 138.

5. Смирнов В.Г., Кедо И.А., Кольцов В.В. «О перспективных направлениях дальнейшего раз вития и совершенствования аэрозольной дезинфекции» Москва – 1992. – с. 10-11.

6. Nw B. bdl u-v ud.//J.AI.B., v.23, N2, I960,.365.

УДК 619:619.5:616.074:576.8:619. ОБНАРУЖЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ CAMPYLOBACTER В ПРОДУКТАХ УБОЯ КУР В САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ У.М. Курако, кандидат биологических наук, тел. 8-917-202-71-08, kum13@rambler.ru А.А.Щербаков, доктор биологических наук, профессор тел. 8(8452)69-24-41, shscherbakovaa@sgau.ru ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова»

Ключевые слова: кампилобактериоз, Cplbr u, диагностика, полимеразная цеп, ная реакция, микроорганизмы.

В статье приведены данные исследования продуктов животного происхождения с примене нием высокочувствительного молекулярно-генетического экспресс-метода - полимеразной цепной реакции (ЦР).

Этот метод был апробирован при выявлении кишечного иерсиниоза и кампилобактериоза в продуктах животного происхождения Саратовской области, так как эти микроорганизмы обла дают рядом биологических особенностей, затрудняющих их индикацию в исследуемом материале и позволяющих им длительное время сохраняться и размножаться в продуктах питания.

Введение. Кишечный кампилобактериоз – это острая кишечная зооантропонозная инфекция, которая характеризуется преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта, протекающая чаще всего в виде гастроинтестинальных, реже генерализованных форм и нередко сопровождающаяся токсико-аллергической симптоматикой.

Микроорганизмы рода Cplbr в качестве этиологического фактора ОКИ встречаются чаще, чем сальмонеллы, шигеллы и ротавирусы. По данным ВОЗ, в зависимости от географического положения региона и сезонности, кампилобактеры вызывают от 3 до 73 % ОКИ [1,2,3,4].

Кампилобактериоз подлежит обязательной регистрации в США, Великобритании, Франции, Германии и во многих других европейских странах. В России диагностика кампилобактериоза прово дится редко, что свидетельствует об отсутствии четкой информации о распространенности этого за болевания в РФ.

Главным фактором риска при возникновении кампилобактериоза является употребление в пищу недостаточно термически обработанного мяса птицы, хотя степень данного риска до сих пор точно не установлена. Так, зараженнсть бактериями рода Cplbr бройлерной птицы может достигать 100%, а послеубойная обработка ее не всегда предотвращает попадание указанных бактерий на тушки птицы [5,6,7].

пидемиологическая опасность мяса возрастает в связи с тем, что бактерии рода Cpl bacter высоко контагиозны. то позволяет рассматривать кампилобактеры как возможный этиологиче ский фактор профессионального заболевания у работников птицеводства [8].

Кроме этого кампилобактериоз наносит существенный экономический ущерб птицевод Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ству, за счет снижения живой массы, снижения яйценоскости, падежа птицы и затрат на ликвидацион ные мероприятия.

Сведения, о распространенности кампилобактериоза среди людей и птицы в Саратовской об ласти отсутствуют.

Все вышесказанное свидетельствует о необходимости исследования поголовья птицы с пти цефабрик и птицеводческих хозяйств, а также продуктов убоя кур, на наличие возбудителя кампило бактериоза.

Целью работы явилось изучение распространения и идентификация некоторых видов Cam plbr – возбудителей пищевых токсикоинфекций на птицефабриках и птицеводческих хозяйствах Саратовской области, а также выяснение роли мяса птицы и продуктов убоя птицы, как фактора пере дачи возбудителей.

Материалы и методы исследований. Для исследования материалами с птицефабрик и племен ных птицеводческих заводов Саратовской области послужили:

• содержимое желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) клинически здоровых кур;

• содержимое ЖКТ кур, которых при внешнем осмотре и по клиническим признакам направ ляли на санитарный убой;

• смывы из брюшной полости тушек после потрошения, до промывки;

• смывы из брюшной полости тушек после промывки, готовых к упаковке.

Проанализировав данные методических рекомендаций «тиология, клиника и диагностика кампилобактериоза» [9] и инструкций по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза [10], нами была предложена следующая методика выделения, изучения и идентификации штаммов возбудителя кишечного кампилобактериоза. По данной методике составили схему лабораторной диа гностики кампилобактериоза (см. рисунок).

Результаты исследований и их обсуждение. Была исследована 431 проба от кур различ ного происхождения, из хозяйств Татищевского, Балтайского, Марксовского, нгельского, Петровского, Лысогорского, Аткарского и Саратовского районов Саратовской области.

Бактериологическим методом было исследовано 207 индивидуальных проб содержимого ЖКТ кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, нгельского, Татищевского, Марксовского, Петровского, Лысогор ского и Балтайского районов Саратов ской области и выделено 14 штаммов С. Ju, и 8 штаммов С. coli.

При этом исследовали проб от клинически здоровых кур и 101 пробу от кур направленных на санитарный убой. В результате про веденных исследований, от клиниче ски здоровых кур были выделены штамма C. jejuni и 2 штамма C. coli, а от кур направленных на санитарный убой выделили 10 штаммов C. jejuni и 6 штаммов C. coli. То есть соотноше ние количества выделенных штаммов С. jejuni из ЖКТ клинически здоровых кур и кур, направленных на санитар ный убой 29 % к 71 %, а C. coli 25 % к 75 %, соответственно.

Рисунок – Схема лабораторной диагностики кампи- Следовательно, в большин лобактериоза стве случаев у кур заболевание проте Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы кало остро, с явными клиническими признаками, по которым их направляли на санитарный убой и реже в виде носительства без явных клинических признаков. то свидетельствует о том, что профилактиче ские мероприятия против распространения кишечного кампилобактериоза в хозяйствах проводились не всегда своевременно.

Далее бактериологическим методом было исследовано 184 индивидуальные пробы смывов с брюшной полости тушек в процессе переработки, с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовского, нгельского, Марксовского и Лысогорского районов Саратовской области и было выде лено 8 штаммов С. jejuni, и 8 штаммов С. coli.

При исследовании 109 проб смывов с брюшной полости кур после потрошения и до промывки было выделено 6 штаммов С. jejuni и 6 штаммов С. coli, а из 75 проб смывов с брюшной полости кур после промывки, направленных на упаковку и дальнейшую реализацию, выделено 2 штамма С. jejuni и 2 штамма С. coli.

В ходе данного эксперимента было установлено, что контаминация тушек бактериями рода Cplbr происходить, в основном, в результате попадания на них содержимого ЖКТ во время потрошения на конвейере, что соответствует данным многих исследователей: M.J. Bl l. (1982);

R.C. B, M.D. Pd, R.A. u (1987) [11,12].

Также установлено, что промывка тушек кур после потрошения водопроводной водой, не яв ляется достаточно эффективной и даже может способствовать большей обсемененности, что также соответствует данным некоторых исследователей: M.E. Bg l. (2001);

N.J. S l. (2001);

F.

Jg l. (2002) [13,14,15].

Во избежание контаминации продуктов птицеводства бактериями рода Cplbr в хозяй ствах должны строго соблюдаться схема переработки птицы и качество промывки. Необходимо приме нять дополнительные меры дезинфекции поверхностей оборудования и воды для промывки.

Одним из этапов работы являлось использование ПЦР для индикации С. jejuni в продуктах птицеводства.

С помощью амплитест – системы «КАМ-БАК» нами были исследованы мясо и субпродукты кур с птицефабрик и племенных птицеводческих заводов Саратовской области, приобретенных в сетях розничной торговли города Саратова.

Всего было исследовано 40 индивидуальных проб мяса и субпродуктов кур, из них 14 пока зали положительный результат, на наличие бактерий вида С. jejuni, что составляет 35 %. При этом ис пользование параллельно бактериологического метода не дало положительных результатов.

Также, методом ПЦР, нами было исследовано мясо уток, приобретенное у частного предпри нимателя. Из 3 проб мяса уток был обнаружена 1 положительная проба, бактериологический метод положительных результатов не показал.

Результаты эксперимента дают возможность рекомендовать ПЦР в качестве эффективного дополнительного экспресс – метода лабораторной диагностики бактерий рода Cplbr у птиц и индикации кампилобактеров в продуктах убоя кур.

Заключение.

• впервые выделены и идентифицированы, по морфологическим, культуральным и биохи мическим тестам, возбудители кампилобактериоза, в продуктах убоя кур ряда птицефабрик и племен ных птицеводческих заводов Саратовской области;

• установлено, что ПЦР является эффективным методом индикации С. jejuni в мясе и суб продуктах птицы, и по многим показателям существенно превосходит общепринятый бактериологиче ский метод.

Библиографический список:

1. Кампилобактериоз у людей / Т.Б. Сафонова [и др.]. // Лабораторное дело. – 1988. – № 6. – С. 41 – 44.

2. Иванов В.П. Кампилобактеры и кампилобактериозы / В.П. Иванов, А.Г. Бойцов, А.А. Порин.

– СПб., 1995. – С. 144.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы 3. Особенности эпидемиологии кампилобактериоза в современных условиях / Д.Л. Кирик [и др.]. // Микробиология. – М., 1995. - № 5. – С. 60 – 63.

4. Edlgy Cplbr u Ud S d duld / C.R. Fd [ l.]. // Cylb / d J. N, M.J. Bl. – Wg: ASM P, 2001. – P. 5.

5. Жакипбаева Б.Т. Микробиологическая характеристика и санитарно-эпидемиологические особенности кампилобактериозов на промышленных птицекомплексах : автореф. дис. … канд. мед.

наук / Жакипбаева Б.Т. – Алма – Ата, 1992. – 21 с.

6. О распространении кампилобактериоза и ротовирусной инфекции в отдельных птицевод ческих хозяйствах : материаллы междунар. симп. «Пищевые зоонозы - сальмонеллезы, кампилобакте риозы, иерсиниозы, листериоз. Методы и средства диагностики, лечения и профилактики», Москва, 1- марта 1995 г. / Т.Т. Болохович [ и др.]. – М., 1995. – С. 93 – 94.

7. Wll A. Sly J. // J. Al. Mbl. – 1998.V. 85. – P. 224 – 236.

8. Кирьянов Е.А. Кампилобактериоз животных : лекция / Е.А. Кирьянов // Приморский с.-х.

ин-т. – Уссурийск, 1992. – 23 с.



Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 12 |
 










 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.