авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 12 |

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Департамент ветеринарии Ульяновской области ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» ...»

-- [ Страница 8 ] --

МИКРО-МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ -ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ШТАММОВ B. BRONCHISEPTICA А.В. Мастиленко, соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Д.Г. Сверкалова, соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Работа проводилась в научно-исследовательском инновационном центре микробиологии и биотехнологии (НИИЦМиБ) кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-сани тарной экспертизы ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА».

Материалы и методы.

Для проведения работы использовался микроскоп БИОМЕД 6 № 4F 8663200/01, тринокуляр с видионасадкой ДСМ 130 (1,3 м xl, USB 20) и программным обеспечением;

термостат ТС-80М-2;

покровные и предметные стекла с лункой по ГОСТ 9284-75, бактериологическая петля = 2 мм, масло иммерсионное d = 1,515 ± 0,002;

g - = 0,0106 ± 0,0003, 20С±2.

Гемолитическую активность проверяли на штаммах: rdll brhp 8344, rd ll brhp 1, rdll brhp 7, rdll brhp 214, rdll brh bronchi septica 22-06, принадлежащих коллекции музея кафедры МВиВС ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА».

Для подтверждения наличия гемолитической активности изучаемых штаммов бактерий, поль зовались стандартной методикой определения гемолиза с помощью кровяного агара с 10% содержани ем дефибринированной крови человека, описанной в 4-ом издании “Микробиология с техникой микро биологических исследований” А.С. Лабинской. М., “Медицина”, 1978 г.

Приготовления препарата “висячая капля” проводили так же по описанию А.С. Лабинской в 4-ом издании “Микробиология с техникой микробиологических исследований” М., “Медицина”, 1978 г.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Определению гемолитических свойств бактерий всегда уделялось большое внимание в прак тической бактериологии. Гемолиз – один из важнейших факторов патогенности бактериальных культур, по типу гемолиза так же судят о принадлежности бактерий к тому или иному виду.

В наших исследованиях определение гемолитической активности штаммов бордетелл мы рас сматривали как наличие патогенных свойств. Поэтому нам было важно, как можно скорее установить их наличие.

Гемолитическую активность штаммов rdll bronchiseptica наблюдали в поле зрения ми кроскопа БИОМЕД 6 № 4F 8663200/01 в течение 20 - 30 минут. Для микроскопии готовили препарат следующим образом. Готовилось разведение крови или эритроцитарной массы в стерильном физиоло гическом растворе, с таким расчетом, чтобы полученный раствор содержал в 1 мл не более 2104 эри троцитов. ритроцитарную взвесь в физиологическом растворе наносили пипеткой на предваритель но обезжиренное чистое покровное стекло, затем, бактериологической петлей вносили 1-2 суточную агаровую культуру одного из штаммов. bronchiseptica в каплю физиологического раствора с кровью.

Далее готовили препарат по типу “висячая капля”, используя предметное стекло с лункой. Наблюда ли под увеличением 10015 с использованием иммерсии, в течение 20-30 минут адсорбцию клеток бордетелл на поверхности эритроцитов и обесцвечивание последних, что свидетельствует о гемолизе (фото 1 - 3).

1. Эритроцит и культура референс-штам 2. Эритроцит и культура референс-штамма ма B. bronchiseptica 7 в физиологическом B. bronchiseptica 7 в физиологическом рас растворе в первые минуты, увеличение творе через 15 минут, увеличение 100 4. Контроль. Эритроциты без культуры уве 3. Эритроцит и культура референс-штамма личение референс-штамма B. bronchiseptica B. bronchiseptica 7 в физиологическом рас 7 в физиологическом растворе в первые творе через 30 минут, увеличение минуты, увеличение 100 Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Параллельно каждую исследуемую культуру высевали “штрихом” на поверхность 10% кро вяного агара из той же дефибринированной крови человека, который потом помещали в термостат с температурой 37С. Через 24, 48, 72 часа наблюдали рост культур, гемолиз ярко проявлялся только через 48 часов инкубации и у тех же штаммов, у которых наблюдали картину гемолиза эритроцитов под микроскопом нашим методом (фото 5).

Рис. 5 Рост штамма B. bnisi 7 на кровяном агаре с -гемолизом Выводы. Таким образом, возможно использование данного метода для определения гемоли тической активности бордетелл, так как по точности результатов он не уступает стандартному методу, позволяет установить гемолитическую активность в короткие сроки (30 минут), что является преиму ществом разработанного нами метода по сравнению со стандартным, который позволяет определить гемолитическую активность бордетелл только через 48-часов. Кроме того, разработанный нами микро метод определения гемолитической активности позволяет определить вышеуказанное свойство бакте рий у штаммов, обладающих слабым -гемолизом.

Используемая литература 1. Лабинская А.С. Микробиология с техников микробиологических исследований. М.: Меди цина, 1978. – 394с.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК 579.26.64:631. КРУГОВОРОТ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ИЛИ МИКРОБНЫЙ ЦИКЛ.

А.М. Семнов, доктор биологических наук Е.В. Семнова, кандидат биологических наук кафедра микробиологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова.





Тел.: (495)9394223. E-mail: amsemenov@list.ru Ключевые слова: круговорот микроорганизмов, цикл микроорганизмов, сапротрофы, эн теропатогены, экология, эпидемиология.

Экспериментально обосновывается круговорот или цикл микроорганизмов при исследова нии перемещения популяций сапротрофных – Pud flur fp 32 и энтеропатогенных бактерий fp-меченых hrh l O157:7 и Slll r Vr. Tphuru через основные экологические ниши: корм животных - желудочно-кишечный тракт - экскременты животных - по чва (вода) - растения и опять желудочно-кишечный тракт животных.

Введение. Цикличность процессов в природе вполне обычное явление. Более того, о транс формации основных биогенных (биофильных) элементов в природе, таких как углерод, азот, сера, же лезо, кислород и др. говорят не иначе как о циклах этих элементов. При этом хорошо известно, что основной движущей силой круговорота в природе биофильных элементов являются микроорганизмы.

Известны и циклы веществ, например, гидрологический цикл.

Микроорганизмы в природе тоже перемещаются, мигрируют. Миграция – это процесс активного или пассивного перемещения клеток микроорганизмов из одного местообитания в другое. Перемеще ние микроорганизма из одной экониши в другую и быстрая колонизация экониш – явление достаточно распространенное в природе и в последнем случае нередко говорят об инвазии того или иного микро организма. Перемещения микроорганизмов можно разделить не только на пассивные и активные, но и на ненаправленные (скалярные) и направленные (векторные). Такое деление несколько условно, т.к.

в ряде случаев трудно классифицировать ту или иную форму перемещения. Считается, что главным способом распространения микроорганизмов в природе является рассеяние с воздушными массами и водными потоками, т.е. диссипативное распространение. Безусловно, ненаправленное, диссипативное распространение микроорганизмов с воздушными массами и водными потоками играет существенную роль в природе. Однако микроорганизмы перемещаются и в других фазах биосферы - почве, воде и населяющих их растительном и животном мире.

С точки зрения распространения микроорганизмов и их приуроченности к конкретным местоо битаниям, помимо деления на эндемиков и космополитов микроорганизмы, с определенными допуще ниями, можно также разделить на обитателей и проходящих или “транзитных” представителей.

Для некоторых организмов известны жизненные циклы (ЖЦ) - процесс существования орга низма в виде последовательных переходов от одной жизненной формы (стадии) к другой, с изменения ми морфологических и физиологических состояний, изменением сексуальных процессов и плоидности клеток и функционированием в одной или нескольких взаимосвязанных эконишах. Такие ЖЦ особенно характерны и хорошо известны для некоторых фито- и зоопатогенных микроорганизмов, как прокари отных, так и эвкариотных. ЖЦ осуществляются посредством диссипативных и векторных механизмов.

Основным векторным механизмом перемещения микроорганизмов является трофическая цепь, где микроорганизмы перемещаются и распространяются в виде субстрата и с субстратом. Од нако, как «пастбищный», так и «детритный» варианты пищевой цепи однонаправлены и не могут ох ватить и объяснить всего многообразия перемещения микроорганизмов в экосистемах (Одум, 1986).

Всесторонний охват и объяснение перемещения микроорганизмов дает представление об экологиче Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ском цикле микроорганизмов или, другими словами, ци Животные кле микроорганизмов (ЦМ). Циклические перемещения микроорганизмов в экотопах и экосистемах в виде от дельных клеток, популяций и сообществ через основ ные природные местообитания: почву и воду - расте Экскременты и экскреты Растения ния - животных - экскременты и экскреты животных и растений и опять почву, и воду является непрерывно действующим источником инокуляции постоянно воз никающих новых экониш и местообитаний, к которым, в первую очередь относятся желудочно-кишечные тракты Почва и вода новорожденных животных, а также эндосфера растений Рис. 1. Схема круговорота микроорганиз- (Рис.1). В отличие от пищевых цепей, которые однона мов в природе или цикл микроорганиз- правлены и не замкнуты, круговорот микроорганизмов в виде цикла - микробный цикл (МЦ) может быть обрати мов.

мым, но является замкнутым. Почва и вода выполняют роль источника (резервуара, «узла», «хранилища»). Животные, их пищеварительные тракты – роль интенсивных инкубаторов (ферментеров). Кроме этого, почва, вода, растения, поверхности животных играют роль экстенсивных инкубаторов. Вода и растения - пассивные векторы, а животные - активные векторы, они же «ребра», соединяющие «узлы». Имеется и сток микроорганизмов, которым опять же является почва и вода. В «узлах» происходит селекция и размножение наиболее приспособленных к каждому конкретному месту обитанию микроорганизмов, потребление веществ и энергии, создание новых веществ, содержащих энергию. Следствием этого является формирование новых устойчивых к определенным условиям микробных популяций и сообществ. Наряду с таким глобальным МЦ, который сформировался вследствие филогенеза всего живого мира, имеют место микроциклы и/или укорочен ные циклы (петли), которые отражают эволюционное развитие каждого отдельного узла, например, короткий цикл почва - растение - почва, почва - животное - экскременты - почва и т.д. Циклическая при рода перемещения микроорганизмов отмечена эпидемиологами (Черкасский, 1994).

Целью настоящей работы было экспериментальное подтверждение существования ЦМ в природе.

Материалы и методы исследований. Объектами исследований были популяции сапро трофных – Pud flur fp 32 и энтеропатогенных бактерий fp-меченых Escherichia coli O157:H7 и Salmonella enterica V yuu (Sv l., 2010). Бактерии получены из Универ ситета Вагенингена (Нидерланды). У энтеропатогенных бактерий были удалены гены вирулентности.

Бактерии выращивали на соответствующих средах с антибиотиками, концентрировали центрифугиро ванием, отмывали от сред и в соответствующих разведениях вносили в субстраты - фураж для скарм ливания коровам или курам или в свежесобранные экскременты крупного рогатого скота (КРС). КРС, с интродуцированными fp-бактериями после выявления закономерностей динамики выживания ин тродуцентов и аборигенов (=22C) смешивали в соотношении 1:6 с почвой (влажность смеси 15%), опять исследовали динамику выживания интродуцентов и аборигенов (состав среды см. Sv l., 2010). В смеси КРС-почва выращивали растения кресс-салата или овса. После учета на поверхности корней и стеблей растений fp-бактерий растения скармливали – кресс-салат улиткам виноградным, овес морским свинкам или белым мышам. В экскрементах улиток, морских свинок или мышей опреде ляли численность fp-бактерий. Учет fp-меченых бактерий осуществляли посевом на агаризованные среды с соответствующими антибиотиками и/или под люминесцентным микроскопом из соответствую щих разведений. Дополнительно был проведен эксперимент по скармливанию курам инокулированно го fp-бактериями фуража с последующим определением этих бактерий в экскрементах кур и динамики выживания в стерильной и не прудовой воде. Водорастворимый органический углерод (ВОУ) определя ли бихроматным методом при калибровании по глюкозе. ксперименты с каждой бактерией отдельно повторяли три раза с не менее чем тремя повторностями каждый раз.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Результаты и их обсуждение. Попу ляционная динамика выживания S. yuu fp и. l O157:H7 fp в КРС и в смеси КРС-почва в краткосрочных экспериментах была довольно сходной и мало зависела от исходной инокуляционной дозы. Как при са мой высокой инокуляционной дозе 9,5·108 кл/г КРС для S. yuu fp и. l O157:H fp, так и при самой низкой 7,1·104 КОЕ/г КРС и 6,8·104 КОЕ/г КРС для S. yuu fp и. l O157:H7 fp соответственно, их числен ность через 10 суток в КРС осталась довольно стабильной (5,5·108 кл/г и 5,8·104 КОЕ/г КРС).

Популяционная динамика P. flur 32 fp в целом была схожа с динамикой энтеробакте рий. Однако при наивысшей концентрации P.

flur 32 fp снижение численности этой бактерии за наблюдаемые 10 суток было более резким. В смеси КРС-почва также происходило сни жение численности интродуцентов, причем более заметно, хотя тренд для всех бактерий был примерно одинаковым. Наибольшее снижение численности для энтеробактерий имело место при наибольшей и наименьшей инокуляционных дозах.

Снижение численности интродуцентов в смеси КРС-почва может быть объяснено в первую очередь, снижением концентрации доступных субстратов, о чем косвенно свидетельствует уменьше ние концентрации ВОУ в этих субстратах. В КРС было обнаружено 7,8·104 мкг ВОУ/г сухого вещества, а в смеси КРС-почва только 1,2·103 мкг ВОУ/г сухого вещества. Средняя численность аборигенов соответствовала «промежуточным» начальным численностям интродуцентов (108 и 107/мл) в наших экспериментах, именно такие концентрации оказались наиболее оптимальными для выживания интро дуцентов в КРС и смеси КРС-почва. Т.о., оптимальной концентрацией бактерий для интродукции в природные субстраты и успешного прохождения по цепи разных субстратов является такая, которая более или менее совпадает с концентрацией, выявляемых на средах аборигенов.

Закономерности выживания популяций интродуцентов, по крайней мере, энтеробактерий, в филлосфере и ризосфере кресс-салата отличались от таковых в КРС и смеси КРС-почва. В КРС и смеси КРС-почва, хотя и медленно, но происходило снижение численности, на растениях, как в ризосфере, так и в филлосфере обнаружено увеличение численности всех исследованных бактерий.

Растения кресс-салата как местообитание оказалось благоприятным и для энтеробактерий, и для псев домонад, способствуя их росту или концентрированию.

Схема эксперимента по исследованию способности бактерий перемещаться по цепи местоо битаний: комбикорм - коровы - их экскременты - почва - растения - грызуны и их экскременты приведена на рис. 2, а результаты в таблице. Установлено, что, как и в случае с кресс салатом в ризосфере и фил лосфере овса сапротрофы и энтеропатогены увеличивали свою численность. Увеличение численности имело место и в экскрементах мышей. Т.о., бактерии способны проходить через ряд местообитаний, в том числе два раза пройти через ЖКТ разных млекопитающих, фактически совершив полный цикл.

Кроме этого, настоящими экспериментами еще раз было показана способность грызунов служить ак тивными векторами распространения различных бактерий и инфицировать разные природные место обитания.

Так как птицы являются наиболее мобильными векторами в распространении микроорганиз мов был проведен эксперимент по изучению выживания бактерий при прохождении через ЖКТ птиц и возможность выживания в водной среде после ее контаминирования. После скармливания курам комбикорма, содержащего 107 кл. меченых бактерий/г сух. комбикорма, в собранных через сутки экс Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы крементах кур было обнаружено до 1,2*104 меченых клеток энтеробактерий и 104 клеток P. flur fp в грамме сухого вещества. При наблюдении динамики численности меченых бактерий в экскремен тах кур выявлено увеличение численности S. yuu fp почти на два порядка, несколько меньше для. l O157:H7 fp и отсутствие прироста у P. flur 32 fp. После смешивания экскрементов со стерильной и нестерильной водой и определении численности исследуемых бактерий в Таблица 1. Выживание исследуемых бактерий в серии природных субстратов после скармливания их крупному рогатому скоту.

Исследуемые бактерии, КОЕ/г сухого субстрата Субстрат S. Тyphimurium MAE 110 gfp E. coli O157:H7 gfp P. fluorescens 32 gfp Инокулированный комбикорм 7 7 2,0±0,8*10 2,2±0,5*10 2,2±0,6* перед скармливанием коровам ЭКРС, через сутки после 7,0±2,7*103 7,1±2,4*103 3,2±0,9* скармливания ЭКРС, перед смешиванием с 2,5±1,6*104 1,1±0,4*104 5,9±0,6* почвой Смесь ЭКРС - почва 2,2±1,0*103 5,2±1,8*103 6,4±1,3* Смесь ЭКРС - почва перед 3,8±1,1*103 9,5±3,3*103 8,0±1,2* посевом овса Филосфера овса 4,4±1,6*103 1,5±0,4*104 1,3±0,7* Ризосфера овса 8,9±1,4*103 6,2±1,1*104 2,4±0,7* Экскременты мышей 5,8±0,3*103 2,1±0,4*104 2,5±0,2* Экскременты морских свинок 1,6±0,8*103 1,8±0,2*104 1,9±0,1* нестерильной и в стерильной воде выявлена монотонно убывающая численность бактерий. В стерильной воде снижение было несколько медленнее, чем в нестерильной, что может быть связано с конкурентным давлением со стороны водных аборигенов.

Заключение. Показано, что три вида бактерий: сапротрофная P. flur 32 fp и две эн теропатогенные бактерии Salmonella enterica V. yuu fp и E. coli O157:H7 fp при разной ис ходной численности способны успешно и длительно выживать в различных природных субстратах.

Даже при самой низкой исходной популяционной численности бактерии способны проходить сложную и длинную цепь местообитаний, указывая тем самым не конкретную эконишу существования в природе каждой конкретной популяции микроорганизмов, а на последовательное и многократное перемеще ние всей или части популяции в ряду субстратов, что можно, по-видимому, назвать многоступенчатой интродукцией или инокуляцией. В связи с тем, что у энтеропатогенов обнаружена высокая выживае мость в различных эконишах, современные представления эпидемиологии о резервуарах, источниках, «носительстве» и др. нуждаются в соответствующей корректировке. Помимо практической значимо сти исследованиями обосновывается такой важный теоретически факт как существование круговорота микроорганизмов в виде перемещения отдельных популяций микроорганизмов или комплекса разных популяций через ряд взаимосвязанных природных субстратов в виде цикла (Семенов, 2005;

Куприянов, 2009;

Sv l., 2010). При «расщеплении» или «диссипации» таких популяций с перемещением сразу в несколько новых местообитаний, по-видимому, можно говорить не только о круговороте микро организмов в виде цепи, но и в виде сети. Полученные результаты показывают, что сохранение и под держание популяции того или иного микроорганизма в природе зависит не только от того, как долго он Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы может выживать в том или ином субстрате, но и от того, как успешно он может выживать при переме щении из одного субстрата в другой, третий и т.д.

Литература.

1. Куприянов А.А. 2009. Динамика выживания бактерий в цепи взаимосвязанных природных субстратов. Автореф. дисс. на соиск. уч. степ. к.б.н. М. «СТ-ПРИНТ» 24 с.

2. Одум Ю. 1986. кология. Том 2. М. Мир. 376 с.

3. Семёнов А.М. 2005. Трофическое группирование и динамика развития микробных сооб ществ в почве и ризосфере. Дис. на соиск. уч. степ. д.б.н. в виде научн. доклада. М. 2005. «МАКС Пресс». 66 с.

4. Черкасский Б.Л. 1994. Инфекционные и паразитарные болезни человека. М. Изд. Мед.

Газета. 617 с.

5. Sv A.M., Kuv A.A., V Bugg A.H.C. 2010. g u.M., M.,.,.A., A.,.,.H.C.

H.C.

.C.

C.

.

v b bl yl. Mb. El. 60:239-249.

УДК 619:616.98:578.842.1:577. КОНСТРУИРОВАНИЕ ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО КОНТРОЛЯ К ТЕСТ-СИСТЕМЕ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК ВИРУСА МИКСОМЫ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ Синдрякова И.П., аспирант, Моргунов С.Ю., аспирант, Сальников Н.И аспирант, Колбасов Д.В., доктор ветеринарных наук, профессор ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии Тел./факс: (49243) 6-21-25;

6-10-56 VNIIVViM@niiv.petush.elcom.ru Ключевые слова: вирус миксомы, нуклеиновые кислоты, ЦР, рекомбинантная плазмида.

Статья посвящена получению рекомбинантного положительного контроля к ЦР тест системе для обнаружения ДНК вируса миксомы.

Введение.

Миксоматоз — остро протекающая, высококонтагиозная болезнь кроликов, характеризующа яся воспалением слизистых оболочек и появлением студенистых отеков в области головы, ануса, гени талий и кожи [1]. В России эпизоотические вспышки миксоматоза регистрируются в кролиководческих хозяйствах, начиная с 1978 г.

Возбудитель миксоматоза – Myx uulu – ДНК-содержащий вирус, относящийся к роду Lxvu семейства Рxvd. Вирус миксомы имеет большой 2-х цепочечный ДНК-геном длиной 163 тысячи пар оснований, который реплицируется в цитоплазме инфицированных клеток. Мик соматозом болеют кролики независимо от возраста. Распространение болезни в естественных услови ях происходит через кровососущих насекомых — комаров, кроличьих блох, вшей и клещей, в организме которых вирус сохраняется до 7 месяцев, создавая резервуар возбудителя в природе [2].

Лабораторные диагностические исследования на наличие вируса миксомы проводят путем гистологического изучения инфильтратов, постановки биопробы на кроликах. Для обнаружения у кро ликов антител к возбудителю применяют серологические методы, такие как: РИФ, РСК, РДП, РН, ИФА [1]. В ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии была разработана “Тест-система для выявления ДНК виру Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы са миксомы методом полимеразной цепной реакции” (далее “Тест – система...”), в которой в качестве положительного контроля (ПК ПЦР) использовалась ДНК вируса миксомы. Однако применение данного положительного контроля имеет ряд недостатков: небольшой срок хранения, необходимость работы с вирусной ДНК, низкая концентрация.

В настоящее время в диагностических тест-системах в качестве положительного контроля применяется рекомбинантная плазмида, характеризующаяся специфичностью, безопасностью приго товления и использования, низкой себестоимостью, длительным сроком хранения.

В связи с этим целью нашей работы являлось создание положительного контроля основе ре комбинантной плазмиды к диагностической тест-системе для выявления вируса миксомы методом по лимеразной цепной реакции.

Материалы и методы исследований.

С использованием компонентов набора «Тест система...» амплифицировали фрагмент ( п.о.) гена М022L вируса миксомы, штамм МР. Постановку реакции осуществляли на термоциклере Pl Cyl (Cb R, Австралия). Полученный фрагмент встраивали в плазмидный вектор GEM – Ey (Pg, США) в соответствии с инструкцией изготовителя. Методом электропорации транс Pg,, формировали рекомбинантной плазмидой компетентные клетки E. l, штамм 10 (Ivg, США).

Трансформированные клетки высевали на агар, содержащий ампициллин (100 мкг/мл), X-Gl (0,5 мМ) и IPG (80мкг/мл). После 8-10 ч инкубации при температуре 37°С проводили первичный скрининг клонов по цвету колоний (колонии белого цвета содержат рекомбинантную плазмиду, синего цвета – не содер жат). Отобранные колонии высевали в среду SOB и инкубировали при перемешивании до достижения средней логарифмической фазы. Методом щелочного лизиса из 1,5 -2 мл бактериальной культуры каж дого клона выделяли плазмидную ДНК, которую затем проверяли методом ПЦР на наличие фрагмента генома вируса миксомы.[4] Подбор оптимальной концентрации плазмиды в качестве матрицы для постановки ПЦР, и определение чувствительности реакции проводили, с использованием серии десятикратных разведе ний.

Результаты исследований.

В результате скрининга клеточных культур несущих фрагмент гена M022L вируса миксомы, было отобрано 10 клонов. С целью проверки встройки участка генома вируса миксомы в вектор GEM – Ey была проведена ПЦР с компонентами набора “Тест – система...”. Специфический фрагмент выявляли на уровне 550 п. о., что соответствует искомому размеру ПЦР - продукта (Рис. 1).

Рис. 1. Электрофореграмма результатов ПЦР.

Треки: К-в- отрицательный контроль выделения;

1-органный вируссодержащий материал от кроликов, зараженных штаммом МР вируса миксомы;

2- культуральный материал (ФЭК), содер Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы жащий штамм -82 вируса миксомы;

3- лиофилизированный материал, содержащий штамм MР ви - руса миксомы;

М - маркер молекулярной массы ulr 3000 bp NA ddr Plu (Fr);

4- ре Fr);

);

комбинантная плазмида;

К-пцр- отрицательный контроль ЦР.

Затем было проведено сравнение стабильности геномного и плазмидного контролей в усло виях использования набора. Для этого проводили их 10кратное замораживание/оттаивание при приме нении компонентов «Тест – системы….». В результате электрофореза наблюдали сильное деградиро вание молекул ДНК вируса миксомы. Плазмида, напротив, выдерживала многократное замораживание/ оттаивание, что также является одним из преимуществ ее использования в наборах в качестве положи тельного контроля ПЦР.

В ходе определения оптимальной концентрации плазмиды было установлено, что при исполь зовании в качестве матрицы геномной ДНК вируса миксомы (штамм МР, инфекционная активность 5, lg LD 50/см3) искомый амплифицированный фрагмент выявляли в разведении 1:104( 1,0 lg LD 50/см3), а с использованием рекомбинантной плазмиды( исходная концентрация 3*1010 копий молекул ДНК на мкл) - в разведении 1:108 (300 копий молекул ДНК на мкл) (рис.2). Таким образом, для использования в “Тест- системе …”необходимо применять плазмиду в разведении 1:104 или 1:105.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Рис.2. Электрофореграмма результатов ПЦР с использованием в качестве матрицы раз ведений плазмиды.

Треки : 1- исходная плазмида,2- 11 – рекомбинантная плазмидная ДНК в разведениях с 1: до 1: 1010 соответственно.

Заключение.

В ходе исследований была оценена специфичность связывания праймеров, входящих в диа гностический набор, с нуклеотидной последовательностю рекомбинантной плазмиды. При детекции продуктов амплификации с помощью электрофореза фрагмент расчетного размера обнаруживали в пробах материала, содержащих вирус миксомы, и в пробе, содержащей плазмидный положительный контроль. Таким образом, диагностические праймеры комплементарны соответствующим участкам созданной плазмиды, что позволяет использовать ее в качестве положительного контроля в разрабо танной тест-системе для выявления ДНК вируса миксомы методом полимеразной цепной реакции.

Библиографический список:

1.Сюрин В.Н. «Вирусные болезни животных», ВНИТИБП, Москва, 1998. – 742-746 с.

2. N, P., B, J., C, J. X., H-Mll, S., Ll, A. S., Ev,H., Xu, X. M., Rbud, J., Hu, S., Al, C., S, B.. &MFdd, G. (1999).

Iudul by vu : yxvu y. Iulgl Rvw 168, 103-120.

3. Mlul Clg. A lby Mul /.M, E.F. F, S. Sb // Cld Sg Hb Lby. - Cld Sg Hb, Nw Y, 2006.

4. Mlul Clg. A lby Mul/J.Sb, D.W.Rull// Cld Sg Hb Lb y. - Cld Sg Hb, Nw Y, 2001. P.132-134.

5. Pv l dvl dg yx vu DNA by PCR.

6. u l v d b v l yx vu d by PCR lb.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК 636:648.61:615. ДЕЗИНФЕКЦИЯ, КАК ОСНОВА ПРОФИЛАКТИКИ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ С.Б.Спиридонов, кандидат ветеринарных наук тел. 8 (0212) 37-06-77, spiridonovbz45@rambler.ru Цывис Н.Н., студент УО “Витебская ордена “Знак Почета” государственная академия ветеринарной медицины” Ключевые слова: профилактика, телята, дезинфекция, резистентность, продуктив ность.

В процессе длительной эксплуатации животноводческих помещений неизбежно проникно вение микроорганизмов вглубь ограждающих конструкций животноводческих помещений, что соз дает неблагоприятные условия для содержащихся в помещении животных. В то же время ряд про водимых в помещениях профилактических мероприятий не гарантируют надежное уничтожение возбудителей различных заболеваний. оэтому широкое распространение получают методы аэро зольной дезинфекции.

Введение. Соблюдение параметров микроклимата в телятниках в рамках профилактики бо лезней животных является одним из важных аспектов промышленного животноводства. Нарушение технологических процессов, таких как кормление и поение животных, удаление навоза и других тех нологических операций, приводит к снижению прироста живой массы на 30 %. Далее это приводит к сокращению срока службы животных на 20 %, что увеличивает отход молодняка на 40 %, тем самым повышая себестоимость продукции. При этом некачественный микроклимат уменьшает сроки эксплуа тации животноводческих зданий и производительность труда [1].

Тем не менее, в большинстве животноводческих помещений микроклимат не полностью со ответствует гигиеническим нормативам: высокая концентрация аммиака, углекислого газа и влаги, что способствует увеличению уровня звукового давления. В результате происходит недобор запланиро ванной продукции, большой отход молодняка, перерасход кормов и высокая заболеваемость среди обслуживающего персонала [2].

Одним из способов подавления роста и развития бактерий и вирусов, в рамках борьбы с уве личением устойчивости ряда возбудителей инфекционных заболеваний во внешней среде, является дезинфекция.

Особое значение дезинфекция приобретает при длительной эксплуатации животноводческих помещений. При этом возбудители инфекционных заболеваний проникают вглубь ограждающих кон струкций и в ряд укромных мест в помещениях. Поэтому важно использовать способ дезинфекции, гарантирующий обеззараживание мест, куда могли попасть возбудители той или иной инфекции.

К такому способу, прежде всего, следует отнести аэрозольную дезинфекцию помещений, при котором дезинфицирующее средство переводится в мелкодисперсное состояние и периодически вво дится в воздушную среду помещения. Аэрозоль заполняет весь объем, оседает мельчайшими капель ками на поверхностях объекта, а при испарении частички аэрозоля проникают во все щели, укромные места, пазы, трещины и т.п.

Проведение аэрозольных дезинфекций необходимо для предупреждения заболеваний, как у человека, так и у животных, т.к. при этом способе обработки помещения значительно сокращается рас ход обеззараживающих средств и повышается производительность труда. Кроме того, аэрозольный способ позволяет дезинфицировать поверхности и воздух закрытых помещений, а так же все предметы, находящиеся в них.

Применение аэрозольной обработки животных при воспалительных процессах верхних дыха тельных путей оказывает терапевтический эффект за счет образования аэрозольной капли, размером Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы около пяти микрон, активнодействующего вещества в облаке тумана, оказывая лечебное воздействие непосредственно на органы дыхания нужное количество времени.

Преимущество аэрозольной технологии заключаются в сокращении затрат труда до 90 % по сравнению с обычным опрыскиванием, отсутствии повышение влажности воздуха в обрабатываемых помещениях и гарантирует равномерное покрытие всех внутренних поверхностей.

Материалы и методы исследований. Материалом для исследования являлись параметры микроклимата в помещении, продуктивность телят, с использованием гигиенических, экономических и статистических методов исследования.

Результаты исследований и их обсуждение. Перед аэрозольной дезинфекцией были ис следованы параметры микроклимата в помещении для телят (таблица 1).

Таблица 1 – Параметры микроклимата в телятнике до дезинфекции Показатели Величина Температура, С 8, Относительная влажность, % 76, Скорость движения воздуха, м/с 0, Концентрация аммиака, мг/м 11, Общая микробная обсемененность, т.м.т./м 52, Как показали исследования, в телятнике сформировался неблагоприятный микроклимат: по казатели относительной влажности и содержания аммиака превышают предельно допустимые значе ния на 7,1 % и 10,0 % соответственно. Общая микробная обсемененность воздуха в помещении превы шает гигиенический норматив на 31,8 %.

Выявленные нарушения параметров микроклимата в помещении телят создают предпосылки для снижения резистентности организма и увеличения заболеваемости телят респираторными заболе ваниями.

Предварительно телята были разделены на изолированные друг от друга опытную и контроль ную группы по 50 телят в каждой.

Далее была проведена аэрозольная дезинфекция телятника, где содержались телята опыт ной группы, комплексным препаратом Вироцид методом горячего тумана 20-м % раствором Вироцида в дозе 5 мл рабочего раствора на 1 м помещения без использования дополнительных добавок при помощи термомеханического аэрозольного генератора F 35 компании «Игеба». Телята контрольной группы содержались в станках без аэрозольной обработки.

После проведение обработки телятника Вироцидом было проведено исследование параме тров микроклимата (таблица 2).

Таблица 2 – Параметры микроклимата в телятнике после дезинфекции Показатели Величина Температура, С 7, Относительная влажность, % 77, Скорость движения воздуха, м/с 0, Концентрация аммиака, мг/м 7, Общая микробная обсемененность, т.м.т./м 35, В результате проведенной дезинфекции в помещении снизились концентрация аммиака и об щая микробная обсемененность на 36,4 % и 32,8 % соответственно. При этом, значения концентрации аммиака и микробной обсемененности соответствовали гигиеническим нормам.

При изучении заболеваемости и сохранности телят в контрольной и опытной группах получе ны следующие результаты (таблица 3).

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Таблица 3 – Заболеваемость и сохранность телят Показатели Группы животных контрольная опытная 22 Заболеваемость телят, % Отход телят, % 8 Сохранность телят, % 92 Полученные результаты по изучению заболеваемости и сохранности свидетельствуют о за метном улучшении условий содержания телят.

Так, в контрольной группе у животных отмечен более высокий уровень заболеваемости (в 3, раза больше), что обусловило более высокий отход в данной группе по сравнению с телятами опытной группы. При этом, в основном, диагностировали у телят бронхопневмонию и гастроэнтерит.

Основные показатели, характеризующие интенсивность роста и развития телят представлены в таблице 4.

Таблица 4 – Продуктивность подопытных телят Группы животных Показатели контрольная опытная Средняя живая масса теленка в начале опыта, кг 57,4±2,59 57,5±3, Средняя живая масса животных в конце опыта, кг 70,4±8,72 71,2±5, Абсолютный прирост живой массы, кг 13,0±0,71 13,7±0, Среднесуточный прирост живой массы, г 433,3±21,73 456,7±19, Относительная скорость роста, % 20,3 21, Как показывают результаты исследований, проведенная аэрозольная обработка помещения для содержания телят способствовала повышению продуктивности телят на 5,4 %, по сравнению с животными контрольной группы, что свидетельствуют о более эффективном предупреждении заболе ваний различной этиологии у телят.

Заключение. Проведенная аэрозольная дезинфекция методом горячего тумана является эффективным приемом по профилактике болезней животных, повышает продуктивность животных и качество получаемой продукции, снижает расход ветеринарных препаратов, заболеваемость и отход молодняка, улучшая экономические показатели и прибыль предприятий.

Библиографический список:

1. Системы вентиляции современных помещений для содержания крупного рогатого скота / Г.М. Позин [и др.] // Информационные системы. – 2009. – № 2. – С. 58 – 60.

2. Спиридонов, С.Б. Оценка условий содержания крупного рогатого скота и пути их улучшения / С.Б. Спиридонов // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: материалы Международной научно-практической конференции, 20 – 22 января 2010 г. – Курск, Ч. 2. – Курск: Издательство Курской государственной сельскохозяйственной академии, 2010. – С. 185 – 187.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ВЛИЯНИЕ ТРОМБОДЕФЕНСИНОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ НА НЕКОТОРЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ Сычева М.В. к.б.н., доцент, Галиуллина Л.Ф., аспирант, Карташова О.Л., д.б.н., профессор Ключевые слова: катионные антимикробные пептиды, тромбодефенсины, бактерии, ан тагонистически активные вещества, bllu, антибиотики.

Аннотация: Тромбодефенсины сельскохозяйственных животных повышают чувствитель ность условно-патогенных микроорганизмов к антагонистически активным веществам лактоба цилл и к антибиотикам. Максимальное увеличение чувствительности к антагонистически актив ным веществам бактерий рода bllu отмечено у клонов S. uru и C. lb, к антибио.., тикам - у S. aureus к мономицину и E. coli к канамицину. Наибольший эффект наблюдается при соинкубировании бактерий с тромбодефенсинами кур.

В последние годы отмечаются значительные темпы роста бактериальных инфекций. Расшире ние спектра возбудителей, многообразие их свойств, рост антибиотикорезистентных штаммов диктуют необходимость поиска новых подходов к лечению бактериальных инфекций [6]. В данных условиях, важным арсеналом совершенствования терапевтических подходов является разработка нового поко ления препаратов на основе антимикробных пептидов, среди которых на сегодняшний день особое вни мание уделяется низкомолекулярным катионным белкам из тромбоцитов или тромбодефенсинам (ТД) [8]. Результаты исследований последних лет свидетельствуют о способности ТД изменять персистент ные характеристики микроорганизмов, влиять на биоплёнкообразование [4, 5]. Установлен противо микробный эффект тромбоцитарного катионного белка (ТКБ). Вместе с тем, в литературе отсутствуют сведения, касающиеся характера изменения таких признаков условно-патогенных микроорганизмов, как чувствительность к антибиотикам, а также к антагонистически активным веществам представителей нормальной микрофлоры микроорганизма в результате воздействия ТКБ. Расширенное изучение дан ного вопроса, на наш взгляд позволит по-новому подойти к решению проблемы лечения инфекционных заболеваний и коррекции дисбиозов.

Всё вышеизложенное и предопределило цель настоящего исследования - изучить влияние антимикробных пептидов из тромбоцитов сельскохозяйственных животных на антибиотикочувствитель ность и чувствительность условно-патогенных микроорганизмов к антагонистически активным веще ствам лактобацилл.

Материалы и методы.

В исследование были включены тромбодефенсины, выделенные из тромбоцитов лошадей, крупного рогатого скота и кур методом кислотной экстракции. Содержание белка в полученных кислот ных экстрактах определяли по методу М.М. Брэдфорда [7]. Изучено влияние кислотных экстрактов из тромбоцитов на антибиотикочувствительность штаммов Sphlu aureus и Escherichia coli и на чувствительность клонов Sphlu aureus, Candida albicans к антагонистически активным веще ствам бактерий рода bllu (штаммы L 364 и L 370), выделенных из репродуктивного тракта. Для оценки воздействия ТКБ на микроорганизмы суточные агаровые культуры культивировали с кислотны ми экстрактами из тромбоцитов (H 5,5–5,8) в минимальной подавляющей концентрации (МПК) и 1/ МПК, установленных нами ранее, в течение 1 часа при 370С с последующим высевом в объеме 0,2 мл на питательный агар. Оценка антибиотикочувствительности микроорганизмов до и после соинкубиро вания с ТКБ проведена с помощью диско-диффузионного метода [3].

Чувствительность условно-патогенных микроорганизмов к антагонистически активным веще ствам лактобацилл определяли помощью чашечного метода (принцип отсроченного антагонизма) [1].

Степень чувствительности к антагонистическим факторам лактобацилл условно-патогенных микроор Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ганизмов выражали с помощью коэффициента, который рассчитывали как отношение диаметра зоны задержки роста условно-патогенного микроорганизма к диаметру зоны роста культуры лактобацилл.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием -критерия Стьюдента [2].

Результаты исследований В результате проведенных исследований было установлено, что антимикробные пептиды из тромбоцитов сельскохозяйственных животных усиливали чувствительность S. аureus и C. albicans к антагонистически активным веществам бактерий рода bllu.

Максимальное увеличение чувствительности клонов S. aureus к антагонистическим факторам штамма L370 отмечено после соинкубирования с тромбодефенсинами крупного рогатого скота в МПК, при этом коэффициент антагонистической активности увеличился в 3,3 раза (15,2±6,51 против 4,6±1, в контроле) (рис.).

Коэфф. антагонистической Коэфф. антагонистической активности активности 2 1 0 МПК 1/4 МПК 1/4 МПК 1/ МПК 1/4 МПК 1/4 МПК 1/ МПК МПК МПК МПК МПК МПК контроль Лошадь Кр.рог.скот Куры контроль Лошадь Кр.рог.скот Куры L 364 L Рисунок - Влияние тромбодефенсинов сельскохозяйственных животных на чувстви тельность S. uus к антагонистически активным веществам лактобацилл Коэффициенты антагонистической активности для штамма L 364 в отношении S. aureus после соинкубирования с тромбодефенсинами крупного рогатого скота в МПК и МПК составили, соответ ственно, 4,8±1,02 и 8,4 ±2,31 против 3,72 ± 0,58 в контроле, а для штамма L370 – в МПК 7,6±3,8 про тив 4,6±1,43 в контроле. При воздействии тромбоцитарного катионного белка, полученного от других животных, на S. aureus также регистрировали выраженное изменение признака. Так, у клонов S. aureus при соинкубировании с ТКБ птицы в МПК отмечено увеличение чувствительности к антагонистически активным веществам L 370 в 1,9 раз, а при соинкубировании с кислотным экстрактом из тромбоцитов лошади в той же концентрации изучаемый показатель увеличивался в 2,6 раза. Также у клонов S. u-. au reus было установлено значительное изменение чувствительности к антагонистическим факторам L при соинкубировании с ТКБ птицы в МПК, с увеличением коэффициента антагонистической активности в 2,2 раза. Изменения значений чувствительности клонов S. aureus к антагонистически активным ве ществам лактобацилл были в пределах ошибки средней арифметической, а поэтому различия между величинами оказались недостоверными.

Следует отметить, что тромбодефенсины крупного рогатого скота по сравнению с антимикроб ными пептидами из тромбоцитов лошади и кур в наибольшей степени увеличивали чувствительность клонов S. aureus к антагонистически активным веществам лактобацилл.

При изучении влияния тромбодефенсинов лошади в МПК на чувствительность С. albicans к антагонистически активным веществам лактобацилл было установлено увеличение изучаемого показа теля в среднем на 35,45% (табл.1). При соинкубировании С. albicans с тромбодефенсинами лошади в МПК отмечено увеличение коэффициента в 2,1 раза для L364 (р0,05) и в 1,9 раза – для L370 (р0,05).

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Таблица 1. - Влияние тромбодефенсинов сельскохозяйственных животных на чувстви тельность C. bins к антагонистически активным веществам лактобацилл Коэффициент антагонистической активности лактобацилл L 364 L 5,5±1,20 6,6±1, Тромбодефенсины Контроль МПК 8,4±170 7,8±1, Лошади 1/4 МПК 11,7±2,04* 12,7±2,22* МПК 7,5±1,19 5,4±0, Крупного рогатого скота 1/4 МПК 12,1±1,65** 8,6±1, МПК 12,8±1,27** 14,9±1,74** Кур 1/4 МПК 14,0±2,76* 9,8±2, римечание: * - достоверность различий коэффициента антагонистической активности в контроле и после соинкубирования с кислотным экстрактом тромбоцитов (р0,05);

** - (р0,01).

В меньшей степени изменялась чувствительность С. albicans к антагонистически активным ве ществам лактобацилл под действием кислотного экстракта из тромбоцитов крупного рогатого скота. В среднем изучаемый показатель увеличивался на 18,2% после соинкубирования с тромбодефенсинами в МПК. Более существенное изменение рассматриваемого параметра было отмечено при соинкуби ровании С. albicans с ТД в МПК. Коэффициент антагонистической активности для bllu составил 12,1±1,65 против 5,5±1,20 в контроле (р0,01), для bllu 370 – 8,6±1,20 против 6,6±1, 35 в контроле.

Максимальное изменение признака наблюдали при воздействии на микроорганизмы тромбо дефенсинами кур. Так, под влиянием ТКБ кур в МПК отмечалось увеличение коэффициента антагони стической активности лактобацилл L 364 и L 370 в отношении С. albicans в 2,3 раза. Разница значений по сравнению с контролем в обоих случаях достоверна (р0,01). Коэффициент антагонистической ак тивности L 364 и L 370 в отношении С. albicans после соинкубирования с кислотным экстрактом из тром боцитов птицы в МПК возрастал по сравнению с контролем в 2,5 (р0,05) и 1,5 раза соответственно.

В ходе проведенных исследований было установлено, что в целом, тромбодефенсины повы шают антибиотикочувствительность микроорганизмов. Степень выраженности данного признака как у штаммов E. coli, так и у штаммов S. aureus под влиянием ТКБ, выделенных от разных животных, за висела от его концентрации и от антибиотика, в отношении которого определяли чувствительность.

Максимальное повышение антибиотикочувствительности отмечено у E. coli под влиянием ТКБ кур в минимальной подавляющей концентрации в отношении ломефлоксацина, средняя зона задержки ро ста штаммов составила 24,7±1,45 мм против 20,7±0,84 мм в контроле (р0,05). Также под влиянием ТКБ кур в 100% случаев выявлен эффект повышения чувствительности штаммов E.coli к ломефлоксацину, диаметр зоны подавления роста варьировал от 23,7±1,36 мм до 24,7±1,45 мм.

Как показали наши исследования, антимикробные пептиды из тромбоцитов кур повышали чув ствительность штаммов E. coli также и к остальным изученным антибиотикам. При сокультивировании с ТКБ кур в МПК зарегистрировано повышение чувствительности к левомицетину на 6,8% (20,5±0, против 19,2±0,75 в контроле), при сокультивировании с 1/4 МПК чувствительность к канамицину увели чивалась на 11,6% (17,2±1,68 против 15,2±2,54 в контроле).

Наиболее подверженной влиянию изученных тромбодефенсинов оказалась чувствитель ность штаммов E. coli к канамицину. Максимальное изменение данного признака под воздействием кислотного экстракта из тромбоцитов установлено при сокультивировании с тромбодефенсинами ло шади и крупного рогатого скота в МПК, что составило 18,8±1,17 мм и 19,0±1,75, соответственно, против 15,2±2,54 в контроле (табл.2).

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Таблица 2. - Влияние тромбодефенсинов сельскохозяйственных животных на антибио тикочувтвительность E. i Зоны задержки роста, Sx ± x Тромбодефенсины онтроль левомицетин канамицин ломефлоксацин 19,2±0,75 15,2±2,54 20,7±0, МПК 20,3±0,76 18,8±1,17 21,7±1, Лошади 1/4 МПК 19,3±0,95 16,0±2,0 22,3±0, МПК 20,5±0,89 15,2±0,54 24,7±1,45* Кур 1/4 МПК 19,0±0,63 17,2±1,68 23,7±1, МПК 20,7±1,20 19,0±1,75 21,8±1, Крупного рогатого скота 1/4 МПК 19,8±1,40 16,5±1,61 21,5±1, римечание: * - достоверность различий показателя антибиотико-чувствительности в контроле и после соинкубирования с кислотным экстрактом тромбоцитов (р0,05).

Как показали наши исследования, максимальное изменение изучаемого признака отмечено при сокультивировании S. aureus с ТКБ из тромбоцитов крупного рогатого скота в МПК. При сокультиви ровании штаммов с данным препаратом чувствительность к мономицину, левомицетину, канамицину, олеандомицину и эритромицину увеличилась на 13,7%, 2,3%, 11,5%, 1,03%, 6,7%, соответственно. При этом установлено, что все препараты наиболее эффективно изменяли чувствительность штаммов к мономицину: значения данного признака увеличивались на 9,8% при соинкубировании с тромбодефен синами лошади в МПК, на 13,7% при соинкубировании с тромбодефенсинами птицы в МПК и крупно го рогатого скота в минимальной подавляющей концентрации (табл. 3). В результате исследований не было установлено зависимости между концентрацией тромбодефенсинов и степенью их активности.

Таблица 3. - Влияние тромбодефенсинов сельскохозяйственных животных на антибио тикочувтвительность S. uus Зоны задержки роста, Sx ± x Тромбо Контроль мономицин левоми-цетин кана-мицин олеандо-мицин эритро-мицин дефен-сины 18,2±1,42 21,3±0,61 21,8±0,60 19,5±0,62 22,5±0, МПК 20±0,45 22,3±0,71 23,0±1,03 19,2±1,11 24,3±0, Лошади 1/4 МПК 19,7±0,80 21,8±0,65 25,0±2,37 20,5±0,96 23,8±1, МПК 19,5±0,72 20,8±2,30 22,0±0,25 19,8±0,87 23,3±0, Кур 1/4 МПК 20,7±0,61 21,8±0,65 23,8±2,10 18,2±0,65 19,7±1, МПК 20,7±0,76 21,8±0,79 24,3±1,26 19,7±0,67 24,0±0, Кр. рог.

скота 1/4 МПК 19,8±0,60 21,0±0,68 22,5±0,72 18,5±0,72 23,3±0, Заключение Таким образом, тромбодефенсины сельскохозяйственных животных оказывают стимулирую щее влияние на чувствительность условно-патогенных микроорганизмов к антагонистически активным веществам бактерий рода bllu и чувствительность микроорганизмов к антибиотикам. Наибо лее выраженную активность в отношении антибиотикочувствительности штаммов S. aureus проявляли тромбодефенсины крупного рогатого скота в отношении E. coli - ТКБ кур. Максимальное увеличение антибиотикочувствительности установлено у S. aureus к мономицину и E. coli к канамицину.

В ходе проведенного исследования отмечено максимальное повышение чувствительности S. aureus к антагонистическим факторам лактобацилл 364 под воздействием тромбоцитарного кати онного белка крупного рогатого скота. Однако, наиболее выраженным стимулирующим действием на чувствительность C. аlbicans к факторам межмикробного взаимодействия лактобацилл обладает кис лотный экстракт из тромбоцитов птицы.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Известно, что большинство антимикробных пептидов эндогенного происхождения, в том числе и тромбодефенсины, являются мембраноактивными агентами [9]. Полученные нами данные позволяют предположить, что соинкубирование с ТД приводит к изменению структуры и функции цитоплазмати ческих мембран, что способствует проникновению в микробную клетку антибиотических веществ, об уславливающих антагонистическую активность лактобацилл в отношении условно-патогенных микро организмов, а также синтетических антибиотиков.

Список литературы 1. Кудлай Д.Г. Бактериоциногения / Д.Г. Кудлай, В.Г. Лиходед. - М.: Медицина, 1966. - 203 с.

2. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - М.: Высшая школа, 1990. - 288 с.

3. Методические указания МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганиз мов к антибактериальным препаратам» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 4 мар та 2004 г.).

4. Сычёва М.В. Влияние тромбодефенсинов некоторых видов животных на антилактоферри новую активность микроорганизмов / М.В. Сычёва, Е.В. Шейда, О.Л. Карташова // Ученые записки Ка занской государственной академии ветеринарной медицины им. Н..Баумана. - Казань. – 2010. - С.

256-259.

5. Сычева М.В. Влияние антимикробных пептидов из тромбоцитов сельскохозяйственных жи вотных на способность микроорганизмов к образованию биопленок / М.В. Сычёва, Е.В. Шейда, О.Л.

Карташова И.В. Валышева // Известия КрасГАУ. – 2011. -№1. – С. 130-132.

6. Яковлев В.П. Рациональная антимикробная фармакотерапия / В.П. Яковлев, С.В. Яковлев.

- М.: Мир, 2008.- 1001 с.

7. Bdd M.M. A d d v d qu g qu ulg l -dy bdg / M.M. Bdd // Al. Bv. - 1976. - Vl. 72. – P. 248-254.

8. g Y.. Abl d u ll /.Y. g, M.R. Y, M.E. Sld // I d Iuy. – 2002. - Vl. 70. - №12 - P. 6524-6533.

УДК 619:636:616-093-08- ОПТИМИЗАЦИЯ КОНТРОЛЯ ОСНОВНЫХ ХОЗЯЙСТВЕННО-ЗНАЧИМЫХ БАКТЕРИОЗОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Л.Г. Улько, кандидат ветеринарных наук, доцент Т.И. Фотина, доктор ветеринарных наук, профессор А.В. Березовский, кандидат ветеринарных наук, доцент А.А. Фотина, кандидат ветеринарных наук, доцент Сумский национальный аграрный университет, Украина (0542) 62-78-58, larisau@ukr.net Ключевые слова: микрофлора, антибиотикорезистентность, бактериозы, крупный рога тый скот, лечение, профилактика Работа посвящена изучению антибиотикорезистентности микрофлоры изолированной от коров с ассоциативным течением бактериозов и разработке эффективной схемы их лечения и профилактики.

Введение. Среди заболеваний крупного рогатого скота наиболее распространенными остают Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ся маститы, гнойно-некротические поражения дистального отдела конечностей и метриты. Они наносят значительный экономический ущерб производителям молока, которые формируются за счет недополу чения и значительного снижения его качества, преждевременной выбраковки коров и затрат на лечение [1-3].

Как показывают исследования, этиопатогенез гнойно-некротических заболеваний дистального отдела конечностей, маститов и метритов имеет сложный, многокомпонентный характер, а в их воз никновении и развитии есть общие звенья. В частности, это условно-патогенная микрофлора, которая объединяясь в ассоциации, действует как единый инфекционный агент [4-7]. Ситуация усложняется тем, что большинство штаммов микроорганизмов ассоциации вызывающей патологический процесс резистентны ко многим дезинфектантам и антибактериальным препаратам [8].

Применение антибиотиков в таких случаях часто не дает ожидаемых результатов, а длитель ное бессистемное их использование приводит к повышению антибиотикорезистентности бактерий, по тери продукции вследствие ее браковки в течении курса лечения и накопления остаточного количества антибиотиков в молоке и продуктах убоя животных [9]. К тому же, недостатком применения монопрепа ратов, является низкая терапевтическая эффективность, так как они влияют на определенный микро организм, а не на всю ассоциации, что приводит к хронизации патологического процесса, который в дальнейшем не поддается лечению и отсутствию выраженного противомикробного действия.

Поэтому, ветеринарная практика требует эффективных комплексных мероприятий по борьбе с ассоциативными бактериозами крупного рогатого скота.

Целью нашей работы было определение антибиотикорезистентности микрофлоры изолиро ванной от коров и разработка лечебно-профилактических мероприятий при ассоциированных бактери озах.

Материалы и методы исследований. Материалом для исследования были пробы патологического материала от крупного рогатого скота с гнойно-некротическими пора жениями дистального отдела конечностей, маститами и метритами. Изоляцию и идентификацию микрофлоры проводили по общепринятым методикам.

Чувствительность изолированных микроорганизмов к химиотерапевтическим средствам опре деляли методом разведений в жидкой питательной среде. Исследованию на чувствительность к анти биотикам подлежали чистые культуры микроорганизмов. Материал для посева брали от коров с гной но-некротическими поражениями дистального отдела конечностей, больных маститами и метритами, производили посев на соответствующий набор питательных сред, необходимых для выделения чистых культур различных видов микроорганизмов и определяли минимальную подавляющую рост микроорга низма концентрацию антибиотика.

Результаты исследований и их обсуждение. В течение 2010 года нами было обследовано 4280 коров. Гнойно-некротические поражения дистального отдела конечностей выявлены у 19,51%, маститы - у 27,64%, метриты – у 11,01% животных. Одновременное течение гнойно-некротических по ражений дистального отдела конечностей и мастита регистрировали у 11,94% коров, гнойно-некроти ческих поражений конечностей и метрита - у 11,94%, метрита и мастита - у 4,3%,. Мастит, метрит и патологию конечностей выявляли у 2,27% обследованного поголовья.

При бактериологическом исследовании проб патматериала от коров с гнойно-некротическими поражением дистального отдела конечностей выделены культуры Sylu uu, Su yg, Su аl, E l, Pud ug, Klbll u, Cldu g, Cldu u, Fuоbu u и Pu vulg.

Из секрета вымени коров, больных клиническим маститом были изолированы следую щие микроорганизмы: Sylu uu, Sylu u, Su yg, Su gl, E l и Pu vulg.

Из содержимого матки коров, больных эндометритом, чаще выделяли Sylu uu, Su yg, E l, Klbll u и Pu vulg.

Из воздушной среды и хозяйственных объектов наиболее часто изолировали культуры Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Sylu uu, Sylu u, Sylu lbu, Su yg, E l, Pud ug, Klbll u и Pu vulg.

Таким образом, полученные результаты указывают на то, что микрофлора изолирована из воздушной среды, хозяйственных объектов животноводческих помещений и от животных с патологией конечностей, маститами и метритами сходна по видовому составу и является одним из источников кон таминации органов и тканей болезнетворными микроорганизмами.

При изучении чувствительности изолированных микроорганизмов к антибиотикам и некото рым антисептикам установлено, что большинство из них устойчивы к ампициллину, канамицину, линко мицину, неомицину, стрептомицину, эритромицину и пенициллину (табл. 1).

Таблица 1. - Чувствительность микрофлоры к антибиотикам S. saprophiticus F. necrophorum K. pneumoniae C. perfringens P. aeruginosa S. agalactiae S. pyogenes C. septicum S. fаecalis P. vulgaris S. aureus S. albus Антибакте E. coli риальные средства Апмициллин 0 2 1 0 1 1 0 0 1 1 2 0 Гентамицин 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 Канамицин 1 1 1 0 0 1 1 0 1 2 1 0 Левомицетин 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Линкомицин 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 Неомицин 1 1 2 0 0 1 1 1 1 0 0 0 Пенициллин 0 1 1 0 1 1 0 0 1 0 1 1 Стрептомицин 1 1 0 0 0 0 0 1 0 1 0 0 Тетрациклин 1 2 2 2 2 1 1 2 1 1 2 1 Тиамулин 2 2 1 2 1 2 2 1 2 2 2 2 Тилозин 1 2 2 1 2 0 1 2 1 1 0 1 Эритромицин 1 1 2 0 0 1 0 0 1 1 0 1 ВетОкс-1000 2 2 2 2 1 1 2 1 1 2 2 2 Бровадез плюс 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 римечание: 0 - устойчивые, 1 - среднечувствительные, 2 - чувствительные.

Практически все культуры чувствительны к дезинфектанту Бровадез плюс и антисептику Ве тОкс-1000.

Изолированные штаммы проявили среднюю чувствительность к гентамицину и левомицетину.

Большинство штаммов были чувствительны к тетрациклину, тиамулину и тилозину.

Исходя из результатов исследований, был разработан новый комбинированный препарат на основе тилозина и тиамулина – ТимТил, который активен ко всему спектру микроорганизмов изолиро ванных от животных при ассоциативных бактериозах.

Применение препарата ТимТил в ряде хозяйств Сумской, Черниговской и Полтавской обла стей Украины, показало высокую терапевтическую эффективность данного препарата при ассоцииро ванных бактериозах крупного рогатого скота (86-100%) Ввиду того, что изолированная микрофлора проявляла чувствительность к антисептику Ве тОкс-1000 и дезинфектанту Бровадез плюс, эти средства также были включены в комплексную схему лечебно-профилактических мероприятий при ассоциативных бактериозах крупного рогатого скота.

Полный дезинфицирующий эффект против Fuоbu u, Cldu g, Cldu d, Cldu u, E. Cl, Pu vulg, стрептококков и стафилококков достигается применением 0,5-1%-ного раствора Бровадеза плюс. При этом, дезинфекция проводиться в присутствии животных.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Препарат ВетОкс-1000 в схеме лечебно-профилактических мероприятий используется для местной санации очага поражения (на рану, внутриматочно или внутрицестернально, в зависимости от локализации патологического процесса). Перед применением его необходимо развести 0,9%-ним рас твором натрия хлорид в соотношении 1:2 или 1:3.

Разработанная схема лечения и профилактики ассоциированных бактериозов крупного рога того скота позволила сократить заболеваемость животных в хозяйствах Северо-Восточной зоны Укра ины в 3,2 раза.

Заключение. Применение комплекса лечебно-профилактических мероприятий при с исполь зованием комбинированного антибиотика ТимТил, антисептика ВетОкс-1000 и дезинфектанта Брова дез плюс позволяет контролировать основные бактериозы крупного рогатого скота Библиографический список:

1. Никулин В.Н. Бактериальный фон при заболеваниях дистального отдела конечностей / В.Н.

Никулин // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии, Троицк, 2004 – С. 93.

2. Панько І.С. Гнійно-некротичні хвороби пальців у високопродуктивних корів / І.С. Панько, М.В.

Петрик – К.: 2007. – 62 с 3. Гудимова Т.Е. Болезни гениталий и маститы / Т.Е. Гудымова // Ветеринария. – 1986. – № 8.

– С. 4. Попов Ю.Г. Значение условно-патогенной микрофлоры при массовых болезнях крупного рогатого скота / Ю. Г. Попов // Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологи животных:

Мат. междунар. науч.- произв. конф. - СПб, 2004.- С. 103- 5. Бортнійчук В. Роль мікробного фактора в етіології ендометриту в корів / В. Бортнійчук, В.

Любецький, Г. Хмельницький, Л. Хмельницький // Ветеринарна медицина України. — 2002. — №3. — С.

41 – 42.

6. Гараздюк Г.В. Моніторинг маститів корів у Чернівецькій області / Г.В. Гараздюк // Ветеринар на медицина України. — 2008. — №7. — С. 39 – 40.

7. Фотіна Т.І. Значення мікробних асоціацій у патогенезі гнійно-некротичних уражень дисталь ного відділу кінцівок у високопродуктивних корів / Т.І. Фотіна, Л.Г. Улько // Міжвід наук. темат. збірник «Ветеринарна медицина», - Харків, 2009. С. 510-512.

8. Фотіна Т.І. Визначення чутливості мікрофлори, ізольованої із гнійно-некротичних вогнищ кінцівок корів до антибактеріальних препаратів / Т.І. Фотіна, Л.Г. Улько // Науковий вісник Національного університету біоресурсів і природокористування України - К., 2010.- Вип. 151. - Ч. 1.- С. 294- 9. Улько Л.Г. Вплив захворювань корів, викликаних умовно-патогенною мікрофлорою, на склад і якість молока / Л.Г. Улько, Т.І. Фотіна // Міжвід наук. темат. збірник «Ветеринарна медицина» - Харків, 2010.- № 94. С. 334-335).

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК 619: ИЗУЧЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ РОДА BACILLUS К РАЗЛИЧНЫМ КОНЦЕНТРАЦИЯМ ХЛОРИДА НАТРИЯ В.А. Макеев, аспирант кафедры МВЭиВСЭ УГСХА М.А. Юдина, аспирант кафедры МВЭиВСЭ УГСХА А.Х. Мустафин, аспирант кафедры МВЭиВСЭ УГСХА А.И. Калдыркаев, соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Н.А. Феоктистова, к б н, доцент кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Мерчина С.В., к б н, ст преподаватель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Тел. 8(84231)55-95-47, feokna@yandex.ru Целью данного исследования было изучение чувствительности бактерий видов Ваllu - cillus ce ru, llu ubl, Ваllu ru, Ваllu d. Вышеназванные бациллы являются очень распространенными контаминантами пищевых продуктов и могут вызывать серьезные пищевые отравления человека и животных.

Бациллы, микроорганизмы, хлорид натрия, пищевые отравления, концентрации, мясо, мя сопродукты.

Некоторые микроорганизмы сохраняют жизнеспособность даже в сухой поваренной соли. В свежей озерной соли содержится до 200 тыс. клеток на один грамм. При длительном хранении соли оно снижается до сотен на один грамм. Среди этих микроорганизмов найдены: спороносные и неспо роносные, палочки, кокки, сарцины, плесневые грибы и др. В числе бактерий, сохраняющихся в соли, могут быть протеолитические и липолитические. Стало быть, соль может явиться одним из источников заражения рассолов и продуктов вредоносными микроорганизмами. Поэтому соль, употребляемую для посола пищевых продуктов, необходимо прокаливать или высушивать, если она чрезмерно загрязнена [3]. Характер влияния хлористого натрия на микроорганизмы свидетельствует о том, что он не обладает бактерицидным действием. Его действие сводится в основном к подавлению развития большинства микроорганизмов. Такое действие вызвано частично высоким осмотическим давлением в его раство рах, которое вызывает большее или меньшее обезвоживание клеток микроорганизмов, изменение, их размеров и формы и нарушение водного обмена. Неодинаковое влияние осмотического давления растворов соли на различные микроорганизмы в значительной мере объясняется различием в уровне обмена веществ этих микроорганизмов. Наиболее выносливы к действию хлористого натрия плесени, грамположительные кокки;

менее выносливы бациллы, наиболее чувствительны грамотрицательные палочки, не образующие спор. К числу последних относится большинство гнилостных аэробов. Чув ствительность к действию соли обнаруживают также и многие гнилостные анаэробы [4].

Действие растворов хлористого натрия на микроорганизмы не может быть, однако, объяс нено, исходя только из влияния осмотического давления. Растворы сернокислого магния обладают более сильным водоотнимающим действием, тем не менее, сернокислый магний дает меньший кон сервирующий эффект. Специфичность действия хлористого натрия объясняется его влиянием на фер ментативную деятельность бактерий (например, протей теряет способность разжижать желатин при концентрации, значительно меньше той, при которой прекращается его рост). Большое значение для жизнедеятельности клеток имеет подвижность ионов консервирующего вещества.

Специфичность консервирующего действия объясняется также и наличием иона хлора. Как показали опыты, ион хлора в большей степени подавляет деятельность микроорганизмов, чем неко торые другие анионы, например бром-ион, сульфат-ион.Подавление жизнедеятельности гнилостных микроорганизмов при посоле мяса происходит не только за счет действия хлористого натрия, но также Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы в результате развития в рассоле и продукте микробов - антагонистов гнилостных бактерий. Из рас сола выделены непатогенные культуры с ярко выраженным антагонизмом к гнилостным спороносным аэробам и анаэробам и более слабо выраженным к протею и кишечной палочке. В старых и стерилизо ванных рассолах таких антагонистов меньше и действие их слабее. Антагонизм некоторых микробов к гнилостным бактериям проявляется только при достаточно высоких концентрациях рассола [6].

Таким образом, соль не обезвреживает продукт, пораженный многими из патогенных бактерий, не приостанавливает развития некоторых микробов, способных вызвать порчу продукта, содержащего значительное количество влаги. Поэтому при необходимости хранить мясопродукты длительное время консервирование солью должно быть дополнено какими-либо другими способами предохранения про дукта от порчи: низкими температурами, частичным обезвоживанием, копчением, обработкой антисеп тиками.

Вас. mesentericus относится к микроорганизмам, вырабатывающим протеолитические фер менты, которые расщепляют белок до конечных продуктов, поэтому называется «микробом гниения».

Процесс психрофильного поверхностного гниения протекает в 5 фаз и, как известно, сопровождается сменой микроорганизмов. В первой фазе очень медленно развиваются бактерии рода llu (llu subtilis и Вас. mru) [2]. Sfl описал «размягчение колбасных изделий». Возбудителями этого процесса они называют бактерии группы Вас.ru-subtilis, которые вызывали порчу колбасных изделий в течение двух - шести дней после изготовления [5]. Микробиологическое исследование боль шого количества проб мясного фарша провела Е. Динчева в Болгарии. При исследовании более партий фарша установлено, что общее количество бактерий колебалось в пределах 106 - 1010 клеток/г.

После хранения фарша при температуре 4° С в течение 48 ч количество бактерий увеличивалось в два - восемь раз. Спорообразующие аэробные бактерии - преимущественно Вас.ru-subtilis, Вас. pudoanthracis (31,5% проб) - обнаружены в трети проб [1]. Ряд авторов обращает внимание на встречаемость в пищевых продуктах токсигенных культур этой группы, наличие у них факторов пато генности. Однако, вследствие недооценки возможной роли бацилл в патологии человека и животных, большинство авторов не исследовали токсичность выделенных культур.

Целью наших исследований было изучение воздействия различных концентраций хлорида натрия на вегетативные клетки бактерий видов Ваcillus cereus, llu subtilis, Ваcillus mru, Ваcillus d. Объектом исследований были референс-штаммы Ваcillus cereus 2527, llu subtilis 6633,. d 2701, полученные из музея кафедры МВ и ВС УГСХА» и штаммы бактерий видов Ваcillus cereus, llu subtilis, Вас. mru,. d, выделенные нами из проб специй, вхо дящих в рецептуру колбасных изделий, и идентифицированные по схеме Gd (1973) [5].

Методика исследований: суточные культуры бактерий видов Ваcillus cereus, llu subtilis, Вас. mru,. d высевались на мясо-пептонный агар, в рецептуру которого были вве дены растворы хлорида натрия в в концентрациях: 3, 5, 7, 10, 12 и 15 %. Посев производили газоном/ Использовали 0, 5 мл суточной бульонной культуры на 1 чашку. Посевы инкубировали в условиях тер мостата в течение 18-24 часов, затем проводили учет результатов, который представлен в таблице 1.

Анализ результатов проведенных исследовании свидетельствует, что культуры бактерий видов Ваcillus cereus, llu subtilis, Ваcillus mru, Ваcillus d, выделенные нами из проб специй про являют свойства факультативных галлофилов.

Таблица 1. - Изучение чувствительности бактерий рода Ваius различным концентра ius циям хлорида натрия Концентрация пищевой поваренной соли, % Название штамма 3 5 7 10 12 Наличие роста бактериальной культуры (определяются визуально) Ваcillus cereus 2527 + + + - - Ваcillus cereus 1 + + + + + Ваcillus cereus 3 + + + + + Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Bacillus subtilis 6633 + + - - - Bacillus subtilis 4 + + + + + Bacillus subtilis 8 + + + + + Вас. mesentericus 1 + + + + + Вас. mesentericus 2 + + + + + Вас. mesentericus 3 + + + + + Bac. mycoides 2701 + + - - - Bac. mycoides 1 + + + + + Bac. mycoides 2 + + + + + римечание: «+ - наличие роста на чашках етри, «- - отсутствие роста на чашках етри.

Они достаточно хорошо растут как при высоких концентрациях хлорида натрия, так и в при сутствии 1-2% соли. Однако, референс-штаммы бактерий видов Ваcillus cereus, llu subtilis, Ваcillus d проявляли свойства солетолерантных микроорганизмов. Они хорошо размножаются при не больших концентрациях (1-2%), дают слабый рост на средах, содержащих до 6-8% хлорида натрия, и длительное время сохраняют жизнеспособность при высоких ее концентрациях.

Полученные данные свидетельствуют о том, что так называемые «полевые штаммы микро организмов» более приспособлены к экстремальным факторам внешней среды, в отличие от рефе ренс-штаммов, которые при многочисленных пересевах, возможно, утратили свои некоторые свойства «записанные» на внехромосомных носителях наследственности.

Изучение свойств споровых микроорганизмов является, по нашему мнению, актуальным, т.к.

микроорганизмы обладают уникальными адаптивными возможностями, в частности способностью длительное время сохранять свою жизнедеятельность в неблагоприятных условиях. Довольно распро страненным и наиболее перспективным для практического использования, являются бактерии рода llu, которые являются очень распространенными контаминантами пищевых продуктов и могут вы зывать серьезные пищевые отравления.

На метаболитическом уровне хроническая интоксикация, вызываемая вышеуказанными ми кроорганизмами, приводит к разнонаправленным нарушениям водного и липидного обмена, угнетению синтеза балка и повышенному расходу энергии на нейтрализацию токсического действия: а в поддер живающем обмене – к нарушениям соотношения в утилизации белков и липидов, резкому снижению жизнеспособности, особенно в неблагоприятных условиях.

Полученные результаты будут полезны как в исследовательских, так и в практических целях.

Библиографический список:

1. Динчева Е. Микробиологическое изучение мясного фарша //Научные труды Высшего вете ринарно-медицинского института. – 1970, №22. – С.139-146.

2. Итоги науки и техники: микробиология. – М.: ВИНИТИ, 1989. – Т. 22. – С.142-153.

3. Окорокова Ю.И., Еремин Ю.Н. Гигиена питания - 3-е изд. - М. Медицина, 1981. – С. 35-39.

4. Сидоров М.А., Корнеева Р.П. Микробиология мяса и мясопродуктов – М.;

Колос, 1996. – С.

58-60.

5. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии – про дуценты биологически активных веществ – Киев: Наукова Думка, 1982. – С.117-120.

6. Руководство по ветеринарно-санитарной экспертизе и гигиене производства мяса и мясо продуктов/ Под ред. М.П. Бутко, Ю.Г Костенко. - М.;

Антиква,1994. – С.16-17.

Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УДК 619: АНАЛИЗ ИЗМЕНЕНИЙ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОВ БАКТЕРИЙ ВИДОВ ВАCILLUS CEREUS И BACILLUS SUBTILIS ПРИ ХРАНЕНИИ В.А. Макеев, аспирант кафедры МВЭиВСЭ УГСХА М.А. Юдина, аспирант кафедры МВЭиВСЭ УГСХА А.Х. Мустафин, аспирант кафедры МВЭиВСЭ УГСХА А.И. Калдыркаев, соискатель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Н.А. Феоктистова, к б н, доцент кафедры МВЭиВСЭ УГСХА Мерчина С.В., к б н, ст преподаватель кафедры МВЭиВСЭ УГСХА ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Тел. 8(84231)55-95-47, feokna@yandex.ru В статье дан анализ изменений литической активности фагов бактерий видов аllu ru и llu ubl при хранении в течение 21 месяца. Доказано, что хранение фагов свыше 1 года понижает литическую активность и делает бактериофаги менее чувствительными, что может отрицательно сказаться на результатах по индикации и идентификации бактерий видов llu ubl и Ваllu ru в объектах санитарного надзора.

Бактериофаг, Ваllu ru, llu ubl, литическая активность, индикация, иденти фикация, хранение.

Введение. Вопрос об изменении литической активности фагов при хранении в отношении бактериофагов рода llu в настоящее время остается открытым. При разработке биопрепарата на основе фагов для индикации и идентификации бактерий рода llu важным параметром для исполь зования с применением различных методик (реакция нарастания титра фага, реакция адсорбции фага, фаготетразоловый метод, метод «стекающей капли») являются сроки хранения биопрепарата. Анализ литературных данных по бактериофагам бацилл за последние 30 лет свидетельствует, что проблемой изучения литической активности в динамике никто из фагологов не занимался. Понижение литической активности бактериофагов, входящих в состав биопрепарата, до показателей 104 – 105 по Грациа может привести к Общеизвестно, что роль бактериофага как средства терапии и профилактики некоторых инфекционных заболеваний в настоящее время невелика, а значение для лабораторной диагностики ряда пищевых инфекций этот биологический объект не только не утратил, а, наоборот, начал привле кать к себе все более пристальное внимание исследователей. С каждым годом повышается значимость бактериофагов как высоко специфического диагностического средства, позволяющего надежно диф ференцировать возбудителей бактериальных видов, а порой проводить более детальную дифферен циацию отдельных типов и вариантов внутри вида бацилл. Возможность фагоидентификации вытекает из специфичности действия фагов, которая может быть настолько выражена, что позволяет диффе ренцировать не только отдельные виды, но и серологически неотличимые штаммы в пределах одного вида [2].

Поэтому все большее число исследователей предпочитают обращаться к фаговым тестам, как единственному средству, способному дифференцировать близкородственные штаммы [1,4,5].

Благодаря типовым бактериофагам можно изучить мониторинг распространения бактерий, возможность установить источник и путь передачи инфекционного заболевания, т.е. провести его эпидемиологический анализ. Так в Канаде в промежуток с 1986 по 1993 было отобрано 146 изолятов llu ru, причастных к 18 вспышкам пищевого отравления. Из них 142 штамма было разделено на 17 типов фагов [6].

Первоначально нами были выделены и селекционированы бактериофаги видов Ваllu llu ce reus и llu subtilis, изучены их биологические свойства и сконструированы экспериментальные био Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения Актуальные проблемы заразных болезней животных, микробиологии, биотехнологии и ветеринарно-санитарной экспертизы препараты «B-УГСХА» (B-13 и B-16 серии УГСХА) и «Вс-УГСХА» (Bс-4 и Bс-8 серии УГСХА). Для разработки технологических параметров изготовления биопрепаратов на основе фагов необходимо установить как происходит изменение литической активности указанных фагов при хранении.

Методика. Фаги бактерий видов Ваcillus cereus и llu subtilis после изучения их биологи ческих свойств герметично закрывали во флаконы с мясо-пептонным бульоном и хранили при темпе ратуре 2-4 0С. Периодически флаконы вскрывали и определяли их литическую активность методом агаровых слоев по Грациа [3].

Метод посева агаровыми слоями по Грациа. Накануне опыта по чашкам разливали 1,5 % мя сопептонный агар. Перед использованием чашки подсушивали в термостате 15-20 минут. Индикатор ные выращивались в условиях термостата в течение 18-20 часов при 37 0С на мясо-пептонном бульоне.



Pages:     | 1 |   ...   | 6 | 7 || 9 | 10 |   ...   | 12 |
 



 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.