авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |

«Материалы международной научно-практической конференции «Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой ...»

-- [ Страница 2 ] --

Calculations and Considerations// Current Pharmaceutical Biotechnology, 2010, 11, 58- 4. Адамс М. Бактериофаги. – М.: Изд.ин. литературы,1961. – 527с.

5. Тихоненко А.С. Ультраструктура вирусов бактерий. – М.: Наука, 1968. – 89с.

6. Ackermann H.W., Dubow M.S. Viruses of prokaryotes. V.1. General properties of bacteriophages. CRC Press, Boca Raton, FL., 1987. - p. 96.

BACTERIOPHAGES IN SALMONELLOSIS CHICKENS Lenev S.V.

Key words: samoneoss, baterophages, antbots, hkens, preventon, treatment Gven the resuts of the stuy of booga propertes of baterophages S. Enterts, S.

Typhmurum an S. Ganarum, as we as the omparson of the ta atons of phages an antbots for Samonea.

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ БАКТЕРИОФАГОВ:

КРАТКИЙ ОБЗОР Лыско К.А., Игнатьев Г.М., Отрашевская Е.В.

ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России, г. Москва Ключевые слова: антибактериальные препараты, антибиотики, антибиотикорези стентность, бактериофаги, бактериальные инфекции, производство, фаготерапия.

В обзорной статье приведены основные ерты, характеризующие современное со стояние производства и применения леебно-профилактиеских препаратов бактериофа гов в России и за рубежом. редставлен переень выпускаемых препаратов бактериофагов, оерена область применения, приведены конкретные примеры использования препаратов в клиниеской практике и в комплексе противоэпидемиеских мероприятий. Также сформу лированы основные преимущества препаратов бактериофагов в сравнении с препаратами антибиотиков.

В ноябре 2009 года в Москве в рамках круглого стола «Эра антибиотиков заканчивает Бактериофаги в медицине и ветеринарии ся: альтернативные возможности в антибактериальной терапии» представителем объединен ной рабочей группы ECDC и EMEA был особо отмечен тот факт, что в период с 70-х по 90-е годы прошлого века не было открыто ни одного нового класса антибиотиков. Лишь в 2000-х годах появились препараты класса циклических липопептидов и оксазолидинонов. Например, линезолид был допущен в медицинскую практику в США в апреле 2000 года. Но мутанты, устойчивые к данному препарату, стали выявляться в клиниках меньше, чем через год [1].

Экономический ущерб, наносимый возникновением антибиотикорезистентных форм бакте рий, исчисляется десятками и сотнями миллионов долларов [2]. В сложившейся ситуации до стойную альтернативу антибиотикам в терапии множества заболеваний бактериального проис хождения способны составить бактериофаги (фаги), которые уже имеют историю успешного применения в мировом масштабе.



Бактериофаги широко применялись для лечения различных заболеваний с 20-х годов ХХ века как в СССР, так и за рубежом: в США, Канаде, в странах Западной и Восточной Евро пы, странах Ближнего Востока и Африки. Даже не смотря на начало «эры антибиотиков» в 50 60-ых годах производство нескольких фаговых препаратов для медицинского использования продолжилось в Западной Европе, США, Африке.

Сегодня промышленное производство лечебно-профилактических препаратов осу ществляется в Российской Федерации и Грузии. В польском центре препараты бактериофагов нарабатываются в ограниченном количестве для экспериментальной терапии. В 2010 – 2011 го дах начато производство бактериофагов на Украине. Компанией Intralytix Inc. в 2008 году была завершена фаза I клинических испытаний препарата бактериофагов, содержащего восемь фа гов, специфически лизирующих P. aerugnosa, S. aureus и E. coli. Показана безопасность пре парата при лечении венозных язв. В 2007 году специалисты Novolytics Limited начали работы по созданию интраназальных мази и капель для профилактики и лечения внутригоспитальных инфекций, вызываемых метициллин-резистентными S. aureus (MRSA). Проведение клиниче MRSA). ).

ских исследований данных препаратов планировалось в 2009 году, но на сегодняшний день более подробная информация отсутствует. В 2008 году была завершена фаза II клинических исследований поливалентного препарата бактериофагов BioРhage-PA, показавшая его эффек тивность и безопасность. Препарат предназначен для терапии хронических отитов, вызывае мых антибиотикорезистентными штаммами P. aerugnosa. В марте 2009 компания получила разрешение на проведение фазы III клинических исследований. [3-8].

В последнее время и в России набирают обороты исследования в области бактерио фагов [9, 10]. Так, НПЦ «МикроМир» разработан лечебно-профилактический препарат бак териофагов для профилактики и лечения гингвита и пародонтита «Фагодент». Информации о составе препарата в открытых источниках нами не обнаружено. Так же отсутствуют сведения о данном препарате в Государственном реестре лекарственных средств. В начале 2013 года ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора получено свидетельство о госу дарственной регистрации специализированного пищевого продукта для диетического (профи лактического) питания «Фудфаг». В гигиенической характеристике указано, что БАД обладает специфической литической активностью в отношении 5 видов бактерий. На конференции до кладывалось, что разработанная БАД показана для профилактического применения декрети рованному контингенту, занятому на пищевых производствах и предприятиях общественного питания.

Т.о., единственным производителем лечебно-профилактических препаратов бактери офагов на территории России является ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России. На про изводственных площадках в городах Уфа, Пермь и Нижний Новгород лечебно-профилактиче ские препараты бактериофагов производятся с 40-х годов прошлого века по сей день.





Бактериофаги в медицине и ветеринарии Производство лекарственных средств осуществляется под контролем государствен ных органов, что гарантирует качество, безопасность и эффективность препаратов бактери офагов. Кроме того, коллекция производственных штаммов бактерий ежегодно обновляется, т.е. препараты бактериофагов регулярно адаптируются к актуальным циркулирующим бакте риальным возбудителям.

В России и странах СНГ препараты бактериофагов применяют для профилактики и лечения широкого спектра заболеваний (таблица 1).

Таблица 1 - Лечебно-профилактические бактериофаги Наименование пре- Спектр антибактериаль Область применения парата ной активности Бактериофаг дизен- Лечение больных дизентерией и профи Shgea sonnae, exner терийный полива- лактика данного заболевания. Санация 1,2,3,4,6 serotypes лентный реконвалесцентов.

Бактериофаг саль Samonea Serogroups монеллезный гр. Лечение и профилактика сальмонеллезов.

A,В,С,D,E.

ABCDE Лечение и профилактика гнойных инфек Stapyoous aureus и рядций кожи, слизистых, вызванных стафи других видов коагулазоо Бактериофаг стафи- лококками, а также при дисбактериозах.

трицательных стафило лококковый Применяется для лечения циститов, холе кокков циститов, острых тонзиллитов, энтероко литов и др.

Лечение и профилактика гнойно-воспа лительных и энтеральных заболеваний, а Бактериофаг стреп Streptoous, Enteroous также дисбактериозов. Обработка после тококковый операционных и свежеинфицированных ран (в т.ч. с профилактической целью).

Лечение и профилактика гнойных инфек ций, вызванных протейными бактериями, Бактериофаг протей Proteus vugars, mrabs а также при дисбактериозах. Применяет ный ся для лечения абсцессов, гнойно-ослож ненных ран, циститов и др.

Лечение и профилактика инфекций кожи и внутренних органов: гнойно-осложнен Энтеропатогенная Eh- ные раны, ожоги, абсцессы, плевриты.

Бактериофаг коли erha coli Применяется для лечения циститов, энте роколитов, токсикоинфекций, а также для профилактики колиинфекций.

Лечение заболеваний различных органов и гнойных инфекций кожи. Применяется Бактериофаг синег Pseuomonas aerugnosa для лечения абсцессов, хирургических нойный инфекций, гнойно-осложненных ран, ци ститов и др.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Лечение хирургических инфекций, забо леваний урогенитальной сферы и желу Бактериофаг клебси- дочно-кишечного тракта, гнойно-воспа елл пневмонии очи- Kebsea pneumonae лительных заболеваний уха, горла и носа, щенный а также при сепсисе. Применяется также для селективной деконтаминации кишеч ника.

Лечение озены, риносклеромы и гной Бактериофаг клебси- но-воспалительных заболеваний. Приме Kebsea rhnoseromats, елл поливалентный няется для лечения отитов, воспалений pneumonae, ozaenae очищенный пазух носа и для других гнойно-воспали тельных заболеваний уха, горла и носа.

Лечение и профилактика энтероколитов Энтеропатогенная E. coli, Бактериофаг коли и лечение кольпитов колипротейной эти P. vugars, mrabs протейный ологии.

P. aerugnosa, P. mrabs, vugars, K. pneumonae, Пиобактериофаг по Staphyoous, Enteroo- Лечение и профилактика различных ливалентный us, энтеропатогенная E. форм гнойно-воспалительных и энте ральных заболеваний. Применяется для coli лечения хирургических инфекций, ожо гов, гнойных поражений кожи, циститов P.aerugnosa, P. mrabs, и пиелонефритов, гастроэнтероколитов, vugars, K. pneumonae, Пиобактериофаг холециститов, дисбактериоза кишечника.

Staphyoous, Enteroo, комплексный (Сек us, энтеропатогенная E.

стафаг) coli, K. oxytoa S. sonnae, exner 1,2,3,4,6, Samonea ABDE, эн-, Лечение острых и хронических заболева теропатогенная E. coli, Интести-бактериофаг ний: дизентерии, сальмонеллеза, диспеп P.vugars, mrabs, S. au.vugars, vugars,,,.

сии, колита, энтероколита.

reus, P. aerugnosa, Entero,., ous.

Препараты бактериофагов используются в клинической практике наряду с антибио тиками. Интересен тот факт, что в некоторых случаях фаговые препараты превосходят другие антибактериальные препараты по активности в отношении антибиотикорезистентных возбу дителей. Бактериофаги не вызывают побочных токсических и аллергических реакций и не имеют противопоказаний. Кроме того, они применяются при лечении ряда заболеваний бере менных женщин в сочетании с другими лечебными препаратами [1, 11 - 15].

Использование препаратов бактериофагов стимулирует активизацию факторов специ фического и неспецифического иммунитета [16-18, 1]. Поэтому фаготерапия особенно эффек тивна при лечении хронических воспалительных заболеваний на фоне иммунодепрессивных состояний. Бактериофаги не препятствуют реализации лечебного действия других препаратов (антибиотики, пробиотики, синбиотики) и не чувствительны к их воздействию [19, 17].

Бактерии родов Kebseа, Eherha, Proteus, Pseuomonas, Staphyoous, Бактериофаги в медицине и ветеринарии Streptoous относятся к разряду внутригоспитальных и являются причиной хирургических и кишечных инфекций, урогенитальной патологии, гнойно-септических и энтеральных забо леваний. Летальность при этих инфекциях достигает 30-60%. Вместе с тем лечение данных заболеваний затруднено высокой частотой (50-95%) антибиотикорезистентности, проявлени ем токсических и многочисленных аллергических реакций, а также осложнениями в виде яв лений дисбактериоза [19-21]. В то же время многолетняя клиническая практика применения препаратов бактериофагов при данных инфекционных заболеваниях свидетельствует об их эффективности в 77 – 93% случаев [21-23].

В августе 2009 года корпорацией Nestl Nutrition были инициированы клинические исследования по изучению безопасности и эффективности применения бактериофага E. coli в терапии кишечных инфекций детей в возрасте от 6 до 60 месяцев. [24, 25]. Вследствие без вредности и ареактогенности препаратов бактериофагов возможно их применение в педиатри ческой практике, в т.ч. и у новорожденных детей [22, 26].

Широкое распространение фагов в природе значительно упрощает (как по трудоемко сти, так и по срокам и стоимости) процесс создания новых лекарственных препаратов к раз личным патогенам. Т.о., фаговая терапия может рассматриваться как перспективное направле ние современной медицины.

Библиографический список 1. Катер Э., Сулаквелидзе А. Бактериофаги: биология и практическое применение – М.: Научный мир, 2012. – 640 с.

2. European Centre for Disease Prevention and Control [Electronic resource]-Mode acess:

http://www.ecdc.europa.eu/en/publications/Publications/ 0909_TER_The_Bacterial_Challenge_ Time_to_React.pdf.

3. A. Sulakvelidze et al. Bacteriophage Therapy. // Antimicrobal Agents and Chemotherapy – 2001. – Vol. 45, №3. – P. 649 – 659.

4. A. Wright, C.H. Hawkins et al. A controlled clinical trial of a therapeutic bacteriophage preparation in chronic otitis due to antibiotic-resistant Pseudomonas aeruginosa;

a preliminary report of efficacy. // Clinical tolaryngology - 2009. – Vol. 34 Issue 4. - Р. 349 – 357.

5. A service of the U.S. National Institutes of Health [Electronic resource]. – Mode acess: http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00945087?term=bacteriophage+preparation&rank=1 .

6. Intralytix Inc. [Electronic resource].–Mode acess: http://www.intralytix.com/Intral_Prod ucts_ListShield.htm 7. Novolytics Limited [Electronic resource].–Mode acess: http://novolytics.co.uk/ technology.html 8. U.S. Food and Drug Administration [Electronic resource]. – Mode acess: http://www.

fda.gov/Food/FoodIngredientsPackaging/GenerallyRecognizedasSafeGRAS/GRASListings/ ucm154675.htm 9. Зурабов А.Ю. Создание отечественной коллекции бактериофагов и принципы раз работки лечебно-профилактических фаговых препаратов / Зурабов А.Ю. и др. // Биомедицина.

– март 2012. - №1. - с. 134 – 138.

10. Алешкин А.В. Бактериофаги в качестве нового класса консервантов и биологиче ски активных добавок к пище в профилактике инфекционных заболеваний / Алешкин А.В. и др. //Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням, Мо сква, 26-28 марта 2012 г. – Москва. 2012. – с. 16.

11. Захарова Ю.А. Использование бактериофагов у беременных с пиелонефритом: ав тореф. дис. … канд. мед. наук / Захарова Юлия Александровна. - Пермь, 2004. – 19 с.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии 12. Кисина В.И. и др. Фаготерапия воспалительных урогенитальных заболеваний у женщин // Вестник дерматологии и венерологии. – 1996. - № 5. – С. 45-48.

13. Падруль М.М., и др. Микробиологическая диагностика инфекций мочевых путей у женщин при беременности и использование препаратов бактериофагов при данной патологии.

Методические рекомендации. Пермь, 2007. – с. 29.

14. Трушков А.Г. Фагопрофилактика как метод предупреждения инфекционно-воспа лительных осложнений при абдоминальном родоразрешении: автореф. дис. … канд. мед. Наук / Трушков Андрей Геннадьевич. – Пермь, 2003. – 21 с.

15. Акимкин В.Г. и др. Клинико-эпидемиологические особенности нозокомиального сальмоннелеза у больных с хирургической патологией. – Магнитогорск: ООО «АС», 2008. – 172 с.

16. Биопрепараты и ведущие направления их лечебно-профилактического примене ния: монография / Алсынбаев М.М. и др. – Уфа: РИО филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, 2008. – 100 с.

17. Султанов Н.М. Антибактериальная активность и клиническая эффективность пре парата пиобактериофага поливалентного очищенного при лечении хронического гнойного риносинусита: дис. … канд. мед. Наук / Султанов Назиф Мударисович;

науч. рук. Н.Н. Воро шилова, Н.А. Арефьева Н.А.;

ГОУВПО «Башкирский государственный медицинский универ ситет». - Уфа, 2007. – 113 с.

18. B. Weber-Dabrowska, M. Zimecki, M. Kruzel et al. Alternative therapies in antibiotic resistant infection. // Advances in Medical Sciences – 2006. – Vol. 51. – P. 242 – 244.

19. Ворошилова Н.Н. Изучение клинической эффективности препаратов бактериофа гов при лечении энтеральных и гнойно-воспалительных заболеваний. / Н.Н. Ворошилова и др.

// Актуальные вопросы разработки и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: материалы всероссийской конф. - Уфа. 2000. - с.87-94.

20. Карабелеш Е.Е., Ткаченко С.А., Панкратов С.М., Демедюк О.И. Применение бакте риофагов, как концепция лечебного и профилактического направления в медицине // Актуаль ные проблемы транспортной медицины. – 2008. - № 1 (11). – С. 135-139.

21. Парфенюк Р.Л. Микробиологические основы пероральной фаготерапии гнойно воспалительных заболеваний: автореф. дис. … канд. биол. наук / Парфенюк Римма Леонтьев на. - Москва, 2004. – 24 с.

22. Сенцова Т.Б., Сергеева Т.В., Яцык С.П. и др. Алгоритм диагностики и лечения ин фекции мочевой системы у детей. Методические рекомендации (№ 41). Москва, 2003. – 21 с.

23. Перепанова Т.С., Дарбеева О.С., Майская Л.М. и др. Бактериофаготерапия уроло гических инфекций. Методические рекомендации. Москва, 2007. – с. 9.

24. A service of the U.S. National Institutes of Health [Electronic resource] – Modeacess: http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00663091?term=bacteriophage&rank=2 .

25. A service of the U.S. National Institutes of Health [Electronic resource]– Mode acess: http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00937274?term=nestle+phage&rank=1 .

26. Воротынцева Н.В. и др. Фаготерапия и фагопрофилактика острых кишечных ин фекций у детей. Методические рекомендации. Москва, 1991. – с. 11.

THERAPEUTIC AND PROPHYLACTIC DRUGS BACTERIOPHAGES:

AN OVERVIEW Lysko K.A., Ignatieff G.M., Otrashevskaya E.V.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Keywords: antbots, antbots, antbot resstane, baterophages, batera nfetons, prouton, baterophage treatment.

In a revew arte presents the man features that haraterze the urrent state of the prouton an use of heath are prouts baterophages n Russa an abroa. Presents manufature rugs baterophages eneate sope, spefi exampes of the use of rugs n na prate an n the ompex epemooga measures. Aso state the man avantages of baterophages rugs versus antbot rug.

УДК 619: ИНДИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ РОДА KLEBIELLA,С ПОМОЩЬЮ СПЕЦИФИЧЕСКИХ БАКТЕРИОФАГОВ, В ОБЪЕКТАХ ВЕТЕРИНАРНОГО НАДЗОРА Ляшенко Е.А., кандидат биологических наук, доцент, elena-l18@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор, dav_ul@mail.ru Золотухин С.Н., доктор биологических наук, профессор, 8(8422) 55-95-47, fvm.zol@yandex.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: бактериофаги, индикация, клебсиелла, бактерии.

Работа основывается на изуении использования РНФ с индикаторными бактерио фагами для обнаружения бактерий рода Kebsea.

В результате проведенных исследований, можно утверждать об успешном применении метода – РНФ с индикаторными бактериофагами К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА диагностиеская увствительность которого позволяет обнаруживать бактерии рода Kebsea в минимальной концентрации 103 – 104м.к./мл за 18 – 22 аса.

Введение. Этиологическая роль клебсиелл известна при маститах, септицемиях коров, свиней, лошадей, обезьян, инфекционной диареи молодняка животных [2, 6].Альтернативой су ществующим методам лабораторной диагностики, которые либо не позволяют быстро идентифи цировать бактерии, либо пока недоступны для большинства лабораторий, являются специфиче ские бактериофаги [2, 3, 4, 5].

По литературным данным об использовании специфических бактериофагов для индика ции бактерий сообщают ряд исследователей [2, 3, 4, 5]. Учитывая выраженную специфичность индикаторных бактериофагов и простоту количественного учета фага, был предложен метод опре деления патогенных бактерий из исследуемого материала без выделения чистой культуры – реак ция нарастания титра фага (РНФ) [1]. Сущность РНФ в том, что если в материале присутствует искомый возбудитель, то добавленный в исследуемый материал гомологичный фаг, вступив во взаимодействие с ним, размножится и дальнейшее увеличение свободного фага укажет на нали чие возбудителя. Цель исследования: изучение возможности использования РНФ с индикатор ными бактериофагами для обнаружения бактерий рода Kebsea.

Материалы и методы исследования. Исследованию подвергались пробы комбикорма, воды, фекалий, мяса. В качестве индикаторных бактериофагов использовали штаммы К - 10 и Бактериофаги в медицине и ветеринарии К - 81 серии УГСХА. Индикацию бактерий рода Kebsea в объектах ветеринарного надзора проводили с помощью реакции нарастания титра фага по методике описанной В.Д. Тимаковым, Д.М. Гольдфарбом (1961), В.Я. Ганюшкиным (1988). Одновременно исследования проводили бакте риологическим методом, в соответствии с правилами, представленными в «Методических указаниях по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вы зываемой патогенными энтеробактериями». Полученный в исследованиях цифровой материал обрабатывали с использованием стандартных программ статистического анализа «STATISTIKA».

Результаты исследований и их обсуждения. Пробы водопроводной воды, комбикорма, мяса и фекалий в количестве 5 мл(г) вносили в колбы и контаминировали бактериями рода Kebsea в концентрации 105, 104, 103, 102, 101м.к./мл, заливали МПБ из расчета 10 мл бульона на 1 мл воды и ставили контроль – колбу с пробой (воды, комбикорма, мяса и фекалий) не контаминированной бак териями рода Kebsea.Результат реакции учитывали по количеству образовавшихся негативных колоний фага в опытных и контрольных чашках.

Положительная реакция характеризовалась увеличением количества корпускул фага по сравнению с контролем в 5 и более раз.

Увеличение количества фагов в искусственно инфицированной водопроводной воде, представлена в табл. 1.

Таблица 1 – Увеличение количества фагов в искусственно инфицированной штаммами бактерий рода Kebsea водопроводной воде Бактериофаги К - 10 УГСХА К - 81 УГСХА Концентрация индикаторных Количество Количество Увеличение Увеличение штаммов бактерий колоний фага (М колоний фага (М кол-ва фага (раз) кол-ва фага (раз) ± m) ± m) 10 лизис 10 лизис 10 лизис 10 лизис 10 420 ± 3,21 5,9 350 ± 3,05 10 160 ± 3,05 2,2 142 ± 3,05 10 77 ± 2,08 1 80 ± 3,78 Контрольная проба 71 ± 2,64 0 70 ± 1,15 Контроль 0 0 0 «дикого» фага По результатам проведенных исследований водопроводной воды установлено, что увели чение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации бактерий рода Kebsea 103 микробных клеток в 1 мл водопроводной воды.

Увеличение количества фага в искусственно инфицированном комбикорме, показано в табл. 2.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 2 – Увеличение количества фагов в искусственно инфицированном штаммами бактерий рода Kebsea комбикорме Бактериофаги К - 10 УГСХА К - 81 УГСХА Концентрация индикаторных Количество Количество Увеличение Увеличение штаммов бактерий колоний фага (М колоний фага (М кол-ва фага (раз) кол-ва фага (раз) ± m) ± m) 105 лизис 10 лизис 10 лизис 10 лизис 10 630 ± 3,46 8,6 437 ± 9,60 5, 102 212 ± 1,52 2,9 201 ± 5,13 2, 10 75 ± 2,64 1 77 ± 3,51 Контрольная проба 73 ± 2,00 0 79 ± 2,64 Контроль 0 0 0 «дикого» фага В результате проведенного опыта, увеличение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации бактерий рода Kebsea 103м.к./г комбикорма, при наличии посторонней микрофлоры.

Увеличение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации бактерий рода Kebsea 103м.к./г мяса (табл. 3).

Таблица 3 – Увеличение количества фага в искусственно инфицированном штам мами бактерий рода Kebsea мясе Бактериофаги К - 10 УГСХА К - 81 УГСХА Концентрация индикаторных Количество Количество Увеличение Увеличение штаммов бактерий колоний фага (М колоний фага (М кол-ва фага (раз) кол-ва фага (раз) ± m) ± m) 105 лизис 10 лизис 10 лизис 10 лизис 103 690 ± 3,21 10 770 ± 2,88 10, 10 164 ± 2,08 2,3 159 ± 2,08 2, 10 70 ± 5,68 1 68 ± 3,51 Контрольная проба 69 ± 0,57 0 75 ± 2,64 Контроль 0 0 0 «дикого» фага Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 4 – Увеличение количества фага в искусственно инфицированных штаммами бактерий рода Kebsea фекалиях Бактериофаги К - 10 УГСХА К - 81 УГСХА Концентрация индикаторных Количество Количество Увеличение Увеличение штаммов бактерий колоний фага (М колоний фага (М кол-ва фага (раз) кол-ва фага (раз) ± m) ± m) 105 565 ± 11,23 7,8 803 ± 4,58 10 369 ± 7,81 5,1 401 ± 3,51 10 70 ± 4,04 0 85 ± 6,02 102 73 ± 3,21 1 82 ± 3,60 10 70 ± 3,60 0 68 ± 4,35 Контрольная проба 72 ± 1,00 0 80 ± 1,7 Контроль 0 0 0 «дикого» фага Из результатов опыта видно, что увеличение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА бо лее чем в 5 раза произошло при концентрации бактерий рода Kebsea 104 микробных клеток в 1 г фекалий. Такое снижение чувствительности связано с высокой обсемененностью данного объекта посторонней микрофлорой. С увеличением инкубации бактериофагов с материалом до 10 часов диагностическая чувствительность повышалась и позволяла обнаруживать указанные бактерии в концентрации 103м.к./г за 22 часа.

Полученные данные при исследовании воды, комбикорма и мяса подтверждают увели чение титра фагов более чем в 5 раз при минимальной концентрации бактерий рода Kebsea 103м.к./мл. При исследовании фекалий бактерии рода Kebsea обнаруживались в концентра ции 104м.к./г, а с увеличением инкубации бактериофагов с материалом до 10 часов обнаруживали данные бактерии в концентрации 103м.к./г за 22 часа.

Бактериологическим методом в исследованных пробах воды, комбикорма, мяса и фекалий бактерии рода Kebsea обнаруживались в концентрации 104м.к./мл за 96 часов.

Заключение. В результате проведенных исследований по обнаружению бактерий рода Kebsea в контаминированных указанными микроорганизмами объектах ветеринарного надзора, можно утверждать об успешном применении метода – РНФ с индикаторными бактериофагами К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА диагностическая чувствительность которого позволяет обнаруживать бактерии рода Kebsea в минимальной концентрации 103 – 104м.к./мл за 18 – 22 часа. Из чего сле дует, что РНФ является высокочувствительным методом, позволяющим обнаружить бактерии рода Kebsea даже в случаях, когда выделение культуры в чистом виде практически невоз можно из-за наличия большого количества посторонней микрофлоры.

Библиографический список 1. Ганюшкин В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии. – Улья новск, 1988. – 45 с.

2. Золотухин С.Н. Создание и разработка схем применения диагностических биопре паратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий: Автореф. дис. … до-ра биол. наук. – Ульяновск, 2007. – 39 с.

3. Тимаков В.Д., ГольдфарбД.М. Реакция нарастания титра фага (РНФ).– М., 1962.– 32 с.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии 4. Молофеева Н.И. Выделение и изучение основных биологических свойств бактери офагов E. сoli 0157 и их применение в диагностике: Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Сара тов, 2004. – 20 с.

5. Пульчеровская Л.П. Выделение и изучение основных биологических свойств бак териофагов trobater и их применение в диагностике: Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов, 2004. – 21 с.

6. Семенцов В.И., и др. Клебсиеллез поросят. / В.И. Семенцов, И.А. Болоцкий, О.П.

Ольховик и др.// Ветеринария Кубани. – 2009. - № 6. - С. 15-17.

DISPLAY TYPE BACTERIA KLEBIELLA, WITH SPECIFIC BACTERIOPHAGE, IN VETERINARY SURVEILLANCE OBJECTS Liashenko E.A., Vasilyev D.A., Zolotukhin S.N.

Keywords: baterophage spay, Kebsea, batera.

The work s base on a stuy of RNF wth nator baterophages to etet batera of the genus Kebsea.

As a resut of the researh, t an be argue on the suessfu use of the metho - RNF wth nator baterophages to - 10 UGSKHA an K - 81 UGSKHA agnost senstvty that an etet batera of the genus Kebsea at a mnmum onentraton of 103 - 104m.k./m for 18 - 22 hours.

УДК: 679. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ИНФЕКЦИОННЫМИ ОСЛОЖНЕНИЯМИ В КЛИНИКЕ ТРАВМАТОЛОГИИ И ОРТОПЕДИИ Мидленко В.И.*, доктор медицинских наук, профессор Золотухин С.Н.**, доктор биологических наук, профессор тел. 8(8422) 55-95-47, fvm.zol@yandex.ru Шевалаев Г.А. *, кандидат медицинских наук, доцент, shga63@rambler.ru Ефремов И.М.*, ассистент кафедры госпитальной хирургии efremov-im@rambler.ru Пичугин Ю.В., врач рентгенолог, udgin-777@mail.ru *ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»

**ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина»

Ключевые слова: бактериофаги, хрониеский остеомиелит, инфекция области хи рургиеского вмешательства Анализ этиологиеской структуры возбудителей гнойных послеоперационных ослож нений показал ведущую роль стафилококков в развитии этих процессов у травматологие ских больных, при хирургиеском вмешательстве в 83% и при хрониеском остеомиелите в 70% слуаев.

оливалентный пиобактериофаг лизировал 78% грамположительных бактерий, в том исле полирезистентных к антибиотикам штаммов St. aureus.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Введение. Лечение инфекционных осложнений у больных в клинике травматологии и ортопедии вызывает большие трудности. Увеличение числа антибиотикорезистентных штам мов микроорганизмов способствует увеличению количества отрицательных клинических ре зультатов лечения данной группы больных [1,2].

Анализ литературных данных показывает, что основными возбудителями инфекцион ных осложнений у больных травматолого-ортопедического профиля являются: грамположи тельные кокки - St.aureus и St.epidermidis;

неферментирующие грамотрицательные палочки - Ps. aeruginosa и бактерии рода Acinetobacter spp.;

энтеробактерии - Proteus spp., Enterobacter spp., Klebsiella spp., E.coli и т.д. [3].

В комплексе лечебных мероприятий, наряду с хирургическим вмешательством, одним из важных методов лечения инфекционных осложнений служит воздействие на этиологиче ского агента гнойных осложнений. В практической медицине это осуществляется применени ем различных антибактериальных химиопрепаратов и антисептиков [4-6].

Однако применение антибиотиков не всегда возможно и оправдано, ввиду наличия по бочных действий лекарственных препаратов, антибиотикорезистентности возбудителей болез ни, ограничений применения в детском возрасте, наличия тяжелых сопутствующих соматиче ских заболеваний, являющихся противопоказанием для антибактериальной терапии, высокая стоимость лекарственных препаратов.

Для лечения больных с инфекцией области хирургического вмешательства (ИОХВ) и хроническим остеомиелитом (ХО) антибиотики с успехом применяются местно в комбинации с носителем: полиметилметакрилат [8,9], ГАП-материалы [10], биодеградируемые композиции [11] и т.д.

Лечебно-профилактические бактериофаги являются одной из альтернатив антибакте риальной химиотерапии [12-14]. Кроме того, имеются сообщения о более эффективном воз действии бактериофагов в комплексе с антибактериальной терапией [15], а также с озонотера пией [16].

Материалы и методы.

Нами проведено изучение этиологической структуры возбудителей гнойных инфек ций, выделенных из содержимого воспалительных процессов от 35 больных с послеопераци онными инфекционными осложнениями, проходивших стационарное лечение во 2-ом, 3-ем и 4-ом травматологических отделениях ГУЗ «Ульяновский областной клинический центр специ ализированных видов медицинской помощи» в 2012 году.

Среди исследуемых больных у 30 инфекционные осложнения возникли после опе ративного лечения закрытых переломов длинных трубчатых костей, у 2-х после операций на мягких тканях, у 2-х после оперативного лечения деформирующего коксартроза (тотального эндопротезирования тазобедренного сустава). Из них, у 12 больных после операций накостно го остеосинтеза пластинами различной конструкции, 10 после блокируемого интрамедулляр ного остеосинтеза, 4 после фасцикулярного остеосинтеза и остеосинтеза аппаратами внешней фиксации, 6 больных после тотального эндопротезирования тазобедренного сустава (цемент ное – 4, бесцементное – 2). У одного больного консервативное лечение переломов лодыжек осложнилось развитием гнойного остеоартрита голеностопного сустава и остеомиелитом ко стей, формирующих голеностопный сустав.

Помимо этого, проведен ретроспективный анализ микрофлоры, выделенной у 50 боль ных ХО костей конечностей. Из них у 18 больных - хронический посттравматический остео миелит, у одной больной - первично-хронический остеомиелит Гарре, у 31 больного - хрони ческий послеоперационный остеомиелит. Послеоперационный остеомиелит у 9 больных явил ся осложнением операций накостного остеосинтеза, у 11 интрамедуллярного остеосинтеза, у Бактериофаги в медицине и ветеринарии двух фасцикулярного остеосинтеза, у 6 остеосинтеза аппаратами внешней фиксации, удвух операций на мягких тканях.

Для изучения фагочувствительности возбудителей инфекционных осложнений у больных травматолого-ортопедического профиля, проанализированы результаты бактерио логического исследования (in vitro) посевов из свищей и гнойно-некротических ран у 30-ти госпитальных больных, проходивших стационарное лечение в клинике травматологии и орто педии ГУЗ «УОКЦ СВМП» в 2012 году.

Из них, у 21-го больного диагностирован ХО, у 3-х ранняя ИОХВ после металлоо стеосинтеза закрытого перелома, у одного ранняя ИОХВ после операции на мягких тканях, у одного ранняя глубокая ИОХВ после эндопротезирования тазобедренного сустава, у 4-х от крытые переломы длинных трубчатых костей нижних конечностей, осложненные инфекци онно-воспалительным процессом. Свищи – у 13-ти больных, гнойно-некротические раны - у 17-ти больных.

Посев материала производился на стандартные питательные среды. Далее определя ли родовую и видовую принадлежность микроорганизмов после выделения чистых культур возбудителей по совокупности тинкториально-морфологических, культуральных и фермента тивных свойств с последующим исследованием антибиотикочувствительности выделенных штаммов диско-диффузионным методом в соответствии с методическими указаниями МУК 4.2.1980-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препа ратам».

Фагочувствительность 38-ми выделенных штаммов микроорганизмов определяли в отношении поливалентного пиобактериофага «Секстафаг», из них у 32 грамположительных штаммов и у 6 грамотрицательных бактерий. Чувствительность к препарату определяли на плотных питательных средах методом «стекающая капля».

Результаты исследований. При анализе полученных данных нами установлено, что основными возбудителями ранних и поздних послеоперационных инфекционных осложнений у больных в клинике травматологии и ортопедии являются стафилококки - 83% (рис. 1).

Рисунок 1. Микробный пейзаж у больных с послеоперационными инфекционны ми осложнениями в клинике травматологии и ортопедии 73% штаммов стафилококков нами были отнесены к виду St.aureus, остальные 27% штаммов были коагулазонегативные и принадлежали к видам St.epidermidis, St.saprophyticus, St.hominis, St.capitis. Из всех St.aureus и St.epidermidis - 28% штаммы MRSA и MRSE. Из гра.hominis,.capitis.

hominis, capitis.

,..aureus aureus.epidermidis epidermidis.

мотрицательных неферментирующих палочек 75% были бактериями рода Acinetobacter spp.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Рисунок 2. Микробный пейзаж у больных хроническим остеомиелитом При анализе результатов изучения этиологической структуры возбудителей гнойных осложнений у больных ХО (рис. 2) установлено, что основной причиной воспалительных про цессов являются также стафилококки, которые составляют 70% от общего количества выде ленных штаммов бактерий. Из них 72% принадлежали к виду St.aureus, 14% - к St.epidermidis, и 14%, такие как, St.saprophyticus, St.hominis, St.capitis, St.haemolyticus, были идентифициро.saprophyticus,.hominis,.capitis,.haemolyticus, saprophyticus, hominis, capitis, haemolyticus,,,,, ваны как КОС.

11% штаммов St.aureus и 29% штаммов St.epidermidis были отнесены нами к MRSE.

На втором месте были грамотрицательные неферментирующие палочки. Среди них 57% бактерии вида Ps.aeruginosa, 43% принадлежали к роду Acinetobacter spp.

Третье место в этиологической структуре составили энтеробактерии: три штамма принадлжали к виду E.coli, по одному штамму Proteus vulgaris, En. Cloacae и Kl. pneumoniae.

Энтерококки выявлены в 6% случаев и были представлены видом Enterococcus feaca lis. Кроме того, выделен один штамм Streptococcus piogenes.

Коринебактерии составили один процент от общего количества выделенных микро бов. Грибы рода Candida выделены только у одного больного (один штамм).

По результатам исследований 78% штаммов грамположительных бактерий были чув ствительны к поливалентному пиобактериофагу. Наибольшая чувствительность была отме чена у St.aureus (95% изучаемых штаммов). Меньшую чувствительность проявили КОС, что составило составила 29% от общего количества выделенных штаммов этих микроорганизмов.

Все штаммы MRSA были чувствительны к поливалентному пиобактериофагу. Три штамма стафилококков обладали устойчивостью к изучаемому препарату.

75% бактерий рода Enterococcus spp. были чувствительны к изучаемому фаговому препарату.

50% штаммов бактерий синегнойной палочки лизировались поливалентным пиобак териофагом.

Остальные штаммы синегнойной палочки, оказались устойчивыми к поливалентному пиобактериофагу и специфическому синегнойному бактериофагу.

Чувствительность к поливалентному пиобактериофагу проявили по одому штамму Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae и Streptococcus piogenes.

Выводы. 1. Основным возбудителем послеоперационных и посттравматических ин фекционных осложнений у больных в клинике травматологии и ортопедии является St.aureus, обнаруженные в 73% случаев при ИОХВ, и 72% - при ХО.

2. Поливалентный пиобактериофаг – «Секстафаг» лизировал 95% бактерий St.aureus, Бактериофаги в медицине и ветеринарии 29% КОС, 75% бактерий рода Enterococcus spp. и 50% бактерий Ps. aeruginosae.

Библиографический список 1. Афиногенова, А.Г. Микробные биопленки ран: состояние вопроса / А.Г. Афиногено ва, Е.Н. Даровская // Травматология и ортопедия России. – 2011. – №3. – С. 119-125.

2. Гостев, В.В. Антибиотикорезистентность микрофлоры ран открытых переломов (II сообщение) / В.В. Гостев, З.С. Науменков, И.И. Мартель // Травматология и ортопедия России.

– 2010. – №1. – С. 33-37.

3. Гординская, Н.А. Резистентность основных возбудителей инфекции в отделении гнойной остеологии / Н.А. Гординская, Е.В. Сабирова, Н.В. Абрамова, Е.В. Дударева, В.Н.

Митрофанов // Вопросы травматологии и ортопедии. – 2012. – №2. – С. 14-17.

4. Божкова, С.А. Современные принципы диагностики и антибактериальной терапии инфекции протезированных суставов (обзор литературы) / С.А. Божкова // Травматология и ортопедия России. – 2011. – №3. – С. 126-136.

5. Кузнецов, Н.А. Современные антисептические препараты в лечении параэндопро тезной инфекции / Н.А. Кузнецов, В.Г. Никитин, Е.Б. Телешова, А.А. Мильчаков // Инфекции в хирургии. – 2009. – №4. – С. 46-50.

6. Савельев, В.С. Хирургические инфекции кожи и мягких тканей. Российские нацио нальные рекомендации / В.С. Савельев [и др.]. – 2009. – С. 90.

7. Федянин, С.Д. Рациональная антибиотикотерапия у пациентов с гематогенным и посттравматическим остеомиелитом / С.Д. Федянин // Вестник ВГМУ. – 2004. – №2. – С. 61-68.

9. Куропаткин, Г.В. Костный цемент в травматологии и ортопедии / Г.В. Куропаткин. – Самара: «Издательство Самара», «БМВ и К», 2006г. – 48с.: ил.

10. Уразгильдиев, З.И. Применение коллапана для пластики остеомиелитических де фектов костей / З.И. Уразгильдиев, О.М. Бушуев, Г.Н. Берченко // Вестник травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова. – 1998. – №2. – С. 31-34.

11. Афиногенов, Г.Е. Антимикробная биодеградируемая композиция на основе высо комолекулярного поливинилпирролидона для профилактики экспериментального остеомиели та / Г.Е. Афиногенов, Р.М. Тихилов, А.Г. Афиногенова, Т.Я. Богданова, М.В. Краснова, И.В.

Козлов, Е.Н. Даровская, Л.О. Анисимова, И.К. Лебедева, Т.М. Петрова // Травматология и ор топедия России. – 2010. – №3. – С. 47-54.

12. Асланов, Б.И. Бактериофаги как факторы формирования госпитальных штаммов и средства борьбы с внутрибольничными инфекциями / Б.И. Асланов, Л.П. Зуева, В.Ю. Хоро шилов // Инфекции в хирургии. – 2009. – №1. – С. 25-29.

13. Габриэлян, Н.И. Исследование антибиотико- и фагочувствительности нозокоми альных штаммов микробов, выделенных от пациентов трансплантологической клиники / Н.И.

Габриэлян, Е.М. Горская, Т.С. Спирина, С.А. Прудникова, Л.Ю. Ромашкина // вестник транс плантологии и искусственных органов. – 2011. – №3. – С. 26-32.

14. Красильников, И.В. Применение бактериофагов: краткий обзор современного со стояния и перспектив развития / И.В. Красильников, К.А. Лыско, А.К. Лобастова // Сибирский медицинский журнал. – 2011. – №2. – С. 33-37.

15. Курбангалеев, С.М. Гнойная инфекция в хирургии / С.М. Курбангалеев // – М.:

«Медицина», 1985. – С. 272.

16. Чандра-Д,Мелло, Р. Методика комбинированного использования озоно- и бактери офаготерапии в комплексном лечении хронических аднекситов / Р. Чандра-Д,Мелло, Г.О. Греч канев, Н.Н. Никишин, Н.С. Перетягина // Медицинский альманах. – 2009. – №4. – С. 140-142.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии MICROBIOLOGICAL SUBSTANTIATION OF BACTERIOPHAGE’S TO TREATMENT OF PATIENTS WITH INFECTIOUS COMPLICATIONS IN TRAUMATOLOGY AND ORTHOPAEDICS Midlenko V.I., Zolotukhin S.N., Shevalaev G.A., Efremov I.M., Pichugin U.V.

Key words: baterophages, hron osteomyets, nfeton of the surga nterventon Anayss of the mroba ansape showe that staphyoous oupe a eang roe n the eveopment of nfeton of the surga nterventon n traumatooga patents. Staphyoous was obtane n 83% of t of regon of s surga nterventon an n 70%of hron osteomyets.

Poyvaent pobakterofag yse 78% of gram-postve batera, nung mutrug-ress tant strans of St. aureus.

УДК 619: ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИОФАГОВ AEROMONAS HYDROPHILA Насибуллин И.Р., соискатель, nir72@mail.ru Куклина Н.Г., научный сотрудник, ul_nk@mail.ru Горшков И.Г., научный сотрудник, i.o.gun@mail.ru Викторов Д.А., кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, тел. 9084775573, viktorov_da@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор, dav_ul@mail.ru Нафеев А.А., доктор медицинских наук, nafeev@mail.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: Aeromonas hyropha, бактериофаги, диагностика, изолят фагов, литиеская активность.

Статья посвящена методам изуения литиеской активности бактериофагов бак терий Aeromonas hyropha, выделенных из окружающей среды в Ульяновской области. Вы, деленные бактериофаги проявили разлиную литиескую активность, варьирующуюся в ши роких пределах.

Введение. Литическая активность является одним из биологических свойств бакте риофагов, оцениваемых при их селекции для создания диагностических биопрепаратов [1, 4, 5]. Литическая активность бактериофага оценивается по его способности вызывать лизис бактериальной культуры в жидких или плотных средах и выражают это тем максимальным разведением, в котором испытуемый бактериофаг проявил свое литическое действие. Более точным методом оценки активности бактериофага является определение количества активных корпускул фага в единице объема. Активность бактериофага определяется в конкретных, стан дартных условиях. Бактериофаг по отношению к одной и той же культуре, но в разных средах, так же как и при испытании его в одной среде на разных штаммах одного и того же вида бак терий, может проявлять разную литическую активность и формировать неодинаковое число Бактериофаги в медицине и ветеринарии колоний на плотной среде [2, 3]. Важными условиями при изучении литического действия бактериофагов является: состав питательной среды, особенно наличие в ней ионов кальция и магния, органических кофакторов лизиса типа триптофана, концентрация агара и толщина его слоев, возраст и количество добавляемой тест-культуры, температура инкубации посевов, ее продолжительность [5].

Материалы и методы исследований. В работе были использованы: 1 референс штамм, полученный из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветери нарно-санитарной экспертизы УГСХА, 14 «полевых» штаммов, выделенных нами из объектов окружающей среды, 5 штаммов бактериофагов, выделенных нами из озер и рек Ульяновской области. Культуры бактерий Aeromonas hyropha для определения литической активности бактериофагов выращивали на стандартном мясо-пептоном бульоне в течение 18-24 часов. Ли тическую активность селекционированных бактериофагов определяли по методу Аппельмана и Грациа [1, 2, 3, 4, 5].

Метод Аппельмана.

В ряд пробирок из нейтрального стекла одинакового диаметра наливали по 4,5 мл бу льона. В первую пробирку вносили 0,5 мл исследуемого бактериофага. Затем делали последо вательные разведения, перенося отдельными стерильными пипетками из пробирки в пробирку по 0,5 мл бактериофага. Использовали 10 пробирок. Из последней пробирки 0,5 мл выливали в дезраствор, затем во все пробирки вносили по 0,2 мл 18-часовой бульонной индикаторной культуры. 11-я и 12-я пробирки являются контрольными, в первой из них находится бульон и культура (без фага), во второй - бульон с бактериофагом (контроль на стерильность). Все пробирок помещали в термостат при 30 С на 18 часов. Титр фага устанавливали по последней прозрачной пробирке ряда и выражали разведением фага [2, 4]. Результаты исследований пред ставлены в таблице № 1.

Метод агаровых слоев по Грациа. Мясо-пептонный агар 1,5 % концентрации с ген цианвиолетом накануне опыта разливают по чашкам Петри в количестве 25-30 мл. Чашки, прикрытые стерильной бумагой, подсушивают в термостате или под бактерицидной лампой в течении нескольких часов. Это необходимо для абсолютной сухости чашек, так малейшее их увлажнение может исказить результаты количественного изучения фага. Затем 0,7 % агар в количестве 2,5 мл, предварительно разлитый в стерильные пробирки, расплавляют и остужа ют до 46-47 С. Исследуемый фаг в количестве 1,0 мл помещают в 2,5 мл 0,7 % агара, туда же помещают 0,2 мл суточной индикаторной культуры, все быстро и тщательно перемешивают вращением пробирки в ладонях и выливают на поверхность 1,5 % агара. Смесь осторожными движениями распределяют по поверхности агара, чашки для затвердения оставляют на гори зонтальной поверхности на 30-40 минут, затем инкубируют в термостате в перевернутом виде в течение 18-20 часов при 30 С. После инкубации в термостате подсчитывают количество не гативных колоний и умножают полученное число на степень разведения [2, 3, 4, 5]. Результаты исследований в таблице 1.

Таблица 1 - Литической активности бактериофагов Aeromonas hyropha № Название фага Титр по Аппельману Титр по Грациа 1 Фаг 43-УГСХА 10 2 х - 2 Фаг 1п-УГСХА 10 4 х - 3 Фаг 43г-УГСХА 10-7 3 х 4 Фаг 13а-УГСХА 10 5 х - 5 Фаг Ahd-УГСХА 10-7 1 х Бактериофаги в медицине и ветеринарии Заключение. Из данных таблицы следует, что литическая активность бактериофагов бактерий вида Aeromonas hyropha по Аппельману находится в пределах от 10-5 до 10-8, а по Грациа от 5 х 105 до 2 х 108 фаговых корпускул в 1 мл. Максимальный титр у бактериофага 43-УГСХА: по Аппельману 10-8, по Грациа 2 х 108. Необходимо дальнейшее изучение этого бактериофага для создания биопрепарата на его основе.

Библиографический список 1. Викторов Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индика ции бактерий Pseuomonas puta // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – 2011. – 22 с.

2. Ганюшкин В. Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии. Учеб ное пособие. – Ульяновск. 1988. – С. 12-16.

3. Гольдфарб Д. М. Бактериофагия. – М.: Медгиз, 1961. – С. 14-17.

4. Золотухин С. Н. Бактериофаги М. morganii и их применение при желудочно-кишеч ных заболеваниях поросят // Автореферат дис. канд. вет. наук.- Ульяновск, 1994.

5. Ревенко И. П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. – Киев:

Урожай, 1978. – С. 18-21.

RESEARCH OF LYTIC ACTIVITY OF BACTERIOPHAGES AEROMONAS HYDROPHILA Nasibullin I.R., Кuklina N.G., Gorshkov I.G., Viktorov D.А., Vasilev D.А., Nafeev А.N.

Key words: batera Aeromonas hyropha, baterophages, agnoss, soate phage yt atvty.

The arte s evote to the methos of the stuy of yt atvty of baterophages of batera Aeromonas hyropha, aoate from the envronment n Uyanovsk regon. Seete baterophages have shown varyng yt atvty that ranges wey.

УДК 619: О ПЕРСПЕКТИВАХ ФАГОДИАГНОСТИКИ ФЛАВОБАКТЕРИОЗОВ РЫБ Парамонова Н.А., аспират, paramonnat@rambler.ru Викторов Д.А., кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, тел. 9084775573, viktorov_da@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор, dav_ul@mail.ru Золотухин С.Н., доктор биологических наук, профессор тел. 9272703480, fvm.zol@yandex.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: Favobaterum psyhrophum, бактериальная холодноводная бо лезнь рыб, диагностика, леение, профилактика, бактериофаги.

В работе приведён обзор литературных данных отеественных и зарубежных авто Бактериофаги в медицине и ветеринарии ров, рассматривается проблема диагностики, леения и профилактики бактериальной хо лодноводной болезни рыб, обусловленной Favobaterum psyhrophum. роведённый анализ указывает на актуальность разработки методов фагодиагностики и фаготерапии для на званного заболевания рыб.

Среди многочисленных бактерий, ежегодно заражающих рыб, Favobaterum psyhrophum за последние годы вызывает большой интерес, как в экономической, так и в экологической сфере [20].

F. psyhrophum – тонкие, нитевидные грамотрицательные бактерии длиной 2-5 мкм, в диаметре 0,3-0,5 мкм. Образуют слизистые, блестящие, круглые, выпуклые, желтые колонии.

Для клеток характерны скользящие движения. Этот возбудитель вызывает холодноводную бак териальную болезнь (bacterial coldwater disease (BCWD)), которую впервые описал Борг в году [6]. В Европе данное заболевание называют «обжаренный синдром радужной форели»

(rainbow trout fry syndrome (RTFS)) [7].

Бактериальная холодноводная болезнь (cold-water disease, или RTSF - Rainbow trout fry syndrome), вызванная Favobaterum psyhrophum, встречается во всем мире [8]. Инфекции вызванные F. psyhrophum были обнаружены по всей Северной Америке [9], почти в каждой стране Европы [21], Австралии [23], Чили [26], Перу [15], Японии [10], Корее [13], и Турции [12]. F. psyhrophum имеет по крайней мере три основных серотипа [16].

F. psyhrophum удавалось выделить из патологического материала лососевых, сомо вых, карпа, карася [14] и некоторых аквариумных рыб при температуре воды 4-10 0С.

Вирулентные формы условно-патогенных бактерий рода F.psyhrophum вызывают эпизоотии и массовую гибель при неблагоприятных или стрессовых для рыб условиях, спо собствующих повышению восприимчивости гидробионтов к инфекциям и усиливающих при способляемость бактерий [4].

Смертность может составлять 90% [21], а также может быть очень низкой (1%) и не прерывной [22].

При холодноводной болезни у личинок происходит коагуляция желтка, эрозия кожных покровов и желточного мешка. Гибель личинок может достигать 50 %. У мальков отмечают потемнение окраски тела, появление характерных поражений в виде белых пятен. У сеголет ков отмечают эрозию спинного и хвостового плавников, гиперемию в области анального от верстия, некроз спинного плавника, хвостового стебля с оголением скелета, нижней челюсти.

У годовиков выявляют разрушение кожи с оголением мышц на голове, челюстях, на разных участках тела, анемию и геморрагии жабр. Больные рыбы отказываются от корма. Гибель мальков, сеголетков и годовиков достигает 10-20 %. У форели первым поражается жировой плавник, который постепенно обесцвечивается к основанию. Хвостовой плавник рыбы при обретает грязно-белый цвет. Иногда разрушение хвостового плавника развивается до такой степени, что обнажаются мышцы и позвоночник. У балтийского лосося поражения кожи могут начаться на спине. У кижуча часто поражаются голова, рот и почки. Повышение температуры воды до 15—16 °С ведет к прекращению заболевания.

F.psyhrophum способны к образованию желтого пигмента, а также протеолитиче ских ферментов, которые вызывают прямое повреждение тканей и расширение зоны пора жения, что является одним из предлагаемых факторов вирулентности бактерии [18], а также выделяет эндотоксин.

При исследование пораженной кожи рыб F. psychrophilum выявились только на микро травмах, причем интактные участки кожи оставались неинфицированными. Бактерии имеют сродство к коллагену, благодаря чему при попадании на кожу мигрируют в миосепты через Бактериофаги в медицине и ветеринарии соединительную ткань. Впоследствии поражениераспространяется на основную мускулатуру, что приводит к развитию некротического миозита и формированию открытых язв [19].

Установлено, что бактерии могут передаваться от родителей потомству через инфи цированное внутреннее содержимое икринки – так называемая вертикальная передача – и вы живать даже после ее дезинфекции [10, 19], так и горизонтальным путем [17].

Имеются данные об изоляции микроорганизмов F. psyhrophum из внутреннего со держимого оплодотворенной икринки, а также из внутренних органов и половых продуктов рыб-производителей. Поэтому очень важно проведение бактериологического обследования производителей перед закладкой икры на инкубацию [3].

Подавляющее большинство изолированных штаммов бактерий F. psyhrophum чув ствительны к эритромицину и тетрациклину – 83,3 и 80,0 % соответственно. Рост половины изолятов подавляла оксолиновая кислота. Более слабую чувствительность отмечали в отноше нии стрептомицина и гентамицина. Все выделенные штаммы F. psyhrophum были устойчи вы к канамицину. Устойчивость к антибиотикам бактерий F. psyhrophum в настоящее время является серьезной проблемой [4].

Способность возбудителя холодноводной болезни образовывать оболочку, устойчи вую к антибиотикам, вероятно, приводит к быстрому развитию резистентности к лечебным препаратам, а также к рецидивирующим инфекциям [24]. В настоящее время контролирование инфекций, вызванных F. psyhrophum, антибиотиками является малоэффективным методом [5].

Вышеперечисленное обуславливает научный и практический интерес к бактериям F.

psyhrophum. В значительной степени это связано с недостаточно разработанными методами индикации и идентификации данного микроорганизма при выделении из объектов внешней среды [1]. С середины прошлого столетия бактериофаги широко используются для диагности ки различных бактериальных инфекций [2]. Вместе с тем, использование реакции нарастания титра фага, как быстрого и точного метода индикации бактерий, для F. psyhrophum ранее не изучалось.

В связи с этим для усовершенствования методов диагностики флавобактериозов рыб, в настоящее время коллективом авторов проводится выделение бактериофагов F. psyhroph.

um для их дальнейшей селекции и конструирования на их основе биопрепарата для индика ции данных бактерий методом реакции нарастания титра фага.

Библиографический список 1. Васильев Д.А. Учебно-методическое пособие по методам общей бактериологии / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.М. Никишина – Ульяновск, 1998. – 151 с.

2. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия / Д.М. Гольдфарб // М.: Медгиз. – 1961. – 225 с.

3. Дзюба Е.В. Апробация системы высокочувствительной детекции патогенных ми кроорганизмов в аквакультуре обыкновенного карпа cyprinus carpio linnaeus, 1758 / Е.В. Дзю, ба [и др.]//Известия Самарского научного центра Российской академии наук - 2012. - том 14, №1(8). – С. 1883- 4. Устименко Е. А. Бактериальные инфекции у тихоокеанских лососей при искусствен ном воспроизводстве на камчатке // Автореф. дис. …канд. биол. Наук. – 2012. -22 с.

5. Barnes M.E. A Review of Favobaterum psyhrophum Biology, Clinical Signs, and Bacterial Cold Water Disease Prevention and Treatment /, M.E. Barnes, M.L. Brown//The pen Fish Science Journal - 2011, 4 –P.1- 6. Cipriano RC, Holt RA: Favobaterum psyhrophum, cause of Bacterial Cold-Water Disease and Rainbow Trout Fry Syndrome. Fish Disease Leaflet No. 86. United States Dept. of the Бактериофаги в медицине и ветеринарии Interior, U.S. Geological Service, National Fish Health Research Laboratory, Kearneysville, WV 2005, 1- 7. Ekman E. Natural and experimental infections with Favobaterum psyhrophum in salmonid fish. Ph.D. Thesis. Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala 8. Groff JM, LaPatra SE. In: Lim CE, Webster CD. Nutrition and Fish Health New York:

Haworth Press 2001;

pp. 11- 9. Hesami S, Allen KJ, Metcalf D, stland VE, Maclnnes JI, Lumsden JS. Phenotypic and genotypic analysis of Favobaterum psyhrophum isolates from ntario salmonids with bacterial coldwater disease. Can J Microbiol 2008;

54: 619-29.

10. Iida Y, Mizokami A. utbreaks of coldwater disease in wild ayu and pale chub. Fish Pathol 1996;

31: 157-64.

11. Kumagai A. Bacterial coldwater disease in coho salmon. Journal of the Japanese Society of Fisheries Science 2005;

71: 645- 12. Kum C, Kirkan S, Sekkin S, Akar F, Boyacioglu M. Comparison of in vitro antimicrobial susceptibility in Favobaterum psyhrophum isolated from rainbow trout fry. J Aquat Anim Health 2008;

20: 245-51.

13. Lee KB, Heo GJ. First isolation and identification of ytophaga psyhropha from cul tured ayu Korea. Fish Pathol 1998;

33: 37-8.

14. Lehmann J., Mock D., Sturenberg F.J. & Bernardet J.F. (1991) First isolation of Cytophaga psychrophila from a systemic disease in eel and cyprinids. Diseases of Aquatic rganisms 10, 217 15. Len J, valos R, Ponce M. Favobaterum psyhrophum and its pathology of alevins from the El Ingenio fish farm, Huancayo. Rev Peru Biol 2009;

15: 117-24.

16. Lorenzen E, lesen NJ. Characterization of isolates of Favobaterum psyhrophum associated with coldwater disease or rainbow trout fry syndrome II: serological studies. Dis Aquat rgan 1997;

31: 209-20.

17. Madetoja J., Nyman P. & Wiklund T. (2000) Favobaterum psyhrophum, invasion into and shedding by rainbow trout ncorhynchus mykiss. Diseases of Aquatic rganisms 43, 27- 18. Madsen, L. Comparative studies of Danish Favobaterum psyhrophum isolates:

ribotypes, plasmid profiles, serotypes and virulence / L. Madsen, I. Dalsgaard// J. Fish Dis. 2000. Vol.

23. P. 211- 19. Miwa, S. Pathogenesis of experimentally induced bacterial cold water disease in ayu Plecoglossus altivelis /S. Miwa, C. Nakayasu // Dis. Aquat. rg. 2005. Vol.67. P. 93- 20. Nicolas P, Mondot S, Achaz G, Bouchenot C,Bernardet J-F, Duchaud E: Population structure of the fish-pathogenic bacterium Favobaterum psyhrophum. Appl Env Microbiol 2008, 74: 3702. PMID: 21. Nilsen H, lsen AB, Vaagnes, et al. Systemic Favobaterum psyhrophum infec tion in rainbow trout ncorhynchus mykiss (Walbaum) farmed in fresh and brackish water in Nor way. J Fish Dis 2011;

34: 403-8.

22. Post GP. Textbook of fish health. New Jersey;

T.F.H. Publications 23. Schmidtke LM, Carson J. Characteristic of Fexbater psyhrophus isolated from Atlantic salmon in Australia. Dis Aquat rgan 1995;

21: 157- 24. Sundell, K., and T. Wiklund. Effect of biofilm formation on antimicrobial tolerance of Favobaterum psyhrophum. J Fish Dis 2011: 34: 373- 25. Taylor PW. Detection of Favobaterum psyhrophum in eggs and sexual fluids of pacific salmonids by a polymerase chain reaction assay: implications for vertical transmission of bacterial coldwater disease. J Aquat Anim Health 2004;

16: 104-8.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии 26. Wakabayashi H, Toyama T, Iida T. A study on serotyping of ytophaga psyhropha isolated from fishes in Japan. Fish Pathol 1994;

29: 101-4.

ABOUT THE PROSPECTS OF PHAGES-DIAGNOSTICS OF FLAVOBACTERIOSIS OF FISH Paramonova N.А., Viktorov D.А., Vasilev D.А., Zolotukhin S.N.


Key words: Favobaterum psyhrophum, batera o-water fish sease, agnoss, treatment, preventon, baterophages.

The paper proves a revew of the pubshe ata of natona an foregn authors, the probem of agnosts, treatment an preventon of batera o-water fish sease ause by Favobaterum psyhrophum s onsere. The anayss ponts to the urgeny of the eveopment of methos phages-agnosts an phagotherapy for the mentone seases of fish.

УДК 619:616.98:579.842. БАКТЕРИОФАГИ В БОРЬБЕ С САЛЬМОНЕЛЛЕЗОМ ПТИЦ Пименов Н.В., доктор биологических наук, доцент, ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина», тел. 8(495)3778567, pimenov-nikolai@yandex.ru Ключевые слова: Бактериофаги, сальмонеллез птиц, леение, оздоровление, препа рат В работе изложены результаты исследований по выделению активных бактериофа гов и созданию препарата против сальмонеллеза птиц. Создание бивалентного бактериофага на основе Phagum Samonea typhmurum и Phagum Samonea enterts, разработка техно, логии его биологиеского производства и успешная апробация фагового препарата открыва ют новые перспективы в противоэпизоотиеской борьбе с сальмонеллезом.

Введение. Сальмонеллез птиц продолжает оставаться острой проблемой для ветери нарной и гуманитарной медицины. По заключению экспертов Всемирной организации здраво охранения сальмонеллез, как зоонозная инфекция, не имеет себе равных по сложности эпизо отологии, эпидемиологии и трудностям борьбы с ней. В последние годы произошел серьезный дрейф в сторону развития у полевых штаммов сальмонелл множественной резистентности к антибиотикам. Латентно больные птицы (например, дикие и домашние голуби) могут являться причиной распространения опасного возбудителя и расширения границ эпизоотического оча га, что в серьезной степени увеличивает социальную опасность [1].

Проблема антибиотикорезистентности актуализирует проблему переориентирования медикаментозных подходов при лечении сальмонеллеза от использования химиотерапевтиче ских групп препаратов к применению других эффективных и менее опасных групп. Такими являются препараты, приготовленные на основе бактериофагов [2].

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение. Для создания препарата бактериофагов против сальмонеллеза птиц нами по методу обогащения из сточных вод птицефабрик, пометных вод голубятен и зоопарков были выделены 39 изолятов Phagum Salmonella typhimurium. Изучили их происхождение, морфологию вирионов, морфологию ко.

лоний, активность, диапазон специфичности, спектр литической активности, что позволило отобрать, паспортизировать и депонировать производственные штаммы. Три наиболее актив ных штамма – Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, 8 МЕ, 9 ММ отличались высокими литическими каче..

ствами. Их литическая активность составляла 10-8-10-10 по методу Аппельмана и превосходила 107 по методу Грациа. При последующих исследованиях еще 15 бактериофагов тифимуриум паспортизированы в качестве резервных для препарата. У всех фагов отмечен максимальный спектр литического действия при специфичности литической активности к бактериям вида Salmonella enterica.

По морфологической структуре выделенные и селекционированные бактериофаги от несены к 4 классификационной группе по Тихоненко, В1 морфотипу и семейству Siphoviridae.

Фаги 5 ТЗ и 8 МЕ обладали выраженным лизинообразованием. Кроме того, депони рованные фаги обладали выраженными свойствами адсорбции на клетках хозяев. При этом наибольшие показатели скорости адсорбции – (4,96±0,05)х10-9 см3мин-1 и количества адсор бировавшихся фаговых частиц – 91,7±0,25%, отмечены у бактериофага Ph. S. typhimurium № МЕ -ДЕП, который также наиболее интенсивно формировал литический фермент.

Проведение опытов одиночного цикла развития осуществляли в трех аналоговых по вторностях согласно описанному методу Эллипса и Дельбрюкка на бульонных культурах де понированных штаммов сальмонелл. Учет результатов проводили после инкубации по иссле дованию посевов методом агаровых слоев, произведенных с интервалом в 2 минуты в течение 1 часа.

Отмечено, что среднее число негативных колоний в разведении 1:40 составляет 30- на протяжении 22 минут (фаг 5 ТЗ), с 26 минуты отмечается выраженный рост, на 28 минуте появляются негативные колонии в чашках, засеянных из разведения 1:100, и на 30 минуте про является полный лизис колоний в посевах из второго разведения (1:40). Таким образом, конец латентного периода начинает проявляться на 24-25 минутах и стабилизируется за 8 минут. Т.е.

у селекционированных фагов выявлен минимальный латентный период внутриклеточного раз вития. Среднее число негативных колоний, полученных из разведения фага 1:100 – 132, значит, по окончании лизиса бактерий количество фаговых частиц составило 13200 в 0,1 мл материа ла. Средняя урожайность фагов на одну бактериальную клетку также отмечена на достаточно высоком уровне для производственных штаммов – 185-206 фаговых частиц. Таким образом, проведенные исследования определили характеристики полученным нами сальмонеллезным фагам тифимуриум, которые удовлетворяют требованиям к производственным штаммам для создания лечебно-профилактических препаратов.

Для определения степени антигенного родства производственных штаммов мы прово дили исследования серологических свойств фагов, получая к ним антисыворотки методом им мунизации кроликов. Через 7-10 дней после последнего введения антигена у кроликов брали кровь из краевой вены уха и испытывали нейтрализующую активность антисывороток в разве дениях 1:25-1:800. Если антисыворотка вызывала нейтрализацию свыше 90 % фаговых частиц при пятиминутном контакте, то ее активность считали приемлемой для дальнейшей работы.

Полученные гипериммунные сыворотки на производственные штаммы бактериофа гов проявляли нейтрализующую активность в разведениях 1:50-1:400. Константы скорости нейтрализации фагов с гомологичными антисыворотками составили 240,21-270,26 мин-1, с ге терологичными антисыворотками – 124,42-163,67 мин-1. Т.о. было установлено, что штаммы Бактериофаги в медицине и ветеринарии Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, 8 МЕ, 9 ММ являются родственными и обладают выраженной им муногенностью.

Принимая во внимание этиологическую структуру возбудителей сальмонеллеза для разных видов птиц, было отмечено, что S. enteritidis – доминирующий этиотропный серова риант для кур, второй из значимых (хотя и в принципиально меньшем соотношении) возбуди телей сальмонеллеза голубей, некоторых декоративных и водоплавающих птиц. Кроме того, серовариант S. enteritidis является основным возбудителем пищевых токсикоинфекций у чело века [3]. Сальмонеллоносительство у водоплавающих, синантропных, вольерных птиц с уча стием S. enteritidis довольно широко распространено, что отмечено нашими наблюдениями и исследовательскими данными [4].

Для создания бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц были исполь зованы фаги к S. enteritidis, выделенные нами при исследовании по методу обогащения проб птицефабрик и депонированные нами совместно с С.В. Леневым и Ю.А. Малаховым в качестве производственных – Ph. S. enteritidis А-1, ЮН-1, ЮН-2. Их характеризует литическая активность к эталонному штамму S. enteritidis №3-2 ВГНКИ по методу Аппельмана 10-9-10-10, специфичность и широкий спектр литического действия.

Бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц готовили, производя высев в разные емкости с предварительно нагретым до 37 °С разведенным 1:5 МПБ суспензий 6-ча совой культуры штамма Salmonella typhimurium М-2ф t-ДЕП и фильтрата каждого из бакте риофагов: Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, 8 МЕ, 9 ММ, а также суспензий 6-часовой культуры S.

enteritidis 25 Яв e-ДЕП и фильтрата каждого из бактериофагов Ph. S. enteritidis А-1, ЮН-1, ЮН-2.

Фаговый препарат готовили поэтапно. Культивирование фагов на молодых культурах сальмонелл проводили 18 часов, после чего осуществляли очистку биологического препарата бактериофагов от биологической массы сальмонелл, остатков клеток и компонентов питатель ной среды.

Следующим этапом осуществляли центрифугирование при 6000 об./мин. в течение 30 минут, фильтрацию через системы бактериальных фильтров Шамберленда и приготовле ние концентрированной суспензии бактериофагов. В качестве контроля служили отсутствие роста при посеве суспензии бактериофагов в разведенный МПБ и рост сальмонеллы без фагов по выраженной мутности питательной среды. Концентрированную суспензию бактериофагов контролировали по методу Аппельмана, доводя концентрацию до уровня 108 фаговых частиц в 1 см3 среды.

В качестве консерванта приготовленной суспензии фагов применяли раствор хинозо ла до его конечной концентрации в фаголизате – 0,01%. Готовый препарат формировали сме шиванием консервированных суспензий бактериофагов в соотношении 1:1:1:1:1:1, после чего проводили расфасовку, упаковку, маркировку и контроль препарата бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц.

Контроль экспериментальных серий препарата на стерильность осуществляли высе вом на МПА, в МПБ, среды Китта-Тароцци и Сабуро.

Отмечены высокие результаты при постановке контролей на активность бивалентного бактериофага, осуществленных на белых мышах и голубях при подкожном инфицировании, для чего лабораторным объектам внутримышечно вводили культуры S. typhimurium M-2ф t -ДЕП (1 группа), S. enteritidis 25 Яв e -ДЕП (2 группа) в дозах по 5 LD50 и смесь культур по 2, LD50 (3 группа), а спустя 20 минут – препарат. Наблюдение и учет заболевших и павших голу бей с бактериологическим исследованием проводили в течение 14 дней.

Результаты исследования активности бивалентного бактериофага против сальмонел Бактериофаги в медицине и ветеринарии леза птиц в остром лабораторном опыте на мышах и голубях показали их сохранность 90- % при сохранности в контрольных группах без фагообработки – 0-10 %. При этом единичные летальные случаи в опытных группах могли быть спровоцированы высокой дозой экзо- и эн дотоксинов введенных сальмонелл, т.к. гибель по 1 голубю отмечали в первые 1-2 суток после начала эксперимента при введении S. enteritidis или смеси с ее присутствием. Причем от по.

гибших голубей в опытных группах сальмонеллу не выделяли, при этом в контроле ее выделя ли из материала, как от трупов, так и от клинически здоровых голубей.

Препараты сальмонеллезных фагов: как в моноисполнении, так и в виде бивалентно го бактериофага против сальмонеллеза птиц, способы их производства и применения были успешно апробированы в условиях птицеферм, голубятен, зоопарков, частных подворий и во льеров для содержания птиц различных видов, неблагополучных по сальмонеллезу.

Основываясь на представленных материалах, Бактериофаг тифимуриум против саль монеллеза голубей, бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц и способ лечения сальмонеллеза птиц при помощи этих препаратов были внедрены в практику и рекомендова ны ветеринарным специалистам. Препарат против сальмонеллеза голубей и способ лечения сальмонеллеза голубей запатентованы. Фаговые препараты рекомендованы для борьбы с саль монеллезом птиц, что нашло отражение в одобренных Департаментом ветеринарии МСХ РФ «Рекомендациях по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур» [5], «Реко мендациях по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей» [6].

Заключение. Резюмируя вышеизложенное необходимо отметить, что возвращение препаратов на основе активных бактериофагов в практику ветеринарной медицины при борьбе с сальмонеллезом птиц является перспективным направлением противоэпизоотической рабо ты, особенно в условиях множественной антибиотикорезистентности возбудителя и ограничи тельных требований по применению химиотерапевтических препаратов для профилактики и лечения болезней в птицеводстве.

Библиографический список 1. Данилевская В.Н., Пименов Н.В. Проблема антибиотикорезистентности на примере лечения сальмонеллеза у домашних голубей//Российский ветеринарный журнал, 2005, №4, с.

21-24.

2. Ленев С.В. Сальмофаг энтеритидис//Состояние, проблемы и перспективыразвития ветеринарной науки в России: Сб. мат-лов науч. сессии РАСХН/ Под ред. А.М. Смирнова. – М.:

РАСХН, 1992, с. 258-259.

3. Михаэль А. Сальмонеллез – вопросы и ответы?//Сб. докладов VI Междунар. вет.

конгресса по птицеводству, 26-29 апреля 2010, М., 2010, с. 114-121.

4. Кузьмин В.А. Сальмонеллезная инфекция в условиях птицефабрик, методы профи лактики и оздоровления: Автореф… дис. докт. вет. наук. – СПб: СПбГАВМ, 1995, 16 с.

5. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В., Малахов Ю.А., Яковлев С.С. Рекоменда ции по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. – М.: МСХ-МГАВМиБ, 2002, 34 с.

6. Пименов Н.В., Куриленко А.Н., Чиркова И.В., Яковлев С.С. Рекомендации по диа гностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей. – М.: МСХ;

«МегАрт», 2008, 43 с.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии BACTERIOPHAGES AGAINST AVIAN SALMONELLOSIS Pimenov N.V.

Key words: baterophages, samonea brs, treatment, rehabtaton, mene The arte presents the resuts of researh on the reease of the atve baterophages an the reaton of mene aganst samonea brs. reatng a bvaent baterophage base on Ph.

S. typhmurum an Ph. S. enterts, the eveopment tehnoogy of t’s booga prouton an suessfu testng of phage preparatons open new prospets n antepzoot aganst samonea.

УДК 576.9+579.842./4.598.2/. ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОКИНЕТИКИ САЛЬМОНЕЛЛЁЗНЫХ БАКТЕРИОФАГОВ В ОРГАНИЗМЕ ЦЫПЛЯТ КРОССА ИЗА Пугачев В.Г., заведующий сектором;

Тотменина О.Д., научный сотрудник;

Тимакова О.И., инженер;

Агиенко А.И., студентка ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», р.п. Кольцово, Новосибирской области тел. 8(383)363-47-79, pugachev@vector.ncs.ru Юшков Ю.Г., кандидат ветеринарных наук;

Леонов С.В., научный сотрудник;

Селиверстова Н.А., младший научный сотрудник ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии, п. Краснообск, Новосибирской области тел. 8(383)348-39-31, 348-39-31@mail.ru Ключевые слова: бактериофаг, сальмонелла, птицеводство, фаготерапия.

В работе исследовали распределение бактериофагов по органам и тканям цыпленка при выпаивании суспензии бактериофага здоровым птицам и инфицированным сальмонеллой.

Результаты исследования показали, то фаги быстро распространяются по органам цы плёнка при оральном введении и постепенно выводятся в отсутствие бактерий для размно жения. Через 20 асов фаговые астицы остаются только в кишенике. В слуае заражения сальмонеллой бактериофаги концентрируются и размножаются в тканях пеени, в селезенке и в кишенике. Знаительное увелиение концентрации бактериофага к 20 асам показывает, то в органах идет размножение на специфиных бактериях патогена.

В настоящее время бактериофаги находят широкое применение в медицине, ветерина рии и биотехнологии. Узкая специфичность действия на бактериальную микрофлору, способ ность избирательно воздействовать на патогенные микроорганизмы, позволяет использовать их для диагностики, профилактики и лечения человека, животных и птиц.

Возникновение антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов предполагает поиск новых препаратов для борьбы с ними. Современные лечебно-профилактические препа раты бактериофагов составлены из вирулентных фагов широкого диапазона действия, актив ных и в отношении бактерий, устойчивых к антибиотикам.

Спектр негативного влияния применения антибиотиков в сельском хозяйстве настоль ко широк (аллергенность, токсичность, селекция антибиотикорезистентных штаммов), что Бактериофаги в медицине и ветеринарии правительства ряда стран с 1998г проводят политику, направленную на максимальное ограни чение, а в перспективе – и на полный запрет применения антибиотиков в сельском хозяйстве.

[1] Появление антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов привело к неэф фективности лечения бактериальных болезней у животных, к увеличению заболеваемости и смертности и, как следствие, к продолжительному бактерионосительству. Антибиотикорези стентность появляется у многих видов возбудителей, в том числе таких как Escherichia coli, Salmonella, Staphylococcus.[2] В связи с ограничениями, вводимыми на применение антибио тических препаратов, еще более актуальным является вопрос о включении бактериофагов в противоэпизоотические мероприятия в промышленном птицеводстве. Поэтому в ветеринар ной практике все более широкое применение находят экологически безопасные методы ле чения, которые в комплексе с другими лечебными мероприятиями часто дают более высокий терапевтический эффект. К последним относят и бактериофаготерапию.[3] Значительная доля всех инфекционных болезней в птицеводстве приходится на болез ни бактериальной этиологии. На первом месте стоит колибактериоз (49%), а затем микоплаз моз, сальмонеллез (25%), пастереллез.[4, 5, 7].

Целью настоящей работы явилось изучение распределения бактериофагов по органам и тканям цыпленка при выпаивании суспензии бактериофага здоровым птицам и инфициро ванным сальмонеллой.

Материалы и методы. В работе использовали бактериофаги – Ps-1 и Ps-2, выделен -1 -2, ные из стоков и напольной подстилки птицефабрики и селектированные на штаммах №465 и №105.[6,8] Штаммы сальмонелл - Salmonea enterts - №465 и Salmonea ganarum - № – выделены и охарактеризованы в лаборатории болезней птиц ГНУ ИЭВСиДВ.

Бактериофаги Ps-1 и Ps-2 размножали на специфичных штаммах №465 и №105, лиза -1 - ты были очищены фильтрованием. Литическую активность проверяли на ряде коллекционных штаммов.

Суспензию бактериофагов с концентрацией 108б.о.е./мл выпаивали 3-х суточным цы плятам в количестве 2-3 108б.о.е. В контрольную партию входили здоровые цыплята, а опыт ная партия состояла из цыплят, предварительно инфицированных штаммами сальмонелл.

Органы забирали через 2, 4, 6, 8 и 20 часов после выпаивания суспензии фагов. Далее ткани взвешивали, гомогенизировали и суспендировали в физиологическом растворе. Полу ченную суспензию высевали на агаризованные питательные среды для проверки на наличие сальмонелл, к оставшейся суспензии добавляли хлороформ (2%), осветляли центрифугирова нием и аликвоты раскапывали на агар из чувствительной культуры. Чашки инкубировали при 370С, 20 часов.

Таблица 1 - Специфичность выделенных фагов к коллекционным и лаборатор ным штаммам микроорганизмов.

Бактериофаги Штаммы микроорганизмов Ps-1 Ps- Samonea typhmurum B-581 лизис лизис Samonea enterts DS – 1 лизис нет Samonea enterts DS – 3 лизис нет Samonea 1 №105 лизис лизис Samonea ganarum №465 лизис нет Shgea B - 582 лизис лизис Esherha o AB - 259 нет нет Esherha o B - 34 нет нет Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 2 - Чувствительность выделенных штаммов к антибиотикам.

Наименование препаратов №105 (мм) №465 (мм) Гентамицин (10мкг) 22 Канамицин (30мкг) 20 Спектиномицин (100мкг) - Амоксициллин (20мкг) 21 Норфлоксацин (10мкг) 22 Энрофлоксацин (5 мкг) - Офлоксацин (5мкг) 18 Ципрофлоксацин (5мкг) - Флорфеникол (30мкг) - Линкомицин(15мкг) - Левомицетин (30мкг) 21 Полимиксин (300ЕД) 18 Результаты. В процессе работы были выделены два бактериофага, специфичных штаммам сальмонелл №465 и №105. Литическая активность бактериофагов проверяли на кол лекционных штаммах. В таблице 1 показано, что бактериофаги Ps-1 и Ps-2 имеют достаточно узкую специфичность.

Штаммы сальмонелл №465 и №105 проверили на чувствительность к антибиотикам.

Результаты представлены в таблице 2.

Исследование органов цыплят контрольной группы показало, что уже через 2 часа фа говые частицы распределяются по тканям печени, селезенки и кишечника. В пробах, отобран ных через 4, 6 и 8 часов, также найдены фаговые частицы в кишечнике и печени, к 20 часам фаг остается только в кишечнике и обнаружен лишь у одной особи из двух.

При исследовании органов цыплят экспериментально инфицированных штаммами сальмонелл и пропоенных суспензией бактериофага мы наблюдали несколько иную картину.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |
 

Похожие работы:





 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.