авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 13 |

«Проведение школы-конференции осуществлено при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований Мирошников А.И., Председатель оргкомитета.Председатель ПНЦ РАН, ...»

-- [ Страница 2 ] --

ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕТЕРОГЕННОСТИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ИНТЕРФЕРОНА-2b ЧЕЛОВЕКА Злобина О.В., Протасов Е.А., Родин С.В., Ищенко А.М.

Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: olazzz@mail.ru Интерферон-альфа 2b человека (ИФН-2b) является одним из важнейших и социально значимых лекарственных препаратов, применяемых в противовирусной и противоопухолевой терапии. При получении рекомбинантных белков медицинского назначения очень важно, чтобы структура белка соответствовала установленным фармакопейным стандартам. Целью работы было изучение гетерогенности препарата интерферона, получаемого из производственного штамма-продуцента E. coli BL21(DE3) (pAYC-ET-(hIFN-2b) lacI), в котором рекомбинантный белок накапливался в цитоплазме клеток в виде телец включения.

Изучение белка телец включения после рефолдинга и циклов хроматографической очистки, проведенное методами электрофореза в ПААГ и ОФВЭЖХ, выявило многокомпонентный состав препарата, причем, по данным иммунохимического анализа множество компонентов (фракций) относились к интерферону. Было замечено, что отдельные фракции не стабильны и компонентный состав интерферона претерпевает изменения во времени.

Показано, что в отсутствии глутатиона в белковом растворе происходит перераспределение белка между фракциями в направлении увеличения доли белка, соответствующего фармакопейным стандартам (с правильно замкнутыми дисульфидными связями, далее - “основной” фракции). При добавлении в белковый раствор глутатиона происходит резкое возрастание доли одной из фракций (далее - “исследуемой” фракции) за счет белка основной фракции, однако в процессе последующего хранения возрастание сменяется постепенным уменьшением доли исследуемой фракции и соответствующим возрастанием доли белка основной фракции. Для выяснения причин гетерогенности отдельные фракции были выделены и детально исследованы при помощи различных методов. В результате масс-спектрометрического анализа выявлено, что молекулярная масса белка исследуемой фракции превышена на 307 Да по сравнению со стандартным белком. Полученные данные, в совокупности с результатами других исследований (реакция Эллмана с препаратом белка до и после восстановления дисульфидных групп) позволяют предположить, что белок исследуемой фракции представляет собой комплекс ИФН с молекулой ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ глутатиона, образованный через дисульфидную связь. Проведенные исследования позволяют объяснить временную кинетику перераспределения фракций ИФН и установить пути стабилизации белка.

ВАРИАЦИИ НАКОПЛЕНИЯ ИНГИБИТОРОВ ТРИПСИНА В РАСТЕНИЯХ СЕМЕЙСТВА COMPOSITAE В ПРОЦЕССЕ ВЕГЕТАЦИИ Иванов О.А., Домаш В.И.

Институт экспериментальной ботаники им. В.Ф. Купревича НАН Беларуси, Минск (Беларусь).

E-mail: heleg-zero@mail.ru Исследовали накопления ингибиторов трипсина в различных частях растений ряда широко распространенных на территории РБ дикорастущих видов семейства Compositae в процессе роста и развития. Исследовали подземные части и надземную вегетативную массу 18 видов растений данного семейства, произрастающих на территории республики. Критерием оценки накопления ингибиторов была выбрана удельная ингибиторная активность белков по отношению к трипсину.

Анализ удельной активности экстрактов корневищ и листьев в начале вегетации, в период активного цветения и после полного созревания плодов позволил выявить несколько характерных вариантов накопления и перераспределения белковых ингибиторов в различных вегетирующих органах исследованных растений. У однолетних растений наблюдалось три тенденции накопления ингибиторов трипсина в листьях. Для листьев Cirsium palustre было характерно повышение удельной ингибиторной активности к фазе цветения и ее понижение к концу вегетативного периода. В листьях Galinsoga parviflora не обнаружено трипсинингибирующей активности в начале развития растения, к моменту активного цветения она была довольно значительной и уменьшалась к созреванию семян. Для листьев Bidens tripartitа было характерно повышение ингибиторной активности к моменту цветения и сохранение ее уровня к окончанию вегетации. Для многолетних растений с отмирающими на зиму надземными органами отмечено повышение удельной ингибиторной активности в листьях в середине вегетации с падением этого показателя к моменту окончания плодоношения. В корневищах наблюдалась тенденция к уменьшению удельной активности к периоду цветения растения и возрастанию ее к этапу окончания созревания плодов. Проведенные исследования позволили установить, что для многолетних растений семейства Compositae с зимующими прикорневыми розеточными листьями характерно накопление ингибиторов протеиназ в листьях.

Это было показано для всех исследованных растений данной группы, удельная активность ингибиторов трипсина в листьях которых в начале вегетации и в конце вегетации была значительно выше, чем в фазе цветения.

СОЗДАНИЕ ЖИВОТНОЙ МОДЕЛИ С ВОССТАНАВЛИВАЮЩИМСЯ СТАТУСОМ МЕДИ Ильичева Е.Ю., Затуловский Е.А.

Санкт-Петербургский государственный политехнический университет, Санкт Петербург (Россия), НИИ экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: ikaterina2705@yandex.ru В последние годы показано, что некоторые транспортеры меди участвуют в транспорте в клетку широко используемых в клинике платиновых противоопухолевых препаратов. Это дает основание считать, что эффективность ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ применения цисплатина и его органоспецифичность может быть связана со статусом меди в организме и клетках опухоли. Поэтому целью данной работы было создание животной модели, удобной для изучения метаболизма меди, его роли в развитии опухолей и эффективности применения различных типов противоопухолевых препаратов.

Ранее было показано, что с помощью Ag-диеты у грызунов можно индуцировать дефицит меди, ассоциированной с церулоплазмином (ЦП). Чтобы выяснить восстанавливается ли статус меди, Ag-грызунам однократно внутрибрюшинно или per os вводили раствор CuSO4 (10 мкг CuSO4/г массы тела), и через различные интервалы времени (от 10 мин до 72 ч) в сыворотке крови измеряли уровень оксидазного ЦП. В течение всего эксперимента животные продолжали получать с пищей серебро. Результаты демонстрируют, что введение ионов меди вызывает повышение уровня оксидазного ЦП. При этом заметной разницы в действии CuSO4, введенного внутрибрюшинно или per os, нет. Ферроксиадзная активность также восстанавливается. Соответственно нарастает определенная кинетическим методом ферментативная активность сыворотки этих животных в реакции окисления о-дианизидина. При этом существенного увеличения содержания иммунореактивного ЦП не происходит. В то же время, повышение оксидазной активности происходит быстрее, чем новосинтезированный ЦП появляется в кровотоке. Вероятно, введенная медь уже через несколько минут поступает в печень, и метаболически посттрансляционно в комплексе Гольджи включается в ЦП.

ВЛИЯНИЕ ДАЛАРГИНА НА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В КРОВИ КРЫС ПРИ ГИПОТЕРМИИ Исмаилова Ж.Г., Астаева М.Д., Таджибова Л., Гюлиева Э.Ф., Кличханов Н.К.

Дагестанский государственный университет, Махачкала (Россия).

E-mail: jamilja@mail.ru У ненаркотизированных животных под действием низкой температуры развивается холодовой стресс, следствием чего является активация свободнорадикальных процессов в тканях. Для предупреждения холодового стресса, а, следовательно, опосредованного им образования активных форм кислорода в тканях крыс используют опиоидный пептид даларгин, механизмы антиоксидантного действия которого недостаточно изучены. В данной работе исследовано действие даларгина на свободнорадикальные процессы в крови крыс при умеренной гипотермии (температура тела снижена до 30С).

При снижении гипотермии в плазме крови на 66,2% возрастает содержание мочевой кислоты - индикатора образования АФК in vivo. В эритроцитах содержание малонового диальдегида возрастает на 29,3%, а содержание основного клеточного антиоксиданта - глутатиона снижается на 17,3% относительно контроля. Таким образом, совокупность полученных нами данных свидетельствует о том, что при умеренной гипотермии в крови интенсифицируются свободнорадикальные процессы.

Инъекция даларгина (внутрибрюшинно в дозе 100 мкг/кг) за 30 мин до холодового воздействия способствует меньшему накоплению мочевой кислоты в плазме крови, чем при гипотермии без введения пептида. При гипотермии на фоне введения даларгина в эритроцитах не происходит повышение уровня МДА, а также падение уровня глутатиона.

Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о том, что при кратковременной умеренной гипотермии даларгин препятствует интенсификации процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах, ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ снижая генерацию активных форм кислорода и повышая активность антиоксидантной системы.

ФЕРМЕНТЫ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ЗАЩИТЫ ВАКУОЛЕЙ КЛЕТОК ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ Ишеева О.Д., Прадедова Е.В., Саляев Р.К.

Учреждение Российской академии наук Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН, Иркутск (Россия).

E-mail: praded@sifibr.irk.ru Центральная вакуоль активно вовлекается в поддержание гомеостаза клеток растений. В последние годы все чаще стали обращать внимание на участие вакуоли в формировании ответных защитных реакций клетки на разнообразные стрессорные воздействия, в том числе и на окислительный стресс. В условиях окислительного стресса система ферментативной защиты от токсических эффектов активных форм кислорода (АФК) сформирована с участием супероксидцисмутазы (СОД), каталазы и пероксидазы в качестве необходимых компонентов. Они активно изучаются в таких клеточных структурах как митохондрии, пластиды, пероксисомы, клеточные стенки и т.д. В тоже время, обращает на себя внимание слабый интерес к этим ферментам у центральной вакуоли. В связи с этим цель настоящего исследования заключалась в изучении ферментативной системы антиоксидантной защиты у вакуолей клеток растений.

Из всех перечисленных ферментов до последнего времени была выявлена только вакуолярная пероксидаза (КФ 1.11.1.7.). Нам удалось идентифицировать СОД (КФ 1.15.1.1) в вакуолях корнеплодов столовой свеклы (Beta vulgaris L.). Фермент вакуолярной локализации оказался Cu,Zn-СОД, состоящей из трех изоформ с pI от 3 до 4,5. Каталазу в вакуолях корнеплодов не обнаружили. А выявленная в них фенол-зависимая пероксидаза была представлена широким спектром молекулярных форм (кислых и основных). Она имела высокое сродство к 3.3'-диаминобензидину и оптимальные условия для активности при низких значениях рН (рН 5,0-6,0). Активность и изоферментный состава вакуолярных СОД и пероксидазы изменялись в зависимости от стадии развития корнеплода и воздействия стрессорных факторов (обезвоживание, патогенез). Наличие СОД и пероксидазы в центральной вакуоле указывает на то, что ее молекулярные структуры защищаются от избыточных супероксидного радикала и H2O2, а в вакуолярном пространстве поддерживается и регулируется редокс-гомеостаз.

ВЛИЯНИЕ ГЛУБОКОЙ ГИПОТЕРМИИ И ПОСЛЕДУЮЩЕГО СОМОСОГРЕВАНИЯ НА ЛИПИДНЫЙ СОСТАВ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ КРЫС Каландаров А.М.1, Фейзуллаев Б.А.1, Забелинский С.А.2, Кличханов Н.К. Дагестанский государственный университет, Махачкала (Россия), Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова, Санкт Петербург (Россия).

E-mail: klich-khan@mail.ru Искусственная гипотермия у ненаркотизированных крыс приводит к снижению деформируемости эритроцитов и ускорению их внутрисосудистого гемолиза. Возможно, что существенные нарушения структурно-динамических характеристик мембран эритроцитов при гипотермии связаны с изменением их липидного состава в результате липидного обмена с липопротеидами плазмы крови, либо их перекисного окисления. В этой связи нами исследован состав ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ фосфолипидов мембран эритроцитов при глубокой гипотермии (температуру тела снижали до 20°С) и после восстановления температуры тела крыс. Липиды из мембран эритроцитов экстрагировали по методу Фолча. Разделение фосфолипидов (ФЛ) на индивидуальные фракции проводили методом двумерной тонкослойной хроматографии.

При гипотермии в мембранных липидах обнаружена тенденция к снижению содержания холинсодержащих ФЛ и (сфингомиелина фосфатидилхолина). При низкой температуре тела в мембранных липидах почти в два раза снижается содержание фосфатидилинозитола, что возможно связано с их участием в сигнальных процессах. Гипотермия существенно увеличивает содержание лизофосфолипидов (на 38,3%) в липидах мембран, которые, взаимодействуя с эритроцитарной мембраной, могут изменять ее структуру и свойства и, накапливаясь в значительных количествах, приводить к лизису клеток. Восстановление температуры тела после перенесенной глубокой гипотермии не приводит к нормализации состава ФЛ мембран. Таким образом, причиной нарушения структурно-динамических характеристик мембран эритроцитов при гипотермии может быть существенное изменение состава и соотношения ФЛ.

NADH: УБИХИНОН ОКСИДОРЕДУКТАЗА (КОМПЛЕКС I) ИЗ МИТОХОНДРИЙ МОЗГА СВИНЬИ Калашников Д.С.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва (Россия).

E-mail: denis.kalashnikov@gmail.com Каталитические свойства и механизмы регуляции комплекса I (митохондриальной NADH:убихинон оксидоредуктазы, ЕС 1.6.99.3) подробно изучены на препаратах полученных из сердца млекопитающих или на примере прокариотических гомологов фермента, NDH-1. Неясным остается вопрос о возможной специфике комплекса I из других тканей. Мы впервые получили препарат сопряженных субмитохондриальных частиц из митохондрий мозга свиньи (М-СМЧ). М-СМЧ катализируют NADH-оксидазную (0,8 мкмоль/мин на мг белка) и NADH:Q1-редуктазную реакции (0,6 мкмоль/мин на мг белка) чувствительные к ротенону (30°C и рН 8,0). Величина дыхательного контроля сопряженных с помощью олигомицина М-СМЧ при окислении NADH составляет 5, а при окислении сукцината 3. Содержание комплекса I в препарате (0, нмоль/мг) оценили с помощью титрования NADH-оксидазной активности М-СМЧ с помощью специфических ингибиторов: пиерицидина, ротенона и NADH-OH.

Содержание цит. a в полученном препарате составляет 0,17-0,19 нмоль/мг белка.

По стимуляции каналообразущим антибиотиком аламетицином NADH-оксидазной активности в присутствии разобщителя оценили содержание правильно ориентированных (inside-out) М-СМЧ (~70%). Пальмитиновая кислота в присутствии Ca2+ и при щелочных значениях рН приводит к развивающемуся во времени необратимому ингибированию NADH:Q1-редуктазной активности М-СМЧ.

Эффект специфичен для пальмитиновой кислоты. Мы предполагаем, что накопление длинноцепочечных жирных кислот в присутствии Ca2+ может способствовать ингибированию комплекса I например при развитии ряда патологий, в том числе ишемического повреждения тканей мозга.

Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ 08-04- и NIH Fogarty 5R03TW007825.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ СОДЕРЖАНИЕ ЦИТОХРОМА B5 И ЕГО РОЛЬ В ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ МИКРОСОМНОГО ЦИТОХРОМА Р-450 В ПЕЧЕНИ КРЫС С ТРАНСПЛАНТИРОВАННОЙ КАРЦИНОМОЙ ГЕРЕНА Кеца О.В., Винничук С.М.

Черновицкий национальный университет, Черновцы (Украина).

E-mail: ketsa80@mail.ru Цитохром b5 является компонентом NADH-зависимой микросомной цепи и ему пренадлежит особая роль в регуляции скорости гидроксилирования ксенобиотиков цитохромом Р-450. Изучение содержания цитохрома b5 как одного из компонентов микросомных редокс-цепей в условиях роста в организме злокачественного новообразования откроет перспективы для выяснения причин изменения детоксикационной функции печени. Цель работы – исследование содержания цитохрома b5 в микросомной фракции печени крыс с трансплантированной карциномой Герена на разных этапах онкогенеза.

Результаты исследования уровня цитохрома b5 в микросомной фракции печени показали, что по мере роста в организме карциномы Герена содержание данного гемопротеина снижается. Так, на начальном этапе онкогенеза уровень цитохрома b5 в 1,2 раза ниже контрольных показателей, тогда как на терминальном этапе данный показатель в 1,8 раза ниже нормы.

В условиях снижения уровня цитохрома b5 в микросомной фракции печени в динамике роста карциномы Герена, роль этого фермента в функционировании NADPH-зависимой цепи цитохрома Р-450 ограничивается, поскольку именно цитохром b5 обеспечивает цитохром Р-450 электронами на пятом этапе монооксигеназного цикла. В результате этого наблюдается снижение гидроксилазной активности цитохрома Р-450 на терминальном этапе онкогенеза, соответственно снижается детоксикационная функция печени в условиях роста в организме карциномы Герена.

Таким образом, установленное нами снижение содержания цитохрома b5 и одновременное снижение гидроксилазной активности цитохрома Р-450 в микросомной фракции печени опухоленосителей, дает основание утверждать о роли цитохрома b5 в регуляции активности цитохрома Р-450 в условиях роста в организме карциномы Герена.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИЗМЕНЕНИЙ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНОВ А И Е У БЕЛЫХ КРЫС С КОМБИНИРОВАННЫМ ПОРАЖЕНИЕМ ЭТАНОЛОМ НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКОГО ОТРАВЛЕНИЯ СОЛЯМИ СВИНЦА И КАДМИЯ Клищ И.Н., Демкив И.Я.

Тернопольский государственный медицинский университет им. И.Я.

Горбачевского, Тернополь (Украина).

E-mail: iria_ternopil@mail.ru Целью данного экспериментального исследования стало изучение изменений концентраций витаминов А и Е сыворотки крови и печени белых крыс в условиях смоделированного поражения этиловым спиртом на фоне хронического отравления солями свинца и кадмия.

Все животное были разделены на 3 группы. Алкогольное отравление моделировали по (Panchenko L.F., 1987). Комбинированное поражение осуществляли путем внутрижелудочного введения хлорида кадмия в дозе 3, мг/кг массы тела и уксуснокислого свинца в дозе 11 мг/кг в течение 30 суток, после чего на 31 сутки одноразово вводили этанол 12,5 мл 40% раствора на килограм массы тела животного. Концентрации витаминов А и Е определяли по методике Р.Ч. Черняускене ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Исследование концентрации витамина А в сыворотке крови и при комбинированном введении животным этанола и солей свинца и кадмия показало, что данный показатель достоверно снижается на 1 сутки эксперимента на 29,7%;

на 2 сутки эксперимента на 28,1% и на 5 - 42,2% по сравнению с контрольными животными. Мы также зафиксировали снижение концентрации витамина А в группе животных с комбинированным отравлением относительно группы животных отравленных этанолом на 1 (18,2%) и 5 (37,3%) сутки наблюдения. В печени животных с комбинированным поражением, концентрация витамина А снижалась относительно контроля в течении всего эксперимента. При данном поражении в сыворотке крови и печени существенно снижается концентрация витамина Е в течение всего эксперимента относительно контрольной группы животных. Концентрация витамина Е снижалась в сыворотке крови на 1 (на 39,9%), 2 (на 35,2%) и 5 (31,6%) сутки, а также в печени на 1 (на 40,6%), 2 (на 44,2%) и 5 (20,5%) сутки эксперимента соответственно относительно аналогичного показателя в группе животных с изолированным введением этанола.

ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ РЕКОВЕРИНСВЯЗЫВАЮЩЕГО УЧАСТКА РОДОПСИНКИНАЗЫ Ковалева Н.А., Григорьев И.И., Чурюмова В.А., Сенин И.И., Филиппов П.П.

НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, Москва (Россия).

E-mail: nadya.kovaleva@gmail.com Десенситизация родопсина осуществляется путем фосфорилирования рецептора под действием родопсинкиназы. В настоящее время механизм функционирования родопсинкиназы остается невыясненным, а также неясно на каком этапе действует Ca2+-связывающий ингибитор фермента - рековерин.

В настоящей работе мы показали, что рековерин в комплексе с родопсинкиназой не препятствует фосфорилированию 11-членного С-концевого пептида родопсина. Это означает, что рековерин не оказывает влияния на свойства каталитического домена родопсинкиназы. Более того, мы продемонстрировали, что в то время как родопсинкиназа конкурирует с трансдуцином за связывание с рецептором и тем самым понижает GTP-азную активность трансдуцина, рековерин в комплексе с родопсинкиназой не оказывает влияния на это конкурирование.

Для более детального исследования образования комплекса между рековерином, родопсинкиназой и родопсином мы сконструировали фрагменты родопсинкиназы, соответствующие ее каталитическому, N- и С-концевым доменам и изучили их способность взаимодействия с рековерином и родопсином.

Мы показали, что рековерин в присутствии Ca2+ взаимодействует только с N-концевым доменом родопсинкиназы, но не взаимодействует с другими доменами. При этом в составе N-концевого домена родопсинкиназы за взаимодействие с рековерином отвечает короткий участок с 1 по аминокислотные остатки. Также мы показали, что только N-концевой домен родопсинкиназы светозависимо взаимодействует с родопсином, при этом рековеринсвязывающий участок (1-25) также принимает участие во взаимодействии с рецептором.

Полученные результаты позволили предложить механизм Ca2+/рековерин зависимой регуляции активности родопсинкиназы.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ НА УРОВЕНЬ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ Коваленко С.С., Кузьмичева Л.В., Альба Н.В.

Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева, Саранск (Россия).

E-mail: tarakashka89@yandex.ru Чешуйчатый лишай, или псориаз (psoriasis vulgaris) рассматривается как хронический, рецидивирующий, тяжелый, мультифакториальный дерматоз неясной этиологии с очень сложным патогенезом. Показателями, характеризующими состояние больного и эффективность лечения, часто используют свободнорадикальное окисление (СРО) и антиоксидантную активность (АОА).

Целью работы являлось определение эффективности комплексной терапии псориаза по уровню АОА. Общая антиоксидантная активность определялась хемилюминесцентным методом в сыворотке крови (Афонина Г.Б., Бордонос В.Г., 1990).

Значение АОА в контрольной группе составило 0,163±0,012 Е/мл, показатель СРО равнялся 0,110±0,003 имп/с. Сыворотка крови больных I группы (n=15) характеризовалась значением АОА, не превышающим 0,042 Е/мл. Для лечения применялась лекарственная терапия и плазмаферез с аутотрансфузией озономодифицированной эритровзвеси. Показатели АОА у II группы (n=14) не превышали 0,019 Е/мл, терапия включала внутрисосудистое облучение крови.

Значение СРО в сыворотке крови у обеих групп больных мало отличалась от контроля - 0,107±0,002 имп/с. Результаты показали, что у больных I группы показатель АОА до лечения был в 3,88 раза ниже значения, полученного в группе доноров. После лечения АОА возросла до 0,118±0,015 Е/мл, т.е. увеличилась в 2,8 раз по сравнению с показателем, полученным в прогрессивную стадию заболевания. У больных II группы до лечения значение АОА было меньше контрольного значения в 8,3 раза. После применения внутрисосудистого облучения уровень АОА достиг 0,060±0,008 Е/мл, т.е. увеличился в 3,1 раз. Таким образом, оба метода лечения оказались достаточно продуктивными, обозначилась положительная динамика роста уровня антиоксидантной активности.

С-КОНЦЕВОЙ СЕГМЕНТ В РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ НЕЙРОНАЛЬНОГО КАЛЬЦИЕВОГО СЕНСОРА РЕКОВЕРИНА Колпакова Т.В.1, Е.Ю.Зерний1, Е.Л.Князева2, С.Е.Пермяков2, Е.А.Пермяков2, Д.В.Зинченко3, И.И.Григорьев1, И.И.Сенин1, П.П.Филиппов НИИ ФХБ им. А.Н.Белозерского МГУ, Москва (Россия), 2Учреждение РАН Институт биологического приборостроения РАН, Пущино (Россия), 3Филиал ИБХ им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова, Пущино (Россия);

E-mail: kolpakovatatiana@mail.ru Нейрональные Cа2+-сенсоры (НКС) – семейство EF-hand содержащих Са2+ связывающих белков, способных в ответ на изменения концентрации внутриклеточного Cа2+ с высокой специфичностью распознавать и регулировать белки-мишени, принимая участие в передаче различных сигналов. В пределах семейства НКС обладают высокой степенью структурного сходства, однако при этом демонстрируют различные чувствительности к Cа2+ и регулируют широкий диапазон мишеней. Отличительной особенностью структуры НКС является наличие в ней С-концевой гипервариабельной последовательности, так называемого “С-концевого сегмента”. В настоящей работе высказано предположение, что именно эта последовательность отвечает за уникальность ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Са2+-зависимых функциональных свойств отдельных НКС. Для проверки этого предположения сконструирован ряд мутантов одного из НКС, фоторецепторного белка рековерина, содержащих С-концевой сегмент различной длины. Показано, что удаление 15-ти и более С-концевых а.о. в рековерине приводит к нарушению структурных свойств белка, что выражается в снижении степени посттрансляционного миристоилирования белка до 70%, а также в снижении его термостабильности. Установлено, что последовательность Q191 – E195 С концевого сегмента, принимает участие в регуляции механизма Са2+ миристоильного переключателя рековерина, за счет которого он способен связываться с фоторецепторными мембранами. Впервые показано участие 12-ти С-концевых а.о. рековерина в его взаимодействии с внутриклеточной мишенью – родопсинкиназой. Выдвинуто предположение, что С-концевой сегмент у НКС является регуляторным участком, определяющим специфичность их Са2+ зависимого взаимодействия с мишенями.

ОБ ИЗМЕНЧИВОСТИ ПЕКТИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ В СОСТАВЕ РАСТИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ Кондратенко В.В.1, Кондратенко Т.Ю. Краснодарский НИИ хранения и переработки сельскохозяйственной продукции Россельхозакадемии, Краснодар (Россия), Кубанский государственный аграрный университет, Краснодар (Россия).

E-mail: kvlad_46@mail.ru В настоящее время в биохимии нативного синтеза и деградации пектиновых веществ существует устойчивое мнение, что данный процесс идет у различных растительных организмов приблизительно по одному механизму - в процессе активного развития растительной клетки, начиная с момента формирования срединной пластинки и до начала формирования вторичных клеточных стенок аппарат Гольджи непрерывно экскретирует исходные составляющие пектиновых молекул в область формирующейся первичной клеточной стенки, в результате чего общее содержание пектиновых веществ возрастает. А поскольку основная масса их сосредоточена в этот момент именно в составе клеточных стенок, где пектиновые молекулы связаны по всем своим функциональным группам с остальными компонентами матрикса, то такого рода пектин нативно нерастворим в воде и относится к категории “протопектин”.

Далее, в процессе роста и развития, по мере перестройки клеточных стенок и приближении их к состоянию биологической зрелости, часть протопектина подвергается частичному гидролизу с отщеплением более или менее крупных фрагментов, способных находиться в растворе, что знаменуется накоплением растворимых фракций пектина и постепенной мацерацией тканей. При этом последний процесс постепенно продолжается до смерти клеток. Анализ проведенных авторами исследований позволяет утверждать, что протопектиновый комплекс растительной клеточной стенки представляет собой не пассивносвязанную совокупность молекул пектина, но сложную сильноразветвленную сеть единого макрокомплекса, отдельные нити которого могут быть связаны в пространстве посредством ионных, эфирных и водородных связей. При этом в клеточной стенке в течение всей жизни клетки идут одновременно два разновекторных процесса - досинтез существующего макрокомплекса и частичный гидролиз его фрагментов, что приводит к сложной динамике общего содержания пектина и его свойств как ответ на внешние условия жизнедеятельности клеток.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ВЛИЯНИЕ ЦЕЛЛОБИОЗОЛИПИДА НА СИНТЕЗ ПОЛИФОСФАТОВ У ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAЕ ВКМ Y- Кочеткова О.Ю., Трилисенко Л.В., Вагабов В.М., Кулаев И.С.

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино (Россия).

E-mail: The-kocha@rambler.ru Целью данной работы является изучение действия разных концентраций целлобиозолипида (ЦБЛ) из Cryptococcus humicola на синтез отдельных фракций неорганических полифосфатов у дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКМ Y-1173, культивируемых на глюкозе или этаноле при низкой (гипоксия) или высокой концентрации кислорода в среде.

Действие ЦБЛ из Cryptococcus humicola, основано на его способности нарушать проницаемость цитоплазматической мембраны клеток дрожжей мишеней, что выражается, в частности, в потере клетками ионов К+ и АТР и снижением уровня неорганических полифосфатов (полиР).

Низкие концентрации ЦБЛ слабо повлияли на синтез отдельных фракций полиР, в то же время, высокая (0,05 мг/мл) концентрация ЦБЛ снизила скорость синтеза полиР. При этом, на фоне резкого снижения синтеза полиР при росте на глюкозе и низкой аэрации, обращает на себя внимание более устойчивый синтез фракции полиР4. Та же картина наблюдается и при росте на глюкозе с высокой аэрацией среды. Наконец, при росте на этаноле синтез всех фракций полиР был более устойчивым к действию ЦБЛ, достигая 63%-70% от синтеза в контрольных клетках.

Низкие концентрации ЦБЛ (0,005 и 0,01 мг/мл) слабо повлияли на содержание Рi и АТР в клетках. Действие высокой концентрации вещества (0, мг/мл) привело к резкому падению как содержания Рi, так и АТР в клетках.

Причем снижение уровня этих соединений зависело прямым образом от источника углерода и аэрации среды: наибольшее снижение Рi и АТР относительно контроля наблюдалось в клетках, растущих на глюкозе и низком содержании кислорода. При повышении аэрации и росте на глюкозе содержание Рi и АТР увеличивалось и, наконец, наибольшее содержание этих соединений приходится на клетки, растущие на этаноле.

Таким образом, действие ЦБЛ на синтез полиР у Sacch. cerevisiae зависит от условий роста культуры, в частности, источника углеродного питания и аэрации среды.

СОДЕРЖАНИЕ ВОССТАНОВЛЕННОГО ГЛУТАТИОНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ АТРОФИЧЕСКОМ ГАСТРИТЕ И ЯЗВЕННОМ КОЛИТЕ Кравченко О.А., Гайда Л.Н., Тимошенко М.А., Томачинская Л.И., Дробинская О.В.

Киевский национальный университет им. Тараса Шевченко, Киев (Украина).

E-mail: demidiko@gmail.com По распространенности такие патологии, как неспецифический язвенный колит (ЯК) и атрофический гастрит (АГ) занимают одно из ведущих мест среди заболеваний органов пищеварения, имеют рецидивирующее течение и неблагоприятный медико-социальный прогноз, в крайних случаях приводящий к злокачественным процессам и смерти. При этом биохимические особенности данных патологий, не смотря на их принципиальное значение для диагностики и профилактики, остаются малоисследованными.

Исходя из вышесказанного, целью данной работы было оценить содержание восстановленного глутатиона (GSH) в клетках слизистой оболочки ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ желудочно-кишечного тракта при формировании экспериментального язвенного колита и атрофического гастрита. Отметим, что GSH, играя исключительную роль в протекании клеточных окислительно-восстановительных реакций, имеет прямое влияние на пролиферацию, функционирование и апоптоз клеток.

АГ вызывали интрагастральным введением подопытным крысам 2% салицилата натрия в течение 6 недель, заменяя питьевую воду 20 мМ деоксихолатом. Колит моделировали заменяя питьевую воду 1,5%-ным раствором декстрансульфатнатрия в течение 7 суток. Содержание GSH определяли флуориметрически, на 1,2,3,4,5,6 недели развития АГ и на 1, 3 и сутки индукции колита.

В результате проведенных исследований установлено, что в течение недель развития атрофический гастрит характеризуется постепенным увеличением по сравнению с контролем содержания GSH, что может указывать на активацию глутатионовой антиоксидантной системы в период острого воспаления. В последующие сроки наблюдения нами отмечено достоверное снижение уровня данного параметра на 33% и 25% по сравнению с контролем на 5 и 6 недели соответственно. Концентрация цитозольного GSH при колите на сутки незначительно возрастала, на 3 сутки - достоверно не изменялась, а на сутки составляла лишь 70% от контроля. Таким образом, более поздние стадии развития исследуемых патологий, сопровождающиеся нарастанием морфолого гистологических признаков атрофии слизистой оболочки желудка (для АГ) и воспаления (для ЯК), характеризуются истощением пула восстановленного глутатиона.

ПОИСК И ВЫДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНЫХ БЕЛКОВ ИЗ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ГОЛУБОГО ПЕСЦА ALOPEX LAGOPUS Кучерова Е.Г.1, Берлов М.Н.1,2, Кораблёва Е.С.1, Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия), НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: kucherovaele@yandex.ru Работа с антимикробными белками и пептидами актуальна и интересна, поскольку они являются частью механизмов врожденного иммунитета, обеспечивающих неотложное реагирование организма животных и человека на инфекцию.

В качестве материала были использованы лейкоциты крови голубого песца, ранее не исследованного в этой области. Из клеток были получены экстракты 10%-ной уксусной кислотой. Их анализировали диск-электрофорезом в присутствии додецилсульфата натрия (SDS) и антимикробным тестом методом наложения гелей против Listeria monocytogenes и Escherichia coli, после чего один из экстрактов был подвергнут разделению путем гель-фильтрации на колонке, заполненной биогелем Р-10, и обращённо-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (офВЭЖХ). После проведения электрофорезов в присутствии SDS и при кислых pH в присутствии мочевины, а также антимикробного теста методом радиальной диффузии против L. monocytogenes и E. coli, были выделены белковые фракции, демонстрирующие микробоцидное действие. Одна из них была нами идентифицирована по молекулярной массе и характерной ферментативной активности как фракция лизоцима.

Ведется работа с пробой, проявляющей мощную антимикробную активность, которая после проведения электрофореза в присутствии SDS выглядит в виде двух полос на уровне 16 и 8 кДа с выраженной зоной между ними, а после электрофореза при кислых pH - в виде одной. Тест на содержание углеводного компонента дал отрицательный результат. После обработки ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ надмуравьиной кислотой, окисляющей серосодержащие аминокислотные остатки, на геле после электрофореза при кислых pH, она выглядела в виде трех полос. Мы предположили, что это белок, состоящий из двух субъединиц сходной молекулярной массы, но несущих различный заряд. В дальнейшем планируется провести масс-спектрометрический анализ и определить первичную структуру.

НОВАЯ АЦИЛАМИДАЗА ИЗ RHODOCOCCUS ERYTHROPOLIS, СПОСОБНАЯ ГИДРОЛИЗОВАТЬ N-ЗАМЕЩЁННЫЕ АМИДЫ К. В. Лавров, И. А. Залунин, Е. К. Котлова, А.С. Яненко Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, 113545, Москва, 1-ый Дорожный пр., 1, ф. (495) 315-05-01, e-mail yanenko@genetika.ru Выделена и охарактеризована новая ациламидаза из Rhodococcus erythropolis ТА37, субстратами которой являются N-замещённые акриламиды изопропилакриламид, метилен-бис N,N-диметил-аминопропилакриламид, акриламид, п-нитроанилиды кислот - 4`-нитроацетанилид, Gly-pNA, Ala-pNA, Leu pNA, N-ацетилпроизводные аминокислот глицина, аланина, лейцина. Фермент также использует в качестве субстратов алифатические амиды - ацетамид, акриламид, изобутирамид, н-бутирамид, валерамид, хотя и с меньшей эффективностью. Масса субъединицы фермента по результатам Ds-Na ПААГ составила 55 кДа. Максимальная активность фермента наблюдается при рН 7- и температуре 550С. Фермент стабилен при 220С в течение 15 часов, при 450С в течение получаса. Константа Михаэлиса Кm c Gly-pNA составляет 0,25мМ, с Ala pNA 0,55 мМ. Активность ациламидазы подавляется ингибиторами сериновых протеаз - ФМСФ и ДИФФ, и не подавляется ингибиторами алифатических амидаз - ацетальдегидом и нитрофенилдисульфидами. N-концевая аминокислотная последовательность ациламидазы высоко гомологична N-концевым последовательностям двух предполагаемых амидаз, обнаруженных при секвенировании геномов Rhodococcus erythropolis. Предполагается, что ациламидаза вместе с обнаруженными гомологами являются представителями нового семейства внутри суперсемейства GGSS амидаз.

Ключевые слова: Rhodococcus erythropolis, амидаза, N-замещённые амиды, акриламид, N-ацетиламинокислоты.

ВЛИЯНИЕ ВТОРИЧНЫХ МЕССЕНДЖЕРОВ НА СИНТЕЗ МЕХАНО-РОСТОВОГО ФАКТОРА Лисицина Е.С., Фуралев В.А., Кравченко И.В., Попов В.О.

Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Москва (Россия).

E-mail: lisitsinaes@gmail.com Механо-ростовой фактор представляет собой продукт (МРФ) альтернативного сплайсинга гена инсулино-подобного фактора роста 1, стимулирующий деление миобластов и повышающий мышечную массу экспериментальных животных. Экспрессия МРФ резко возрастает при повреждении мышечной ткани и при мышечных нагрузках. Механизм его действия остается неизвестным, хотя показано, что МРФ действует через иные, чем ИПФР-1, рецепторы. Регуляция синтеза МРФ также остается малоизученной.

Целью данной работы было исследования влияния различных регуляторов сигнальных путей, индуцируемых вторичными мессенджерами, на синтез МРФ в культурах миобластов и дифференцированных миотуб мыши и человека на уровне белка и мРНК.

Было исследовано влияние на экспрессию МРФ следующих соединений:

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ дибутирил-цАМФ (дб-цАМФ) - проникающего через мембраны аналога цАМФ;

форсколина - активатора аденилатциклазы;

А23187 - кальциевого ионофора;

форбол-миристоил-ацетата (ФМА) - активатора протеинкиназы С;

LY-83 583 донора супероксид-иона;

нитропруссида натрия - донора NO. Было обнаружено, что из всех исследованных соединений только дб-цАМФ и форсколин обладали способностью стимулировать синтез МРФ в миобластах и миотубах мыши, причем эффект был выражен как на уровне мРНК, так и на уровне белка. В случае клеток человека помимо вышеперечисленных соединений стимулирующим действием обладал также ФМА. Эффект дб-цАМФ и ФМА на человеческие миобласты и миотубы был аддитивным - при совместном воздействии наблюдалась более сильная стимуляция, чем при воздействии любого из агентов по отдельности. дб-цАМФ активировал экспрессию МРФ значительно быстрее, чем ФМА, что дает основание предположить опосредованный механизм стимуляции синтеза МРФ при активации протеинкиназы С.

Из остальных испытанных соединений Са2+-ионофор А23187 сильно ингибировал экспрессию МРФ в миобластах и миотубах клеток как мыши, так и человека. LY-83 583 обладал менее выраженным ингибирующим действием, а нитропруссид не оказывал существенного влияния на синтез МРФ.

АКТИВНОСТЬ КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ N У ПАЦИЕНТОВ С ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА Лобзина Е.С., Киселева Е.А., Сметанин В.А., Петрушова О. П., Бардинова Ж.С., Генгин М. Т.

Пензенский государственный педагогический университет им. В. Г. Белинского, г.

Пенза vsmeta@rambler.ru Ишемическая болезнь сердца (ИБС) – самое распространенное заболевание и одна из основных причин смертности. Инфаркт миокарда (ИМ) является серьезным осложнением ИБС. Важную роль при данной патологии играют вазоактивные пептиды, в обмене которых принимает участие карбоксипептидаза N (КПN).

Целью данной работы было определение активности КПN в сыворотке крови у пациентов с ИБС и ИМ.

Изучение активности ферментов было проведено у 11 мужчин с ИБС и 11 мужчин с ИМ в возрасте от 49 до 70 лет. В качестве контроля выступала группа из 12 здоровых пациентов того же возраста. Активность КПN определяли в сыворотке крови нингидриновым методом по образованию гиппурил- аргинина при pH 7,6 как активируемую ионами кобальта (II). Достоверность отличий между средними определяли с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты наших исследований показали увеличение активности КПN в сыворотке крови у больных с ИБС в 2,8 раза, а у больных ИМ в 2,4 раза по сравнению с контролем. С одной стороны, такие изменения можно объяснить тем, что КПN, разрушая брадикинин, который является мощным вазодилататором, может способствовать констрикции сосудов, и тем самым вызывать увеличение артериального давления – одного из патогенетических факторов ИБС. Кроме того, брадикинин участвует в воспалительных реакциях, к которым относится формирование атеросклеротической бляшки. Таким образом, фермент, разрушая брадикинин, может тормозить развитие атеросклеротического процесса, а значит и риск развития ИМ и ИБС. Возможно, увеличение активности КПN является своеобразным защитным механизмом в условиях усиленного атерогенеза.

Полученные результаты представляют интерес для понимания биологической ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ роли КПN при ИБС, и, возможно, могут быть использованы для разработки методов профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ИСКУССТВЕННОГО ГИПОБИОЗА И ГИБЕРНАЦИИ НА АКТИВНОСТЬ ОРНИТИНДЕКАРБОКСИЛАЗЫ В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ Логвинович О.С., Аксенова Г.Е., Фиалковская Л.А., Афанасьев В.Н., Игнатьев Д.А., Коломийцева И.К.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия).

E-mail: Ologvinovich@rambler.ru Одной из актуальных проблем современной биологии является выяснение механизмов адаптации млекопитающих к факторам окружающей среды. В этом плане зимоспящие млекопитающие являются уникальными объектами для изучения резервных возможностей организма, так как они способны переживать неблагоприятные условия окружающей среды, впадая в состояние оцепенения. В этом плане создание аналогов зимней спячки - состояний сниженной жизнедеятельности является перспективным направлением современной науки.

Задача настоящего исследования заключалась в изучении влияния искусственного гипобиоза и гибернации на активность орнитиндекарбоксилазы в органах и тканях млекопитающих. В качестве объектов исследования выбраны самцы крыс Вистар и якутские длиннохвостые суслики. Состояние гипобиоза у крыс получали методом закрытого сосуда в условиях гипоксии-гиперкапнии.

Сусликов использовали в летний период и в различных физиологических состояниях в период гибернации. Активность ОДК ткани (селезенка, тимус, печень, почки, неокортекс, костный мозг, слизистая оболочка тонкого кишечника) определяли радиоизотопным методом по освобождению 14СО2 из меченого L-[1 C] орнитина. Распределение тимоцитов и клеток костного мозга по фазам клеточного цикла исследовали методом проточной цитофлюориметрии.

Показано, что адаптация млекопитающих к естественному и искусственному гипобиозу сопровождается специфическими изменениями активности ОДК. По критериям активности ОДК и распределению клеток по фазам клеточного цикла состояние искусственного гипобиоза у крыс отличается от естественного гипобиоза у сусликов. Работа поддержана грантом РФФИ № 09-04-00993-а.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ПЕКТИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ОРГАНИЗМА ТЯЖЕЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ Лопатникова Е. Г., Кузьмичева Л. В., Альба Н. В.

Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева, Саранск (Россия) e-mail: krasotulya87@mail.ru Для выведения из организма тяжелых металлов наиболее эффективно использование веществ, содержащихся в натуральных пищевых продуктах, таких как пектины.

Объектом исследования были белые беспородные крысы, самцы, массой 160-180 г. Животные делились на 3 группы: 1-ая группа – контрольная, рацион животных состоял из зерна и воды;

2-ая группа – помимо обычного кормления зерном крысы получали раствор ацетата свинца (100 мг/кг) в течение 21 суток;

3 я группа - после соответственного срока кормления свинцом получала водный раствор свекловичного пектина со степенью этерификации 43,15±0,01 (100 мг/кг) также в течение 21 суток.

Результаты наших исследований показали, что при свинцовой интоксикации происходит снижение уровня общего белка на 9,44%, повышение ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ содержания общего холестерина и общих липидов соответственно на 66,86% и 84,45% по отношению к контролю. Уровень глюкозы в крови экспериментальных животных повышен на 45,88%. Отношение эффективной к общей концентрации альбумина (ЭКА/ОКА) в сыворотке снижается до 0,93…%, а индекс токсичности (ИТ) повышается в 3 раза. При действии пектина содержание глюкозы достоверно ниже, чем в группе со свинцовой нагрузкой в среднем на 42,85%, а общих липидов на 61,09%. Концентрации общего белка и общего холестерина близки к контрольным значениям. Показатель ЭКА/ОКА повышается до 0,98, а ИТ уменьшается в 3,4 раза по сравнению с показателями в сыворотке крови крыс, подвергшихся свинцовой интоксикации в течение такого же периода времени.

Таким образом, введение в рацион низкоэтерифицированных пектиновых веществ вызывает снижение уровня интоксикации, вызванной тяжелыми металлами, в частности свинцом.

ФИТИН-РАЗЛАГАЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ПОЧВ УЗБЕКИСТАНА Маликова Н.А., Игамназаров Р.П., Умарова Г.Б.

Национальный университет Узбекистана, Ташкент (Узбекистан).

Фитин, попадая в почву в основном с растительными остатками, составляет значительную часть (30-35%) органических соединений фосфора почвы. Накопление фитина в почве происходит в виде фитиновой кислоты и их солей с ионами металлов - Na, K, Mg, Ca, Al, Fe. В кислых почвах накапливаются фитаты Fe и Al, а в нейтральных и щелочных почвах - фитат Ca-Mg, что обусловлено их растворимостью при различных значениях рН.

На содержание фитина в почве влияет довольно значительный набор факторов, в том числе - глубина разреза, тип почвы, ее окультуренность, содержание органики и ряд других условий, сказывающихся на развитии корней растений и микробиологической деятельности. Важным биологическим индикатором такой деятельности является фитин-разлагающая активность почв.

В настоящем работе приводится данные, характеризующие фитазную активность различных образцов почв, ее зависимость от таких факторов как тип почвы, глубина среза, окультуренность.

Показано, что ферментативная активность непосредственно связана с типом почв и глубиной среза. Например, ферментативная активность 100 г.

поливной сероземной почвы на глубине 0-15 см за 24 часа инкубации, оцененная по количеству отщепленного от фитина ортофосфата, составляла 2,46 мг фосфора, во 2-ом (20-35 см) и 3-ем (45-60 см) срезах эти показатели составляли соответственно 0,98 и 0,66 мг. Такая же закономерность наблюдается и при рассмотрении других типов почв (светлый серозем, такырная почва, луговая почва и Лугово-аллювиальная). Из полученных результатов следует, что фитазная активность поливной сероземной почвы наиболее высокая, наименьшая активность выявлена в образцах луговых и лугово-аллювиальных почв. Аналогичную закономерность наибольшего распространения микроорганизмов, разлагающих органофосфаты, в слое 5-15 см пахотного горизонта черноземов установили и другие исследователи.

ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДАМИ КВАНТОВОЙ ХИМИИ ВЛИЯНИЯ АТОМОВ ХЛОРА В ЭТИЛЕНЕ НА СКОРОСТЬ И МЕХАНИЗМ ОЗОНОЛИЗА Мамин Э. А. 1, А. В. Майоров2, Б. Э. Крисюк3, А. А. Попов Московский физико-технический институт МФТИ, Долгопрудный, 6 курс Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва, Россия Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка, Россия ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ E-mail: yeldar443@yandex.ru В работе были проведены кванто-химические расчеты с помощью следующих методов: B3LYP, МП2, МКССП и МКMП2, с помощью программ Gaussian06, pcgamess, GamessUS. В результате была исследована первичная стадия реакции озона с хлорпроизводными этилена. Константы скорости рассчитывали как при согласованном присоединении озона по механизму Криге (k1), так и при несогласованном бирадикальном присоединения озона по механизму Демура (k2). Произведено сопоставление результатов вычисления с экспериментальными данными из литературы.

В результате можно сделать следующие выводы:

1) Полуколичественный метод B3LYP в целом дает константы скорости реакции, близкие к экспериментальным значениям, за исключением 1,1 – дихлорэтилена, для которого завышение константы с экспериментом составляет 500 раз, и за исключением тетрахлорэтилена, где занижение константы по сравнению с экспериментом составляет 50.

2) Метод МСSCF c поправками MRMP2 в целом дает менее точные значения констант скорости, однако во всех случаях расчетная константа скорости отличается от экспериментальной не более, чем в несколько раз, за исключением трихлорэтилена, для которого различие составляет 30 раз;

3) Присоединение озона идет по механизму Демура в реакции с 1,1 – дихлорэтиленом, тетрахлорэтиленом и трихлорэтиленом, конкуренция обоих механизмов наблюдается для монохлорэтилена, цис- и транс-1,2-дихлорэтилена.

СРАВНЕНИЕ РЕАКЦИОННОЙ СПОСОБНОСТИ ПО ОТНОШЕНИЮ К ОЗОНУ СОПРЯЖЕННОЙ ДВОЙНОЙ СВЯЗИ 1,3-БУТАДИЕНА И ОБЫЧНОЙ ДВОЙНОЙ СВЯЗИ БУТЕНА-1 С ПОМОЩЬЮ КВАНТО-ХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ Майоров А.В.1, Е.И.Денисенко2, Б.Э.Крисюк3, А.А.Попов1, А.А.Пермяков Институт биохимической физики, Москва, Российская Федерация Московский физико-технический институт МФТИ, Долгопрудный, 4 курс Институт прикладной химической физики, Черноголовка, Российская Федерация Московский физико-технический институт МФТИ, Долгопрудный, 5 курс Электронный адрес: hruk@list.ru В данной работе производили расчеты следующими методами квантовой химии: методом, основанным на использовании теории функционала плотности (ТФП) с использованием гибридных функционалов: трехпараметровый функционал Бекке и корреляционный функционал Ли, Янга и Парра (B3LYP);

а также методом, основанным на теории возмущений Меллера-Плессе 2-го порядка (МП2);

и многоконфигурационным методом самосогласованного поля (МКССП) с использованием поправок МКМП2. Расчеты проводились в базисных наборах функций 6-31+G**/6-311+G** и aug-cc-PVDZ.

Для расчетов использовали программы Gamess US, Pcgamess, Gaussian06, программы для расчета термодинамики из нормальных частот колебаний Moltran.

Было проведено сравнение реакционной способности сопряженной двойной связи в бутадиене и обычной двойной связи в бутене-1 при взаимодействии с озоном, так же были проведены расчеты для бывшей сопряженои двойной связи, когда она соседствует с эпоксидом и молозонидом.

Рассчитаны константы скорости реакции. Показано, что скорость озонолиза двойной связи убывает согласно следующей последовательности: сопряженная двойная связь в бутадиене, двойная связь в бутене-1, бывшая сопряженная двойная связь в бутадиене в соседстве с эпоксидом и бывшая сопряженная двойная связь в соседстве с молозонидом. Полученные данные показывают, что ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ двойные связи в четырех вышеописанных ситуациях могут быть дифференцированы методом озонолиза.

ИЗМЕНЕНИЕ ДНКАЗА-I-ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЯДЕР И ХРОМАТИНА ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ГИДРОКОРТИЗОНА Маргарян А.В., Арцруни И.Г., Матинян К.С., Саркисян Э.Г., Геворкян Э.С.

Ереванский государственный университет, Ереван (Армения).

E-mail: ashotmarg2004@gmail.com Известно, что ядерные рецепторы гидрокортизона являются транскрипционными факторами, способными связываться с гормон компетентными областями в хроматине, имеющем репрессивную конформацию.

Следствием подобного связывания является интеграция в данную область белков, ремоделирующих хроматин и меняющих его конформацию на транкрипционно-пермиссивную. Вместе с тем известно, что через 4 часа после введения животным гидрокортизона в ядрах печени выявляется прогрессирующая деконденсация хроматина.

Целью настоящего исследования явилось изучение влияния деконденсации хроматина на его ДНКаза-I-чувствительность, являющуюся основной биохимической характеристикой деконденсированного транскрипционно-пермиссивного хроматина. В этой связи нами была изучена кинетика нуклеазного расщепления хроматина и ядер, выделенных из печени крыс через 4 часа после инъекции гидрокортизона.

Результаты исследований показали, что гидрокортизон заметно увеличивает ДНКаза-I-резистентность ядер, выделенных из печени животных через 4 часа после инъекции гормона. Вместе с тем, согласно ранее полученным нами данным, гидрокортизон оказывает существенное влияние на фосфолипидный состав ядерной оболочки и вызывает изменение ее электрокинетического потенциала, что делает вероятным изменение проницаемости ядерных оболочек для тестируемого фермента. С целью исключения влияния факторов, контролируемых ядерной мембраной, мы исследовали ДНКаза-I-чувствительность хроматина, изолированного из соответствующих препаратов ядер. Результаты этих экспериментов показывают, что индуцированная гидрокортизоном ДНКаза-I-резистентность не может быть обусловлена падением внутриядерной эффективной концентрации ДНКазы-I вследствие гормон-индуцированных изменений в ядерных мембранах.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БЕЛКОВ С АЗОЛАМИ И ЛЕКАРСТВЕННЫМИ СРЕДСТВАМИ НА ИХ ОСНОВЕ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ pH Мартынов Д.В., Андриенко М.Н., Чухно А.С.

Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: alex-chuhno@yandex.ru Изучение процессов взаимодействия между белком и азолом имеет большое значение для медицины и фармации, так как может прояснить процессы, происходящие в организме при действии лекарств на основе азолов.

Целью работы являлось изучение влияния азотосодержащих гетероциклов на положение изоэлектрической точки (ИЭТ) белка, а также изучение образования комплекса между белком и азолами и их поизводными.

В качестве объектов исследования были взяты азолы и некоторые лекарственные средства, их производные. В качестве белков использовались:

яичный альбумин, желатин, казеин. Исследования проводились в водных ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ растворах. рН создавалась с помощью растворов соляной кислоты и гидроксида калия, а также стандартными буферами с известными рН.

В работе определялась ИЭТ методом измерения степени набухания.

Вязкость определялась методом вискозиметрии по стандартной методике.

Электрокинетический потенциал границы скольжения (-потенциал) находился методом макроэлектрофореза.

Из полученных данных следует, что при определении ИЭТ белков, несколькими методами в присутствии азотсодержащих гетероциклов наблюдается смещение значений ИЭТ, что говорит о их специфическом взаимодействии с белком. В большинстве исследованных нами случаев ИЭТ белков смещается в основную область, что говорит о специфическом взаимодействии по катиону, и только растворах тетразола (и его замещенных) в кислую, что говорит о специфическом взаимодействии по аниону. Наибольшее воздействие на значение ИЭТ белка оказывают гетероциклы с 1,3 - положением гетероатомов. Вязкость белковых систем в присутствии азолов практически не меняется от рН, по сравнению с белковыми системами, не содержащими азолов.

АКТИВНОСТЬ 5-АМИНОЛЕВУЛИНАТ-СИНТАЗЫ В МИКРОСОМНОЙ ФРАКЦИИ КАРЦИНОМЫ ГЕРЕНА ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ОБЛУЧЕННЫХ КРЫС ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ Марченко М.М., Кеца О.В., Зла А.В.

Черновицкий национальный университет, Черновцы (Украина).

E-mail: ksen808@mail.ru Влияние малых доз радиации приводит к усилению в организме свободнорадикальных процессов вследствие интенсивной генерации активных форм кислорода (АФК). Компоненты биологических мембран – первые объекты, подвергающиеся атаке АФК, нарушение структуры и функций которых лежит в основание развития онкологических заболеваний. Резистентность опухолевых клеток определяется эффективностью работы клеточной системы детоксикации, основные компоненты которой являются гемопротеинами. Активность 5 аминолевулинат-синтазы может опредилять содержание (АЛК-синтазы) компонентов системы детоксикации в условиях онкогенеза. Цель работы – исследование ферментативной активности АЛК-синтазы в микросомной фракции карциномы Герена предварительно облученных крыс-опухоленосителей.

Результаты исследования показали, что облучение крыс перед трансплантацией в организм карциномы Герена приводит к повышению АЛК синтазной активности в периоды начального и интенсивного роста опухоли в сравнении с необлученными опухоленосителями. Вероятно, влияние малых доз облучения обусловливает синтез гема в клетках печени de novo. Значительная часть вновь синтезированного гема в опухоли утилизируется для образования цитохрома Р-450, поскольку исследуется корреляция между активностю АЛК синтазы гема и индукцией цитохрома Р-450 на соответсвенных этапах онкогенеза.

На терминальном этапе роста карциномы Герена наблюдается снижение АЛК-синтазной активности до уровня показателей необлученных опухоленосителей. Вероятно накопление токсических соединений и радикалов в опухоли, вследствие некротических процессов на терминальном этапе онкогенеза способствует инактивации АЛК-синтазы.

Таким образом, предварительное облучение организма способствует активации АЛК-синтазы в ткани карциномы Герена в логарифмической фазе онкогенеза.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА АНТИОКСИДАНТНУЮ ЗАЩИТУ МИОКАРДА КРЫС-ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ НА ФОНЕ ДОКСОРУБИЦИНА Маслакова А.Г., Напалкова С.М., Генинг Т.П., Саенко Ю.В.

Ульяновский государственный университет, Ульяновск (Россия).

E-mail: maslokova@rambler.ru Цель работы: Изучение функционального состояния перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы (ПОЛ-АОС) у животных с асцитной опухолью яичников (АОЯ) на фоне доксорубицина и эритропоэтина в гомогенатах сердца.

Методы: Исследование проведено на 60 белых беспородных половозрелых крысах обоего пола массой 200-230 грамм. В качестве модели опухолевого процесса использована АОЯ - банк опухолей штаммов им. Блохина.

Животные были разделены на 5 групп (n=12): 1 - интактные, 2 - животные, которым внутривенно вводился доксорубицин в дозе 7,5 мг/кг, 3 - с перевитой АОЯ, 4 - крысы, которым на шестые сутки развития опухоли вводился доксорубицин, 5 - животные с АОЯ, котоым до назначения доксорубицина вводился подкожно эритропоэтин 1200 МЕ/кг на протяжении шести суток. Забой животных через 24 часа после введения доксорубицина. В гомогенатах сердца определяли ПОЛ, оцененное по уровню малонового диальдегида (МДА). Об активности АОС судили по уровню каталазы и глутатионредуктазы (ГР).

Результаты: В гомогенатах сердца у опухоленосителей на 7-е сутки в два раза возрастает уровень ПОЛ при увеличении активности ферментов АОС:

достоверно повышаются цифры каталазы и умеренно возрастают цифры ГР.

Введение доксорубицина достоверно (p0,001) повысило уровень МДА в исследуемом материале и незначительно повысило активность ГР и каталазы.

Это значит, что сам доксорубицин вызывает неоднозначные изменения в системе ПОЛ-АО. У опухоленосителей этот цитостатик повысил уровень МДА в гомогенатах сердца на седьмые сутки роста опухоли (p0,05), понижая активность каталазы (p0,05). Глутатионредуктаза практически не меняет свою активность в исследуемые сроки. Таким образом, введение доксорубицина опухоленосителям вызывает противоположные процессы в активности ПОЛ-АО на примере каталазы и МДА. Использование эритропоэтина не привело к изменению уровня МДА у опухоленосителей, получавших антрациклин. При этом активность звена антиоксидантной защиты возросла: статистически достоверно в случае каталазы (p0,05) и менее существенно на примере ГР. Таким образом, можно говорить о защитном свойстве эритропоэтина на антиоксидантный компонент системы ПОЛ-АО.

Выводы: 1) Доксорубицин в дозе 7,5 мг/кг повышает уровень МДА и активность ГР у здоровых животных;

2) У опухоленосителей доксорубицин в дозе 7,5 мг/кг при внутривенном введении умеренно повышает уровень МДА, понижая уровень каталазы;

3) Эритропоэтин повышает активность каталазы и ГР, не изменения показатель МДА в гомогенатах сердца у животных-опухоленосителей на фоне введения доксорубицина.

ДЕЙСТВИЕ ЦИСПЛАТИНА НА АКТИВНОСТЬ ПОЛИ(АДФ РИБОЗИЛ)ПОЛИМЕРАЗЫ 1 ЯДЕР ТИМОЦИТОВ КРЫС Мельникова-Шарова М.А., Арцруни И.Г., Матинян К.С., Демирханян Л.О., Геворкян Э.С.

Ереванский государственный университет, Ереван (Армения).

E-mail: maga-kamv@rambler.ru В настоящее время известно, что поли(АДФ-рибозил)полимераза1 (ПАРП ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ 1) определяет конкретный путь гибели клеток, выступая в роли переключателя различных программ их элиминации. Последнее обстоятельство делает фермент перспективной мишенью для исследований в области разработки эффективных противоопухолевых препаратов и хемиотерапевтических схем лечения злокачественных новообразований.

Как известно, применение мощного и распространенного антиопухолевого препарата цисплатина ограничено развитием резистентности опухолевых клеток к действию лекарства. Для преодоления данной проблемы часто прибегают к увеличению вводимой дозы цисплатина, что увеличивает вероятность повреждения здоровых клеток организма. Исходя из этого, мы исследовали действие различных доз цисплатина на активность фермента в ядрах тимоцитов здоровых крыс.

Нами показано, что низкие дозы цисплатина (5мг/1000г веса животного) не оказывают существенного влияния на исходную активность ПАРП-1 в ядрах тимоцитов крыс через 24 и 48 часов действия препарата. Введение большей дозы цисплатина (10мг/1000г веса животного) не отражается на активности ПАРП-1 в ядрах тимоцитов крыс в течение первых 24 часов, но уже через часов активность фермента возрастает в 2,5 раза. Поскольку резкая активация ПАРП-1 может быть сопряжена с инициацией апоптической программы клеточной смерти, мы исследовали действие указанной дозы препарата (10мг/1000г веса животного) на ДНК ядер тимоцитов. Согласно полученным данным, через часов действия цисплатина характерного для апоптоза интернуклеосомального расщепления ДНК не наблюдается. Таким образом, более чем двукратное увеличение активности ПАРП-1 недостаточно для включения апоптической программы самоуничтожения тимоцитов.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ БИОАКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА СЕКРЕТОВ, ВЫДЕЛЯЕМЫХ КЛЕЩАМ СЕМЕЙСТВ IXODIDAE И ARGASIDAE Мирзаева А.У., Умркулова С.Х., *Умаров Д.К.

Институт зоологии АН РУз., * Национальный университет Узбекистан, Ташкент Изучение клещей, как ядовитых животных, сравнительно новое направление в науке. Слюна некоторых из них, вводимая в рану в момент присасывания к хозяину и обеспечивающая анестезирующий и антикоагулирующий эффект, содержит токсические вещества.

В экспериментах по изучению состава яда клещей нами обнаружены следующие ферменты: у Hyalomma detritum - фосфолипаза А - 0, мкмоль/мин.мг и протеаза - 0,12 мкмоль/мин.мг;

Hyalomma anatolicum – фосфолипаза А - 0,33 мкмоль/мин.мг и протеаза - 0,09 мкмоль/мин.мг;

Hyalomma asiaticum фосфолипаза А - 0,29 мкмоль/мин.мг и протеаза - 0,07 мкмоль/мин.мг;

а у семейства Argasidae: Argas persicus - фосфолипаза А - 0,48 мкмоль/мин.мг и протеаза - 0,20 мкмоль/мин.мг;

у Argas reflexus – фосфолипаза А - 0, мкмоль/мин.мг и протеаза - 0,15 мкмоль/мин.мг и Argas vespertionis фосфолипаза А -0,32 мкмоль/мин.мг и протеаза - 0,18 мкмоль/мин. мг. Содержание белка - у всех видов иксодовых и аргасовых клещей составило 75-80 %.

Введение яда клещей мышам и крысам вызывало паралич задних, а затем и передних конечностей. Наблюдалось учащение дыхания и судороги.

Выраженность указанных признаков зависела от дозы яда. Введение больших доз (LD100) приводило к гибели животных от асфиксии и судорожных явлений.

Необходимо отметить, что токсичность ядов клещей была близка к таковой ядов пауков Argiopa lobata и Araneus grossus. Эти данные являются достаточно веским основанием для того, чтобы отнести изученных нами клещей к группе ядовитых членистоногих.

КИНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАТРИКСНОЙ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ 2, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ ТКАНИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Мотрук Н.В.

Одесский национальный университет им. И.И. Мечникова, Одесса (Украина).

E-mail: ntvl@ukr.net В предыдущих исследованиях нами было установлено, что матриксная металлопротеиназа-2 КФ полученная из (ММП-2 - 3.4.24.24), немалигнизированной и опухолевой тканей молочной железы, является типичной желатиназой, наиболее интенсивно расщепляющей денатурированый коллаген желатину, и кроме того дипептиды, содержащие неполярные гидрофобные аминокислоты.

Основываясь на данных о субстратной специфичности полученных ферментов, нами были исследованы кинетические характеристики ММП- немалигнизированной и опухолевой тканей молочной железы.

Определение активности полученных ферментов проводили по гидролизу желатины (по методу Вовчук) и по гидролизу 2мМ растворов дипептидов (по методу Бредшау).

Установлено, что усиление процесса малигнизации сопровождается снижением Кm фермента, выделенного из ткани злокачественной опухоли с 0,0298 мM до 0,0061 мМ до, что свидетельствует о повышении сродства ММП-2 к субстрату желатине. По отношению к неспецифическому синтетическому субстрату 2,0 мМ пролил-аланину Кm фермента составляла 7,0274 мМ для ММП 2 нормальной ткани и 11,5647 мМ для ММП-2 опухоли, что свидетельствует о ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ снижении сродства фермента к данному субстрату.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в ответ на трансформацию ткани молочной железы происходит повышение сродства ММП- к природным субстратам и снижение по отношению к синтетическим.

ВЛИЯНИЕ ДАЛАРГИНА НА АКТИВНОСТЬ Na, K-АТФазы И АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ МЕМБРАН СИНАПТОСОМ ИЗ КОРЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС ПРИ ИШЕМИИ Мохаммед М.Т., Аль-Саеди C.М.К., Шихамирова З.М., Кличханов Н.К.

Дагестанский государственный университет, Махачкала (Россия).

E-mail: klich-khan@mail.ru Ранее нами было показано, что при ишемии мозга, вызванной окклюзией сонных артерий, снижается активность ферментов мембран синаптосом - Na, K АТФазы и ацетилхолинэстеразы, что может причиной повреждения нейронов.

Клинические наблюдения и эксперименты на животных позволили установить, что D-Ala2, Leu5, Arg6-энкефалин (даларгин) обладает как антигипоксическим, так и антиишемическим действием. В связи с этим нами исследовано действие даларгина на активность Na, K-АТФазы и ацетилхолинэстеразы (АХЭ) мембран синаптосом из коры головного мозга крыс при ишемии. Экспериментальная ишемия мозга у крыс создавалась путем двусторонней окклюзии общих сонных артерий головного мозга в течение 60 мин.

При ишемии активность Na, K-АТФазы мембран синаптосом снижается на 45,8%, а АХЭ - на 28,3% относительно контроля (ложно оперированные животные). Внутрибрюшинное введение даларгина в дозе 100 мкг/кг за 30 мин до ишемии существенно не предотвращало ингибирование мембранных ферментов.

В дозе, проникающей в головной мозг (500 мкг/кг), даларгин частично предотвращает ингибирование исследуемых ферментов. Так, при ишемии на фоне даларгина активность Na, K-АТФазы на 25,5% выше, чем при ишемии без введения пептида. Падение активности АХЭ при ишемии даларгин предотвращает в меньшей степени (на 9,5%). Биологические эффекты даларгина опосредованы через и опиатные рецепторы, принадлежащие к семейству G белок-сопряженных рецепторов и расположенных на пре- и постсинаптических мембранах нейронов. Исходя из этого, можно предположить, что различная степень защиты этих ферментов даларгином при ишемии связана с особенностями их локализации на синаптической мембране.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ МЕГАФЕРОНА НА ПОЛ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ОСТРОМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГЕПАТИТЕ Мухаммаджанова Г.М., Далимова С.Н., Гафуров М.Б., Альметова Ф.Э., Умарова Г.Б.

Национальный университет Узбекистана им. М. Улугбека, Ташкент (Узбекистан).

E-mail: surae_dalimova@mail.ru Известно, что гепатиты как острые, так и хронические сопровождаются повреждением мембранных структур гепатоцита. Повреждение мембранных структур чаще всего вызывается появлением активных форм кислорода, что приводит в конечном счете к образованию высоких концентраций завершающего продукта переокисления - МДА.

В последние годы в качестве антиоксидантных средств широко используются соединения растительного происхождения. К числу таковых относятся многие полифенолы и различные производные госсипола.

Целью работы явилось изучение влияния нового супрамолекулярного ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ комплекса мегосина (производное госсипола) и глицирризиновой кислоты (выделен из корня солодки)-мегаферона на содержание МДА в плазматических мембранах клеток печени крыс с острым гепатитом, вызванным однократным введением 50%-го масляного раствора ССl4. Мегаферон в концентрации 0, мг/кг веса вводили гепатитным крысам в течение 3-х дней.

Установлено, что острое отравление ССl4 приводит к почти 3-х кратному увеличению содержания МДА в гепатоцитах. Введение мегаферона экспериментальным животным способствовало значительному снижению МДА (в 2,5 раза). Таким образом, на основании проведенных исследований можно предположить, что новый супрамолекулярный комплекс мегаферон чвляется хорошим антиоксидантом.

ИЗМЕНЕНИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КОРНЕЙ ПШЕНИЦЫ ПОД ВЛИЯНИЕМ ЛЕКТИНОВ АЗОСПИРИЛЛ Наконечная О.И., Аленькина С.А., Никитина В.Е.

Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, г. Саратов (Россия) E-mail: аlenkina@ibppm.sgu К числу совершенно неизученных аспектов функционирования ассоциативных симбиозов относится вопрос о том, как влияют макро- и микропартнер друг на друга. В этой связи большой интерес представляют лектины, т.к. известно, что они выполняют информационные функции в различных биологических системах. В частности, в ассоциации пшеница азоспирилла интересны в этом отношении лектины азоспирилл. Ранее с поверхности клеток Azospirillum brasilense Sp7 и его мутанта по лектиновой активности Azospirillum brasilense Sp7.2.3 были выделены лектины, являющиеся гликопротеинами с молекулярной массой 36 кDa, проявляющие специфичность к L-фукозе и имеющие структурные и антигенные различия. Было показано, что лектины азоспирилл способны не только осуществлять наряду с другими факторами адгезию бактерий к растительной клетки, но также стимулировать прорастание семян, проявлять по отношению к растительной клетке митотическую и ферментмодифицирующую активности. Все эти факты позволили предположить, что лектины азоспирилл могут играть роль вещества-сигнала для растительной клетки.

Ответом на многие биотические и абиотические воздействия может быть резкое увеличение образования растительными клетками перекиси водорода.

Было показано, что лектины обоих штаммов во всех изучаемых концентрациях (оценивали три концентрации – 10, 20 и 40 мкг/мл) вызывали увеличение активности пероксидазы, но только в том случае, когда время выдерживания корней с лектинами составляло 20 мин (изучались временные интервалы 10 и мин). Самой эффективной концентрацией для обоих лектинов явилась концентрация 40 мкг/мл. Лектин родительского штамма вызывал увеличение пероксидазной активности в большей степени, чем лектин мутантного штамма.

Полученные данные свидетельствуют о способности лектинов азоспирилл изменять метаболизм растения в направлении, благоприятном для роста и развития путем регулирования содержания цАМФ и перекиси водорода.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ И МЕХАНИЗМА ДЕЙСТВИЯ СИНТЕТИЧЕСКОГО ПЕПТИДА ОКТАРФИНА Некрасова Ю.Н.1,2, Садовников В.Б.1, Наволоцкая Е.В. Филиал Учреждения Российской академии наук Института биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Пущино (Россия), Пущинский государственный университет, Пущино (Россия).

E-mail: nekr-jul@mail.ru Известно, что действие -эндорфина осуществляется через мю и дельта опиоидные рецепторы, а также через неопиоидные (нечувствительные к опиоидному антагонисту налоксону) рецепторы -эндорфина. До настоящего времени структура и функции последних остаются малоизученными. Недавно нами был определен фрагмент -эндорфина наименьшей длины, способного с высоким сродством связываться с неопиоидным рецептором. Им является фрагмент молекулы гормона 12-19. Был синтезирован пептид TPLVTLFK, соответствующий последовательности 12-19 -эндорфина (авторское название октарфин).

Цель настоящей работы - изучение влияния октарфина на активность иммунокомпетентных клеток мыши in vitro и in vivo.

Получен меченный тритием октарфин ([3H]октарфин, уд. активность Ки/моль) и изучено его связывание с перитонеальными макрофагами мыши.

Установлено, что [3H]октарфин связывается с макрофагами с высокой аффинностью (Kd 2,3±0,2 нМ) и специфичностью: Специфическое связывание [3H]октарфина с макрофагами ингибировали немеченые -эндорфин и селективный агонист неопиоидного рецептора -эндорфина синтетический пептид иммунорфин (SLTCLVKGFY) (Ki 2,7±0,2 и 2,4±0,2 нМ соответственно) и не ингибировали немеченые налоксон, -эндорфин, -эндорфин и [Met5]энкефалин (Ki 10 мкМ). Показано, что октарфин при концентрации 1-10 нМ он увеличивал адгезию и распластывание перитонеальных макрофагов, а также их способность переваривать бактерии вирулентного штамма Salmonella typhimurium 415 in vitro;

внутрибрюшинное введение пептида приводило к возрастанию активности перитонеальных макрофагов, а также T- и В-лимфоцитов селезенки.

/-АГАТОКСИНЫ - НОВОЕ СЕМЕЙСТВО МОДУЛЯТОРОВ ПОТЕНЦИАЛ ЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ Никольский А.1, Биллен Б.2, Василевский А.1, Титгат Я.2, Гришин Е. Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им.

акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва (Россия), Университет города Лёвен, лаборатория токсикологии, Лёвен (Бельгия).

E-mail: annikolsky@gmail.com Потенциал-зависимые натриевые каналы являются ключевыми элементами в процессах проведения нервных импульсов и мишенями действия целого арсенала токсинов животного и растительного происхождения.

Полипептидные молекулы, взаимодействующие с высокой селективностью и эффективностью с натриевыми каналами, помогут раскрыть новые аспекты в строении и функции этих мембранных транспортных систем.

Эта работа посвящена выделению и исследованию нового семейства полипептидных токсинов из яда паука Agelena orientalis, модулирующих активность натриевых каналов насекомых. Выделение активных компонентов яда осуществлялось в две стадии методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Установленные аминокислотные ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ последовательности токсинов (36-38 остатков) проявляют высокую степень сходства не только между собой, но также с -агатоксинами, куртатоксинами и палутоксинами. Все исследуемые пептиды в концентрациях порядка 100 нМ оказывают модулирующее действие на потенциал-зависимые натриевые каналы плодовой мушки Drosophila melanogaster (DmNav1): вызывают ингибирование инактивации (т.н. -эффект) и снижение порога активации каналов (-эффект).

Более того, /-агатоксины обладают высочайшей специфичностью в отношении каналов насекомых, будучи абсолютно неэффективными на каналах млекопитающих. Такая избирательность действия пептидов позволяет рассматривать их в качестве основы для создания высокоэффективных и безопасных инсектицидов.

РОЛЬ СИГНАЛЬНЫХ БЕЛКОВ, ЦИТОКИНОВ И ОКСИДА АЗОТА В РЕГУЛЯЦИИ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА У МЫШЕЙ Новоселова Т.В., Глушкова О.В.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино (Россия) E-mail: novossulova_t@rambler.ru Воспалительные хронические патологии и особенно сепсис, как их наиболее тяжелое последствие, являются одними из наиболее частых причин смертности. Обычно септические состояния возникают как пост-операционные последствия, в основе которых лежат расстройства функционирования иммунитета, гибель клеток и повреждение тканей. Целью данной работы было исследование роли ключевых защитных систем клетки при остром воспалении, а также исследование динамики изменений клеточного иммунитета при хроническом воспалении. Кроме того, в задачу работы входило изучение закономерности воздействия in vitro и in vivo ингибитора активности белка теплового шока БТШ90 – гелданамицина – на уровень провоспалительного ответа клетки в условиях острого воспаления путем оценки продукции цитокинов (ФНО-, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-10, ИФН-), оксида азота, а также оценить уровень активации сигнальных каскадов NF-B и SAPK/JNK. В работе впервые установлено, что острое воспаление, индуцированное бактериальным эндотоксином ЛПС, выделенного из стенок грамм-отрицательных бактерий E-coli, сопровождается более высоким уровнем молекулярно-клеточного ответа, о чем свидетельствует повышение продукции цитокинов, белков теплового шока и оксида азота на воспаление, чем то, что индуцируется при хронической интоксикации. Установлено, что гелданамицин in vitro и in vivo обладает антивоспалительной активностью, снижая продукцию цитокинов и оксида азота в условиях острого воспаления. Механизм действия гелданамицина на клетку включает регуляцию активности каскадов NF-B и SAPK/JNK. Таким образом, нами было показано, что гелданамицин проявляет противовоспалительную активность в условиях острого воспаления, индуцированного у животных введением эндотоксина.

СРАВНЕНИЕ МЕТОДАМИ КВАНТОВОЙ ХИМИИ РАЗЛИЧНОГО ВЛИЯНИЯ РАСТЯЖЕНИЯ С=С СВЯЗИ Н-БУТЕНА И РАСТЯЖЕНИЯ ВСЕГО ОСТОВА Н БУТЕНА НА КИНЕТИКУ ОЗОНОЛИЗА Н-БУТЕНА Овчинников В. А. 1, А. В. Майоров1, Б. Э. Крисюк2, А. А. Попов Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка, Россия Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва, Россия E-mail: of4inik@yandex.ru Известно, что деформация реакционного центра может на порядки менять ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ реакционную способность разных соединений в самых различных химических реакциях. Причем причина возникновения такой деформации роли не играет, эффект наблюдается во всех случаях, как в низкомолекулярных соединениях, так и в полимерах. Несмотря на различную природу этих реакций, зависимость константы скорости k от величины приложенного напряжения имеет во многих случаях вид: ln (k/k0) = /RT, где коэффициент зависит от природы реакции, наличия катализаторов, структуры материала и определяет чувствительность процесса к деформации.

В работе различными квантово-химическими методами расчета (B3LYP, QCISD, MP2) в базисе 6-311+G** выполнены расчеты реакции озона с цис-, транс-бутеном-2 и этиленом для двух механизмов реакции - симметричного присоединения (Криге) и несимметричного присоединения (Демура). В работе исследовалось влияние деформации двойной связи и бутенового фрагмента на кинетику реакции, для этого расчеты производились при различных фиксированных длинах двойной С=С связи и фиксированной длине между концевыми атомами бутена. Найдено, что при деформации двойной связи, энергия активации убывает с увеличением длины двойной связи, а реакция активируется как по механизму Криге, так и по механизму Демура, причем чувствительность к деформации каналов Криге и Демура различна. Для цис бутена-2 канал Криге активируется в большей степени, чем канал Демура. При деформации бутенового фрагмента картина обратная. На первом этапе, энергия активации возрастает достигая максимума при относительной деформации ~2,5–8%, а сама реакция тормозится.

ГЕКСАДЕКАНОИДНЫЙ ПУТЬ В РАСТЕНИЯХ Осипова Е.В., Гоголев Ю.В., Гречкин А.Н.

Казанский институт биохимии и биофизики КазНЦ РАН, Казань (Россия).

E-mail: eva-0@mail.ru 7,10,13-Гексадекатриеновая кислота (16:3) обнаруживается во многих видах растений. Однако ее метаболизм по липоксигеназному пути изучен недостаточно. Целью настоящей работы было исследовать окисление 16: различными липоксигеназами растений и выяснить присутствие продуктов окисления 16:3 в проростках растений. Обнаружено, что рекомбинантная 9 липоксигеназа кукурузы специфически превращала 16:3 в (7S)-гидроперекись.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 13 |
 



 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.