авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ БИБЛИОТЕКА РОССИИ

КОНФЕРЕНЦИИ, КНИГИ, ПОСОБИЯ, НАУЧНЫЕ ИЗДАНИЯ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 13 |

«Проведение школы-конференции осуществлено при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований Мирошников А.И., Председатель оргкомитета.Председатель ПНЦ РАН, ...»

-- [ Страница 3 ] --

Идентификация этого нового оксилипина была подтверждена данными ГХ/МС, ЖХ-МС/МС, 1Н-ЯМР и двухмерной корреляционной спектроскопии, а также включением атомов дейтерия из [2H6]16:3. Соевая липоксигеназа- катализировала образование 91% (11S)- гидроперекиси и 6% рацемической 14 гидроперекиси. Рекомбинантная соевая липоксигеназа-2 (специфично окисляющая линолеат до 13-гидроперекиси) была неспецифичной по отношению к 16:3. Липоксигеназа-2 катализировала образование 7-, 8-, 10-, 11-, 13- и 14 гидроперекиси 16:3 наряду со значительным количеством бис-аллильной 9 гидроперекиси. Проростки нескольких исследованных видов растений содержали свободные гидроксипроизводные 16:3, а также их этиловые эфиры. Интересно, что гидроксипроизводные 16:3 встречается не только в “16:3-растениях”, но также в типичных “18:3-растениях”, например, в проростках гороха и сои. Показано, что (7S)-гидроперекись может принимать участие в дальнейшем липоксигеназном каскаде, так как используется в качестве субстрата ферментами CYP74. Так рекомбинантная дивинилэфирсинтаза табака образует in vitro из (7S) гидроперекиси новый оксилипин динор-колнеленовую кислоту, алленоксидсинтаза кукурузы - -кетол. Таким образом, помимо классического ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ октадеканоидного липоксигеназного каскада в растениях обнаружен гексадеканоидный каскад, физиологическая роль продуктов которого пока остается загадкой.

ВЛИЯНИЕ N-СТЕАРОИЛЭТАНОЛАМИНА НА СОСТОЯНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ДИАБЕТЕ I ТИПА У КРЫС Паничкина О.И., Голиченко В.М., Бердышев А.Г., Косякова Г.В., Горидько Т.Н.

Институт биохимии им. А.В. Палладина НАН Украины, Киев (Украина).

E-mail: panichkina.olga@gmail.com N-ацилэтаноламины (NAE) - минорные липидные компоненты мембран, количество которых значительно увеличивается при различных патологических состояниях. Известны противовоспалительные, антитоксические и некоторые другие фармакологические свойства N-ацилэтаноламинов. Однако, точная функциональная роль этих соединений до сих пор изучена недостаточно.

Исходя из этого, целью наших исследований было изучение действия С 18:0 N-ацилэтаноламина - N-стеароилэтаноламина (NSE) на содержание ТБК - активных продуктов и активность основных ферментов антиоксидантной защиты - супероксиддисмутазы (СОД), каталазы и глутатионпероксидазы (ГП) в семенниках и плазме крови крыс при диабете I типа, индуцированного введением стрептозотоцина (50 мг/кг массы тела).

Показано, что на начальных этапах развития сахарного диабета I типа в семенниках и плазме крови наблюдается изменение активности ферментов антиоксидантной защиты, а именно снижение активности СОД и каталазы в семенниках, снижение активности СОД и ГП в плазме крови с одновременным увеличением активности каталазы. При этом отмечено значительное накопление ТБК - активных продуктов в семенниках.

Введение крысам на начальной стадии диабета перорально водной суспензии NSE в течение 10 дней в дозе 50 мг/кг массы тела способствовало повышению активности СОД и каталазы в семенниках, а также нормализации активности СОД, ГП и каталазы в плазме крови. Кроме того, NSE препятствовало накоплению ТБК - активных продуктов в семенниках.

Таким образом, N-стеароилэтаноламин способен модулировать состояние системы антиоксидантной защиты в семенниках и плазме крови крыс на начальных этапах развития сахарного диабета I типа, что предполагает использование NSE для коррекции нарушений антиоксидантной защиты организма при данной патологии.

АНАЛИЗ ПРОСТРАНСТВЕННОЙ СТРУКТУРЫ ИЗОФОРМ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ МЕТОДОМ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ Парфенова И.В., Гречкина М.В., Шульгина Е.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия).

E-mail: irina-parfenova-@mail.ru В последнее время метод сканирующей зондовой микроскопии, в частности атомно-силовой (АСМ), вследствие высокой разрешающей способности достаточно широко применяется в биологии с целью изучения структурного состояния мембран клеток и отдельных биомолекул. В ряде работ детально изучена субъединичная структура иммуноглобулинов и получено трехмерное изображение белковой молекулы IgG, IgM. Метод атомно-силовой микроскопии состоит в получении топографических изображений поверхности при ее сканировании тонкой иглой.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Целью нашей работы было выяснение пространственной структуры малатдегидрогеназы из бактерий Sphaerotilus natans штамм Д-507, при помощи атомно-силовой микроскопии с использованием прерывисто-контактного метода.

Визуализацию фермента малатдегидрогеназы проводили на атомно-силовом микроскопе Solver P47 Pro (НТ-МДТ, Россия) в полуконтактном режиме на воздухе при комнатной температуре.

В результате исследования молекулы фермента получено его трехмерное изображение и установлены размеры молекул МДГ. При проведении расчетов молекулу белка чаще всего представляют в виде идеализированного эллипсоида или цилиндра. Размер одной субъединицы составляет 25 нм в диаметре при высоте 1 нм, димерной изоформы 301,8 нм, тетрамерной 452,5 нм.

Результаты измерений позволили сделать вывод о том, что отдельная субъединица фермента представляет собой плоский цилиндр. Установленные размеры димера МДГ указывают, что субъединицы расположены друг над другом. Таким образом, анализ полученных величин для тетрамерной формы показывает, что субъединицы собраны в две стопки. Сопоставляя результаты по размеру субъединиц и нативных молекул МДГ, можно сделать заключение о димерном и тетрамерном строении изоформ малатдегидрогеназы.

АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ОКСИДОРЕДУКТАЗ В ОРГАНАХ КРЫС, ИМЕЮЩИХ В РАЦИОНЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ Пастернак С.Л., Витковская М.В., Душак И.В., Кошевая В.В., Руцинская Д.И.

Одесский национальный университет им. И.И. Мечникова, Одесса (Украина).

E-mail: du5he4ka@mail.com Поступающие в организм с пищей различные вещества частично метаболизируются в желудочно-кишечном тракте, всасываются в кровь и распределяются по всем органам и тканям. Процесс всасывания зависит как от энергетических процессов в клетках эндотелия, так и от микрофлоры кишечника.

Широкое использование биологически активных добавок (БАД) в продуктах питания современного человека имеет значение как для профилактики, так и для лечения различных патологий. Наряду со способностью БАД адсорбировать и выводить различные ксенобиотики, пищевые волокна метаболизируются микрофлорой кишечника, а продукты этого метаболизма, попадая в кровь, оказывают определенное положительное действие на организм животного. В связи с этим целью нашей работы было изучить активность некоторых ферментов цикла Кребса, обеспечивающих энергетические процессы пищеварения у крыс, имеющих в рационе БАД: жмых сахарной свеклы и пищевые волокна (ПВ) сахарной свеклы. Для исследования нами были взяты крысы средним весом 100-150 г., которых делили на три группы: I - интактные с рационом вивария;

II - с рационом вивария, в который вносили БАД - жом из сахарной свеклы;

III - с рационом вивария, в который вносили ПВ из сахарной свеклы. БАД добавляли в корм ежедневно в количестве 10 г. на 100 г. веса животного. На протяжение периода кормления наблюдали за физиологическим состоянием животных, отмечая изменение массы тела крыс. Через 30 дней животных декапитировали и для исследования использовали печень, почки, двенадцатиперстная, тонкая и толстая кишки. Из органов готовили гомогенаты, выделяли митохондрии и определяли активность пируватдегидрогеназы (ПДГ), 2 оксоглутаратдегидрогеназы (2-оксоглутарат ДГ) и сукцинатдегидрогеназы (СДГ).

Активность ферментов определяли ферицианидным методом и выражали в мкм/г ткани и мкм/мг белка. Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики.

Нами обнаружены различия по активности изучаемых ферментов как в ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ каждом отдельном органе, так и между органами. Наличие БАД в рационе питания крыс влияет на активность ферментов, степень которого зависит как от органа, так и от фермента.

Таким образом, полученные нами экспериментальные данные указывают на то, что наличие БАД в корме крыс влияет на энергетические процессы, протекающие в почках, печени и в отделах кишечника.

СПЕКТРЫ ПОГЛОЩЕНИЯ ЦИС- И ТРАНС-ФОРМ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА В РАЗЛИЧНЫХ СРЕДАХ Перетолчин Д.В., Рогожин В.В.

Якутская государственная сельскохозяйственная академия, Якутск (Россия) E-mail: vrogozhin@mail.ru Дигидрокверцетин (ДГКВ) относится к группе фенольных соединений обладающих высокой антиоксидантной активностью. ДГКВ хорошо растворим в полярных растворителях и в водно-спиртовых растворах, особенно при нагревании. В растворах ДГКВ может присутствовать в транс- и цис-формах.

Методами электронной спектроскопии нами изучено поглощение транс- и цис-форм дигидрокверцетина в водно-спиртовых (0-96%) и буферных растворах (рН 4,5-8,0). Установлены максимумы поглощения дигидрокверцетина, в зависимости от природы раствора. Показано, что при варьировании рН от 4,5 до 8,0 в спектрах дигидрокверцетина проявляются три максимума поглощения в УФ области при 230, 290 и 327 нм, которые характерны для двух изоформ флавоноида. Каждая из изоформ имела выраженный максимум поглощения при рН 4,5 и 8,0, которые соответствуют цис- и транс-формам дигидрокверцетина, проявляемые соответственно в кислой и щелочной областях рН. Переход одной изоформы в другую осуществляется через две изобестические точки при 265 и 305 нм.

При изменении полярности среды водно-спиртовых растворов в спектрах дигидрокверцетина проявляются два максимума поглощения при 290 и 327 нм, варьирование которой достигалось за счет увеличения содержания этанола. В воде дигидрокверцетин имел максимум поглощения при 327 нм, а в 16,4 М растворе этанола максимум поглощения проявляется уже при 290 нм. При этом переход одной изоформы в другую, осуществляется через изобестическую точку при 305 нм. Точка пересечения кривых рН-зависимости приходилась на рН 6,6, а водно-спиртового раствора на – 35%. Следовательно рН 6,6 и водно-спиртоваый раствор в 35%, служат показателями перехода изоформ дигидрокверцетина.

Наличие характерных максимумов поглощения для транс- и цис-форм ДГКВ, позволил нам рассчитать для них коэффициенты молярного поглощения.

ИНТЕНСИВНОСТЬ ПРОЦЕССОВ ПОЛ В ТКАНЯХ КРЫС ПРИ ГБО ИНДУЦИРОВАННОМ ОКИСЛИТЕЛЬНОМ СТРЕССЕ Питерская Е.А., Милютина Н.П., Внуков В.В.

Южный федеральный университет, Ростов-на-Дону (Россия).

E-mail: evlalia@bk.ru Гипербарическую оксигенацию (ГБО) на данный момент расценивают как прогрессивную немедикаментозную процедуру, показанную при лечении различных патологий. В то же время ГБО (при соответствующих режимах) считается мощным индуктором перекисных процессов;

ее рассматривают как адекватную модель окислительного стресса. Исходя из вышеизложенного, нами была оценена интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) по содержанию основных молекулярных продуктов (диеновые конъюгаты ДК, ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ малоновый диальдегид МДА и шиффовы основания ШО) в тканях белых крыс (митохондрии мозга и печени, а также плазма крови и эритроциты) при ГБО воздействии в режиме 0,5 МПа в течение 90 минут.

В результате проведенных исследований показано, что при ГБО воздействии в указанном режиме наблюдается усиление процессов ПОЛ во всех исследованных тканях. При этом интенсификация ПОЛ в разных тканях выражена в разной степени. В плазме крови уровень всех молекулярных продуктов возрастает умеренно: на 21-28%. В эритроцитах содержание ДК повышается на 60%, МДА - на 26%, а ШО - на 80%. В митохондриях уровень первичных и конечных продуктов ПОЛ (ДК и ШО, соответственно) превышает норму на 19-23%, зато уровень МДА возрастает относительно контроля на 47% в митохондриях печени и на 91% - в митохондриях мозга.

Таким образом, ГБО-воздействие в режиме 0,5 МПа 90 минут является индуктором по меньшей мере оксидативного стресса, и значительный процент исследованных изменений свидетельствует о развитии патологического процесса. В то же время индуцированный окислительный стресс в разных тканях развивается в разной степени с преимущественным усилением той или иной стадии ПОЛ, что может отражать тканеспецифичность ответной реакции организма.

ВЫЯВЛЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ-МАРКЕРОВ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ РАДИАЦИИ Погосян С.А.

Институт молекулярной биологии НАН РА, Ереван (Армения).

E-mail: suzy2005@mail.ru Проблемы изучения последствий облучения организма человека и способы защиты от него актуальны. Известно, что радиация оказывает на организм как прямое действие, вызывая разрывы химических связей в макромолекулах, в том числе и в ферментных белках, так и опосредованное свободнорадикальное действие. Целью настоящей работы было выявление ключевых ферментов клеточного метаболизма в качестве маркеров ионизирующего действия радиации с целью использования их для оценки эффективности действия потенциальных радиопротекторов.

Опыты проведены на беспородных крысах-самцах весом 140-160г, подвергнутых однократному облучению в дозах 350Р,450 Р и 600Р, забитых для исследования на 5-6 и 12-13 сутки после облучения. Величина изменений уровней активности исследуемых ферментов зависит как от дозы рентгеновского облучения, так и от пострадиационного времени и органа, где они обнаруживаются. На 5-6 сутки после облучения при дозе 450Р значительно меняются ферментативные активности в печени на 40-50% и в мозге - на 50-70%.

На 12-13 сутки после облучения большинство исследуемых ферментов восстанавливают активность почти до уровня контроля, что является, по видимому, следствием включения адаптационных механизмов организма.

Таким образом, радиочувствительность исследуемых ферментов обусловлена ни столько их свойствами, сколько их органной принадлежностью.

На основании сравнительного анализа полученных данных для дальнейших исследований эффективности действия новых радиопротекторов в качестве ферментов-маркеров предлагаются КК и ПНФ печени и мозга крыс, доза облучения - 450Р, пострадиационное время - пятый день.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ АНТИМИКРОБНЫЕ БЕЛКИ И ПЕПТИДЫ ИЗ ЯДА И ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ЭКСТРАКТА ГАДЮКИ ОБЫКНОВЕННОЙ (VIPERA BERUS) Попугайло А.Г.

Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: blessedchainsaw@mail.ru Исследования системы врожденного иммунитета являются одной из актуальных современных медико-биологических проблем. Принцип работы этой системы очень сложен и до конца не ясен, но основными путями реализации ее эффектов являются различные типы фагоцитоза и прямое действие антибактериальных белков и пептидов на патогенные микроорганизмы.

Последние играют важную роль не только в элиминации патогенов, но так же обладают рядом свойств, не связанных с их антимикробной активностью. Данные сравнительных исследований свидетельствуют об их высокой консервативности.

Эти полипептидные соединения обнаруживаются главным образом в азурофильных гранулах нейтрофильных гранулоцитов, различных барьерных эпителиях и секретах экзокринных желез. Секрет ядовитых желез некоторых представителей отряда Serpentes является объектом исследования биохимиков в течение многих десятилетий - из змеиного яда было выделено большое количество активных белков и пептидов. Для некоторых из них была показана выраженная антимикробная активность. Проведенное исследование показало наличие белковой фракции, обладающей очень ярко выраженной антимикробной активностью в яде гадюки обыкновенной (Vipera berus). Данная фракция, выявленная методом кислого электрофореза с добавлением мочевины, так же является одной из доминирующих, что может указывать на содержание в ней токсических компонентов. Важно отметить, что подвижность этой фракции в геле была меньше, чем у лизоцима. В лейкоцитарном экстракте разнообразие антимикробных компонентов намного больше, при этом все они так же имеют меньшую электрофоретическую подвижность, чем лизоцим. Важно отметить, что в лейкоцитарном экстракте и яде есть активные фракции, обладающие схожей подвижностью в геле.

ИСЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССОВ ПОЛ И ФУНКЦИОНАЛЬНОСТЬ СИСТЕМЫ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ У КРЫС С КАРЦИНОМОЮ ГЕРЕНА ПРИ УСЛОВИЯХ ЛОКАЛЬНОГО РЕНГЕНОВСКОГО ОБЛУЧУНИЯ И ПРИМЕНЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ АНТИОКСИДАНТОВ Раецкая Я.Б., Строцкая Е.А., Преображенская Т.Д., Остапченко Л.И.

Киевский национальный университет им. Тараса Шевченко, Киев (Украина).

E-mail: raetska@yandex.ru Лучевая терапия рядом с хирургическим и химиотерапевтическим лечением выступает одним с радикальных методов лечения злокачественных новообразований. Локальное влияние ионизирующей радиации на опухоль в период экспотенциального роста вызывает смерть ее клеток за механизмами некроза и апоптоза. Одновременно лучевая терапия приводит к появлению в организме дополнительных инициаторов липопероксидации. Использование препаратов с антиоксидантной активностью может нормализовать физиологическое состояние антиоксидантной системы. Проантоцианидины с косточек винограда - природные антиоксиданты, которые проявляют широкий спектр фармакологической активности, защищают клетки от пероксидного окисления липидов (ПОЛ) и подавляют рост раковых клеток.

Целью нашей работы было исследование процессов свободнорадикального окисления липидов в условиях злокачественного роста ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ карциномы Герена и лучевой терапии, а также изучение действия препаратов природного происхождения на эти процессы с целью коррекции лучевых повреждений с помощью лечебно-профилактических средств.

На основании проведенных исследований было установлено, что облучение приводит к изменениям показателей пероксидного окисления липидов при злокачественном росте. Было показано, что введение лечебных препаратов с антиоксидантными свойствами нормализует процессы пероксидации, усиливая эффективность радиотерапии. На этом основании антиоксидантные препараты могут быть предложены для профилактики и комплексного лечения злокачественных новообразований.

ИЗУЧЕНИЕ НОВЫХ АНТИМИКРОБНЫХ ПЕПТИДОВ СОРНОГО ЗЛАКА ЕЖОВНИКА ОБЫКНОВЕННОГО (ECHINOCHLOA CRUSGALLI L.) С УНИКАЛЬНЫМ 4-ЦИСТЕИНОВЫМ МОТИВОМ Рогожин Е.А., Феофанов А.В., Егоров Ц.А., Арсеньев А.С., Гришин Е.В.

Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им.

акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва (Россия).

E-mail: rea21@list.ru Антимикробные пептиды (АМП) растений обладают широким спектром действия и могут рассматриваться как новый класс перспективных антимикробных агентов. Исследование АМП имеет фундаментальное значение для выяснения молекулярных механизмов иммунитета растений, оно представляет большой интерес для разработки новой стратегии борьбы с фитопатогенами в сельском хозяйстве, основанной на использовании методов генетической инженерии. Данная работа заключалась в выделении из зерна ежовника (Echinochloa crusgalli) и структурно-функциональном исследовании ряда АМП с уникальным 4-цистеиновым мотивом. С использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в сочетании с MALDI масс-спектрометрией и секвенированием по Эдману выделено и охарактеризовано 4 гомологичных пептида, названных Ec-AMP1-4. Для данных пептидов определено число остатков цистеина и полные первичные структуры.

Для всех пептидов характерен общий цистеиновый мотив: …CXXXC…CXXXC…, в котором X-любой аминокислотный остаток. Кроме того, методом 1H-ЯМР была определена пространственная структура пептида Ec-AMP1, которая состоит из двух -спиральных участков, соединенных -изгибом, и двух подвижных N- и C концевых фрагментов. Показано, что дисульфидные связи в молекуле образованы между остатками цистеина C1-C4 и C2-C3. Испытания антигрибной активности методом in vitro выявило высокую степень ингибирования роста мицелия у ряда фитопатогенных грибов рода Fusarium (F. graminearum, F.

verticillioides и F. oxysporum) при концентрации менее 4 мкМ. С использованием спектральной лазерной сканирующей конфокальной микроскопии показана высокая степень связывания флуоресцентной производной Ec-AMP1 с плазматической мембраной конидий F. graminearum, а также его интернализация в цитоплазму.

ПЕРОКСИДАЗА КАК ГЕНЕРАТОР ВОДЫ В ПОКОЯЩИХСЯ ЗЕРНОВКАХ ПШЕНИЦЫ Рогожина Т.В., Рогожин В.В.

Якутская государственная сельскохозяйственная академия, Якутск (Россия) E-mail: vrogozhin@mail.ru Пероксидаза (КФ 1.11.1.7) входит в состав антиоксидантной системы ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ живых организмов. Высокая активность фермента и широкая субстратная специфичность, свидетельствует о его разнообразной функциональной деятельности в клетках растений. Пероксидаза катализирует реакции оксидазного, пероксидазного и оксигеназного окисления. Субстратами фермента могут быть неорганические и органические соединения, окисляющиеся кислородом и перекисью водорода.

Нами изучена активность пероксидазы в зернах злаковых культур, находящихся в состоянии покоя и на начальных этапах прорастания. Показано, что пероксидаза может участвовать в поддержании жизнеспособности зерновок злаковых культур, находящихся в состоянии вынужденного покоя и испытывающих в этот период недостаток экзогенной воды. Механизм действия фермент основан на способности фермента катализировать реакции последовательного восстановления кислорода до воды и за счет этого восполнять потребности зародыша в воде.

АН2 + О2 А + Н2О АН2 + Н2О2 А + 2Н2О Однако при реализации этой функции в каталитическом процессе фермента расходуется и пластический материал клеток растений. В частности, низкомолекулярные антиоксиданты. Поэтому в реакциях восстановления кислорода фермент может использовать различные органические соединения клеток растений, реализуя возможности своей широкой субстратной специфичности. Кроме того, пероксидаза может участвовать в инициировании дыхания зерновок в начальный период их прорастания, когда энергетические возможности зерновок резко понижены, что подтверждается наличием корреляции активности фермента со всхожестью зерновок.

РОЛЬ ПИРОФОСФАТЗАВИСИМОЙ 6-ФОСФОФРУКТОКИНАЗЫ В МЕТАБОЛИЗМЕ МЕТАНОТРОФОВ I И X ТИПОВ Розова О.Н.

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино (Россия).

E-mail: rozovaolga1@rambler.ru Клонированием гена pfр из облигатных метанотрофных бактерий Methylomicrobium alcaliphilum 20Z (I тип) и Methylococcus capsulatus Bath (Х тип), реализующих рибулозомонофосфатный (РМФ) путь или РМФ путь в сочетании с циклом Кальвина, соответственно, получены электрофоретически гомогенные препараты рекомбинантной пирофосфатзависимой 6-фосфофруктокиназы (ПФК).

Обнаружено, что ПФК Mc. capsulatus Bath (2х45 кДа) обратимо фосфорилирует седогептулозо-7-фосфат (С-7-Р) и рибулозо-5-фосфат, причем сродство к С-7-Р (Км = 0,03 мМ) выше, чем к фруктозо-6-фосфату (Ф-6-Р) (Км = 2,27 мМ).

Напротив, ПФК Mm. alcaliphilum 20Z (4x45 кДа) в 3500 раз активнее с Ф-6-Р, чем с С-7-Р. Предположено участие ПФК у Mc. capsulatus Bath в перестроечных реакциях РМФ пути и цикла Кальвина.

Филогенетический анализ показал, что ПФК Mm. alcaliphilum 20Z является представителем подгруппы “Р” II группы фосфофруктокиназ, тогда как ПФК Mc.

capsulatus Bath наиболее близка с ферментами автотрофных бактерий, представляющих подгруппу “В2”. Выявлена высокая степень дивергенции между ПФК Mm. alcaliphilum 20Z и Mс. capsulatus Bath (16% идентичности транслированных аминокислотных последовательностей). Это отражает значительные отличия в кинетических параметрах, обусловленные различной метаболической ролью фермента.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Впервые установлено, что ген pfр Mc. capsulatus Bath расположен в одном опероне с геном hpp, кодирующим предполагаемую Н+-пирофосфатазу V-типа.

Подобная локализация генов pfp и hpp обнаружена в хромосомах ряда автотрофных бактерий, что указывает на участие данного фермента в энергетическом метаболизме этих бактерий. Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ 08-04-01484а, РНП 2.1.1/605 и ГК 02.740.11.0296.

ПОВЕРХНОСТНЫЙ ЗАРЯД МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ГИПОТЕРМИИ И ВВЕДЕНИИ ДАЛАРГИНА Саидов М.Б., Курбанисмаилова М.И., Юферова М.Г.

Дагестанский государственный университет, Махачкала (Россия).

E-mail: smagras@mail.ru Исследовано влияние гипотермии 20°С и 30°С на поверхностный заряд мембран эритроцитов крыс при введении даларгина. Поверхностный заряд мембран эритроцитов измеряли с помощью отрицательно заряженного зонда - 1 (АНС-).

анилино-нафталин-8-сульфоната Измеряли интенсивность флуоресценции суспензии эритроцитов при длине волны возбуждения 370 нм и максимуме испускания 470 нм в отсутствии зонда (F0) и после инкубации с АНС-.

По величине F / F0 судили об изменении поверхностного заряда мембран эритроцитов. Исследование поверхностного заряда мембран эритроцитов крыс показало, что гипотермия 30 и 20°С приводит к снижению на 23-25% и на 25-30% соответственно интенсивности флуоресценции АНС- суспензии эритроцитов.

Уменьшение степени связывания зонда АНС- с мембранами эритроцитов свидетельствует о повышении отрицательного поверхностного заряда мембран.

Изменение поверхностного заряда может быть связано с интенсификацией окислительных процессов в мембранах эритроцитов. Известно, что при гипотермии интенсифицируются процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и окислительной модификации белков мембран эритроцитов. Кроме того, при этом, в мембранах эритроцитов увеличивается содержание свободных жирных кислот. Все эти процессы, видимо, обуславливают повышение отрицательного поверхностного заряда мембран эритроцитов при гипотермии, что приводит к тушению флуоресценции АНС-. Введение даларгина контрольным животным существенно не изменяет величину поверхностного заряда мембран эритроцитов. В условиях гипотермии даларгин полностью предотвращает повышение отрицательного поверхностного заряда мембран эритроцитов. Такое действие даларгина можно объяснить тем, что введение пептида при гипотермии тормозит процессы ПОЛ в эритроцитах, а также накопление в плазме крови неэстерифицированных жирных кислот.

ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОГО ФЕРМЕНТА ПЕРВИЧНОЙ АТАКИ ОРГАНОФОСФОНАТОВ - ГЛИФОСАТ-ОКСИДОРЕДУКТАЗЫ Свиридов А.В., Леонтьевский А.А.

Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино (Россия).

E-mail: alhummen@rambler.ru Органофосфонаты (ОФ) - класс соединений, имеющих в своей структуре прямую углерод-фосфорную (C-P) связь, - широко применяются в качестве пестицидов и являются опасными загрязнителями окружающей среды. Кроме того, к ОФ относятся многие боевые отравляющие вещества и продукты их нейтрализации. C-P связь крайне устойчива к химическим и физическим факторам воздействия, однако расщепляется ферментами некоторых ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ микроорганизмов. Изучение таких ферментных систем имеет большое значение для разработки методов биоремедиации загрязненных почв и воды, а также промышленных стоков. Однако, в настоящее время обнаружены лишь единичные ферменты деструкции ОФ, причем механизм их действия, физико-химические и кинетические характеристики, за редким исключением, не изучены.

В нашей работе впервые был выделен и охарактеризован новый ключевой фермент деструкции органофосфонатов у бактерий - глифосат-оксидоредуктаза Ochrobactrum anthropii GPK3 (ВКМ 2554D), превращающий гербицид глифосат (N фосфонометил-глицин) и другие ОФ в нетоксичные соединения. При этом была разработана схема очистки нового фермента до электрофоретически гомогенного состояния, обеспечивающая выход не менее 70%. У глифосат оксидоредуктазы были определены основные физико-химические (ММ, изоэлектрическая точка, температурный и pH-оптимумы, термостабильность) и кинетические (Кm, Vmax) характеристики, исследованы субъединичный состав и влияние ионов металлов на активность фермента, обнаружены кофакторы, необходимые для катализа, найдены способы сохранения активности фермента при длительном хранении. Проведенный MALDI-TOF анализ глифосат оксидоредуктазы показал высокую гомологию с семейством FAD-содержащих монооксигеназ (саркозиноксидаза, D-лизиноксидаза и др.).

ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ОКИСЛИТЕЛЬНОМ СТРЕССЕ, ИНДУЦИРОВАННОМ CCL Семенчуков А.А.

Сибирский федеральный университет, Красноярск (Россия).

E-mail: semlex@yandex.ru Перекисное окисление липидов (ПОЛ) - это сложный биологический процесс, играющий важную роль в липидном обмене клетки. При избытке активных форм кислорода (АФК), таких как супероксид-анион (O2•-) или гидроксид радикал (OH-), процесс ПОЛ значительно усиливается, что приводит к негативным явлениям таким как: нарушение целостности мембраны, повреждение белков и ДНК, инактивация различных ферментов и т.д.

Целью нашего исследования являлось изучение липидного обмена и жирнокислотного состава тканей крыс в условиях окислительного стресса. В рамках этой цели мы смоделировали токсический окислительный стресс путем перорального введения животным (крысам) раствора содержащего ССl4 (1 мл/кг).

Через 24 часа после введения был измерен ряд биохимических показателей, характеризующих уровень развития окислительного стресса, а также жирнокислотный спектр плазмы, эритроцитов, тканей печени, мозга и почек.

В результате эксперимента было зарегистрировано значительное увеличение активности аланинаминотрансферазы в плазме крови (в 2,7 р.), содержания белка (в 1,9 р.) и общих липидов (в 2,4 р.) печени, а также уровня малонового диальдегида (в 2 р.). Абсолютное и относительное содержание жирных кислот в тканях в целом не изменялось. За исключением печени.

Увеличение происходило в основном за счет короткоцепочечных предельных жирных кислот (14:0, 15:0, 16:0), а также ряда непредельных жирных кислот (16:1(n-6), 16:1(n-9), 18:1(n-7), 18:1(n-9), 18:2(n-6), 18:3(n-3), 20:1), тогда как увеличение содержания предельных жирных кислот с большим количеством атомов углерода (17:0, 18:0, 20:0, 22:0, 23:0, 24:0), а также ряда длинноцепочечных непредельных жирных кислот (18:3(n-6), 20:2, 20:3(n-9), 20:4(n-6), 20:5, 22:1, 22:5(n-6), 22:5(n-3), 22:6(n-3), 24:1) происходит не значительно или не происходит вовсе.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ УРОВЕНЬ РЕГУЛЯТОРНЫХ ПЕПТИДОВ И АКТИВНОСТЬ ФЕРМЕНТОВ ИХ ОБМЕНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ СПОРТСМЕНОВ ПРИ ФИЗИЧЕСКОЙ РАБОТЕ Соловьев В.Б., Прохорова Ю.В., Рахматуллина Р.И., Пашковский С.А.

Пензенский государственный педагогический университет им. В.Г. Белинского, Пенза (Россия).

E-mail: solowew@rambler.ru Данные исследований последних лет свидетельствуют об участии некоторых регуляторных пептидов в реакциях адаптации при физической работе.

Однако, изучение содержания уровня того или иного нейропептида в тканях и сыворотке крови не дает достаточно точных представлений о динамических процессах, происходящих в пептидергической системе при физической работе.

Более информативным является изучение процессов синтеза и трансформации нейропептидов, поскольку концентрация биологически активных пептидов зависит от активности ферментов, участвующих в их обмене. Знание путей образования и инактивации регуляторных пептидов, участвующих в ответе организма на физическую нагрузку, позволит, избирательно воздействуя на ферменты их метаболизма, регулировать уровень биологических форм тех нейропептидов, от которых зависит спортивный результат. Цель нашей работы исследование уровня регуляторных пептидов в сыворотке крови спортсменов и людей, не занимающихся спортом, а также изучение путей их образования и инактивации в норме и при физической работе. Результаты нашего исследования показывают существенное различие в уровне регуляторных пептидов в сыворотке крови спортсменов и людей, не занимающихся спортом. Активность пептидил-дипептидазы А, карбоксипептидазы N и лейцинаминопептидазы у спортсменов в физиологическом состоянии была выше, чем у людей, не занимающихся спортом. После анаэробной работы у спортсменов не наблюдалось изменений в активности исследуемых ферментов, в то время как у неспортсменов происходило повышение активности данных пептидгидролаз.

Результаты нашего исследования показывают, что пептидергическая система спортсменов в состоянии покоя функционирует интенсивнее и изменения, происходящие в ней при физической работе менее выражены, чем у людей, не занимающихся спортом.

ПРООКСИДАНТЫ ПРЕДОТВРАЩАЮТ ИНДУЦИРОВАННУЮ ГЕНОТОКСИЧЕСКИМ СТРЕССОМ ГИБЕЛЬ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE Сорокин М.И.1, Смирнова Е.А.2, Кнорре Д.А.2, Северин Ф.Ф. Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, факультет биоинженерии и биоинформатики, Москва (Россия), НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, Москва (Россия).

E-mail: sorokin.maks@gmail.com Ранее было показано, что обработка клеток дрожжей алкилирующим агентом метил-метансульфонатом (ММС) приводит к образованию активных форм кислорода (АФК). Мы решили выяснить, является ли повышение концентрации АФК этапом активации защитного механизма клетки или патологическим процессом. Для этого мы проверили как обработка веществами, влияющими на внутриклеточный уровень АФК, будет отражаться на устойчивости клеток дрожжей к генотоксическому стрессу. Было показано, что прооксиданты (менадион, перекись водорода) значимо увеличивают выживаемость клеток, обработанных ММС. Интересно, что менадион защищал клетки дрожжей только ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ от умеренных концентраций ММС, а на больших концентрациях только усиливал токсический эффект. Антиоксидант ионол - наоборот, оказывал защитное действие только в случае высоких концентраций ММС. Эти данные свидетельствует о двойственной роли АФК при генотоксическом стрессе.

Защитное действие прооксидантов сохранялось на арестованных нокодазалом клетках, но подавлялось актиномицином. Это говорит о том, что защита клеток экзогенными прооксидантами обусловлена АФК-зависимым транскрипционным ответом, а не обогащением культуры дрожжей резистентными к ММС клетками с двойным набором ДНК.

ЗАВИСИМОСТЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ФЕНОЛЬНЫХ АНТИОКСИДАНТОВ ОТ СТРУКТУРЫ ИХ ПАРА-АЛКИЛЬНОГО ЗАМЕСТИТЕЛЯ Ткачев В.О.1, Меньщикова Е.Б.1, Зенков Н.К.1, Кандалинцева Н.В. Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск (Россия), Новосибирский государственный педагогический университет, Новосибирск (Россия).

E-mail: tkachev_victor@mail.ru Была исследована способность гидрофильных несимметрично экранированных фенольных антиоксидантов, различающихся структурой пара алкильного заместителя, регулировать в условиях in vitro активность редокс чувствительных факторов транскрипции NF-В и Nrf2, являющихся ключевыми в индукции и разрешении воспаления, а также их противовоспалительные свойства in vivo.

О влиянии исследуемых соединений на транскрипционный фактор Nrf судили по изменению активности фермента НАД(Ф)Н:хиноноксидоредуктазы (NQO1) в клетках линии U937, на фактор NF-B - по изменению активности индуцибельной NO-синтазы в перитонеальных макрофагах мыши. Выраженность местной воспалительной реакции после интраплантарного введения крысам каррагинана определяли, измеряя объем воспаленной конечности.

Среди исследованных соединений наибольшей способностью стимулировать активность NQO1 и ингибировать iNOS обладает 3-(3'-трет-бутил 4'-гидроксифенил)пропилтиосульфонат натрия, что хорошо согласуется с его максимально выраженными среди структурных аналогов противовоспалительными свойствами in vivo. Удаление из структуры пара алкильного заместителя атома серы, его замена на атом селена или укорочение углеродной цепи на одно метиленовое звено приводит к снижению биологической активности фенольных антиоксидантов in vitro и in vivo.

Таким образом, противовоспалительные свойства синтетических экранированных водорастворимых фенольных антиоксидантов, связанные с их способностью активировать Nrf2 и ингибировать NF-В, зависят от присутствия атома двухвалентной серы и длины углеродной цепи пара-алкильного заместителя.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант № 09-04 00600).

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ НЕОРГАНИЧЕСКИЕ ПОЛИФОСФАТЫ РАЗЛИЧНЫХ ФРАКЦИЙ У МУТАНТОВ ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE, ДЕФЕКТНЫХ ПО АТФАЗЕ ВАКУОЛЕЙ Томашевский А.А.

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, Пущино (Россия).

E-mail: thomal@rambler.ru Целью работы было оценить, каким образом мутация, нарушающая функционирование V-ATФазы сказывается на обмене неорганических полифосфатов у Saccharomyces cerevisiae.

В качестве объектов исследования выбраны мутанты по гену VMA2, кодирующему V1 субъединицу вакуолярной АТФазы. Клетки мутанта на стационарной стадии роста при культивировании на глюкозе содержат в 5 раз меньше полифосфатов, чем клетки родительского штамма. Это уменьшение затрагивает кислоторастворимые, солерастворимые полифосфаты, а также фракцию, экстрагируемую слабой щелочью, в то время как содержание более длинноцепочечных фракций полиР4 и полиР5 мало изменяется. На логарифмической стадии также наблюдается значительное снижение содержания полифосфатов у мутантного штамма по сравнению с родительским.

Различий в длине цепи полифосфатов у родительского и мутантного штаммов не выявлено.

Разобщитель FCCP в одинаковой степени подавлял накопление полифосфатов у родительского и мутантного штаммов.

Полученные данные свидетельствуют о важной роли энергизации вакуолярной мембраны в накоплении полифосфатов у S. cerevisiae.

ВЛИЯНИЕ КВЕРЦЕТИНА И ЛИПОФЛАВОНА НА АКТИВНОСТЬ ГЛУТАТИОНТРАНСФЕРАЗЫ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЕМОРРАГИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА Торгало Е.А., Гайда Л.Н., Остапченко Л.И.

Киевский национальный университет имени Тараса Шевченка., г. Киев (Украина) e-mail: alisa210@meta.ua Избыточной генерации активных форм кислорода, которое лежит в основе многих цереброваскулярных патологий, противостоит антиоксидантная система.

Глутатионовая антиоксидантная система, припятствует накоплению токсических продуктов пероксидного окисления липидов (ПОЛ), играет важную роль в детоксикации, деградации и выведении из организма чужеродных органических субстанций.

Важной составляющей выше указанных систем являеться глутатионтрансфераза - ключевой фермент в механизмах защиты клеток от влияния экзогенных и эндогенных токсических соединений и свободных радикалов, возникающих в ответ на геморрагический инсульт. Для профилактики и лечения послеинсультних осложнений применяют антиоксиданты, одним из которых является кверцетин. Биодоступность последнего к клеткам мозга затруднена в связи с его нерастворимостью в водной среде, что исключает внутривенное введение и направленый быстрый транспорт в зону поражения.

Применяя липосомальную форму кверцетина - липофлавон, можно избежать данной проблемы.

Целью нашего исследования было изучить влияние кверцетина и липофлавона на активность глутатионтрансферазы в тканях мозга, селезенки и почек при экспериментальном геморрагическом инсульте.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ В опыте использовали белых крыс-самцов массой 180 ± 10 г.

Геморрагический инсульт у крыс вызывали путем введения во внутреннюю капсулу головного мозга аутогенной крови. Кверцетин вводили перорально, а липофлавон внутривенно (10 мг / кг) в течение 7 дней. Активность глутатиотрансферазы определяли с накоплением конъюгата и выражали в мкмоль на 1 г белка в минуту.

В исследуемых органах в условиях развития геморрагического инсульта происходит активизация процессов декомпенсации антирадикальной защиты. В этих условиях снижаются активность исследуемого фермента, что может быть одной из причин нарушения пролиферации клеток. Активность глутатионтрансферазы при экспериментальной модели геморрагического инсульта после введения липофлавона и кверцетина повышалась во всех исследуемых органах. В результате исследований нами установлено, что введение липофлавона приводило к достоверному росту активности глутатионтрансферазы в мозге, селезенке и почках, что может свидетельствовать об активации процессов обезвреживания продуктов пероксидного окисления липидов, а также участии ферментов в эндогенном метаболизме, обеспечивающим локальную защиту организма, увеличивая устойчивость клетки и организма в целом.

Полученные результаты показали, что в условиях геморрагического инсульта происходит интенсификация процессов пероксидного окисления липидов (ПОЛ), о чем свидетельствует установленное нами повышение содержания их продуктов и снижение активности антиоксидантных ферментов. Введение кверцетина и липофлавону приводит к нормализации состояния системы (ПОЛ), а именно, к снижению содержания продуктов ПОЛ и активации ферментов антиоксидантной защиты.

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЛАГОВИНА НА СОДЕРЖАНИЕ ЦИКЛИЧЕСКИХ НУКЛЕОТИДОВ В БТП КРЫС Тураева Д.Т., Далимова С.Н., Выпова Н.Л., Далимов Д.Н.

Национальный университет Узбекистана им. М. Улугбека, Ташкент (Узбекистан).

E-mail: surae_dalimova@mail.ru Анализ литературных данных, посвященных гемостатикам, показывает, что, несмотря на существование достаточного количества кровоостанавливающих средств, поиск новых препаратов, действующих на процесс свертывания крови, является важной задачей.

Препарат Лаговин, представляющий собой супрамолекулярный комплекс лагохилина с поливинилпирролидоном (ПВП), обладает выраженным гемостатическим действием, как на плазменный, так и на сосудисто тромбоцитарный гемостаз. В ранее проведенных исследованиях было показано, что в механизме кровоостанавливающего действия Лаговина принимает участие ПГF2. Целью настоящего исследования явилось выяснение роли цАМФ и цГМФ в гемостатическом действии Лаговина.

Лаговин в дозе 0,5 мг/кг веса тела крыс вводили внутривенно и через минут после введения препарата в богатой тромбоцитами плазме (БТП) определяли содержание цАМФ и цГМФ с помощью радиоиммунных наборов фирмы Amersham.

Установлено, что под действием Лаговина содержание цАМФ снижается ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ на 25%, а цГМФ на 28%. Увеличение концентрации препарата приводит к более выраженному снижению содержания цАМФ.

Полученные данные позволяют, предположить, что снижение содержания циклических нуклеотидов под действием Лаговина может быть связано с ранее обнаруженным изменением внутриклеточного уровня Са2+, который вызывает ингибирование аденилатциклазного и гуанилатциклазного путей, тормозящих стимуляцию тромбоцитов.

ВЛИЯНИЕ ЛАКТОФЕРРИНА НА АНТИМИКРОБНЫЕ СВОЙСТВА ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА Филимонов В.Б., Берлов М.Н.

Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Россия), НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: hgg86@list.ru Лактоферрин (ЛФ) - это катионный гликопротеин, который локализован в специфических гранулах нейтрофилов и обладает рядом антимикробных свойств. ЛФ способен образовывать комплексы с ионами Fe3+ и таким образом создавать в среде дефицит по железу. В ходе воспаления фагоциты мобилизуют свои энергетические и пластические ресурсы и достигают состояния т.н.

“дыхательного взрыва”. При этом происходит синтез активных форм кислорода, в том числе пероксида водорода (Н2О2). В литературе есть данные о том, что между концентрацией Н2О2 и ее антимикробной активностью не наблюдается монотонной зависимости: показано, что Н2О2 в концентрации 10-20 мМ обладает в отношении различных штаммов E. coli меньшей антимикробной активностью, чем в концентрации 2,5 мМ. Этот эффект связан с образованием токсичных радикалов при реакции Fe2+ c H2O2, которое максимально при умеренных концентрациях Н2О2.

Нами не было обнаружено немонотонной зависимости антимикробной активности от концентрации при действии Н2О2 на грамположительную бактерию Listeria monocytogenes. Однако было показано, что ЛФ усиливает антимикробное действие Н2О2 в отношении L. monocytogenes и способствует появлению немонотонной зависимости при действии Н2О2 на бактерии.

Помимо этого был отработан метод определения каталазной активности лизата клеток L. monocytogenes и показано, что предварительная инкубация бактерий с ЛФ способствует усилению каталазной активности их лизата. В опытах с добавлением хлорамфеникола (ингибитором синтеза белка) показано, что этот эффект не связан с индукцией синтеза белка.

Полученные результаты могут свидетельствовать о парадоксальном явлении повышения концентрации Fe2+ внутри бактерий при инкубации с ЛФ.

ИЗУЧЕНИЕ АДСОРБЦИИ Н+ И ОН- ИОНОВ НА ХЛОРОФИЛЛЕ МЕТОДОМ ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКОГО ТИТРОВАНИЯ В ОТСУТСТВИИ ВНЕШНЕГО ИОННОГО ФОНА Хомутова О.С., Титович Д.А., Цирюльникова И.В., Фейн Е.И., Чухно А.С.

Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия, Санкт-Петербург (Россия).

E-mail: alex-chuhno@yandex.ru Химическая полифункциональность многих молекул порфиринов обуславливают появление биологических функций в результате их способности вступать в различные обменные взаимодействия с окружающей средой.

Порфирины представляют собой скелет молекулы гемоглобинов и хлорофиллов.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Любая органическая молекула природного происхождения обязана своим появлением тетрапирролам, через фотосинтез. Фотосинтез и ряд других процессов в значительной степени зависят от кислотно-основных свойств среды от буферной способности этих систем. Исследование адсорбции ионов Н+ и ОН на хлорофилле позволит более полно описать процессы, происходящие в природе.

Целью данной работы является исследование адсорбции ионов Н+ и ОН на хлорофилле в зависимости от рН дисперсной системы.

Адсорбцию Н+ и ОН- ионов на хлорофилле исследовали методом непрерывного потенциометрического титрования. Титрование проводили через 30 минут после добавления адсорбента к исследуемому раствору. Титрант добавляли порциями по 0,1 мл с интервалом в 1 мин. Далее строили кривые потенциометрического титрования в координатах рН-V, V- объем титранта (КОН или НСl).

В работе была установлена оптимальная концентрация дисперсий хлорофилла, необходимая для получения надежных результатов адсорбции. Она составила величину 10-3 моль/л. Пробы для титрования готовились разведением концентрированных дисперсий дистиллированной водой до заданной концентрации без добавления электролитов. Значение рН водной дисперсии хлорофилла с концентрацией 10-3 моль/л равно 3,5. Кривые титрования для дисперсий хлорофилла сравнивали с кривыми титрования чистой воды и растворов КС1. Значение рНТНЗ водных разбавленных дисперсий хлорофилла смещается в кислую область с увеличением ее концентрации и изменяется в диапазоне рН от 4,5 до 2,5.

ВЫДЕЛЕНИЕ ПРОТЕИНАЗ КОЛОРАДСКОГО ЖУКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АФФИННОГО СОРБЕНТА НА ОСНОВЕ ПОЛИАКРИЛАМИДА Цветков В.О., Шевченко Н.Д., Ибрагимов Р.И., Гарипова М.И.

Башкирский государственный университет, Уфа (Россия).

E-mail: zvetkovvo@rambler.ru Гидролитические ферменты выполняют ключевую роль в усвоении пищевых субстратов и, соответственно, являются одним из важных факторов агрессивности и патогенности фитофагов, в т.ч. и насекомых - вредителей сельскохозяйственных культур. В связи с этим исследование гидролаз фитофагов представляет научный и практический интерес. Тем не менее, гидролазы насекомых-вредителей мало изучены, и сведения о них в научной литературе малочисленны. Целью нашей работы было выделение и очистка протеаз из тканей личинок колорадского жука - опасного вредителя посевов картофеля.

Для выделения протеаз жука использовали аффинный сорбент на основе полиакриламида, содержащий иммобилизованный желатин. Для получения такого сорбента готовили 16%-ный ПАА-гель с 1%-ным содержанием желатина.

После полимеризации гель гомогенизировали, помещали в 0,5%-ный раствор глутарового альдегида в карбонатном буфере (рН 8,0) и инкубировали при 37°С в течение 10 часов для образования ковалентных сшивок между полиакриламидом и желатином. Для экстракции белков из личинок использовали Tris-HCl-буфер в пятикратном объеме.

Хроматографию осуществляли на колонке 2х6 см со скоростью элюции 1, мл/мин при температуре 4°С. Элюцию проводили 0,1 М уксусной кислотой с 0,9% NaCl (рН 2,9). Протеолитическую активность элюатов контролировали по скорости гидролиза синтетического субстрата БАПНА. О содержании белка судили по количественной реакции с реактивом Брэдфорд. Степень очистки ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ фермента определяли по изменению его удельной активности.

Удельная активность ферментов в исходном растворе составляла 0, Е/мкг, в первой и второй фракциях элюата - 0,419 и 0,536 Е/мкг соответственно.

Таким образом, на аффинном сорбенте с иммобилизованной желатиной были выделены протеиназы с достаточно высокой степенью очистки (более 40 раз).

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И РЕГУЛЯТОРНЫЕ СВОЙСТВА ИЗОФОРМ ИЗОЦИТРАТЛИАЗЫ ИЗ РАСТЕНИЙ Чан Тхи Хоанг Куен, Зайчикова М.В., Сальников А.В.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия).

E-mail: nhimlui@gmail.com Изоцитратлиаза (ИЦЛ, КФ 4.1.3.1) - высоко-специфичный фермент, который в высших растениях не только функционирует в глиоксилатном цикле, но и участвует в образовании щавелевой кислоты, биосинтезе серина и глицина. В настоящее время одной из важнейших в растительном мире культурой признана соя (Glycine max L.), семена которой являются великолепной комбинацией жирных кислот и высокоценного растительного белка, в связи с чем служат объектом значительного количества исследований. В связи с этим целью нашей работы являются получение высокоочищенных препаратов изоформ ИЦЛ из растений и изучение их физико-химических и регуляторных свойств. Были получены гомогенные препараты двух изоформ ИЦЛ из 4х-дневных проростков сои сорта Игор. При специфическом проявлении электрофореграмм, в суммарной фракции гомогената и фракции глиоксисом наблюдали наличие 2 изоформ фермента с Rf 0,28 и 0,44. Полученные результаты позволяют предположить, что исследуемый фермент имеет преимущественно глиоксисомальную локализацию, поскольку активность фермента в цитоплазме находится в пределах загрязнения.

Проведено сравнение их физико-химических, кинетических и регуляторных характеристик. С помощью гель-хроматографии на cефадексе G-200 и денатурирующего электрофореза в присутствии ДДС-Na установлено, что ИЦЛ1 и ИЦЛ2 состоят из 4 субъединиц, т.е. являются гомотетрамерами с молекулярной массой субъединиц 66 кДа. Значения Км нативных молекул ИЦЛ1 и ИЦЛ составили 272 и 246 кДа соответственно. Изучение влияния концентрации ионов водорода на активность ИЦЛ из семядолей сои показало, что оптимальное значение рН, при котором наблюдали максимальную активность, для ИЦЛ1 равно 8,0, а для ИЦЛ2 - 6,5.

Т.о., полученные данные показывают о наличии в растительной клетке двух изоформ ИЦЛ, сильно отличающихся по регуляторным характеристикам.

Можно предположить, что изоформы выполняющие различные функции в растении генетические детерминированные, т.е. являются изоферментами.

CРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РАЗЛИЧНЫХ ИЗОФЕРМЕНТОВ ПИРУВАТКИНАЗЫ КРЫС Чернова С.Н., Губич О.И.

Белорусский государственный университет, Минск (Беларусь).

Е-mail: Hubich_Oksana@mail.ru Целью данной работы явилось изучение важнейших каталитических и регуляторных свойств R-, M1- и L-изоферментов пируваткиназы (ПК) крыс.

Исследования проводились с использованием цитозольной фракции скелетной мускулатуры (М1-ПК), печени (L-ПК) и эритроцитов (R-ПК) крыс. Определение активности фермента осуществляли в сопряженной с лактатдегидрогеназой системе.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ В ходе выполнения работы показаны величины оптимума рН для изоферментов ПК, составившие 6,5 (для L- и R- ПК) и 7,5 (для М1-ПК). Величина Km по ФЕП соответствовала 0,21;

0,14 и 0,80 ммоль/л для L-, М1- и R- ПК.

Величина Km по АДФ оказалась равной 1,3;

2,2 и 1,5 ммоль/л соответственно для L-, М1- и R- ПК. Максимально эффективная концентрация природного ингибитора ПК - фенилаланина - составила 10 ммоль/л, причем ингибиторный эффект проявлялся при рН7,5 (L- и М1-ПК) и рН6,5 (R-ПК). Величина IC50 для фенилаланина оказалась равной 0,8 ммоль/л (R-ПК), 1,2 ммоль/л (L-ПК) и 1, ммоль/л (M1-ПК).

Показано, что куркумин и природные биофлавоноиды оказывают выраженный ингибиторный эффект на все изоферменты ПК в диапазоне концентраций от 1·10-5 до 1·10-10 моль/л. По силе ингибиторного действия полифенолы образовали следующий ряд эффективности:

для М1-ПК: кверцетин (-95,1% к контролю) морин (-87,7%) куркумин ( 56,7%) хризин (-54%) гесперидин = 0.

для L-ПК: морин (-96,3%) кверцетин (-94,2%) гесперидин (-74,2%) хризин (-45,3%) куркумин (-11,3%).

для R-ПК: кверцетин (-98,1%) морин (-80,1%) хризин (-17,2%) гесперидин (-6,6%) куркумин = 0.

Примечательно, что в присутствии 5 ммоль/л аланина наблюдалось достоверное снижение ингибиторного эффекта биофлавоноидов.

ИССЛЕДОВАНИЕ НАДМОЛЕКУЛЯРНЫХ СТРУКТУР ЛИПОПОЛИСАХАРИДОВ БАКТЕРИЙ РОДА AZOSPIRILLUM Чистякова Ю.Ю.1, Бурыгин Г.Л.2, Щёголев С.Ю.1, Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского, Саратов (Россия).

Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов (Россия).

E-mail: gena@ibppm.sgu.ru Липополисахариды уникальные макромолекулы (ЛПС) грамотрицательных микроорганизмов, покрывающие большую часть бактериальной поверхности, ЛПС играют важную роль во взаимодействии макро и микроорганизмов, в частности, являясь эндотоксинами. В водных системах ЛПС образуют надмолекулярные комплексы, структурная организация которых во многом определяет их физико-химические и биологические свойства.

В данной работе методами динамического и статического рассеяния света были определены характеристики ЛПС бактерий Azospirillum lipoferum Sp59b, A.

brasilense S27 и A. brasilense Sp245.5 (ЛПСSp59b, ЛПСS27, ЛПСSp245.5) в различных буферных системах (фосфатно-солевой (PBS), фосфатной (PB) и Трис-НСl.

Ранее было показано, что ОПС и липитд А этих штаммов значительно различаются по составу и строению.

Методом динамического рассеяния света была охарактеризована гетерогенность образующихся надмолекулярных комплексов. Каждый из исследованных препаратов ЛПС в использованных буферных растворах образовывал, по крайней мере, два типа структур, существенно отличающихся по размеру. При этом в фосфатном растворе с высокой ионной силой (PB 0,2 M) содержание более крупных частиц было несколько выше, что отражалось в понижении значений волнового экспонента с 2,6 до 2,3. В других буферных системах (Трис-НСl и PBS) размер частиц не превышал 100 нм. Радиус подавляющей доли частиц составил 20 нм, а наибольший вклад в интенсивность рассеянного света вносили частицы с R=82 нм для Трис-НСl буфера, и R=93 нм ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ для PBS.

Дробное ультрацентирфугирование раствора ЛПСSp59b в PBS с последующим изучением рассеяния света и изменения концентрации препарата в растворе позволило сделать вывод, что крупноразмерная фракция ЛПСSp59b составляет примерно четверть от массы препарата, при этом осуществляет почти 90% рассеяния света.

МЕХАНИЗМ ТОКСИЧНОГО ДЕЙСТВИЯ МИОГЛОБИНА ПРИ РАБДОМИОЛИЗЕ Чупыркина А.А., Плотников Е.Ю., Зоров Д.Б.

НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, Москва (Россия).

E-mail: a.chupyrkina@gmail.com Известно, что около 15% случаев острой почечной недостаточности возникает при рабдомиолизе. Рабдомиолиз - это некроз скелетных мышц, приводящий к высвобождению внутриклеточных содержимого во внеклеточное пространство и циркуляцию. В результате эти вещества оказываются в почке.

Полагают, что главным токсичным фактором при рабдомиолизе является миоглобин, 17 кДа мышечный белок, участвующий в переносе кислорода. Ранее считалось, что токсичное действие миоглобина ограничено канальцевой обструкцией и окислением наружных клеточных мембран. Однако мы показали ключевую роль митохондрий клеток почки в развитии окислительного стресса при миоглобинурии.

Инкубация изолированных митохондрий почки в присутствии 100 и мкМ миоглобина в течение 1 ч показало 2- и 3-кратное падение дыхательного контроля и одновременное 2- и 3-кратное увеличение уровня липидных перекисей (МДА-продуктов) соответственно.

Тем не менее, механизм взаимодействия миоглобина и митохондрий in vivo остается неясным. Во-первых, неизвестно, вся молекула миоглобина или только продукты ее деградации, в частности гем или свободное железо, вызывают повреждение митохондрий. Прооксидантные эффекты нативного миоглобина на почечные канальцы были более сильными, чем это наблюдалось на изолированных митохондриях. Инкубация изолированных митохондрий с миоглобином, подвергешемуся пепсинолизу, привела к 5-кратному увеличению уровня МДА по сравнению с контролем.

Таким образом, очевидно, что процесс дисфункции почечных митохондрий при миоглобинурии является комплексным и связан с накоплением миоглобина клетками канальцев, его возможной деградацией и дальнейшим взаимодействием с митохондриями. Работа поддержана грантом РФФИ 08-04 01667.

АНТИАГРЕГАЦИОННЫЙ ЭФФЕКТ НОВОГО НЕСТЕРОИДНОГО ПРЕПАРАТА ГЛАС Шамухамедова С.Ж., Далимова С.Н., Мухамедова М.Ж.

Национальный университет Узбекистана им. М. Улугбека, Ташкент (Узбекистан).

Е-mail: surae_dalimova@mail.ru Непосредственной причиной инфаркта миокарда является коронарный тромбоз, в возникновении которого ведущая роль принадлежит тромбоцитам. Это обуславливает повышенное внимание к роли антитромбоцитарных препаратов в профилактике и лечение ИБС. Среди антитромбоцитарных препаратов наиболее известным является ацетилсалициловая кислота (АСК), эффективность которой в профилактике инфаркта миокарда доказана во многих крупных исследованиях.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ Однако известно, что АСК обладает рядом побочных нежелательных действий, к числу которых относится ульцерогенный эффект, выражающийся в раздражении слизистой оболочки желудка и развитии эрозии со скрытым или явным кровотечением.

В связи с вышеизложенным в ИБОХ АН РУз был создан эффективный кардиологический препарат - ГЛАС, полученный из ацетилслициловой кислоты и глицирризиновой кислоты из корня солодки и не обладающий ульцерогенным эффектом.

Было проведено сравнительное исследование влияния АСК и ГЛАС в концентрациях 10-2-10-3 мг/мл на агрегацию тромбоцитов в опытах in vitro.

Установлено, что АСК в концентрации 10-2 мкг/мл удлиняет время агрегации тромбоцитов в 2 раза, а в концентрации 10-3 мкг /мл - в 3 раза по сравнению с контролем, тогда как ГЛАС в указанных концентрациях еще больше (в 5 и 6 раз соответственно) увеличивал время агрегации тромбоцитов.

На основании полученных данных сделано предположение о том, что ГЛАС обладает выраженным антиагрегационным действием.

ДЕТОКСИКАЦИОННЫЕ СВОЙСТВА ПЕРЕПЕЛИНЫХ ЯИЦ ПРИ СВИНЦОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ Шиндёнкова С. И., Матюшкин А. П., Кузьмичева Л. В., Быстрова Е. В.

Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева, Саранск (Россия).

E-mail: svetlichyok@yandex.ru Соединения свинца, попадая в организм, нарушают многие обменные процессы (белковый, углеводный, липидный обмен), вызывая эндогенную интоксикацию. Предполагается, что одним из наиболее эффективных средств детоксикации организма от вредного воздействия тяжелых металлов и радионуклидов являются перепелиные яйца.

Объектом исследования были белые беспородные крысы, самцы, массой 160-180 г. Животные делились на 3 группы: 1-ая группа – контрольная, рацион животных состоял из зерна и воды;

2-ая группа – помимо обычного кормления зерном крысы получали раствор ацетата свинца (100 мг/кг) в течение 7 и суток;

3-я группа - после соответственного срока кормления свинцом получала перепелиные яйца также в течение 7 и 14 суток.

В результате проведенных исследований было выявлено, что после воздействия ацетатом свинца в течение 7 суток показатели эндогенной интоксикации в сыворотке крови изменяются: увеличивается содержание молекул средней массы (МСМ) на 12,3%, на фоне уменьшения АОА на 10% уровень ПОЛ повышается на 63%, отношение эффективной к общей концентрации альбумина (ЭКА/ОКА) в сыворотке составило 0,87, а индекс токсичности (ИТ) вырос в 1,2 раза по сравнению с контролем. Спустя 14 суток содержание в крови МСМ повышается на 16%, уровень ПОЛ увеличивается на 88%, показатель ЭКА/ОКА соответствовал значению 0,84, ИТ резко увеличивается в 2,86 раза по отношению к контролю. После применении перепелиных яиц в течение 14 суток наблюдается снижение в крови МСМ на 10%, уровня ПОЛ на 21%, повышение ЭКА/ОКА до 0,92, и уменьшение ИТ в 1, раза по сравнению с показателями в сыворотке крови крыс, подвергшихся свинцовой интоксикации в течение такого же периода времени. Таким образом, употребление перепелиных яиц при свинцовой интоксикации нормализует биохимические показатели сыворотки крови.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВОДНО-СПИРТОВЫХ СМЕСЕЙ ГОМОЛОГИЧЕСКОГО РЯДА НИЗШИХ АЛИФАТИЧЕСКИХ СПИРТОВ Широкова И. Ю., Шилова Ю.А., Кучук В.И.

Санкт-Петербургская Государственная химико-фармацевтическая академия, Санкт-Петербург, Россия qchuk631@mail.ru Известно, что широкое использование водно-спиртовых растворов в качестве среды для различных систем (растворов ПАВ, ВМС, лекарственных средств, дисперсных систем и др.) в значительной мере зависит от соотношения вода:спирт и связано с изменением внутренней структуры жидкости.

Достаточно хорошо изученные водно - этанольные растворы показывают экстремальные зависимости теплоты смешения, контракции, упругости паров, вязкости, показателя преломления и пр. при различных массовых соотношениях компонентов. Отмеченные еще Д.И.Менделеевым резкие изменения ряда свойств связывают с ассоциацией молекул воды и этилового спирта (а также ассоциации молекул одного типа) и образованием гидратов различного состава в зависимости от соотношения в растворе воды и спирта, что по-разному отражается на физико-химических свойствах полученных растворов.

Целью данной работы являлось исследование различных физико химических свойств – электропроводности, вязкости, показателя преломления, рН, плотности и поверхностного натяжения – водно-спиртовых растворов группы алифатических спиртов – этанола, н-пропанола, изо-пропанола, н-бутанола и изо-бутанола. Исследования проводились в широком интервале соотношений компонентов (1:9 – 9:1).

Показано, что по мере изменения соотношения вода:спирт ряд свойств изменяется практически монотонно (такие как плотность, поверхностное натяжение, значение рН), тогда как другие – с экстремумами (особенно вязкости растворов), приходящимися, в зависимости от природы спирта, на различные соотношения вода:спирт.

Полученные результаты трактуются как с точки зрения природы спирта (длины цепи, константы автопротолиза, типа изомера), так и соотношения молекул обоих компонентов водно-спиртовой смеси.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАКТОРОВ, ВЛИЯЮЩИХ НА ОЛИГОМЕРНОЕ СОСТОЯНИЕ МДГ ИЗ ПУРПУРНЫХ БАКТЕРИЙ RHODOBACTER SPHAEROIDES ШТАММ 2R.

Шихалиева К.Д.

Воронежский государственный университет, Воронеж (Россия) E-mail: ksunya-shik@mail.ru Большинство бактерий семейcтва Rhodospirillaceae ассимилируют ацетат через цикл трикарбоновых кислот. Ряд С4-кислот ЦТК восполняется у многих бактерий с помощью глиоксилатного шунта. Некоторые виды (Rhodospirillum rubrum, Rhodobacter sphaeroides) способны ассимилировать ацетат без глиоксилатного цикла, используя подобный ему по функциям цитрамалатный путь. Малатдегидрогеназа (МДГ, КФ 1.1.1.37.), являясь полифункциональным ферментом, обеспечивает протекание всех перечисленных метаболических путей. Полифункциональность МДГ в клетках эукариот связана с широким изоферментным спектром, тогда как для бактерий характерно наличие изоформ, образующихся за счет структурных перестроек белковой молекулы. Причем, образующиеся димерные и тетрамерные формы МДГ содержат одинаковые субъединицы, кодирующиеся одним геном. Механизм трансформации димерной формы в тетрамерную и факторы, влияющие на нее, неизвестны. Таким ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ образом, целью данной работы явилось изучение факторов, влияющих на олигомерное состояние МДГ из пурпурных бактерий Rhodobacter sphaeroides.Эксперименты по ассоциации-диссоциации гомогенного препарата МДГ проводились посредством «сшивания» димеров бифункциональным реагентом в присутствии того или иного фактора. В результате удалось выявить рН зависимость данного процесса. Так, было показано, что повышение рН с 7. до 8.5 вызывало ассоциацию димеров с образованием тетрамеров, тогда как снижение величины рН до значения 6.0 сопровождалось диссоциацией димерной формы с образованием мономерных белков. Также вызывало агрегацию димеров с образованием тетрамеров добавление к ферментному препарату ионов магния.

Было изучено и влияние таких метаболитов, как NAD+, NADH, оксалоацетат, ацетил-КоА и выяснено, что их присутствие не влияет на изменение олигомерного состояния МДГ из R. sphaeroides. Полученные результаты подтверждают, что бактериальная МДГ может существовать в различных олигомерных состояниях in vivo.

ЭКСТРАКЛЕТОЧНЫЕ ПОЛИСАХАРИДЫ БАКТЕРИЙ HERBASPIRILLUM SEROPEDICAE Z Шишонкова Н.С., Смолькина О.Н., Игнатов В.В.

Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов (Россия).

E-mail: room308@ibppm.sgu.ru Бактерии рода Herbaspirillum эндофитные ассоциативные азотфиксаторы принадлежащие к -субклассу Proteobacteria. Известно, что многие бактерии продуцируют экстраклеточные полисахариды или экзополисахариды (ЭПС), отличающиеся уникальностью состава и структуры. Возможно, они играют немаловажную роль в обеспечении контакта микроорганизмов с внешней средой.

Для изучения данной проблемы необходимо иметь данные о составе и строении ЭПС. В связи с этим целью работы стало выделение и характеристика ЭПС H.

seropedicae Z78. Бактериальную культуру выращивали на жидкой синтетической среде с малатом и глюкозой до окончания экспоненциальной фазы роста.

Культуральную жидкость отделяли от клеток и концентрировали, затем из нее осаждали ЭПС этиловым спиртом. Осадок растворяли и разделяли на колонке с носителем Sephadex G-50. В результате чего были получены фракции ЭПС-I и ЭПС-II с выходами 1,07% и 0,48% от веса сухих микробных клеток. Анализ биополимерного состава показал наличие в ЭПС-I и ЭПС-II углеводов 35,4 и 20,6%, КДО 0,1 и 0,3%, белка 4,0 и 3,6%, фосфора 1,0 и 0,8%. Методами ТСХ и ГЖХ в виде ацетатов полиолов в составе препаратов были обнаружены нейтральные моносахара Man, Gal, Glc и три неидентифицированных аминосахара. В составе ЭПС-I были так же выявлены Xyl и GalA. Методом ГЖХ после метанолиза в препаратах найдены жирные кислоты с длиной цепи от С до С24. Преобладающими были 2-ОН-С12:0, 3-ОН-С12:0, C14:0, C16:0, С18:0 в соотношении 1:1:1:1:1 для ЭПС-I и 1:2:3:4:1 для ЭПС-II. Препараты исследовали методом Ds-Na-ПААГ-электрофореза с последующим окрашиванием серебром на углеводы. Электрофореграммы образцов содержали одну узкую полосу в верхней части и одну широкую полосу в нижней части треков. Мягким кислотным гидролизом ЭПС-I и ЭПС-II 1% уксусной кислотой получены ПС-I и ПС-II с выходами 53,7 и 31,3% от веса соответствующих ЭПС. Методом ГЖХ в виде ацетатов полиолов в полисахаридах были идентифицированы Man, Gal, Glc в соотношении 1:3:2.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ МОДУЛЯЦИЯ РЕТИНОИДАМИ CYP АКТИВНОСТЕЙ КАРЦИНОМЫ ГЕРЕНА Шмараков И.А., Катан Н.В.

Черновицкий национальный университет им. Ю. Федьковича, Черновцы (Украина).

E-mail: igor.shmarakov@gmail.com Метаболическая активность опухолевых клеток и образование значительных количеств токсических продуктов метаболизма требуют высокого уровня активности компонентов клеточной системы детоксикации, ведущим элементом которой являются цитохромы Р-450 (CYP). Ретиноиды прямо способны индуцировать экспрессию определенных изоформ CYP через активацию промотора, содержащего RARE (retinoic acid responsive element) в комплексе с рецепторами ретиноевой кислоты (RAR, RXR) и пролифераторов пероксисом (PPAR). Предварительными исследованиями нами установлена дозозависимая интенсификация роста карциномы Герена при восстановлении витаминных А ресурсов авитаминозного организма с опухолью. В связи с этим мы заинтересовались связаны ли установленные морфологические параметры роста карциномы Герена с активностью CYP. Установлено, что для карциномы Герена в авитаминозном организме характерно снижение темпов роста (до 98%) наряду со сниженной n-гидроксилазной и N-деметилазной активностями в 8 и 2 раза соответственно в сравнении с контролем. В то же время, введение в рацион авитаминозных животных физиологических (30 МЕ) и супрафизиологических (3000 МЕ) доз витамина А вызывало увеличение темпов роста опухоли, сопровождаемое возрастанием исследуемых активностей. С целью проверки предположения про специфическую индукцию ретиноидами исследуемых активностей цитохромов опухолевой ткани нами разработано липосомальную форму ретиноевой кислоты (РК), вводимую в дозе 10 мкг/кг (эквивалентно 30 МЕ активности витамина А) для проверки именно генно-индуцированного механизма действия, поскольку такая форма витамина А не проявляет антиоксидантных свойств и вызванные ею эффекты связаны исключительно с молекулярно генетическими механизмами. Использование липосомальной формы РК (а не пустых липосом или свободной РК) вызывало тенденцию увеличения размеров опухоли и индукцию n-гидроксилазной и N-деметилазной активностей, подобную показателям авитаминозных животных, получающих гипердозы витамина А.

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ФОСФОГИДРОЛАЗНЫХ АКТИВНОСТЕЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ГРИБА P. CANESCENSТ Шохолдоров М.Н.1, Умарова Г.Б.1, Игамназаров Р.П.1, Байбаев Б.Г.2, Валиханов М.Н. Национальный университет Узбекистана им. М. Улугбека, Ташкент (Узбекистан), Институт микробиологии АН РУз, Ташкент (Узбекистан).

E-mail: divya_shakti@hotmail.com Поводом для данных исследований послужил дефицит усвояемого фосфора различными сельскохозяйственными растениями, в районах с большой концентрацией минеральных солей в почве. Эффективность фитазы обусловлена способностью разрушать фитатные комплексы, в которых, например, сосредоточено до 60% неусвояемого фосфора из зерновых.

Для того чтобы оценить возможность наличия в культуральной жидкости Penicillium canescens различных фосфогидролазных активностей в присутствии некоторых ингибиторов фосфогидролаз, в качестве которых, помимо LiCl (ингибитор инозит-монофосфатазы), были использованы также NaF (ингибитор фитазы), ЭДТА (ингибитор иолифосфатазы и триполифосфатазы) и гепарин.

Из полученных данных следует, что гепарин достаточно эффективно и избирательно блокирует фитазную активность культуральной жидкости, значительно слабее влияя на интенсивность расщепления триполифосфата и не действуя на скорость гидролиза АТФ и пирофосфата. 50%-ное ингибирование фитазной активности наблюдалось при 114 мкг/мл гепарина, что соответствует ~7,5 мкМ. Довольно избирательным действием на фитазную активность культуральной жидкости P. canescens обладал фторид, который снижал скорость гидролиза фитина на 50% при концентрации ~75 мкМ. Одновременно отмечалось и ингибирование пирофосфатазной активности, хотя и с меньшей эффективностью - 50%-ное снижение активности имело место при концентрациях NaF несколько выше 500 мкМ. Таким образом, описанные выше эксперименты свидетельствует о том, что в культуральной жидкости P. canescens помимо фитазной активности присутствует довольно широкий спектр других фосфогидролазных активностей пирофосфатаза, (монофосфатаза, триполифосфатаза).

ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ СВОЙСТВ ФИТАЗЫ И РОСТСТИМУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ГРИБА FUZARIUM Шохолдоров М.Н.1, Байбаев Б.Г.2, Валиханов М.Н.1, Умарова Г.Б. Национальный университет Узбекистана им. М. Улугбека, Ташкент (Узбекистан), Институт микробиологии АН РУз, Ташкент (Узбекистан).

E-mail: divya_shakti@hotmail.com В настоящее время все более актуальным становится разработка систем интегрированной биологической защиты и стимуляции роста растений, не нарушающих экологического равновесия в почве и не загрязняющих окружающую среду. Эффективные компоненты этих систем - микробиологические препараты на основе живых клеток, один из наиболее перспективных объектов для получения биопрепаратов различного назначения - ризосферные грибы.

Известно, что фитаза - это специфический фермент растений и микроорганизмов, способный расщеплять фитаты, в виде которых и существует 78-90% всего фосфора в растительных кормах. Наряду с фитинрасщепляющей способностью микромицетов рода Fuzarium изучены механизмы стимулирующего влияния грибов на рост растений. Методами хроматографии на различных носителях из культуральной жидкости гриба Fuzarium sp. получена фитаза ( ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ кДа, pl 6,3). Изучена каталитическая активность фермента, стабильность при хранении, а также - субстратная специфичность в широком аспекте субстратов, и при действии различных эффекторов (в частности, ионов металлов, органических соединений). Определен аминокислотный состав фермента, который состоит из 445 аминокислотных остатков.

В опытах in vitro на калиоптилях пшеницы и хлопчатника проведено тестирование ростстимулирующей и фитинрасщепляющей активностей гриба. В результате проведенных тестов установлено эффективное расщепление фитина в различных субстратах и стимуляция роста и развития растений. На основе вышесказанного можно предположить, что культуральная жидкость гриба Fuzarium может быть использована в качестве биологической добавки.

METALLOTHIONEINS RESPONSES TO ENVIRONMENTAL EXPOSURE IN MOLLUSK ANODONTA CYGNEA: PROTECTION AGAINST HEAVY METAL TOXICITY AND OXIDATIVE STRESS Gnatyshyna L.L.1, Falfushynska H.I.1, Dyakiv V.V.1, Maksymiv N.M.1, Gyori J.2, Dallinger R.3, Stoliar O.B. Ternopil National Pedagogical University, Ternopil (Ukraine), Balaton Limnological Research Institute (Hungary), Leopold-Franzens-Universitt Innsbruck (Austria).

E-mail: halynka.f@gmail.com Metallothioneins (MTs) are low molecular weight, soluble, thermostable and sulfhydryl-rich proteins, which can act as buffers for essential metals Zn and Cu and nonessential metal Cd to protect cells from their toxicity. The role of MTs in the homeostasis of the redox state in cells limits its use as a universal biomarker of heavy metal stress. The aim of this study was to examine stress response in bivalve mollusk Anodonta cygnea to effect of complex non-point environmental pollution in respect to relationships between MTs and oxidative stress parameters. Animals were collected from three sites during spring, summer and autumn: agricultural site in the lower portion of the river (A);

cooling pond of nuclear power plant (N) and forestry site in the higher portion of river close to the municipal water inlet (F).

The levels of MTs, glutathione (GSH) (reduced and oxidized form), glutathione S-transferase and total binding capacity of MTs, activities of superoxide dismutase (SOD), cholinesterase and lipid peroxidation (LPO) were determined in the digestive gland and gills. The results revealed that the casual local effects of non-point pollution source were best characterized by MTs concentration, LPO and GSH-transferase activity. At site A, oxidative stress revealed as overloading of the capacity of antioxidant defense (high level of LPO, lesser level of redox-index of GSH) in summer gave place to activation of antioxidant defense and cholinesterase in autumn. For site N in summer, remarkable activation of both antioxidant defense and LPO was probably connected extremely high temperature of water. In autumn, biggest level of MTs reflected high concentrations of Cd and Cu in the water here. By Discriminant Functional Analyses, we revealed that the level of MTs was closely related to thiol status and the level of superoxide anion. The metal-binding capacity of MTs was negatively associated with antioxidant defense such as SOD. To summarize, the protective effect of MTs in bivalve mollusks under the effect of complex contamination was connected more to its capacity to sequester reactive oxygen species than to the participation in metal detoxification.

This work has been granted by the Ministry of Education and Science of Ukraine (Projects № M/25-2009, № M/13-2009, F29/321-2009).

ОБЩАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ БИОХИМИЯ EFFECT OF 2-HYDROXYPROPYL--CYCLODEXTRIN ON THERMAL AGGREGATION OF GLYCOGEN PHOSPHORYLASE b Roman S.G.1,2, Eronina T.B.1, Chebotareva N.A.1, Kleymenov S.Yu.3, Makeeva V.F.1, Kurganov B.I. A.N. Bach Institute of Biochemistry, Russian Academy of Sciences, Moscow (Russia), Moscow State University, Department of Physics, Moscow (Russia), Koltsov’s Institute of Developmental Biology, Russian Academy of Sciences, Moscow (Russia).

E-mail: svetabaj@gmail.com Cyclodextrins (CDs) are cyclic oligosaccharides with a hydrophobic interior and a hydrophilic exterior. Owing to the ability of CDs to increase protein stability against thermal and chemical induced denaturation and aggregation, CDs are attractive reagents for pharmaceutical industry.

Our study of the kinetics of thermal aggregation of glycogen phosphorylase b (Phb) from rabbit skeletal muscle by dynamic light scattering showed that 2 hydroxypropyl--cyclodextrin (HP--CD, a derivative of natural -CD that has higher solubility in water) accelerated the aggregation process and induced the formation of the larger protein aggregates. The reason of the accelerating effect of HP--CD is destabilization of the protein molecule under the action of HP--CD. This conclusion was supported by the data on differential scanning calorimetry and the kinetic data on thermal inactivation. It is assumed that destabilization of the Phb molecule is due to preferential binding of HP--CD to intermediates of protein unfolding in comparison with the original native state. The ability of Phb for binding of HP--CD was supported by the data of the enzyme inhibition by HP--CD and the sedimentation velocity data demonstrating the effect of HP--CD on dimer-tetramer equilibrium of Phb in the presence of 1 mM AMP.

The work was supported by Russian Foundation for Basic Research (08-04 00666-a) and Presidium of the Russian Academy of Sciences (Program “Molecular and Cell Biology”).

ПРИБОРЫ И МЕТОДЫ ДЛЯ БИОЛОГИИ, БИОТЕХНОЛОГИИ И МЕДИЦИНЫ ПРИБОРЫ И МЕТОДЫ ДЛЯ БИОЛОГИИ, БИОТЕХНОЛОГИИ И МЕДИЦИНЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА УЛЬТРАФИЛЬТРАЦИИ ПО ПРИНЦИПУ “КРОСС ФЛОУ” ДЛЯ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ О-АНТИГЕНА ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА Алешина Ю.А., Еремин С.А., Комиссаров А.В., Никифоров А.К.

ФГУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт “Микроб”, Саратов (Россия).

E-mail: microbe@san.ru В технологии производства отечественной холерной бивалентной химической вакцины для концентрирования О-АГ холерного вибриона ранее применялись ультрафильтрационные волоконные аппараты марки УВА-ПС-20 1040 с размером пор 20 кДа. Однако в настоящее время производство модулей УВА прекращено. Из всего многообразия современных ультрафильтрационных технологий наше внимание привлек метод концентрирования антигенов ультрафильтрацией по принципу “кросс-флоу”. В своих экспериментах мы использовали установку для микро- и ультрафильтрации на базе фильтродержателя АСФ-009 фирмы Владисарт, снаряженной мембранными модулями из триацетата целлюлозы с номинальной отсечкой по молекулярной массе 20 кДа, с площадью фильтрации равной 0,1 м2. Было проведено концентрирование безмикробных центрифугатов, полученных при производственном выращивании в ферментере штамма V. сholerae М-41 Огава.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 13 |
 



 
© 2013 www.libed.ru - «Бесплатная библиотека научно-практических конференций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.